可溶性ICAM-1作为生物标志物用于预测治疗性应答
阅读：186发布：2023-03-05
专利汇可以提供可溶性ICAM-1作为生物标志物用于预测治疗性应答专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及免疫学领域，并且特别地涉及用于针对例如因感染或癌症所致 疾病 治疗 患者的接种方法。更具体地，本发明涉及预测受试者在这种接种后是否易于或不易于发展 预防 性或治疗性应答、优选地免疫应答的方法。本发明涉及用于选择患者的方法和组合物，其中所述患者能够最佳地通过免疫原性组合物、尤其 疫苗 而产生体内治疗性免疫应答。，下面是可溶性ICAM-1作为生物标志物用于预测治疗性应答专利的具体信息内容。
1.针对sICAM-1的抗体的用途，用于制备测试患者是否对包括施用免疫原性组合物的治疗方法会治疗性应答的试剂盒，其中测试患者是否对包括施用免疫原性组合物的治疗方法会治疗性应答包括步骤：
从患者获得血样；
测量所述血样中sICAM-1的水平，
其中sICAM-1的低水平表示具有sICAM-1低于300ng/ml的低水平的患者会发展针对该免疫原性组合物的预防性或治疗性应答。
2.权利要求1所述的用途，其中所述sICAM-1的低水平意指低于250ng/ml的水平。
3.权利要求1所述的用途，其中所述sICAM-1的低水平意指低于224ng/ml的水平。
4.权利要求1所述的用途，其中所述sICAM-1的低水平意指低于200ng/ml的水平。
5.权利要求1所述的用途，其中所述的治疗方法是治疗癌症的方法。
6.权利要求1所述的用途，其中所述的sICAM-1水平用Luminex技术或酶联免疫吸附测定法测量。
7.权利要求1所述的用途，其中所述的血样选自由全血样、血浆或血清组成的组。
8.权利要求1所述的用途，其中所述的免疫原性组合物含有至少一种被靶向抗原的全部或部分。
9.权利要求1所述的用途，其中所述的免疫原性组合物含有在体内表达至少一种异源核苷酸序列的全部或部分的至少一种重组载体。
10.权利要求9所述的用途，其中所述的重组载体是病毒载体。
11.权利要求10所述的用途，其中所述的病毒载体是有复制能力的。
12.权利要求10所述的用途，其中所述的病毒载体是有复制缺陷的。
13.权利要求9所述的用途，其中所述的重组载体是重组腺病毒载体。
14.权利要求13所述的用途，其中所述的重组腺病毒载体是有复制能力的。
15.权利要求13所述的用途，其中所述的重组腺病毒载体是有复制缺陷的。
16.权利要求9所述的用途，其中所述的重组载体是重组痘苗载体。
17.权利要求16所述的用途，其中所述的重组痘苗载体是有复制能力的。
18.权利要求16所述的用途，其中所述的重组痘苗载体是有复制缺陷的。
19.权利要求16所述的用途，其中所述的重组痘苗载体是重组MVA载体。
20.权利要求1至19任一项所述的用途，其中所述的患者是用化疗药治疗的患者。
21.用于测试患者是否对包括施用免疫原性组合物的治疗方法会治疗性应答的试剂盒，其中该试剂盒包含：
用于确定在来自该患者的血样中sICAM-1水平的抗体；和
用于解读所获得的数据的说明书，指出sICAM-1的低水平表示患者会发展针对所述免疫原性组合物的预防性或治疗性应答，其中sICAM-1的低水平是低于300ng/ml的水平。
可溶性ICAM-1作为生物标志物用于预测治疗性应答
[0001] 本发明涉及免疫学领域，并且特别地涉及针对例如因感染或癌症所致疾病对患者进行的免疫治疗。更具体地，本发明涉及预测受试者在这种免疫治疗后是否易于或不易于发展预防性或治疗性应答、优选地免疫应答的方法。本发明涉及用于改善免疫应答的方法和组合物，其中所述的免疫应答通过免疫原性组合物、尤其疫苗而体内产生。
[0002] 常规接种技术已经已知多年，其涉及向动物系统导入可以诱导免疫应答并因而例如保护该动物免遭感染的抗原(例如，肽、蛋白质)。这些技术已经进一步包括开发活疫苗和灭活疫苗。活疫苗一般是减毒非致病形式的传染性物质，其能够引发针对该传染性物质致病形式的免疫应答。
[0003] 近年来，已经在开发从载体中编码和表达外来目的抗原的重组疫苗、尤其重组活疫苗方面取得进展。在它们当中，基于重组病毒的载体已经显示巨大前景并且在新疫苗的开发中扮演重要角色。已经对许多病毒研究了它们表达源自外来病原体或肿瘤组织的蛋白质的能力和在体内诱导针对这些抗原的特异性免疫学应答的能力。一般而言，这些基于基因的疫苗能够刺激强烈的体液免疫和细胞免疫应答，并且病毒载体可以是用于递送编码抗原的基因和促进并增强抗原呈递的有效策略。为了作为疫苗载体使用，理想的病毒载体应当是安全的并且能够有效呈递所需要的病原体特异性抗原至免疫系统。另外，该载体系统必须满足能够基于大规模产生它的标准。几种病毒疫苗载体因而迄今已经出现，根据提出的用途，它们均具有相对的优势和局限(对于重组病毒疫苗的综述，例如见Harrop和Carroll，2006，Front Biosci.，11，804-817；Yokoyama等人，1997，J Vet Med Sci.，59，311-322)。
[0004] 在20世纪90年代早期观察到质粒DNA载体可以直接在体内转染动物细胞后，也已经投入明显的研究力量以开发基于使用DNA质粒的接种技术，旨在通过将编码抗原的DNA直接导入动物来诱导免疫应答。广泛称作DNA接种的此类技术现在已经用来在大量疾病模型中引发保护性免疫应答。对于DNA疫苗的综述，见Reyes-Sandoval和Ertl，2001(CurrentMolecular Medicine，1，217-243)。
[0005] 然而，疫苗领域的常见问题是确定在所接种个体中诱导足够强烈的免疫应答以保护免受感染和疾病的手段。
[0006] 因此，例如近年进行了大量努力来发现通过刺激免疫系统的某些关键方面而起效的新药物化合物，这将用于提高疫苗诱导的免疫应答。称作免疫应答调节物(IRMs)或佐剂的大部分的这些化合物似乎通过基本免疫系统机制借助Toll样受体(TLR)起效以诱导多种重要的细胞因子生物合成(例如，干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子等，例如见Schiller等人，2006，Exp Dermatol.，15，331-341)。此类化合物已经显示可刺激某些树状细胞、单核细胞/巨噬细胞衍生的细胞因子迅速释放并且也能够刺激B细胞分泌在IRM化合物的抗病毒和抗肿瘤活性中发挥重要作用的抗体。
[0007] 备选地，已经提出了接种策略，它们中的大部分基于引发-强化接种方案。根据这些“引发-加强(prime-boost)”接种方案，免疫系统首先通过施用引发组合物至患者被诱导并且随后通过施用加强性第二组合物进行加强(例如见EP1411974或US20030191076)。
[0008] 另外，一个群体的每个成员可能不同等地应答于特定疗法。例如，新化合物经常在后期临床试验中失败，原因是在受检群体中缺乏效力。尽管此类化合物可能在整个群体中不是有效的，但是可能存在对那些失败化合物敏感的亚群体，这归咎于多种原因，包括基因表达的先天差异。通过鉴定对某化合物敏感的患者亚群体，因此可能定义可以用来挽救失败化合物的方法。限于敏感患者亚群体的后续临床试验随后可以在这个特定患者亚群体中显示先前失败化合物的效力，从而推进批准该化合物用于这个亚群体中。因此，另一种改善免疫治疗效力的方式可以是确定对该治疗敏感的患者群体。
[0009] 胞内黏附分子1(ICAM-1或CD54)是属于免疫球蛋白超家族的黏附相关分子。此分子存在于内皮细胞的细胞膜上。当活化时，ICAM-1引起白细胞稳定黏附于内皮表面。起初，已经显示ICAM-1的一级结构具有典型的疏水性跨膜节段并且ICAM-1是不溶性分子，其通过在非离子型去污剂中裂解细胞而自细胞膜溶解(见EP0289949)。后续研究已经鉴定到ICAM-1的命名为sICAM-1(或sCD54)的备选性分子种类，它在不添加去垢剂情况下是可溶的(见US5821341)。可溶性胞间黏附分子-1(sICAM-1)代表了组成型表达或在不同细胞系的细胞表面上可诱导的循环形式的ICAM-1。已经在此类体液如血清、脑脊液、滑液、痰、尿和支气管肺泡灌洗液中发现了可溶性ICAM-1。可溶性ICAM-1的释放受几种细胞因子和多种因子(TNFα、白细胞介素、干扰素等)调节。虽然仍未彻底阐明可溶性ICAM-1的作用和功能，证据显示它参与某些疾病进展(例如动脉粥样硬化和炎症，Hulthe等人，2002，Clin Sci(Lond).，103，123-9)。已经提出至少其升高的水平可以告知临床医生关于病理过程的信息。
[0010] 见例如：
[0012] Molla等人(1989，J Biol Chem.，264，10589-94)提出sICAM-1的水平用作动脉粥样硬化临床表现的指征。
[0013] Dong Soon Kim等人(1999，Chest，115，1059-1065)提出使用可溶性ICAM-1水平的值作为结节病中活动性的标志物，因为在患有活动疾病的患者中，血清中的sICAM-1水平(575±221ng/mL)高于患有非活动性疾病的患者的那些sICAM-1水平。
[0014] Demerath等人(2001，Ann Hum Biol.，28，664-78)已经显示可溶性sICAM-1和sESEL的浓度还反映了表观健康的男性和女性中建立的CVD风险因子的水平，进一步作为这些因子借助对血管内皮的炎症作用而促进CVD的证据。
[0015] 还见Witkowska等人，2004，Eur Cytokine Netw.，15，91-98，其提供多种疾病中sICAM-1在体液中的浓度。
[0016] 研究已经显示可溶性ICAM和VCAM的升高水平与患有多种急性和慢性炎性疾病的患者中的疾病活动性相关(Ilic等人，2007，Med Pregl.，第60卷，增刊2，128-32)。
[0017] Dowlati等人，2008，Clin.Cancer Res.，14，1407-1412最近已经证实ICAM水平预示存活并且预测对化疗法(即，卡铂+紫杉醇)的应答。
[0018] 本申请人现在已经鉴定了新的工具和接种策略。根据第一实施方案，本发明涉及通过施用包含至少一种抗原的免疫原性组合物针对人类疾病治疗患者的方法，其中在由具有低水平sICAM-1(也叫做sCD54或可溶性ICAM-1或可溶性CD54)的患者组成的患者群体中选出所述患者。
[0019] 本发明因而涉及通过施用包含至少一种抗原的免疫原性组合物而针对人类疾病治疗患者的方法，所述的方法包括以下步骤：
[0020] 在由具有低水平sICAM-1的患者组成的患者群体中选出患者，
[0021] 施用该免疫原性组合物至所述的选出患者。
[0022] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于通过施用免疫原性组合物在患者中发动免疫应答(即，发动的免疫应答(raised immune response))以治疗人类疾病的方法，其中在由具有低水平sICAM-1的患者组成的患者群体中选出所述患者。
[0023] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于通过施用免疫原性组合物在患者中发动针对至少一种抗原的免疫应答(即，发动的免疫应答)以治疗人类疾病的方法，其中在由具有低水平sICAM-1的患者组成的患者群体中选出所述患者。
[0024] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于通过施用免疫原性组合物在患者中发动免疫应答(即，发动的免疫应答)以治疗人类疾病的方法，其中在由具有低水平sICAM-1的患者组成的患者群体中选出所述患者并且其中所述发动的免疫应答是先天免疫应答。先天免疫应答是身体针对病原体的初始免疫防御并且由包括抗原呈递细胞或“APC”在内的多种细胞引发。这些细胞表达识别外部来源分子(例如，细菌和病毒的核酸、蛋白质、糖)的表面受体和胞浆受体。当检测到这些信号时，树状细胞和巨噬细胞引发防御性应答，其包括释放吸引细胞如不成熟性树状细胞、巨噬细胞、NK细胞和粒细胞至攻击部位的细胞因子(包括干扰素、TNF-α和IL-12)和趋化因子。先天免疫应答因而赋予非特异性保护，而身体产生适应性应答。
[0025] 本发明因而涉及了用于通过施用免疫原性组合物在患者中发动免疫应答(即，发动的免疫应答)以治疗人类疾病的方法，所述的方法包括以下步骤：
[0026] 在由具有低水平sICAM-1的患者组成的患者群体中选出患者，
[0027] 施用该免疫原性组合物至所述的选出患者。
[0028] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于通过施用免疫原性组合物在患者中发动针对至少一种抗原的免疫应答(即，发动的免疫应答)以治疗人类疾病的方法，所述的方法包括以下步骤：
[0029] 在由具有低水平sICAM-1的患者组成的患者群体中选出患者，
[0030] 施用该免疫原性组合物至所述的选出患者。
[0031] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于通过施用免疫原性组合物在患者中发动免疫应答(即，发动的免疫应答)以治疗人类疾病的方法，其中所述发动的免疫应答是先天免疫应答，所述的方法包括以下步骤：
[0032] 在由具有低水平sICAM-1的患者组成的患者群体中选出患者，
[0033] 施用该免疫原性组合物至所述的选出患者。
[0034] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于通过施用免疫原性组合物在患者中诱导免疫应答(即，发动的免疫应答)以治疗人类疾病的方法，所述的方法包括以下步骤：
[0035] -测量该患者中sICAM-1的水平，和
[0036] -如果所述患者具有低水平的sICAM-1，施用所述的免疫原性组合物至该患者。
