Formulation of a mixture of free -b- ring flavonoids and flavans as a therapeutic agent |
|||||||
| 申请号 | JP2004500784 | 申请日 | 2003-04-30 | 公开(公告)号 | JP2005529898A | 公开(公告)日 | 2005-10-06 |
| 申请人 | ユニゲン・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド; | 发明人 | ジア，キ; | ||||
| 摘要 | 本発明は、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ経路によって仲介される疾患及び状態の予防及び治療において使用するための２つの特定のクラスの化合物（遊離−Ｂ−環フラボノイド類及びフラバン類）の混合物で構成される新規な組成物を提供する。 本発明はさらに、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）及び５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）酵素を同時に阻害し、ｃｏｘ−２ｍＲＮＡ生成を低減する新規な方法を提供する。 最後に、本発明は、体重減少及び血中グルコース制御の方法を含む。 本発明の方法は、これを必要とする受容者に、有効な量の本発明の組成物を薬学的に許容可能なキャリアと一緒に投与することで構成される。 本発明は一般に、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）及び５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）経路によって仲介される疾患及び状態の予防及び治療に関し、こうしたものとしては、変形性関節症、慢性関節リウマチ、及び過剰使用から生じる他の損傷のような状態に関連する関節の不快感及び 疼痛 の緩和が挙げられるがこれらに限定されるものではない。 | ||||||
| 权利要求 | 少なくとも１つの遊離−Ｂ−環フラボノイドと少なくとも１つのフラバンとの混合物で構成される組成物。 前記組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド対フラバンの比は、９９：１の遊離−Ｂ−環フラボノイド：フラバン〜１：９９の遊離−Ｂ−環フラボノイド：フラバンの範囲から選択される、請求項１に記載の組成物。 前記組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド：フラバンの比は約８５：１５である、請求項２に記載の組成物。 前記遊離−Ｂ−環フラボノイドは、以下の構造： Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ 、及びＲ ５は独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＨ ２ 、−ＮＨＲ、−ＮＲ ２ 、−ＮＲ ３ ＋ Ｘ − 、炭素、酸素、窒素または硫黄、アルドペントース、メチル−アルドペントース、アルドヘキソース、ケトヘキソース及びその化学的誘導体を含む単一のまたは多数の糖の組合せのグリコシドからなる群から選択され； ここで、 Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基であり； Ｘは、ヒドロキシル、塩化物、ヨウ化物、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、フッ化物及び炭酸塩を含む薬学的に許容可能な対陰イオンの群から選択される。 ］ を有する化合物の群から選択される、請求項１に記載の組成物。 前記フラバンは、以下の構造： Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４及びＲ ５は独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＯＣＨ ３ 、−ＳＣＨ ３ 、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＨ ２ 、−ＮＲＨ、−ＮＲ ２ 、−ＮＲ ３ ＋ Ｘ − 、独立して、没食子酸エステル、酢酸エステル、シンナモイル及びヒドロキシル−シンナモイルエステル、トリヒドロキシベンゾイルエステル及びカフェオイルエステルからなる群から選択される置換基のエステル；アルドペントース、メチルアルドペントース、アルドヘキソース、ケトヘキソース及びその化学的誘導体を含む単一のまたは多数の糖の組合せの炭素、酸素、窒素または硫黄グリコシド；ダイマー、トリマー及び他の重合フラバン類；からなる群から選択され； ここで、 Ｒは、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基であり； Ｘは、ヒドロキシル、塩化物、ヨウ化物、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、フッ化物、炭酸塩が挙げられるがこれらに限定されるものではない薬学的に許容可能な対陰イオンの群から選択される。 ］ を有する化合物の群から選択される、請求項１に記載の組成物。 前記遊離−Ｂ−環フラボノイド及び前記フラバンは、有機合成によって得られるかまたは植物から単離される、請求項１に記載の組成物。 前記遊離−Ｂ−環フラボノイド及び前記フラバンは、茎、茎樹皮、樹幹、樹幹樹皮、小枝、塊茎、根、根樹皮、新鞘、種子、根茎、花及び他の生殖器官、葉並びに他の気生部分からなる群から選択される植物部分から単離される、請求項６に記載の組成物。 前記遊離−Ｂ−環フラボノイドは、アンノナセアエ、アステラセアエ、ビグノニアセアエ、コムブレタセアエ、コンポシタエ、エウフォルビアセアセ、ラビアタエ、ラウランセアセ、レグミノサエ、モラセアエ、ピナセアエ、プテリダセアエ、シノプテリダセアエ、ウルマセアセ及びジンギベラセアからなる群から選択される植物科から単離される、請求項６に記載の組成物。 前記遊離−Ｂ−環フラボノイドは、デスモス、アキロクリン、オロキシルム、ブチェナビア、アナファリス、コツラ、グナファリウム、ヘリクリスム、センタウレア、エウパトリウム、バッカリス、サピウム、スキューテラリア、モルサ、コレブローケア、スタキス、オリガヌム、ジジフォラ、リンデラ、アクチノダフネ、アカシア、デリス、グリシルヒザ、ミレッチア、ポンガミア、テフロシア、アルトカルプス、フィクス、ピティログラマ、ノトラエナ、ピヌス、ウルムス及びアルピニアからなる群から選択される植物属から単離される、請求項６に記載の組成物。 前記フラバンは、アカシア・カテキュー、アカシア・コンシナ、アカシア・ファルネシアナ、アカシア・セネガル、アカシア・スペシオサ、アカシア・アラビカ、Ａ． カエシア、Ａ． ペンナタ、Ａ． シヌアタ、Ａ． メアルンシイ、Ａ． ピクナンタ、Ａ． デアルバタ、Ａ． アウリクリフォルミス、Ａ． ホロセレシア及びＡ． マンギウムからなる群から選択される植物種から単離される、請求項６に記載の組成物。 前記遊離−Ｂ−環フラボノイドは、スキューテラリア属の植物中の単数または複数の植物から単離され、前記フラバンは、アカシア属の植物中の単数または複数の植物から単離される、請求項６に記載の組成物。 関節の疼痛及びこわばりを軽減し、可動性及び身体的機能を改良する方法であって、これを必要とする受容者に、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物で構成される有効な量の組成物を投与することを含む方法。 前記組成物は、０．０１〜２００mg/kgの体重から選択される用量で投与される、請求項１２に記載の方法。 投与経路は、経口、局所、坐剤、静脈内、及び皮内、胃内、筋肉内、腹腔内及び静脈内投与からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。 変形性関節症及び慢性関節リウマチに関連する病理学的状態を予防し、治療する方法であって、これを必要とする受容者に、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む有効な量の組成物を薬学的に許容可能なキャリアと一緒に投与することを含む方法。 前記組成物は、０．０１〜２００mg/kgの体重から選択される用量で投与される、請求項１５に記載の方法。 投与経路は、経口、局所、坐剤、静脈内、及び皮内、胃内、筋肉内、腹腔内及び静脈内投与からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。 シクロオキシゲナーゼＣＯＸ−２酵素の酵素活性を阻害する方法であって、これを必要とする受容者に、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物で構成される有効な量の組成物を投与することを含む方法。 前記組成物は、０．０１〜２００mg/kgの体重から選択される用量で投与される、請求項２０に記載の方法。 投与経路は、経口、局所、坐剤、静脈内、及び皮内、胃内、筋肉内、腹腔内及び静脈内投与からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。 ５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）酵素の酵素活性を阻害する方法であって、これを必要とする受容者に、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物で構成される有効な量の組成物を投与することを含む方法。 前記組成物は、０．０１〜２００mg/kgの体重から選択される用量で投与される、請求項２１に記載の方法。 投与経路は、経口、局所、坐剤、静脈内、及び皮内、胃内、筋肉内、腹腔内及び静脈内投与からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。 ＣＯＸ−２酵素及び５−ＬＯ酵素の酵素活性を同時に阻害する方法であって、これを必要とする受容者に、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物で構成される有効な量の組成物を投与することを含む方法。 前記組成物は、０．０１〜２００mg/kgの体重から選択される用量で投与される、請求項２４に記載の方法。 投与経路は、経口、局所、坐剤、静脈内、及び皮内、胃内、筋肉内、腹腔内及び静脈内投与からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。 ｃｏｘ−２ｍＲＮＡ生成の阻害の方法であって、これを必要とする受容者に、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む有効な量の組成物を投与することを含む方法。 前記組成物は、０．０１〜２００mg/kgの体重から選択される用量で投与される、請求項２７に記載の方法。 投与経路は、経口、局所、坐剤、静脈内、及び皮内、胃内、筋肉内、腹腔内及び静脈内投与からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。 ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ経路によって仲介される疾患及び状態を予防し、治療する方法であって、これを必要とする受容者に、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む有効な量の組成物を投与することを含む方法。 前記組成物は、０．０１〜２００mg/kgの体重から選択される用量で投与される、請求項３０に記載の方法。 投与経路は、経口、局所、坐剤、静脈内、及び皮内、胃内、筋肉内、腹腔内及び静脈内投与からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。 ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ経路仲介の生理学的及び病理学的状態は、生理痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満症、糖尿病、症候群Ｘ、アルツハイマー病、呼吸器アレルギー反応、慢性静脈不全、痔核、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張性頭痛、片頭痛、炎症性腸疾患；ウイルス、細菌、真菌によって引き起こされる局所感染、日やけ、熱傷、接触性皮膚炎、メラノーマ及び癌からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。 血中グルコース濃度を低減する方法であって、これを必要とする受容者に、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む有効な量の組成物を投与することを含む方法。 前記組成物は、０．０１〜２００mg/kgの体重から選択される用量で投与される、請求項３４に記載の方法。 投与経路は、経口、局所、坐剤、静脈内、及び皮内、胃内、筋肉内、腹腔内及び静脈内投与からなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。 ボディマス指数を減少させ、体重減少を引き起こす方法であって、これを必要とする受容者に、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む有効な量の組成物を投与することによる方法。 前記組成物は、０．０１〜２００mg/kgの体重から選択される用量で投与される、請求項３７に記載の方法。 投与経路は、経口、局所、坐剤、静脈内、及び皮内、胃内、筋肉内、腹腔内及び静脈内投与からなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。 |
||||||
| 说明书全文 | 本発明は一般に、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）及び５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）経路によって仲介される疾患及び状態の予防及び治療に関する。 特に、本発明は、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ経路によって仲介される疾患及び状態の予防及び治療において使用するための２つの特定のクラスの化合物（遊離−Ｂ−環フラボノイド類及びフラバン類）のブレンドの混合物で構成される新規な組成物に関する。 本発明に含まれるのは、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ酵素のタンパク質機能の同時阻害の方法、及び本発明の新規な組成物の投与によってｍＲＮＡの生成を調節する方法である。 また本発明に含まれるのは、例えば変形性関節症、慢性関節リウマチ、及び過剰使用から生じる他の損傷のような状態に関連する関節の不快感及び疼痛が挙げられるがこれらに限定されるものではないＣＯＸ−２及び５−ＬＯ仲介疾患及び状態の予防及び治療の方法である。 さらに本発明に含まれるのは、血中グルコースレベルを低減し、体重減少を促進する方法である。 細胞膜からのアラキドン酸（ＡＡ）の遊離及び代謝は、幾つかの異なる経路による親炎症性代謝物の生成をもたらす。 ほぼ間違いなく、炎症に至る最も重要な経路のうちの２つは、酵素５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）及びシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）によって仲介される。 こうした平行経路はそれぞれロイコトリエン及びプロスタグランジンの生成をもたらし、これらは炎症反応の開始及び進行において重要な役割を果たす。 こうした血管作動性化合物は、組織中への炎症細胞の浸潤を促進し、炎症反応を引き延ばすケモタキシンである。 従って、炎症のこうしたメディエーターを生成させる原因である酵素は、慢性関節リウマチ、変形性関節症、アルツハイマー病及び特定のタイプの癌のような疾患の病因論に寄与する炎症の治療を目的とする多くの新たな薬物の標的になった。 シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）酵素の阻害は、大部分の非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）に帰する作用の機構である。 ＣＯＸ酵素の２つの別個のアイソフォーム（ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２）が存在し、これらは約６０％の配列相同性を共有するが、発現プロフィル及び機能が異なる。 ＣＯＸ−１は、血小板凝集能、胃の細胞機能の保護及び正常な腎臓機能の維持のような正常な生理学的機能の調節に関与する生理学的に重要なプロスタグランジンの生成と関連づけられた酵素の構成形態である（Dannhardt and Kiefer (2001) Eur. J. Med. Chem. 36:109-26）。 第２のアイソフォーム（ＣＯＸ−２）は、親炎症性サイトカインの例えばインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）及び他の成長因子によって誘発可能な酵素の形態である（Herschmann (1994) Cancer Metastasis Rev. 134:241-56; Xie et al. (1992) Drugs Dev. Res. 25:249-65）。 このアイソフォームは、ＡＡからのプロスタグランジンＥ ２ （ＰＧＥ ２ ）の生成を触媒する。 ＣＯＸ−２の阻害が、従来のＮＳＡＩＤｓの抗炎症活性の原因である。 ＣＯＸ−２及び５−ＬＯに対する二重特異性を証明し、同時に、ＣＯＸ−１と比較してＣＯＸ−２選択性を維持する阻害剤は、ＡＡ代謝の多数の経路を阻害するという明白な恩典を有すると思われる。 このような阻害剤は、生成を制限することによって、ＰＧＥ ２の炎症性効果並びに多数のロイコトリエン（ＬＴ）のものを遮断すると思われる。 これは、ＬＴＢ ４及びＬＴＤ ４の血管拡張、血管透過性及び走化性効果並びにＬＴＥ ４の影響（またアナフィラキシーの遅反応性物質として周知である）を含む。 こうしたもののうち、ＬＴＢ ４は最も効力のある走化性及びケモカイン効果を有し（Moore (1985) in Prostanoids: Pharmacological, Physiological and Clinical Relevance, Cambridge University Press, NY, pp. 229-30）並びに炎症性腸疾患を有する患者の消化管粘膜中で（Sharon and Stenson (1983) Gastroenterology 84:1306-13）及び慢性関節リウマチを有する患者の滑液内部で（Klicksein et al. (1980) J. Clin. Invest. 66:1166-70; Rae et al. (1982) Lancet ii :1122-4）高まることが示された。 二重ＣＯＸ−２／５−ＬＯ阻害剤の上述の恩典に加えて、多くの二重阻害剤は、従来のＮＳＡＩＤｓによって引き起こされる消化管損傷及び不快感を含むＮＳＡＩＤｓまたはＣＯＸ−２阻害剤に特徴的な副作用の幾つかを引き起こさない。 