[0001] 本发明属于重组疫苗领域。具体地，本发明提供一种重组狂犬病病毒株，其在基因组中额外插入G基因；本发明提供构建所述重组狂犬病病毒株的方法及其用于制备疫苗的应用。

[0002] 狂犬病是一种很重要的人畜共患病，每年约造成60,000人死亡(1)。在很多发展中国家，狗仍是造成人感染狂犬病的主要原因，而在发达国家，狂犬病病毒主要存在于野生动(2)物宿主。实践已证明，对动物如狗进行免疫能显著降低人狂犬病的发病率 ，因此对动物实施免疫对控制狂犬病极为重要。

[0003] 狂犬病病毒属于弹状病毒科狂犬病毒属，基因组是不分节段的单股负链RNA，全长约12kb，编码5种病毒蛋白：核蛋白N、磷蛋白P、基质蛋白M、糖蛋白G和RNA聚合酶L。位于囊膜上的糖蛋白G是主要的致病因子，同时也是诱导保护性免疫反应的主要抗原。

[0004] 目前，在我国Flury-LEP活毒疫苗被广泛使用于对狗的免疫。该病毒是由Koprowski等于1940年从狂犬病致死的一个女孩脑内分离到1株强毒Flury株连续在1日龄雏鸡脑内通过138代，再经鸡胚卵黄囊传40～50代，降低了其周围注射时侵犯中枢神经系统的特性。该病毒对狗不致病，但保持其免疫原性，但是小鼠脑内注射时仍感染并致死，且Flury-LEP疫苗有时能够在3月龄幼犬引起狂犬病。鉴于弱毒活疫苗在使用过程中存在较大的安全隐患，WHO建议使用狂犬病灭活疫苗代替弱毒疫苗。

[0005] 为获得高效的、免疫原性更佳的狂犬疫苗株，本研究利用反向遗传技术构建了一个含有2个G基因的狂犬病病毒rLEP-G。我们鉴定了该重组病毒株的生物学特性，并将其与野生型毒株Flury-LEP进行了比较。结果表明重组病毒rLEP-G与LEP相比具有更好的安全性和免疫原性，适用于狂犬病毒灭活疫苗的开发。

[0006] 针对本发明待解决的技术问题，本发明在第一个方面中提供一种具有更好的安全性和免疫原性的重组狂犬病病毒株，其在基因组中额外插入G基因。

[0007] 在第一个方面的一个实施方案中，包含两个G基因的基因组如图1所示，其在Pme I酶切位点插入另外一个G基因，插入G基因后的狂犬病重组病毒基因组如图1A所显示。在第一个方面的一个实施方案中，所述重组病毒是由野生型狂犬病病毒株Flury-LEP构建而来。在第一个方面的一个实施方案中，所述构建的重组狂犬病毒株是如本发明实施例构建的rLEP-G。在一个实施方案中，所述插入的G基因的序列如SEQ ID NO：8所示。

[0008] 在本发明的第二个方面中，提供构建所述重组狂犬病病毒株的方法，所述方法包括下列步骤；

[0009] 1)构建转录质粒，其中将G基因序列插入野生型狂犬病病毒株的基因组中，得到含有双G基因的重组基因组全长cDNA克隆；

[0010] 2)构建辅助质粒系统，所述辅助质粒系统分别编码LEP的核蛋白N、磷酸蛋白P及聚合酶蛋白L；

[0011] 3)使用含有双G基因的重组基因组全长cDNA克隆的质粒载体以及辅助质粒系统共转染到容许所述病毒复制的宿主细胞，培养所述宿主细胞；

[0012] 4)拯救病毒。

[0013] 在第二个方面的一个实施方案中，构建的转录质粒为pCI-LEP-G，构建的转录辅助质粒分别为pCAGG-N、pCAGG-P、pCAGG-L。在第二个方面的一个实施方案中，所用的宿主细胞为BHK-21细胞。

[0014] 在本发明的第三个方面中，提供包含如第一方面中所构建的含有双G基因的重组基因组全长cDNA克隆的质粒载体。在第三个方面的一个实施方案中，所述质粒载体为pCI。

[0015] 在本发明的第四个方面中，提供在第一个方面中构建的重组病毒株用于制备狂犬病病毒灭活疫苗的应用。

[0016] 发明效果

[0017] 由本发明提供的包含两个G基因的重组狂犬病病毒株rLEP-G株在神经细胞NA细胞和非神经细胞BHK-21细胞上的生长动力学曲线与亲本Flury-LEP株十分相似，并且对比格犬的免疫试验还表明，灭活的重组病毒rLEP-G可诱导比野生型狂犬病毒毒株更高的中和抗体水平，说明可以将本发明的重组狂犬病病毒株用于开发更安全和更具免疫原性的疫苗。附图说明

[0018] 图1(A)双G基因的LEP基因组的构建

[0019] (B)左图：间接免疫荧光检测拯救病毒rLEP-G感染BHK-21细胞，

[0020] 右图：阴性对照；

[0021] 图2是wtLEP和rLEP-G在NA细胞(A)和BHK-21细胞(B)上的生长动力学曲线；

[0022] 图3是rLEP-G表达G蛋白的Western-blot鉴定

[0023] 1.LEP感染BHK-21细胞；2.rLEP-G感染BHK-21细胞；3.BHK-21细胞对照；4.蛋白标准分子量标准具体实施方式：

[0024] 本发明将通过下面的实施例进行进一步描述，但是本发明的范围并不受所述实施例的限制。

[0025] 实施例1含有两个G基因的重组病毒的构建及其鉴定

[0026] 1材料和方法

[0027] 1.1质粒、细胞株和病毒

[0028] 质粒pCAGG、pCI-RBz购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，pBluescriptSK(+)购自clonetech。BHK-21细胞(ATCC CC1-10)，293T细胞(CRL-11268)购自ATCC，培养基均为含10％胎牛血清的DMEM(购自GIBCO)。小鼠脑神经瘤细胞NA细胞来自军事医学科学院军事兽医研究所，培养基为含10％胎牛血清的MEM(购自GIBCO)。狂犬病病毒Flury-LEP和HEP购自中国兽医药品监察所中国兽医微生物菌种保藏管理中心，在BHK-21细胞上扩增，-70℃冻存备用。

[0029] 1.2主要试剂和仪器

[0030] T4 DNA连接酶，限制性内切酶Sph I，Mlu I等均购自TaKaRa公司。PhusionTMTM超保真DNA聚合酶。SuperScript III反转录试剂盒、无血清培养基Opti-MEM，转染试剂TM
Lipofectamine 2000均购自Invitrogen公司。犊牛血清购自Gibco公司。LB培养基成分均购自OXOID公司。胶回收试剂盒(Gel Extraction Mini Kit)及质粒小量提取试剂盒(Plasmid Mini Kit)均购自OMEGA公司。质粒中量提取试剂盒QIAfilter Plasmid Midi Kit购自QIAGEN公司。鼠抗狂犬病病毒高免血清由本研究室制备。FITC标记的羊抗鼠荧光二抗购自Sigma公司。普通显微镜，购自OLYMPUS公司；荧光显微镜，购自ZEISS公司。PCR仪购自Applied Biosystem公司。核酸测序采用BECKMAN CEQ 8000自动测序仪，所用试剂为BECKMAN公司产品。P2级生物安全柜购LABCONCO自公司。二氧化碳培养箱购自Thermo Electron公司。不同型号离心机均购自BECKMAN公司。-70℃超低温冰箱购自NBS公司。
普通冰箱冰柜购自海尔公司。全自动净水机MILI-Q购自BIOCEL公司。各种规格细胞培养瓶及细胞培养板均购自CORNING公司。

[0031] 1.3引物

[0032] 参照Gene Bank中所提供的Flury-HEP株基因组序列(Gene Bank序列号AB085828)，和Flury-LEP基因序列(Gene Bank序列号DQ099524，Flury-LEP全长基因组cDNA序列见SEQ ID NO：1)，将Flury-LEP基因组分为3段(即，F1，F2和F3)分别设计PCR引物。其中，片段F1为Flury-LEP基因序列的1-4063核苷酸序列(SEQ ID NO：2)，片段F2为Flury-LEP基因序列的4013-8254核苷酸序列(SEQ ID NO：3)，片段F3为Flury-LEP基因序列的8187-11925核苷酸序列(SEQ ID NO：4)。构建全长基因组cDNA所用引物、引入Pme I所用引物(表1)和构建辅助质粒所用引物(表2)均由上海英俊生物技术有限公司合成。

[0033] 表1 RT-PCR和全长基因组cDNA构建所用的引物

[0034]

[0035] 注：cDNA片断与图1相一致。下划线部分为病毒特异序列，黑体表示酶切位点，锤头状核酶(HamRz)和丁肝病毒核酶(HdvRz)用斜体表示。

[0036] 表2辅助质粒构建所用的引物

[0037]

[0038] 注：下划线部分为病毒特异序列，黑体表示酶切位点，突变碱基用字符边框表示，Kozak序列用斜体表示。

[0039] 1.4构建Flury-LEP基因组全长cDNA克隆和cDNA片段克隆以及辅助质粒系统[0040] 1.4.1病毒基因组的提取、反转录和PCR

[0041] 取Flury-LEP病毒液250μL，加入750μL Trizol，经常规方法提取基因组RNA。TM
提取的RNA用SuperScript III反转录试剂盒进行反转录反应(反转录引物见表1)按该试剂盒说明书进行操作，获得末端部分重叠的3个病毒cDNA片段F1、F2和F3片段。

[0042] 1.4.2 RT-PCR产物的克隆

[0043] 整个基因组分为末端部分重叠的3个片断进行RT-PCR扩增，PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳，使用胶回收试剂盒(购自OMEGA公司)回收F1、F2和F3片段，分别克隆至pBluscript II KS(+/-)(Clontech)的EcoR v位点，转化感受态细胞DH5α，选择并提取阳性质粒pBlue-F1，pBlue-F2和pBlue-F3，测序确保克隆的基因组片段与病毒基因组RNA序列完全一致(具体方法见《分子克隆试验指南》，J.萨姆布鲁克编，2008年第三版，科学出版社译)。

[0044] 1.4.3 Flury-LEP基因组全长cDNA克隆和cDNA片段克隆的构建

[0045] 利用基因组cDNA片段F1、F2和F3相邻重叠部分存在的限制酶切位点进行连接组装(示意图见图1)。具体地，首先将F3段cDNA经Nhe I和Rsr II位点克隆进pCI-RBz，所得质粒命名为pCI-F3，再将F1段经Nhe I和Mlu I插入到pCI-F3，所得质粒命名为pCI-F31。最后将F2段经Sph I和Mlu I克隆进pCI-F31，至此Flury-LEP全基因组cDNA组装完成，构建成的病毒基因组转录质粒命名为pCI-LEP。

[0046] 该克隆在CMV启动子之下、两个核酶之间的全长cDNA可以在真核细胞RNA聚合酶的作用下得到转录，并且由于核酶的自身催化功能，可以保证转录产物的3′末端与病毒基因组精确一致。

[0047] 1.4.4含有双G基因的基因组全长cDNA的构建

[0048] 为了救获表达双G基因的重组LEP病毒，在病毒基因组转录质粒pCI-LEP的基础上，首先构建在G和L基因之间带有Pme I酶切位点的全长cDNA克隆，具体方法是：以pCI-LEP为模板，利用F2-PF和Pme I-PR为引物，扩增出PCR片段PmeA，以F2-PR和Pme I-PF为引物扩增出PCR片段PmeB；然后再以PCR片段PmeA和PmeB为模板，以F2-PF和F2-PR为引物，扩增出含有Pme I酶切的F2片段，命名为F2-P。将F2-P经SphI和Mlu I克隆进pCI-F31，从而构建成重组基因组转录载体pCI-LEP-PmeI。然后，以上游引物InsertGPF：5′-ATGCGTTTAAACAAGTTTATCACTTGTTTACCTCT-3′，下游引物InsertGPR：5′-GCATGTTTAAACACTTGAAGTGTCAAAAGGATGA-3′(下划线为酶切位点Pme I序列)，以pCI-LEP-Pme I为模板扩增出两端带有Pme I酶切位点、包含有转录起始序列、转录终止序列的G基因片段
1800bp(SEQ IDNO：8)。经测序无误后，该PCR产物末端经Pme I酶切插入同样经Pme I处理的pCI-LEP-Pme I载体内，构建好的含有双G基因的重组基因组全长cDNA克隆命名为pCI-LEP-G。