[0037] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于通过施用免疫原性组合物在患者中诱导针对至少一种抗原的免疫应答(即，发动的免疫应答)以治疗人类疾病的方法，所述的方法包括以下步骤：
[0038] -测量该患者中sICAM-1的水平，和
[0039] -如果所述患者具有低水平的sICAM-1，施用所述的免疫原性组合物至该患者。
[0040] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于通过施用免疫原性组合物在患者中诱导免疫应答(即，发动的免疫应答)以治疗人类疾病的方法，其中所述发动的免疫应答是先天免疫应答，所述的方法包括以下步骤：
[0041] -测量该患者中sICAM-1的水平，和
[0042] -如果所述患者具有低水平的sICAM-1，施用所述的免疫原性组合物至该患者。
[0043] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于通过施用免疫原性组合物来预测受试者是否易于或不易于发展预防性或治疗性应答、优选地预防性或治疗性免疫应答的方法，所述的方法包括步骤：
[0044] 从受试者获得血样；和
[0045] 测量sICAM-1的水平，其中sICAM-1的低水平表示该受试者预测具有增加的发展预防性或治疗性应答、优选地预防性或治疗性免疫应答的易感性。
[0046] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于通过施用免疫原性组合物来选择易于发展预防性或治疗性应答、优选地预防性或治疗性免疫应答的受试者的方法，所述的方法包括步骤：
[0047] 从受试者获得血样；和
[0048] 测量sICAM-1的水平，其中sICAM-1的低水平表示该受试者具有增加的发展预防性或治疗性应答、优选地预防性或治疗性免疫应答的易感性。
[0049] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于预测受试者是否易于或不易于对包括施用免疫原性组合物的疗法积极应答的方法，所述的方法包括步骤：
[0050] 从受试者获得血样；和
[0051] 测量sICAM-1的水平，其中sICAM-1的低水平表示该受试者预测具有增加的发展预防性或治疗性应答、优选地预防性或治疗性免疫应答的易感性。
[0052] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于选择易于对包括施用免疫原性组合物的疗法积极应答的受试者的方法，所述的方法包括步骤：
[0053] 从受试者获得血样；和
[0054] 测量sICAM-1的水平，其中sICAM-1的低水平表示该受试者具有增加的发展预防性或治疗性应答、优选地预防性或治疗性免疫应答的易感性。
[0055] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于测试受试者是否会对包括施用免疫原性组合物的治疗方法治疗性应答的离体(ex-vivo)方法，其中该测试方法包括步骤：
[0056] 从受试者获得血样；和
[0057] 测量sICAM-1的水平，其中sICAM-1的低水平表示受试者会发展针对该免疫原性组合物的预防性或治疗性应答、优选地预防性或治疗性免疫应答。
[0058] 根据另一个实施方案，本发明涉及用于测试受试者是否会对通过施用免疫原性组合物而治疗癌症的方法治疗性应答的离体方法，其中该测试方法包括步骤：
[0059] 从受试者获得血样；和
[0060] 测量sICAM-1的水平，其中sICAM-1的低水平表示受试者会针对治疗癌症的方法治疗性应答。
[0061] 如整个申请书范围内通篇所用，术语“一”和“一个”以如下含义使用，它们意指“至少一个”、“至少头一个”、“一个或多个”或“多个”所提及的化合物或步骤，除非上下文清楚地另外申明。例如，术语“一个细胞”包括多个细胞，包括其混合物。更具体地，“至少一个”和“一个或多个”意指是1或大于1的数字，特别优选1、2或3。
[0062] 无论在本文中何处使用，术语“和/或”包括“和”、“或”和“由该术语连接的所述要素的全部或任一其他组合”的意思。
[0063] 如本文中所用的术语“约”或“大约”意指在20％范围内，优选10％范围内并且更优选5％范围内。
[0065] 术语“在由具有低水平sICAM-1的患者组成的患者群体中选出的患者”应当理解为意指已经如本文中公开那样测量其sICAM-1水平和具有本发明的sICAM-1低水平的患者。当受检患者的数目高于1时，所述患者们形成一个患者群体。
[0066] 根据具体实施方案，术语“患者会或是易于治疗性应答”意指在该患者中，施用本发明的免疫原性组合物后，免疫应答被发动(即，发动的免疫应答)。根据优选的实施方案，术语“患者会或是易于治疗性应答”意指该患者具有增加的存活率(见实施例部分)。
[0067] 根据本发明，通过比较本发明疗法与参比疗法，参比疗法即在没有基于sICAM-1水平选择患者的情况下的疗法，本发明疗法观察到存活率的增加。在优选的实施方案中，当治疗的患者在根据本发明治疗后5年、2年、12个月、8个月、6个月、1个月仍活着时，观察到存活率的增加。
[0068] 如本文中所用，术语“治疗”或“正在治疗”包括预防和/或治疗。因此，本发明的免疫原性组合或方法不限于治疗性应用并且可以在预防应用中使用。这由本文中的术语“产生预防性或治疗应答、优选地免疫应答”涵盖。“预防”不限于防止急性疾病(例如传染病)，它还包括防止这些感染的长期后果如硬化或癌症。
[0069] 活性化合物的“有效量”或“足够量”是足以实现有益或想要的结果(包括临床结果)的量。有效量可以以一次或多次施用进行施用。“治疗有效量”是实现有益临床结果的量，所述的有益临床结果包括，但不限于缓解一种或多种与肿瘤进展、病毒感染有关的症状以及防止疾病(例如防止癌症或感染的一种或多种症状)、刺激/诱导/增强受试者的免疫系统以改进现有病状或保护免遭或减少目前或未来伤害或感染(包括病毒性、细菌性、寄生虫感染)，例如，减少的肿瘤细胞增生或存活、受试者中减少的病原体复制或散播或可检测地减少的与病状相关的不利症状、延长患者存活。
[0070] 如本文中所用，术语“sICAM-1”或sCD54意指可溶性胞间黏附分子-1并且代表循环形式的ICAM-1。sICAM-1或sCD54可以互换地使用。
[0071] 根据本发明，可以通过本领域已知的任意方法确定sICAM-1的水平，例如，本发明的材料和方法可以随Luminex技术(Luminex Corporation，Austin，Tex.)或酶联免疫吸附测定法(ELISA，众多ELISA试剂盒是市售的，例如由CliniScience，Diaclone，Biosource市售)一起使用。
[0073] 根据本发明的一个实施方案，通过使用抗体确定sICAM-1的水平。
[0074] 根据本发明的一个具体实施方案，所述抗体是单克隆抗体。
[0075] 根据本发明的一个具体实施方案，所述的抗体是标记的，例如被荧光素、放射标记物、酶、生物素或通过设计旨在使得以所述抗体标记的sICAM-1可检测到的任何其他方法标记。这些技术被广泛使用并且是本领域已知的。
[0076] 抗CD54抗体、尤其单克隆抗体是商业上广泛可获得的。参见例如来自Anticorps-enligne.fr的抗体3H1547、抗体5540-P(Biocytex)。
[0077] 根据具体实施方案，术语“sICAM-1的低水平”意指低于约300ng/ml、优选地低于约250ng/ml、更优选地低于约224ng/ml并且甚至优选地低于约200ng/ml的水平。可以通TM过使用 系统(例如 xMAP 技术，R&D Systems)的多分析物血浆蛋
白特征记录分析法(Multi-analyte plasma protein profiling)测量所述的水平。
白特征记录分析法(Multi-analyte plasma protein profiling)测量所述的水平。
[0078] 如本文中所用，术语“免疫原性组合物”、“疫苗组合物”、“疫苗”或相似术语可以互换地使用并且意指一种药剂，其适用于刺激/诱导/增强受试者的免疫系统以改善现有病状或保护免遭或减少目前或未来的伤害或感染(包括病毒性、细菌性、寄生虫感染)，例如，减少的肿瘤细胞增生或存活、受试者中减少的病原体复制或散播或可检测地减少的与病状相关的不利症状、延长患者存活。所述的免疫原性组合物可以含有(i)至少一种被靶向抗原的全部或部分和/或(ii)至少一种重组载体，该重组载体在体内表达至少一个异源核苷酸序列的全部或部分、尤其是编码至少一种被靶向抗原的全部或部分的异源核苷酸序列的全部或部分。根据一个备选实施方案，本发明的免疫原性组合物包含单独的或与(i)和/或(ii)组合的(iii)至少一种免疫应答调节物。此类免疫应答调节物(IRMs)的实例包括CpG寡核苷酸(例如，见US 6,194,388；US2006094683；WO 2004039829)、脂多糖、聚肌胞苷酸复合物(Kadowaki等人，2001，J.Immunol.166，2291-2295)和已知诱导细胞因子从树状细胞和/或单核细胞/巨噬细胞产生的多肽和蛋白质。此类免疫应答调节物(IRMs)的其他实例是有机小分子如咪唑并喹啉胺类、咪唑并吡啶胺类、6，7稠合的环烷基咪唑并吡啶胺类、咪唑并萘啶胺类、 唑并喹啉胺类、噻唑并喹啉胺类和1，2-桥接的咪唑并喹啉胺类(见例如US 4,689,338；US 5,389,640；US 6,110,929；和US 6,331,539)。
[0079] 如本文中所用，术语“抗原”指能够作为免疫应答的靶的任意物质，包括复杂抗原(例如肿瘤细胞、病毒感染的细胞等)。抗原可以是例如由患者产生的细胞介导免疫应答和/或体液免疫应答的靶。术语“抗原”包括例如病毒抗原、肿瘤特异性或肿瘤相关抗原、细菌抗原、寄生虫抗原、变应原等的全部或部分。
[0080] 病毒抗原包括例如来自肝炎病毒A、B、C、D和E、HIV、疱疹病毒、巨细胞病毒、水痘带状疱疹病毒、乳头瘤病毒、EB病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒、柯萨奇病毒、小RNA病毒、轮状病毒、呼吸道合胞体病毒、痘病毒、鼻病毒、风疹病毒、乳多空病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒的抗原；已知病毒抗原的一些非限制性实例包括以下抗原：从HIV-1衍生的抗原如tat、nef、gp120或gp160、gp40、p24、gag、env、vif、vpr、vpu、rev或其部分和/或组合；从人疱疹病毒衍生的抗原如gH、gL、gM、gB、gC、gK、gE或gD或其部分和/或组合或立即早期蛋白如来自HSV1或HSV2的ICP27、ICP47、ICP4、ICP36；从巨细胞病毒衍生的抗原、尤其从人巨细胞病毒衍生的如gB或其衍生物；从E-B病毒衍生的抗原如gp350或其衍生物；从水痘带状疱疹病毒衍生的抗原如gp1、11、111和IE63；从肝炎病毒衍生的抗原如乙型肝炎、丙型肝炎或戊型肝炎病毒抗原(例如HCV的env蛋白E1或E2、核心蛋白、NS2、NS3、NS4a、NS4b、NS5a、NS5b、p7或其部分和/或组合)；从人乳头瘤病毒衍生的抗原(例如HPV6、11、
16、18、例如L1、L2、E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7或其部分和/或组合)；从其他病毒病原体如呼吸道合胞体病毒(例如F和G蛋白或其衍生物)、副流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、黄病毒(例如黄热病病毒、登革病毒、蜱传脑炎病毒、日本脑炎病毒)或流感病毒感染细胞衍生的抗原(例如HA、NP、NA或M蛋白或其部分和/或组合)；
16、18、例如L1、L2、E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7或其部分和/或组合)；从其他病毒病原体如呼吸道合胞体病毒(例如F和G蛋白或其衍生物)、副流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、黄病毒(例如黄热病病毒、登革病毒、蜱传脑炎病毒、日本脑炎病毒)或流感病毒感染细胞衍生的抗原(例如HA、NP、NA或M蛋白或其部分和/或组合)；
