Antiwrinkle agent and external preparation for skin |
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| 申请号 | JP2006276007 | 申请日 | 2006-10-10 | 公开(公告)号 | JP2008094734A | 公开(公告)日 | 2008-04-24 |
| 申请人 | Shiseido Co Ltd; 株式会社資生堂; | 发明人 | MATSUNAGA YUKIKO; SHIBATA MICHIO; IRIYAMA SHUNSUKE; AMANO SATOSHI; KUSAKARI TAKESHI; OTA MASAHIRO; UMISHIO KENICHI; | ||||
| 摘要 | PROBLEM TO BE SOLVED: To provide an antiwrinkle agent improving wrinkles, especially small wrinkles induced when barrier functions are deteriorated by drying etc. SOLUTION: The antiwrinkle agent comprises one or two or more species of plants selected from Elaeocarpus sphaericus of the family Elaeocarpaceae, Quercus lineata Blume. of the family Fagaceae, Quercus lanata Sm. of the family Fagaceae, Pinus wallichiana A. B. Jacks of the family Pinaceae, Dioscorea esculenta Burkill of the family Dioscoreaceae, Cochlospermum religiosum (L. ) Alston of the family Cochlospermaceae, Coriaria nepalensis Wall. of the family Coriariaceae and Cinnamomum bejolghota of the family Lauraceae or a solvent extract thereof. COPYRIGHT: (C)2008,JPO&INPIT |
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| 权利要求 | ホルトノキ科のエラオカルプス スファエリカス（学名：Elaeocarpus sphaericus）、ブナ科のクエルカス リネアタ ブルム． （学名：Quercus lineata Blume.）、ブナ科のクエルカス ラナタ エスエム． （学名：Quercus lanata Sm.）、マツ科のピヌス ウオリチアナ エー． ビー． ジャクス（学名：Pinus wallichiana ABJacks）、ヤマノイモ科のディオスコレア エスクレンタ ブルキル（学名：Dioscorea esculenta Burkill）、ワタリモドキ科のココロスペルマム レリジオスム（エル．）アルストン（学名：Cochlospermum religiosum(L.)Alston）、ドクウツギ科のコリアリア ネパレンシス ウォール（学名：Coriaria nepalensis Wall.）、クスノキ科のシナモマム ベジョルゴタ（学名：Cinnamomum bejolghota）から選ばれる一種または二種以上の植物、またはこれらの溶媒抽出物を含有することを特徴とする抗しわ剤。 ブナ科のクエルカス リネアタ ブルム． （学名：Quercus lineata Blume.）、ブナ科のクエルカス ラナタ エスエム． （学名：Quercus lanata Sm.）、マツ科のピヌス ウオリチアナ エー． ビー． ジャクス（学名：Pinus wallichiana ABJacks）、ヤマノイモ科のディオスコレア エスクレンタ ブルキル（学名：Dioscorea esculenta Burkill）、クスノキ科のシナモマム ベジョルゴタ（学名：Cinnamomum bejolghota）から選ばれる一種または二種以上の植物、またはこれらの溶媒抽出物を配合してなることを特徴とする皮膚外用剤。 |