[0049] 1.4.5构建转录辅助质粒系统

[0050] 以pCI-LEP为模板，PCR扩增编码核蛋白(N)、磷酸蛋白(P)及聚合酶蛋白(L)基因的开放阅读框架(ORF)cDNA序列(核苷酸序列分别为SEQ ID NOs：5-7，引物序列见表2)，分别克隆在pCAGG质粒的多克隆位点(MCS)。在起始密码子前引入Kozak序列(GCCACC)，以增强蛋白表达；在原有终止密码子后增加一个终止密码子，以有效终止辅助质粒mRNA的转录。构建成的辅助质粒分别命名为pCAGG-N、pCAGG-P和pCAGG-L。

[0051] 1.5病毒拯救

[0052] 转染前一天，将BHK-21细胞传到35mm 6孔板上，当细胞密度达到80％以上时即可进行转染。将pCI-LEP-G(见1.3)、pCAGG-N、pCAGG-P、pCAGG-L分别以4μg、2μg、1μg、1μg的比例加入到250μl无血清培养基OPTI-MEM(购自GIBCO公司)中，混匀；
TM
取15μl Lipofectamine 2000溶于250ul OPTI-MEM中，混匀后在室温静置5min；然后TM
将Lipofectamine 2000与转染质粒(即pCI-LEP-G、pCAGG-N、pCAGG-P、pCAGG-L各4μg、
2μg、1μg、1μg)混合均匀，室温孵育30min。在此期间用OPTI-MEM洗涤BHK-21细胞两TM
次，然后每孔加入OPTI-MEM 1ml，最后将Lipofectamine 2000-质粒混合液加入细胞培养孔中，置于37℃CO2培养箱中培养8h后吸弃转染液，加入含10％胎牛血清的DMEM继续培养。72小时后，仔细吹落培养板上的细胞，将培养液及细胞混合物全部接种BHK-21细胞，-1 -5
37℃培养3天。3天后，将细胞上清做10 -10 稀释后接种生长于24孔板的BHK-21细胞，
2天后，用间接免疫荧光试验来检测病毒是否拯救成功，即以1∶50稀释的鼠抗狂犬病毒高免血清为一抗，以相同倍数稀释的小鼠阴性血清为对照，以荧光素(FITC)标记的羊抗鼠IgG(Sigma)为二抗。根据拯救病毒的滴度，进行适当比例稀释传代，制备种毒。从全长质粒pCI-LEP-G救获的病毒命名为rLEP-G。

[0053] 1.6 RT-PCR鉴定及序列测定

[0054] 对重组病毒进行序列分析：取重组病毒250μl，用病毒RNA(小量)抽提试剂盒提取病毒RNA，用上游引物

[0055] 5′-CAATCCTTGGGAGCAATAGA-3′和下游引物

[0056] 5′-CGTTGGTCACTGAAACTGCTA-3′，进行RT-PCR方法扩增含两个G基因的片段，并对扩增的PCR产物进行序列分析。

[0057] 1.7种毒的制备及滴定

[0058] 将上述拯救的重组病毒株在BHK-21细胞上进行扩增，37℃培养3天。收获病毒后-8测定病毒滴度，即将病毒用无菌的PBS连续10倍稀释至10 ，每个稀释度3复孔接种培养于24孔板的单层NA细胞或BHK-21细胞。培养48h后，进行IFA，病毒滴度用病灶形成单位(focus forming unit)FFU表示。

[0059] 1.8多步生长曲线的测定

[0060] 为测定病毒的多步生长曲线，分别以M.O.I为0.01感染单层NA细胞或BHK-21细胞。感作1h后用，无血清MEM(购自GIBCO)洗2次后加0.2％FBS的MEM或2％DMEM于37℃培养。分别于接种后24小时、72小时和120h取细胞培养液上清，在NA细胞或BHK-21细胞上测定滴度。

[0061] 1.9重组病毒对小鼠的致病性试验

[0062] 将救获的病毒和野生病毒L E P用灭菌PBS作10倍倍比稀释至10-7，将10-4～10-7各稀释度分别取30μl脑内接种5只5～6周龄的Balb/c雌性小鼠。连续观察21天，记录每组小鼠的平均体重变化和死亡数量。利用Reed-Muench法计算小鼠半数致死量(LD50)(5)。

[0063] 将107FFU的rLEP和rLEP-G分别小鼠后腿肌肉注射4只5～6周龄的Balb/c雌性小鼠，连续观察21天，记录每组小鼠的平均体重变化和死亡数量。

[0064] 1.10 Western-blot检测重组病毒G基因表达

[0065] 重组病毒rLEP-G，野生型LEP以M.O.I为1感染BHK-21细胞，3天后收集细胞进行SDS-PAGE电泳，以空白细胞作为对照样品。将蛋白电转移到NC膜上，10％脱脂奶粉封闭TM过夜，以1∶50稀释的鼠抗G蛋白高免血清为一抗，1∶5000稀释的IRDye 700DX标记的羊抗鼠IgG为二抗。用Odyssey红外荧光扫描成像系统进行结果分析。

[0066] 2.结果

[0067] 2.1含双G基因的LEP全长基因组cDNA克隆的构建和重组病毒的拯救[0068] 经PCR方法，扩增出两端带有Pme I酶切位点、包含有转录起始序列、转录终止序列的G基因片段，该PCR产物末端经Pme I酶切插入同样经Pme I处理的pCI-LEP-Pme I上，构建成含有双G基因的重组LEP cDNA克隆质粒pCI-LEP-G(图1)。

[0069] 为了从cDNA克隆拯救感染性重组病毒，首先将pCI-LEP-G及表达RVN、P、L蛋白的辅助质粒共转染BHK-21细胞，3天后收获细胞及上清液，盲传一代后IFA检测呈阳性结果4
(图1A)，且病毒滴度达到2×10FFU/ml，继续在BHK-21细胞上传代制备种毒。为了确定拯救的病毒是否来源于pCI-LEP-G，对重组病毒进行RT-PCR鉴定，扩增出3732bp片段，该片段包含有2个G基因序列。进一步测序证明，所救获的病毒是来自pCI-LEP-G。

[0070] 2.2重组病毒的生物学特性

[0071] 2.2.1动力学曲线

[0072] rLEP-G和LEP在神经元细胞NA和非神经元细胞BHK-21上的生长动力学曲线如图所示(图2)，rLEP-G在两种细胞上的生长性能与wtLEP没有显著差异，这表明从基因组全长cDNA拯救出来的rLEP-G的生长特性与wtLEP是一致的。

[0073] 2.2.2嗜神经指数

[0074] 狂犬病毒的体外嗜神经指数是指病毒在NA细胞相对于BHK-21细胞上的感染性比例，嗜神经指数为1即表示病毒在神经元细胞上感染的能力比在非神经细胞上的高10倍[6]。表1可见rLEP-G和wtLEP的嗜神经指数分别为0.85和0.84，没有显著差异。

[0075] 表1 wtLEP和LEP-G的体外嗜神经性

[0076]

[0077] a同一种毒在NA细胞和BHK-21细胞上的滴度

[0078] b体外嗜神经指数＝log(NA上的滴度)-log(BHK-21上的滴度)

[0079] 2.2.3对小鼠的致病性

[0080] 为了确定rLEP-G和野生型LEP对小鼠的致病性，每只小鼠脑内接种病毒5
10FFU/30μl。感染rLEP-G和LEP的小鼠表现出麻痹、兴奋、体重减轻等中枢神经系统疾病的临床症状，所有的老鼠在11天内全部死亡。此外，我们测定了wtLEP和rLEP-G的LD50，分别为8.8个FFU和3.4个FFU。可见，rLEP-G与wtLEP对小鼠的致病性没有显著差异。但
7
是，10FFU的LEP外周感染小鼠可引起小鼠发病并致死，可见LEP还残留一定的神经侵害能力，而rLEP-G株相同滴度外周感染小鼠引起小鼠体重下降及个别后肢麻痹但并不引起小鼠死亡，表明rLEP-G的安全性较LEP高。

[0081] 2.2.4Western-blot检测重组病毒G基因表达

[0082] Western-blot分析rLEP-G感染BHK-21细胞在细胞中的表达水平。rLEP-G，wtLEP以M.O.I为1感染BHK-21细胞3天后收集细胞裂解，如图3，以β-action为内参，rLEP-G的G表达量显著高于wtLEP的G表达量。

[0083] 实施例2重组病毒对比格犬的免疫试验

[0084] 为了评价重组病毒对狗的免疫效果，将8×107FFU/ml的wtLEP和rLEP-G分别用1∶6000β-丙内脂处理2h灭活，与磷酸铝佐剂(购自REHEIS公司)3∶1混匀后，经肌肉注射途径免疫3月龄比格犬(购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心)各6条，同时设6条为对照，肌肉注射1ml PBS。免疫后21天采血并分离血清，用于中和抗体滴度检测。中和试验

[0085] 血清样品首先56℃水浴处理30min灭活，随后连续20倍至1280倍倍比稀释，同时设阴、阳性血清对照。病毒采用标准固定毒CVS株，将稀释好的血清与含1000个FFU的病毒等体积混合，37℃孵育1h，然后取100μl加到过夜生长的24孔BHK-21细胞上。每个样品作3个重复。感染后48h进行IFA检测。被检血清的中和抗体滴度为使荧光灶抑制等于50％的血清最高倍数。阳性对照血清(购自狂犬病OIE参考实验室，法国)的起始稀释效价为2IU/ml，待测抗体单位(IU/ml)＝待测血清中和滴度/标准血清中和滴度×2。

[0086] 重组病毒rLEP-G对比格犬的免疫保护性

[0087] 根据O.I.E标准测定灭活的重组病毒rLEP-G和野生型wtLEP诱导比格犬中和抗体水平实验结果显示：灭活rLEP-G免疫比格犬诱导产生的中和抗体达14±4IU/ml，灭活wtLEP免疫比格犬诱导产生的中和抗体滴度为6±2.3IU/ml，两组数据差异显著(P＜0.05)。可见，灭活的重组病毒rLEP-G可诱导比野生型更高的中和抗体水平，更适用于狂犬病毒灭活疫苗的开发。

[0088] 讨论

[0089] 本研究通过反向遗传技术成功拯救重组狂犬病病毒rLEP-G株，该重组病毒是在亲本弱毒疫苗株Flury-LEP株反向遗传操作系统基础上，构建增强一个病毒本身的G基因即含有2个相同G基因的病毒全长cDNA克隆并拯救获得的。Flury-LEP株具有优良的免疫原性，被广泛用作人或动物的狂犬病灭活疫苗种毒株。还被包括中国在内的许多国家用作预防犬狂犬病的弱毒疫苗。

[0090] rLEP-G株在神经细胞NA细胞和非神经细胞BHK-21细胞上的生长动力学曲线与亲本Flury-LEP株十分相似(图2)，然而rLEP-G在BHK-21细胞中G蛋白的表达量显著高于亲本株LEP(图3)。

