一种去除细胞内活性氧的方法
阅读：1043发布：2020-05-29
专利汇可以提供一种去除细胞内活性氧的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种去除细胞内 活性 氧 的方法，涉及活性氧去除技术领域。本发明所述方法仅仅采用高频超声 辐射 的作用实现对细胞内ROS的清扫，不需要添加其它辅助 试剂 或者颗粒；而且在进行超声辐射时，超声 频率 为1MHZ，功率和时间可调。在本发明 实施例 中，超声辐射作用下，细胞内ROS含量减少，即细胞内ROS得到清扫；且随着超声辐射的时间延长或者功率的增加，清除ROS的量在增加，说明超声辐射能够实现对细胞内ROS的清扫。，下面是一种去除细胞内活性氧的方法专利的具体信息内容。
一种去除细胞内活性氧的方法
技术领域
[0001] 本发明属于活性氧去除技术领域，具体涉及一种去除细胞内活性氧的方法。
背景技术
[0002] 人体内的自由基分为氧自由基和非氧自由基。氧自由基包括过氧化氢分子、羟自由基、过氧化羟基自由基、烷氧基自由基、超氧阴离子自由基等，他们统称为活性氧(reactive oxygen species,ROS)，是人体内最重要的自由基。生物体内活性氧的生成与清除处于动态平衡状态，各种因素打破这一平衡而导致活性氧浓度超过生理限度时就会损伤生物大分子，包括脂质过氧化、DNA的氧化损伤、蛋白质的氧化和单糖氧化等，从而导致各种疾病发生。
[0003] 经查100多种疾病的发生过程中，都有活性氧的参与，包括威胁人类健康的重大疾病癌症、心血管疾病、糖尿病、神经退行性(如帕金森病和阿尔兹海默症)、获得性免疫缺陷综合征、中风和衰老的发生。因此，清除细胞内活性氧成为延缓或者治疗疾病的一种方案。
[0004] 目前献中常使用的ROS抑制剂或清除剂有鱼藤酮(rotenone)、奥苷嘌醇(oxypurinol)、N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)、BHA丁基羟基茴香醚、BHT二丁基羟基甲苯、PG没食子酸丙酯VC、异抗坏血酸钠、植酸、茶多酚等。还有一些纳米颗粒，他们通过纳米颗粒的运动或者在红外光下特异性的清除细胞内活性氧。细胞内活性氧的清除有助于对相应疾病的协同治疗。但是上述这些方法都需要吞服药物或者纳米颗粒，然而药剂的服用都具有一定的毒副作用。
发明内容
[0006] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0007] 本发明提供了一种去除细胞内活性氧的方法，所述方法包括：将细胞置于高频超声辐射环境中，所述高频超声辐射的功率为0.01W～1.0W，所述高频超声辐射的辐射时间为1～60s，所述高频超声辐射的频率为1MHZ。
[0008] 优选的，所述高频超声辐射体系中还包括Hank's平衡盐溶液。
[0009] 优选的，当细胞数量为1×105个时，所述高频超声辐射体系中Hank’S平衡盐溶液的体积为10mL。
[0010] 本发明提供了一种去除细胞内活性氧的方法，仅仅采用高频超声辐射的作用实现对细胞内ROS的清扫，不需要添加其它辅助试剂或者颗粒；而且在进行超声时，超声频率为1MHZ，功率和时间可调。在本发明实施例中，超声辐射作用下，细胞内ROS含量减少，即细胞内ROS得到清扫；且随着超声辐射的时间延长或者功率的增加，清除ROS的量在增加，说明超声辐射能够实现对细胞内ROS的清扫。
附图说明
附图说明
[0011] 图1为超声辐射试验平台示意图；
[0012] 图2为超声辐射不同时间下清除ROS的量；
[0013] 图3为在超声辐射不同功率下清除ROS的量。
具体实施方式
[0014] 本发明提供了一种去除细胞内活性氧的方法，所述方法包括：将细胞置于高频超声辐射环境中，所述高频超声辐射的功率为0.01W～1.0W，所述高频超声辐射的辐射时间为1～60s，所述高频超声辐射的频率为1MHZ。
[0015] 本发明所述方法中，所述高频超声辐射体系中优选还包括Hank’s平衡盐溶液；当细胞数量为1×105个时，所述高频超声辐射体系中Hank’s平衡盐溶液的体积优选10mL。在本发明实施例中，在激光共聚焦小皿(直径为35mm)中进行实验，即Hank’s平衡盐溶液的液面距离底部距离为10mm。
[0016] 在本发明实施例中，以脐静脉内皮细胞HUVEC为例进行验证，结果发现在0.2W超声辐射，辐射时间为1s、3s、5s情况下，随着时间的增加，清除ROS的量在持续增加，说明超声辐射能够实现对细胞内ROS的清扫。同时还发现，在辐射时间为3s，超声辐射功率为0.2W和0.5W时，随着功率的增加，清除ROS的量在持续增加，说明超声辐射能够实现对细胞内ROS的清扫。
[0017] 下面结合实施例对本发明提供的去除细胞内活性氧的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
[0018] 实施例1
[0019] 1、准备便于共聚焦观察的细胞样品(以脐静脉内皮细胞HUVEC为例)HUVEC细胞1x105个种于激光共聚焦小皿(直径为35mm)中，细胞培养箱内培养24小时。弃去上清，PBS清洗2遍，用活性氧(ROS)试剂盒，试剂浓度为0.8μm/L孵育细胞25分钟。PBS清洗3遍加入Hank’s平衡盐溶液(10mL)溶液室温孵育40分钟，细胞内ROS含量达到稳定平衡状态。
[0020] 2、不同时间超声辐射细胞
[0022] 辐射过程中，超声波换能器刚刚垂直淹没于共聚焦小皿液面下面，共聚焦小皿内Hank’s平衡盐溶液液面距离小皿底部10mm。
[0023] 3、不同功率超声辐射细胞
[0024] 在如图1所示的装置中，超声信号发生器输入功率为0.2W和0.5W，超声辐射时间设定为3s，超声频率为1MHZ，超声波换能器直径为15mm。
[0025] 辐射过程中，超声波换能器刚刚垂直淹没于共聚焦小皿液面下面，共聚焦小皿内Hank’s平衡盐溶液液面距离小皿底部10mm。
[0026] 4、共聚焦检测
[0027] 超声辐射结束后，共聚焦小皿放置于激光共聚焦显微镜下观察，结果如图2和图3所示，超声辐射作用下，细胞内ROS含量减少，即细胞内ROS得到清扫；且随着超声辐射的时间延长或者超声辐射功率的增加，清除ROS的量在增加，说明超声辐射能够实现对细胞内ROS的清扫。
[0028] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
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