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| 说明书全文 | 本発明は、抗しわ剤に関し、特に乾燥等によりバリア機能が低下する際に惹起される皮膚の肥厚を抑制して該バリア機能低下に起因するしわ、特に小じわを予防・改善する抗しわ剤に関するものである。 皮膚の最外層に位置する角層は細菌や有害物質などの異物の接触や浸透から生体を保護すると共に、体内からの水分蒸散を防ぐことによって皮膚を健全な状態に保持するバリア機能を有する。 過度の水仕事や冬場の乾燥、近年では夏場のクーラーの効き過ぎ等によりバリア機能が低下すると、皮膚表面からの経表皮水分蒸発量（trans epidermal water loss：ＴＥＷＬ）が増加し、相対的に角質水分量が低下する。 角層水分量の低下により皮溝、皮丘から成る皮紋（きめ）が不規則化すると、皮膚はかさかさした肌荒れ状態を呈する（非特許文献１参照）。 曽根俊郎ら、香粧会誌 Vol.15 No.2 P.60-65(1991) 芋川玄爾ら、Fragrance Journal 1992-11、29-42 本発明は上記したような従来の事情に鑑みてなされたもので、その目的は、乾燥等によりバリア機能が低下した際に誘導されるしわ、特に小じわを改善する抗しわ剤を提供することにある。 本出願人はこれまでにヘアレスマウス背部にテープストリッピングを継続的に行ってバリア機能を低下させることによって小じわ様のしわを有する動物モデル（バリア破壊しわモデル）を確立した。 このモデル動物では角層水分量がコントロールと比較して６割程度に低下していた。 組織では表皮および真皮肥厚が顕著で、しわが回復すると肥厚も収まることから、しわ形成と表皮および真皮肥厚には相関性があると考えられた（第３０回日本研究皮膚科学会にて発表）。 また本出願人は、バリア破壊しわモデルにおいて、ＡＤＡＭ−９、ＡＤＡＭ−１０およびＡＤＡＭ−１７等の、ディスインテグリンとメタロプロテアーゼドメインを有するＡＤＡＭ（a disintegrin and metalloprotease）ファミリーに属するタンパク質（以下、ＡＤＡＭと称する）、さらにはそれらＡＤＡＭによって細胞膜からの遊離および活性化がなされるＨＢ-ＥＧＦ（ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子；heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor）およびAmphiregulinの表皮における遺伝子発現が亢進していること、さらにはそれらＡＤＡＭの阻害剤を塗布することによって、表皮および真皮の肥厚ならびにしわ形成を抑制できること、ヒトまたは動物の皮膚、皮膚組織または細胞に被験物質を接触させ、前記皮膚、組織または細胞におけるＡＤＡＭの酵素活性または遺伝子発現レベルを検出し、ＡＤＡＭの酵素発生または遺伝子発現レベルを指標として被験物質の抗しわ効果を評価する方法をすでに見出している（特願２００５−２９９５２４号、特願２００５−２９６２１９号参照）。 一方、ＡＤＡＭ阻害剤としてはTAPI-1{N-(R)-(2-(Hydroxyaminocarbonyl)methyl)-4-Methylpentanoyl-L-Nal-L-Alanine2-Aminoethyl amide(L-Nal:L-3-(2'-Naphthyl)alanine)}や、TAPI-2{N-(R)-(2-(Hydroxyaminocarbonyl)methyl)-4-Methylpentanoyl-Lt-Butyl-Glycyl-L-Alanine2-Aminoethyl amide}が知られているが、これらの物質のＡＤＡＭ阻害能は充分とは言えず、また皮膚外用剤としての安全性は確認されていない。 そこで、より安全で効果の高い薬剤の開発が求められてきた。 本発明者らは、細胞を用いたＡＤＡＭ阻害薬剤スクリーニング方法を用いてＡＤＡＭ活性を阻害する新規な生薬を探索し、バリア破壊しわモデルを用いて小じわ改善薬剤の効果を検討したところ、特定の生薬が小じわを改善する作用に優れていることを見出し、本発明に至った。 本発明は、ホルトノキ科のエラオカルプス スファエリカス（学名：Elaeocarpus sphaericus）、ブナ科のクエルカス リネアタ ブルム． （学名：Quercus lineata Blume.）、ブナ科のクエルカス ラナタ エスエム． （学名：Quercus lanata Sm.）、マツ科のピヌス ウオリチアナ エー． ビー． ジャクス（学名：Pinus wallichiana ABJacks ）、ヤマノイモ科のディオスコレア エスクレンタ ブルキル（学名：Dioscorea esculenta Burkill）、ワタリモドキ科のココロスペルマム レリジオスム（エル．）アルストン（学名：Cochlospermum religiosum(L.)Alston）、ドクウツギ科のコリアリア ネパレンシス ウォール（学名：Coriaria nepalensis Wall.）、クスノキ科のシナモマム ベジョルゴタ（学名：Cinnamomum bejolghota）から選ばれる一種または二種以上の植物、またはこれらの溶媒抽出物を含有することを特徴とする抗しわ剤である。 