ＮＳＡＩＤ誘発胃炎症は主として５−ＬＯの代謝物、特にＬＴＢ ４ （細胞を胃の病巣の部位に引きつけ、従ってさらなる損傷を引き起こす）が原因であると示唆されてきた（Kircher et al. (1997) Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids 56:417-23）。 ロイコトリエンは、プロスタノイド阻害後の胃粘膜内部の一次ＡＡ代謝物を表す。 こうした化合物は、ＮＳＡＩＤｓの使用から生じる胃上皮損傷のかなりの量の一因となるようである。 （Celotti and Laufer (2001) Pharmacol. Res. 43:429-36）。 ＣＯＸ−２及び５−ＬＯの二重阻害剤はまた、ラットモデルにおける関節炎の心臓における冠状血管収縮を阻害することが証明された（Gok et al. (2000) Pharmacology 60:41-46）。 総合すれば、こうした特性は、増大した効力及び低減した副作用の両方に関して、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯの二重阻害剤には、特異的ＣＯＸ−２阻害剤及び非特異的ＮＳＡＩＤｓにまさる別個の利点存在するかもしれないことを示唆する。 ＣＯＸ阻害剤の作用の機構は大部分の従来のＮＳＡＩＤｓのものと重なり合うので、ＣＯＸ阻害剤を使用して、炎症が決定的な役割を果たす一時的状態及び慢性疾患における炎症に関連する疼痛及び腫脹のような同じ症状の多くが治療される。 一時的状態は、少量の表皮剥脱、日やけまたは接触性皮膚炎に関連する炎症の治療、並びに、緊張性頭痛及び片頭痛及び生理痛に関連する疼痛の緩和を含む。 慢性状態は、関節炎の疾患の例えば慢性関節リウマチ及び変形性関節症を含む。 慢性関節リウマチは主として自己免疫疾患であり、変形性関節症は関節の軟骨の劣化によって引き起こされるが、各々に関連する炎症を低減することは、こうした疾患に苦しむ人々にクオリティ・オブ・ライフのかなりの増大を提供する（Weinberg (2001) Immunol. Res. 22:319-41; Wollhiem (2000) Curr. Opin. Rheum. 13:193-201）。 炎症は一般にリウマチ性疾患の構成要素なので、ＣＯＸ阻害剤の使用は、疾患の例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）（Goebel et al. (1999) Chem. Res. Tox. 12:488-500; Patrono et al. (1985) J. Clin. Invest. 76:1011-1018）及びリウマチ性皮膚状態の例えば強皮症を含むように拡大された。 ＣＯＸ阻害剤はまた、乾癬炎のようなリウマチ由来ではない炎症性皮膚状態の緩和のために使用され、ここではプロスタグランジンの過剰生成から生じる炎症を低減することは、直接の恩典を提供する可能性がある（Fogh et al. (1993) Acta Derm. Venereol (Oslo) 73:191-3）。 抗炎症剤としてのそれらの使用に加えて、ＣＯＸ阻害剤の別の潜在的な役割は癌の治療である。 ＣＯＸ−２の過剰発現は、様々なヒト悪性腫瘍において証明され、ＣＯＸ−２の阻害剤は、皮膚、乳房及び膀胱腫瘍を有する動物の治療において有効であることが示された。 作用の機構は完全に理解されているわけではないが、ＣＯＸ−２の過剰発現はアポトーシスを阻害し、腫瘍発生細胞タイプの侵襲性を増大させることが示された（Dempke et al. (2001) J. Can. Res. Clin. Oncol. 127:411-17; Moore and Simmons (2000) Current Med. Chem. 7:1131-44）。 ＣＯＸ−２の過剰発現から生じるプロスタグランジンの向上した生成は、細胞増殖を促進し、従って脈管形成を増大させることが可能である。 （Moore (1985) in Prostanoids: Pharmacological, Physiological and Clinical Relevance, Cambridge University Press, NY, pp. 229-30; Fenton et al. (2001) Am. J. Clin. Oncol. 24:453-57）。 様々なタイプの癌の予防及び治療における潜在的な使用のために、ＣＯＸ−２阻害剤を評価する多数の臨床研究がなされた。 １９９９年に、結腸直腸癌の１３０，０００人の新たな患者が米国において診断された。 非特異的ＮＳＡＩＤであるアスピリンは、結腸直腸癌の発生を４０〜５０％（Giovannucci et al. (1995) N. Engl. J. Med. 333:609-614）及び死亡率を５０％（Smalley et al. (1999) Arch. Intern. Med. 159:161-166）低減することが見い出された。 １９９９年に、ＦＤＡは、結腸直腸癌による死亡率を低減するために、ＣＯＸ−２阻害剤セレコキシブをＦＡＰ（家族性大腸ポリポーシス）において使用するために承認した。 ＣＯＸ−２が関与する証拠を有する他の癌をＣＯＸ−２阻害剤を用いて成功裏に予防及び／または治療できるかもしれないと考えられており、こうしたものとしては、食道癌、頭部癌及び頸の癌、乳癌、膀胱癌、頸部癌、前立腺癌、肝細胞癌及び非小細胞性肺癌が挙げられるがこれらに限定されるものではない（Jaeckel et al. (2001) Arch. Otolarnygol. 127:1253-59; Kirschenbaum et al. (2001) Urology 58:127-31; Dannhardt and Kiefer (2001) Eur. J. Med. Chem. 36:109-26）。 ＣＯＸ−２阻害剤はまた、ハイリスク患者における結腸癌を成功裏に予防すると判明するかもしれない。 また、ＣＯＸ−２阻害剤は、幾つかのタイプの致命的な癌を予防できるかまたは逆転さえもできるという証拠が存在する。 現在まで、５０もの研究は、動物における前癌性及び悪性腫瘍を予防することができ、多分、膀胱、食道及び皮膚癌を同様に予防することを示している。 ＣＯＸ−２阻害は、今世紀の最も重要な予防医学的成果のうちの１つであると判明する可能性がある。 最近の科学の進歩は、ＣＯＸ−２発現、一般的な炎症及びアルツハイマー病（ＡＤ）の病因論の間の相関を特定した（Ho et al. (2001) Arch. Neurol. 58:487-92）。 動物モデルにおいては、ＣＯＸ−２酵素を過剰発現するトランスジェニックマウスは、より損傷を受けやすいニューロンを有する。 国立老化現象研究所（ＮＩＡ）は、ＮＳＡＩＤｓがアルツハイマー病の進行を遅らせることができるかどうかを決定するための臨床試験に着手している。 ナプロキセン（非選択的ＮＳＡＩＤ）及びロフェコキシブ（ビオックス（Vioxx）、ＣＯＸ−２特異的選択的ＮＳＡＩＤ）が評価されよう。 先の証拠は、炎症はアルツハイマー病の一因となることを示した。 アルツハイマー協会（Alzheimer's Association）及びＮＩＡによれば、米国において約四百万の人々がＡＤに苦しみ、これは今世紀の中ごろまでに千四百万人に増大すると予想される。 ＣＯＸ酵素（またプロスタグランジンＨ ２シンターゼとして周知である）は２つの別個の反応を触媒する。 第１の反応においては、ＡＡを代謝して、不安定なプロスタグランジンＧ ２ （ＰＧＧ ２ ）を形成し、これはシクロオキシゲナーゼ反応である。 第２の反応においては、ＰＧＧ ２をエンドペルオキシドＰＧＨ ２に転換し、これはペルオキシダーゼ反応である。 短命のＰＧＨ ２は非酵素的にＰＧＥ ２に分解する。 本明細書において説明する化合物は、ＣＯＸ酵素の新規な阻害剤を特定するために、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２ペルオキシダーゼ活性の阻害に焦点を合わせたアッセイと化学的脱複製プロセスを合わせた発見戦略の結果である。 遺伝子発現という用語をしばしば使用して、ｍＲＮＡ生成及びタンパク質合成の広い結果を説明する。 実際に、実際の遺伝子発現の変化はタンパク質レベルの観察可能な変化を決してもたらさないかもしれない。 タンパク質レベルの変化は必ずしも遺伝子発現の変化から生じるとは限らないという命題もまた真であり得る。 ゲノムＤＮＡから機能性タンパク質に至る経路中に６つの可能な調節箇所が存在する：（１）前ｍＲＮＡの生成に至る、核因子及び他の信号による転写調節；（２）エクソンスプライシング、５'キャップ構造及び３'ポリ−アデニル化配列の付加並びに核から細胞質中への熟成ｍＲＮＡの輸送を含む前ｍＲＮＡプロセシング調節；（３）タンパク質への翻訳のための、特定の細胞質部位へのｍＲＮＡの局在化を制御するｍＲＮＡ輸送調節；（４）特定のｍＲＮＡからの任意のタンパク質翻訳の前にまたは翻訳の終了の手段としてｍＲＮＡプールのサイズを制御するｍＲＮＡ分解調節；（５）タンパク質翻訳開始の特定の速度の翻訳調節；（６）グリコシル化及びタンパク質開裂のような修飾を含む翻訳後プロセシング調節。 ゲノム研究に関連して、この経路中の後の段階（例えばタンパク質レベル）ではなく初期の段階（例えばｍＲＮＡレベル）により近い遺伝子発現レベルを測定する技術を使用することが重要である。 最近の報告は、ｃｏｘ−２遺伝子発現における変更において、薬草であるスキューテラリア・バイカレンシス（Scutellaria baicalensis）から単離されたフラボノイド類を関与させる可能性に取り組んでいる（Wakabayashi and Yasui (2000) Eur. J. Pharmacol. 406:477-481; Chen et al. (2001) Biochem. Pharmacol. 61:1417-1427; Chi et al. (2001) 61:1195-1203 and Raso et al. (2001) Life Sci. 68:921-931）。 ｃｏｘ−２遺伝子発現に関して上記に引用された研究の各々は、ウェスタンブロット技術を使用して、分子レベルの実証無しで遺伝子発現における推定上の変更を評価した。 この方法は、タンパク質レベルを測定するのみでであり、特異的転写生成物であるｍＲＮＡを測定しないので、タンパク質発現の観察される増大に至る他の機構を含むことが可能である。 例えば、ＬＰＳは、ｍＲＮＡＳの３'未翻訳領域（３'ＵＴＲ）中に見い出される不安定性配列によってｍＲＮＡ半減期を調節すると報告され（Watkins et al. (1999) Life Sci. 65:449-481）、これは遺伝子転写の速度の交互変化の無い増大したタンパク質発現を説明できた。 従って、これは、こうした治療条件は遺伝子発現の意味のある変化をもたらしたかどうかという疑問を残したままである。 ＲＴ−ｑＰＣＲ及びＤＮＡマイクロアレイ分析のような技術は、分析のためのｍＲＮＡレベルに依拠し、様々な条件下で、すなわち医薬品の存在下でまたは無い状態で遺伝子発現のレベルを評価するために使用することができる。 文献には、遊離−Ｂ−環フラボノイド類またはフラバン類を治療剤として使用する場合に直接にまたは間接にｍＲＮＡの量を特異的に測定する技術を使用する既知の報告が存在しない。 フラボノイド類は、天然物の広く分布する群である。 フラボノイド類の摂取は、痴呆の発生の危険と逆に関連することが証明された。 作用の機構は既知ではないが、フラボノイド類の抗酸化効果が原因であると推測されてきた（Commenges et al. (2000) Eur. J. Epidemiol. 16:357-363）。 ポリフェノールフラボン類は、ｃｏｘ−２、核因子カッパＢ（ＮＦκＢ）及びｂｃｌ−Ｘ（Ｌ）を含む遺伝子上のｍＲＮＡレベルで作用することで形質転換結腸細胞におけるプログラム細胞死、分化及び成長阻害を誘発する（Wenzel et al. (2000) Cancer Res. 60:3823-3831）。 Ｂ環上のヒドロキシル基の数は、ｃｏｘ−２転写活性の抑制において重要であると報告された（Mutoh et al. (2000) Jnp. J. Cancer Res. 91:686-691）。 遊離−Ｂ−環フラボン類及びフラボノールは特定のクラスのフラボノイド類であり、芳香族Ｂ環上に置換基を有せず（本明細書において遊離−Ｂ−環フラボノイド類と呼ぶ）、これは以下の一般的な構造によって示される： ［式中、 典型的に、フラボノイド類は、それの利用可能性に基づいて、活性に関して無作為に試験された。 時々、Ｂ−環上の置換の要件が、特定の生理活性、例えばｐ−糖タンパク質に対する高親和性結合にとって必要なＢ−環置換（Boumendjel et al. (2001) Bioorg. Med. Chem. Lett. 11:75-77）；強心効果（Itoigawa et al. (1999) J. Ethnopharmacol. 65:267-272）、リノール酸ヒドロペルオキシド誘発毒性に対し内皮細胞に及ぼす保護効果（Kaneko and Baba (1999) Biosci. Biotechnol. Biochem. 63:323-328）、ＣＯＸ−１阻害活性（Wang (2000) Phytomedicine 7:15-19）及びプロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ活性（Kalkbrenner et al. (1992) Pharmacology 44:1-12）のために重要視された。 幾つかの発表のみが、遊離−Ｂ−環フラボノイド類の未置換Ｂ−環の重要性について言及した。 １例は、ＮＡＤＰＨキノンアクセプターオキシドレダクターを阻害する２−フェニルフラボン類の潜在的な抗凝血薬としての使用である（Chen et al. (2001) Biochem. Pharmacol. 61:1417-1427）。 様々な遊離−Ｂ−環フラボノイド類の抗炎症活性に関して報告された作用の機構は議論の的となった。 遊離−Ｂ−環フラボノイド類であるクリシン（Liang et al. (2001) FEBS Lett. 496:12-18）、ウォゴニン（wogonin）（Chi et al. (2001) Biochem. Pharmacol. 61:1195-1203）及びハランギン（halangin）（Raso et al. (2001) Life Sci. 68:921-931）の抗炎症活性は、ペルオキシソーム−増殖剤活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）の活性化による誘発可能なシクロオキシゲナーゼ及び一酸化窒素合成酵素の抑制並びに脱顆粒及びＡＡ放出に及ぼす影響に関連づけられた（Tordera et al. (1994) Z. Naturforsch [C] 49:235-240）。 オロキシリン（oroxylin）、バイカレイン及びウォゴニンは、シクロオキシゲナーゼに影響することなしに１２−リポキシゲナーゼ活性を阻害すると報告された（You et al. (1999) Arch. Pharm. Res. 22:18-24）。 より最近、ウォゴニン、バイカリン（baicalin）及びバイカレインの抗炎症活性は、一酸化窒素阻害剤及びリポ多糖によって誘発される誘発可能な一酸化窒素合成酵素及びｃｏｘ−２酵素生成の阻害によって起きるとして報告された（Chen et al. (2001) Biochem. Pharmacol. 61:1417-1427）。 またオロキシリンはＮＦκＢ活性化の抑制によって作用すると報告された（Chen et al. (2001) Biochem. Pharmacol. 61:1417-1427）。 最後に、ウォゴニンは、報告によると、マクロファージ中の誘発可能なＰＧＥ ２生成を阻害する（Wakabayashi and Yasui (2000) Eur. J. Pharmacol. 406:477-481）。 バイカレインによるマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）のリン酸化の阻害及びＣａ ２＋イオノホアＡ２３１８７誘発ＰＧＥ ２放出の阻害は、スキューテラリアエ・ラディックス（Scutellaria eradix）の抗炎症活性の機構として報告された（Nakahata et al. (1999) Nippon Yakurigaku Zasshi 114, Supp. 11:215P-219P, Nakahata et al. (1998) Am. J. Chin. Med. 26:311-323）。 スキューテラリア・バイカレンシスから得られるバイカリンは、報告によると、超抗原ブドウ球菌エキソトキシン刺激Ｔ−細胞増殖並びにＩＬ−１β、ＩＬ−６、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）の生成を阻害する（Krakauer et al. (2001) FEBS Lett. 500:52-55）。 従って、バイカリンの抗炎症活性は、超抗原によって活性化された親炎症性サイトカイン仲介シグナリング経路を阻害することに関連づけられた。 しかしながら、バイカリンの抗炎症活性は、その生理活性を制限する様々なケモカイン類の結合が原因であると提案された（Li et al. (2000) Immunopharmacol. 49:295-306）。 最近、トロンビン及びトロンビン受容体アゴニストペプチドによって誘発される接着分子発現にバイカリンが及ぼす影響（Kimura et al. (2001) Planta Med. 67:331-334）、並びに、ＭＡＰＫカスケードの阻害（Nakahata et al. (1999) Nippon Yakurigaku Zasshi 114, Supp 11:215P-219P; Nakahata et al. (1998) Am. J. Chin Med.26:311-323）が報告された。 中国産の薬用植物であるスキューテラリア・バイカレンシスは、バイカレイン、バイカリン、ウォゴニン及びバイカレノシド（baicalenoside）を含むかなりの量の遊離−Ｂ−環フラボノイド類を含む。 従来、この植物を使用して、熱の除去、発熱の除去、湿気−温暖及び夏季熱症候群；高熱から生じる煩渇多飲症；カルブンケル、痛み及び他の化膿性皮膚感染；上気道感染の例えば急性扁桃炎、咽頭炎及び猩紅熱；ウイルス性肝炎；腎炎；ペルビティス；赤痢；吐血及び鼻出血を含む多数の状態を治療した。 またこの植物を従来を使用して、流産を予防した（Encyclopedia of Chinese Traditional Medicine, ShangHai Science and Technology Press, ShangHai, China, 1998を参照されたい）。 臨床的には、現在スキューテラリアを使用して、小児肺炎、小児細菌性下痢、ウイルス性肝炎、急性胆嚢炎症、高血圧、切り傷及び手術から生じる局所急性炎、気管支喘息及び上気道感染のような状態を治療している（Encyclopedia of Chinese Traditional Medicine, ShangHai Science and Technology Press, ShangHai, China, 1998）。 気管支喘息を治療するためのスキューテラリアの根の薬理学的効力は、報告によると、遊離−Ｂ−環フラボノイド類の存在及び好酸球の補充に関連するエオタキシンの抑制に関連する（Nakajima et al. (2001) Planta Med.67(2):132-135）。 