预测患者氧化应激表现分的方法

本发明的目的是按照等级0-10预测患者氧化应激表现分的方法。

已知氧是细胞的碳燃料，并且在本领域中有大量有关此的出版物。

然而，某些氧的形态，特别是自由基，如果其催化天然氧化反应随 机改变生物分子，则可能对于生物体与细胞是强毒性的。

这里涉及为氧化应激领域技术人员所知的现象。

这种现象涉及非常广泛的病理学范围，特别是肝炎、癌、艾滋病、 阿耳茨海默氏病、帕金森氏病，并且还相应于基本的老龄化运动。

然而，医学界现在干预氧化应激采取的方法例如是改善生活卫生、 摄入营养物(根据国家安全营养计划(Programme National Nutrition Santé) 推荐)或施用天然或合成的抗氧化剂。

因此期望能够评价在每种特定情况下的氧化应激，以便预告病理学 发展的危险性并在检测到异常时就能提早采取任何可能措施进行医治。

为此，不同实验室实际上提出了采用基于测定某些生物学标记的基 本血液结果来研究这种应激反应。

不过这里涉及大量经验性的方法，这样使用的标记越多，实验室彼 此间的差别就越大。

因此，所述结果在现有医学中在本质上对氧化应激没有作用，而且 其特别复杂的解释是多年来研究氧化应激的某些技术人员的特性。

最近，根据文献EP 1 793 230，人们提出根据血液结果与按照等级 0-10(从干扰最小的结果到干扰最大的结果)生物学测定患者氧化应激表 现分进行测定。

这样的分构成了提供给医学技术人员评价患者氧化应激的科学工 具，其是正常或者或多或少不正常的结果的指示。

在不正常结果的情况下，医生然后应该作解释工作，估计这种异常 根源并为患者拟定必要的医治措施。

在几个月后根据新测定的氧化应激表现分可以检验这些措施(生活卫 生方面的劝告，改进食谱，特别是增加供给水果和蔬菜或补充抗氧化剂) 的恰当性。

不过，这样一种患者氧化应激表现分的测定方法的缺陷是需要考虑 十五个分成三类的生物学标记，它们分别表示可能与不同氧化应激发展 阶段相关的不同信息并且分别相应于外源抗氧化剂、内源抗氧化剂与氧 化损伤标记。因此，这种方法的成本相对高。

因而，应期望的是在测定所述分之前实施预先的《试探(sondage)》 步骤，其只是考虑有限数量的预选择的生物学标记就能够预知其位于的 范围，从而以更低成本获得充分准确可靠的预测。

这样一种《试探》事实上应能够根据患者的氧化应激危险性确定预先 的患者分类，以便只提交已预先确定高氧化应激危险性的患者的完全结 果。

本发明的目的是提出根本上满足这种要求的按照等级0-10预测患者 氧化应激表现分的方法。

附图说明：

图1：横坐标是预测分，纵坐标是氧化应激分。黑色圆相应于属于第 1类的患者，空心圆相应于属于第2类的患者，黑色方块相应于属于第3 类的患者。

根据本发明，这种方法特征在于下述系列步骤：

-在开始校准步骤中：

-通过测定特别是测定抽取的血液评估在一组人中一系列与氧化 应激相关的生物学标记，然后使用预定公式计算这些人中每个人的特定 氧化应激分S0，以便得到数据库，以及

-对这个数据库进行统计分析，以便选择一组氧化应激分的特别代 表性生物学标记，并确定预测关系式，由如此选择的生物学标记计算氧 化应激S0分的预测分Sp，

-通过测定选择的患者组的生物学标记进行评估，以及

-使用所述预测关系计算患者的特定预测分Sp。

本发明的方法最初能够借助医学和数学多学科工作进行构思。

于是根据文件EP 1 793 230预先建立一系列完全的氧化应激结果， 通过医学专家使这些结果中的每个结果有效，以便除去非典型的结果。

于是由177个氧化应激结果得到非常完全的数据库，它作为实例列 在表1中。

表2明确指出了使用的不同生物学标记缩写的含义、其单位与范围。

然后对这个数据库进行统计处理，以便从医学观点选择最恰当的、 最能预计氧化应激分的标记。

根据本发明，如此选择的该组生物学标记可以有利地包含6个以下 的生物学标记。

根据本发明的第一个实施方案，这些生物学标记是铜Cu、锌Zn、还 原谷胱甘肽/氧化谷胱甘肽比(G/G比)、硫蛋白质(prot th)和血浆丙二醛 (MDA)。

根据本发明的这个实施方案，于是提出只使用五个合理选择的生物 学标记(需要六次测定)就能够获得足够精确的、患者氧化应激分的可靠预 测。

应该指出，这些生物学标记属于在上述氧化应激测定方法范围内所 考虑的三类生物学标记，即外源标记(Cu、Zn)、内源标记(G/G比，prot th) 和氧化损伤标记(MDA)。