また本発明は、ブナ科のクエルカス リネアタ ブルム． （学名：Quercus lineata Blume.）、ブナ科のクエルカス ラナタ エスエム． （学名：Quercus lanata Sm.）、マツ科のピヌス ウオリチアナ エー． ビー． ジャクス（学名：Pinus wallichiana ABJacks）、ヤマノイモ科のディオスコレア エスクレンタ ブルキル（学名：Dioscorea esculenta Burkill）、クスノキ科のシナモマム ベジョルゴタ（学名：Cinnamomum bejolghota）から選ばれる一種または二種以上の植物、またはこれらの溶媒抽出物を配合してなることを特徴とする皮膚外用剤である。 本発明の抗しわ剤は、乾燥等によりバリア機能が低下した際に誘導されるしわ、特に小じわを防止・改善することができる。 また本発明の皮膚外用剤は、乾燥等によりバリア機能が低下した際に誘導されるしわ、特に小じわを防止・改善することができ、使用性および安全性にも優れたものである。 以下に、本発明の最良の実施の形態について説明する。 本発明で用いられる各植物は、生のままでも乾燥したものでも使用することができるが、使用性、製剤化等の観点から乾燥粉末あるいは溶媒抽出物として用いることが好ましい。 それぞれの植物を乾燥粉末あるいは溶媒抽出物とする時の好ましい使用部位は次の通りである。 上記各植物の溶媒抽出物は常法により得ることができ、例えば、抽出溶媒とともに浸漬または加熱還流した後、濾過し濃縮して得ることができる。 抽出溶媒としては、通常抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができ、例えば、水、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等のアルコール類、含水アルコール類、クロロホルム、ジクロルエタン、四塩化炭素、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン等の有機溶媒類等を、それぞれ単独あるいは組み合わせて用いることができる。 抽出溶媒として好ましいものは、エタノール、含水エタノール、１，３−ブチレングリコール、含水１，３−ブチレングリコールである。 このようにして得た上記植物抽出物は、安全性が高く、優れたＡＤＡＭ活性阻害効果およびしわ防止・改善効果を有する。 本発明の抗しわ剤は極めて応用範囲が広く、種々の分野に応用することができる。 具体的には、医薬部外品を含む化粧料、医薬品、食品等が挙げられる。 なお、本発明の抗しわ剤は、実質的に上記植物抽出物の一種または二種以上からなる配合原料であるが、他の成分を含んでいてもよい。 この抗しわ剤が皮膚外用剤に配合されて、本発明の皮膚外用剤が提供される。 上記植物抽出物を皮膚外用剤に配合して用いる場合、外用剤全量中に乾燥重量として０．０００００１〜５．０質量％配合するのが好ましく、より好ましくは０．００００１〜３．０質量％、特に好ましくは０．００００１〜１．０質量％である。 上記植物抽出物を皮膚外用剤に配合して用いる場合、これら抽出物に加えて、本発明の効果を損わない範囲内で、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる他の成分、例えば油分、界面活性剤、アルコール、増粘剤、キレート剤、活性酸素消去剤、紫外線吸収剤、保湿剤、湿潤剤、各種薬効成分、防腐剤、中和剤、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、香料、水等を必要に応じて適宜配合することができる。 上記任意配合成分のうち、油分としては、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール等の直鎖アルコール、モノステアリルグリセリンエーテル、ラノリンサルコール、コレステロール、フィトステロール、イソステアリルアルコール等の分岐鎖アルコール等の高級アルコール、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸等の高級脂肪酸、固形パラフィン、ビースワックス、硬化ヒマシ油、カルナウバロウ、バリコワックス等のワックス、牛脂、豚脂、羊脂、スクワラン、ヤシ油、パーム油、パーム核油、大豆油、オリーブ油、綿実油、ホホバ油、ヒマシ油、ラノリン等の動植物油脂、流動パラフィン、ワセリン等の鉱物油、トリメチルプロパントリイソステアレート、イソプロピルミリステート、グリセロールトリ−２−エチルヘキサネート、ペンタエリスリトールテトラ−２−エチルヘキサネート、環状または直鎖シリコーン油、ポリオキシエチレン（以下、ＰＯＥとも記載する。）ポリオキシプロピレン（以下、ＰＯＰとも記載する。）ペンタエリスリトールエーテル等の合成油等が挙げられる。 