1.发明领域

本发明涉及用于治疗卵巢癌的方法，更具体地说，本发明涉及从 可生物降解的聚(含磷酸酯)组合物中延长释放抗治疗剂的那些方法。

2.相关领域的描述

时常将诸如紫杉醇这样的抗肿瘤剂用于治疗卵巢癌。例如，本领 域技术人员已经尝试给患有卵巢癌的妇女腹腔输注紫杉醇的生理盐水 溶液作为一周一次的延长系列治疗手段。参见，Francis等的“每周 一次腹膜内给予紫杉醇的I期可行性和药理研究：妇科肿瘤学类别导 向研究”(Phase I Feasibility and Pharmacologic Study of Weekly Intraperitoneal Paclitaxel：A Gynecologic Oncology Group Pilot Study)-《临床肿瘤学杂志》(J of Clinical Oncology)13：12， 1961-67(1995)。然而，在为达到这种治疗手段的功效而需要使用高 液体体积和药物剂量时通常遇到诸如腹痛、恶心、呕吐、白细胞减少 和疲劳这样的多重毒性问题。此外，重复给药和伴随的不适感对患者 来说不利且有时甚至是不可接受的。

因此，存在对体内使各种不同的抗治疗剂以控释方式进入腹膜的 方法需求，无论这些抗肿瘤剂是诸如紫杉醇这样的较小的疏水性药物 还是诸如有治疗用途的蛋白质这样的较大和庞大的生物大分子。优选 抗肿瘤剂应在不需显著量的诸如生理盐水或有机溶剂这样生理上可接 受的液体载体存在的情况下有效释放。另外，对可生物降解的聚合物 组合物存在持续的需求，这种聚合物组合物可以以可将软组织周围的 损伤减小到最低限度的方式产生延长释放的效果。

已经将可生物降解的聚合物用于各种治疗药物的递送和医用植入 物的应用中。如果将医用植入物用作药物递送或其它控释系统，那么 使用可生物降解的聚合物载体是一种以局部和受控方式递送所述治疗 剂的有效方式，参见Langer等的“作为控释生物活性剂载体的聚合物 的化学和物理结构”(Chemical and Physical Strutures of Polymers as Carriers for Controlled Release of Bioactive Agents)-《大 分子科学、大分子物化综述杂志)》(J.Macro.Science，Rev.Macro. Chem.Phys.)C23(1)，61-126(1983)。在这种方式中，要求药物 的总量较小并可以将毒副作用减小到最低限度。

有时将聚合物用作实现局部释放和缓释的治疗剂的载体。参见 Leong等的聚合物控制的药物递送”(Polymeric Controlled Drug Delivery)-《药物递送进展综述》(Advanced Drug Delivery Rev.) 1：199-233(1987)；Langer的“药物递送新方法”(New Methods of Drug Delivery)-《科学》(Science)249：1527-33(1990)和Chien 等的《新型药物递送系统》(Novel Drug Delivery Systems)(1982)。 这类递送系统具有提高治疗功效并降低总体毒性的能力。已经作为能 够生物降解的固体物质研究的合成聚合物种类的实例包括：聚酯类 (Pitt等“以脂族聚酯类为基础的可生物降解的药物递送系统：在避 孕药和麻醉药拮抗剂中的应用”(Biodegradable Drug Delivery Systems Based on Aliphatic Polyesters：Applications to Contraceptives and Narcotic Polyesters)-《生物活性物质的受 控释放》(Controlld Release of Bioactive Materials)19-44 (Richard Baker编辑，1980))；聚(氨基酸)和假聚(氨基酸)(Pulapura 等的“医疗应用的生物重吸收聚合物的进展方向”(Trends in the Development of Bioresorbable Polymers for Medical Applications)-《生物物质应用杂志》(J.Biomaterials Appl.) 6：1，216-50(1992))；聚氨基甲酸酯类(Bruin等的“人造皮肤中以 可生物降解的赖氨酸二异氰酸酯为基础的聚(乙交酯-co-ε己内酯)- 尿烷网状结构”(Biodegeadable Lysine Diisocyanate-based Poly(Glycolide-co-εCaprolactone)-Urethane Network in Artificial Skin)-《生物物质》(Biomaterials)11：4，291-95 (1990))；聚(原酸酯)(Heller等，“炔诺酮从聚(原酸酯)中的 释放”(Release of Norethidrone from Poly(Ortho Esters))，《聚 合物工程科学》(Polymer Engineering Sci.)21：11，727-31(1981))； 和聚酐类(Leong等的“用于控释生物活性物质的聚酐类” (Polyanhydrides for Controlled Release of Bioactive Agents) -《生物物质》(Biomaterials)7：5，364-71(1986))。

