匹杉琼作为淋巴示踪剂的应用
阅读：1033发布：2020-08-26
专利汇可以提供匹杉琼作为淋巴示踪剂的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了匹杉琼(式I化合物)及其盐类(如匹杉琼 马 来酸盐、匹杉琼 盐酸 盐、匹杉琼 硫酸 盐 、匹杉琼 醋酸 盐、匹杉琼三氟乙酸盐、匹杉琼 柠檬酸 盐、匹杉琼苹果酸盐、匹杉琼 酒石酸 盐等)作为淋巴示踪剂或在制备淋巴示踪剂方面的应用。匹杉琼及其盐类可制成注射液，粉针，乳剂，脂质体，纳米粒和微球等制剂。其既可直接发挥杀伤 恶性 肿瘤 细胞的作用，蓝染特性又可作为淋巴示踪剂，应用于癌症手术疗法中术中淋巴清扫术，适用于胃癌， 乳腺癌 ，肠癌， 宫颈 癌 ，睾丸癌等。，下面是匹杉琼作为淋巴示踪剂的应用专利的具体信息内容。
1.匹杉琼盐酸盐在制备淋巴示踪剂中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述淋巴示踪剂为一种匹杉琼注射液，其每1000ml的处方为：
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述抗氧剂为焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠或两者组合物。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述淋巴示踪剂为一种匹杉琼粉针，其每
500ml的处方为：
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述淋巴示踪剂为一种匹杉琼乳剂，其处方为包括下述重量百分比的组分：
6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述淋巴示踪剂为一种匹杉琼脂质体，其处方为：
7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述淋巴示踪剂为一种匹杉琼纳米粒，其处方为包括下述重量百分比的组分：
8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述淋巴示踪剂为一种匹杉琼明胶微球，其处方为：
匹杉琼作为淋巴示踪剂的应用
技术领域
[0001] 本发明属于药物新适应症领域，具体涉及匹杉琼作为淋巴示踪剂方面的应用。
背景技术
[0002] 恶性肿瘤已经成为继心血管疾病之后的人类第二大死因。每年全球新增恶性肿瘤患者超过1200万人，死于肿瘤的患者约760万。2010年，我国每年新增肿瘤患者309万人，死于肿瘤的患者194万人，约占全球肿瘤死亡人数的1/4。近20年来，中国癌症死亡率上升了近30％，每四五个死亡者中就有一个死于癌症。癌症的早期发现和诊断可以为癌症的治疗赢得时间，对于患者生命有着特殊的意义，而及时彻底的手术清除癌细胞是治疗癌症成功的关键。众所周知，恶性肿瘤的浸润和转移途径无外乎直接蔓延，血行转移，淋巴转移，种植转移四种。其中淋巴转移非常重要，在某些肿瘤中是首要途径。根据国际TNM分期，淋巴结的转移情况是肿瘤分期的重要组成部分，淋巴结转移越多，病期越晚，预后越差。实体癌症手术或者放疗后远期存活率不令人很满意，失败的主要原因是癌细胞的淋巴转移。因此，手术中需要尽可能的将淋巴结摘除，防止其进一步转移，这就需要寻求一种有效地示踪剂来辨认淋巴结。与此同时，美国GLOBOCAN数据显示，至2015年在中国大陆地区，每年需要进行恶性肿瘤手术并进行淋巴清扫的患者将逼近400万人在全世界范围内，需进行淋巴清扫的患者则达到了近1300万人。另一方面，采用本身带有抗癌作用的药物作为淋巴示踪剂，即使未能摘除的淋巴结能够富集较高浓度的抗癌药物，以防止癌细胞的进一步转移。
