1 |
一种高纯度NK细胞的分离培养方法 |
CN201710791174.8 |
2017-09-05 |
CN107384859A |
2017-11-24 |
杨本艳姿; 李雪莲; 陈强 |
本发明提供了一种用于分离培养高纯度NK细胞的试剂盒,它包含培养基1-3,本发明还提供了一种高纯度NK细胞的分离培养方法。利用本发明提供的试剂盒及分离培养方法,可以高效获得满足临床使用的NK细胞,细胞数量多,纯度高、杀伤活性好,在同种异体NK回输方面具有突出优势,应用前景良好。 |
2 |
一种视网膜节细胞特异性表面蛋白的筛选方法 |
CN201610290827.X |
2016-05-04 |
CN107345218A |
2017-11-14 |
王晓冰 |
本发明涉及一种视网膜节细胞特异性表面蛋白的筛选方法,筛选出节细胞特异性表面蛋白、该表面蛋白特异性的表达在人胚胎干细胞以及人多能干细胞来源的视网膜节细胞前体细胞的细胞膜表面,这将提供一种简单的方法用于人多能干细胞来源的视网膜节细胞前体细胞的纯化。通过表面蛋白筛选获得的纯化节细胞,可以避免转基因或者应用多种小分子化合物为诱导剂所带来的潜在危险。这一关键科学问题的解决,将加快干细胞向临床转化的过程,符合医学研究的需要,为人类青光眼的细胞替代治疗奠定了基础。 |
3 |
一种构建验证视网膜节细胞特异性表面蛋白的方法 |
CN201610289894.X |
2016-05-04 |
CN107345217A |
2017-11-14 |
王晓冰 |
本发明涉及一种构建验证视网膜节细胞特异性表面蛋白的方法,对已知的370种CD抗体对人胚胎干细胞来源的视网膜节细胞前体细胞进行筛选,筛选出的其中一种CD抗原特异性表达在人胚胎干细胞以及人多能干细胞来源的视网膜节细胞前体细胞的细胞膜表面,这将提供一种简单的方法用于人多能干细胞来源的视网膜节细胞前体细胞的纯化。通过表面蛋白筛选获得的纯化节细胞,可以避免转基因或者应用多种小分子化合物为诱导剂所带来的潜在危险。这一关键科学问题的解决,将加快干细胞向临床转化的过程,符合医学研究的需要,从而用于临床利用细胞移植替代疗法治疗青光眼。 |
4 |
一种复合口腔粘膜上皮细胞的口腔补片制备方法 |
CN201710559545.X |
2017-07-11 |
CN107335096A |
2017-11-10 |
李康乐; 汪文涛; 葛翠兰; 沈健峰; 韩韦红 |
本发明公开一种复合口腔粘膜上皮细胞的口腔补片制备方法,包括以下步骤:采用小肠粘膜下层制备口腔补片,通过传代培养法培养口腔粘膜上皮细胞,将口腔粘膜上皮细胞接种至放有口腔补片的细胞培养皿中,37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。培养中止后,即得到复合口腔粘膜上皮细胞的口腔补片。本发明所提供的一种复合口腔粘膜上皮细胞的口腔补片制备方法,材料来源充分,能够使口腔粘膜上皮细胞在口腔补片中大量增殖,为临床上口腔粘膜大面积缺损的修复重建提供新的途径。 |
5 |
一种嵌合抗原受体NK细胞的制备方法 |
CN201710728772.0 |
2017-08-23 |
CN107267455A |
2017-10-20 |
张正亮 |
本发明公开了一种嵌合抗原受体NK细胞的制备方法,该方法包括如下步骤:采集患者外周富集血,加入肝素抗凝,将外周血与Ficoll-Paque PLUS单核细胞分离液混合;混合液离心后,取沉淀加入PBS重悬;将S1中得到的核细胞加入PBS洗涤两次后装入离心管中,离心管中加入8%灭活血清和1000U/mL IFN-γ,培养24-28h;于S3的离心管中补加IL-1100U/mL及抗CD3单抗350ng/mL,继续培养10-12d,得到NK细胞。本发明公开了一种NK细胞的体外培养方法,从患者体内采集外周血后通过Ficoll法分离单个核细胞,体外培养得到NK细胞,通过加入生长因子IL-1和抗CD3单抗,避免细胞增殖不稳定,为病毒感染细胞提供有利环境。 |