带有磷酸酯键的称作聚(磷酸酯)poly(phosphates)、聚(膦酸 酯)和聚(亚磷酸酯)的聚合物是公知的。参见Penczek等的《聚合 物合成手册》(Handbook of Polymer Synthesis)第17章：“含磷聚 合物”(Phosphorus-Containing Polymers)(Hans R.Krichldorf 编辑，1992)。各自带有与磷原子连接的不同侧链的这三类化合物的相 应结构如下：    聚磷酸酯                         聚膦酸酯 聚亚磷酸酯

这些聚合物的多用途来源于磷原子的多用途，这对多数反应来说 是公知的。其结合可以包括3p轨道或各种3s-3p氢化物；spd氢化物 因可进入d轨道而也是可能的。因此，通过改变R或R’基团可以方便 地改变聚(含磷酸酯)(poly(phosphoesters))的物化特性。聚合物 的生物降解性主要是由于该聚合物主链上生理上不稳定的磷酸酯键所 导致的。通过控制主链或侧链可以实现广泛的生物降解率。

聚(含磷酸酯)的其它特性是功能性侧链的有效性。因为磷可以 是五价的，药物分子或其它生物活性物质可以与该聚合物以化学方式 连接。例如，带有-O-羧基的药物可以通过可水解的磷酸酯键与磷偶联。 参见Leong的美国专利号5,194,591和5,256,765。主链上P-O-C基 也可以降低聚合物的玻璃化转变温度且重要的是它可以产生在常用有 机溶剂中的溶解性，对于特征化和加工来说，这是理想的。

共同待审美国申请顺序号09/053,648和WO98/44021中公开了 可生物降解的对苯二甲酸聚酯-聚(磷酸酯)组合物；美国中请顺序号 09/053,649和WO98/44020中公开了含有由磷酸酯类链延伸的聚合物 的可生物降解的组合物；且美国申请号09/070,204和国际申请号 PCT/US98/09185中公开了包括聚(环脂族磷酸酯)化合物的可生物降 解的组合物。然而，这些公开文献中没有一篇提示可生物降解的聚(含 磷酸酯)组合物在特异性治疗卵巢癌中的特殊应用。

因此，仍然对新方法和物质存在需求，这些新方法和物质可以成 功治疗卵巢癌疑难问题而将不适感、毒性和延长的周期性再给药降低 到最低限度。

发明概括

目前已经发现可生物降解的聚合物组合物，包括：

(a)至少一种抗肿瘤剂和

(b)一种可生物降解的聚合物，它包括通式I中所示的重复单体 单元：

其中X是-O-、或-NR4-，其中R4是H或烷基；

Y是-O-、-S-或-NR4-；

R1和R2各自为二价有机部分；

L是带有1-20个碳原子的二价的支链或直链脂族基、环脂族基 或具有下列通式的基团： R3选自H、烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、杂环基或杂环氧基 (heterocycloxy)组成的组；且

n约为5-5,000；

其中所述的聚合物组合物适合于腹膜内给药来治疗患有卵巢癌的 哺乳动物受治疗者。这些聚合物组合物可使所述抗肿瘤剂释放入所述 受治疗者腹膜内的时间延长；此外，与通过给予含有相同剂量的所述 抗肿瘤剂而不含本发明所述可生物降解的聚合物的组合物所获得的中 数生存率相比，本发明的聚合物组合物可使癌症患者的中数生存率至 少提高约10％。