現在まで、多数の天然に存在する遊離−Ｂ−環フラボノイド類が様々な使用のために商品化された。 例えば、スキューテラリア抽出物のリポソーム製剤は皮膚ケアのために利用された（米国特許第5,643,598号；同第5,443,983号）。 バイカリンは、癌遺伝子に及ぼすその阻害効果が理由となって癌を予防するために使用された（米国特許第6,290,995号）。 バイカリン及び他の化合物は、抗ウイルス、抗菌性及び免疫調節剤として（米国特許第6,083,921号）並びに天然の抗酸化剤として（ポーランド国特許第9,849,256号）使用された。 クリシンはその不安低減特性のために使用された（米国特許第5,756,538号）。 抗炎症フラボノイド類は、直腸及び結腸疾患の制御及び治療（米国特許第5,858,371号）並びにリポキシゲナーゼの阻害（米国特許第6,217,875号）のために使用される。 またこうした化合物を、結合組織の修復及び維持のためにグルコサミンコラーゲン及び他の成分と共に製剤化する（米国特許第6,333,304号）。 フラボノイドエステルは、化粧品組成物のための活性成分を構成する（米国特許第6,235,294号）。 ２００２年３月１日に出願された"Identification of Free-B-ring Flavonoids as Potent COX-2 inhibitors"と称する米国特許出願第10/091,362号は、遊離−Ｂ−環フラボノイドを含む組成物または遊離−Ｂ−環フラボノイド類の混合物を含む組成物をこれを必要とする受容者に投与することによってシクロオキシゲナーゼ酵素ＣＯＸ−２を阻害する方法を開示している。 これは、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とＣＯＸ−２阻害活性との間の関連に関する最初の報告である。 この出願を、特に本明細書において、参考のためにその全体を引用する。 日本国特許第63027435号はバイカレインの抽出及び富化を説明しており、日本国特許第61050921号はバイカリンの精製を説明している。 ［式中、 カテキンは、単独で及び茶に見い出される他のフラボノイド類と共にの両方で作用し、抗ウイルス活性及び抗酸化剤活性の両方を有する。 カテキンは、ウイルス性肝炎の治療の際に有効であることが示された。 これはまた、心臓、腎臓、肺及び脾臓に対する酸化的損傷を予防するようであり、胃癌細胞の増殖を阻害することが示された。 カテキン及びその異性体であるエピカテキンは、プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼをＩＣ ５０値４０μMで阻害する。 （Kalkbrenner et al. (1992) Pharmacol. 44:1-12）。 （＋）−カテキン及びガロカテキンを含む５つのフラバン−３−オール誘導体は、４つの植物種、アツナ・ラセモサ（Atuna racemosa）、シジギウム・カリノカルプム（Syzygium carynocarpum）、シジギウム・マラッセンス（Syzygium malaccense）及びバンタネア・ペルビアナ（Vantanea perviana）から単離され、ＣＯＸ−１と比較して、ＣＯＸ−２に対してＩＣ ５０値３．３μM〜１３８μMの範囲にわたる等しいかまたはより弱い阻害活性を示す（Noreen et al. (1998) Planta Med. 64:520-524）。 （＋）−カテキンは、セイバ・ペンタンドラ（Ceiba pentandra）の樹皮から単離され、ＣＯＸ−１をＩＣ ５０値８０μMで阻害する（Noreen et al. (1998) J. Nat. Prod. 61:8-12）。 市販の純粋な（＋）−カテキンは、ＣＯＸ−１を実験条件に依存してＩＣ ５０値約１８３〜２７９μMで阻害し、ＣＯＸ−２に対する選択性はない（Noreen et al. (1998) J. Nat. Prod. 61:1-7）。 緑茶カテキンをスプレーグ・ドーリー雄性ラットの食餌中に補った場合に、血小板ＰＬＡ ２の活性レベルを低下させ、血小板シクロオキシゲナーゼレベルを有意に低減した（Yang et al. (1999) J. Nutr. Sci. Vitaminol. 45:337-346）。 カテキン及びエピカテキンは、報告によると、ヒト結腸癌ＤＬＤ−１細胞においてｃｏｘ−２遺伝子転写を弱く抑制する（ＩＣ ５０ ＝４１５．３μM）（Mutoh et al. (2000) Jpn. J. Cancer Res. 91:686-691）。 赤葡萄酒から得られる（＋）−カテキンの神経保護能力は、シクロオキシゲナーゼ、リポキシゲナーゼまたは一酸化窒素合成酵素のような細胞内酵素に及ぼす阻害効果ではなく、カテキンの抗酸化剤特性から生じる（Bastinanetto et al. (2000) Br. J. Pharmacol. 131:711-720）。 緑茶及び紅茶から精製されたカテキン誘導体の例えばエピガロカテキン−３−ガラート（ＥＧＣＧ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピカテキン−３−ガラート（ＥＣＧ）及びテアフラビンは、ヒト結腸粘膜及び結腸腫瘍組織におけるＡＡのシクロオキシゲナーゼ−及びリポキシゲナーゼ−依存性代謝の阻害（Hong et al. (2001) Biochem. Pharmacol. 62:1175-1183）並びに誘発ｃｏｘ−２遺伝子発現及びＰＧＥ ２生成（Park et al. (2001) Biochem. Biophys. Res. Commun. 286:721-725）を示した。 セラスツルス・オルビクラツス（Celastrus orbiculatus）の気生部分（aerial part）から単離されるエピアフゼレチン（Epiafzelechin）は、ＩＣ ５０値１５μMでＣＯＸ−１活性の用量依存性阻害を示し、また用量１００mg/kgでの経口投与後のカラゲーニン誘発マウス脚浮腫に対する抗炎症活性を証明した（Min et al. (1999) Planta Med. 65:460-462）。 様々な植物源から、特に緑茶茶葉から得られるカテキン及びその誘導体は、ＨＰＶ感染尖形コンジローマの治療において（Cheng、米国特許第5,795,911号）及び乳頭腫ウイルスによって引き起こされる過形成の治療において（Cheng、米国特許第5,968,973号及び同第6,197,808号）使用された。 またカテキン及びその誘導体は、哺乳類組織において脈管形成を阻害するために、皮膚癌、乾癬、クモ状静脈または目の下のくまのような状態において（Anderson、米国特許第6,248,341号）、マウスにおけるＵＶＢ誘発腫瘍発生に対して（Agarwal et al. (1993) Photochem. Photobiol. 58:695-700）、遺伝子発現のレベルで一酸化窒素合成酵素及び酵素活性を阻害するために（Chan、米国特許第5,922,756号）、毛髪成長剤として（Takahashi、米国特許第6,126,940号）局所使用された。 カテキンに基づく組成物はまた、ざ瘡の治療のために（Murad、米国特許第5,962,517号）、消化器の組織を硬化し（Shi、米国特許第5,470,589号）、アンドロゲン障害関連疾患及び癌を治療する際に５アルファ−レダクターゼ活性を阻害するために（Liao、米国特許第5,605,929号）他の抽出物及びビタミンと共に製剤化された。 緑茶抽出物は、ＣＯＸ−２酵素を阻害することで炎症を低減するために、特定の活性成分のいずれも特定せずに７つの他の植物抽出物と共に製剤化された（Mewmark、米国特許第6,264,995号）。 アカシアはマメ科の高木及び低木の属である。 アカシア属は、レグミノサエ（Leguminosae）の科及びミノソイデアエ（Mimosoideae）の亜科に属する１，０００種を超えるものを含む。 アカシアは、中央及び南アメリカ、アフリカ、アジアの一部分、並びに、最大数の固有種を有するオーストラリアの熱帯及び亜熱帯区域のような場所で世界中に分布する。 アカシアは主に乾燥した領域に存在し、ここではで森林はしばしばまばらなとげの多い低木の性質である。 アカシア属は、主に葉の形態に基づいて３つの亜属に分類され、これはすなわちアカシア、アクリフェルム（Aculiferum）及びヘテロフィルム（Heterophyllum）である。 しかしながら、成木の葉の性質に基づいて、アカシア属は２つの“普及した”群に分類でき、これはすなわち典型的な二回羽状種及び偽葉種である。 偽葉は、拡張して、小葉のない葉様構造になる変性した葉柄であり、乾生条件に適応している。 典型的な二回羽状種は主に熱帯全体にわたって見い出されるが、偽葉種は主にオーストラリアに見られる。 ４０種を超えるアカシアがインドにおいて報告された。 ギャンブル（Gamble）はFlora of Madras Presidencyと称する自書においてインド南部に関して２３の自生種を列記しており、この１５はタミール・ナドゥにおいて見い出される。 しかしながら、この時以来、多くの新たなアカシア種がインドに導入され、現在約４０種がタミール・ナドゥ自体において見い出される。 固有種は主に、とげの多い高木または低木であり、幾つかはとげの多い迷い出た枝があり、例えばＡ． カエシア（A. caesia）、Ａ． ペンナタ（A. pennata）及びＡ． シヌアタ（A. sinuata）である。 多くの種がアフリカ及びオーストラリアから導入され、こうしたものとしてはＡ． メアルンシイ（A. mearnsii）、Ａ． ピクナンタ（A. picnantha）及びＡ． デアルバタ（A. dealbata）（二回羽状葉を有する）、並びにＡ． アウリクリフォルミス（A. auriculiformis）、Ａ． ホロセレシア（A. holoserecia）及びＡ． マンギウム（A. mangium）（偽葉種である）が挙げられる。 アカシアは経済的に非常に重要であり、タンニン、ガム、木材、燃料及び飼料の源を提供する。 タンニンは、主に樹皮から単離され、原皮のなめしのために広範囲にわたって使用されている。 また幾つかのアカシア樹皮は地酒を着香するために使用される。 またＡ． シヌアタのような幾つかの固有種はサポニン類を与え、これは水と混合し、撹拌した場合にせっけんの泡を形成する任意の様々な植物グルコシドである。 サポニン類は、洗剤、泡立て剤及び乳化剤において使用される。 幾つかのアカシア種の花は芳香があり、香料を製造するために使用される。 例えば、カッシエ香料は、Ａ． フェルゲネア（A. ferrugenea）から得られる。 多くのアカシアの心材は農業器具を製造するために使用され、また薪の源を提供する。 アカシアガムは、薬剤及び菓子製造において並びにサイズ材料及び仕上げ材料として繊維工業において広範囲にわたって使用されている。 ラックカイガラムシは、Ａ． ニロティカ（A. nilotica）及びＡ． カテキュー（A. catechu）を含む幾つかの種上で成長できる。 Ａ． ニロティカを含む幾つかの種は荒地の造林のために使用され、これは若干の湛水に耐えることができ、幾つかのこのような区域は鳥類保護区域になった。 現在まで、約３３０の化合物が様々なアカシア種から単離された。 フラボノイド類は、あるタイプの水溶性植物顔料であり、アカシアから単離された主要なクラスの化合物である。 約１８０の異なるフラボノイド類が特定され、この１１１はフラバン類である。 テルペノイド類は、アカシア属の種から単離された２番目に大きなクラスの化合物であり、４８の化合物が特定された。 アカシアから単離された他のクラスの化合物は、アルカロイド（２８）、アミノ酸／ペプチド（２０）、タンニン（１６）、炭水化物（１５）、酸素複素環（１５）及び脂肪族化合物（１０）を含む。 （Buckingham, in The Combined Chemical Dictionary, Chapman & Hall CRC, version 5:2, Dec. 2001）。 フェノール化合物、特にフラバン類は中〜高濃度で全てのアカシア種中に見い出される（Abdulrazak et al. (2000) J. Anim. Sci. 13:935-940）。 歴史的に、アカシア属の植物及び抽出物の大部分は、収斂薬として、消化管障害、下痢、消化不良を治療するために及び出血を止めるために利用された（Vautrin (1996) Universite Bourgogne (France) European abstract 58-01C:177; Saleem et al. (1998) Hamdard Midicus. 41:63-67）。 Ａ． アラビカ・ワイルド． （A. arabica Willd.）の樹皮及びさやは多量のタンニンを含み、収斂薬及び去痰薬として利用された（Nadkarni (1996) India Materia Medica, Bombay Popular Prakashan, pp.9-17）。 ジアリールプロパノール誘導体は、ソマリア産のＡ． トーティリス（A. tortilis）の茎樹皮から単離され、平滑筋弛緩効果を有すると報告された（Hagos et al. (1987) Planta Med. 53:27-31,1987）。 またテルペノイドサポニン類は、Ａ． ビクトリアエ（A. victoriae）から単離され、ジメチルベンズ（ａ）アントラセン誘発ネズミ皮膚発癌に及ぼす阻害効果を有し（Hanausek et al. (2000) Proc. Am. Assoc. Can. Res. Annu. Mtg. 41:663）、アポトーシスを誘発する（Haridas et al. (2000) Proc. Am. Assoc. for Can. Res. Annu. Mtg. 41:600）と報告された。 Ａ． ニロティカから得られる植物抽出物は、痙攣発生、血管収縮薬及び抗高血圧活性（Amos et al. (1999) Phytotherapy Research 13:683-685; Gilani et al. (1999) Phytotherapy Research 13:665-669）、並びに抗血小板凝集活性（Shah et al. (1997) Gen. Pharmacol. 29:251-255）を有すると報告された。 抗炎症活性がＡ． ニロティカに関して報告された。 フラボノイド類、多糖類及び有機酸は潜在的な活性成分であると推測された（Dafallah and Al-Mustafa (1996) Am. J. Chin. Med. 24:263-269）。 現在まで、アカシアから単離された唯一の報告された５−リポキシゲナーゼ阻害剤は、モノテルペノイダルカルボキサミドである（Seikine et al. (1997) Chem. Pharm. Bull. (Tokyo) 45:148-11）。 アカシアガムは、活性成分のいずれも特定せずに他の植物成分と共に製剤化され、潰瘍を予防するために使用された（Fuisz、米国特許第5,651,987号）。 またアカシアガムは、他の植物成分と共に製剤化され、栄養組成物の粘度を低下させることで（Chancellor、米国特許第5,545,411号）、薬物溶解を改良するために使用された（Blank、米国特許第4,946,684号）。 アカシアの樹皮から得られる抽出物は日本において外用に増白剤として（Abe、JP10025238）、歯科用途にグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤として（Abe、JP07242555）、タンパク質合成阻害剤として（Fukai、JP07165598）、外用皮膚製剤のための活性酸素捕捉剤として（Honda、JP07017847、Bindra、米国特許第6,1266,950号）、炎症、花粉症及び咳を予防するための経口消費のためのヒアルロニダーゼ阻害剤として（Ogura、JP07010768）特許化された。 文献を検討して、疼痛の緩和のために遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を使用するかまたは変形性関節症治療のために生化学的臨床結果を測定するヒトへの臨床適用がないことが明らかになった。 この報告は、ヒトにおけるこうした化合物の安全及び効力に関する最初の無作為化二重盲検プラセボ対照研究であると思われる。 本発明は、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物で構成される新規な組成物を含む。 この新規な組成物を本明細書においてユニベスチンＴＭ （UNIVESTIN ＴＭ ）と呼ぶ。 本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、特定の疾患または状態の予防及び治療に関する徴候及び特定の要件に基づいて調節できる。 一般に、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、９９：１の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類〜１：９９の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の範囲内とすることができる。 本発明の特定の具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は約９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０及び１０：９０からなる群から選択される。 本発明の好適な具体例においては、本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の比は約８５：１５である。 好適な具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類はスキューテラリア属の植物中の単数または複数の植物から単離され、フラバン類はアカシア属の植物中の単数または複数の植物から単離される。 本発明はさらに、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ酵素の両方を同時に阻害する際に有効な方法を含む。 ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ経路の同時二重阻害の方法は、合成された及び／または単一の植物または多数の植物から単離された遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む組成物を、これを必要とする受容者に投与することで構成される。 この方法の効力を、精製された酵素を用いて、様々な細胞系において、多数の動物モデル及び最終的にヒトへの臨床研究において証明した。 本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、９９：１の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類〜１：９９の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の範囲内とすることができる。 本発明の特定の具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は約９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０及び１０：９０からなる群から選択される。 