6 |
一种基于母体的胎儿外膜滋养层细胞的胎儿遗传检测方法 |
CN201710495203.6 |
2017-06-26 |
CN107236809A |
2017-10-10 |
曹林; 张力军; 聂俊伟; 瞿志鹏; 韩锦雄; 齐心; 曲若端 |
本发明公开一种基于母体的胎儿外膜滋养层细胞的胎儿遗传检测方法,包括如下步骤:1)提供含有胎儿滋养层细胞的样本;2)将样品固定,加冰醋酸消化,离心,缓冲液重悬,姨酶消化,缓冲液重悬;3)加入磁性纳米颗粒偶联的HLA‑G单克隆抗体,孵育;4)磁力架收集,缓冲液冲洗离心,纯化磁性纳米颗粒捕获的细胞;5)DNA酶处理,挑取单个细胞,进行单细胞基因组扩增,对基因组DNA进行打断建库;6)测序分析。本发明所述方法简便、快速、特异性高。 |
7 |
一种为肺癌提供离体个体化药物测试的方法及培养基 |
CN201710345315.3 |
2017-05-16 |
CN107151645A |
2017-09-12 |
李晖; 陈雨; 叶立娜; 吴小婷; 赵天龙; 张康; 蔡铠红; 魏高斌; 曾志宏 |
本发明公开了一种为肺癌提供离体个体化药物测试的方法及培养基。属细胞生物学与药理学领域。通过应用人或哺乳动物正常上皮细胞和原代肿瘤细胞的培养基M,建立肺癌病人自身肿瘤细胞和癌旁正常细胞的体外培养体系,获得了可持续传代和快速增殖的患者个体的原代细胞。该培养体系可以同时用于检测药物或其联用组的敏感性及安全性,从而建立了稳定准确可靠的肺癌个体化治疗‑药敏试验标准检测流程体系。利用此系统筛选出的个体敏感化疗药物或组合,将结合临床医学或相关学科制定出临床的个体化治疗方案,最终服务于临床。 |
8 |
微载体上的多能干细胞培养 |
CN200980155382.2 |
2009-11-19 |
CN102307991B |
2017-08-15 |
S·纳尔逊 |
本发明涉及用于在微载体上培养、扩增和分化多能干细胞的方法。 |
9 |
一种人脐带组织消化酶及其制备方法 |
CN201710241716.4 |
2017-04-14 |
CN106867981A |
2017-06-20 |
沈晓延 |
本发明公开了一种人脐带组织消化酶,包括按照重量份计的如下组份:胶原酶30‑50份、透明质酸酶20‑40份、DNA酶0.1‑0.8份、青霉素4‑10份、链霉素15‑23份。本发明提出的一种人脐带组织消化酶性质温和,对细胞损伤小;该组织消化酶的酶解速率高,缩短了脐带组织的消化时间,分离得到的间充质干细胞具有更加优良的增殖活性和分化能力;此外本发明的组织消化酶中还添加青霉素和链霉素,可有效防止样本在采集过程中的污染以及运输过程中细菌的滋生。 |
10 |
一种围产期间充质干细胞二次分离培养方法 |
CN201610986118.5 |
2016-11-09 |
CN106754667A |
2017-05-31 |
闫姗姗; 李一佳; 尹义强; 刘国燕 |
本发明涉及一种围产期间充质干细胞二次分离培养方法,属于生物医药技术领域。本发明经过人胎盘绒毛膜组织或脐带组织首次分离后组织的回收、人胎盘绒毛膜或脐带组织的间充质干细胞二次分离及间充质干细胞的体外培养和冻存,并对分离获得的细胞进行相关检测,与首次分离的细胞数量进行比较。本发明能够从已经分离过一次间充质干细胞的人胎盘绒毛膜组织或脐带组织中再次分离获得大量表型均一稳定的间充质干细胞,经检测符合临床应用标准。通过培养体外扩增获得大量间充质干细胞满足市场需求。 |
11 |
脂肪干细胞美容微囊泡的培养制备方法 |
CN201611151767.X |
2016-12-14 |
CN106727264A |
2017-05-31 |
万谦; 高莉 |