[0081] 肿瘤特异性或相关抗原包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。此类癌的更具体实例包括乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肠胃癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝癌、结直肠癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌瘤和多种类型的头颈癌、肾癌、恶性黑素瘤、喉癌、前列腺癌。癌抗原是可以潜在地明显刺激肿瘤特异性免疫应答的抗原。这些抗原中的某些由正常细胞编码，虽然不是必需表达。这些抗原可以表征为正常细胞中通常沉默(即不表达)的那些抗原、仅以低水平或在某些分化期表达的那些抗原和时序性表达的那些抗原如胚抗原和胎儿抗原。其他癌抗原由突变的细胞基因编码，如癌基因(例如，活化的ras癌基因)、阻抑基因(例如，突变的p53)、因内部缺失或染色体易位产生的融合蛋白。另外，其他癌抗原可以由病毒基因(如RNA和DNA肿瘤病毒上携带的那些病毒基因)编码。肿瘤特异性或相关抗原的一些非限制性实例包括MART-1/Melan-A、gp100、二肽基肽酶IV(DPPIV)、腺苷脱氨酶结合蛋白(ADAbp)、亲环蛋白b、结直肠相关抗原(CRC)-C017-1A/GA733、癌胚抗原(CEA)和其免疫原性表位CAP-1和CAP-2、etv6、aml1、前列腺特异性抗原(PSA)和其免疫原性表位PSA-1、PSA-2和PSA-3、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、T细胞受体/CD3-ζ链、肿瘤抗原MAGE-家族(例如，MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A11、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-C 1、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)、肿瘤抗原GAGE-家族(例如，GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE-9)、BAGE、RAGE、LAGE-1、NAG、GnT-V、MUM-1、CDK4、酪氨酸酶、p53、MUC家族(例如MUC-1)、HER2/neu、p21ras、RCAS1、甲胎蛋白、E-钙黏着蛋白、α-联蛋白、β-联蛋白和γ-联蛋白、p120ctn、gp100.sup.Pmel117、PRAME、NY-ESO-1、cdc27、腺瘤性结肠息肉蛋白(APC)、胞衬蛋白、连接蛋白37、Ig-独特型、p15、gp75、GM2和GD2神经节苷脂、病毒产物如人乳头瘤病毒蛋白、肿瘤抗原Smad家族、lmp-1、P1A、EBV-编码的核抗原(EBNA)-1、脑糖原磷酸化酶、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-1和CT-7、和c-erbB-2；
[0082] 细菌性抗原包括例如来自造成TB和麻风的分枝杆菌(Mycobacteria)、肺炎球菌、需氧性革兰氏阴性杆菌、支原体、葡萄球菌感染、链球菌感染、沙门氏菌(salmonellae)、衣原体、奈瑟氏菌的抗原；
[0083] 其他抗原包括例如来自疟疾、利什曼病、锥虫病、弓形体病、血吸虫病、丝虫病的抗原。
[0084] 变应原指可以在易感受试者中诱导变态或哮喘反应的物质。变应原的名录是众多的并且可以包括花粉、昆虫毒液、动物毛皮尘、真菌孢子和药物(例如青霉素)。天然的动物和植物变应原的实例包括，但不限于以下属特有的蛋白质：犬属(Canine)(家犬(Canis familiaris))；尘螨属(Dermatophagoides)(例如尘螨(Dermatophagoides farinae))；猫 属 (Felis)(家 猫(Felis domesticus))；豚 草 属(Ambrosia)( 豚 草 (Ambrosia artemiisfolia))；黑麦草属(Lolium)(例如宿根黑麦草(Lolium perenne)或多花黑麦草(Loliummultiflorum)；柳杉属(Cryptomeria)(日本柳杉(Cryptomeria japonica))；链格孢属(Alternaria)(链格孢(Alternaria alternata)；Alder；桤木属(Alnus)(欧洲桤木(Alnus gultinoasa))；桦木属(Betula)(垂枝桦(Betula verrucosa))；栎属(Quercus)(白栎(Quercus alba))；木犀榄属(Olea)(油橄榄(Olea europa))；蒿属(Artemisia)(艾蒿(Artemisia vulgaris))；车前草属(Plantago)(例如长叶车前草(Plantago
lanceolata))；墙草属(Parietaria)(例如墙草(Parietariaofficinalis)或欧蓍草
(Parietaria judaica))；小蠊属(Blattella)(例如德国小蠊(Blattella germanica)；
Apis(例如Apis multiflorum)；柏木属(Cupressus)(例如地中海柏木(Cupressus
sempervirens)、绿干柏(Cupressus arizonica)和大果柏木(Cupressus macrocarpa))；
刺柏属(Juniperus)(例如Juniperussabinoides、铅笔柏(Juniperus virginiana)、普通柏(Juniperus communis)和阿希刺柏(Juniperus ashei))；侧柏属(Thuya)(例如侧柏(Thuyaorientalis))；扁柏属(Chamaecyparis)(例如日本扁柏(Chamaecyparisobtusa))；
大蠊属(Periplaneta)(例如美洲大蠊(Periplaneta americana))；冰草属(Agropyron)(例如匍匐冰草(Agropyron repens))；黑麦属(Secale)(例如黑麦(Secale cereale))；
小麦属(Triticum)(例如普通小麦(Triticumaestivum))；鸭茅属(Dactylis)(例如鸭茅(Dactylis glomerata))；羊茅属(Festuca)(例如牛尾草(Festuca elatior))；早熟禾属(Poa)(例如草地早熟禾(Poa pratensis)或加拿大早熟禾(Poa compressa))；燕麦属(Avena)(例如燕麦(Avena sativa))；绒毛草属(Holcus)(例如绒毛草(Holcus
lanatus))；黄花茅属(Anthoxanthum)(例如黄花茅(Anthoxanthum odoratum))；燕麦草属(Arrhenatherum)(例如燕麦草(Arrhenatherum elatius))；剪股颖属(Agrostis)(例如小糠草(Agrostis alba))；梯牧草属(Phleum)(例如梯牧草(Phleum pratense))；虉草属(Phalaris)(例如虉草(Phalaris arundinacea))；雀稗草(Paspalum)(例如百喜草(Paspalum notatum))；蜀黍属(Sorghum)(例如石茅高粱(Sorghum halepensis))；和雀麦属(Bromus)(例如无芒雀麦(Bromus inermis))。
lanceolata))；墙草属(Parietaria)(例如墙草(Parietariaofficinalis)或欧蓍草
(Parietaria judaica))；小蠊属(Blattella)(例如德国小蠊(Blattella germanica)；
Apis(例如Apis multiflorum)；柏木属(Cupressus)(例如地中海柏木(Cupressus
sempervirens)、绿干柏(Cupressus arizonica)和大果柏木(Cupressus macrocarpa))；
刺柏属(Juniperus)(例如Juniperussabinoides、铅笔柏(Juniperus virginiana)、普通柏(Juniperus communis)和阿希刺柏(Juniperus ashei))；侧柏属(Thuya)(例如侧柏(Thuyaorientalis))；扁柏属(Chamaecyparis)(例如日本扁柏(Chamaecyparisobtusa))；
大蠊属(Periplaneta)(例如美洲大蠊(Periplaneta americana))；冰草属(Agropyron)(例如匍匐冰草(Agropyron repens))；黑麦属(Secale)(例如黑麦(Secale cereale))；
小麦属(Triticum)(例如普通小麦(Triticumaestivum))；鸭茅属(Dactylis)(例如鸭茅(Dactylis glomerata))；羊茅属(Festuca)(例如牛尾草(Festuca elatior))；早熟禾属(Poa)(例如草地早熟禾(Poa pratensis)或加拿大早熟禾(Poa compressa))；燕麦属(Avena)(例如燕麦(Avena sativa))；绒毛草属(Holcus)(例如绒毛草(Holcus
lanatus))；黄花茅属(Anthoxanthum)(例如黄花茅(Anthoxanthum odoratum))；燕麦草属(Arrhenatherum)(例如燕麦草(Arrhenatherum elatius))；剪股颖属(Agrostis)(例如小糠草(Agrostis alba))；梯牧草属(Phleum)(例如梯牧草(Phleum pratense))；虉草属(Phalaris)(例如虉草(Phalaris arundinacea))；雀稗草(Paspalum)(例如百喜草(Paspalum notatum))；蜀黍属(Sorghum)(例如石茅高粱(Sorghum halepensis))；和雀麦属(Bromus)(例如无芒雀麦(Bromus inermis))。
[0085] 根据一个具体实施方案，所述抗原由异源核苷酸序列编码并且由重组载体在体内表达。
[0086] 在一个特别优选的实施方案中，本发明的异源核苷酸序列编码一种或多种以下抗原的全部或部分：HBV-PreS1 PreS2和表面env蛋白、核心蛋白和polHIV-gp120 gp40、gp160、p24、gag、pol、env、vif、vpr、vpu、tat、rev、nef；HPV-E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7、E8、L1、L2(见例如WO 90/10459、WO 98/04705、WO 99/03885)；HCV env蛋白E1或E2、核心蛋白、NS2、NS3、NS4a、NS4b、NS5a、NS5b、p7(见例如WO2004111082、WO2005051420)；Muc-1(见例如US 5,861,381；US6,054,438；WO98/04727；WO98/37095)。
[0087] 根据本发明的变例，免疫原性组合物含有至少两种抗原或编码至少两种抗原的异源核苷酸序列或编码至少两种抗原的至少两种异源核苷酸序列，或其任意组合。
[0088] 根据另一个具体实施方案，所述的本发明异源核苷酸序列编码HPV抗原的全部或部分，其中在由HPV的E6早期编码区、HPV的E7早期编码区及其衍生物或组合组成的组中选出所述的HPV抗原。
[0089] 在由HPV E6多肽、HPV E7多肽或HPV E6多肽及HPV E7多肽二者组成的组中选出由本发明重组载体编码的HPV抗原。本发明包括了与p53的结合作用被改变或至少明显减少的任意HPV E6多肽的用途和/或与Rb的结合作用被改变或至少明显减少的任意HPV E7多肽的用途(Munger等人，1989，EMBO J.8，4099-4105；Crook等人，1991，Cell 67，547-556；Heck等人，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89，4442-4446；Phelps等人，1992，J.Virol.66，2148-2427)。适用于本发明目的的非致癌性HPV-16E6变体缺失了从大约第
118位置至大约第122位置(+1代表天然HPV-16 E6多肽的第一甲硫氨酸残基)存在的
一个或多个氨基酸残基，特别优选完全缺失第118至第122位残基(CPEEK)。适用于本发明目的的非致癌性HPV-16E7变体缺失了从大约第21位置至大约第26位置(+1代表天然HPV-16 E7多肽的第一氨基酸残基)存在的一个或多个氨基酸残基，特别优选完全缺失第
21至第26位残基(DLYCYE)。根据一个优选的实施方案，进一步修饰用于本发明中的一种或多种HPV-16早期多肽，从而改善I类MHC和/或II类MHC呈递作用和/或刺激抗HPV
免疫。HPV E6和E7多肽是核蛋白并且先前已经显示膜呈递作用允许改善它们的治疗效力(见例如WO99/03885)。因而，可以建议的是修饰至少一种HPV早期多肽，从而被锚定至细胞膜上。可以通过在HPV早期多肽中掺入膜锚定序列并且如果该天然多肽缺少分泌序列，则掺入分泌序列(即，信号肽)来轻易实现膜锚定作用。膜锚定序列和分泌序列是本领域已知的。简而言之，分泌序列存在于膜呈递或分泌的多肽的氨基端并且启动它们进入内质网(ER)。它们通常包含15至35个实质上疏水的氨基酸，所述氨基酸随后由位于ER的特异性内肽酶去除以产生成熟的多肽。膜锚定序列通常是本质上高度疏水的并且起到将多肽锚定于细胞膜中的作用(见例如Branden和Tooze，1991，在Introduction to Protein Structure中，第202-214页，NY Garland)。
118位置至大约第122位置(+1代表天然HPV-16 E6多肽的第一甲硫氨酸残基)存在的
一个或多个氨基酸残基，特别优选完全缺失第118至第122位残基(CPEEK)。适用于本发明目的的非致癌性HPV-16E7变体缺失了从大约第21位置至大约第26位置(+1代表天然HPV-16 E7多肽的第一氨基酸残基)存在的一个或多个氨基酸残基，特别优选完全缺失第
21至第26位残基(DLYCYE)。根据一个优选的实施方案，进一步修饰用于本发明中的一种或多种HPV-16早期多肽，从而改善I类MHC和/或II类MHC呈递作用和/或刺激抗HPV
免疫。HPV E6和E7多肽是核蛋白并且先前已经显示膜呈递作用允许改善它们的治疗效力(见例如WO99/03885)。因而，可以建议的是修饰至少一种HPV早期多肽，从而被锚定至细胞膜上。可以通过在HPV早期多肽中掺入膜锚定序列并且如果该天然多肽缺少分泌序列，则掺入分泌序列(即，信号肽)来轻易实现膜锚定作用。膜锚定序列和分泌序列是本领域已知的。简而言之，分泌序列存在于膜呈递或分泌的多肽的氨基端并且启动它们进入内质网(ER)。它们通常包含15至35个实质上疏水的氨基酸，所述氨基酸随后由位于ER的特异性内肽酶去除以产生成熟的多肽。膜锚定序列通常是本质上高度疏水的并且起到将多肽锚定于细胞膜中的作用(见例如Branden和Tooze，1991，在Introduction to Protein Structure中，第202-214页，NY Garland)。
