Composition for inhibiting fibrosis

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アカシア属、ストリフノデンドロン属、アナカルディウム属、オコテア属、セデュレラ属に属する植物の繊維化抑制作用に関する。
【０００２】
【従来技術】
ＴＧＦ-βは細胞の増殖分化、組織障害後の修復や再生を調節する重要なサイトカインである。 ＴＧＦ-βは、障害組織の修復に際して、白血球の局所への浸潤や血管新生を促し、さらに、細胞外マトリックス（ラミニンＢ１、フィブロネクチン、コラーゲン、テネイシン、及びプロテオグリカン等）の産生と沈着を亢進させる。
【０００３】
このＴＧＦ-βによる細胞外マトリックスの産生と沈着は次の三つのメカニズムからなっている。 第一に、ＴＧＦ-βは、細胞外マトリックス蛋白の遺伝子発現を促進させ、細胞外マトリクッスの蛋白の合成、分泌を増加させる。 第二に、ＴＧＦ-βは合成された細胞外マトリックスを分解する蛋白分解酵素の合成を阻害し、同時に蛋白分解酵素阻害物質の合成を増加させる。 第三に、ＴＧＦ-βは細胞外マトリックスに対するレセプターであるインテグリンを増加させ、細胞周囲のマトリックスの沈着を促進させる。
【０００４】
このように、ＴＧＦ-βは、繊維組織の主たる構成細胞である繊維芽細胞を始めとする各種細胞の増殖分化を調節し、かつ創傷の治療に不可欠な細胞外マトリックスの産生沈着を調節するという、生体にとって極めて重要な役割を有している。 しかし、何らかの原因により、ひとたび過剰なＴＧＦ-βの産生あるいは活性の亢進が生じ、かつ持続すると、糸球体腎炎、糖尿病性腎炎、肝硬変、肺繊維症等の繊維性の増殖病変、硬化性病変を引き起こす。
【０００５】
従って、ＴＧＦ-βが関与する上記の疾患の治療、予防、症状改善には、過剰なＴＧＦ-βの産生、活性の亢進の抑制、細胞マトリックスの沈着抑制することが不可欠である。
【０００６】
アカシア属は、マメ科の双子葉植物で、５００種以上が知られ、ほとんどが常緑性の大高木から小高木である。
アカシア・コンシンナ（Ａｃａｃｉａ concinna (Willd.) DC．）は、和名をネムカズラといい、刺のある低木である。 インド、ビルマ、中国南部、ジャワに分布し、豆果は絹や毛織物の洗剤に用いられる。 また、食用にもされ、若芽は野菜になる。
【０００７】
アカシア・ロイコフロエア（Ａｃａｃｉａ leucophloea Willd.）は、大型の落葉樹で、インドからビルマの乾燥林に分布し、アラビアゴム樹脂が採取される。 若い豆と種子は食用にされる。
【０００８】
ストリフノデンドロン属は、マメ科の複葉植物で、熱帯アメリカに分布し、２０種知られ、強壮、下痢止めに用いられる種もある。
ストリフノデンドロン・バルバチマム（Stryphnodendron barbatimam Mart.）は、種子にグルコマンナンが含まれている。
【０００９】
アナカルディウム属は、ウルシ科の双子葉植物で、熱帯アメリカに１５種知られている。
アナカルディウム・ギガンティウム（Anacardium giganteum Loud）は、代表的な１種である。
【００１０】
オコテア属は、クスノキ科に属する双子葉植物で、高木又は低木である。 大部分の種は、熱帯から亜熱帯アメリカに分布し、一部がカナリア群島と南アメリカ、マダガスカル等に分布する。 約２５０種が知られている。
オコテア・オピフェラ（Ocotea opifera Mart.）は、代表的な１種である。
【００１１】
セデュレラ属は、センダン科に属する大型の高木で、東南アジアと中南米の熱帯を中心に約２０種が分布する。