本发明描述了脂肪干细胞美容微囊泡的培养制备方法,它涉及细胞培养技术领域,培养制备方法为:无菌条件下取健康女性腹部和腿部皮下脂肪约5g,用含有双抗的PBS充分漂洗3遍,在超净台上将脂肪剪成组织小碎块,用PBS缓冲液洗净血污;胰蛋白酶消化,采用2倍体积的I型胶原酶消化脂肪组织块;将脂肪消化后的产物接种培养基中,至脂肪干细胞生长铺满瓶底,即可进行传代;传代结束后,取出脂肪干细胞悬液,冻融,进行细胞裂解;加入PBS缓冲液15‑20ml,制备成脂肪干细胞美容微囊泡保存,使用时融化即可。具有取材容易、适宜大规模培养、对机体损伤小等优点,它取材来源广泛,体内储备量大,培养过程较为简单,操作容易。 |
12 |
免疫磁珠的制备方法 |
CN201710054241.8 |
2017-01-24 |
CN106680486A |
2017-05-17 |
唐平 |
本发明涉及一种免疫磁珠的制备方法。该制备方法包括以下步骤:1)将铁盐、分解促进剂、亲水性高分子及油酸加入到溶剂中溶解,得到混合溶液;2)将上述混合溶液在180℃‑250℃的温度条件下反应5分钟‑30分钟后冷却,得到含有反应产物的冷却溶液;3)将所述冷却溶液中的反应产物洗涤后得到免疫磁珠;其中,制备过程中铁盐、分解促进剂、油酸、溶剂和亲水性高分子的用量比为(1.5‑2.5)mmol:(8‑12)mmol:(4‑8)mmol:(15‑30)ml:(0.05‑1.5)g。该方法制备的免疫磁珠分散性好、粒径分布均匀且不易团聚。 |
13 |
一种快速简易的拟南芥完整叶绿体的提取方法 |
CN201611010468.4 |
2016-11-17 |
CN106676054A |
2017-05-17 |
彭昌操; 杨紫薇; 刘思雯; 朱其金; 董甜甜; 宋亚男; 郑丹菁 |
本发明属于细胞生物学、生物化学和分子生物学等技术领域,公开了一种快速简易的拟南芥完整叶绿体的提取方法。其中包括以下操作步骤:(1)将拟南芥叶片在Medium I中低速匀浆;(2)过滤之后1500g 4℃水平离心5min;(3)叶绿体沉淀用Medium II悬浮后,在40%/80%percoll梯度中3000g 4℃水平离心30min。(4)吸出完整叶绿体,用SH buffer洗涤两次;(5)叶绿体沉淀用SH buffer悬浮后色素定量。 |
14 |
一种高效捕获细胞的方法 |
CN201611122625.0 |
2016-12-08 |
CN106591236A |
2017-04-26 |
姜维; 吴庆军 |
本发明提出一种高效捕获细胞的方法,包括以下几个步骤:A1.磁珠的活化;A2.磁珠的修饰:使用特定的长链化合物对活化后的磁珠进行修饰,获得磁珠‑长链化合物复合物,形成的复合物具有立体网状结构,表面有大量的长链凸起;A3.免疫磁珠的制备:在所述的长链化合物外偶联抗体;A4.特定细胞的捕获与分离富集。本发明捕获细胞的方法,通过使用特定的长链化合物对磁珠进行修饰,形成的磁珠‑长链化合物复合物具有立体网状结构,增加了抗体和细胞结合的概率,大大提高了免疫磁珠捕获细胞的效率和灵敏度,并且不会增加分离的难度,促进了其在临床上的应用。 |
15 |
一种皮肤干细胞活性成分的提取方法 |
CN201611213857.7 |
2016-12-26 |
CN106591222A |
2017-04-26 |
于保锋; 孟凡秀; 张琪; 解军; 曹睿; 温晓薇; 杨巧艳; 加三三; 温丽敏; 白欣艳; 姚志坚; 曾思衡; 袁洋洋; 张紫燕; 张丽娜; 王萱; 田九博; 马培元; 刘志贞; 傅松涛; 杨丽红; 郭睿; 王惠珍; 徐钧; 刁海鹏; 陈显久; 胡晓年; 弓韬; 王海龙; 赵虹 |
本发明公开了一种皮肤干细胞活性成分的提取方法,是将人源性皮肤组织加入添加有PMSF蛋白酶抑制剂的Ⅰ型胶原酶与Ⅱ型胶原酶的生理盐水混合消化液中恒温摇床培养,以含体积分数10%胎牛血清的M199培养基终止消化,离心收集沉淀,生理盐水重悬细胞得到复合皮肤干细胞,应用磁珠标记的Dlk抗体和Sca1抗体筛选出Dlk1+/Sca1−皮肤干细胞。以本发明方法提取的Dlk1+/Sca1−皮肤干细胞纯度可以达到95.8%,皮肤干细胞数量多、细胞存活率高、活性好,应用于治疗脱发的药物中,生发效果显著。 |