[0090] 可以在本发明上下文中使用的膜锚定序列和分泌序列的选择项是繁多的。它们可以从包含该序列任意的膜锚定或分泌多肽(例如细胞多肽或病毒多肽)如狂犬病病毒糖蛋白、HIV病毒包膜糖蛋白或麻疹病毒F蛋白获得，或者可以是合成的。在根据本发明使用的每一早期HPV-16多肽中插入的膜锚定序列和/或分泌序列可以具有共同或不同起源。插入分泌序列的优选位点是用于翻译起始的密码子的氨基端下游并且插入膜锚定序列的优选位点是羧基端，例如紧邻终止密码子的上游。
[0091] 用于本发明中的HPV E6多肽优选地通过插入麻疹病毒F蛋白的分泌信号和膜锚定信号进行修饰。任选地或组合地，用于本发明中的HPV E7多肽优选地通过插入狂犬病病毒糖蛋白的分泌信号和膜锚定信号进行修饰。
[0092] 也可以通过使用一种或多种编码免疫增效多肽的核酸改善该重组载体的治疗效力。例如，可能有利的是将HPV早期多肽与多肽如肌钙网蛋白(Cheng等人，2001，J.Clin.Invest.108，669-678)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)热休克蛋白70(HSP70)(Chen等人，2000，Cancer Res.60，1035-1042)、遍在蛋白(Rodriguez等人，1997，J.Virol.71，8497-8503)或细菌毒素的转运结构域如铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa) 外 毒 素 A(ETA(dIII))(Hung 等 人，2001Cancer Res.61，
3698-3703)连接。
3698-3703)连接。
[0093] 根据另一个实施方案，本发明的重组载体包含了编码一种或多种如上文定义的早期多肽并且更具体地编码HPV-16和/或HPV-18早期E6和/或E7多肽的核酸。
[0094] 根据另一个特定且优选的实施方案，所述的本发明异源核苷酸序列编码MUC 1抗原或其衍生物的全部或部分。
[0095] 根据另一个特定实施方案，所述的本发明异源核苷酸序列编码一种或多种以下抗原的全部或部分：HCV env蛋白E1或E2、核心蛋白、NS2、NS3、NS4a、NS4b、NS5a、NS5b、p7或其衍生物。根据另一个特定实施方案，所述的本发明异源核苷酸序列编码一种或多种融合蛋白，其中构型就以下意义而言不是天然的：所述NS多肽至少之一以不同于天然构型的顺序出现。因而，如果融合蛋白包含NS3多肽、NS4A多肽和NS5B多肽，则天然构型将是NS3-NS4A-NS5B，其中NS3位于N端并且NS5B位于C端。相反，非天然构型可以是NS5B-NS3-NS4A、NS5B-NS4A-NS3、NS4A-NS3-NS5B、NS4A-NS5B-NS3或NS3-NS5B-NS4A。尤其，本发明的融合蛋白包含以下多肽中至少之一：
[0096] 直接或通过接头与NS3多肽N端融合的NS4A多肽；
[0097] 直接或通过接头与NS5B多肽N端融合的NS3多肽；
[0098] 直接或通过接头与NS5B多肽N端融合的NS4B多肽；
[0099] 直接或通过接头与NS3多肽N端融合的NS4A多肽，其中所述的NS3多肽直接或通过接头与NS4B多肽的N端融合；和/或
[0100] 直接或通过接头与NS4B多肽N端融合的NS3多肽，其中所述的NS4B多肽直接或通过接头与NS5B多肽的N端融合。
[0101] 在本发明融合蛋白的此类特定部分中，每种NS多肽可以独立地是天然或修饰的。例如，NS4A-NS3部分中所包含的NS4A多肽可以是天然的，而NS3多肽包含至少一种下文所述的修饰。
[0102] 根据需要，可以优化用于本发明中的核酸分子以使被靶向抗原(例如HPV早期多肽)在特定宿主细胞或生物(例如人类宿主细胞或生物)中高水平表达。一般而言，通过将一个或多个与哺乳动物宿主细胞中不频繁使用的密码子相对应的“天然”(例如HPV)密码子替换为一个或多个更频繁使用的编码相同氨基酸的密码子进行密码子优化。这可以通过常规诱变或通过化学合成技术(例如产生合成性核酸)实现。无需替换与不频繁使用的密码子相对应的全部天然密码子，因为甚至可以用部分替换实现增加的表达。更进一步地，可以对严格遵循优化的密码子使用进行某些偏离以容许导入限制性位点。
[0103] 如本文中所用，术语“重组载体”指病毒载体以及非病毒载体，包括染色体外载体(例如附加体)、多拷贝载体和整合型载体(即，用于整合入宿主染色体)。在本发明上下文中特别重要的是用于基因治疗中的载体(即，其是能够递送核酸至宿主生物)以及用于多种表达系统中表达的表达载体。合适的非病毒载体包括质粒如pREP4、pCEP4(Invitrogene)、pCI(Promega)、pCDM8(Seed，1987，Nature 329，840)、pVAX 和pgWiz(Gene TherapySystem Inc；Himoudi等人，2002，J.Virol.76，12735-12746)。合适的病毒载体可以从多种不同的病毒(例如逆转录病毒、腺病毒、AAV、痘病毒、疱疹病毒、麻疹病毒和泡沫病毒等)衍生。如本文中所用，术语“病毒载体”包括载体DNA/RNA以及从其产生的病毒粒子。病毒载体可以是有复制能力的或可以在遗传上失能从而是复制缺陷的或复制受损的。如本文中所用的术语“有复制能力”包括选择复制型和条件复制型病毒载体，其中所述病毒载体被工程化以在特定宿主细胞(例如肿瘤细胞)中更好或选择性地复制。
[0104] 在一个方面，用于本发明中的重组载体是重组腺病毒载体(对于综述，见“《用于基因治疗的腺病毒载体》(Adenoviral vectors for gene therapy)”2002，D.Curiel和J.Douglas编著，Academic Press)。它可以从多种人或动物来源衍生，并且可以使用从腺病毒血清型1直至51的任意血清型。特别优选的是人腺病毒2(Ad2)、5(Ad5)、6(Ad6)、11(Ad11)、24(Ad24)和35(Ad35)。此类腺病毒从美国典型培养物保藏中心(American Type CultureCollection(ATCC，Rockville，Md.))可获得并且已经是描述其序列、组织结构和产生方法的众多出版物的主题，从而允许技术人员应用它们(见例如US 6,133,028；
US 6,110,735；WO 02/40665；WO 00/50573；EP 1016711；Vogels等人，2003，J.Virol.77，
8263-8271)。
US 6,110,735；WO 02/40665；WO 00/50573；EP 1016711；Vogels等人，2003，J.Virol.77，
8263-8271)。
[0105] 用于本发明中的腺病毒载体可以是有复制能力的。有复制能力的腺病毒载体的众多实例是本领域技术人员轻易可获得的(见例如Hernandez-Alcoceba等人，2000，Human Gene Ther.11，2009-2024；Nemunaitis等人，2001，Gene Ther.8，746-759；Alemany等人，2000，NatureBiotechnology 18，723-727)。例如，它们可以通过E1A CR2结构域中缺失(见例如WO00/24408)和/或通过用组织、肿瘤或细胞状态特异性启动子替换天然E1和/或E4启动子从野生型腺病毒基因组中工程化而来(见例如US5,998,205、WO99/25860、US
5,698,443、WO00/46355、WO00/15820和WO01/36650)。
5,698,443、WO00/46355、WO00/15820和WO01/36650)。
[0106] 备选地，用于本发明中的腺病毒载体是复制缺陷的(见例如WO94/28152；Lusky等人，1998，J.Virol 72，2022-2032)。优选的复制缺陷型腺病毒载体是E1缺陷的(例如见US6,136,594和US 6,013,638)，其中E1缺失从大约第459位置延伸至第3328位置或从大约第459位置延伸至第3510位置(通过参考在GeneBank中以登录号M73260并在Chroboczek等人，1992，Virol.186，280-285中披露的人腺病毒5型的序列)。可以通过缺失腺病毒基因组的额外部分(非必需E3区或其他必需E2、E4区域的全部或部分)进一步改善克隆容量。可以如Chartier等人(1996，J.Virol.70，4805-4810)中所述通过同源重组进行核酸在腺病毒载体的任意位置中的插入。例如，可以插入编码HPV-16E6多肽的核酸替代E1区并且可以插入编码HPV-16E7多肽的核酸替代E3区，或反之亦然。
[0107] 在另一个和优选的方面，用于本发明中的载体是痘病毒载体(例如见Cox等人在“人类基因治疗中的病毒(Viruses in Human Gene Therapy)”中，J.M.Hos编著，Carolina Academic Press)。根据另一个优选的实施方案，该痘病毒载体在痘苗病毒组成的组中选出，合适的痘苗病毒包括但不限于哥本哈根株(Goebel等人，1990，Virol.179，247-266和517-563；Johnson等人，1993，Virol.196，381-401)、Wyeth株及其衍生的高度致弱的减毒病毒，包括MVA)(对于综述，见Mayr等人，1975，Infection 3，6-16)及其衍生物(如MVA痘苗株575(ECACC V00120707-US 6,913,752)、NYVAC(见WO 92/15672-Tartaglia等人，
1992，Virology，188，217-232)。MVA基因组完整序列的测定和与哥本哈根(Copenhagen)VV基因组的比较已经允许精确鉴定在MVA基因组中出现的7个缺失(I至VII)(Antoine等人，1998，Virology 244，365-396)，它们中的任一者均可以用来插入编码抗原的核酸。该载体也可以从痘病毒科(Poxviridae)的任何其他成员，特别从禽痘病毒(例如，TROVAC，见Paoletti等人，1995，Dev.Biol.Stand.84，159-163)；金丝雀痘病毒(例如，ALVAC，WO
95/27780，Paoletti等人，1995，Dev.Biol.Stand.84，159-163)；鸽痘病毒；猪痘病毒等获得。通过举例方式，本领域技术人员可以参考(通过引用方式并入的)WO 9215672，其描述了产生基于痘病毒的能够表达此类异源核苷酸序列、尤其编码抗原的核苷酸序列的表达载体。
1992，Virology，188，217-232)。MVA基因组完整序列的测定和与哥本哈根(Copenhagen)VV基因组的比较已经允许精确鉴定在MVA基因组中出现的7个缺失(I至VII)(Antoine等人，1998，Virology 244，365-396)，它们中的任一者均可以用来插入编码抗原的核酸。该载体也可以从痘病毒科(Poxviridae)的任何其他成员，特别从禽痘病毒(例如，TROVAC，见Paoletti等人，1995，Dev.Biol.Stand.84，159-163)；金丝雀痘病毒(例如，ALVAC，WO
95/27780，Paoletti等人，1995，Dev.Biol.Stand.84，159-163)；鸽痘病毒；猪痘病毒等获得。通过举例方式，本领域技术人员可以参考(通过引用方式并入的)WO 9215672，其描述了产生基于痘病毒的能够表达此类异源核苷酸序列、尤其编码抗原的核苷酸序列的表达载体。
[0108] 在本领域技术人员可获得的众多文献中描述了用于插入所述核酸和相关调节元件的基础技术，其中所述的相关调节元件是在痘病毒基因组中表达所需要的(Paul等人，2002，Cancer gene Ther.9，470-477；Piccini等人，1987，Methods of Enzymology 153，
545-563；US 4,769,330；US 4,772,848；US 4,603,112；US 5,100,587和US 5,179,993)。
通常，通过在病毒基因组和携带待插入核酸的质粒中均存在的重叠序列(即，目的插入位点)之间的同源重组实施。
545-563；US 4,769,330；US 4,772,848；US 4,603,112；US 5,100,587和US 5,179,993)。
通常，通过在病毒基因组和携带待插入核酸的质粒中均存在的重叠序列(即，目的插入位点)之间的同源重组实施。
[0109] 编码本发明抗原的核酸优选地插入痘病毒基因组的非必需基因座中，旨在重组痘病毒仍保持活力和感染性。非必需区是非编码的基因间区或其失活或缺失不明显损害病毒生长、复制或感染的任意基因。也可以构思插入必需病毒基因座中，条件是在病毒粒子的产生期间反式地提供缺损的功能，例如通过使用携带与痘病毒基因组中那些缺失序列相对应的互补序列的辅助细胞系。
[0110] 当使用哥本哈根痘苗病毒时，编码抗原的核酸优选地插入胸苷激酶基因(tk)中 (Hruby 等 人，1983，Proc.Natl.Acad.Sci USA 80，3411-3415；Weir 等 人，1983，J.Virol.46，530-537)。然而，其他的插入位点也是适宜的，例如在血凝素基因(Guo等人，1989，J.Virol.63，4189-4198)中、在K1L基因座中、在u基因中(Zhou等人，1990，J.Gen.Virol.71，2185-2190)或在痘苗病毒基因组的左末端，在此处多种自发的或工程化的缺失已经在文献中报道(Altenburger等人，1989，Archives Virol.105，15-27；Moss等人