[0003] 前哨淋巴结(sentinel lymph node，SLN)是肿瘤细胞最早转移的淋巴结，是肿瘤相关抗原((tumor associated antigen，TAA)和适应性免疫反应最早发生的部位。前哨淋巴结接受原始的淋巴液，引流量最大，所以最容易含有转移的肿瘤细胞。恶性肿瘤的淋巴结转移遵从一定的规律，即肿瘤细胞首先随淋巴管引流至该区域的一个或几个少数特定的淋巴结如前哨淋巴结后，再引流至其他的淋巴结。如果前哨淋巴结无转移，则该区域其他的淋巴结发生转移的可能性很小，相反，前哨淋巴结有转移，则相应的该区域其他淋巴结发生转移的可能性就大大增加。所以，对前哨淋巴的准确检测以及对含有肿瘤细胞的淋巴结及时清除对癌症的预后起着至关重要的作用。自Giuliano等采用10g/L的异硫蓝进行乳腺癌前哨淋巴结以来，各国医生尝试不同的活性染料以期达到最佳的前哨淋巴结检测效果。从理论上讲，前哨淋巴结的性状能准确地反映区域淋巴结状况，故通过一定的技术手段对前哨淋巴结进行定位，再以微侵入的方式取出并进行精确活检，即可推断趋于淋巴结现状。这对于实体癌的临床治疗和判断预后有着重大意义。
[0004] 从当前的临床来看，前哨淋巴结活检(sentinel node biopsy SNB)定位方法主要有以下3种：(1)放射性胶体定位法。将一种放射性同位素标记的胶体于术前1-6h注射到乳腺肿瘤周围组织，术中应用淋巴闪烁显像或γ-计数器探测仪追踪探测，定位前哨淋巴结。(2)生物染料定位法。将一种蓝色染料注入肿瘤周围组织，使肿瘤周做一个切口，通过细致的解剖，显露出蓝染的淋巴管，找出离肿瘤最近的蓝染淋巴结，即前哨淋巴结。(3)生物染料与放射性胶体联合应用定位法。先将放射性胶体注射到肿瘤周围组织中，然后将5ml蓝色染料注射到瘤体四周，使用手持γ-计数器探测仪探测SLN，测量摄取放射性同位素的量，并解剖出蓝染的淋巴管和淋巴结。放射性胶体定位法，虽然操作简单，费时少，但需要专用探测仪器，费用较高；并没有直接提高在血染视野清除淋巴结的准度及程度。生物染料定位法是一种成本较低可操作性高的方法。常用的生物染料有异硫蓝(Isosulfan blue dye)，专利蓝V(Patent Blue-V)及淋巴蓝(lymphazurin)。资料表明：前二者与蛋白结合力弱，注射后组织弥散少，并能很快进入淋巴管和前哨淋巴结使之有较深染色，故能获得较好的效果。但是，不足之处就是维持染色时间较短，常需要反复注射，对结果有一定影响，而且价格昂贵，国内无生产厂家，故国内报道较少；后者能持久维持淋巴结的蓝染状态，但是与蛋白的结合力较强，对周围的组织也有染色。因而，寻求开发安全有效的淋巴示踪剂，有效地对肿瘤区域淋巴结进行清除，是提高癌症患者生存质量、延长病人寿命的重要手段。
[0005] 匹杉琼(Pixantrone)是新一代的蒽醌类抗肿瘤药物，外观为蓝黑色结晶，易溶于水，同时作为新一代蒽醌累抗癌药，比同类蒽醌类抗肿瘤药物作用更强不良反应更小。其作用机制与米托蒽醌相似，可嵌入细胞DNA，抑制拓扑异构酶Ⅱ(Topo-Ⅱ)。匹杉琼单一用药的疾病完全缓解率达到20％，当匹杉琼替换了标准治疗药物CHOP(环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+泼尼松)中的多柔比星时，疾病的完全缓解率达到59％。大量临床证实，匹杉琼对白血病、乳腺癌和恶性淋巴瘤疗效显著。根据专利文献报道，米托蒽醌可以作为淋巴示踪剂用于肿瘤手术中的淋巴结清除，而匹杉琼作为新一代的蒽醌类药物具有与米托蒽醌同样的抗肿瘤和染色效果，同时具有更好的安全治疗窗口，使其成为很好的淋巴示踪剂候选药物。
发明内容
[0006] 本发明的目的是解决现有示踪剂染色时间慢，维持时间短，周围组织弥散大，注射部位残留严重以及制备工艺复杂的难题，提供了匹杉琼及其盐类作为淋巴示踪剂方面的应用。
[0007] 匹杉琼的化学式如式(I)所示：
[0008]
[0009] 匹杉琼作为优良的淋巴示踪剂的优势在于：(1)血浆中消除迅速，不蓝染血管。试验证明，静注匹杉琼后，血药浓度很快下降，半衰期短，所以几乎不蓝染血管，不影响淋巴结的定位；(2)染色迅速，定位准确。小鼠实验证明，匹杉琼能于10分钟之内蓝染一、二、三级淋巴结；(3)蓝染维持时间长。实验证明，匹杉琼蓝染淋巴结后，淋巴结褪色时间大于120分钟；(4)周围组织弥散少，注射部位残留较少；(5)价格相对较低廉。
[0010] 综上，匹杉琼是一种适宜临床广泛应用和推广的优良的淋巴示踪剂。
[0012] 本发明还提供了匹杉琼及其盐在制备淋巴示踪剂中的应用，匹杉琼及其盐在制备淋巴示踪剂时可制成匹杉琼注射液，粉针，乳剂，脂质体，纳米粒和毫微球等剂型。