[0091] 我们的实验结果也证明了额外增加一个G基因并不影响病毒的生长性能，且在感染细胞中G蛋白的表达量显著提高。对比格犬的免疫试验还表明，灭活的重组病毒rLEP-G可诱导比野生型更高的中和抗体水平，更适用于狂犬病毒灭活疫苗的开发。

[0092] 囊膜糖蛋白G蛋白是狂犬病病毒最主要的致病因子(6，7)。LEP株小鼠脑内接种时仍感染并致死，额外增加一个G蛋白是否会增强其致病能力。通过测定LD50并观察小鼠状态，我们发现rLEP-G株的LD50与其亲本株LEP没有显著差异，这表明rLEP-G株的毒力与亲本株LEP几乎是一样的。LEP高滴度外周感染小鼠可引起小鼠发病并致死，可见LEP还残留一定的神经侵害能力，rLEP-G株高滴度外周感染小鼠引起小鼠体重下降及个别后肢麻(8)痹但并不引起小鼠死亡。影响RV致病性的其中一个因素是逃避细胞凋亡的能力 。增加G蛋白含量的重组病毒诱导细胞凋亡能力增强，外周感染时对小鼠的致病力下降，与之相应的是病毒的中和抗体滴度显著上升，这可能是因为内源性佐剂的释放刺激了细胞毒性T细胞反应且能促进树突状细胞的成熟和抗原递呈。

[0093] 狂犬病病毒的RNA基因组以RNP复合物形式存在，RNA基因组模板及其转录子均(9)被N蛋白紧密包裹起来，使其不受RNA酶的降解，维持高活性。Mebatsion等 首次拯救的表达外源蛋白CAT的重组病毒传代25次后仍能检测到CAT活性。插入外源片段后的重组RV RNA基因组的高遗传稳定性是其作为载体使用的优势之一。rLEP-G株在BHK-21细胞上连续多次传代后仍保有额外的G基因并维持病毒的高滴度和G蛋白高表达，表明在培养细胞中rLEP-G株的遗传稳定性。

[0094] 参考文献

[0095] 1.Martinez L.Global infectious disease surveillance.Int J Infect Dis，2000，4(4)：222-8.

[0096] 2.Kammer AR，Ertl HC.Rabies vaccines：from the past to the 21st century.Hybrid Hybridomics，2002，21(2)：123-7.

[0097] 3.Faber M，Pulmanausahakul R，Hodawadekar SS，et al.Overexpression ofthe rabies virus glycoprotein results in enhancement of apoptosis andantiviralimmune response.J Virol，2002，76(7)：3374-81.

[0098] 4.Hosokawa-Muto J，Ito N，Yamada K，et al.Characterization of recombinantrabies virus carrying double glycoprotein genes.MicrobiolImmunol，2006，50(3)：187-96.

[0099] 5.Reed，LJ，Muench，H.A simple method of estimating fifty percent endpoints.Am.J.Hyg，1938，27：493-497.

[0100] 6.Morimoto K，Hooper DC，Carbaugh H，et al.Rabies virus quasispecies：implications for pathogenesis.Proc Natl Acad Sci USA，1998，95(6)：3152-6.[0101] 7.Dietzschold B，Wunner WH，Wiktor TJ，et al.Characterization of anantigenic determinant of the glycoprotein that correlates with pathogenicityof rabies virus.Proc Naal Acad Sci USA，1983，80(1)：70-4.[0102] 8.Morimoto K，Hooper DC，Spitsin S，et al.Pathogenicity of different rabiesvirus variants inversely correlates with apoptosis and rabies virusglycoprotein expression in infected primary neuron cultures.J Virol，1999，
73(1)：510-8.

[0103] 9.Mebatsion T，Schnell MJ，Cox JH，et al.Highly stable expression of aforeign gene from rabies virus vectors.Proc Natl Acad Sci USA，1996，93(14)：7310-4.