1981，J.Virol.40，387-395；Panicali等人，1981，J.Virol.37，1000-1010；Perkus等人，
1989，J.Virol.63，3829-3836；Perkus等人，1990，Virol.179，276-286；Perkus等人，1991，Virol.180，406-410)。
1981，J.Virol.40，387-395；Panicali等人，1981，J.Virol.37，1000-1010；Perkus等人，
1989，J.Virol.63，3829-3836；Perkus等人，1990，Virol.179，276-286；Perkus等人，1991，Virol.180，406-410)。
[0111] 当使用MVA时，可以在鉴定的缺失I至VII任一者中以及在D4R基因座中插入编码抗原的核酸，但是优选在缺失II或III中的插入(Meyer等人，1991，J.Gen.Virol.72，1031-1038；Sutter等人，1994，Vaccine 12，1032-1040)。
[0112] 当使用禽痘病毒时，虽然可以考虑在胸苷激酶基因内部的插入，但是编码抗原的核酸优选地导入位于ORF7和9之间的基因间区中(例如见EP314569和US 5,180,675)。
[0113] 根据一个特定实施方案，该重组载体是重组质粒DNA或重组病毒载体。
[0114] 根据另一个特定实施方案，所述重组病毒载体是重组腺病毒载体。
[0115] 根据另一个特定实施方案，所述重组病毒载体是重组痘苗载体。
[0116] 根据一个优选的实施方案，所述重组痘苗载体是重组MVA载体。
[0117] 优选地，用于本发明中的编码抗原的核酸处在适于其在宿主细胞或生物中表达的形式，这意指编码抗原的核酸被置于对其在宿主细胞或生物中表达必需的一个或多个调节序列的控制下。如本文中所用，术语“调节序列”指允许、有助于或调节核酸在给定宿主细胞中表达(包括该核酸或其衍生物之一(即，mRNA)的复制、重复、转录、剪接、翻译、稳定性和/或运输至此宿主细胞)的任意序列。本领域技术人员会理解，调节序列的选择可以取决于诸多因素，如宿主细胞、载体和想要的表达水平。编码抗原的核酸与指导该抗原核酸在真核细胞内部表达的基因表达序列有效连接。基因表达序列是任一调节性核苷酸序列，如启动子序列或启动子-增强子组合，其促进与它有效连接的抗原核酸的有效转录和翻译。例如，基因表达序列可以是哺乳动物或病毒启动子，如组成型或诱导型启动子。组成型哺乳动物启动子包括，但不限于以下基因：次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)、腺苷脱氨酶、丙酮酸激酶的启动子、b-肌动蛋白启动子和其他组成型启动子。在真核细胞中组成型地发挥作用的示例性病毒启动子包括，例如，来自巨细胞病毒(CMV)、猴病毒(例如，SV40)、乳头瘤病毒、腺病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、罗氏肉瘤病毒、巨细胞病毒、莫洛尼氏白血病病毒和其他逆转录病毒的长末端重复序列(LTR)的启动子和单纯疱疹病毒胸苷激酶启动子。其他组成型启动子是本领域普通技术人员已知的。用作本发明基因表达序列的启动子也包括诱导型启动子。诱导型启动子在诱导剂存在下表达。例如，金属硫蛋白启动子在某些金属离子存在下被诱导以促进转录和翻译。其他诱导型启动子是本领域普通技术人员已知的。通常，基因表达序列应当根据需要包括分别参与转录起始和翻译起始的5′非转录和5′非翻译序列，如TATA框、加帽序列、CAAT序列等。尤其地，此类5′非转录序列会包括启动子区，所述启动子区包括用于转录性控制有效连接的抗原核酸的启动子序列。根据需要，基因表达序列任选地包括增强子序列或上游激活蛋白序列。用于痘病毒载体中的优选启动子(见下文)不限制地包括痘苗病毒启动子7.5K、H5R、TK、p28、p11和K1L、早期与晚期痘病毒启动子之间的嵌合启动子以及合成性启动子如在Chakrabarti等人(1997，Biotechniques23，1094-1097)、Hammond等 人(1997，J.VirologicalMethods 66，135-138)和Kumar 与Boyle(1990，Virology 179，151-158)中描述的那些合成启动子。
[0118] 启动子是特别重要的，并且本发明包括使用指导核酸在许多类型宿主细胞中表达的组成型启动子和指导仅在某些宿主细胞中或应答于特定事件或外源因素时(例如，因温度、营养添加物、激素或其他配体)表达的那些启动子。在文献中广泛地描述了合适的启动子，并且可以援引更具体的病毒启动子如RSV、SV40、CMV和MLP启动子。用于痘病毒载体中的优选启动子不限制地包括痘苗病毒启动子7.5K、H5R、TK、p28、p11和K1L、早期与晚期痘病毒启动子之间的嵌合启动子以及合成性启动子，如在Chakrabarti等人(1997，Biotechniques 23，1094-1097)、Hammond等人(1997，J.Virological Methods 66，135-138)和Kumar与Boyle(1990，Virology 179，151-158)中描述的那些启动子。
[0119] 本领域技术人员会认识到，控制本发明核酸分子的表达的调节元件可以还包括用于在宿主细胞或生物中正确起始、调节和/或终止转录(例如，聚腺苷酸转录中止序列)、mRNA运输(例如，核定位信号序列)、加工(例如，剪接信号)和稳定性(例如，内含子和非编码性5′和3′序列)、翻译(例如，肽信号、前肽、三重体前导序列、核糖体结合位点、SD序列等)的额外元件。
[0120] 备选地，用于本发明中的重组载体可以还包含编码至少一种细胞因子的至少一种核酸。合适的细胞因子不限制地包括白细胞介素(例如IL-2、IL-7、IL-15、IL-18、IL-21)和干扰素(例如IFNγ、INFα)，特别优选白细胞介素IL-2。当本发明的重组疫苗包含了表达细胞因子的核酸时，该核酸可以由编码一种或多种抗原的重组载体或由具有相同或不同起源的独立重组载体携带。
[0121] 根据一个优选的实施方案，用于本发明中的重组载体编码MUC1抗原的全部或部分和上文所列的至少一种细胞因子并且优选地编码白细胞介素，尤其IL-2。
[0122] 可以通过常规方法产生包含上文所述重组病毒载体的感染性病毒粒子。示例性方法包括步骤：
[0123] a.将该病毒载体导入合适的细胞系，
[0124] b.在合适条件下培养所述的细胞系，以允许所述感染性病毒粒子的产生，
[0125] c.从所述细胞系的培养物回收产生的感染性病毒粒子，和
[0126] d.任选地纯化所述的回收的感染性病毒粒子。
[0127] 适用于增殖腺病毒载体的细胞例如是293细胞、PERC6细胞、HER96细胞或如WO94/28152、WO 97/00326、US 6,127,175中公开的细胞。
[0129] 可以从培养上清液或从裂解后的细胞回收感染性病毒粒子(例如通过化学手段、冻/融、渗透压休克、机械冲击、超声破碎等)。病毒粒子可以通过连续轮次的蚀斑纯化进行分离并且随后使用现有技术(层析方法、在氯化铯或蔗糖梯度上超速离心)予以纯化。
[0130] 根据需要，可以在选出的患者中与一个或多个常规治疗方式(例如放疗、化疗和/或外科手术)联合的情况下实施根据本发明(即，通过施用包含至少一种抗原的免疫原性组合物)针对人类疾病来治疗患者的方法或用途。多种治疗手段的使用为选出的患者提供了更广阔的介入法。在一个实施方案中，根据本发明针对人类疾病来治疗患者的方法或用途可以先于或后续于外科手术介入。在另一个实施方案中，它可以先于或后续于放疗法(例如，γ放疗法)。本领域技术人员可以轻易地配置可以使用的适宜放疗方案和参数(例如，见Perez和Brady，1992，放射肿瘤学原理与实践(Principles andpractice of radiation oncology).第2版JB Lippincott Co；使用适宜的改进和调整，如本领域技术人员轻易地显而易见)。又在另一个实施方案中，本发明的方法或用途与使用一种或多种药物(例如常规用于治疗或预防病毒感染、病毒相关性病理状况、癌症等的药物)的化疗法有关。
[0131] 本发明因而涉及用于改善癌症患者治疗的方法，所述的癌症患者正在经历采用化疗药的化疗治疗，所述方法包括以下步骤：
[0132] 在由具有低水平sICAM-1的患者组成的患者群体中选出患者，
[0133] 施用本发明的免疫原性组合物和化疗药至所述选出的患者。
[0134] 根据一个实施方案，所述化疗药的施用先于所述免疫原性组合物的施用。
[0135] 根据另一个实施方案，所述化疗药的施用后于所述免疫原性组合物的施用。
[0136] 根据另一个实施方案，所述化疗药的施用与所述免疫原性组合物的施用同时进行。
[0137] 本发明还涉及改善细胞毒性药物或放疗法的细胞毒性有效性的方法，该方法包括用本发明的免疫原性组合物协助治疗(co-treating)在具有低水平sICAM-1的患者组成的患者群体中选出的患者。
[0138] 优选的化疗药或细胞毒性药物包括例如长春新碱、顺铂、氮鸟嘌呤、依托泊苷、阿霉素、阿柔比星、米托蒽醌、丝裂霉素、紫杉醇、吉西他滨、泰索帝、地塞米松、Ara-C、甲泼尼松(Methylpredrdsolone)、氨甲蝶呤、博来霉素、甲基GAG、卡铂、5-FU(5-氟尿嘧啶)、TMMABTHERA (利妥昔单抗)、放疗法、组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂和5-氮-2′-脱氧胞苷(地西他滨)。
[0139] 示例性放射性化疗药包括了含有α辐射体如砹-211、铋-212、铋-213、铅-212、镭-223、锕-225和钍-227、β辐射体如氚、锶-90、铯-137、碳-11、氮-13、氧-15、氟-18、铁-52、钴-55、钴-60、铜-61、铜-62、铜-64、锌-62、锌-63、砷-70、砷-71、砷-74、溴-76、溴-79、铷-82、钇-86、锆-89、铟-110、碘-120、碘-124、碘-129、碘-131、碘-125、氙-122、锝-94m、锝-94、锝-99m和锝-99或γ辐射体如钴-60、铯-137和锝-99m的化合物。示TM例性化疗药也包括抗体，如阿仑珠单抗、达昔单抗、利妥昔单抗(MABTHERA )、曲妥珠单抗TM
(HERCEPTIN )、吉妥珠单抗、替依莫单抗、依决洛单抗、托西莫单抗、CeaVac、依帕珠单抗、米妥莫单抗、贝伐单抗、西妥西单抗、依决洛单抗、林妥珠单抗、MDX-210、IGN-101、MDX-010、MAb、AMEABX-EGF、EMD 72000、阿泊珠单抗、拉贝珠单抗、ior-tl、MDX-220、MRA、H-11 scFv、奥伐伏单抗、huJ591 MAb、BZL Visilizumab、TriGem、TriAb、R3、MT-201、G-250、非缀合的、ACA-125、Onyvax-105、CDP-860、BrevaRex MAb AR54、IMC-ICl1、GlioMAb-H、ING-I、抗LCG MAbs、MT-103、KSB-303、Therex、KW-2871、抗HMI.24、抗PTHrP、2C4抗体、SGN-30、TRAIL-RI MAb CAT、前列腺癌抗体、H22xKi-4、ABX-MAl、Imuteran和Monopharm-C。
(HERCEPTIN )、吉妥珠单抗、替依莫单抗、依决洛单抗、托西莫单抗、CeaVac、依帕珠单抗、米妥莫单抗、贝伐单抗、西妥西单抗、依决洛单抗、林妥珠单抗、MDX-210、IGN-101、MDX-010、MAb、AMEABX-EGF、EMD 72000、阿泊珠单抗、拉贝珠单抗、ior-tl、MDX-220、MRA、H-11 scFv、奥伐伏单抗、huJ591 MAb、BZL Visilizumab、TriGem、TriAb、R3、MT-201、G-250、非缀合的、ACA-125、Onyvax-105、CDP-860、BrevaRex MAb AR54、IMC-ICl1、GlioMAb-H、ING-I、抗LCG MAbs、MT-103、KSB-303、Therex、KW-2871、抗HMI.24、抗PTHrP、2C4抗体、SGN-30、TRAIL-RI MAb CAT、前列腺癌抗体、H22xKi-4、ABX-MAl、Imuteran和Monopharm-C。
[0140] 示例性化疗药也包括阿西维辛；阿柔比星；盐酸阿考达唑；阿克罗宁；阿多来新；阿霉素；阿地白介素；六甲蜜胺(Altretarnine)；安波霉素；醋酸阿美蒽醌；Arnmoglutethimide；安吖啶；阿那曲唑；安曲霉素(Anthramycin)；天冬酰胺酶；曲林霉素；阿扎胞苷；阿扎替派；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；盐酸比生群；二甲磺酸双奈法德；比折来新；硫酸博来霉素；布喹那钠；溴匹立明；白消安；放线菌素C；卡鲁睾酮；喜树碱；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫司汀；盐酸卡柔比星；卡折来新；西地芬戈；苯丁酸氮芥；西罗霉素；顺铂；克拉屈滨；康普瑞汀A-4；甲磺酸克立那托(Grisnatol Mesylate)；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；DACA(N-[2-(二甲基-氨基)乙基]吖啶-4-甲酰胺)；放线菌素D；盐酸柔红霉素；道诺霉素；地西他滨；右奥马铂；地扎瓜宁；甲磺酸地扎瓜宁；地吖醌；多西他赛；海兔毒素；多柔比星；盐酸多柔比星；屈洛昔芬；柠檬酸屈洛昔芬；丙酸屈他雄酮；达佐霉素；依达曲沙；盐酸依氟鸟氨酸；玫瑰树碱；依沙芦星；恩洛铂；