セデュレラ・オドラタ（Cedrela odorata L.）は、和名をニシインドチャンチンといい、葉巻ケースや装飾用材として用いられる。 葉は食用にされる。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、過剰のＴＧＦ-βによる繊維化により発症する、糸球体腎炎・糖尿病性腎炎、肝硬変、肺繊維症等の疾患を治療、予防、症状改善作用を有する組成物又は食品を提供することにある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、特定の植物が強いＴＧＦ-β誘導コラーゲン産生抑制作用を有することを見出し、本発明を完成させた。
【００１４】
すなわち、本発明は、特定の植物、又はその搾汁若しくは抽出エキスのうち、少なくとも１種を含有する、繊維化抑制用組成物、ＴＧＦ-β誘導コラーゲン産生抑制用組成物、抗腎炎用組成物、抗肝硬変用組成物、抗肺繊維症用組成物、繊維化抑制用食品、ＴＧＦ-β誘導コラーゲン産生抑制用食品、抗腎炎用食品、抗肝硬変用食品、抗肺繊維症用食品に関する。
【００１５】
【発明の実施の形態】
本発明において、アカシア属、ストリフノデンドロン属、アナカルディウム属、オコテア属、セデュレラ属に属する植物が使用可能である。
アカシア属に属する植物としては、アカシア・コンシンナ（Ａｃａｃｉａ concinna (Willd.) DC．）、又はアカシア・ロイコフロエア（Ａｃａｃｉａ leucophloea Willd.）を挙げることができる。
ストリフノデンドロン属に属する植物としては、ストリフノデンドロン・バルバチマム（Stryphnodendron barbatimam Mart.）を挙げることができる。
アナカルディウム属に属する植物としては、アナカルディウム・ギガンティウム（Anacardium giganteum Loud）を挙げることができる。
オコテア属に属する植物としては、オコテア・オピフェラ（Ocotea opifera Mart.）を挙げることができる。
セデュレラ属に属する植物としては、セデュレラ・オドラタ（Cedrela odorata L.）を挙げることができる。
【００１６】
本発明において、上記植物（以下、単に「植物」という）は、葉、茎、芽、花、木質部、木皮部（樹皮）等の地上部および根、塊茎等の地下部、種子、果実、樹脂等全ての部位が使用可能である。
【００１７】
植物自身を乾燥させた乾燥物、その粉砕物、又はこれを圧搾することにより得られる搾汁をそのまま、又は水、湯、ジュース、ミルク等の飲料と一緒に服用できる他、定法により熱湯で適宜抽出し、その抽出液を服用することができる。
【００１８】
植物の抽出エキスは、植物を水（熱水）あるいはアルコール等の溶媒で、定法により抽出し、濃縮乾固することにより得る。 当該エキスは、又は水、湯、ジュース、ミルク等の飲料に懸濁又は溶解して服用することができる。 また、抽出後、定法により精製してもよいし、噴霧乾燥や凍結乾燥してもよい。 これらは単独で用いても良く、２種以上混合して用いても良い。
【００１９】
植物の服用量、又は煎じ量は、服用者の性別や年齢、症状、用いる部位等によって異なるが、成人１日当たり、植物の乾燥体１〜１００ｇが適当であり、好ましくは、２〜２０ｇの範囲である。 抽出エキスの場合、成人１日当たり、０．１〜１０ｇが適当であり、好ましくは０．２〜５ｇの範囲である。 いずれも、１日１回、又は１日２〜４回に分割して服用することができる。
【００２０】
本発明に係る組成物（以下、「本発明組成物」という）は、植物の植物体、搾汁、その抽出エキスを、そのまま又は生理的に許容しうる無毒性かつ不活性な担体中に、例えば０．０１〜９９．５％の範囲内で、好ましくは０．５〜９０％の範囲内で含有させることができる。
【００２１】
上記担体としては、固形、半固形、又は液状の希釈剤、充填剤、及びその他の処方用の助剤一種以上を用いることができる。 本発明組成物は、末剤、カプセル剤、錠剤、糖衣剤、顆粒剤、酸剤、懸濁剤、液剤、シロップ剤、ドロップ剤等あらゆる形態をとることができる。 また、注射剤の形態をとることもできる。
【００２２】
本発明組成物は、抗腎炎作用を有する。 従って、本発明組成物は、医薬として腎炎治療剤、腎炎予防剤として用いることができる。