界面活性剤としては、セッケン用素地、ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等の脂肪酸セッケン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸カリウム等の高級アルキル硫酸エステル塩、ＰＯＥラウリル硫酸トリエタノールアミン、ＰＯＥラルリル硫酸ナトリウム等のアルキルエーテル硫酸エステル塩、ラウロイルサルコシンナトリウム等のＮ−アシルサルコシン酸、Ｎ−ミリストイル−Ｎ−メチルタウリンナトリウム、ヤシ油脂肪酸メチルタウリッドナトリウム等の高級脂肪酸アミドスルホン酸、ＰＯＥステアリルエーテルリン酸等のリン酸エステル塩、モノラウロイルモノエタノールアミドＰＯＥスルホコハク酸ナトリウム、ラウリルポリプロピレングリコールスルホコハク酸ナトリウム等のスルホコハク酸塩、リニアドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、リニアドデシルベンゼンスルホン酸トリエタノールアミン等のアルキルベンゼンスルホン酸塩、Ｎ−ステアロイルグルタミン酸ジナトリウム、Ｎ−ステアロイルグルタミン酸モノナトリウム等のＮ−アシルグルタミン酸塩、硬化ヤシ油脂肪酸グリセリン硫酸ナトリウム等の高級脂肪酸エステル硫酸エステル塩、ロート油等の硫酸化油、ＰＯＥアルキルエーテルカルボン酸、ＰＯＥアルキルアリルエーテルカルボン酸塩、高級脂肪酸エステルスルホン酸塩、二級アルコール硫酸エステル塩、高級脂肪酸アルキロールアミド硫酸エステル塩、ラウロイルモノエタノールアミドコハク酸ナトリウム、カゼインナトリウム等のアニオン系界面活性剤；塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ラウリルトリメチルアンモニウム等のアルキルトリメチルアンモニウム塩、塩化ジステアリルジメチルアンモニウム塩等のジアルキルジメチルアンモニウム塩、塩化セチルピリジニウム等のアルキルピリジニウム塩、アルキル四級アンモニウム塩、アルキルジメチメチルベンジルアンモニウム塩、アルキルイソキノリニウム塩、ジアルキルモリホニウム塩、ＰＯＥアルキルアミン、アルキルアミン塩、ポリアミン脂肪酸誘導体、アミルアルコール脂肪酸誘導体、塩化ベンザルコニウム等のカチオン系界面活性剤；２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキシド−１−カルボキシエチロキシ二ナトリウム塩等のイミダゾリン系両性界面活性剤、アミドベタイン、スルホベタイン等のベタイン系界面活性剤等の両性界面活性剤；ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノイソステアレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタントリオレエート等のソルビタン脂肪酸エステル類、モノ綿実油脂肪酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリン、セスキオレイン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリンリンゴ酸塩等のグリセリンポリグリセリン脂肪酸類、モノステアリン酸プロピレングリコール等のプロピレングリコール脂肪酸エステル類、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥ・メチルポリシロキサン共重合体等の親油性非イオン界面活性剤；ＰＯＥソルビタンモノオレエート、ＰＯＥソルビタンモノステアレート等のＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類、ＰＯＥソルビットモノラウレート、ＰＯＥソルビットモノオレエート、ＰＯＥソルビットモノステアレート等のＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類、ＰＯＥグリセリンモノオレエート、ＰＯＥグリセリンジステアレート等のＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類、ＰＯＥモノオレエート、ＰＯＥジステアレート、ＰＯＥモノジオレエート等のＰＯＥ脂肪酸エステル類、ＰＯＥラウリルエーテル、ＰＯＥオレイルエーテル、ＰＯＥコレスタノールエステル等のＰＯＥアルキルエーテル類、ＰＯＥオクチルフェニルエーテル、ＰＯＥノニルフェニルエーテル等のＰＯＥアルキルフェニルエーテル類、プルロニック等のプルアロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰモノブチルエーテルＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類、ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油モノイソステアレート、ＰＯＥ硬化ヒマシ油マレイン酸等のＰＯＥヒマシ油硬化ヒマシ油誘導体、ＰＯＥソルビットミツロウ等のＰＯＥミツロウ・ラノリン誘導体、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド、脂肪酸イソプロパノールアミド等のアルカノールアミド、ＰＯＥプロピレングリコール脂肪酸エステル、ＰＯＥ脂肪酸アミド、ＰＯＥアルキルアミン、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルエトキシジメチルアミンオキシド等の親水性非イオン界面活性剤等が挙げられる。 