本発明の好適な具体例においては、本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の比は約８５：１５である。 好適な具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類はスキューテラリア属の植物中の単数または複数の植物から単離され、フラバン類はアカシア属の植物中の単数または複数の植物から単離される。 本発明はさらに、生理痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満症、糖尿病、症候群Ｘ、アルツハイマー病、呼吸器アレルギー反応、慢性静脈不全、痔核、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張性頭痛、片頭痛、炎症性腸疾患；ウイルス、細菌及び真菌によって引き起こされる局所感染、日やけ、熱傷、接触性皮膚炎、メラノーマ並びに癌が挙げられるがこれらに限定されるものではないＣＯＸ−２及び５−ＬＯ仲介疾患及び状態の予防及び治療の方法を含む。 ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ仲介疾患及び状態を予防し、治療する方法は、これを必要とする受容者に、合成された及び／または単一の植物または多数の植物から単離された遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む有効な量の組成物を薬学的に許容可能なキャリアと一緒に投与することで構成される。 遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、９９：１の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類〜１：９９の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の範囲内とすることができる。 本発明の特定の具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は約９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０及び１０：９０からなる群から選択される。 本発明の好適な具体例においては、本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の比は約８５：１５である。 好適な具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類はスキューテラリア属の植物中の単数または複数の植物から単離され、フラバン類はアカシア属の植物中の単数または複数の植物から単離される。 別の具体例においては、本発明は、一般的な関節の疼痛及びこわばりを治療し、可動性及び身体的機能を改良し、変形性関節症及び慢性関節リウマチの病理学的状態を予防し、治療する方法を含む。 関節の疼痛及びこわばりを予防し、治療し、可動性及び身体的機能を改良し、変形性関節症、及び慢性関節リウマチの病理学的状態を予防し、治療する方法は、これを必要とする受容者に、合成された及び／または単一の植物または多数の植物から単離された遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む有効な量の組成物を薬学的に許容可能なキャリアと一緒に投与することを含む。 遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、９９：１〜１：９９の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の範囲内とすることができる。 本発明の特定の具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は約９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０及び１０：９０からなる群から選択される。 本発明の好適な具体例においては、本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の比は約８５：１５である。 好適な具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類はスキューテラリア属の植物中の単数または複数の植物から単離され、フラバン類はアカシア属の植物中の単数または複数の植物から単離される。 本発明は、可動性、可撓性及び身体的機能を改良することから生じる増大した活動性による体重減少及び血糖制御の方法を含み、該方法は、これを必要とする受容者に、合成された及び／または単一の植物または多数の植物から単離された遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む有効な量の組成物及び薬学的に許容可能なキャリアを投与することを含む。 遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、９９：１の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類〜１：９９の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の範囲内とすることができる。 本発明の特定の具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は約９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０及び１０：９０からなる群から選択される。 本発明の好適な具体例においては、本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の比は約８５：１５である。 好適な具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類はスキューテラリア属の植物中の単数または複数の植物から単離され、フラバン類はアカシア属の植物中の単数または複数の植物から単離される。 本発明はまた、疼痛経路に関与するｍＲＮＡの生成を調節する方法を含み、該方法は、これを必要とする受容者に、合成された及び／または単一の植物または多数の植物から単離された遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む有効な量の組成物及び薬学的に許容可能なキャリアを投与することを含む。 理論によって限定されるものではないが、出願人は、ｍＲＮＡの生成を調節する能力は、ｃｏｘ−２遺伝子によるがｃｏｘ−１遺伝子によらないｍＲＮＡの生成において遊離−Ｂ−環／フラバン組成物中の活性成分による減少によって成し遂げられると考えている。 本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、９９：１〜１：９９の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の範囲内とすることができる。 本発明の特定の具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は約９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０及び１０：９０からなる群から選択される。 本発明の好適な具体例においては、本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の比は約８５：１５である。 好適な具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類はスキューテラリア属の植物中の単数または複数の植物から単離され、フラバン類はアカシア属の植物中の単数または複数の植物から単離される。 以下の発明に従って使用できる遊離−Ｂ−環フラボノイド類（また本明細書において遊離−Ｂ−環フラボン類及びフラボノールと呼ぶ）は、以下の一般的な構造によって示される化合物を含む： ［式中、 ［式中、 上記に言及したように、本発明のフラバン類は、アカシアの属から選択される単数または複数の植物から得てよい。 好適な具体例においては、植物は、アカシア・カテキュー、Ａ． コンシナ（A. concinna）、Ａ． ファルネシアナ（A. farnesiana）、Ａ． セネガル（A. Senegal）、Ａ． スペシオサ（A. speciosa）、Ａ． アラビカ、Ａ． カエシア、Ａ． ペンナタ、Ａ． シヌアタ、Ａ． メアルンシイ、Ａ． ピクナンタ、Ａ． デアルバタ、Ａ． アウリクリフォルミス、Ａ． ホロセレシア及びＡ． マンギウムからなる群から選択される。 本発明は、製剤を最適化し、最良の効力を得るために酵素及びインビボモデルを使用した、遊離−Ｂ−環フラボノイド類及びフラバン類の様々な組成物の評価を含む。 またこの製剤の効力及び安全は、ヒトへの臨床研究において証明される。 本発明は、望ましい生理学的活性を有する組成物を与えるために、アカシアフラバン類及び遊離−Ｂ−環フラボノイド類を単離、精製し、組み合わせる工業的に実行可能な方法を提供する。 本発明の組成物は、当業者には周知の任意の方法によって投与できる。 投与のモードとしては、経腸（経口）投与、非経口（静脈内、皮下、及び筋肉内）投与及び局所適用が挙げられるがこれらに限定されるものではない。 本発明に従って治療する方法は、これを必要とする患者に、合成された及び／または単一の植物または多数の植物から単離された遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との治療上有効な量の混合物を内服または局所で投与することを含む。 前述の一般的な説明及び以下の詳細な説明の両方は模範例であって、説明とするのみであり、請求される本発明を制限するものではないことは理解できるはずである。 本明細書において様々な用語を使用して本発明の態様に言及する。 本発明の構成要素の説明の解明を助けるために以下の定義を提供する。 本明細書において使用する“遊離−Ｂ−環フラボノイド類”は特定のクラスのフラボノイド類であり、芳香族Ｂ環上に置換基を有せず、これは以下の一般的な構造によって示される： ［式中、 ［式中、 “タンパク質発現”は、ｍＲＮＡからタンパク質への翻訳を指す。 本明細書において使用する“治療上の”は、治療及び／または予防を含む。 使用する場合に、治療上のは、ヒト並びに他の動物に当てはまる。 “プラセボ”は、疾患の徴候、症状または原因の軽減するかもしれない所望の生物学的製剤を誘導するのに十分な薬学的にまたは治療上有効な用量または量を非活性物質で置き換えることを指す。 “受容者”または“患者”は、本明細書において説明する組成物が投与される生体、ヒトまたは動物である。 本発明は、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物で構成される新規な組成物を含む。 この新規な組成物を本明細書においてユニベスチンＴＭと呼ぶ。 本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、特定の疾患または状態の予防及び治療に関する徴候及び特定の要件に基づいて調節できる。 一般に、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、９９：１の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類〜１：９９の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の範囲内とすることができる。 本発明の特定の具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は約９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０及び１０：９０からなる群から選択される。 本発明の好適な具体例においては、本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の比は約８５：１５である。 好適な具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類はスキューテラリア属の植物中の単数または複数の植物から単離され、フラバン類はアカシア属の植物中の単数または複数の植物から単離される。 本発明の１具体例においては、実施例５、７及び１３；表５、７、８及び９並びに図３において定義するように、標準化遊離−Ｂ−環フラボノイド抽出物は、純度１〜９９％（重量で）の総遊離−Ｂ−環フラボノイド類を有する活性化合物で構成される。 バイカリンは、総遊離−Ｂ−環フラボノイド類の約５０〜９０％（重量で）を占める、抽出物中の主要な活性成分である。 好適な具体例においては、標準化抽出物は＞７０％の総遊離−Ｂ−環フラボノイド類を含み、遊離−Ｂ−環フラボノイド類の＞７５％はバイカリンである。 １具体例においては、実施例８、９及び１２；表４、６及び９並びに図９において定義するように、標準化フラバン抽出物は、純度１〜９９％（重量で）の総フラバン類を有する活性化合物で構成される。 カテキンは、抽出物中の主要な活性成分であり、総フラバン類の約５０〜９０％（重量で）を占める。 好適な具体例においては、標準化フラバン抽出物は＞５０％の総フラバン類を含み、フラバン類の＞７０％はカテキンである。 １具体例においては、ユニベスチンＴＭは、上記の２つの抽出物または合成化合物を９９：１〜１：９９の比で混合することで製造される。 実施例１４において定義するように、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の好ましい比は８５：１５の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類である。 ユニベスチンＴＭ中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類の濃度は約１％〜９９％とすることができ、ユニベスチンＴＭ中のフラバン類の濃度は９９％〜１％とすることができる。 本発明の好適な具体例においては、ユニベスチンＴＭ中の総遊離−Ｂ−環フラボノイド類の濃度は約７５％であり、バイカリン含量はユニベスチンＴＭの総重量の約６０％であり；ユニベスチンＴＭ中の総フラバン類の濃度は約１０％であり、カテキン含量約９％である。 この具体例においては、ユニベスチンＴＭ中の総活性成分（遊離−Ｂ−環フラボノイド類プラスフラバン類）は総重量の＞８０％である。 本発明はまた、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ酵素の両方を同時に阻害する際に有効な方法を含む。 ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ経路の同時二重阻害の方法は、合成された及び／または単一の植物または多数の植物から単離された遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む組成物を、これを必要とする受容者に投与することで構成される。 本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、９９：１の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類〜１：９９の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の範囲内とすることができる。 本発明の特定の具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は約９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０及び１０：９０からなる群から選択される。 本発明の好適な具体例においては、本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の比は約８５：１５である。 好適な具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類はスキューテラリア属の植物中の単数または複数の植物から単離され、フラバン類はアカシア属の植物中の単数または複数の植物から単離される。 本明細書はさらに、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ仲介疾患及び状態の予防及び治療の方法を含む。 ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ仲介疾患及び状態を予防し、治療する方法は、これを必要とする受容者に、合成された及び／または単一の植物または多数の植物から単離された遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む有効な量の組成物を薬学的に許容可能なキャリアと一緒に投与することで構成される。 遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、９９：１の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類〜１：９９の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の範囲内とすることができる。 本発明の特定の具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は約９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０及び１０：９０からなる群から選択される。 本発明の好適な具体例においては、本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の比は約８５：１５である。 好適な具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類はスキューテラリア属の植物中の単数または複数の植物から単離され、フラバン類はアカシア属の植物中の単数または複数の植物から単離される。 なおさらなる具体例においては、本明細書は、一般的な関節の疼痛及びこわばりを治療し、可動性及び身体的機能を改良し、変形性関節症及び慢性関節リウマチの病理学的状態を予防し、治療する方法を含む。 関節の疼痛及びこわばりを予防し、治療し、可動性及び身体的機能を改良し、変形性関節症、及び慢性関節リウマチの病理学的状態を予防し、治療する方法は、これを必要とする受容者に、合成された及び／または単一の植物または多数の植物から単離された遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む有効な量の組成物を薬学的に許容可能なキャリアと一緒に投与することで構成される。 遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、９９：１〜１：９９の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の範囲内とすることができる。 