[0104] 序列表

[0105] <110>中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

[0106] <120>双表达G基因的重组狂犬病病毒的构建及其生物学特性分析

[0107] <130>1B096748

[0108] <160>8

[0109] <170>PatentIn version 3.1

[0110] <210>1

[0111] <211>11925

[0112] <212>DNA

[0113] <213>狂犬病病毒

[0114] <400>1

[0115] acgcttaaca acaaaaccaa agaagaagca gacagcgtca gttgcaaagc aaaaatgtaa 60[0116] cacccctaca atggatgccg acaagattgt gttcaaagtc aataatcagg tggtctcttt 120[0117] gaagcccgag attatcgtgg atcaatatga gtacaagtac cctgctatca aagatttgaa 180[0118] aaagccttgt ataaccctag ggaaagcccc cgatttaaac aaagcttaca aatcagtttt 240[0119] atcaggcatg aatgccgcca aacttgatcc tgatgatgta tgctcctact tggcagcagc 300[0120] aatgcagttc tttgagggga catgtccgga agactggacc agctatggaa tcctgattgc 360[0121] acgaaaagga gacaagatca ccccagactc tctagtggag ataaagcgta ctgatgtaga 420[0122] agggaattgg gctctgacag gaggcatgga actgacaagg gaccccactg tctccgaaca 480[0123] tgcatcttta gtcggtcttc tcctgagtct gtacagattg agcaaaatat caggacaaaa 540[0124] cactggtaac tataagacaa acattgcgga tagaatagag cagattttcg agacagcccc 600[0125] ttttgttaag atcgtggaac accataccct gatgacaact cacaagatgt gtgctaattg 660[0126] gagtactata ccgaacttca gatttttggc cggaacctac gacatgtttt tctcacggat 720[0127] cgagcatctg tattcggcaa tcagagtggg cacagttgtc accgcttatg aagactgctc 780[0128] aggactggta tcgtttacag ggttcataaa gcagatcaat ctcaccgcaa gagaagcaat 840[0129] actatatttc ttccacaaga actttgaaga agagataagg agaatgtttg agccagggca 900[0130] agagacagct gttcctcact cttatttcat tcacttccgt tcactaggct tgagtgggaa 960[0131] gtctccttat tcatcaaatg ccgtcggtca tgtgttcaat ctcattcact ttgttggatg 1020[0132] ctatatgggt caagtcagat ctctaaatgc aacggttatt gctgcatgtg cccctcatga 1080[0133] gatgtctgtt ctagggggct atttgggaga ggagttcttc ggaaaaggga catttgaaag 1140[0134] aaggttcttc agagacgaga aagaacttca agaatatgag gcggctgaac tgacaaagac 1200[0135] cgacgtggca ctggcagatg acggaaccgt caactccgat gacgaggact acttctccgg 1260[0136] tgaaaccaga agtccagaag ctgtctatac tcgaatcatg atgaatggag gtcgactgaa 1320[0137] gagatcacat atacggagat atgtctcagt cagttccaat catcaagccc gtccaaactc 1380[0138] attcgccgaa tttttaaaca aaacgtattc gagtgactca taaggagttg aatgacaggg 1440[0139] tgccagaaat ccatagattg tgtatatcca tcatgaaaaa aactaacact cctcctttcg 1500[0140] aaccatccca agtatgagca agatctttgt taatccgagt gcaatcagag ccggtctggc 1560[0141] cgatcttgag atggccgaag agactgttga tctgatcaac agaaacatag aagacaatca 1620[0142] ggctcatctc cagggagaac ccatagaagt ggacaatctc cctgaggaca tgaggcaatt 1680[0143] tcacctgggc gatgaaaaat tgtccaacct tggtgagatg gttagggtgg gcgaaggcaa 1740[0144] gtatcgagag gactttcaga tggatgaggg agaggacccc aacctcctgt tccaatcgta 1800[0145] cctggacaat gttggagtcc aaatagtcag acaaatgagg tcaggagaga gattcctcaa 1860[0146] gatatggtca cagaccgtag aggaaattat atcctatgtc acggtcaact ttcctaaccc 1920[0147] tccaggaagg tcttcggagg ataaatcaac ccaaactact ggccgggagc tcaagaagga 1980[0148] gacaacatcc actctttctc agagagaaag ccaaccttca aaagccggaa tggtggctca 2040[0149] agttgcctct ggccctccat cccttgaatg gtctgccacc aatgaagagg atgatctatc 2100[0150] agtagaggct gagatcgctc atcagattgc tgaaagcttt tccaagaagt acaagtttcc 2160[0151] ctctcgatct tcaggaatat tcttgtataa ttttgagcaa ctggagatga accttgatga 2220[0152] catagttaaa gaggcaaaaa atgtaccggg cgtgacccgt ctggcccatg atggatccaa 2280[0153] aatcccccta agatgtgtac tgggatgggt cgctttggcc aactccaaga aattccaatt 2340[0154] gatagtcgag gccgacaagc taagcaaaat catgcaagat gacttggatc gctacacatc 2400[0155] atgctaaccg agtcttcgaa ttcattccct ctagataatg aaaactgaga tgtcatggag 2460[0156] tcgacatgaa aaaaacaggc aacaccacta ataaaatgaa ctttctatgt aagatagtga 2520[0157] aaaactgtag ggatgaggac acccaaaagc cctctcctgt gtcagcccct ccggatggcg 2580[0158] atgacctgtg gcttccacct ccagaatatg tcccgctgaa agaactcaca agcaagaaga 2640[0159] acatgaggaa cttttgtatc aacggggagg ttaaagtgtg tagcccgaac ggttactcat 2700[0160] tcaggatcct gcggcatatt ctgagatcat tcgacgagat atactctggg aatcatagga 2760[0161] tgattgggtt agtcaaagtt gttattggac tagctttatc aggagctcca gttcctgagg 2820[0162] gcatgaactg ggtatacaaa ttgaggagaa cccttatttt ccagtgggct gattccaggg 2880[0163] gccctcttga aggggaggag ttggaacact ctcaagagat cacttgggac gatgatactg 2940[0164] aattcgtcgg attgcaaatg agagtgagcg caagacaatg tcatattcaa ggcaggatct 3000[0165] ggtgtatcaa catgaactcg agggcatgtc aactatggtc tgacatgtct cttcagacac 3060[0166] aaaggtctga agaggacaaa gactcttctc tgcttctaga ataatcagat tatatcccgc 3120[0167] aagtttatca cttgtttacc tctggaggag agaacatacg ggcttaactc caatccttgg 3180[0168] gagcaataga acaaaaaaac acgccatggt gccattaaac cgctgcattt tatcaaagtc 3240[0169] aagttaatta cctttacatt ttgagcctct tggatgtgaa aaaaactatt aacatccctc 3300[0170] aaaagactta aggaaagatg gttcctcagg ttcttttgtt tgtacccctc ctgggttttt 3360[0171] cattgtgttt cgggaagttc cccatttaca cgataccaga caaacttggt ccctggagcc 3420[0172] ctattgacat acaccatctc agctgtccaa ataacctggt tgtggaggac gaaggatgta 3480[0173] ccaacctgtc cgagttctct tacatggaac ttaaagtggg atacatctca gccataaaag 3540[0174] tgaacgggtt cacttgcaca ggtgttgtga cagaggcaga aacctacacc aactttgttg 3600[0175] gttatgtcac aaccacattc aagagaaagc atttccgccc caccccagac gcatgtagag 3660[0176] ccgcgtataa ctggaagatg gccggtgacc ccagatatga agagtctcta cacaatccgt 3720[0177] accccgacta ccattggctt cgaactgtaa aaaccaccaa agagtctctc gttatcatat 3780[0178] ccccaagtgt gacagatttg gacccatatg acaaatccct tcactcaagg gtcttccctg 3840[0179] gcggaaattg ctcaggaata acggtgtcct cgacctactg ctcaactaat catgattaca 3900[0180] ccatttggat gcctgagaat ctgagactag ggacatcttg tgacattttt accaatagca 3960[0181] gagggaagag ggcatccaaa ggaggcaaga cttgcggctt tgtggatgaa agaggcctgt 4020[0182] ataagtctct aaagggagca tgcaaactca agttatgtgg agttctcgga cttagactta 4080[0183] tggatggaac atgggtcgcg atgcaaacat cagatgagac caaatggtgc cctccaggtc 4140[0184] agttggtgaa tttgcacgac tttcgctcag acgagattga gcatctcgtt gtggaagagt 4200[0185] tagtcaagaa aagagaggag tgtctggatg cactagagtc catcatgacc accaagtcag 4260[0186] tgagtttcag acgtctcagt cacttgagaa aacttgtccc tgggtttgga aaagcatata 4320[0187] ccatattcaa caaaaccttg atggaggctg atgctcacta caagtctgtc cggacctgga 4380[0188] atgagatcat cccctcaaaa gggtgtttga gagttggggg gaggtgtcat ccccatgtga 4440[0189] acggggtgtt tttcaatggt ataatattag ggtctgacgg ccatgttcta atcccagaga 4500[0190] tgcagtcatc cctcctccag caacatatgg agttgttgga atcttcagtt atccccctga 4560[0191] tgcacccctt ggcagaccct tctacagttt tcaaagacgg tgatgaggtt gaggattttg 4620[0192] ttgaagttca cctccccgat gtgcatgaac aggtctcagg agttgaactg ggtctcccga 4680[0193] actgggggaa gtatgtattg atgattgcag gggccttgat tgccctgatg ttgataattt 4740[0194] tcctgatgac atgttgcaga agagtcaatc gaccagaatc tacgcaaagc agtcttggag 4800[0195] agacagggag aaatgtgtca gtcacttccc aaagcggaaa agtcatatct tcatgggagt 4860[0196] catataagag tggaggcgag accagactgt gaaggccggt catccttttg acacttcaag 4920[0197] tcccgaggat aacctcctct cggggttggg gggaatcttg ggatccagta gtcctccttg 4980[0198] aactccatcc aacagggtag atttaagagt catgagactt tcattaatca tctcagttga 5040[0199] tcagacatgg tcgtgtagat tctcataaca cgggagatct tctagcagtt tcagtgacca 5100[0200] acggtgcttt cattctccag gaactgatac caaaggttgt ggacaagcca aggggtgctt 5160[0201] cggattactc tgtgcttggg cacagaaaga ggtcgtagtt tgccccttga tagcagattc 5220[0202] aacatgaatt aactaagaaa ggcgatctgc ctcccatgaa ggacataagc aatagttcac 5280[0203] aatcatcttg catctcagtg aagtgtacat aactataaag ggctgggtca tctaagcatt 5340[0204] tcagtcgaga aaaaaactgt agaccaaaag aacaactaac aacacttctc atcccgagac 5400[0205] ccatatcaag atgctggatc cgggagaggt ttatgatgac cctattgatc caattgagtc 5460[0206] agaggctgaa cccagaggaa cccccactgt ccccaacatc ttgaggaact ctgactacaa 5520[0207] tctcaactct cctttgatag aggactctgc caaactaatg ttagaatggt tgaaaacagg 5580[0208] gaacagacct tatcggatga ctttgacaga caattgctcc aggtcttaca aagttttgaa 5640[0209] agattatttc aagaaagtag atttgggttc tctcaaagtg ggaggaactg ctgcacaatc 5700[0210] aatgatttct ctctggttgt atggagccca ctctgagtca aacaggagcc ggagatgtat 5760[0211] aaccgacttg gcccatttct attccaagtc atcccccata gagaagctgt tgaattgtac 5820[0212] gttaggaaac agaggcctga gaatcccacc agagggggtg ttaagttgcc ttgagagggt 5880[0213] cgattatgat aaggcatttg ggaggtatct ggccaacacg tattcctctt atctgttttt 5940[0214] ccatgtaatt accttataca tgaatgccct agactgggaa gaggaaaaaa ccatcctagc 6000[0215] attatggaaa gatctaacct cagtggatac cgggaaggac ttggtcaaat tcaaagatca 6060[0216] aatatgggga ctgctggttg tgacaaagga ctttgtttac tctcagagtt ctaactgtct 6120[0217] ttttgacaga aactatacac tgatgctaaa ggatcttttc ttgtctcgat tcaactcctt 6180[0218] gatgattttg ctttctcccc ctgagccccg atactcagat gacttaatat ctcagctgtg 6240[0219] ccagctatac atcgctgggg atcaagtctt gtccttgtgt gggaactccg gctatgaagt 6300[0220] catcaaaata ttggagccat atgtcgtgaa cagtttggtc cagagggcag agaagtttag 6360[0221] gcctctcatc cactccttgg gagactttcc tatgtttata aaagacaagg tgaatcaact 6420[0222] tgaagggact ttcggtccca gtgcaaaaag gttttttagg gttctagatc aattcgacaa 6480[0223] catacatgat ctagtatttg tgtatggctg ttacagacat tgggggcacc cctatataga 6540[0224] ttatcggaag ggtctgtcga aactatatga tcaagttcac attaagaaag taatagataa 6600[0225] gtcctaccag gagtgtttag caagtgactt ggctagaagg atcctcagat ggggatttga 6660[0226] caagtactcc aagtggtatc tagattcgag attccttgcc ctagaccacc ccttggctcc 6720[0227] ttatatcaag acccaaacat ggccacccaa acatatagta gacttggtgg gggacacatg 6780[0228] gcacaagctc ccgatcacgc agatctttga gattcctgaa tcaatggacc cgtcagagat 6840[0229] actggatgat aaatcacatt ctttcaccag aacaagacta gcttcttggc tgtccgagaa 6900[0230] ccgagggggg cctgttccta gcgagaaggt cattatcacg gccctgtcta agccacctgt 6960[0231] caatccccga gagtttttga aatctatcga cctcggagga ttgccagatg atgacttgat 7020[0232] aattggcctc agaccaaagg aacgggagtt gaagattgag ggccgattct tcgctctaat 7080[0233] gtcatggaat ctaagattat attttgtcat caccgagaag ctcttggcca actacatttt 7140[0234] gccacttttt gacgcactga ctatgacaga caacctgaac aaggtattta aaaagttgat 7200[0235] cgacagggtc accgggcaag ggcttttgga ctattcgagg gtcacatacg catttcacct 7260[0236] ggactatgag aaatggaaca atcatcaaag attggagtca acggaggatg tattttctgt 7320[0237] cctagatcag gtgtttggat tgaagagggt gttttctaga acacacgagt tttttcagaa 7380[0238] gtcctggatc tattattcag acagatcaga cctcattggg ttacgggagg atcagatata 7440[0239] ttgcttggat atgtccaatg gtccaacctg ctggaatggc caagacggcg ggctagaggg 7500[0240] cttacggcag aagggctgga gtctagtcag cttattgatg atagatagag aatctcaaac 7560[0241] caggaacaca agaaccaaga tactagctca aggagacaac caggttctgt gtccgacata 7620[0242] catgttgtca ccgggattgt ctcaagaggg gcttctctat gagttagaga gcatatcgag 7680[0243] gaatgcactc tcaatatacc gagctatcga ggaaggagca tctaaactgg ggctgatcat 7740[0244] caagaaagaa gagaccatgt gtagttatga ctttctcata tatgggaaga cccccttatt 7800[0245] tcgaggcaac atattagtac ctgaatccaa aagatgggcc cgagtctctt gcatctctaa 7860[0246] cgaccaaata gtcaacctcg ccaatataat gtctacagta tccaccaatg cgctgacagt 7920[0247] ggcacaacac tctcaatctc tgatcaaacc tatgagggat tttctgctca tgtcagtaca 7980[0248] ggcagttttc cactacctgc tgtttagccc aatcttaaaa ggcagggttt ataagattct 8040[0249] gagtgctgaa ggggagagct ttctcctagc catgtcgcgg ataatctacc tagatccttc 8100[0250] tttgggaggg gtgtctggaa tgtctctcgg gaggttccat atacgtcagt tctcagaccc 8160[0251] tgtctctgaa gggttgtcat tctggagaga gatctggtta agctcccatg aatcctggat 8220[0252] tcacgcgttg tgtcaagagg ccgggaaccc cgatcttgga gagagaacac tagagagctt 8280[0253] cactcgcctt ttagaagatc ctactacctt aaatatcaaa ggaggggcca gtcctaccat 8340[0254] tctactcaag gatgctatca gaaaggctct gtacgacgag gtggacaagg tggaaaattc 8400[0255] agagtttcga gaggcaatcc tgttgtccaa gacccataga gataacttta tactcttttt 8460[0256] aaaatctgtt gagcctctgt tccctcgatt tctcagtgaa ctcttcagtt cgtccttctt 8520[0257] gggaatacca gagtcaatta ttggactgat acaaaactcc aggacaataa gaaggcagtt 8580[0258] tagaaagagt ctctcaagaa ctttagaaga gtccttctac aactcagaga tccacgggat 8640[0259] taatcggatg acccagacac ctcaaagggt cgggagagtg tggccttgct cttcagagag 8700[0260] ggcagatcta cttagggaga tctcttgggg aaggaaagtg gtaggcacga cagttcctca 8760[0261] cccttccgag atgttggggc tgcttccaaa atcctctatt tcctgcactt gtggagcaac 8820[0262] agggggaggc aatcctagag tttctgtatc agtactcccg tccttcgatc agtcattttt 8880[0263] ttcacgaggt cccctaaagg gatacttggg ctcgtccacc tccatgtcaa cccagctatt 8940[0264] ccatgcatgg gaaaaagtca ctaatgttca tgtggtgaaa agggctatat cgttaaaaga 9000[0265] atctataaac tggttcatca atagaaattc caatttggct caaactctaa ttagaaacat 9060[0266] catgtctctg acaggccctg atttccctct agaagaggct cctgttttca aacggacagg 9120[0267] gtcagccttg cataggttca agtctgccag atacagcgaa ggagggtatt cttctgtttg 9180[0268] tcctaacctt ctctctcata tctctgtcag tacagacact atgtctgatt tgacccaaga 9240[0269] cgggaagaac tatgatttca tgtttcagcc attgatgctt tatgcgcaaa catggacatc 9300[0270] agagctggta cagagagaca caagactgag agactccacg tttcactggc accttcgatg 9360[0271] caacagatgt gtaaggccca ttgaggatat aacactggaa acttctcaga tcttcgagtt 9420[0272] cccggatgtg tcaaaaagga tatccaggat ggtttctgga gccgtccctc actttcagaa 9480[0273] gcttcctgat atccgtctaa gaccaggtga ttttgaatct ctaagtggta gagaaaagtc 9540[0274] tcgccacata gggtcagctc aggggctctt atactcaatc ttagtagcaa ttcacgattc 9600[0275] aggatacaat gatgggacca tcttccctgt caacatatac ggcaaagttt cccctagaga 9660[0276] ctatttgaga gggctcgcaa gagggatctt gataggatcc tcgatttgct tcttgacacg 9720[0277] aatgacaaat attaatatta aaagacctct tgaattgatc tcaggggtaa tttcctatat 9780[0278] tctcctgagg ctggataatc atccctctct gtatataatg cttagagaac cgtctcttag 9840[0279] aggagagata ttctctatcc ctcagaaaat ccccgccgct tacccaacca ctatgaaaga 9900[0280] aggcaacaga tcgatcttgt gttacctcca acacgtgcta cgctatgagc gagaagtaat 9960[0281] cacggcgtcc ccggagaatg actggctgtg gatcttctca gacttcagaa gtgcgaaaat 10020[0282] gacgtacttg accctcatta cctaccagtc tcacctccta ctccagaggg ttgagcgaaa 10080[0283] cttgtctaag agtatgagag ctactctgcg acaaatgggt tccttaatga ggcaagtgct 10140[0284] gggtgggcac ggagaagaca ccttggagtc agacgacgac attcaacgat tactaaaaga 10200[0285] ctctttgcga aggacaaggt gggtagatca agaggtgcgc catgcagcta gaaccatgag 10260[0286] tggagattac agccccaaca agagagtatc ccgcaaggca ggatgttcag aatgggtctg 10320[0287] ctctgctcaa caggttgccg tctccacctc agccaacccg gcccctgtct cagagcttga 10380[0288] cattagggcc ctatctaaga ggtttcaaaa ccccttgatc tcgggcctaa gagtggttca 10440[0289] gtgggcaacc ggcgcccatt ataagcttaa gcctattcta gatgatctaa atgttttccc 10500[0290] atctctctgt cttgttgttg gagacgggtc agggggaata tcaagggcag ttctcaacat 10560[0291] gtttccagat tctaagcttg tgttcaacag cctattggag gtgaatgatc tgatggcttc 10620[0292] cggaacacat ccactgcctc cttcagcaat catgagtgga ggagatgata tcatctccag 10680[0293] agtgatagac tttgactcaa tctgggaaaa accatccgac ctgaggaact tggccacctg 10740[0294] gagatacttc cagtcagttc aaaagcaggt caacatgtcg tatgacctca ttgtttgtga 10800[0295] tgcagaagtt actgatattg catctatcaa ccggataact ctgttgatgt ctgatttcgc 10860[0296] attgtctata gatggaccac tttatctggt cttcaaaact tacgggacta tgctagtgaa 10920[0297] cccagactat aaagctatcc aacatctgtc aagagcgttc ccttcggtca cagggtttat 10980[0298] aacccaagta acttcgtcct tttcttctga gctatacctc cggttctcca aacgagggaa 11040[0299] gttttttagg gatgctgagt acttgacctc ttccaccctt cgggagatga gccttgtgtt 11100[0300] attcaattgt agcagcccca aaagtgagat gcagagagct cgttccttaa actatcaaga 11160[0301] tcttgtaagg ggatttcctg aagagatcat atcaaatcct tacaatgaaa tgatcataac 11220[0302] tctgattgac agtgatgtag agtccttcct ggtccacaag atggtggatg atcttgagtt 11280[0303] acagagggga actctgtcta aagtggctat cattatatcc atcatgattg ttttttccaa 11340[0304] tagagtcttc aacatttcca aacctttgac tgaccccttg ttctatcccc catctgatcc 11400[0305] taaaatcctg aggcacttca acatatgttg cagtactatg atgtatctat ctaccgcttt 11460[0306] aggcgacgtc cctagcttcg caagacttca tgacctatat aatagaccta taacttatta 11520[0307] cttcagaaag caagttattc gagggaatat ttatctatct tggagctggt ccgatgacac 11580[0308] cccagtgttc aagagggtag cctgtaattc tagcttgagt ctgtcatctc actggatcag 11640[0309] gttgatttac aagatagtga agactaccag actcgttggc agcatagaag atctatcagg 11700[0310] agaggtagaa cgacacctgc atgggtacaa cagatggatc accctcgagg atatccgatc 11760[0311] tagatcatcc ctactagact acagttgttt gtaagccgga cattaatgaa agcctgtaca 11820[0312] tgctaaaatt cttgtatgat gcatcttgaa aaaaacaaga tcttgaatcc gaacctctgg 11880[0313] ttgtttgatt gtttttttta tctttattgt ttatttgtta agcgt 11925[0314] <210>2