アルコール類としては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール、シトステロール、ラノステロール等が挙げられる。 増粘剤としては、アラビアゴム、トラガントガム、ガラクタン、キャロブガム、グアーガム、カラギーナン、ペクチン、寒天、デンプン（トウモロコシ、コムギ、ジャガイモ、コメ）等の植物系高分子、デキストラン、プルラン等の微生物系高分子、カルボキシメチルデンプン、メチルヒドロキシプロピルデンプン等のデンプン系高分子、コラーゲン、カゼイン、ゼラチン等の動物系高分子、メチルセルロース、ニトロセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、セルロース硫酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、結晶セルロース等のセルロース系高分子、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル等のアルギン酸系高分子、ポリビニルメチルエーテル、カルボキシビニルポリマー等のビニル系高分子、ＰＯＥ系高分子、ＰＯＥ・ＰＯＰ共重合体系高分子、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリアクリル酸アミド等のアクリル系高分子、ポリエチレンイミン、カチオンポリマー、ベントナイト、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ラポナイト、ヘクトライト、無水ケイ酸等の無機系水溶性高分子等の水溶性高分子等が挙げられる。 キレート剤としては、シトラマル酸、アガル酸、グリセリン酸、シキミ酸、ヒノキチオール、没食子酸、タンニン酸、コーヒー酸、エチレンジアミン四酢酸、エチレングリコールジアミン四酢酸、ジエチレントリアミン五酢酸、フィチン酸、ポリリン酸、メタリン酸、ならびにこれらの類似体ならびにこれらのアルカリ金属塩およびカルボン酸エステル等が挙げられる。 活性酸素消去剤としては、スーパーオキシドディスムターゼ、マンニトール、カタラーゼ、β−カロチン、バイカリン、バイカレイン、ハイドロキノン誘導体、ビリルリン、コレステロール、トリプトファン、ヒスチジン、クエルセチン、クエルシトリン、カテキン、カテキン誘導体、没食子酸、没食子酸誘導体、２−Ｏ−エチルアスコルビン酸、プロアントシアニジン、セサミン、エピセサミン、メリッサ抽出物、エンメイソウ抽出物、セージ抽出物、ローズマリー抽出物、エレウテロコック抽出物、イチョウ抽出物、チョウジ抽出物、クジン抽出物、ハマメリス抽出物、ソウハクヒ抽出物、バジル抽出物、オタネニンジン抽出物、トウキ抽出物、オウゴン抽出物、センキュウ抽出物等が挙げられる。 紫外線吸収剤としては、パラアミノ安息香酸等の安息香酸系紫外線吸収剤；アントラニル酸メチル等のアントラニル酸系紫外線吸収剤；サリチル酸オクチル等のサリチル酸系紫外線吸収剤；パラメトキシケイ皮酸イソプロピル、パラメトキシケイ皮酸オクチル等のケイ皮酸系紫外線吸収剤；２、４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン等のベンゾフェノン系紫外線吸収剤；ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル等が挙げられる。 保湿剤としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、キシリトール、マルチトール、マルトース、D−マンニット、ブドウ糖、果糖、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、グルコサミン、シクロデキストリン等が挙げられる。 薬効成分としては、ビタミンＡ油、レチノール、パルミチン酸レチノール、塩酸ピリドキシン、ニコチン酸ベンジル、ニコチン酸アミド、ニコチン酸ｄｌ−α−トコフェノール、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、ビタミンＤ２、ｄｌ−α―トコフェロール、パントテン酸、ビオチン等のビタミン類；アズレン、グリチルリチン等の抗炎症剤；アルブチン等の美白剤、エストラジオール等のホルモン剤；酸化亜鉛、タンニン酸等の収斂剤；L−メントール、カンフル等の清涼剤；その他塩化リゾチーム、塩酸ピリドキシン、イオウ等を配合することができる。 