【００２３】
また、本発明組成物は、食品、例えば、カレー、ピラフ、惣菜等の一般食品やドリンク、菓子に添加して、又はタブレットやカプセル、顆粒等の形態で、健康食品として用いることができる。
【００２４】
【実施例】
以下に、実施例、試験例を示して具体的に説明するが、これに限定されるものではない。
【００２５】
実施例１ 植物エキスの調製アカシア・コンシンナの果実乾燥粉砕物１２２０ｇに、９９．５％メタノールを２．０Ｌ加え、室温で３日抽出した。 抽出液を濾紙で濾過して、残さを炉別し、残さに更に９９．５％メタノール２．０Ｌを加え、再度、室温で３日抽出した。 抽出液を濾紙で濾過し、１回目の濾液と合わせた。 この抽出液を、減圧濃縮して、アカシア・コンシンナのメタノールエキス２２３．４１ｇを得た。
【００２６】
アカシア・ロイコフロエアの樹皮乾燥粉砕物１１８５ｇに９９．５％メタノールを３．０Ｌ加え、室温で３日抽出した。 抽出液を濾紙で濾過して、残さを炉別し、残さに更に９９．５％メタノール１．９Ｌを加え、再度、室温で３日抽出した。 抽出液を濾紙で濾過し、１回目の濾液と合わせた。 この抽出液を、減圧濃縮して、アカシア・ロイコフロエアのメタノールエキス１６９．２５ｇを得た。
【００２７】
ストリフノデンドロン・バルバチマムの材乾燥粉砕物、アナカルディウム・ギガンティウムの樹皮乾燥粉砕物、オコテア・オピフェラの葉乾燥粉砕物、セデュレラ・オドラタの樹皮乾燥粉砕物についても、同様に、９９．５％メタノールで抽出し、抽出液を減圧濃縮してメタノールエキスを得た。 収率は、それぞれ、２．８５％、２３．９０％、１２．８９％、１５．７７％であった。
【００２８】
試験例１ ＴＧＦ-β誘導コラーゲン産生抑制活性試験９６穴マイクロプレートに、１０ ⁴細胞／ウェルのＮＨＤＦ細胞（ヒト正常皮膚由来繊維芽細胞；クラボウＫＦ-４１０９）を撒き、１０％ＦＢＳ含有培地で、３７℃、５％ＣＯ ₂ 、湿度９５％の条件（培養条件は、以後同様）で１日培養後、０．１％ＢＳＡ添加無血清培地（以下、単に「無血清培地」という）に置換し、更に１日培養した。
次に、植物エキス（植物エキスのＤＭＳＯ溶液（３０ｍｇ／ｍｌ）を添加して、最終濃度１０μｇ／ｍｌとした）、アスコルビン酸（最終濃度５０μｇ／ｍｌ）を含む無血清培地に置換して２時間培養後、ＴＧＦ-β（最終濃度３ｎｇ／ｍｌ）を添加して６時間培養した。 これに、[ ³ Ｈ]プロリン（最終濃度５μＣｉ／ｍｌ）を添加して更に１６時間培養した。
コントロール区として、植物エキスとＴＧＦ-βを加えた場合と同濃度のＤＭＳＯのみを添加した無血清培地に置換した培養を行った。 また、ポジティブコントロール区として、ＴＧＦ-β、及び前記と同様のＤＭＳＯを添加した無血清培地に置換した培養を行った。
培養後、細胞数を細胞測定キット（ロシュ１４６５−０１５）を用いてＸＴＴ法により計測した。 細胞に取り込まれた[ ³ Ｈ]プロリン量は、液体シンチレーションカウンターにより測定した。
単位細胞あたり取り込まれた[ ³ Ｈ]プロリン量は、次式により算出した。
【００２９】
【数１】

【００３０】

ＴＧＦ-β誘導コラーゲン産生抑制活性率は、次式から算出される[

³ Ｈ]プロリン取り込み抑制率として表した。

【００３１】

【数２】

【００３２】

試験結果を表１に示す。

【００３３】

【表１】

【００３４】

表１に示すように、植物エキスを添加した場合、いずれも[

³ Ｈ]プロリン取り込み抑制率が５０％以上であり、強いＴＧＦ-β誘導コラーゲン産生抑制活性が認められた。 従って、抽出物エキスには、組織の繊維化抑制作用を有することが判明し、これに起因する、糸球体腎炎・糖尿病性腎炎、肝硬変、肺繊維症等に有効であることが確認された。

【００３５】

【発明の効果】

本発明組成物は、ＴＧＦ-β誘導コラーゲン産生抑制作用を有することから、組織の繊維化に起因する、腎炎、肝硬変、肺繊維症等に対して、治療、予防、症状改善に利用することができる。