恩普安酯；依匹哌啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸依索比星；雌莫司汀；雌莫司汀磷酸钠；依他硝唑；乙碘油I131；依托泊苷；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺；盐酸法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；氟尿苷；磷酸氟达拉滨；氟尿嘧啶；5-FdUMP；氟西他滨；磷喹酮；氟司曲星钠；吉西他滨；盐酸吉西他滨；Gold Au 198；高喜树碱；羟脲；盐酸伊达比星；异环磷酰胺；
依莫福新；干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素B-Ia；干扰素γ-Ib；异丙铂；盐酸伊立替康；醋酸兰瑞肽；来曲唑；醋酸亮丙立德；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马索罗酚；美坦生；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；醋酸美仑孕酮；美法仓；美诺立尔；巯基嘌呤；氨甲蝶呤；氨甲蝶呤钠；氯苯氨啶；美妥替派；米丁度胺；米托卡星；丝裂红素；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；米托司培；米托坦；盐酸米托蒽醌；霉酚酸；诺考达唑；诺加霉素；奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；陪门冬酶；培利霉素；奈莫司汀；磷酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；盐酸吡罗蒽醌；普卡霉素；普洛美坦；
卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼莫司汀；盐酸丙卡巴肼；嘌呤霉素；盐酸嘌呤霉素；吡唑呋林；利索新；利索新D；利波腺苷；罗谷亚胺；沙芬戈；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；磷乙酰天冬氨酸钠；司帕霉素；盐酸锗螺胺；螺莫司汀；螺铂；链黑霉素；链佐星；氯化铯Sr 89；磺氯苯脲；他利霉素；紫杉烷；紫杉烷类化合物；替可加兰钠；替加氟；盐酸替洛蒽醌；替莫泊芬；
替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；硫咪嘌呤；硫鸟嘌呤；塞替派；二盐酸诺拉曲塞；噻唑呋林；
替拉扎明；拓优得；TOP53；盐酸拓扑替康；柠檬酸托瑞米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨；
曲美沙特；葡醛酸曲美沙特；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；尿嘧啶氮芥；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；长春碱；磷酸长春碱；长春新碱；磷酸长春新碱；长春地辛；磷酸长春地辛；磷酸长春匹定；磷酸长春甘酯；磷酸长春罗辛；酒石酸长春瑞滨；磷酸长春罗定；长春立定磷酸；
伏氯唑；折尼铂；净司他汀；盐酸佐柔比星；2-氯脱氧腺苷；2′脱氧间型霉素；9-氨基喜树碱；雷替曲塞；N-炔丙基-5，8-二脱氮叶酸；2-氯-2′-阿拉伯糖-氟-2′-脱氧腺苷；
2-氯-2′-脱氧腺苷；茴香霉素；曲古柳菌素A；hPRL-G129R；CEP-751；利诺胺；硫芥；氮芥(二氯甲基二乙胺)；环磷酰胺；美法仓；苯丁酸氮芥；异环磷酰胺；白消安；N-甲基-N亚硝基脲(MNU)；N，N′-二(2-氯乙基)-N-亚硝基脲(BCNU)；N-(2-氯乙基)-N′-环己基-N-亚硝基脲(CCNU)；N-(2-氯乙基)-N′-(反-4-甲基环己基-N-亚硝基脲(MeCCNU)；
N-(2-氯乙基)-N′-(二乙基)乙基膦酸酯-N-亚硝基脲(福莫司汀)；链佐星；达卡巴
嗪(diacarbazine)(DTIC)；米托唑胺；替莫唑胺；塞替派(tbiotepa)；丝裂霉素C；AZQ；阿多来新；顺铂；卡铂；奥马铂；奥沙利铂；Cl-973；DWA 2114R；JM216；JM335；双(铂)；拓优得；阿扎胞苷；阿糖胞苷；吉西他滨；6-巯基嘌呤；6-硫鸟嘌呤；次黄嘌呤；替尼泊苷9-氨基喜树碱；拓扑替康；CPT-Il；多柔比星；道诺霉素；表柔比星；依达比星(darubicin)；
米托蒽醌；洛索蒽醌；D放线菌素(放线菌素D)；安吖啶；吡唑啉吖啶；全反式视黄醇；
14-羟-反-视黄醇；全反式维甲酸；N-(4-羟苯基)维甲酰胺；13-顺维甲酸；3-甲基
TTNEB；9-顺维甲酸；氟达拉滨(2-F-阿糖-AMP)；或2-氯脱氧腺苷(2-Cda)。
恩普安酯；依匹哌啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸依索比星；雌莫司汀；雌莫司汀磷酸钠；依他硝唑；乙碘油I131；依托泊苷；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺；盐酸法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；氟尿苷；磷酸氟达拉滨；氟尿嘧啶；5-FdUMP；氟西他滨；磷喹酮；氟司曲星钠；吉西他滨；盐酸吉西他滨；Gold Au 198；高喜树碱；羟脲；盐酸伊达比星；异环磷酰胺；
依莫福新；干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素B-Ia；干扰素γ-Ib；异丙铂；盐酸伊立替康；醋酸兰瑞肽；来曲唑；醋酸亮丙立德；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马索罗酚；美坦生；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；醋酸美仑孕酮；美法仓；美诺立尔；巯基嘌呤；氨甲蝶呤；氨甲蝶呤钠；氯苯氨啶；美妥替派；米丁度胺；米托卡星；丝裂红素；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；米托司培；米托坦；盐酸米托蒽醌；霉酚酸；诺考达唑；诺加霉素；奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；陪门冬酶；培利霉素；奈莫司汀；磷酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；盐酸吡罗蒽醌；普卡霉素；普洛美坦；
卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼莫司汀；盐酸丙卡巴肼；嘌呤霉素；盐酸嘌呤霉素；吡唑呋林；利索新；利索新D；利波腺苷；罗谷亚胺；沙芬戈；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；磷乙酰天冬氨酸钠；司帕霉素；盐酸锗螺胺；螺莫司汀；螺铂；链黑霉素；链佐星；氯化铯Sr 89；磺氯苯脲；他利霉素；紫杉烷；紫杉烷类化合物；替可加兰钠；替加氟；盐酸替洛蒽醌；替莫泊芬；
替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；硫咪嘌呤；硫鸟嘌呤；塞替派；二盐酸诺拉曲塞；噻唑呋林；
替拉扎明；拓优得；TOP53；盐酸拓扑替康；柠檬酸托瑞米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨；
曲美沙特；葡醛酸曲美沙特；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；尿嘧啶氮芥；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；长春碱；磷酸长春碱；长春新碱；磷酸长春新碱；长春地辛；磷酸长春地辛；磷酸长春匹定；磷酸长春甘酯；磷酸长春罗辛；酒石酸长春瑞滨；磷酸长春罗定；长春立定磷酸；
伏氯唑；折尼铂；净司他汀；盐酸佐柔比星；2-氯脱氧腺苷；2′脱氧间型霉素；9-氨基喜树碱；雷替曲塞；N-炔丙基-5，8-二脱氮叶酸；2-氯-2′-阿拉伯糖-氟-2′-脱氧腺苷；
2-氯-2′-脱氧腺苷；茴香霉素；曲古柳菌素A；hPRL-G129R；CEP-751；利诺胺；硫芥；氮芥(二氯甲基二乙胺)；环磷酰胺；美法仓；苯丁酸氮芥；异环磷酰胺；白消安；N-甲基-N亚硝基脲(MNU)；N，N′-二(2-氯乙基)-N-亚硝基脲(BCNU)；N-(2-氯乙基)-N′-环己基-N-亚硝基脲(CCNU)；N-(2-氯乙基)-N′-(反-4-甲基环己基-N-亚硝基脲(MeCCNU)；
N-(2-氯乙基)-N′-(二乙基)乙基膦酸酯-N-亚硝基脲(福莫司汀)；链佐星；达卡巴
嗪(diacarbazine)(DTIC)；米托唑胺；替莫唑胺；塞替派(tbiotepa)；丝裂霉素C；AZQ；阿多来新；顺铂；卡铂；奥马铂；奥沙利铂；Cl-973；DWA 2114R；JM216；JM335；双(铂)；拓优得；阿扎胞苷；阿糖胞苷；吉西他滨；6-巯基嘌呤；6-硫鸟嘌呤；次黄嘌呤；替尼泊苷9-氨基喜树碱；拓扑替康；CPT-Il；多柔比星；道诺霉素；表柔比星；依达比星(darubicin)；
米托蒽醌；洛索蒽醌；D放线菌素(放线菌素D)；安吖啶；吡唑啉吖啶；全反式视黄醇；
14-羟-反-视黄醇；全反式维甲酸；N-(4-羟苯基)维甲酰胺；13-顺维甲酸；3-甲基
TTNEB；9-顺维甲酸；氟达拉滨(2-F-阿糖-AMP)；或2-氯脱氧腺苷(2-Cda)。
[0141] 其他化疗药包括，但不限于20-表-1，25二羟维生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龙；阿柔比星；酰基富烯；腺环戊醇；阿多来新；阿地白介素；ALL-TK拮抗物；六甲蜜胺；氨莫司汀；amidox；安磷汀；氨基乙酰丙酸；安柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑；穿心莲内酯；血管生成抑制剂；拮抗物D；拮抗物G；安雷利克斯(antarelix)；抗背部化形态发生蛋白-1；前列腺癌抗雄激素药；抗雌激素药；抗瘤酮；反义寡核苷酸；氨基乙酸阿非迪霉素；凋亡基因调节物；凋亡调节蛋白；脱嘌呤核酸；阿糖-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨酶；
asulacrine；阿他美坦；阿莫司汀；axinastatin 1；axinastatin 2；axinastatin 3；阿扎司琼；阿扎毒素；重氮酪氨酸；巴丁卡DI衍生物；巴览醇(balanol)；巴马司他；BCR/ABL拮抗物；苯并二氢卟吩(benzochlorins)；苯甲酰星孢菌素(benzoylstaurosporine)；β内酰胺衍生物；β-alethine；倍他克拉霉素B(betaclamycin B)；桦木酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺；比生群；双吖丙啶基精胺；双奈法德；bistratene A；比折来新；breflate；博来霉素A2；博来霉素B2；溴匹立明；布度钛；丁硫氨酸-亚砜亚胺(buthionine sulfoximine)；骨化三醇；卡弗他丁C(calphostin C)；喜树碱衍生物(例如，10-羟-喜树碱)；canarypox HL-2；卡培他滨；甲酰胺-氨基-三唑；羧胺三唑；CaRestM3；CARN 700；软骨衍生抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)；栗精胺；天蚕素B；西曲瑞克；二氢卟吩类；
氯喹 啉磺胺；西卡前列素；顺-卟啉；克拉屈滨；氯米芬类似物；克霉唑；碰撞霉素A(collismycin A)；碰撞霉素B(collismycinB)；康普瑞汀A4；康普瑞汀类似物；康进宁(conagenin)；crambescidin 816；克立那托；隐藻素8；隐藻素A衍生物；库拉素A；环戊蒽醌；cycloplatam；希培霉素(cypemycin)；阿糖胞苷十八烷基磷酸盐；溶细胞因子；
cytostatin；达昔单抗；地西他滨；脱氢膜海鞘素B；2′脱氧考福霉素(DCF)；地格瑞林；
右异环磷酰胺；右雷佐生；右维拉帕米；地吖醌；膜海鞘素B；didox；二乙基去甲精胺；二氢-5-氮杂胞苷；二氢紫杉醇(dihydrotaxol，9-)；二氧黄溶霉素(dioxamycin)；二苯基螺莫司汀；淅皮海绵内酯；二十二烷醇；多拉司琼；去氧氟尿苷；屈洛昔芬；屈大麻酚；多卡霉素SA(duocarmycin SA)；依布硒；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄香烯；乙嘧替氟(ernitefur)；表柔比星；埃坡霉素(A，R＝H；B R＝Me)；epithilones；
依立雄胺；雌莫司汀类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗物；依他硝唑；依托泊苷；依托泊苷4′-磷酸酯(凡毕复(etopofos))；依西美坦；法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；非格司亭；非那雄胺；黄酮吡多；氟卓司汀；fluasterone；氟达拉滨；fluorodaunorunicin hydrochloride；福酚美克(forfenimex)；福美坦；氟司曲星；福莫司汀；钆替沙林；硝酸镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；1，7-庚二醇双氨基磺酸酯(hepsulfam)；调蛋白；六亚甲基双乙酰胺；高三尖杉酯碱(HHT)；金丝桃素；伊班膦酸；伊达比星；艾多昔芬；依决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；咪唑并吖啶酮；咪喹莫德；免疫刺激肽；胰岛素样生长因子-1受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白细胞介素；