[0315] <211>4063

[0316] <212>DNA

[0317] <213>狂犬病病毒

[0318] <400>2

[0319] acgcttaaca acaaaaccaa agaagaagca gacagcgtca gttgcaaagc aaaaatgtaa 60[0320] cacccctaca atggatgccg acaagattgt gttcaaagtc aataatcagg tggtctcttt 120[0321] gaagcccgag attatcgtgg atcaatatga gtacaagtac cctgctatca aagatttgaa 180[0322] aaagccttgt ataaccctag ggaaagcccc cgatttaaac aaagcttaca aatcagtttt 240[0323] atcaggcatg aatgccgcca aacttgatcc tgatgatgta tgctcctact tggcagcagc 300[0324] aatgcagttc tttgagggga catgtccgga agactggacc agctatggaa tcctgattgc 360[0325] acgaaaagga gacaagatca ccccagactc tctagtggag ataaagcgta ctgatgtaga 420[0326] agggaattgg gctctgacag gaggcatgga actgacaagg gaccccactg tctccgaaca 480[0327] tgcatcttta gtcggtcttc tcctgagtct gtacagattg agcaaaatat caggacaaaa 540[0328] cactggtaac tataagacaa acattgcgga tagaatagag cagattttcg agacagcccc 600[0329] ttttgttaag atcgtggaac accataccct gatgacaact cacaagatgt gtgctaattg 660[0330] gagtactata ccgaacttca gatttttggc cggaacctac gacatgtttt tctcacggat 720[0331] cgagcatctg tattcggcaa tcagagtggg cacagttgtc accgcttatg aagactgctc 780[0332] aggactggta tcgtttacag ggttcataaa gcagatcaat ctcaccgcaa gagaagcaat 840[0333] actatatttc ttccacaaga actttgaaga agagataagg agaatgtttg agccagggca 900[0334] agagacagct gttcctcact cttatttcat tcacttccgt tcactaggct tgagtgggaa 960[0335] gtctccttat tcatcaaatg ccgtcggtca tgtgttcaat ctcattcact ttgttggatg 1020[0336] ctatatgggt caagtcagat ctctaaatgc aacggttatt gctgcatgtg cccctcatga 1080[0337] gatgtctgtt ctagggggct atttgggaga ggagttcttc ggaaaaggga catttgaaag 1140[0338] aaggttcttc agagacgaga aagaacttca agaatatgag gcggctgaac tgacaaagac 1200[0339] cgacgtggca ctggcagatg acggaaccgt caactccgat gacgaggact acttctccgg 1260[0340] tgaaaccaga agtccagaag ctgtctatac tcgaatcatg atgaatggag gtcgactgaa 1320[0341] gagatcacat atacggagat atgtctcagt cagttccaat catcaagccc gtccaaactc 1380[0342] attcgccgaa tttttaaaca aaacgtattc gagtgactca taaggagttg aatgacaggg 1440[0343] tgccagaaat ccatagattg tgtatatcca tcatgaaaaa aactaacact cctcctttcg 1500[0344] aaccatccca agtatgagca agatctttgt taatccgagt gcaatcagag ccggtctggc 1560[0345] cgatcttgag atggccgaag agactgttga tctgatcaac agaaacatag aagacaatca 1620[0346] ggctcatctc cagggagaac ccatagaagt ggacaatctc cctgaggaca tgaggcaatt 1680[0347] tcacctgggc gatgaaaaat tgtccaacct tggtgagatg gttagggtgg gcgaaggcaa 1740[0348] gtatcgagag gactttcaga tggatgaggg agaggacccc aacctcctgt tccaatcgta 1800[0349] cctggacaat gttggagtcc aaatagtcag acaaatgagg tcaggagaga gattcctcaa 1860[0350] gatatggtca cagaccgtag aggaaattat atcctatgtc acggtcaact ttcctaaccc 1920[0351] tccaggaagg tcttcggagg ataaatcaac ccaaactact ggccgggagc tcaagaagga 1980[0352] gacaacatcc actctttctc agagagaaag ccaaccttca aaagccggaa tggtggctca 2040[0353] agttgcctct ggccctccat cccttgaatg gtctgccacc aatgaagagg atgatctatc 2100[0354] agtagaggct gagatcgctc atcagattgc tgaaagcttt tccaagaagt acaagtttcc 2160[0355] ctctcgatct tcaggaatat tcttgtataa ttttgagcaa ctggagatga accttgatga 2220[0356] catagttaaa gaggcaaaaa atgtaccggg cgtgacccgt ctggcccatg atggatccaa 2280[0357] aatcccccta agatgtgtac tgggatgggt cgctttggcc aactccaaga aattccaatt 2340[0358] gatagtcgag gccgacaagc taagcaaaat catgcaagat gacttggatc gctacacatc 2400[0359] atgctaaccg agtcttcgaa ttcattccct ctagataatg aaaactgaga tgtcatggag 2460[0360] tcgacatgaa aaaaacaggc aacaccacta ataaaatgaa ctttctatgt aagatagtga 2520[0361] aaaactgtag ggatgaggac acccaaaagc cctctcctgt gtcagcccct ccggatggcg 2580[0362] atgacctgtg gcttccacct ccagaatatg tcccgctgaa agaactcaca agcaagaaga 2640[0363] acatgaggaa cttttgtatc aacggggagg ttaaagtgtg tagcccgaac ggttactcat 2700[0364] tcaggatcct gcggcatatt ctgagatcat tcgacgagat atactctggg aatcatagga 2760[0365] tgattgggtt agtcaaagtt gttattggac tagctttatc aggagctcca gttcctgagg 2820[0366] gcatgaactg ggtatacaaa ttgaggagaa cccttatttt ccagtgggct gattccaggg 2880[0367] gccctcttga aggggaggag ttggaacact ctcaagagat cacttgggac gatgatactg 2940[0368] aattcgtcgg attgcaaatg agagtgagcg caagacaatg tcatattcaa ggcaggatct 3000[0369] ggtgtatcaa catgaactcg agggcatgtc aactatggtc tgacatgtct cttcagacac 3060[0370] aaaggtctga agaggacaaa gactcttctc tgcttctaga ataatcagat tatatcccgc 3120[0371] aagtttatca cttgtttacc tctggaggag agaacatacg ggcttaactc caatccttgg 3180[0372] gagcaataga acaaaaaaac acgccatggt gccattaaac cgctgcattt tatcaaagtc 3240[0373] aagttaatta cctttacatt ttgagcctct tggatgtgaa aaaaactatt aacatccctc 3300[0374] aaaagactta aggaaagatg gttcctcagg ttcttttgtt tgtacccctc ctgggttttt 3360[0375] cattgtgttt cgggaagttc cccatttaca cgataccaga caaacttggt ccctggagcc 3420[0376] ctattgacat acaccatctc agctgtccaa ataacctggt tgtggaggac gaaggatgta 3480[0377] ccaacctgtc cgagttctct tacatggaac ttaaagtggg atacatctca gccataaaag 3540[0378] tgaacgggtt cacttgcaca ggtgttgtga cagaggcaga aacctacacc aactttgttg 3600[0379] gttatgtcac aaccacattc aagagaaagc atttccgccc caccccagac gcatgtagag 3660[0380] ccgcgtataa ctggaagatg gccggtgacc ccagatatga agagtctcta cacaatccgt 3720[0381] accccgacta ccattggctt cgaactgtaa aaaccaccaa agagtctctc gttatcatat 3780[0382] ccccaagtgt gacagatttg gacccatatg acaaatccct tcactcaagg gtcttccctg 3840[0383] gcggaaattg ctcaggaata acggtgtcct cgacctactg ctcaactaat catgattaca 3900[0384] ccatttggat gcctgagaat ctgagactag ggacatcttg tgacattttt accaatagca 3960[0385] gagggaagag ggcatccaaa ggaggcaaga cttgcggctt tgtggatgaa agaggcctgt 4020[0386] ataagtctct aaagggagca tgcaaactca agttatgtgg agt 4063[0387] <210>3