さらに多様な薬効を示す各種抽出物を配合することができる。 すなわちドクダミエキス、オウバクエキス、カンゾウエキス、シャクヤクエキス、ボタンピエキス、ヘチマエキス、ユキノシタエキス、ユーカリエキス、チョウジエキス、マロニエエキス、ヤグルマギクエキス、海藻エキス、タイムエキス等が挙げられる。 防腐剤としては、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類、安息香酸、サリチル酸、ソルビン酸、パラクロルメタクレゾール、ヘキサクロロフェン、塩化ベンザルコニウム、塩化クロルヘキシジン、トリクロロカルバニリド、感光素、フェノキシエタノール等が挙げられる。 中和剤としては、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール、２−アミノ−２−メチル−１、３−プロパンジオール、水酸化カリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム等が挙げられる。 ｐＨ調整剤としては、乳酸、クエン酸、グリコール酸、コハク酸、酒石酸、リンゴ酸、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素アンモニウム等が挙げられる。 酸化防止剤としては、アスコルビン酸、α−トコフェロール、カロチノイド等が挙げられる。 上記成分は例示であり、これらに限定されるものではない。 またこれら成分は、所望する形態に応じた処方に従い、適宜組み合わせて配合することが可能である。 また、本発明の皮膚外用剤は、外皮に適用される化粧料、医薬品、医薬部外品等、特に好適には化粧料に広く適用することが可能であり、その剤型も、皮膚に適用できるものであればいずれでもよく、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水―油二層系、水―油―粉末三層系、軟膏、ゲル、エアゾール等、任意の剤型が適用される。 また、本発明の皮膚外用剤の使用形態も任意であり、例えば化粧水、乳液、クリーム、パック等のフェーシャル化粧料やファンデーションの他、メーキャップ化粧料、芳香化粧料、浴用剤等に用いることができる。 なお、上記の剤型および使用形態に本発明の皮膚外用剤がとり得る形態が限定されるものではない。 本発明の薬剤を配合した皮膚外用剤は、医薬品、医薬部外品（軟膏剤、歯磨剤等）及び化粧品、例えば洗顔料、乳液、クリーム、ジェル、エッセンス（美容液）、パック、マスク等の基礎化粧品；ファンデーション、口紅等のメーキャップ化粧品；口腔化粧品、芳香化粧品、毛髪化粧品、ボディ化粧品等の形態に広く適用可能である。 なお、これらの形態に、上記皮膚外用剤の取り得る形態が限定されるものではない。 また、剤型も水溶液系、可溶化系、油液系、ゲル系、軟膏系、エアゾール系、水−油２層系、水−油−粉末３層系等、幅広い剤型を取り得る。 本発明の抗しわ剤を配合した皮膚外用剤を使用することにより、しわ、特に小じわを防止・改善し、若々しくみずみずしい肌を提供することが可能である。 次に実施例を挙げ、本発明をさらに詳細に説明する。 本発明はこれにより限定されるものではない。 ここで、配合量は質量％である。 実施例に先立ち、本発明のしわ防止・改善剤の効果試験について述べる。 Ａ． 植物抽出物の調製 以下の植物はいずれもネパール産の植物を用いた。 （２）Quercus lineata Blume. のメタノール抽出物 （３）Quercus lanata Sm. の７０％エタノール水溶液抽出物 （４）Pinus wallichiana ABJacks のエタノール抽出物 （５）Dioscorea esculenta Burkill の８０％エタノール水溶液抽出物 （６）Cochlospermum religiosum(L.)Alston のエタノール抽出物 （７）Coriaria nepalensis Wall. の５０％１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物 （８）Cinnamomum bejolghota の３０％１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物 Ｂ． ＡＤＡＭ活性阻害物質のスクリーニング まず、HB-EGF-AP／HT-1080（ヒトHB-EGFのＮ末端に耐熱性アルカリフォスファターゼ（AP）を付加した融合蛋白質を強制的に発現するように改変したヒト繊維肉腫由来培養細胞HT-1080）を用いてＡＤＡＭ酵素阻害活性を有する化合物のスクリーニングを行った。 用いた細胞株HB-EGF-AP／HT-1080の細胞表面上にはアルカリフォスファターゼと融合した形でHB-EGF全長分子が発現している。 