碘苄胍；碘多柔比星(iododoxorubicin)；4-依波米醇；伊立替康；伊罗普拉；伊索拉定；
isobengazole；异高软海绵素B；伊他司琼；jasplakinolide；海蛞蝓提取物F；三醋酸层状素-N；兰瑞肽；雷那霉素(leinamycin)；来格司亭；硫酸香菇多糖；Ieptolstatin；来曲唑；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙立德+雌激素黄体酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；
利阿唑；线性多胺类似物；亲脂性二糖肽；亲脂性铂化合物； 7；洛铂；蚯
蚓磷脂(lombricine)；洛美曲索；氯尼达明；洛索蒽醌；洛伐他汀；洛索立滨；勒托替康；镥替沙林；利索茶碱(lysofylline)；裂解肽；美坦生；抑甘露糖苷酶素A(mannostatin A)；
马立马司他；马索罗酚；乳腺丝抑蛋白；基质溶解α抑制剂(matrilysiαinhibitors)；
基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔；merbarone；美替瑞林；甲硫氨酸酶；甲氧氯普胺；IvHF抑制剂；米非司酮(ifepristone)；米替福新；米立司亭；错配双链RNA；光辉霉素；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米托萘胺；丝裂原毒素成纤维细胞生长因子-皂草素(mitotoxin fibroblast growth factor-saporin)；米托蒽醌；莫法罗汀；莫拉司亭；人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体；单磷酸类脂A+分枝杆菌(myobacteriurn)细胞壁骨架；莫哌达醇；多药耐药性基因抑制剂；基于多肿瘤抑制剂1的疗法；氮芥抗癌药；mycaperoxide B；分枝杆菌细胞壁提取物；多足酮(myriaporone)；N-乙酰地那林；N-取代的苯甲酰胺类；那法瑞林；nagrestip；纳洛酮+喷他佐辛；napavin；萘萜二醇(naphterpin)；那托司亭；奈达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；中性内肽酶；尼鲁米特；二左霉素(nisamycin)；氧化一氮节物；氮氧化物(nitroxide)抗氧化剂；nitruUyn；06-苄基鸟嘌呤；奥曲肽；冲蒽酮(okicenone)；寡核苷酸；奥那司酮；昂丹司琼；昂丹司琼；oracin；口服细胞因子诱导剂；
奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂；奥沙霉素(oxaunomycin)；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；帕劳胺(palauamine)；棕榈酰利索新；帕米膦酸；人参炔三醇；帕诺米芬；parabactin；帕折普汀；陪门冬酶；培得星；戊聚硫钠；喷司他丁；pentrozole；全氟溴烷；培磷酰胺；紫苏子醇；吩嗪霉素(phenazinomycin)；乙酸苯酯；磷酸酶抑制剂；溶血性链球菌制剂；盐酸毛果芸香碱；吡柔比星；吡曲克星；普拉色汀A(placetin A)；普拉色汀B(placetin B)；纤溶酶原激活物抑制剂；铂络合物；铂化合物；铂-三胺络合物；鬼臼毒素；卟吩姆钠；泊非霉素；丙基双吖啶酮；前列腺素J2；蛋白酶体抑制剂；基于蛋白A的免疫调节物；蛋白激酶C抑制剂；微藻蛋白激酶C抑制剂；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂；
红紫素；吡唑啉吖啶；吡哆化(pyridoxylated)血红蛋白聚氧乙烯缀合物；raf拮抗物；雷替曲塞；雷莫司琼；ras法尼基蛋白转移酶抑制剂；ras抑制剂；ras-GAP抑制剂；去甲基化瑞替普汀；依替膦酸铼Re 186；利索新；核酶；RII维甲酰胺；罗谷亚胺；roMtukine；罗莫肽；罗喹美克；鲁比津酮(rubiginone B1)；ruboxyl；沙芬戈；沙因托品(saintopin)；
SarCNU；肉芝软珊瑚A(sarcophytolA)；沙莫司亭；Sdi 1模拟物；司莫司汀；老化衍生抑制剂1；有义寡核苷酸；信号转导抑制剂；信号转导调节物；单链抗原结合蛋白；西佐喃；索布佐生；硼卡钠；苯乙酸钠；solverol；生长调节素结合蛋白；索纳明；膦门冬酸；斯匹卡霉素D(spicamycin D)；螺莫司汀；脾脏五肽(splenopentin)；海绵素1；角鲨胺；干细胞抑制剂；干细胞分裂抑制剂；斯替匹酰胺(stipiamide)；基质溶素抑制剂；sulfinosine；效力超常血管活性肠肽拮抗物；suradista；苏拉明；苦马豆素；合成糖胺聚糖；他莫司汀；甲碘化他莫昔芬；牛碘莫司汀；他扎罗汀；替可加兰钠；替加氟；碲吡 盐(tellurapyrylium)；
端粒酶抑制剂；替莫泊芬；替莫唑胺；替尼泊苷；十氧化四氯；四氮明(tetrazomine)；唐松草碱(thaliblastine)；沙立度胺；噻可拉林；血小板生成素；血小板生成素模拟物；胸腺法新；胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南；胸腺刺激激素；乙基锡初紫红素(tin ethyl etiopurpurin)；替拉扎明；二氯二茂钛；拓扑替康；topsentin；托瑞米芬；全能干细胞因子；翻译抑制剂；维甲酸；三乙酰尿苷；曲西立滨；曲美沙特；曲普瑞林；托烷司琼；妥罗雄脲；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸磷酸化抑制剂；UBC抑制剂；乌苯美司；泌尿生殖窦衍生的生长抑制因子；尿激酶受体拮抗物；伐普肽；variolin B；红细胞基因治疗载体系统；维拉雷琐；藜芦明；verdins；维替泊芬；长春瑞滨；vinxaltine；抗整联蛋白αVβ3人源化单抗(vitaxin)；伏氯唑；扎诺特隆；折尼铂；亚苄维C；和净司他汀斯酯。
asulacrine；阿他美坦；阿莫司汀；axinastatin 1；axinastatin 2；axinastatin 3；阿扎司琼；阿扎毒素；重氮酪氨酸；巴丁卡DI衍生物；巴览醇(balanol)；巴马司他；BCR/ABL拮抗物；苯并二氢卟吩(benzochlorins)；苯甲酰星孢菌素(benzoylstaurosporine)；β内酰胺衍生物；β-alethine；倍他克拉霉素B(betaclamycin B)；桦木酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺；比生群；双吖丙啶基精胺；双奈法德；bistratene A；比折来新；breflate；博来霉素A2；博来霉素B2；溴匹立明；布度钛；丁硫氨酸-亚砜亚胺(buthionine sulfoximine)；骨化三醇；卡弗他丁C(calphostin C)；喜树碱衍生物(例如，10-羟-喜树碱)；canarypox HL-2；卡培他滨；甲酰胺-氨基-三唑；羧胺三唑；CaRestM3；CARN 700；软骨衍生抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)；栗精胺；天蚕素B；西曲瑞克；二氢卟吩类；
氯喹 啉磺胺；西卡前列素；顺-卟啉；克拉屈滨；氯米芬类似物；克霉唑；碰撞霉素A(collismycin A)；碰撞霉素B(collismycinB)；康普瑞汀A4；康普瑞汀类似物；康进宁(conagenin)；crambescidin 816；克立那托；隐藻素8；隐藻素A衍生物；库拉素A；环戊蒽醌；cycloplatam；希培霉素(cypemycin)；阿糖胞苷十八烷基磷酸盐；溶细胞因子；
cytostatin；达昔单抗；地西他滨；脱氢膜海鞘素B；2′脱氧考福霉素(DCF)；地格瑞林；
右异环磷酰胺；右雷佐生；右维拉帕米；地吖醌；膜海鞘素B；didox；二乙基去甲精胺；二氢-5-氮杂胞苷；二氢紫杉醇(dihydrotaxol，9-)；二氧黄溶霉素(dioxamycin)；二苯基螺莫司汀；淅皮海绵内酯；二十二烷醇；多拉司琼；去氧氟尿苷；屈洛昔芬；屈大麻酚；多卡霉素SA(duocarmycin SA)；依布硒；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄香烯；乙嘧替氟(ernitefur)；表柔比星；埃坡霉素(A，R＝H；B R＝Me)；epithilones；
依立雄胺；雌莫司汀类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗物；依他硝唑；依托泊苷；依托泊苷4′-磷酸酯(凡毕复(etopofos))；依西美坦；法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；非格司亭；非那雄胺；黄酮吡多；氟卓司汀；fluasterone；氟达拉滨；fluorodaunorunicin hydrochloride；福酚美克(forfenimex)；福美坦；氟司曲星；福莫司汀；钆替沙林；硝酸镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；1，7-庚二醇双氨基磺酸酯(hepsulfam)；调蛋白；六亚甲基双乙酰胺；高三尖杉酯碱(HHT)；金丝桃素；伊班膦酸；伊达比星；艾多昔芬；依决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；咪唑并吖啶酮；咪喹莫德；免疫刺激肽；胰岛素样生长因子-1受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白细胞介素；
碘苄胍；碘多柔比星(iododoxorubicin)；4-依波米醇；伊立替康；伊罗普拉；伊索拉定；
isobengazole；异高软海绵素B；伊他司琼；jasplakinolide；海蛞蝓提取物F；三醋酸层状素-N；兰瑞肽；雷那霉素(leinamycin)；来格司亭；硫酸香菇多糖；Ieptolstatin；来曲唑；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙立德+雌激素黄体酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；
利阿唑；线性多胺类似物；亲脂性二糖肽；亲脂性铂化合物； 7；洛铂；蚯
蚓磷脂(lombricine)；洛美曲索；氯尼达明；洛索蒽醌；洛伐他汀；洛索立滨；勒托替康；镥替沙林；利索茶碱(lysofylline)；裂解肽；美坦生；抑甘露糖苷酶素A(mannostatin A)；
马立马司他；马索罗酚；乳腺丝抑蛋白；基质溶解α抑制剂(matrilysiαinhibitors)；
基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔；merbarone；美替瑞林；甲硫氨酸酶；甲氧氯普胺；IvHF抑制剂；米非司酮(ifepristone)；米替福新；米立司亭；错配双链RNA；光辉霉素；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米托萘胺；丝裂原毒素成纤维细胞生长因子-皂草素(mitotoxin fibroblast growth factor-saporin)；米托蒽醌；莫法罗汀；莫拉司亭；人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体；单磷酸类脂A+分枝杆菌(myobacteriurn)细胞壁骨架；莫哌达醇；多药耐药性基因抑制剂；基于多肿瘤抑制剂1的疗法；氮芥抗癌药；mycaperoxide B；分枝杆菌细胞壁提取物；多足酮(myriaporone)；N-乙酰地那林；N-取代的苯甲酰胺类；那法瑞林；nagrestip；纳洛酮+喷他佐辛；napavin；萘萜二醇(naphterpin)；那托司亭；奈达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；中性内肽酶；尼鲁米特；二左霉素(nisamycin)；氧化一氮节物；氮氧化物(nitroxide)抗氧化剂；nitruUyn；06-苄基鸟嘌呤；奥曲肽；冲蒽酮(okicenone)；寡核苷酸；奥那司酮；昂丹司琼；昂丹司琼；oracin；口服细胞因子诱导剂；
奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂；奥沙霉素(oxaunomycin)；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；帕劳胺(palauamine)；棕榈酰利索新；帕米膦酸；人参炔三醇；帕诺米芬；parabactin；帕折普汀；陪门冬酶；培得星；戊聚硫钠；喷司他丁；pentrozole；全氟溴烷；培磷酰胺；紫苏子醇；吩嗪霉素(phenazinomycin)；乙酸苯酯；磷酸酶抑制剂；溶血性链球菌制剂；盐酸毛果芸香碱；吡柔比星；吡曲克星；普拉色汀A(placetin A)；普拉色汀B(placetin B)；纤溶酶原激活物抑制剂；铂络合物；铂化合物；铂-三胺络合物；鬼臼毒素；卟吩姆钠；泊非霉素；丙基双吖啶酮；前列腺素J2；蛋白酶体抑制剂；基于蛋白A的免疫调节物；蛋白激酶C抑制剂；微藻蛋白激酶C抑制剂；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂；