[0388] <211>4242

[0389] <212>DNA

[0390] <213>狂犬病病毒

[0391] <400>3

[0392] aggcctgtat aagtctctaa agggagcatg caaactcaag ttatgtggag ttctcggact 60[0393] tagacttatg gatggaacat gggtcgcgat gcaaacatca gatgagacca aatggtgccc 120[0394] tccaggtcag ttggtgaatt tgcacgactt tcgctcagac gagattgagc atctcgttgt 180[0395] ggaagagtta gtcaagaaaa gagaggagtg tctggatgca ctagagtcca tcatgaccac 240[0396] caagtcagtg agtttcagac gtctcagtca cttgagaaaa cttgtccctg ggtttggaaa 300[0397] agcatatacc atattcaaca aaaccttgat ggaggctgat gctcactaca agtctgtccg 360[0398] gacctggaat gagatcatcc cctcaaaagg gtgtttgaga gttgggggga ggtgtcatcc 420[0399] ccatgtgaac ggggtgtttt tcaatggtat aatattaggg tctgacggcc atgttctaat 480[0400] cccagagatg cagtcatccc tcctccagca acatatggag ttgttggaat cttcagttat 540[0401] ccccctgatg caccccttgg cagacccttc tacagttttc aaagacggtg atgaggttga 600[0402] ggattttgtt gaagttcacc tccccgatgt gcatgaacag gtctcaggag ttgaactggg 660[0403] tctcccgaac tgggggaagt atgtattgat gattgcaggg gccttgattg ccctgatgtt 720[0404] gataattttc ctgatgacat gttgcagaag agtcaatcga ccagaatcta cgcaaagcag 780[0405] tcttggagag acagggagaa atgtgtcagt cacttcccaa agcggaaaag tcatatcttc 840[0406] atgggagtca tataagagtg gaggcgagac cagactgtga aggccggtca tccttttgac 900[0407] acttcaagtc ccgaggataa cctcctctcg gggttggggg gaatcttggg atccagtagt 960[0408] cctccttgaa ctccatccaa cagggtagat ttaagagtca tgagactttc attaatcatc 1020[0409] tcagttgatc agacatggtc gtgtagattc tcataacacg ggagatcttc tagcagtttc 1080[0410] agtgaccaac ggtgctttca ttctccagga actgatacca aaggttgtgg acaagccaag 1140[0411] gggtgcttcg gattactctg tgcttgggca cagaaagagg tcgtagtttg ccccttgata 1200[0412] gcagattcaa catgaattaa ctaagaaagg cgatctgcct cccatgaagg acataagcaa 1260[0413] tagttcacaa tcatcttgca tctcagtgaa gtgtacataa ctataaaggg ctgggtcatc 1320[0414] taagcatttc agtcgagaaa aaaactgtag accaaaagaa caactaacaa cacttctcat 1380[0415] cccgagaccc atatcaagat gctggatccg ggagaggttt atgatgaccc tattgatcca 1440[0416] attgagtcag aggctgaacc cagaggaacc cccactgtcc ccaacatctt gaggaactct 1500[0417] gactacaatc tcaactctcc tttgatagag gactctgcca aactaatgtt agaatggttg 1560[0418] aaaacaggga acagacctta tcggatgact ttgacagaca attgctccag gtcttacaaa 1620[0419] gttttgaaag attatttcaa gaaagtagat ttgggttctc tcaaagtggg aggaactgct 1680[0420] gcacaatcaa tgatttctct ctggttgtat ggagcccact ctgagtcaaa caggagccgg 1740[0421] agatgtataa ccgacttggc ccatttctat tccaagtcat cccccataga gaagctgttg 1800[0422] aattgtacgt taggaaacag aggcctgaga atcccaccag agggggtgtt aagttgcctt 1860[0423] gagagggtcg attatgataa ggcatttggg aggtatctgg ccaacacgta ttcctcttat 1920[0424] ctgtttttcc atgtaattac cttatacatg aatgccctag actgggaaga ggaaaaaacc 1980[0425] atcctagcat tatggaaaga tctaacctca gtggataccg ggaaggactt ggtcaaattc 2040[0426] aaagatcaaa tatggggact gctggttgtg acaaaggact ttgtttactc tcagagttct 2100[0427] aactgtcttt ttgacagaaa ctatacactg atgctaaagg atcttttctt gtctcgattc 2160[0428] aactccttga tgattttgct ttctccccct gagccccgat actcagatga cttaatatct 2220[0429] cagctgtgcc agctatacat cgctggggat caagtcttgt ccttgtgtgg gaactccggc 2280[0430] tatgaagtca tcaaaatatt ggagccatat gtcgtgaaca gtttggtcca gagggcagag 2340[0431] aagtttaggc ctctcatcca ctccttggga gactttccta tgtttataaa agacaaggtg 2400[0432] aatcaacttg aagggacttt cggtcccagt gcaaaaaggt tttttagggt tctagatcaa 2460[0433] ttcgacaaca tacatgatct agtatttgtg tatggctgtt acagacattg ggggcacccc 2520[0434] tatatagatt atcggaaggg tctgtcgaaa ctatatgatc aagttcacat taagaaagta 2580[0435] atagataagt cctaccagga gtgtttagca agtgacttgg ctagaaggat cctcagatgg 2640[0436] ggatttgaca agtactccaa gtggtatcta gattcgagat tccttgccct agaccacccc 2700[0437] ttggctcctt atatcaagac ccaaacatgg ccacccaaac atatagtaga cttggtgggg 2760[0438] gacacatggc acaagctccc gatcacgcag atctttgaga ttcctgaatc aatggacccg 2820[0439] tcagagatac tggatgataa atcacattct ttcaccagaa caagactagc ttcttggctg 2880[0440] tccgagaacc gaggggggcc tgttcctagc gagaaggtca ttatcacggc cctgtctaag 2940[0441] ccacctgtca atccccgaga gtttttgaaa tctatcgacc tcggaggatt gccagatgat 3000[0442] gacttgataa ttggcctcag accaaaggaa cgggagttga agattgaggg ccgattcttc 3060[0443] gctctaatgt catggaatct aagattatat tttgtcatca ccgagaagct cttggccaac 3120[0444] tacattttgc cactttttga cgcactgact atgacagaca acctgaacaa ggtatttaaa 3180[0445] aagttgatcg acagggtcac cgggcaaggg cttttggact attcgagggt cacatacgca 3240[0446] tttcacctgg actatgagaa atggaacaat catcaaagat tggagtcaac ggaggatgta 3300[0447] ttttctgtcc tagatcaggt gtttggattg aagagggtgt tttctagaac acacgagttt 3360[0448] tttcagaagt cctggatcta ttattcagac agatcagacc tcattgggtt acgggaggat 3420[0449] cagatatatt gcttggatat gtccaatggt ccaacctgct ggaatggcca agacggcggg 3480[0450] ctagagggct tacggcagaa gggctggagt ctagtcagct tattgatgat agatagagaa 3540[0451] tctcaaacca ggaacacaag aaccaagata ctagctcaag gagacaacca ggttctgtgt 3600[0452] ccgacataca tgttgtcacc gggattgtct caagaggggc ttctctatga gttagagagc 3660[0453] atatcgagga atgcactctc aatataccga gctatcgagg aaggagcatc taaactgggg 3720[0454] ctgatcatca agaaagaaga gaccatgtgt agttatgact ttctcatata tgggaagacc 3780[0455] cccttatttc gaggcaacat attagtacct gaatccaaaa gatgggcccg agtctcttgc 3840[0456] atctctaacg accaaatagt caacctcgcc aatataatgt ctacagtatc caccaatgcg 3900[0457] ctgacagtgg cacaacactc tcaatctctg atcaaaccta tgagggattt tctgctcatg 3960[0458] tcagtacagg cagttttcca ctacctgctg tttagcccaa tcttaaaagg cagggtttat 4020[0459] aagattctga gtgctgaagg ggagagcttt ctcctagcca tgtcgcggat aatctaccta 4080[0460] gatccttctt tgggaggggt gtctggaatg tctctcggga ggttccatat acgtcagttc 4140[0461] tcagaccctg tctctgaagg gttgtcattc tggagagaga tctggttaag ctcccatgaa 4200[0462] tcctggattc acgcgttgtg tcaagaggcc gggaaccccg at 4242[0463] <210>4

[0464] <211>3739

[0465] <212>DNA

[0466] <213>狂犬病病毒

[0467] <400>4

[0468] gagagatctg gttaagctcc catgaatcct ggattcacgc gttgtgtcaa gaggccggga 60[0469] accccgatct tggagagaga acactagaga gcttcactcg ccttttagaa gatcctacta 120[0470] ccttaaatat caaaggaggg gccagtccta ccattctact caaggatgct atcagaaagg 180[0471] ctctgtacga cgaggtggac aaggtggaaa attcagagtt tcgagaggca atcctgttgt 240[0472] ccaagaccca tagagataac tttatactct ttttaaaatc tgttgagcct ctgttccctc 300[0473] gatttctcag tgaactcttc agttcgtcct tcttgggaat accagagtca attattggac 360[0474] tgatacaaaa ctccaggaca ataagaaggc agtttagaaa gagtctctca agaactttag 420[0475] aagagtcctt ctacaactca gagatccacg ggattaatcg gatgacccag acacctcaaa 480[0476] gggtcgggag agtgtggcct tgctcttcag agagggcaga tctacttagg gagatctctt 540[0477] ggggaaggaa agtggtaggc acgacagttc ctcacccttc cgagatgttg gggctgcttc 600[0478] caaaatcctc tatttcctgc acttgtggag caacaggggg aggcaatcct agagtttctg 660[0479] tatcagtact cccgtccttc gatcagtcat ttttttcacg aggtccccta aagggatact 720[0480] tgggctcgtc cacctccatg tcaacccagc tattccatgc atgggaaaaa gtcactaatg 780[0481] ttcatgtggt gaaaagggct atatcgttaa aagaatctat aaactggttc atcaatagaa 840[0482] attccaattt ggctcaaact ctaattagaa acatcatgtc tctgacaggc cctgatttcc 900[0483] ctctagaaga ggctcctgtt ttcaaacgga cagggtcagc cttgcatagg ttcaagtctg 960[0484] ccagatacag cgaaggaggg tattcttctg tttgtcctaa ccttctctct catatctctg 1020[0485] tcagtacaga cactatgtct gatttgaccc aagacgggaa gaactatgat ttcatgtttc 1080[0486] agccattgat gctttatgcg caaacatgga catcagagct ggtacagaga gacacaagac 1140[0487] tgagagactc cacgtttcac tggcaccttc gatgcaacag atgtgtaagg cccattgagg 1200[0488] atataacact ggaaacttct cagatcttcg agttcccgga tgtgtcaaaa aggatatcca 1260[0489] ggatggtttc tggagccgtc cctcactttc agaagcttcc tgatatccgt ctaagaccag 1320[0490] gtgattttga atctctaagt ggtagagaaa agtctcgcca catagggtca gctcaggggc 1380[0491] tcttatactc aatcttagta gcaattcacg attcaggata caatgatggg accatcttcc 1440[0492] ctgtcaacat atacggcaaa gtttccccta gagactattt gagagggctc gcaagaggga 1500[0493] tcttgatagg atcctcgatt tgcttcttga cacgaatgac aaatattaat attaaaagac 1560[0494] ctcttgaatt gatctcaggg gtaatttcct atattctcct gaggctggat aatcatccct 1620[0495] ctctgtatat aatgcttaga gaaccgtctc ttagaggaga gatattctct atccctcaga 1680[0496] aaatccccgc cgcttaccca accactatga aagaaggcaa cagatcgatc ttgtgttacc 1740[0497] tccaacacgt gctacgctat gagcgagaag taatcacggc gtccccggag aatgactggc 1800[0498] tgtggatctt ctcagacttc agaagtgcga aaatgacgta cttgaccctc attacctacc 1860[0499] agtctcacct cctactccag agggttgagc gaaacttgtc taagagtatg agagctactc 1920[0500] tgcgacaaat gggttcctta atgaggcaag tgctgggtgg gcacggagaa gacaccttgg 1980[0501] agtcagacga cgacattcaa cgattactaa aagactcttt gcgaaggaca aggtgggtag 2040[0502] atcaagaggt gcgccatgca gctagaacca tgagtggaga ttacagcccc aacaagagag 2100[0503] tatcccgcaa ggcaggatgt tcagaatggg tctgctctgc tcaacaggtt gccgtctcca 2160[0504] cctcagccaa cccggcccct gtctcagagc ttgacattag ggccctatct aagaggtttc 2220[0505] aaaacccctt gatctcgggc ctaagagtgg ttcagtgggc aaccggcgcc cattataagc 2280[0506] ttaagcctat tctagatgat ctaaatgttt tcccatctct ctgtcttgtt gttggagacg 2340[0507] ggtcaggggg aatatcaagg gcagttctca acatgtttcc agattctaag cttgtgttca 2400[0508] acagcctatt ggaggtgaat gatctgatgg cttccggaac acatccactg cctccttcag 2460[0509] caatcatgag tggaggagat gatatcatct ccagagtgat agactttgac tcaatctggg 2520[0510] aaaaaccatc cgacctgagg aacttggcca cctggagata cttccagtca gttcaaaagc 2580[0511] aggtcaacat gtcgtatgac ctcattgttt gtgatgcaga agttactgat attgcatcta 2640[0512] tcaaccggat aactctgttg atgtctgatt tcgcattgtc tatagatgga ccactttatc 2700[0513] tggtcttcaa aacttacggg actatgctag tgaacccaga ctataaagct atccaacatc 2760[0514] tgtcaagagc gttcccttcg gtcacagggt ttataaccca agtaacttcg tccttttctt 2820[0515] ctgagctata cctccggttc tccaaacgag ggaagttttt tagggatgct gagtacttga 2880[0516] cctcttccac ccttcgggag atgagccttg tgttattcaa ttgtagcagc cccaaaagtg 2940[0517] agatgcagag agctcgttcc ttaaactatc aagatcttgt aaggggattt cctgaagaga 3000[0518] tcatatcaaa tccttacaat gaaatgatca taactctgat tgacagtgat gtagagtcct 3060[0519] tcctggtcca caagatggtg gatgatcttg agttacagag gggaactctg tctaaagtgg 3120[0520] ctatcattat atccatcatg attgtttttt ccaatagagt cttcaacatt tccaaacctt 3180[0521] tgactgaccc cttgttctat cccccatctg atcctaaaat cctgaggcac ttcaacatat 3240[0522] gttgcagtac tatgatgtat ctatctaccg ctttaggcga cgtccctagc ttcgcaagac 3300[0523] ttcatgacct atataataga cctataactt attacttcag aaagcaagtt attcgaggga 3360[0524] atatttatct atcttggagc tggtccgatg acaccccagt gttcaagagg gtagcctgta 3420[0525] attctagctt gagtctgtca tctcactgga tcaggttgat ttacaagata gtgaagacta 3480[0526] ccagactcgt tggcagcata gaagatctat caggagaggt agaacgacac ctgcatgggt 3540[0527] acaacagatg gatcaccctc gaggatatcc gatctagatc atccctacta gactacagtt 3600[0528] gtttgtaagc cggacattaa tgaaagcctg tacatgctaa aattcttgta tgatgcatct 3660[0529] tgaaaaaaac aagatcttga atccgaacct ctggttgttt gattgttttt tttatcttta 3720[0530] ttgtttattt gttaagcgt 3739[0531] <210>5