本発明の特定の具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は約９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０及び１０：９０からなる群から選択される。 本発明の好適な具体例においては、本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の比は約８５：１５である。 好適な具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類はスキューテラリア属の植物中の単数または複数の植物から単離され、フラバン類はアカシア属の植物中の単数または複数の植物から単離される。 本発明はまた、疼痛経路に関与するｍＲＮＡの生成を調節する方法を含み、該方法は、これを必要とする受容者に、合成された及び／または単一の植物または多数の植物から単離された遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を含む有効な量の組成物及び所望により薬学的に許容可能なキャリアを投与することを含む。 遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は、９９：１〜１：９９の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の範囲内とすることができる。 本発明の特定の具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比は約９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０及び１０：９０からなる群から選択される。 本発明の好適な具体例においては、本組成物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類：フラバン類の比は約８５：１５である。 好適な具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類はスキューテラリア属の植物中の単数または複数の植物から単離され、フラバン類はアカシア属の植物中の単数または複数の植物から単離される。 本発明の方法に従って使用できる遊離−Ｂ−環フラボノイド類は、上記に説明した一般的な構造によって示される化合物を含む。 本発明の遊離−Ｂ−環フラボノイド類は、合成法によって得るかまたはアンノナセアエ、アステラセアエ、ビグノニアセアエ、コムブレタセアエ、コンポシタエ、エウフォルビアセアセ、ラビアタエ、ラウランセアセ、レグミノサエ、モラセアエ、ピナセアエ、プテリダセアエ、シノプテリダセアエ、ウルマセアセ、及びジンギベラセアエが挙げられるがこれらに限定されるものではない植物の科から単離してよい。 また遊離−Ｂ−環フラボノイド類は、デスモス、アキロクリン、オロキシルム、ブチェナビア、アナファリス、コツラ、グナファリウム、ヘリクリスム、センタウレア、エウパトリウム、バッカリス、サピウム、スキューテラリア、モルサ、コレブローケア、スタキス、オリガヌム、ジジフォラ、リンデラ、アクチノダフネ、アカシア、デリス、グリシルヒザ、ミレッチア、ポンガミア、テフロシア、アルトカルプス、フィクス、ピティログラマ、ノトラエナ、ピヌス、ウルムス、及びアルピニアが挙げられるがこれらに限定されるものではな高等植物の属から抽出し、濃縮し、精製することができる。 遊離−Ｂ−環フラボノイド類は、茎、茎樹皮、小枝、塊茎、根、根樹皮、新鞘、種子、根茎、花及び他の生殖器官、葉並びに他の気生部分が挙げられるがこれらに限定されるものではない植物の様々な部分中に見い出される。 遊離−Ｂ−環フラボノイド類の単離及び精製の方法は、２００２年３月１日に出願された"Identification of Free-B-ring Flavonoids as Potent COX-2 inhibitors"と称する米国特許出願第10/091,362号において説明されており、本明細書において、参考のためにその全体を引用する。 本発明の方法に従って使用できるフラバン類は、上記に説明した一般的な構造によって示される化合物を含む。 本発明のフラバン類は、合成法によって得るかまたはアカシア属の植物から選択される単数または複数の植物から単離してよい。 好適な具体例においては、植物は、アカシア・カテキュー、Ａ． コンシナ、Ａ． ファルネシアナ、Ａ． セネガル、Ａ． スペシオサ、Ａ． アラビカ、Ａ． カエシア、Ａ． ペンナタ、Ａ． シヌアタ、Ａ． メアルンシイ、Ａ． ピクナンタ、Ａ． デアルバタ、Ａ． アウリクリフォルミス、Ａ． ホロセレシア及びＡ． マンギウムからなる群から選択される。 フラバン類は、茎、茎樹皮、樹幹、樹幹樹皮、小枝、塊茎、根、根樹皮、新鞘、種子、根茎、花及び他の生殖器官、葉並びに他の気生部分が挙げられるがこれらに限定されるものではない植物の様々な部分中に見い出される。 フラバン類の単離及び精製の方法は、２００２年３月２２日に出願された"Isolation of a Dual COX-2 and 5-Llipoxygenase Iinhibitor from Acacia"と称する米国特許出願第10/104,477号において説明されており、本明細書において、参考のためにその全体を引用する。 本発明は、一連のインビボ研究並びにインビトロ生化学、細胞、及び遺伝子発現ふるい分けを組み合わせて、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ酵素活性を特異的に阻害し、ｃｏｘ−１ではなくｃｏｘ−２ｍＲＮＡ生成に影響する活性植物抽出物及び成分を特定する戦略を実現する。 ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ経路を特異的に阻害する活性植物抽出物及び成分を特定するために本明細書において使用する方法を実施例１〜１３に説明する（図１〜１０）。 こうした方法は、２００２年３月１日に出願された"Identification of Free-B-ring Flavonoids as Potent COX-2 inhibitors"と称する米国特許出願第10/091,362号及び２００２年３月２２日に出願された"Isolation of a Dual COX-2 and 5-Llipoxygenase Iinhibitor from Acacia"と称する米国特許出願第10/104,477号においてさらに詳細に説明されており、この各々を特に本明細書において、参考のためにその全体を引用する。 こうした研究は、それぞれ遊離−Ｂ−環フラボノイド類及びフラバン類を含む２つの標準化抽出物の特許ブレンディングで構成され、本明細書においてユニベスチンＴＭと呼ぶ新規な組成物の発見をもたらした。 このような組成物を製造するための一般的な実施例を、それぞれアカシア及びスキューテラリアから単離された２つの標準化抽出物を１つ以上の賦形剤と一緒に使用して実施例１４に提供する。 実施例１４において使用されるアカシア抽出物は、カテキン及びエピカテキンとして＞６０％の総フラバン類を含み、スキューテラリア抽出物は＞７０％の遊離−Ｂ−環フラボノイド類を含み、これは主にバイカリンだった。 表１１に説明するように、スキューテラリア抽出物は他の少量の遊離−Ｂ−環フラボノイド類を含んだ。 １つ以上の賦形剤を所望により組成物に加える。 加える賦形剤の量は、所望の各成分の実際の活性含量に基づいて調節できる。 生成物の各個々のバッチのブレンディング表は、成分の個々のバッチの製品仕様及びＱＣ結果に基づいて作成しなければならない。 ２〜５％の範囲内の追加の量の活性成分が、製品仕様に適合するために推奨される。 実施例１４は、ユニベスチンＴＭの１バッチ（ロット＃Ｇ１７０２−ＣＯＸ−２）のために作成したブレンディング表を示す。 実施例１５〜１７に説明するように、様々なブレンディング比の製剤化されたユニベスチンＴＭ製品を、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ酵素活性を阻害し、ｃｏｘｍＲＮＡ生成を低減する能力に関して試験した。 ＣＯＸ−２阻害アッセイは、ヘム及びアラキドン酸の存在下で酵素ペルオキシダーゼの活性に依拠した。 ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性を阻害した化合物に関してふるい分けするために、実施例２及び６に示すように両方の酵素のペルオキシダーゼ活性の阻害を利用した高スループットインビトロアッセイを開発した。 一定量のＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２酵素に対して滴定することで、ふるい分けプロセスにおいてＣＯＸ−２活性を阻害した植物フラクションを単離した後に、２つの個々の標準化抽出物（１つは主に遊離−Ｂ−環フラボノイド類（スキューテラリアから単離された）及び他はフラバン類（アカシアから単離された）で構成された）、並びに、各抽出物から精製された成分及び様々な比の合わせた抽出物を比較した。 この研究は、スキューテラリア・バイカレンシスから単離された精製された遊離−Ｂ−環フラボノイド類であるバイカリン及びバイカレイン並びにアカシア・カテキューから単離された精製されたフラバンであるカテキンは、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯ活性を阻害することを明らかにした。 加えて、個々の標準化抽出物の各々は、１０〜９０％の範囲内（ＨＰＬＣに基づいて）の濃度の遊離−Ｂ−環フラボノイド類、及び１０〜９０％の範囲内（ＨＰＬＣに基づいて）のフラバン類を含み、またＣＯＸ−２及び５−ＬＯ活性を阻害した。 最後に、研究は、遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の比約８０：２０、５０：５０、及び２０：８０を有する個々の標準化抽出物の各々の混合物を含む組成物はまた全てＣＯＸ−２酵素活性をインビトロで阻害する際に非常に有効であることを明らかにした。 結果を図１１〜１３に説明する。 実施例１６は、５−ＬＯ経路中のアラキドン酸の分解における化合物、すなわちＬＴＢ ４の標的阻害を実行した細胞アッセイを説明する。 結果を図１４及び１５に説明す。 インビボ効力は、実施例１８に説明するように、ＡＡのような皮膚刺激物質のマウスの耳への適用及びユニベスチンＴＭを用いて治療したマウスにおける腫脹の低減を測定することによって証明された。 結果を図１８に説明する。 加えて、実施例１９に説明するように、炎症及び疼痛の部位での効力は、刺激原をマウスの足首関節に注射し、ユニベスチンＴＭを用いて治療したマウスにおける腫脹の低減を測定することによって証明された。 結果を図１９に説明する。 １０〜９９％の範囲内（ＨＰＬＣに基づいて）の濃度の遊離−Ｂ−環フラボノイド類及び１０〜９９％の範囲内（ＨＰＬＣに基づいて）のフラバン類を含む個々の標準化抽出物並びに製品ユニベスチンＴＭを、慢性及び急性投与の場合のマウスにおける毒性に関して試験した（データは示さない）。 慢性投与プロトコルにおいては、１日用量９０mg/kg（ヒト１日用量５００mgと同等）、４５０mg/kg（１日用量同等物の５倍）及び９００mg/kg（１日用量同等物の１０倍）でマウスに試験物品を経口栄養補給によって供給した。 マウスは、体重増加、物理的外観または挙動の点で悪影響を示さなかった。 総体的な死体解剖の結果は器官の異常を示さず、胃、腎臓、及び肝臓の組織学は、未処理の対照マウスと比較して差を示さなかった。 電解質、血液タンパク質、血中酵素、及び肝臓酵素を測定する完全な血液研究は、未処理の対照マウスと比較して異常を示さなかった。 急性プロトコルにおいては、１０〜９９％の範囲内（ＨＰＬＣに基づいて）の濃度の遊離−Ｂ−環フラボノイド類及び１０〜９９％の範囲内（ＨＰＬＣに基づいて）のフラバン類を含む個々の標準化抽出物並びに製品ユニベスチンＴＭ （２グラム/kg（１日用量同等物の２００倍）で与えた）は、体重増加、外観、挙動、器官の総体的な死体解剖の外観、胃、腎臓、及び肝臓の組織学または血液研究において異常を示さなかった。 実施例２０は、膝及び／または腰部の慢性関節リウマチまたは変形性関節症によって引き起こされる疼痛の緩和に及ぼすユニベスチンＴＭの効力を評価するために実行した臨床研究を説明する。 研究は、単一中心無作為化二重盲検プラセボ対照研究だった。 膝及び／または腰部の慢性関節リウマチまたは変形性関節症を有する６０人の被験者（ｎ＝６０）を無作為に４つの群に入れ、９０日間プラセボ、ユニベスチンＴＭ （２５０mg／日または５００mg／日）またはセレブレックスＴＭ （Celebrex ＴＭ ）（またセレコキシブとして周知である）（２００mg／日）を用いて治療した。 実施例１４、表１１に示すように、ユニベスチンＴＭは、バイカリン含量８２．２％（w/w）及び総遊離−Ｂ−環フラボノイド類＞９０％（w/w）を有するスキューテラリア・バイカレンシス・ゲオルギ（Scutellaria baicalensis Georgi）の標準化抽出物と総フラバン含量７７．２％（w/w）を有するアカシア・カテキューの標準化抽出物との８５：１５の比の特許ブレンドからなった。 セレブレックスＴＭは、ＣＯＸ−２選択的阻害剤である処方薬の商品名である。 表１２は、治療前（ベースラインスコア）及び３０、６０及び９０日での疼痛、こわばり及び機能に関するＷＯＭＡＣ指数スコアを説明する。 表１３は、治療後３０、６０及び９０日間の疼痛、こわばり及び機能に関するＷＯＭＡＣ指数スコアの絶対変化を説明する。 図２０〜３１は、全てのデータに関する９５％信頼区間を作図してこの研究の結果を示す。 図２０〜３１に示すように、疼痛、こわばり及び身体的機能に関連するＷＯＭＡＣ複合スコア及び個々のサブスコアは、ユニベスチンＴＭの投与の最中にプラセボ群と比較して有意な改良を示した。 さらに、ユニベスチンＴＭは、処方薬セレブレックスＴＭと比較して、疼痛緩和に対する同様の有効性、こわばりを減少させる際のより良好な有効性、及び身体的機能の際立った改良を示した。 最大の有意性は、変形性関節症または慢性関節リウマチに関連する疼痛、こわばり及び機能障害を緩和する際に各用量のユニベスチンＴＭとプラセボ及びセレコキシブとを比較する際に見られる。 分散分析モデル内の各治療群対についての多数の事後比較は、３０日（ｐ＝０．０２０）の治療の最中に、５００mg／日のユニベスチンＴＭは、変形性関節症を引き起こす疼痛の低減に関して２００mg／日のセレコキシブよりもよりも有意に有効であることを示した。 加えて、３０日（ｐ＝０．０４４）、６０日（ｐ＝０．０３２）及び９０日（Ｐ＝０．００１）の治療の範囲内で、用量５００mg／日のユニベスチンＴＭの投与はまた疼痛の低減に関してプラセボよりも有意に有効だった。 ２００mg／日のセレコキシブは、６０日（ｐ＝０．００９）の治療で疼痛の低減に関してプラセボに対して有意性を示した。 ９０日で、５００mg／日のユニベスチンＴＭ用量は、９０日（ｐ＝０．０３８）の治療の範囲内の２５０mg／日の用量と比較して有意により高い有効性を示した。 ３０日（ｐ＝０．００）、６０日（ｐ＝０．０２７）及び９０日（ｐ＝０．０１５）の治療の範囲内で、２５０mg／日のユニベスチンＴＭは、変形性関節症によって引き起こされるこわばりの低減に関してプラセボよりも有意に有効だった。 加えて、３０日（ｐ＝０．００１）及び９０日（ｐ＝０．００５）の治療の範囲内で、５００mg／日の用量のユニベスチンＴＭは、変形性関節症によって引き起こされるこわばりの低減に関してプラセボよりも有意に有効だった。 ３０日（ｐ＝０．０２３）の治療のみ、２００mg／日のセレコキシブは、変形性関節症によって引き起こされるこわばりの低減に関してプラセボよりも有効性を示した。 ３０日（ｐ＝０．０１０）の治療の範囲内で、変形性関節症によって引き起こされる機能障害の低減に関して、ユニベスチンＴＭは２００mg／日のセレコキシブよりも有意に有効だった。 加えて、３０日（ｐ＝０．０１０）、６０日（ｐ＝０．０４３）及び９０日（ｐ＝０．０３９）の治療の範囲内で、２５０mg／日用量のユニベスチンＴＭはまた変形性関節症によって引き起こされる機能障害の低減に関してプラセボよりも有意に有効だった。 ３０日（ｐ＝０．０１５）、６０日（ｐ＝０．０４３）及び９０日（０．０３９）の治療の範囲内で、５００mg／日用量のユニベスチンＴＭは２００mg／日のセレコキシブよりも有効だった。 最後に、３０日（ｐ＝０．０１５）、６０日（ｐ＝０．０１６）及び９０日（ｐ＝０．００３）の治療の範囲内で、５００mg／日用量のユニベスチンＴＭはまた変形性関節症によって引き起こされる機能障害の低減に関してプラセボよりも有意に有効だった。 こうした結果は、ユニベスチンＴＭは、特に５００mg／日の用量で、変形性関節症によって引き起こされる疼痛、こわばりを緩和し、機能障害を改良する際にプラセボ及びセレコキシブよりもはるかに有効であることを示唆する。 加えて、プラセボ及びセレコキシブと比較して、２５０mg／日の用量で投与されたユニベスチンＴＭはまた、変形性関節症によって引き起こされるこわばりを緩和し、機能障害を改良する際に非常に有効である。 セレコキシブはまた全体的に、変形性関節症によって引き起こされる疼痛、こわばり及び機能障害を緩和する際にわずかな改良のみを示した。 変形性関節症によって引き起こされる疼痛、こわばり及び機能障害にユニベスチンＴＭが及ぼす影響に加えて、実施例２１は、ボディマス指数（ＢＭＩ）及び体重減少にユニベスチンＴＭが及ぼす測定可能な影響を示す。 理論によって限定されるものではないが、この影響は、抗炎症剤の投与の結果としての可動性の増大が原因かもしれずまたは体内の代謝を増大させるか若しくは脂肪及び炭水化物の利用を低減する特定の機構も原因かもしれない。 表１４は、３０及び９０日の治療後に、２５０及び５００mg／日の用量で投与したユニベスチンＴＭ並びにセレコキシブ及びプラセボが体重及びＢＭＩに及ぼす影響を示す。 結果を図３２及び３３にグラフで示す。 図３２及び３３に関して、２５０及び５００mg／日の両方の用量で投与したユニベスチンＴＭは、３０日後に体重及びＢＭＩの有意な低下もたらし、体重減少は９０日後にほぼ２倍になったことが分かる。 セレコキシブは、ユニベスチンＴＭと比較して体重及びＢＭＩに及ぼす影響がより小さい。 実施例２１に説明するように、また分散分析モデルを用いた各治療群対についての多数の事後比較を、体重減少及びＢＭＩに関して実行した。 こうした分析は、３０日の治療後に、２５０mg／日及び５００mg／日用量のユニベスチンＴＭはプラセボに対して統計的に有意な体重減少を引き起こした（ｐ＝０．０１１対Ｐ＝０．１１８）ことを示した。 ３０日で、セレコキシブは、プラセボに対して有意な体重減少を引き起こさなかった。 体重減少は、２５０及び５００mg／日のユニベスチンＴＭを用いた９０日の治療の間中続き、プラセボに対して統計的有意性があった（それぞれｐ＝０．００１及び０．０１）。 セレコキシブは、プラセボと比較して依然として有意性を示さなかった。 ＢＭＩの減少は、２５０mg／日用量のユニベスチンＴＭの場合に同様の傾向をたどり、３０日（ｐ＝０．００８）並びに９０日（ｐ＝０．００１）後にプラセボと比較して有意だった。 ５００mg／日用量のユニベスチンＴＭはＢＭＩの減少を示し、３０日の治療で統計的有意性が無かった。 しかしながら、ＢＭＩの減少は、９０日の治療（ｐ＝０．０１１）で統計的有意性に達した。 