红紫素；吡唑啉吖啶；吡哆化(pyridoxylated)血红蛋白聚氧乙烯缀合物；raf拮抗物；雷替曲塞；雷莫司琼；ras法尼基蛋白转移酶抑制剂；ras抑制剂；ras-GAP抑制剂；去甲基化瑞替普汀；依替膦酸铼Re 186；利索新；核酶；RII维甲酰胺；罗谷亚胺；roMtukine；罗莫肽；罗喹美克；鲁比津酮(rubiginone B1)；ruboxyl；沙芬戈；沙因托品(saintopin)；
SarCNU；肉芝软珊瑚A(sarcophytolA)；沙莫司亭；Sdi 1模拟物；司莫司汀；老化衍生抑制剂1；有义寡核苷酸；信号转导抑制剂；信号转导调节物；单链抗原结合蛋白；西佐喃；索布佐生；硼卡钠；苯乙酸钠；solverol；生长调节素结合蛋白；索纳明；膦门冬酸；斯匹卡霉素D(spicamycin D)；螺莫司汀；脾脏五肽(splenopentin)；海绵素1；角鲨胺；干细胞抑制剂；干细胞分裂抑制剂；斯替匹酰胺(stipiamide)；基质溶素抑制剂；sulfinosine；效力超常血管活性肠肽拮抗物；suradista；苏拉明；苦马豆素；合成糖胺聚糖；他莫司汀；甲碘化他莫昔芬；牛碘莫司汀；他扎罗汀；替可加兰钠；替加氟；碲吡 盐(tellurapyrylium)；
端粒酶抑制剂；替莫泊芬；替莫唑胺；替尼泊苷；十氧化四氯；四氮明(tetrazomine)；唐松草碱(thaliblastine)；沙立度胺；噻可拉林；血小板生成素；血小板生成素模拟物；胸腺法新；胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南；胸腺刺激激素；乙基锡初紫红素(tin ethyl etiopurpurin)；替拉扎明；二氯二茂钛；拓扑替康；topsentin；托瑞米芬；全能干细胞因子；翻译抑制剂；维甲酸；三乙酰尿苷；曲西立滨；曲美沙特；曲普瑞林；托烷司琼；妥罗雄脲；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸磷酸化抑制剂；UBC抑制剂；乌苯美司；泌尿生殖窦衍生的生长抑制因子；尿激酶受体拮抗物；伐普肽；variolin B；红细胞基因治疗载体系统；维拉雷琐；藜芦明；verdins；维替泊芬；长春瑞滨；vinxaltine；抗整联蛋白αVβ3人源化单抗(vitaxin)；伏氯唑；扎诺特隆；折尼铂；亚苄维C；和净司他汀斯酯。
[0142] 在另一个实施方案中，本发明的方法或用途根据包括依次施用一种或多种引发组合物和一种或多种加强组合物的引发加强治疗方式实施。一般地，引发组合物和加强组合物使用了包含或编码至少一种共同抗原结构域的不同运载体。起初施用引发组合物至宿主生物并且在1日至12个月变化的时间之后顺序施用加强组合物至相同的宿主生物。本发明的方法可以包括引发组合物的1至10个依次施用，后续加强组合物的1至10个依次施用。希望的是，注射间隔期是1周至6个月。另外，可以在相同部位或在备选部位通过相同的途径或通过不同的施用途径施用引发组合物和加强组合物。
[0143] 根据一个具体实施方案，本发明涉及如上所述的方法，其中所述的人类疾病是癌症。
[0144] 根据一个具体实施方案，所述癌症例如是乳腺癌、结肠癌、肾癌、肾癌、直肠癌、肺癌、头颈癌、肾癌、恶性黑素瘤、喉癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、血液癌、胃癌、骨髓瘤。
[0145] 根据一个优选的实施方案，所述癌症是非小细胞肺癌(NSCLC)。
[0146] 根据一个具体实施方案，本发明涉及如上所述的方法，其中所述的人类疾病是传染病。
[0147] 根据一个优选的实施方案，所述的传染病是病毒诱导的疾病，如由HIV、HCV、HBV、HPV等诱导的疾病。
[0148] 在又一个实施方案中，提供了免疫原性组合物用于制造在特定患者群体中针对人类疾病治疗患者的药物的用途，所述的免疫原性组合物包含被靶向抗原的全部或部分，其中所述群体的患者具有低水平的sICAM-1。
[0149] 在又一个实施方案中，提供了免疫原性组合物用于制造在患者中发动免疫应答(即，发动的免疫应答)以治疗特定患者群体中人类疾病的药物的用途，其中所述群体的患者具有低水平的sICAM-1。
[0150] 在另一个实施方案中，提供了免疫原性组合物用于制造在患者中发动针对至少一种抗原的免疫应答(即，发动的免疫应答)以治疗特定患者群体中人类疾病的药物的用途，其中所述群体的患者具有低水平的sICAM-1。
[0151] 在另一个实施方案中，提供了免疫原性组合物用于制造在患者中发动针对被靶向抗原的免疫应答(即，发动的免疫应答)以治疗特定患者群体中人类疾病的药物的用途，其中所述群体的患者具有低水平的sICAM-1。
[0152] 在另一个实施方案中，提供了免疫原性组合物用于制造在患者中发动免疫应答(即，发动的免疫应答)以治疗特定患者群体中人类疾病的药物的用途，其中所述群体的患者具有低水平的sICAM-1并且其中所述发动的免疫应答是先天免疫应答。
[0153] 根据一个特定实施方案，所述的在所述患者群体中“发动的免疫应答”针对肿瘤特异性或肿瘤相关的抗原和/或病毒抗原。根据一个实施方案，所述的在所述患者群体中“发动的免疫应答”针对不同的抗原。根据一个特定实施方案，所述的在所述患者群体中“发动的免疫应答”针对MUC1抗原。根据另一个特定实施方案，所述的在所述患者群体中“发动的免疫应答”是T细胞免疫应答，并且优选地是CD8+(细胞毒性T淋巴细胞)免疫应答。根据另一个特定实施方案，所述的在所述患者群体中“发动的免疫应答”是非特异性免疫应答。根据另一个特定实施方案，所述的在所述患者群体中“发动的免疫应答”是刺激先天免疫应答。
[0154] 使用本领域中标准的多种测定法，可以体外或体内地评价在动物或人类生物中施用时诱导或刺激免疫应答的能力。对于可用于评价免疫应答启动和活化的技术的一般描述，例如见Coligan等人(1992和1994年，CurrentProtocols in Immunology；J Wiley & Sons Inc编著，National Institute ofHealth)。对细胞免疫的度量可以通过测量由活化效应细胞(包括从CD4+和CD8+T细胞衍生的那些效应细胞)分泌的细胞因子谱(例如通过ELIspot对产生IL-10或IFNγ的细胞定量)、通过确定免疫效应细胞的激活状态(例如
3
通过经典[H]胸苷摄取的T细胞增殖测定法)、通过分析致敏受试者中的抗原特异性T淋巴细胞(例如在细胞毒性测定法中的肽特异性裂解)或通过借助荧光MHC和/或肽多聚体(例如四聚体)检测抗原特异性T细胞来进行。可以通过抗体结合作用和/或结合竞争测定刺激体液应答的能力(见例如Harlow，1989，Antibodies，Cold Spring Harbor Press)。
本发明的方法也可以进一步在用合适的肿瘤诱导剂(例如表达MUC1的TC1细胞)攻击的动物模型中验证以确定抗肿瘤活性，从而反映抗-抗原免疫应答的诱导或增强。
3
通过经典[H]胸苷摄取的T细胞增殖测定法)、通过分析致敏受试者中的抗原特异性T淋巴细胞(例如在细胞毒性测定法中的肽特异性裂解)或通过借助荧光MHC和/或肽多聚体(例如四聚体)检测抗原特异性T细胞来进行。可以通过抗体结合作用和/或结合竞争测定刺激体液应答的能力(见例如Harlow，1989，Antibodies，Cold Spring Harbor Press)。
本发明的方法也可以进一步在用合适的肿瘤诱导剂(例如表达MUC1的TC1细胞)攻击的动物模型中验证以确定抗肿瘤活性，从而反映抗-抗原免疫应答的诱导或增强。
[0155] 因而，本发明还涉及用于通过施用免疫原性组合物延长针对人类疾病进行治疗的患者存活的方法，所述的方法包括以下步骤：
[0156] 在由具有低水平sICAM-1的患者组成的患者群体中选出患者，
[0157] 施用该免疫原性组合物至所述的选出患者。
[0158] 根据另一个实施方案，本发明涉及sICAM-1作为生物标志物用于通过施用免疫原性组合物来预测受试者是否易于或不易于发展预防性或治疗性应答、优选地预防性或治疗性免疫应答的用途。
[0159] 更具体地，本发明涉及sICAM-1水平作为生物标志物用于通过施用免疫原性组合物来预测受试者是否易于或不易于发展预防性或治疗性应答、优选地预防性或治疗性免疫应答的用途，其中sICAM-1的低水平表示该受试者预测具有增加的发展预防性或治疗性应答、优选地预防性或治疗性免疫应答的易感性。
[0160] 换句话说，本发明涉及sICAM-1水平作为生物标志物用于预测受试者在施用免疫原性组合物后是否易于或不易于存活更长的用途，其中sICAM-1的低水平表示与具有较高水平sICAM-1的受治疗患者相比，该受试者预测具有更长的存活率。
[0161] 本发明也提供了试剂盒，其包括用于实施本文中所述方法的组成部分并且会从本文所提供的实例中显而易见。多组分包(kit of parts)或试剂盒可以包括用于收集或测量sICAM-1的全血水平、血浆水平或血清水平的试剂。此类试剂可以包括抗体。试剂盒还可以包括用于收集和/或加工生物学样品的设备。试剂盒也可能含有用途、截止值的说明书和/或用于其测定的说明书和用于解读因使用所述试剂盒所获得的数据的说明书。
[0162] 根据一个具体实施方案，所述的组合部分试剂盒或试剂盒还可以包括如上文公开和/或如下文实施例部分中公开的免疫原性组合物。
[0163] 本发明还提供了用于监测临床试验和sICAM-1水平、确定此类水平是否高于或低于阈水平和/或推荐调整治疗方案以改善患者对免疫疗法治疗应答的计算机程序和/或算法。所述计算机程序或算法可以连同必要的硬件(例如以试剂盒或装置的形式)一起提供，其也可以接受生物学样品并测量其中存在的sICAM-1的相对水平。上述的计算机程序和/或装置可能随适宜的说明书和试剂(包括抗体)一起提供给内科医师或临床实验室。
[0164] 本发明已经以说明性方式进行了描述，并且应当理解已经使用的术语意图在本质而言为描述性而非限制性的。显然，本发明的众多修改和变体在上述教授内容的影响下是可能的。因此应当理解在所附权利要求书的范围内，本发明可以按照不同于本文中具体描述的方式实施。
[0167] 图1：描述在肺癌中疫苗免疫疗法的存活曲线：具有小于等于或大于224ng/ml sCD54的患者
[0168] -第1组：在具有低水平sCD54的患者中疫苗(即，免疫原性组合物)+化疗。低水平定义为外周血血浆中小于等于224ng/ml sCD54。32位患者。
[0169] --第2组：在具有高水平sCD54的患者中疫苗(即，免疫原性组合物)+化疗。高水平定义为外周血血浆中大于224ng/ml sCD54。29位患者。
[0170] 显著性差异，对数秩检验：p＝0.00006
[0171] o全部的 +经审查过的
[0172] 图2：描述在肺癌中化疗法的存活曲线：具有小于等于或大于224ng/mlsCD54的患者
[0173] -第1组：在具有低水平sCD54的患者中仅化疗(无疫苗)。低水平定义为外周血血浆中小于等于224ng/ml sCD54。32位患者。
[0174] --第2组：在具有高水平sCD54的患者中仅化疗(无疫苗)。高水平定义为外周血血浆中大于224ng/ml sCD54。36位患者。
[0175] 显著性差异，对数秩检验：p＝0.064(无统计显著性)
[0176] o全部的 +经审查过的
[0177] 实施例1：
[0178] 名为疫苗TG4010的免疫原性组合物联合标准化疗法用来治疗非小细胞肺癌(NSCLC)。
[0179] TG4010是表达IL2和肿瘤相关抗原MUC1的重组修饰病毒Ankara(MVA)。
[0180] 将148位患者随机化以接受：
[0181] 仅化疗(在第1日顺铂75mg/m2并且在第1日和第8日吉西他滨1250mg/m2，每3周实施，直至6个周期)(研究组2)或
[0182] 化疗联合TG4010(研究组1)。
[0183] 每隔六周对肿瘤进行评价(WHO标准)。终点是在6月时无进展存活(PFS)和总存活，意图进行治疗分析。
[0184] 血样在治疗之前取得并立即运输至中心免疫学实验室，在那里将血浆样品等分并冷冻。冷冻的等份血浆分批地在干冰上运输至第二中心实验室，在那里评估sCD54水平。
[0185] 通过使用 系统的多分析物血浆蛋白特征记录分析法，评估血浆样品的sCD54(sICAM-1)含量。限值224ng/ml是所分析的全部129位患者基线血浆样品的中位数值。
[0186] 图1显示用TG4010疫苗和化疗法治疗时，在基线处具有小于等于224ng/mlsCD54(ICAM1)的患者[组1(TG4010+化疗)](中位数存活＝24.5个月)比具有大于224ng/ml sCD54(ICAM1)的患者(中位数存活8.4个月)存活得更长。
[0187] 图2中的数据表明基于sCD54(sICAM-1)血浆含量选择患者的效果被限于接受所2
述疫苗的患者。描述仅使用常规化疗(在第1日顺铂75mg/m 并且在第1日和第8日吉
2
西他滨1250mg/m，每3周实施，直至6个周期)的图2显示在基线处具有小于等于或大于
224ng/ml sCD54(ICAM1)的患者不具有显著不同的存活预期。对于小于等于和大于224ng/ml sCD54(ICAM1)，分别观察到12.2个月和8.5个月的中位数存活。
述疫苗的患者。描述仅使用常规化疗(在第1日顺铂75mg/m 并且在第1日和第8日吉
2
西他滨1250mg/m，每3周实施，直至6个周期)的图2显示在基线处具有小于等于或大于
224ng/ml sCD54(ICAM1)的患者不具有显著不同的存活预期。对于小于等于和大于224ng/ml sCD54(ICAM1)，分别观察到12.2个月和8.5个月的中位数存活。
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