[0532] <211>1353

[0533] <212>DNA

[0534] <213>狂犬病病毒

[0535] <400>5

[0536] atggatgccg acaagattgt gttcaaagtc aataatcagg tggtctcttt gaagcccgag 60[0537] attatcgtgg atcaatatga gtacaagtac cctgctatca aagatttgaa aaagccttgt 120[0538] ataaccctag ggaaagcccc cgatttaaac aaagcttaca aatcagtttt atcaggcatg 180[0539] aatgccgcca aacttgatcc tgatgatgta tgctcctact tggcagcagc aatgcagttc 240[0540] tttgagggga catgtccgga agactggacc agctatggaa tcctgattgc acgaaaagga 300[0541] gacaagatca ccccagactc tctagtggag ataaagcgta ctgatgtaga agggaattgg 360[0542] gctctgacag gaggcatgga actgacaagg gaccccactg tctccgaaca tgcatcttta 420[0543] gtcggtcttc tcctgagtct gtacagattg agcaaaatat caggacaaaa cactggtaac 480[0544] tataagacaa acattgcgga tagaatagag cagattttcg agacagcccc ttttgttaag 540[0545] atcgtggaac accataccct gatgacaact cacaagatgt gtgctaattg gagtactata 600[0546] ccgaacttca gatttttggc cggaacctac gacatgtttt tctcacggat cgagcatctg 660[0547] tattcggcaa tcagagtggg cacagttgtc accgcttatg aagactgctc aggactggta 720[0548] tcgtttacag ggttcataaa gcagatcaat ctcaccgcaa gagaagcaat actatatttc 780[0549] ttccacaaga actttgaaga agagataagg agaatgtttg agccagggca agagacagct 840[0550] gttcctcact cttatttcat tcacttccgt tcactaggct tgagtgggaa gtctccttat 900[0551] tcatcaaatg ccgtcggtca tgtgttcaat ctcattcact ttgttggatg ctatatgggt 960[0552] caagtcagat ctctaaatgc aacggttatt gctgcatgtg cccctcatga gatgtctgtt 1020[0553] ctagggggct atttgggaga ggagttcttc ggaaaaggga catttgaaag aaggttcttc 1080[0554] agagacgaga aagaacttca agaatatgag gcggctgaac tgacaaagac cgacgtggca 1140[0555] ctggcagatg acggaaccgt caactccgat gacgaggact acttctccgg tgaaaccaga 1200[0556] agtccagaag ctgtctatac tcgaatcatg atgaatggag gtcgactgaa gagatcacat 1260[0557] atacggagat atgtctcagt cagttccaat catcaagccc gtccaaactc attcgccgaa 1320[0558] tttttaaaca aaacgtattc gagtgactca taa 1353[0559] <210>6

[0560] <211>894

[0561] <212>DNA

[0562] <213>狂犬病病毒

[0563] <400>6

[0564] atgagcaaga tctttgttaa tccgagtgca atcagagccg gtctggccga tcttgagatg 60[0565] gccgaagaga ctgttgatct gatcaacaga aacatagaag acaatcaggc tcatctccag 120[0566] ggagaaccca tagaagtgga caatctccct gaggacatga ggcaatttca cctgggcgat 180[0567] gaaaaattgt ccaaccttgg tgagatggtt agggtgggcg aaggcaagta tcgagaggac 240[0568] tttcagatgg atgagggaga ggaccccaac ctcctgttcc aatcgtacct ggacaatgtt 300[0569] ggagtccaaa tagtcagaca aatgaggtca ggagagagat tcctcaagat atggtcacag 360[0570] accgtagagg aaattatatc ctatgtcacg gtcaactttc ctaaccctcc aggaaggtct 420[0571] tcggaggata aatcaaccca aactactggc cgggagctca agaaggagac aacatccact 480[0572] ctttctcaga gagaaagcca accttcaaaa gccggaatgg tggctcaagt tgcctctggc 540[0573] cctccatccc ttgaatggtc tgccaccaat gaagaggatg atctatcagt agaggctgag 600[0574] atcgctcatc agattgctga aagcttttcc aagaagtaca agtttccctc tcgatcttca 660[0575] ggaatattct tgtataattt tgagcaactg gagatgaacc ttgatgacat agttaaagag 720[0576] gcaaaaaatg taccgggcgt gacccgtctg gcccatgatg gatccaaaat ccccctaaga 780[0577] tgtgtactgg gatgggtcgc tttggccaac tccaagaaat tccaattgat agtcgaggcc 840[0578] gacaagctaa gcaaaatcat gcaagatgac ttggatcgct acacatcatg ctaa 894[0579] <210>7