[0013] 本发明所制备的匹杉琼注射液、粉针、乳剂、脂质体、纳米粒和毫微球对小鼠的淋巴结有较好的蓝染能力，同时又没有将周围组织蓝染。经过反复试验论证，匹杉琼确实对小鼠的淋巴结有较高的趋向性，并且对淋巴结有较深染色，而周围组织无蓝染。因此，匹杉琼可以开发成有效的淋巴示踪诊断试剂，加上其本身对癌症的治疗作用，一方面可以直接杀死肿瘤细胞，另一方面，其蓝染特性又可用于癌症手术中的淋巴结清扫术，可谓一举两得，为癌症患者带来福音。
[0014] 具体的，
[0015] 本发明提供了一种匹杉琼注射液，其每1000ml的处方为：
[0016]
[0017]
[0019] 匹杉琼注射液的制备工艺为：采取溶解法或者稀释法，将处方量匹杉琼及其盐溶于适量溶剂中，超声使溶解，用适量pH调节剂调节pH为3.5～5.5，加入抗氧剂使溶解，加入0.1％-0.5％针用活性炭，室温搅拌10-30min；然后用0.8μm微孔滤膜过滤除炭，0.45μm微孔滤膜精滤，加入溶剂至全量，检查滤液澄明度，合格后灌装，1-10ml每只，熔封，灭菌，测定pH范围在3.5～5.5之间。
[0020] 本发明提供了一种匹杉琼粉针，其每500ml的处方为：
[0021]
[0022] 匹杉琼粉针的制备工艺为：将上述各成分用处方量注射用水溶解后，无菌过滤，分装于安瓿瓶中，每支1-10ml，优选为5ml，冷冻干燥后封口，漏气检查即得。
[0023] 本发明提供了一种匹杉琼乳剂，其处方为包括下述重量百分比的组分：
[0024]
[0025] 匹杉琼乳剂制备工艺为：精密称取处方量的匹杉琼及其盐充分溶解于处方量TranscutolP(二乙二醇单乙基醚)，Span80-Tween80(HLB＝8)和处方量的葡萄糖溶液的混合液中，在35-55℃优选45℃下，搅拌10-30min，优选为20min，加入处方量的大豆油，搅拌10-30min，优选20min，混匀即得匹杉琼油包水微乳。
[0026] 本发明提供了一种匹杉琼脂质体，其处方为：
[0027]
[0028]
[0029] 匹杉琼脂质体制备工艺为：采用薄膜法制备匹杉琼脂质体。分别称取处方量大豆卵磷脂、胆固醇，溶解于适量有机溶剂，优选为5ml无水乙醚中，抽真空旋转至有机溶剂完全去尽，加入处方量磷酸盐缓冲液(pH7.4)水合至生成均匀的淡黄色乳液，转入聚丙烯离心管中，离心管放置在冰浴探头超声1-5min，优选3min(超声50s，停10s)。将此淡黄色半透明液体倒入装有已称重的匹杉琼的圆底烧瓶中，37℃，旋转混合至生成均匀的蓝黑色胶体溶液。4℃保存备用。
[0030] 本发明提供了一种匹杉琼纳米粒，其处方为包括下述重量百分比的组分：
[0031]
[0032] 匹杉琼纳米粒制备工艺为：采用薄膜分散超声法制备，将处方量山嵛酸甘油酷和磷脂等置于圆底烧瓶中，加有机溶剂适量，优选氯仿5ml使溶解，减压蒸发除尽有机溶剂，在瓶内壁形成均匀薄膜。加入含处方量S-40的匹杉琼或其盐的水溶液，溶胀薄膜，探头超声(工作5s，停55s)1-5min，优选2min。
[0033] 本发明提供了一种匹杉琼明胶微球，其处方为：
[0034]
[0035] 匹杉琼明胶微球制备工艺为：以明胶水溶液为分散相，蓖麻油为连续相，加入乳化剂脂肪酸山梨坦-80，电动搅拌得稳定乳剂，甲醛交联固化制成明胶微球。洗尽甲醛，抽干后过400目筛备用；将匹杉琼或其盐溶于0.1mol/L HCl溶液，加入上述GMS(明胶微球)静置浸入，抽干后过400目筛，得球径范围5.1-25.0μm匹杉琼明胶微球。
[0037] 图1、小鼠淋巴结染色效果图
[0038] 图2、大鼠淋巴结染色效果图
[0039] 图3、家兔淋巴结染色效果图
具体实施方式
[0040] 以下实例用于说明本发明。
[0041] 实施例1、匹杉琼盐酸盐的制备
[0042] 称取匹杉琼马来酸盐1g为起始原料，以MQ超纯水作溶剂进行溶解，超声使其充分溶解。接着以717-强碱型阴离子交换树脂(200mL溶胀体积)做交换剂进行马来酸根交换。室温摇床保持30min，将溶液从树脂中取出，多次用水浸洗树脂，尽可能的取出游离匹杉琼溶液。将获得的游离匹杉琼溶液进行冷冻干燥得游离匹杉琼粉末。取MQ超纯水作为溶剂溶解，取等物质量的浓度为1M的盐酸进行成盐反应，反应在摇床上保持1h。反应液冷冻干燥获得匹杉琼盐酸盐粉末(收率95％)。1H-NMR(DMSO)δ-3.10(dd，4H)，3.82(dd，4H)，7.70(d，2H)，8.08(d，1H)，8.31(s，6H)，9.02(d，1H)，9.43(s，1H)，10.89(d，2H)。