再度、９０日の治療後に、セレコキシブ治療群は、プラセボに対するＢＭＩの統計的に有意な変化を示した。 実施例２２は、ユニベスチンＴＭの投与は、血中グルコースレベルに影響するかもしれないこと並びに体重減少及びＢＭＩに及ぼす影響を示唆する。 ユニベスチンＴＭを用いた治療の開始から３０日で、血中グルコースレベルの測定可能な差を検出した。 ９０日で、２５０及び５００mg／日のユニベスチンＴＭ治療群の両方は血中グルコースレベルの有意な低下を示した。 セレコキシブが血中グルコースに及ぼす影響はより劇的でなかった。 結果を表１５に説明し、図３４にグラフで示す。 実施例２２に説明するように、再度、分散分析モデルを用いた各治療群対についての多数の事後比較を、血中グルコースに関しても実行した。 ５００mg／日用量のユニベスチンＴＭのみが、プラセボ群に対して統計的に関連のある有意性（３０日後にｐ＝０．０２８；９０日後にｐ＝０．０２２）を示した。 しかしながら、２５０mg／日用量のユニベスチンＴＭは、プラセボに対して血中グルコースレベルの臨床上有意な変化を示した。 本願出願人は、２００２年３月２２日に出願された"Isolation of a Dual COX-2 and 5-Llipoxygenase Iinhibitor from Acacia"と称する米国特許出願第10/104,477号は、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯに対する二重特異性を証明するアカシア属の植物から単離された組成物の最初の報告であり、２００２年３月１日に出願された"Identification of Free-B-ring Flavonoids as Potent COX-2 inhibitors"と称する米国特許出願第10/091,362号は、遊離−Ｂ−環フラボノイド構造とＣＯＸ−２阻害活性との間の相関の最初の報告であると考えている。 こうした発見は、関節の疼痛及びこわばりを軽減し、可動性及び身体的機能を改良し、変形性関節症、及び慢性関節リウマチの病理学的状態を予防し、治療するために使用され、本明細書においてユニベスチンＴＭと呼ぶ組成物を製造するための２つのクラスの特定の化合物（遊離−Ｂ−環フラボノイド類及びフラバン類）の新規なブレンディングをもたらした。 理論によって限定されるものではないが、この製剤の確認された作用の機構は、ＣＯＸ−２酵素及び５−ＬＯ酵素活性の各々のｍＲＮＡの生成の減少に加えて、こうした酵素の両方のペルオキシダーゼ活性の直接阻害であると考えられている。 またユニベスチンＴＭを利用して、変形性関節症、慢性関節リウマチ、生理痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満症、糖尿病、症候群Ｘ、アルツハイマー病、呼吸器アレルギー反応、慢性静脈不全、痔核、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張性頭痛、片頭痛、炎症性腸疾患；ウイルス、細菌、真菌によって引き起こされる局所感染、日やけ、熱傷、接触性皮膚炎、メラノーマ及び癌が挙げられるがこれらに限定されるものではないＣＯＸ−２及び５−ＬＯ仲介疾患及び状態を予防し、治療することができる。 最後に、ユニベスチンＴＭは、ヒトへの臨床研究において、可撓性、可動性の改良及び活動性を増大させることが原因で体重減少を引き起こし、血中グルコースレベルを低減できることが見い出された。 本発明はまた、本発明の治療剤を含む治療組成物に関する。 本発明の治療剤は、例えば、皮内で、注射によるか、またはエアロゾルによって、例えば非経口、局所、経口または局所性投与を含む任意の適切な手段によって投与できる。 個々の投与のモードは治療される状態に依存しよう。 本発明の試剤は、任意の体液、または体液によって接近可能な任意の標的若しくは任意の組織によるとしてよいと予測される。 本発明の好適な具体例においては、試剤を注射によって投与する。 このような注射は、任意の影響された領域に局所的に投与することができる。 治療組成物は、投与する方法に依存して様々な単位剤形で投与できる。 例えば、動物の経口投与に適した単位剤形としては、散剤、錠剤、丸剤及びカプセルが挙げられる。 本発明の治療組成物の好ましい送達方法としては、例えば、注射または局所投与による静脈内投与及び局所性投与が挙げられる。 本発明の治療試薬を、任意の動物、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒトに投与することができる。 個々の送達のモードの場合、本発明の治療組成物は、他の成分の例えば薬学的に許容可能な賦形剤、アジュバント、及び／またはキャリアを含むように製剤化できる。 例えば、本発明の組成物を、治療される動物が耐えることができる賦形剤中に製剤化できる。 このような賦形剤の例としては、セルロース、二酸化ケイ素、デキストレート、スクロース、ナトリウムデンプングリコレート、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、水、生理的食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、マンニトール、ハンクス液、及び他の水性生理学的平衡塩類溶液が挙げられるがこれらに限定されるものではない。 非水性ビヒクルの例えば不揮発性油、ゴマ油、オレイン酸エチル、またはトリグリセリドもまた使用してよい。 他の有用な製剤は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、またはデキストランのような粘度向上剤を含む懸濁液を含む。 賦形剤はまた少量の添加剤、例えば等張性及び化学的安定性を向上させる物質を含むことができる。 緩衝液の例としては、リン酸緩衝液、重炭酸塩緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、ヒスチジン、シトレート、及びグリシン、またこれらの混合物が挙げられ、保存剤の例としては、チメロサール、ｍ−またはｏ−クレゾール、ホルマリン及びベンジルアルコールが挙げられる。 標準的な製剤は、液体注射可能医薬品または固形物とすることができ、これは、注射用の懸濁液剤または液剤として、適切な液体中に吸収させることができる。 従って、非液体製剤においては、賦形剤はデキストロース、ヒト血清アルブミン、保存剤等を含むことができ、投与の前に、これに無菌の水または生理的食塩水を加えることができる。 本発明の１具体例においては、組成物はまた、アジュバントまたはキャリアを含むことができる。 アジュバントは典型的に、一般にＣＯＸ＆ＬＯ経路に関連する徴候を予防し、治療する際に配合の機能を向上する物質である。 適切なアジュバントとしては、フロインドアジュバント；他の細菌細胞壁成分；アルミニウムに基づく塩；カルシウムに基づく塩；シリカ；ホウ素、ヒスチジン、グルコサミンサルフェート、コンドロイチン硫酸、グルコン酸銅、ポリヌクレオチド；ビタミンＤ、ビタミンＫ、トキソイド；鮫及びウシ軟骨；血清タンパク質；ウイルスコートタンパク質；他の細菌由来製剤；ガンマインターフェロン；ブロックコポリマーアジュバントの例えばハンターズ・タイターマックス・アジュバント（バクセル．ＴＭ．、Ｉｎｃ．ノークロス、Ｇａ．）（Hunter's Titermax adjuvant (Vaxcel.TM., Inc. Norcross, Ga.)）；リビアジュバンツ（Ribi adjuvants）（リビ・イムノケム・リサーチ、Ｉｎｃ．、ハミルトン、Ｍｏｎｔ．（Ribi ImmunoChem Research, Inc., Hamilton, Mont.）から入手可能）；並びにサポニン類及びそれらの誘導体の例えばクイルＡ（Quil A）（スーパーフォス・バイオセクターＡ／Ｓ、デンマーク（Superfos Biosector A/S, Denmark）から入手可能）が挙げられるがこれらに限定されるものではない。 キャリアは典型的に、治療される動物中の治療組成物の半減期を増大させる化合物である。 適切なキャリアとしては、ポリマー制御放出製剤、生分解性植込み剤、リポソーム、細菌、ウイルス、油、エステル、及びグリコールが挙げられるがこれらに限定されるものではない。 本発明の１具体例は、本発明の組成物を動物中に徐々に放出できる制御放出製剤である。 本明細書において使用する制御放出製剤は、制御放出ビヒクル中の本発明の組成物を含む。 適切な制御放出ビヒクルしては、生体親和性ポリマー、他のポリマーマトリックス、カプセル、マイクロカプセル、微粒子、ボーラス製剤、浸透圧ポンプ、拡散装置、リポソーム、リポスフェア、及び経皮送達システムが挙げられるがこれらに限定されるものではない。 本発明の他の制御放出製剤は、動物に投与すると固体またはゲルをインシトゥで形成する液体を含む。 好ましい制御放出製剤は生物分解性（すなわち、生体侵食性）である。 一旦治療組成物が製剤化されたら、これを、無菌バイアル中に液剤、懸濁液剤、ゲル、エマルション、固体、または脱水若しくは凍結乾燥散剤として貯蔵してよく；或いは経口投与のために他の不活性キャリアと共に直接にカプセル化及び／または錠剤化してよい。 このような製剤を、即使用可能形態または投与の直前に再構成を必要とする形態で貯蔵してよい。 全身送達のための組成物を含む製剤の投与方法は、経口、皮下、筋肉内、静脈内、鼻腔内または膣若しくは直腸坐剤によってよい。 個々の障害または状態の治療の際に有効であろう組成物の量は、状態の障害の性質に依存しようし、標準的な臨床技術によって決定できる。 加えて、インビトロまたはインビボアッセイを所望により用いて、最適用量範囲を特定するのを助けてよい。 製剤に用いられる正確な用量も、投与経路、及び疾患または状態の深刻さまたは進行に依存しようし、開業医及び各患者の状況によって決定すべきである。 有効な用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られる用量反応曲線から外挿してよい。 例えば、組成物の有効な量は、段階的用量の組成物を投与し、所望の効果を観察することで容易に決定できる。 本発明に従って治療する方法は、これを必要とする患者に、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物で構成される治療上有効な量の組成物を内服または局所で投与することを含む。 混合物の純度としては、単数または複数の化合物を得るために使用する手法に依存して０．０１％〜１００％が挙げられるがこれに限定されるものではない。 好適な具体例においては、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物及びこれを含む医薬組成物の用量は、一般に０．０１〜２００mg/kgの体重の範囲から選択される有効で無毒の量である。 常用の臨床試験を使用する当業者であれば、治療される個々の疾患のための最適用量を決定できる。 以下の実施例は例示のためにのみ提供するものであり、本発明の範囲を限定することを意図したものではない。 実施例１． アカシア及びスキューテラリア植物から得られる有機及び水性抽出物の製造 アカシア・カテキュー（Ｌ）・ワイルド． （Acacia catechu (L) Willd.）の樹皮、スキューテラリア・オルソカリクス（Scutellaria orthocalyx）の根、スキューテラリア・バイカレンシスの根またはスキューテラリア・ラテリフロラ（Scutellaria lateriflora）の植物全体から得られる植物材料を粉砕して粒度２mm以下にした。 乾燥した粉砕植物材料（６０g）を次にエルレンマイヤーフラスコに移し、メタノール：ジクロロメタン（１：１）（６００mL）を加えた。 混合物を１時間振とうし、ろ過し、バイオマスを再度メタノール：ジクロロメタン（１：１）（６００mL）を用いて抽出した。 有機抽出物を合わせ、真空下で蒸発させて、有機抽出物を提供した（下記の表１を参照されたい）。 有機抽出後に、バイオマスを空気乾燥し、超純水（６００mL）を用いて１回抽出した。 水溶液をろ過し、凍結乾燥して、水性抽出物を提供した（下記の表１を参照されたい）。 実施例２． アカシア・カテキュー、様々なスキューテラリア種及び他の植物から得られる植物抽出物によるＣＯＸ−２及びＣＯＸ−１ペルオキシダーゼ活性の阻害 特異的ＣＯＸ−２阻害剤の特定のためのバイオアッセイ志向型ふるい分けプロセスを設計して、下記に説明するように酵素のペルオキシダーゼ活性をアッセイした。 ペルオキシダーゼアッセイ． ＣＯＸ−２の阻害剤を検出するためのアッセイを、高スループットプラットホーム（ラズ（Raz））のために修正した。 簡潔に述べると、ペルオキシダーゼ緩衝液（１００mMＴＢＳ、５mMＥＤＴＡ、１μMＨｅｍｅ、１mgエピネフリン、０．０９４％フェノール）中の組み換え羊ＣＯＸ−２（ケイマン（Cayman））を、抽出物（１：５００希釈）を用いて１５分間インキュベートした。 クゥアンタブルー（Quantablu）（ピアース（Pierce））基質を加え、４５分間２５℃で展開させた。 次にルミネセンスを、ワラック・ビクター２プレートリーダ（Wallac Victor 2 plate reader）を使用して読み取った。 結果を表２に提出する。 表２は、アカシア・カテキューの樹皮、２つのスキューテラリア種の根を含む５つの植物種から得た有機及び水性抽出物及び３つの他の植物種から得られる抽出物（構造的に同様の遊離−Ｂ−環フラボノイド類で構成される）による酵素の阻害を説明する。 データを、組み換え羊ＣＯＸ−２酵素及び基質単独でと比較して、ペルオキシダーゼ活性のパーセントとして提出する。 有機抽出物によるパーセント阻害は３０％〜９０％の範囲にわたる。 ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２アイソフォームの相対的阻害の比較は、こうした酵素の各々につきＩＣ ５０値の生成を必要とする。 ＩＣ ５０を、対照に関する酵素活性の５０％阻害が特定の阻害剤によって実現される濃度と定義する。 こうした実験において、表３に説明するように、ＩＣ ５０値はそれぞれＣＯＸ−２及びＣＯＸ−１酵素に関して６〜５０μg/mL及び７〜８０μg/mLの範囲にわたることが見い出された。 ＣＯＸ−２及びＣＯＸ−１のＩＣ ５０値の比較は、こうした酵素の各々に対する様々な植物から得られる有機抽出物の特異性を証明する。 スキューテラリア・ラテリフロラの有機抽出物は、例えば、ＣＯＸ−１よりもＣＯＸ−２の選択的阻害を示し、それぞれＩＣ ５０値８０及び３０μg/mLである。 一方、ある抽出物は、他のものではなくＣＯＸ−２の選択的阻害を証明する。 ＨＴＰフラクション及びこうしたフラクションから得られる精製された化合物を調べることは、こうした抽出物及び化合物に対する阻害の真の特異性を決定するために必要である。 実施例３． 活性抽出物のＨＴＰ分画 活性植物から得られる有機抽出物（４００mg）を予備充填フラッシュカラム（２cmＩＤ×８．２cm、１０gのシリカゲル）上に負荷した。 カラムを、日立高スループット精製（ＨＴＰ）システム（Hitachi high throughput purification (HTP) system）を使用し、勾配移動相（Ａ）５０：５０ＥｔＯＡｃ：ヘキサン及び（Ｂ）メタノールで１００％Ａ〜１００％Ｂを用いて３０分、流量５mL／分で溶出した。 分離を、広帯域波長ＵＶ検出器を使用して監視し、フラクションを、ジルソンフラクションコレクター（Gilson fraction collector）を使用して１．９mL／穴で９６深穴プレート中に集めた。 試料プレートを低真空及び遠心分離下で乾燥した。 ＤＭＳＯ（１．５mL）を使用して、各細胞中の試料を溶解させ、一部分（１００μL）をＣＯＸ阻害アッセイ用に採取した。 活性植物から得られる水性抽出物（７５０mg）を水（５mL）中に溶解させ、１μMシリンジフィルターを通してろ過し、４mL高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）バイアルに移した。 次に溶液をオートサンプラーによって予備充填逆相カラム（Ｃ−１８、粒度１５μm、２．５cmＩＤ×１０cm、プレカラム挿入）上に注入した。 カラムを、日立高スループット精製（ＨＴＰ）システムを使用し、勾配移動相（Ａ）水及び（Ｂ）メタノールで１００％Ａ〜１００％Ｂを用いて２０分、続いて１００％メタノールを用いて５分間、流量１０mL／分で溶出した。 分離を、広帯域波長ＵＶ検出器を使用して監視し、フラクションを、ジルソンフラクションコレクターを使用して１．９mL／穴で９６深穴プレート中に集めた。 試料プレートを凍結乾燥した。 超純水（１．５mL）を使用して、各細胞中の試料を溶解させ、一部分（１００μL）をＣＯＸ阻害アッセイ用に採取した。 実施例４． アカシア及びスキューテラリア種から得られるＨＴＰフラクションによるＣＯＸペルオキシダーゼ活性の阻害 ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２組み換え酵素の両方のペルオキシダーゼ活性を阻害する能力に関してＨＴＰフラクションの各々を調べることで、個々の生理活性有機抽出物をさらにキャラクタリゼーションした。 結果を図１及び２に提出し、実施例１及び３に説明するように単離し、実施例２に説明するようにアッセイしたアカシア・カテキューの樹皮及びスキューテラリア・バイカレンシスの根の有機抽出物から得られるＨＴＰフラクションによるＣＯＸ−２及びＣＯＸ−１活性の阻害を示す。 図１及び２に示すプロフィルは、各抽出物中の多数の活性成分を示す阻害の多数のピークを示す。 幾つかの活性ピークはＣＯＸ−２に対して非常に選択的である。 スキューテラリア・オルソカリクス及びスキューテラリア・ラテリフロラを含む他のスキューテラリアｓｐ． は、阻害の同様のピークを証明する（データは示さない）。 しかしながら、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２酵素の両方は阻害の多数のピークを証明し、初期の阻害プロフィルの一因となる１を超える分子が存在することを示唆する 実施例５． スキューテラリアの有機抽出物から得られる活性遊離−Ｂ−環フラボノイド類の単離及び精製 スキューテラリア・オルソカリクスの根から得られる有機抽出物（５g）（実施例１に説明するように単離した）を予備充填フラッシュカラム（１２０gのシリカ、４０μm粒度３２〜６０μm、２５cm×４cm）上に負荷し、勾配移動相（Ａ）５０：５０ＥｔＯＡｃ：ヘキサン及び（Ｂ）メタノールで１００％Ａ〜１００％Ｂを用いて６０分、流量１５mL／分で溶出した。 フラクションを１０mL／フラクションで試験管中に集めた。 溶媒を真空下で蒸発させ、各フラクション中の試料を１mLのＤＭＳＯ中に溶解させ、２０μLのアリコートを９６穴の浅いディッシュプレートに移し、ＣＯＸ阻害活性に関して試験した。 ＣＯＸアッセイ結果に基づいて、活性フラクション＃３１〜＃３９を合わせ、蒸発させた。 ＨＰＬＣ／ＰＤＡ及びＬＣ／ＭＳによる分析は、保持時間８．９分及び２７２ｍ／ｅでのＭＳピークを有する主要な化合物を示した。 生成物をさらに、Ｃ１８半作製カラム（２５cm×１cm）上で、勾配移動相（Ａ）水及び（Ｂ）メタノールを用いて４５分間、流量５mL／分で精製した。 ８８のフラクションを集めて、５．６mgの淡黄色の固体を与えた。 純度を、ＨＰＬＣ／ＰＤＡ及びＬＣ／ＭＳ、及び標準との比較及びＮＭＲデータによって決定した。 化合物をバイカレインであると特定した。 ＣＯＸ−２酵素に対するバイカレインのＩＣ ５０は１０μg/mLであると決定された。 