[0580] <211>6384

[0581] <212>DNA

[0582] <213>狂犬病病毒

[0583] <400>7

[0584] atgctggatc cgggagaggt ttatgatgac cctattgatc caattgagtc agaggctgaa 60[0585] cccagaggaa cccccactgt ccccaacatc ttgaggaact ctgactacaa tctcaactct 120[0586] cctttgatag aggactctgc caaactaatg ttagaatggt tgaaaacagg gaacagacct 180[0587] tatcggatga ctttgacaga caattgctcc aggtcttaca aagttttgaa agattatttc 240[0588] aagaaagtag atttgggttc tctcaaagtg ggaggaactg ctgcacaatc aatgatttct 300[0589] ctctggttgt atggagccca ctctgagtca aacaggagcc ggagatgtat aaccgacttg 360[0590] gcccatttct attccaagtc atcccccata gagaagctgt tgaattgtac gttaggaaac 420[0591] agaggcctga gaatcccacc agagggggtg ttaagttgcc ttgagagggt cgattatgat 480[0592] aaggcatttg ggaggtatct ggccaacacg tattcctctt atctgttttt ccatgtaatt 540[0593] accttataca tgaatgccct agactgggaa gaggaaaaaa ccatcctagc attatggaaa 600[0594] gatctaacct cagtggatac cgggaaggac ttggtcaaat tcaaagatca aatatgggga 660[0595] ctgctggttg tgacaaagga ctttgtttac tctcagagtt ctaactgtct ttttgacaga 720[0596] aactatacac tgatgctaaa ggatcttttc ttgtctcgat tcaactcctt gatgattttg 780[0597] ctttctcccc ctgagccccg atactcagat gacttaatat ctcagctgtg ccagctatac 840[0598] atcgctgggg atcaagtctt gtccttgtgt gggaactccg gctatgaagt catcaaaata 900[0599] ttggagccat atgtcgtgaa cagtttggtc cagagggcag agaagtttag gcctctcatc 960[0600] cactccttgg gagactttcc tatgtttata aaagacaagg tgaatcaact tgaagggact 1020[0601] ttcggtccca gtgcaaaaag gttttttagg gttctagatc aattcgacaa catacatgat 1080[0602] ctagtatttg tgtatggctg ttacagacat tgggggcacc cctatataga ttatcggaag 1140[0603] ggtctgtcga aactatatga tcaagttcac attaagaaag taatagataa gtcctaccag 1200[0604] gagtgtttag caagtgactt ggctagaagg atcctcagat ggggatttga caagtactcc 1260[0605] aagtggtatc tagattcgag attccttgcc ctagaccacc ccttggctcc ttatatcaag 1320[0606] acccaaacat ggccacccaa acatatagta gacttggtgg gggacacatg gcacaagctc 1380[0607] ccgatcacgc agatctttga gattcctgaa tcaatggacc cgtcagagat actggatgat 1440[0608] aaatcacatt ctttcaccag aacaagacta gcttcttggc tgtccgagaa ccgagggggg 1500[0609] cctgttccta gcgagaaggt cattatcacg gccctgtcta agccacctgt caatccccga 1560[0610] gagtttttga aatctatcga cctcggagga ttgccagatg atgacttgat aattggcctc 1620[0611] agaccaaagg aacgggagtt gaagattgag ggccgattct tcgctctaat gtcatggaat 1680[0612] ctaagattat attttgtcat caccgagaag ctcttggcca actacatttt gccacttttt 1740[0613] gacgcactga ctatgacaga caacctgaac aaggtattta aaaagttgat cgacagggtc 1800[0614] accgggcaag ggcttttgga ctattcgagg gtcacatacg catttcacct ggactatgag 1860[0615] aaatggaaca atcatcaaag attggagtca acggaggatg tattttctgt cctagatcag 1920[0616] gtgtttggat tgaagagggt gttttctaga acacacgagt tttttcagaa gtcctggatc 1980[0617] tattattcag acagatcaga cctcattggg ttacgggagg atcagatata ttgcttggat 2040[0618] atgtccaatg gtccaacctg ctggaatggc caagacggcg ggctagaggg cttacggcag 2100[0619] aagggctgga gtctagtcag cttattgatg atagatagag aatctcaaac caggaacaca 2160[0620] agaaccaaga tactagctca aggagacaac caggttctgt gtccgacata catgttgtca 2220[0621] ccgggattgt ctcaagaggg gcttctctat gagttagaga gcatatcgag gaatgcactc 2280[0622] tcaatatacc gagctatcga ggaaggagca tctaaactgg ggctgatcat caagaaagaa 2340[0623] gagaccatgt gtagttatga ctttctcata tatgggaaga cccccttatt tcgaggcaac 2400[0624] atattagtac ctgaatccaa aagatgggcc cgagtctctt gcatctctaa cgaccaaata 2460[0625] gtcaacctcg ccaatataat gtctacagta tccaccaatg cgctgacagt ggcacaacac 2520[0626] tctcaatctc tgatcaaacc tatgagggat tttctgctca tgtcagtaca ggcagttttc 2580[0627] cactacctgc tgtttagccc aatcttaaaa ggcagggttt ataagattct gagtgctgaa 2640[0628] ggggagagct ttctcctagc catgtcgcgg ataatctacc tagatccttc tttgggaggg 2700[0629] gtgtctggaa tgtctctcgg gaggttccat atacgtcagt tctcagaccc tgtctctgaa 2760[0630] gggttgtcat tctggagaga gatctggtta agctcccatg aatcctggat tcacgcgttg 2820[0631] tgtcaagagg ccgggaaccc cgatcttgga gagagaacac tagagagctt cactcgcctt 2880[0632] ttagaagatc ctactacctt aaatatcaaa ggaggggcca gtcctaccat tctactcaag 2940[0633] gatgctatca gaaaggctct gtacgacgag gtggacaagg tggaaaattc agagtttcga 3000[0634] gaggcaatcc tgttgtccaa gacccataga gataacttta tactcttttt aaaatctgtt 3060[0635] gagcctctgt tccctcgatt tctcagtgaa ctcttcagtt cgtccttctt gggaatacca 3120[0636] gagtcaatta ttggactgat acaaaactcc aggacaataa gaaggcagtt tagaaagagt 3180[0637] ctctcaagaa ctttagaaga gtccttctac aactcagaga tccacgggat taatcggatg 3240[0638] acccagacac ctcaaagggt cgggagagtg tggccttgct cttcagagag ggcagatcta 3300[0639] cttagggaga tctcttgggg aaggaaagtg gtaggcacga cagttcctca cccttccgag 3360[0640] atgttggggc tgcttccaaa atcctctatt tcctgcactt gtggagcaac agggggaggc 3420[0641] aatcctagag tttctgtatc agtactcccg tccttcgatc agtcattttt ttcacgaggt 3480[0642] cccctaaagg gatacttggg ctcgtccacc tccatgtcaa cccagctatt ccatgcatgg 3540[0643] gaaaaagtca ctaatgttca tgtggtgaaa agggctatat cgttaaaaga atctataaac 3600[0644] tggttcatca atagaaattc caatttggct caaactctaa ttagaaacat catgtctctg 3660[0645] acaggccctg atttccctct agaagaggct cctgttttca aacggacagg gtcagccttg 3720[0646] cataggttca agtctgccag atacagcgaa ggagggtatt cttctgtttg tcctaacctt 3780[0647] ctctctcata tctctgtcag tacagacact atgtctgatt tgacccaaga cgggaagaac 3840[0648] tatgatttca tgtttcagcc attgatgctt tatgcgcaaa catggacatc agagctggta 3900[0649] cagagagaca caagactgag agactccacg tttcactggc accttcgatg caacagatgt 3960[0650] gtaaggccca ttgaggatat aacactggaa acttctcaga tcttcgagtt cccggatgtg 4020[0651] tcaaaaagga tatccaggat ggtttctgga gccgtccctc actttcagaa gcttcctgat 4080[0652] atccgtctaa gaccaggtga ttttgaatct ctaagtggta gagaaaagtc tcgccacata 4140[0653] gggtcagctc aggggctctt atactcaatc ttagtagcaa ttcacgattc aggatacaat 4200[0654] gatgggacca tcttccctgt caacatatac ggcaaagttt cccctagaga ctatttgaga 4260[0655] gggctcgcaa gagggatctt gataggatcc tcgatttgct tcttgacacg aatgacaaat 4320[0656] attaatatta aaagacctct tgaattgatc tcaggggtaa tttcctatat tctcctgagg 4380[0657] ctggataatc atccctctct gtatataatg cttagagaac cgtctcttag aggagagata 4440[0658] ttctctatcc ctcagaaaat ccccgccgct tacccaacca ctatgaaaga aggcaacaga 4500[0659] tcgatcttgt gttacctcca acacgtgcta cgctatgagc gagaagtaat cacggcgtcc 4560[0660] ccggagaatg actggctgtg gatcttctca gacttcagaa gtgcgaaaat gacgtacttg 4620[0661] accctcatta cctaccagtc tcacctccta ctccagaggg ttgagcgaaa cttgtctaag 4680[0662] agtatgagag ctactctgcg acaaatgggt tccttaatga ggcaagtgct gggtgggcac 4740[0663] ggagaagaca ccttggagtc agacgacgac attcaacgat tactaaaaga ctctttgcga 4800[0664] aggacaaggt gggtagatca agaggtgcgc catgcagcta gaaccatgag tggagattac 4860[0665] agccccaaca agagagtatc ccgcaaggca ggatgttcag aatgggtctg ctctgctcaa 4920[0666] caggttgccg tctccacctc agccaacccg gcccctgtct cagagcttga cattagggcc 4980[0667] ctatctaaga ggtttcaaaa ccccttgatc tcgggcctaa gagtggttca gtgggcaacc 5040[0668] ggcgcccatt ataagcttaa gcctattcta gatgatctaa atgttttccc atctctctgt 5100[0669] cttgttgttg gagacgggtc agggggaata tcaagggcag ttctcaacat gtttccagat 5160[0670] tctaagcttg tgttcaacag cctattggag gtgaatgatc tgatggcttc cggaacacat 5220[0671] ccactgcctc cttcagcaat catgagtgga ggagatgata tcatctccag agtgatagac 5280[0672] tttgactcaa tctgggaaaa accatccgac ctgaggaact tggccacctg gagatacttc 5340[0673] cagtcagttc aaaagcaggt caacatgtcg tatgacctca ttgtttgtga tgcagaagtt 5400[0674] actgatattg catctatcaa ccggataact ctgttgatgt ctgatttcgc attgtctata 5460[0675] gatggaccac tttatctggt cttcaaaact tacgggacta tgctagtgaa cccagactat 5520[0676] aaagctatcc aacatctgtc aagagcgttc ccttcggtca cagggtttat aacccaagta 5580[0677] acttcgtcct tttcttctga gctatacctc cggttctcca aacgagggaa gttttttagg 5640[0678] gatgctgagt acttgacctc ttccaccctt cgggagatga gccttgtgtt attcaattgt 5700[0679] agcagcccca aaagtgagat gcagagagct cgttccttaa actatcaaga tcttgtaagg 5760[0680] ggatttcctg aagagatcat atcaaatcct tacaatgaaa tgatcataac tctgattgac 5820[0681] agtgatgtag agtccttcct ggtccacaag atggtggatg atcttgagtt acagagggga 5880[0682] actctgtcta aagtggctat cattatatcc atcatgattg ttttttccaa tagagtcttc 5940[0683] aacatttcca aacctttgac tgaccccttg ttctatcccc catctgatcc taaaatcctg 6000[0684] aggcacttca acatatgttg cagtactatg atgtatctat ctaccgcttt aggcgacgtc 6060[0685] cctagcttcg caagacttca tgacctatat aatagaccta taacttatta cttcagaaag 6120[0686] caagttattc gagggaatat ttatctatct tggagctggt ccgatgacac cccagtgttc 6180[0687] aagagggtag cctgtaattc tagcttgagt ctgtcatctc actggatcag gttgatttac 6240[0688] aagatagtga agactaccag actcgttggc agcatagaag atctatcagg agaggtagaa 6300[0689] cgacacctgc atgggtacaa cagatggatc accctcgagg atatccgatc tagatcatcc 6360[0690] ctactagact acagttgttt gtaa 6384[0691] <210>8

[0692] <211>1801

[0693] <212>DNA

[0694] <213>狂犬病病毒

[0695] <400>8

[0696] aagtttatca cttgtttacc tctggaggag agaacatacg ggcttaactc caatccttgg 60[0697] gagcaataga acaaaaaaac acgccatggt gccattaaac cgctgcattt tatcaaagtc 120[0698] aagttaatta cctttacatt ttgagcctct tggatgtgaa aaaaactatt aacatccctc 180[0699] aaaagactta aggaaagatg gttcctcagg ttcttttgtt tgtacccctc ctgggttttt 240[0700] cattgtgttt cgggaagttc cccatttaca cgataccaga caaacttggt ccctggagcc 300[0701] ctattgacat acaccatctc agctgtccaa ataacctggt tgtggaggac gaaggatgta 360[0702] ccaacctgtc cgagttctct tacatggaac ttaaagtggg atacatctca gccataaaag 420[0703] tgaacgggtt cacttgcaca ggtgttgtga cagaggcaga aacctacacc aactttgttg 480[0704] gttatgtcac aaccacattc aagagaaagc atttccgccc caccccagac gcatgtagag 540[0705] ccgcgtataa ctggaagatg gccggtgacc ccagatatga agagtctcta cacaatccgt 600[0706] accccgacta ccattggctt cgaactgtaa aaaccaccaa agagtctctc gttatcatat 660[0707] ccccaagtgt gacagatttg gacccatatg acaaatccct tcactcaagg gtcttccctg 720[0708] gcggaaattg ctcaggaata acggtgtcct cgacctactg ctcaactaat catgattaca 780[0709] ccatttggat gcctgagaat ctgagactag ggacatcttg tgacattttt accaatagca 840[0710] gagggaagag ggcatccaaa ggaggcaaga cttgcggctt tgtggatgaa agaggcctgt 900[0711] ataagtctct aaagggagca tgcaaactca agttatgtgg agttctcgga cttagactta 960[0712] tggatggaac atgggtcgcg atgcaaacat cagatgagac caaatggtgc cctccaggtc 1020[0713] agttggtgaa tttgcacgac tttcgctcag acgagattga gcatctcgtt gtggaagagt 1080[0714] tagtcaagaa aagagaggag tgtctggatg cactagagtc catcatgacc accaagtcag 1140[0715] tgagtttcag acgtctcagt cacttgagaa aacttgtccc tgggtttgga aaagcatata 1200[0716] ccatattcaa caaaaccttg atggaggctg atgctcacta caagtctgtc cggacctgga 1260[0717] atgagatcat cccctcaaaa gggtgtttga gagttggggg gaggtgtcat ccccatgtga 1320[0718] acggggtgtt tttcaatggt ataatattag ggtctgacgg ccatgttcta atcccagaga 1380[0719] tgcagtcatc cctcctccag caacatatgg agttgttgga atcttcagtt atccccctga 1440[0720] tgcacccctt ggcagaccct tctacagttt tcaaagacgg tgatgaggtt gaggattttg 1500[0721] ttgaagttca cctccccgat gtgcatgaac aggtctcagg agttgaactg ggtctcccga 1560[0722] actgggggaa gtatgtattg atgattgcag gggccttgat tgccctgatg ttgataattt 1620[0723] tcctgatgac atgttgcaga agagtcaatc gaccagaatc tacgcaaagc agtcttggag 1680[0724] agacagggag aaatgtgtca gtcacttccc aaagcggaaa agtcatatct tcatgggagt 1740[0725] catataagag tggaggcgag accagactgt gaaggccggt catccttttg acacttcaag 1800[0726] t 1801