16 |
获得羊膜上皮干细胞的方法及试剂盒 |
CN201610983737.9 |
2016-11-08 |
CN106566798A |
2017-04-19 |
裴雪涛; 岳文; 贾雅丽; 苏如玉; 黄媛媛 |
本发明公开了获得羊膜上皮干细胞的方法及试剂盒。所述方法包括:利用混合酶制剂将羊膜进行消化处理,得到消化产物;以及从所述消化产物中分离所述羊膜上皮干细胞,其中,所述混合酶制剂包括:胰酶‑EDTA混合液;以及分散酶II。利用本发明的方法或试剂盒能够获得大量、纯度较高且活性较高的羊膜上皮干细胞。 |
17 |
抗Ttyh1单克隆抗体及其应用 |
CN201610916107.X |
2016-10-20 |
CN106543285A |
2017-03-29 |
郑敏化; 曹秀丽; 韩骅 |
本发明涉及抗Ttyh1单克隆抗体及其应用。本发明用重组小鼠Ttyh1分子免疫BALB/c小鼠,制备一组小鼠抗鼠Ttyh1单克隆抗体,并筛选出具有高亲和力和特异性的抗Ttyh1单克隆抗体。本发明的抗体可进行免疫印迹、免疫细胞荧光染色、免疫组织荧光染色多种检测,并可特异性标识小鼠神经干细胞,为标记、分离、纯化及鉴定小鼠神经干细胞提供有利工具,为神经干细胞相关的基础与转化医学研究提供技术支持;基于所选抗原与人TTYH1分子的同源性,该抗体还可以标识人类神经胶质瘤组织中的TTYH1分子,有利于揭示TTYH1在胶质瘤发生发展中的作用,以及在诊断治疗中的应用前景,并在此基础上发展基因工程抗体。 |
18 |
小鼠肝窦内皮细胞的提取方法 |
CN201611197812.5 |
2016-12-22 |
CN106520672A |
2017-03-22 |
刘乃山; 宋延超; 迟培升 |
本发明公开了一种小鼠肝窦内皮细胞的提取方法,该方法利用氯化钆注射清除枯否细胞,结合两步灌流、差速离心、percoll离心、差速贴壁的来实现敢斗内皮细胞的分离。小鼠肝窦内皮细胞的提取方法,简单易行、细胞纯度高、获得率高,并在体外培养保留完整的结构和功能活性,可用于生化及免疫学。此外,本发明方法使用实验室常规仪器,成本低可在大部分实验室推广。 |
19 |
马铃薯原生质体的高效分离、转化及再生的方法及其专用培养基 |
CN201611099745.3 |
2016-12-05 |
CN106520666A |
2017-03-22 |
冉毅东; 高崑; 张康 |
本发明公开了一种马铃薯原生质体的高效分离、转化及再生的方法及其专用培养基,以马铃薯试管苗茎段为起始材料,经过诱导及3次继代培养获得生长旺盛、结构疏松的胚性愈伤组织进行悬浮培养,采用纤维素酶、果胶酶和离析酶,对马铃薯悬浮细胞进行消化并利用密度梯度沉降的方法分离原生质体,获得了高纯度的原生质体。通过聚二乙醇介导将目的基因导入马铃薯原生质体基因组中,经液体浅层培养以及后续分化再生,培育出了大量马铃薯转基因植株。 |
20 |
基因重组干细胞制剂的制备方法及其在皮肤损伤修复、瘢痕抑制中的应用 |
CN201610920534.5 |
2016-10-21 |
CN106497975A |
2017-03-15 |
李程; 郭垚示; 项春生 |
本发明公开了一种用于创伤修复、瘢痕抑制的基因重组干细胞制剂及其制备方法,所述基因重组干细胞制剂包括独立存放的细胞针剂和喷涂剂;该制备方法包括将稳定表达HGF的细胞系进行扩增培养,然后分离出细胞成分和培养上清;将所述细胞成分制备为细胞针剂;将所述培养上清制备为喷涂剂。本发明还提供了稳定表达HGF的宮血干细胞在制备用于修复皮肤损伤和/或抑制瘢痕产生的药物中的用途。本发明能够实现对创伤安全高效的修复并且能够抑制瘢痕的产生。 |