然后进行的统计处理包括使用如此选择的生物学标记寻求适于足够 准确预测患者氧化应激分或换言之得到尽可能最接近氧化应激分S0的预 测分Sp的最佳预测关系式。

根据本发明的第一个实施方案，如此确定的预测关系式是下述关系 式：

Sp＝6.8127106+0.5105519×Cu/Zn-0.026794×G/G比-0.671527 ×prot th+1.5006322×MDA+0.0001327×(G/G比-63.8422)×(G/G比 -63.8422)-0.623101×(MDA-2.03113)×(MDA-2.03113)

根据本发明的这个第一个实施方案，提出将这些预测分分成三个危 险类别。

根据患者预测分位于其中的类别，医学技术人员可以为其后续作出 最适当的决定，即：

-第1类：分数小于4.5，

对患者无任何特别后续手段，

-第2类：分数为4.5-5.5，

一般危险；处于这个区间的患者在接受确定其氧化应激是否已降低 的新测试之前可以接受三至六个月的治疗，

-第3类：分数高于5.5，

高危险；处于这个区间的患者应该进行完全的氧化应激结果测定或 其它检查。

根据本发明的第二个实施方案，这些选择的生物学标记是铜Cu、锌 Zn、硫蛋白质(prot th)、血浆丙二醛(MDA)和T-Bars，即与硫代巴比妥酸 反应的物质。

应该指出，T-Bars相应于第3类标记(主要为氧化损伤标记)。

根据这第二个实施方案，在取样时以及主要在储存样品(在-80℃冻凝) 时需要特别谨慎，避免测定G/G比，已决定在不进行这种测定时评估其 他模型。

进行所述统计处理通过下述预测关系式确定预测分Sp′：

Sp′＝3.0818+0.27018×Cu/Zn-0.64301×prot th+0.91474×MDA +1.16677×T-Bars+0.99643×(Cu/Zn-1.52488)×(MDA-2.03113)+ 0.9099×(Cu/Zn-1.52488)×(T-Bars-2.91639)+0.29203×(prot th- 5.9951)×(MDA-2.03113)

应该指出，根据本发明的这第二个实施方案，这些预测分类别与根 据第一个实施方案确定的类别相比有一些变化；事实上：

-第1类相应于分数小于4，

-第2类相应于分数为4-6，

-第3类相应于分数大于6。

为了证实通过本发明方法得到的氧化应激预测分的代表性，在一组 有患者中进行了计算：

-一方面，根据文件EP 1 793 230的氧化应激分，以及

-另一方面，根据本发明两个方案的预测分。

得到的这些结果总结于图1中，图中横坐标是预测分，而纵坐标是 氧化应激分。

黑色圆相应于属于第1类的患者，而空心圆相应于属于第2类的患 者，黑色方块相应于属于第3类的患者。

这些结果本质上清楚地证明根据本发明两个方案得到的预测分的质 量。

应该指出从纯统计学观点来看，这些工作利用了下述技术和方法：

-主成分分析，

-多元线性回归(较少的方块)与PLS(偏最小二乘法)回归，

-层次分类(Classification Hiérarchique)与列联表分析(Khi2检验和 Kappa指数)。

应该指出，预测患者的氧化应激表现分S0与相关的危险类别分配目 前是借助以宏指令形式用专业2003版Exel研发的实用程序以 交互方式实现的。

对于所有的统计处理，使用6.0.2版的Jmp软件(SAS的Statical Discovery2006 SAS Institute Inc)。

表1

表1-数据库

表2

  缩写   名称  单位   范围   Vit C   维生素C  μmol/l   15-62   Alpha tocoph   α生育酚  μmol/l   18-48.5   Gamma tocoph   γ生育酚  μmol/l   1.4-3.6   VitC/E   维生素C/维生素E比   ＞1.3   GSH   谷胱甘肽  μmol/l   729-1203   GSSG   氧化谷胱甘肽  μmol/l   5.5-19.3   Ratio G/G   谷胱甘肽/氧化谷胱甘肽比   40-155   GPX   谷胱甘肽过氧化物酶  U/l   300-450   Prot Thiol   硫蛋白质  μmol/g蛋白质   5.8-7.7   AcideUrique   尿酸  μmol/l   145-460   Sel   硒.  μmol/l   0.8-1.25   Cu   铜  μmol/l   12.4-25.9   Zn   锌  μmol/l   11.7-17.3   Cu/Zn   铜/锌比   接近1   MDA   血浆丙二醛  μmol/l   1.12-1.81   T-Bars   与硫代巴比妥酸反应的物质   的血清比率  μmol/l   2.13-2.86