この細胞をホルボールエステルで刺激すると、細胞膜表面上のＡＤＡＭ酵素が活性化されてHB-EGF分子を切断する。 切断されて遊離型となったHB-EGFにはアルカリフォスファターゼが結合しているため、培養上清中のアルカリフォスファターゼ活性を測定することで化合物のＡＤＡＭ酵素阻害活性を間接的に測定できる。 具体的には、2.0Ｘ10 5 cells/mlになるように細胞数を調整したHB-EGF-AP／HT-1080を９６ウェル培養用マイクロプレートに0.2ml/wellずつ播取し、３７℃で一晩培養した。 培地を除去しPBS（−）で洗浄後、被験物質を含む培地を０．１ml/wellずつ添加し、３７℃で３０分間インキュベートして前処置した。 その後、培養上清を除去し、再度被験物質と６０nM TPA（ホルボールエステル：12-o-Tetradecanoylphorbol-acetate; Sigma P8139）を含む培地を０．２ml/wellずつ添加し、さらに６０分間インキュベートして処置した。 各被検物質の最終濃度は１０μｇ／ｍｌおよび５０μｇ／ｍｌの両方で試験した。 処置終了後の各ウェルの培養上清０．１mlをアルカリフォスターゼ活性測定用マイクロプレートのウェルに移し、６５℃にて１０分間インキュベートし、内在性のアルカリフォスターゼを失活させた。 １mg/mlのＡＰ基質（ｐ-nitrophenylphosphate, Wako; 141-02341）を０．１ml/wellずつ各ウェルに添加し、直ちに各ウェルの４０５nmでの吸光度を測定した。 遮光して室温にて２時間インキュベートしたのち、再び各ウェルの４０５nmでの吸光度を測定した。 ２時間インキュベート後の吸光度からＡＰ基質添加直後の吸光度を減じたものを各ウェルの吸光度とした。 ０％阻害コントロール（TPAのみを含む培地）の吸光度をＡ0、１００％阻害コントロール（培地のみ）の吸光度をＡ100、試料の吸光度をＡSとし、以下の式により阻害率（％）を算出した。 阻害率（％）＝（Ａ0−ＡS）／（Ａ0−Ａ100）×１００ その結果を表１に示す。 表１から、ホルトノキ科のElaeocarpus sphaericus、ブナ科のQuercus lineata Blume.、ブナ科のQuercus lanata Sm.、マツ科のPinus wallichiana ABJacks、ヤマノイモ科のDioscorea esculenta Burkill、ワタリモドキ科のCochlospermum religiosum(L.)Alston、ドクウツギ科のCoriaria nepalensis Wall.、クスノキ科のCinnamomum bejolghotaに高いＨＢ−ＥＧＦ遊離抑制効果が認められ、ＡＤＡＭ活性を阻害することが示唆された。 Ｃ． しわ改善剤の効果試験（バリア破壊しわモデルを用いた小じわ改善効果測定方法） ４週間後のしわの発生状況を４名の判定者が肉眼観察によりスコア化した。 しわの発生状況は「しわなし；０」、「うすいしわ；１」、「明らかなしわ；２」、「深いしわ；３」とし、０．５刻みで点数化した。 評点が大きいほどしわが深いことを示す。 各群の平均値および標準偏差を算出して薬剤の効果を図１に示した。 図１中、「Vehicle」は薬剤なし（エタノール液または７０％エタノール水溶液）を示す。 図１より、Cochlospermum religiosum (L.) Alston、Quercus lanata Sm.は、Vehicleと比較して有意にしわ抑制効果を示すことがわかる。 同時に経表皮水分蒸散量（Transepidermal Water Loss；ＴＥＷＬ）をVapometer（Delfin,フィンランド）を用いて測定した。 ＴＥＷＬは肌荒れの指標で、数値が高いほど肌状態が悪化していることを示す。 同一個体の右側背部（＝テープストリッピングを行っていない部位）のＴＥＷＬ値（ＮＴ）に対する左側背部（＝テープストリッピングを行っている部位）のＴＥＷＬ値（ＴＳ）の比を求め、各群の平均値および標準偏差を算出した。 その結果を図２に示す。 これらの結果からCochlospermum religiosum (L.) Alston、Quercus lanata Sm.はＡＤＡＭ酵素活性を阻害し、肌荒れに伴う表皮肥厚を抑制することにより小じわ形成を防止することが明らかになった。 以下に本発明に係る抗しわ剤を用いた皮膚外用剤の処方例（製剤例）を示す。 なお、いずれの皮膚外用剤も優れたしわ防止・改善効果を有していた。 製剤例１：しわ防止・改善用クリーム成分 配合量（質量％） 製剤例２：しわ防止・改善用クリーム成分 配合量（質量％） 製剤例３：しわ防止・改善用乳液成分 配合量（質量％） 製剤例４：しわ防止・改善用乳液成分 配合量（質量％） |
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