[0043] 实施例2、匹杉琼硫酸盐的制备
[0044] 按实施例1中所述方法，将“1M的盐酸进行成盐反应”替换为“1M的硫酸进行成盐反应”，获得匹杉琼硫酸盐粉末。1H-NMR(DMSO)δ-3.10(dd，4H)，3.79(dd，4H)，7.65(d，2H)，7.92(d，1H)，8.16(s，6H)，9.03(d，1H)，9.49(s，1H)，10.96(d，2H)。
[0045] 实施例3、匹杉琼三氟乙酸盐的制备
[0046] 按实施例1中所述方法，将“1M的盐酸进行成盐反应”替换为“1M的三氟乙酸进行成盐反应”，获得匹杉琼三氟乙酸盐粉末。1H-NMR(DMSO)δ-3.10(dd，4H)，3.80(dd，4H)，7.64(d，2H)，7.8.08(s，6H，1H)，9.01(d，1H)，9.45(s，1H)，10.97(d，2H)。
[0047] 实施例4、匹杉琼柠檬酸盐的制备
[0048] 按实施例1中所述方法，将“1M的盐酸进行成盐反应”替换为“1M的柠檬酸进行成盐反应”，获得匹杉琼柠檬酸盐粉末。1H-NMR(DMSO)δ-2.49(s，0.5H)，2.53(s，2H)，2.56(s，2H)，2.60(s，0.5H)，3.07(dd，4H)，3.79(dd，4H)，7.63(d，2H)，8.06(d，1H)，9.00(d，1H)，
9.47(s，1H)，10.37(d，2H)。
9.47(s，1H)，10.37(d，2H)。
[0049] 实施例5、匹杉琼苹果酸盐的制备
[0050] 按实施例1中所述方法，将“1M的盐酸进行成盐反应”替换为“1M的苹果酸进行成盐反应”，获得匹杉琼苹果盐粉末。1H-NMR(DMSO)δ-2.30～2.40(q，2H)2.52～2.58(q,2H)，3.06(dd，4H)，3.,77(dd，4H)，4.02(dd，2H)，7.62(d，2H)，8.04(d，1H)，8.99(d，1H)，9.42(s，
1H)，10.96(d，2H)。
1H)，10.96(d，2H)。
[0051] 实施例6、盐酸匹杉琼注射液的制备
[0052] 6.1处方
[0053]
[0054] 6.2制备工艺
[0055] 制备时可采取溶解法或者稀释法，将匹杉琼盐酸盐溶于适量注射用水中，超声使溶解，加适量盐酸调pH约3.5，加入焦亚硫酸钠使溶解，加入0.1％针用活性炭，室温搅拌30min。然后用0.8μm微孔滤膜过滤除碳，0.45μm微孔滤膜精滤，加入二氧化碳饱和的注射用水至全量，制得浓度为1mg/mL的匹杉琼盐酸盐注射液，检查滤液澄明度，合格后灌装，5m1每支，熔封。灭菌。测定PH值约为3.50。
[0056] 实施例7、盐酸匹杉琼粉针的制备
[0057] 7.1处方
[0058]
[0059] 7.2制备工艺
[0060] 将处方中上述各成分用适量注射用水溶解后，无菌过滤，分装于安瓿瓶中，每支5ml，冷冻干燥后封口，漏气检查即得。
[0061] 实施例8、小鼠淋巴结染色实验
[0062] 取小鼠5只，分别用10％的水合氯醛麻醉，酒精消毒，将实施例6制备的匹杉琼注射液分别注入小鼠前肢掌面和后肢足底，10分钟后，沿一侧前肢内侧和后肢内侧做切口，分离皮下组织，观察淋巴结染色情况(见附图1)。
[0063] 实施例9、大鼠淋巴结染色实验
[0064] 取Wistar大鼠5只，分别用10％的水合氯醛麻醉，酒精消毒，将实施例6制备的匹杉琼注射液分别注入大鼠前肢掌面和后肢足底，10分钟后，沿一侧前肢内侧和后肢内侧做切口，分离皮下组织，观察淋巴结染色情况(见附图2)。
[0065] 实施例10、家兔淋巴结染色实验
[0066] 取家兔3只，麻醉，酒精消毒，将实施例6制备的匹杉琼注射液从家兔后腿或乳腺注入，10分钟后，沿家兔后腿内侧做切口，分离皮下组织，观察淋巴结染色情况，见图3。
[0067] 以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本领域的技术人员在本发明所揭示的技术范围内，可不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
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