実施例６． 精製された遊離−Ｂ−環フラボノイド類のＣＯＸ阻害 幾つかの遊離−Ｂ−環フラボノイド類を得、実施例２に説明する方法を使用して２０μg/mLの濃度でＣＯＸ−２阻害活性に関して試験した。 結果を下記の表４に要約する。 スキューテラリア・バイカレンシスの根から単離されたバイカレイン、バイカリン及び標準化遊離−Ｂ−環フラボノイド抽出物のＩＣ ５０の測定を、以下の方法を使用して実行した。 開裂可能な過酸化物発色団をアッセイに含めて、補因子としてのアラキドン酸の存在下で各酵素のペルオキシダーゼ活性を視覚化した。 典型的に、アッセイを９６穴フォーマット中で実行した。 各阻害剤を、１００％ＤＭＳＯ中の１０mg/mLストックから取り、室温で以下の範囲の濃度を使用して３回重複して試験した：０、０．１、１、５、１０、２０、５０、１００、及び５００μg/mL。 各穴に、１５０μLの１００mMＴｒｉｓ−ＨＣｌ（pH７．５）を、ｔｒｉｓ緩衝液中で希釈した１０μLの２２μMヘマチン、ＤＭＳＯ中で希釈した１０μLの阻害剤、及び２５単位のＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２酵素と一緒に加えた。 成分を、回転するプラットホーム上で１０秒間混合し、その後、２０μLの２mMＮ，Ｎ，Ｎ'Ｎ'−テトラメチル−ｐ−フェニレンジアミンジヒドロクロリド（ＴＭＰＤ）及び２０μLの１．１mMＡＡを加えて反応を開始した。 プレートを１０秒間振とうし、次に５分間インキュベートし、その後吸光度を５７０nmで読み取った。 阻害剤濃度対パーセント阻害を作図し、等温線に沿って半最高点を取り、ｘ軸の濃度と交差させることによって、ＩＣ ５０を決定した。 次にＩＣ ５０をアッセイ中の酵素単位数に基準化した。 スキューテラリア・バイカレンシスの根から単離されたバイカレイン、バイカリン及び標準化遊離−Ｂ−環フラボノイド抽出物に関する用量反応及びＩＣ ５０の結果をそれぞれ図４、５及び６に提供する。 実施例７． スキューテラリア・オルソカリクス（根）、スキューテラリア・バイカレンシス（根）及びオロキシルム・インディクム（Oroxylum indicum）（種子）から単離された活性抽出物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類のＨＰＬＣ定量化 ３つの異なる植物種から単離された５つの活性抽出物中の遊離−Ｂ−環フラボノイド類の存在及び量を確定し、表５に説明する。 遊離−Ｂ−環フラボノイド類を、ルナＣ−１８（Luna C-18）カラム（２５０×４．５mm、５μm）を使用し、１％リン酸及びアセトニトリル勾配８０％〜２０％を使用したＨＰＬＣによって２２分で定量的に分析した。 遊離−Ｂ−環フラボノイド類を、ＵＶ検出器を使用して２５４nmで検出し、遊離−Ｂ−環フラボノイド標準との比較によって保持時間に基づいて特定した。 実施例８． アカシア・カテキューの有機抽出物から得られる活性化合物の単離及び精製 Ａ． カテキューの根から得られる有機抽出物（５g）（実施例１に説明するように単離した）を予備充填フラッシュカラム（１２０gのシリカ、４０μm粒度３２〜６０μm、２５cm×４cm）上に負荷し、勾配移動相（Ａ）５０：５０ＥｔＯＡｃ：ヘキサン及び（Ｂ）メタノールで１００％Ａ〜１００％Ｂを用いて６０分、流量１５mL／分で溶出した。 フラクションを１０mL／フラクションで試験管中に集めた。 溶媒を真空下で蒸発させ、各フラクション中の試料をＤＭＳＯ（１mL）中に溶解させ、２０μLのアリコートを９６穴の浅いディッシュプレートに移し、ＣＯＸ阻害活性に関して試験した。 ＣＯＸアッセイ結果に基づいて、活性フラクション＃３２〜＃４１を合わせ、蒸発させて、２．６gの固体を与えた。 ＨＰＬＣ／ＰＤＡ及びＬＣ／ＭＳによる分析は、それぞれ保持時間１５．８及び１６．１分を有する主要な化合物を示した。 生成物をさらに、Ｃ１８半作製カラム（２５cm×１cm）上で精製し、１２．４mgの生成物を負荷し、勾配移動相（Ａ）水及び（Ｂ）アセトニトリル（ＡＣＮ）を用いて６０分間、流量５mL／分で溶出した。 ８８のフラクションを集めて、２つの活性化合物を単離した。 化合物１（１１．５mg）及び化合物２（１６．６mg）である。 純度を、標準（カテキン及びエピカテキン）との比較によるＨＰＬＣ／ＰＤＡ及びＬＣ／ＭＳデータによって並びにＮＭＲデータによって決定した。 化合物１． この化合物をカテキンであると特定した。 この化合物をエピカテキンであると特定した。 実施例９． アカシア・カテキューから得られる活性抽出物のＨＰＬＣ定量化 アカシア・カテキューから単離された有機及び水性抽出物中のフラバン含量を、ホトダイオードアレイ検出器（ＨＰＬＣ／ＰＤＡ）及びルナＣ１８カラム（２５０mm×４．６mm）を使用してＨＰＬＣによって定量化した。 フラバン類を、アセトニトリル勾配１０％〜３０％ＡＣＮを使用して２０分間、続いて６０％ＡＣＮを使用して５分間カラムから溶出した。 結果を表６に説明する。 ＨＰＬＣ精製のプロフィルを図９に示す。 カテキン及びエピカテキンを標準として使用し、保持時間及びＰＤＡデータに基づいて、フラバン類を定量化した。 ２つの主要なフラバン類の保持時間はそれぞれ１２．７３分及び１５．７６分だった。 実施例１０． アカシア・カテキュー及びスキューテラリア種から得られる有機抽出物のＣＯＸ阻害活性のインビトロ研究 アカシア・カテキュー及び様々なスキューテラリア種から単離された有機抽出物のインビトロ効力及びＣＯＸ−２特異性を、細胞に基づく系においてＡＡ代謝物の生成を阻害する能力に関して試験した。 ＣＯＸ−２を構成的に発現する細胞系ＨＯＳＣ及びＣＯＸ−１を発現するＴＨＰ−１を、ＡＡの存在下でＰＧＥ ２を生成する能力に関して試験した。 ＣＯＸ−２細胞に基づくアッセイ． ＨＯＳＣ（ＡＴＣＣ＃８３０４−ＣＲＬ）細胞を培養して８０〜９０％集密的にした。 細胞をトリプシン処理し、洗浄し、１０mL中に１×１０ ６細胞／mLで組織培地（ＭＥＭ）中に再懸濁させた。 細胞懸濁液（２００μL）で９６穴組織培養プレートを覆い、２時間、３７℃、５％ＣＯ ２でインキュベートした。 次に、培地を、１ng/mLＩＬ−１Ｂを含む新たなＨＯＳＣ培地で取り替え、一晩インキュベートした。 培地を再度除去し、１９０mLＨＯＳＣ培地で取り替えた。 次に試験化合物を１０μLのＨＯＳＣ培地中に加え、１５分間、３７℃でインキュベートした。 ＨＯＳＣ培地（２０mL、１００μM）中のアラキドン酸を加え、混合物を、１０分間、振とう機上、室温でインキュベートした。 ＥＬＩＳＡ緩衝液中の１９０μL／穴の１００μMインドメタシンを含む新たなプレートに、上澄み（２０μL）を移した。 上澄みをＥＬＩＳＡによって下記に説明するように分析した。 ＣＯＸ−１細胞に基づくアッセイ． ＴＨＰ−１細胞を懸濁して体積３０mL（５×１０ ５細胞／mL）にした。 ＴＰＡを加えて終濃度１０nMＴＰＡにし、４８時間培養して細胞を分化させて、マクロファージにした（付着）。 細胞をＨＢＳＳ（２５mL）中に再懸濁させ、２００mLの体積、５×１０ ５細胞／穴で９６穴プレートに加えた。 次にＲＰＭＩ １６４０（１０μL）中の試験化合物を加え、５分間、３７℃でインキュベートした。 次いでＲＰＭＩ（２０μL）中のアラキドン酸を加え、混合物を１０分間、振とう機上、室温でインキュベートした。 上澄み（２０μL）をインドメタシン（１００μM）を含むＥＬＩＳＡ緩衝液（１９０μL）に加えた。 次に上澄みをＥＬＩＳＡによって下記に説明するように分析した。 ＣＯＸ−２全血アッセイ． 正常で健康な提供者の末梢血を、静脈穿刺によって集めた。 全血（５００μL）を、試験化合物及び抽出物と共に１５分間、３７℃でインキュベートした。 リポ多糖（ＬＰＳ、大腸菌血清型０１１１：Ｂ４から得た）を加えて終濃度１００μg/mLにし、一晩、３７℃で培養した。 血液を遠心分離し（１２，０００×ｇ）、血漿を集めた。 血漿（１００μL）をメタノール（４００μL）に加えて、タンパク質を沈澱させた。 上澄みをＰＧＥ ２生成に関してＥＬＩＳＡによって測定した。 この手順は、Brideau et al. (1996) Inflamm. Res. 45:68-74によって説明される方法の修正である。 ＣＯＸ−１全血アッセイ． 新鮮血液を、抗凝血薬を含まない管中に集め、直ちに分取して５００μLアリコートにして、シリコーン処理済み微小遠心分離管中に入れた。 試験試料を加え、撹拌し、１時間、３７℃で凝固させた。 次に試料を遠心分離し（１２，０００×ｇ）、血漿を集めた。 血漿（１００μL）をメタノール（４００μL）に加えて、タンパク質を沈澱させた。 上澄みをＴＸＢ ２生成に関してＥＬＩＳＡによって測定した。 この手順は、Brideau et al. (1996) Inflamm. Res. 45:68-74によって説明される方法の修正である。 ＥＬＩＳＡアッセイ． イムノロン−４ＥＬＩＳＡプレート（Immunolon-4 ELISA plate）を、炭酸塩緩衝液（pH９．２）中、一晩、４℃で、０．５〜４μg/mLの捕捉抗体でコーティングした。 プレートを洗浄し、２時間、遮断緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）と共に室温でインキュベートした。 プレートを再度洗浄し、試験試料（１００μL）を加え、振とうしながら１時間、室温でインキュベートした。 ペルオキシダーゼ複合第二抗体を、０．５〜４mg/mLを含む５０μLの体積で加え、振とうしながら１時間、室温でインキュベートした。 次にプレートを３回洗浄し、ＴＭＢ基質（１００μL）を加えた。 プレートを３０分間展開させ、その後１Mリン酸（１００μL）を加えることで反応を止めた。 次にプレートを４５０nmでワラック・ビクター２プレートリーダを使用して読み取った。 細胞毒性． 損傷した細胞中への乳酸デヒドロゲナーゼの放出を測定する比色キット（オックスフォード・バイオケミカル・リサーチ（Oxford Biochemical Research））を使用して、細胞の細胞毒性を評価した。 アッセイを製造業者の指示に従って完了した。 アカシア・カテキューから得られる精製されたフラバン類及び標準化抽出物の両方を試験した。 試験した化合物のいずれでも細胞毒性は観察されなかった。 アッセイの結果を表７に説明する。 データを、直接比較のためのＩＣ ５０値として提出する。 表５に関して、ＩＣ ５０値は一般にＣＯＸ−２よりもＣＯＸ−２よりもＣＯＸ−１の場合に低い。 加えて、また全血をＰＧＥ ２生成（この系におけるＣＯＸ−２の尺度）またはトロンボキサンＢ２（ＴＸＢ ２ ）（ＣＯＸ−１活性化の尺度）の示差的阻害に関して測定した。 表７を参照すると、こうした研究は、全血細胞に基づくアッセイの範囲内でＣＯＸ−２阻害に対する特異性を明らかに証明する。 しかしながら、ＴＨＰ−１及びＨＯＳＣに基づくモデル系を使用した研究は実際に、ＣＯＸ−１に対するより大きな選択性を示した。 この矛盾の可能な理由は、酵素の各々を構成的に発現する不死化細胞系と誘発されてＣＯＸ酵素を発現する全血に由来する一次細胞との間の基本的な相違である。 一次細胞は、炎症をインビボで研究するためのより適切なモデルである。 加えて、ＣＯＸ−１対ＣＯＸ−２活性を特定するために使用される化合物はこうした系の各々において変化し、従って直接に比較できない。 実施例１１． アカシア・カテキューから得られるカテキンによる５−リポキシゲナーゼの阻害 上記に言及したように、炎症反応に関与する最も重要な経路のうちの１つは非ヘム鉄含有リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ、１２−ＬＯ、及び１５−ＬＯ）によって生じ、こうしたものは、ＡＡ（ＡＡ）のような脂肪酸の上への分子状酸素の付加を触媒してヒドロペルオキシド５−、１２−及び１５−ＨＰＥＴＥを生成し、次にロイコトリエンに転換する。 Ａ． カテキューから得られるフラバン抽出物は、ある程度の５−ＬＯ阻害を提供するかもしれず、それによって５−ＨＰＥＴＥの形成を予防するという初期の徴候があった。 リポキシゲナーゼ阻害剤ふるい分けアッセイキット（ケイマン・ケミカル、Ｉｎｃ．（Cayman Chemical, Inc.）、カタログ＃７６０７００）を使用して、アカシア・カテキューから得られる精製されたフラバンカテキンが５−ＬＯをインビトロで直接に阻害するかどうか評価した。 マイクロろ過を使用して、リン酸塩からｔｒｉｓに基づく緩衝液への緩衝液の変更を実行した後に、通常キットにおいて使用される大豆から得られる１５−ＬＯをジャガイモ５−ＬＯで取り替えた。 このアッセイは、酸素検知クロマジェンによってヒドロペルオキシドの形成を検出する。 簡潔に述べると、９０μLの０．１７単位／μLジャガイモ５−ＬＯ、２０μLの１．１mMＡＡ、１００μLの酸素検知クロマジェン、及び１０μLの精製されたフラバン阻害剤を０〜５００μg/mLの範囲にわたる終濃度で加えることで、アッセイを３回重複して実行した。 カテキンから得られる５−ＬＯ阻害のＩＣ ５０は１．３８μg/mL/酵素の単位であると決定された。 実施例１２． アカシア・カテキューから得られる標準化抽出物の製造 アカシア・カテキュー（５００mgの粉砕樹皮）を、以下の溶媒系を用いて抽出した。 （１）１００％水、（２）８０：２０水：メタノール、（３）６０：４０水：メタノール、（４）４０：６０水：メタノール、（５）２０：８０水：メタノール、（６）１００％メタノール、（７）８０：２０メタノール：ＴＨＦ、（８）６０：４０メタノール：ＴＨＦ。 抽出物を濃縮し、低真空下で乾燥した。 各抽出物中の化学的成分の特定を、ホトダイオードアレイ検出器（ＨＰＬＣ／ＰＤＡ）及び２５０mm×４．６mmＣ１８カラムを使用してＨＰＬＣによって実現した。 カテキン及びエピカテキンを標準として使用し、保持時間及びＰＤＡデータに基づいて、化学的成分を定量化した。 結果を表８及び図９に説明する。 表６に示すように、８０％メタノール／水を用いた溶媒抽出から生成したフラバン抽出物は、フラバン成分の最良の濃度を提供した。 実施例１３． 様々なスキューテラリア種から得られるs標準化遊離−Ｂ−環フラボノイド抽出物の製造 スキューテラリア・オルソカリクス（５００mgの粉砕根）を、２５mLの以下の溶媒系を用いて２回抽出した。 （１）１００％水、（２）８０：２０水：メタノール、（３）６０：４０水：メタノール、（４）４０：６０水：メタノール、（５）２０：８０水：メタノール、（６）１００％メタノール、（７）８０：２０メタノール：ＴＨＦ、（８）６０：４０メタノール：ＴＨＦ。 抽出物を合わせ、濃縮し、低真空下で乾燥した。 各抽出物中の化学的成分の特定を、ホトダイオードアレイ検出器（ＨＰＬＣ／ＰＤＡ）及び２５０mm×４．６mmＣ１８カラムを使用してＨＰＬＣによって実行した。 バイカレイン、バイカリン、スキューテラレイン（scutellarein）、及びウォゴニンを標準として使用し、保持時間及びＰＤＡデータに基づいて、化学的成分を定量化した。 結果を表９に説明する。 スキューテラリア・バイカレンシス（１０００mgの粉砕根）を、メタノールと水との５０mLの混合物を次の通り使用して２回抽出した：（１）１００％水、（２）７０：３０水：メタノール、（３）５０：５０水：メタノール、（４）３０：７０水：メタノール、（５）１００％メタノール。 抽出物を合わせ、濃縮し、低真空下で乾燥した。 化学的成分の特定を、ホトダイオードアレイ検出器（ＨＰＬＣ／ＰＤＡ）、及び２５０mm×４．６mmＣ１８カラムを使用してＨＰＬＣによって実行した。 バイカレイン、バイカリン、スキューテラレイン、及びウォゴニンを標準として使用し、保持時間及びＰＤＡデータに基づいて、各抽出物中の化学的成分を定量化した。 結果を表１０に説明する。 実施例１４． スキューテラリア・バイカレンシスの根から得られる標準化遊離−Ｂ−環フラボノイド抽出物及びアカシア・カテキューの樹皮から得られる標準化フラバン抽出物を用いた製剤の製造 本明細書においてユニベスチンＴＭと呼ぶ新規な組成物を、それぞれアカシア及びスキューテラリアから単離された２つの標準化抽出物を１つ以上の賦形剤と一緒に使用して製剤化した。 このような組成物を製造するための一般的な実施例を下記に説明する。 この実施例において使用されるアカシア抽出物は、カテキン及びエピカテキンとして＞６０％の総フラバン類を含み、スキューテラリア抽出物は＞７０％の遊離−Ｂ−環フラボノイド類を含み、これは主にバイカリンだった。 表１１に説明するように、スキューテラリア抽出物は他の少量の遊離−Ｂ−環フラボノイド類を含んだ。 １つ以上の賦形剤を組成物に加える。 フラバン及び遊離−Ｂ−環フラボノイド類の比は、ＣＯＸ−２対５−ＬＯの阻害に関する徴候及び特定の要件並びに製品の効力要件に基づいて調節できる。 賦形剤の量は、各成分の実際の活性含量に基づいて調節できる。 生成物の各個々のバッチのブレンディング表は、成分の個々のバッチの製品仕様及びＱＣ結果に基づいて作成しなければならない。 ２〜５％の範囲内の追加の量の活性成分が、製品仕様に適合するために推奨される。 表１１は、ユニベスチンＴＭの１バッチ（ロット＃Ｇ１７０２−ＣＯＸ−２）のために作成したブレンディング表を示す。 遊離−Ｂ−環フラボノイド含量８２．２％（バイカリン）を有するスキューテラリア・バイカレンシスの根の抽出物（３８．５kg）（ロット＃ＲＭ０５２３０２−０１）；総フラバン含量８０．４％を有するアカシア・カテキュー樹皮抽出物（６．９kg）（ロット＃ＲＭ０５２９０２−０１）；及び賦形剤（５．０kgのキャンデックス（Candex））を合わせて、ブレンディング比８５：１５を有するユニベスチンＴＭ製剤（５０．４kg）を提供した。 表９は、この特定のバッチのユニベスチンＴＭ （ロット＃Ｇ１７０２−ＣＯＸ−２）の活性遊離−Ｂ−環フラボノイド類及びフラバン類の定量化を提供し、これは実施例７及び９に提供する方法を使用して決定された。 表９に関して、この特定のバッチのユニベスチンＴＭは、８６％総活性成分を含み、これは７５．７％遊離−Ｂ−環フラボノイド類及び１０．３％フラバン類を含む。 カプセル形態の２つの異なる用量レベルの最終生成物をこのバッチのユニベスチンＴＭ （５０．０kg）から製造し、これらは１２５mg／用量（６０カプセル）及び２５０mg／用量（６０カプセル）だった。 実施例１５に説明するように、最終生成物をヒトへの臨床試験において評価した。 同じ手法を使用して、２つの他のバッチのユニベスチンＴＭを、スキューテラリア・バイカレンシスの根から得られる標準化遊離−Ｂ−環フラボノイド抽出物及びアカシア・カテキュー樹皮から得られる標準化フラバン抽出物の組合せを使用して製造し、これらはブレンディング比それぞれ５０：５０及び２０：８０を有した。 実施例１５． ユニベスチンＴＭの３つの製剤から得られるＣＯＸ酵素阻害の用量反応及びＩＣ ５０値の測定 ユニベスチンＴＭの３つの異なる製剤を実施例１４に提供するように製造し、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２阻害活性に関して実施例６に説明するように試験した。 図１１、１２及び１３に示すように、３つの製剤は全て、ＣＯＸ酵素活性の有意な用量反応阻害を示す。 実施例１６． ユニベスチンＴＭの製剤から得られるＬＯ酵素阻害の用量反応及びＩＣ ５０値 ユニベスチンＴＭ試料を、スキューテラリア・バイカレンシスの根から得られる標準化遊離−Ｂ−環フラボノイド抽出物及びアカシア・カテキュー樹皮から得られる標準化フラバン抽出物の組合せを使用して、実施例１４に略述するように製造し、これらはブレンディング比８０：２０を有した。 試料を、ＴＨＰ−１またはＨＴ−２９細胞（ＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２及び５−ＬＯを発現する単核細胞系）を含む組織培地中で滴定した。 ＬＴＢ ４ （ＬＴＢ ４ ；ネオジェン、Ｉｎｃ．（Neogen, Inc.）、カタログ＃４０６１１０）のための競合ＥＬＩＳＡを使用して、各細胞系中に存在するＬＴＢ ４の新規合成レベルにユニベスチンＴＭが及ぼす影響をユニベスチンＴＭが５−ＬＯ経路に及ぼす阻害効果の尺度として評価した。 １６０，０００〜１８０，０００細胞／穴を６穴プレート中に加えて、アッセイを二回重複して実行した。 ユニベスチンＴＭを３、１０、３０及び１００μg/mLでＴＨＰ−１培養に加え、一晩（〜１２−１５時間）、３７℃で、５％ＣＯ ２と共に、加湿した環境中でインキュベートした。 結果を図１４に説明し、ユニベスチンＴＭをＴＨＰ−１培養に３〜１０μg/mL加えることで、新規ＬＰＳ誘発ＬＴＢ ４の生成をほぼ完全に阻害したことを示す。 ユニベスチンＴＭ及び別の周知の５−ＬＯ阻害剤であるイブプロフェンを３μg/mLでＨＴ−２９細胞に加え、４８時間、３７℃で、５％ＣＯ ２と共に、加湿した環境中でインキュベートした。 各治療済み細胞系を次に遠心分離によって集め、生理学的緩衝液中のジェントル・ダウンス均質化溶解によって破壊した。 図１５に示すように、ユニベスチンＴＭは、ＨＴ−２９細胞中の８０％の新規合成ＬＴＢ ４生成を阻害した。 イブプロフェンのみは、同じ時間にわたってＬＴＢ ４の量の２０％低減を示した。 実施例１７． ユニベスチンＴＭ対他のＮＳＡＩＤｓによるｃｏｘ−１ではなくｃｏｘ−２遺伝子発現の示差的阻害 ユニベスチンＴＭがゲノムレベルで機能するかどうかを評価するために、単離したヒト末梢血単球（ＰＢＭＣｓ）をリポ多糖（ＬＰＳ）を用いて刺激し、実施例１４に示すようなユニベスチンＴＭ 、セレコキシブ、イブプロフェンまたはアセトアミノフェンを用いて処理し、生成した総ＲＮＡを次に集め、半定量ＲＴ−ｑＰＣＲによって評価した。 特に、１３０，０００細胞／穴を６穴プレート中に加えることでアッセイを構成した。 次に、細胞を１０ng/mLＬＰＳを用いて刺激し、１、３、１０、３０及び１００μg/mLのユニベスチンＴＭ並びに３μg/mLのセレコキシブ、イブプロフェン及びアセトアミノフェンと共に１８時間、３７℃で、５％ＣＯ ２と共に、加湿した環境中で同時インキュベートした。 次に各細胞処理状態を遠心分離によって集め、生成した総ＲＮＡをトリゾル（登録商標）（TRIzol（登録商標））試薬（インビトロジェンＴＭ・ライフ・テクノロジーズ（Invitrogen ｔＭ Life Technologies）、カタログ＃１５５９６−０２６）及び推奨されるトリゾル（登録商標）試薬プロトコルを使用して単離した。 総ＲＮＡを、モロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素（Ｍ−ＭＬＶ ＲＴ；プロメガＣｏｒｐ．（Promega Corp.）、カタログ＃Ｍ１７０１）を使用し、ランダムヘキサマー（プロメガＣｏｒｐ．、カタログ＃Ｃ１１８１）を使用して逆転写した。 ｑＰＣＲ実験を、１８Ｓ ｒＲＮＡ内部標準及び遺伝子特異的アッセイに関して既に開発済みで実証済みのアッセイ・オン・デマンド製品（Assays-on-Demand products）（アプライド・バイオシステムズ、Ｉｎｃ．（Applied Biosystems, Inc.）製のＡＯＤ、カタログ＃４３３１１８２）を使用して、ＡＢＩプリズム（登録商標）７７００シーケンス・デテクション・システム（ABI Prism（登録商標） 7700 Sequence Detection System）上で実行した。 遺伝子特異的発現値をそのそれぞれの１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子発現値（内部対照）に標準化し、次に非−ＬＰＳ非−薬物処理条件を１００に基準化した。 処理条件をこのゼロ状態と比較した。 ユニベスチンＴＭは、ｃｏｘ−２の基準化遺伝子発現を１００倍を超えて減少させ、一方、ｃｏｘ−１基準化遺伝子発現はほとんど変化を示さなかった。 ＰＢＭＣｓを、３μg/mLのユニベスチンＴＭ 、セレコキシブ、イブプロフェンまたはアセトアミノフェンを用いて処理した場合に、ユニベスチンＴＭのみがｃｏｘ−２の遺伝子発現を増大させなかった。 これは、半定量ＲＴ−ｑＰＣＲ技術を使用し、遊離−Ｂ−環フラボノイド類とフラバン類との混合物を用いて治療した後の疼痛及び炎症経路に関与するエイコシノイド、サイトカイン、ケモカイン及び他の遺伝子の遺伝子発現レベルの変化の最初の報告と考えられている。 この研究を、タンパク質レベルの変化を評価するためのＥＬＩＳＡに基づくアッセイ並びにタンパク質機能における変更を評価するための酵素機能アッセイを用いる研究と結び合わせた。 こうした研究の結果として、ユニベスチンＴＭを用いて治療した後のゲノム及びプロテオームの両方を結び合わせた効果が証明された。 文献中に引用する他の研究は、タンパク質特異的方法を使用して遺伝子発現を推測しており、直接に示したものではない。 結果を図１６及び１７に説明する。 実施例１８． インビボマウス耳腫脹モデルを用いたユニベスチンＴＭの効力の評価 ユニベスチンＴＭを使用してインビボで炎症を治療できる可能性があるかどうか試験するために、実施例１４に説明するように製造した組成物を、経口栄養補給によって、ＡＡを用いて耳を処置する１日前に、４〜５週齢ＩＣＲマウス（ハーラン・ラブス（Harlan Labs））に投与した。 試験マウスに、オリーブ油中に懸濁した５０、１００及び２００mg/kgのユニベスチンＴＭの用量同等物を供給し、一方対照マウスにオリーブ油のみを供給した。 翌日、各マウスの一方の耳に９５％アルコール中の２０μLの３３０mMＡＡを適用し、一方、他の耳にアルコールを対照として適用した。 図１８に証明するように、ユニベスチンＴＭを用いて治療したマウスは、次第に増大する用量のユニベスチンＴＭを用いてたどる測定可能な用量反応を示した。 図１８に関して、２００mg/kg用量は、ユニベスチンＴＭの無い対照と比較して腫脹を５０％を超えて低減した。 ５０mg/kg用量のユニベスチンＴＭは、５０mg/kg用量の別の強力な抗炎症剤であるインドメタシンと同程度に有効だった。 実施例１９． インビボマウス足首関節腫脹モデルを用いたユニベスチンＴＭの効力の評価 ユニベスチンＴＭは関節の疼痛を標的にするように設計されているので、９５％エタノール中の２０μLの１００mMＡＡの溶液を４〜５週齢ＩＣＲマウス（ハーラン・ラブス）の後ろ足首関節に注射して腫脹を発生させた。 試験群に、オリーブ油中に懸濁した１００mg/kgのユニベスチンＴＭを〜１２時間前に供給し、一方、別の群はユニベスチンＴＭを与えられなかった。 対照群は、アラキドン酸注射を受けなかったマウス（負の対照）及びＡＡ注入無しで９５％エタノールを有した群（ビヒクル対照）を含んだ。 こうした群はまたユニベスチンＴＭを与えられなかった。 結果を図１９に説明する。 図１９に関して、ＡＡを注射されユニベスチンＴＭを与えられたマウスは、対照及び未処理のアラキドン酸注入群と比較して、バックグラウンドレベルの腫脹を示した。 こうした結果は、関節中の腫脹（作用点）を低減するためのユニベスチンＴＭの有効性を証明する。 実施例２０． 膝及び／または腰部の慢性関節リウマチまたは変形性関節症によって引き起こされる疼痛の緩和に及ぼす遊離−Ｂ−環フラボノイド類及びフラバン類の効力の臨床評価 この臨床研究は、単一中心無作為化二重盲検プラセボ対照研究だった。 膝及び／または腰部の慢性関節リウマチまたは変形性関節症を有する６０人の被験者（ｎ＝６０）を無作為に以下の４つの群のうちの１つの中に入れた。 ユニベスチンＴＭを、実施例１４に説明するように製造した。 この特定のバッチのユニベスチンＴＭ （ロット＃Ｇ１７０２−ＣＯＸ−２）は、８６％総活性成分を含み、これは７５．７％遊離−Ｂ−環フラボノイド類及び１０．３％フラバン類を含む。 セレコキシブ（またセレブレックスＴＭとして周知である）は、ＣＯＸ−２選択的阻害剤である処方薬の商品名である。 被験者は、性別を釣り合わせて年齢４０〜７５才の人から募集した。 治療は、上記の投与計画に従って９０日間のプラセボまたは活性化合物（ユニベスチンＴＭまたはセレコキシブ）の経口投与からなった。 ＮＳＡＩＤｓを投与されている被験者は、研究を開始する前に２週間の洗浄期間を受けた。 活動性を制限せず、被験者に食事に関して助言を与えなかった。 被験者は、任意の時期に任意の理由で試行を自由に止めることができた。 ３０、６０及び９０日の経口投与で、治療の効力を、ウエスタン・オンタリオ及びマクマスター大学（ＷＯＭＡＣ）変形性関節症指数（Western Ontario and McMaster Universities (WOMAC) Osteo-Arthritis index）（Lingard et al. (2001) J. Bone & Joint Surg. 83:1856-1864; Soderman and Malchau (2000) Acta Orthop. Scand. 71(1):39-46を参照されたい）を使用して医師が評価した。 このプロトコルは、モントリオール大学ＩＲＢ委員会（IRB board from University of Montreal）が検討し、承認した。 好ましくは被験者に診察室でＷＯＭＡＣを行った。 被験者は診察室の待合室で自分でか若しくは代理人がアンケートを読んで答えるように要請されるか、またはプロジェクトのスタッフによって電話で面接を受け、データはコンピュータデータベースに転記された。 これは、患者に安定な環境を提供し、患者間の異なる家庭環境による偏りの可能性を低減した。 群間での全ての測定に関する差を、多数の比較に関する一方向分散分析及びツケイ（TUkey）の最小有意差を用いて評価した。 全ての質問に、疼痛、こわばりまたは機能傷害の重症度に依存して０〜４の重みを割り当てた。 次に、こうした値を、１００に基準化したパーセントに転換し、ＷＯＭＡＣスコアとして報告した。 より高い値は、より大きな障害を示す。 表１２は、治療前（ベースライン）並びに３０、６０及び９０日の治療後の、２００mg／日のセレコキシブ及びプラセボと比較した２５０mg及び５００mg／日ユニベスチンＴＭの疼痛、こわばり及び機能の平均ＷＯＭＡＣ指数スコアを説明する。 スコアが低い程、患者は疼痛及びこわばりがより少なく、より良好な機能を有する。 表１３は、疼痛、こわばり及び機能に関するＷＯＭＡＣスコアの平均絶対変化を説明する。 これは、ベースラインと３０、６０及び９０日に与えられるスコアとの間の差として表される。 スコアがより負である程、改良は大きい。 ＊こうしたデータは、研究を完了した被験者のみを含む。 １〜５の範囲を有する５点リカート（Likert）スケールに基づいてＷＯＭＡＣスコアに関する生／非標準化スコアを選択して、最終疼痛、こわばり及び機能障害指数を表した（図２０〜３１）。 ０〜１００のスケールへの標準化を、均一を得るために（表１２及び１３を参照されたい）及び変化の規模の評価を向上されるために他の部分において使用した。 しかしながら、全ての図が同じ１〜５点のスケールに基づいているので、生データを作図し、というのは、これはこうしたスコアを患者のアンケートから得る方法をより正確に反映するからである。 すなわち、患者は１〜５の間の選択を与えられたので、こうした表現は、可能な範囲の回答に対する患者の理解を反映しない０〜１００の標準化または変換されたスコアとは対照的に患者の反応をより良好に反映する。 患者の応答に基づいて２５０及び５００mg／日のユニベスチンＴＭは９０日の治療期間にわたって疼痛を低減したことを示す明らかな傾向が、疼痛指数に存在する。 この同じ期間にわたって、疼痛を低減しないプラセボと比較して、セレコキシブもまた疼痛を低減する。 しかしながら、セレコキシブは、こわばりを低減する際に両方の用量のユニベスチンＴＭと同程度に有効であるとは思われず、というのは、信頼区間はプラセボのものと強く重なり合うからである。 最後に、プラセボと比較して、両方の用量のユニベスチンＴＭは機能障害を明らかに改良したが、セレコキシブはそうではなかった。 グラフ図は、たとえ被験者が研究を完了しなかったとしても、全ての被験者を含む。 しかしながら、各信頼区間は、ＷＯＭＡＣ試験を行った時点で存在した被験者の数に基づいて有効であり、従って傾向は依然として保持される。 こうしたデータを図２０〜３１に作図する。 実施例２１． 機能の増大によるＢＭＩ及び体重減少に及ぼす遊離−Ｂ−環フラボノイド類及びフラバン類の効力の臨床評価。 臨床試験の最中に行った追加の測定は、身長及び体重だった。 全ての群における全ての被験者（実施例２０を参照されたい）につき、３０及び９０日の治療で身長及び体重を測定した。 ＢＭＩの低減及び体重減少に対する結果を偏らせないために、被験者には食餌または運動に関して助言を与えなかった。 表１４は、３０及び９０日間の治療後に起きた体重及びＢＭＩの変化を示す。 こうしたデータに基づいて、２５０mg／日用量のユニベスチンＴＭは最大量の体重減少及びＢＭＩの変化を与え、続いて５００mg／日用量のユニベスチンＴＭ 、次にセレコキシブだった。 プラセボは、体重にもＢＭＩにも影響を及ぼさなかった。 使用されて体重減少またはＢＭＩの変化をもたらす抗炎症化合物に関する何らかの他の報告が文献中に存在するとは考えられていない。 被験者には運動に関して助言を与えなかったが、治療後、特にユニベスチンＴＭを用いて得られたより大きな機能的能力は、自発的により運動することを可能にしたかもしれない。 他に、ユニベスチンＴＭは、熱発生、脂肪分解を増大させるか、または食事中の炭水化物若しくは脂肪の不十分な利用を引き起こすかもしれない。 図３２及び３３は、３０及び９０日の治療後にユニベスチンＴＭに関して見られるＢＭＩ及び体重減少を示す。 実施例２２． 機能の増大による血中グルコースの低下に及ぼす遊離−Ｂ−環フラボノイド類及びフラバン類の効力の臨床評価。 また血中グルコースを０（ベースライン）、治療後３０日及び９０日に採取した（実施例２０を参照されたい）。 こうした測定をミリモル／リットル単位で報告した。 またデータをmg/dL単位で示す。 表１５は、２５０及び５００mg／日のユニベスチンＴＭを用いた３０及び９０日の治療後の血中グルコースレベルを説明する。 こうしたデータは、２５０及び５００mg／日用量のユニベスチンＴＭは両方とも、時間が経つにつれて血中グルコースレベルを有意に低下させることを示唆する。 この影響は、上記に観察された体重の減少失または機能障害が改良された時に推測される活性の増大に関連するかもしれないし、しないかもしれない。 またグルコース負荷を減少させるかまたは炭水化物をより有効に利用することによって、ユニベスチンＴＭが直接に作用してグルコース代謝を改良することが可能かもしれない。 ５０を計算して０．１８μg/mL/酵素の単位であり、ＣＯＸ−２のＩＣ ５０を計算して０．２８μg/mL/単位だった。 ５０は０．４４μg/mL/酵素の単位であると決定され、ＣＯＸ−２のものは０．２８μg/mL/単位であると決定された。 ５０を計算して０．２４μg/mL/酵素の単位であり、ＣＯＸ−２のＩＣ ５０を計算して０．４８μg/mL/単位だった。 ５０は０．１１μg/mL/酵素の単位であると決定され、ＣＯＸ−２のＩＣ ５０は０．４２μg/mL/単位であると決定された。 ５０を計算して０．１７μg/mL/酵素の単位であり、ＣＯＸ−２のＩＣ ５０を計算して０．４１μg/mL/単位だった。 ５０は１．３８μg/mL/酵素の単位だった。 ＴＭ組成物によるＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２の阻害のプロフィルをグラフで示す。 ユニベスチン ＴＭを、組み換え羊ＣＯＸ−１（黒四角）または羊ＣＯＸ−２（◆）のペルオキシダーゼ活性の阻害に関して調べた。 データを、阻害剤無しのアッセイのパーセント阻害対阻害剤濃度（μg/mL）として提出する。 ＣＯＸ−１のＩＣ ５０は０．７６μg/mL/酵素の単位であり、ＣＯＸ−２のＩＣ ５０は０．８０μg/mL/単位だった。 ＴＭ組成物によるＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２の阻害のプロフィルをグラフで示す。 ユニベスチン ＴＭを、組み換え羊ＣＯＸ−１（黒四角）または羊ＣＯＸ−２（◆）のペルオキシダーゼ活性の阻害に関して調べた。 データを、パーセント阻害対阻害剤濃度（μg/mL）として提出する。 ＣＯＸ−１のＩＣ ５０は０．３８μg/mL/酵素の単位であり、ＣＯＸ−２のＩＣ ５０は０．８４μg/mL/単位だった。 ＴＭ組成物によるＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２の阻害のプロフィルをグラフで示す。 ユニベスチン ＴＭを、組み換え羊ＣＯＸ−１（黒四角）または羊ＣＯＸ−２（◆）のペルオキシダーゼ活性の阻害に関して調べた。 データを、阻害剤無しのアッセイのパーセント阻害対阻害剤濃度（μg/mL）として提出する。 ＣＯＸ−１のＩＣ ５０は０．１８μg/mL/酵素の単位であり、ＣＯＸ−２のＩＣ ５０は０．４１μg/mL/単位だった。 ＴＭの次第に増大する濃度が誘発新規合成ＬＴＢ ４の量（◆）に及ぼす影響を示す。 組合せ抽出物の活性は、誘発ＬＴＢ ４合成の％阻害として表される。 ＴＭを用いた治療と３μg/mLイブプロフェンを用いた治療との後にＨＴ−２９細胞中に残るＬＴＢ ４レベルをＥＬＩＳＡによって決定して比較する。 ＴＭの様々な濃度がｃｏｘ−１及びｃｏｘ−２遺伝子発現に及ぼす影響を比較する。 発現レベルを１８Ｓ ｒＲＮＡ発現レベルに標準化（内部対照）し、次に非治療非ＬＰＳ状態に基準化する。 この図は、ＬＰＳ−刺激及びユニベスチン ＴＭへの露出後のｃｏｘ−１遺伝子発現ではなくｃｏｘ−２遺伝子発現の減少を証明する。 ＴＭがｃｏｘ−１及びｃｏｘ−２遺伝子発現に及ぼす影響を同等の濃度の他のＮＳＡＩＤｓと比較する。 発現レベルを１８Ｓ ｒＲＮＡ発現レベルに標準化（内部対照）し、次に非治療非ＬＰＳ状態に基準化する。 ＴＭを、未処理のマウス及び経口栄養補給によってインドメタシン（５０mg/kg）を与えられたマウスと比較した。 データを、各マウスにつき未治療対治療済み耳たぶのミクロン測定の差として提出する。 ＴＭ （８０：２０）（遊離−Ｂ−環フラボノイド類対フラバン類の標準化抽出物の比）がマウスのＡＡ注射した足首（ユニベスチン ＴＭ ＋アラキドン酸）に及ぼす影響を示す。 ＴＭを用いたベースライン、３０、６０及び９０日の治療における疼痛指数ＷＯＭＡＣスコアの９５％信頼区間をグラフで示す。 ＴＭを用いたベースライン、３０、６０及び９０日の治療における疼痛指数ＷＯＭＡＣスコアの９５％信頼区間をグラフで示す。 ＴＭを用いたベースライン、３０、６０及び９０日の治療におけるこわばり指数ＷＯＭＡＣスコアの９５％信頼区間をグラフで示す。 ＴＭを用いたベースライン、３０、６０及び９０日の治療におけるこわばり指数ＷＯＭＡＣスコアの９５％信頼区間をグラフで示す。 ＴＭを用いたベースライン、３０、６０及び９０日の治療における機能障害指数ＷＯＭＡＣスコアの９５％信頼区間をグラフで示す。 ＴＭを用いたベースライン、３０、６０及び９０日の治療における機能障害指数ＷＯＭＡＣスコアの９５％信頼区間をグラフで示す。 ＴＭがＢＭＩの減少に及ぼす影響を示す。 ＴＭが体重の減少に及ぼす影響を示す。 ＴＭが血中グルコースの低下に及ぼす影響を示す。 |
||||||