本发明还包括一种适合于插入腹膜内以治疗患有卵巢癌的哺乳动 物受治疗者的固体制品(solid article)，该制品包括一种可生物降 解的聚合物组合物，它包括：

(a)至少一种抗肿瘤剂和

(b)一种包括上述通式I中所示重复单体单元的可生物降解的聚 合物。

在本发明的另一个实施方案中，提供了一种通过延长释放的抗肿 瘤剂而用于治疗患有卵巢癌的哺乳动物受治疗者的方法，该方法包括 下列步骤：

(a)将所述的抗肿瘤剂与一种具有上述通式I所示重复单体单元 的可生物降解的聚合物组合而制成一种组合物；和

(b)体内将所述的组合物插入所述受治疗者的腹膜内，使得插入 的组合物至少部分与卵巢癌肿瘤接触；

其中与通过给予含有相同剂量的所述抗肿瘤剂而不含所述的可生 物降解的聚合物的组合物所获得的中数生存率相比，所述癌症患者的 中数生存率至少提高约10％。

可以将本发明的组合物用于在延长的时间期限内递送例如，从诸 如紫杉醇这样的疏水性药物到诸如蛋白质这样的高水溶性大分子的各 种各样的抗肿瘤剂而不要求显著体积的递送液体。由此可以将本发明 的方法用于显著增加时间期限，在此过程中，有效剂量的抗肿瘤剂被 释放且通过本方法治疗的受治疗者的存活时间增加到令人意外的程 度。此外，可以以治疗方式控制卵巢癌严重疾病而将副作用减小到最 低限度且没有将显著量液体导入腹膜的周期性系列非肠道治疗手段中 的不愉快和不适感。

附图简述

附图1A表示1H-NMR光谱，且附图1B表示P(BHET-EOP/TC，80/20) 的31P-NMR光谱。

附图2表示P(BHET-EOP/TC，80/20)的FT-IR光谱。

附图3A表示P(BHET-EOP/TC，80/20)和P(BHET-HOP/TC，90/10) 分子量以及的元素分析；且附图3B表示P(BHET-EOP/TC，80/20)的 GPC色谱图。

附图4A表示P(BHET-EOP/TC，80/20)的DSC曲线；且附图4B 表示P(BHET-EOP/TC，50/50)的DSC曲线。

附图5A和5B表示P(BHET-EOP/TC，80/20)和P(BHET-EOP/TC， 85/15)的体外降解数据。

附图6表示体外降解过程中P(BHDPT-EOP)和P(BHET-EOP/TC) 聚(含磷酸酯)的分子量改变。

附图7A和7B表示以重量或质量减轻为依据的P(BHET-EOP/TC) 的体外降解情况；附图7C表示诸如紫杉醇这样的疏水性小分子从p (BHET-EOP/TC，80/20)膜中受控释放的情况。

附图8表示含有FITC-BSA的P(BHET-EOP/TC，80/20)微球体的 电子显微镜照片。

附图9A表示填充量(loading level)对FITC-BSA从微球体中 的释放动力学的影响；且9B表示诸如紫杉醇这样的疏水性小分子从 CHDM聚合物中受控释放的情况。

附图10表示利多卡因从共聚物P(BHET-EOP/TC)微球体中释放 的情况。

附图11表示P(BHET-EOP/TC，80/20)微球体的细胞毒性。

附图12表示相对细胞生长(％)对组织培养孔中4种独立的聚合 物的降解的聚合物浓度(mg/ml)的毒性试验图。

附图13表示P(BHET-EOP/TC，80/20)微球体的细胞毒性。

附图14表示本发明聚合物P(LAEP-EOP)的1H-NMR光谱。

附图15表示本发明聚合物P(LAEP-EOP)的31P-NMR光谱。

附图16A和16B表示本发明两种聚合物的差示扫瞄量热数据。

附图17图形表示本发明聚合物的GPC分析结果。

附图18表示在室温下与空气接触1个月后本发明两种聚合物的 Mw改变。

附图19表示室温下本发明聚合物的贮存稳定性数据。

附图20A和20B表示在37℃下的PBS中8天期限内由本发明两种 聚合物制成的圆片的重量减轻(21A)和Mw改变(21B)。

附图21A和21B表示由本发明两种聚合物制成的圆片的体外重量 减轻(22A)和Mw改变(22B)。

附图22表示本发明聚合物的生物相容性数据。

附图23表示本发明聚合物微球体P(LAEG-EOP)的细胞毒性数据。

附图24A表示制备方法对本发明聚合物微球体的释放比例的影 响；且24B表示利多卡因从本发明聚合物微球体中的释放比例。

附图25(A)-25(E)均表示体外p(DAPG-EOP)聚合物的降解 和释放数据。

附图26表示由31P-NMR和1H-NMR测定的P(反式-CHDM-HOP)的 结构。

附图27表示P(顺式-/反式-CHDM-HOP)的色谱图和分子量分布。

附图28A以图形方式表示作为P(顺式-CHDM-HOP)频率的函数的 活性能量；且28B表示相应的粘度。

附图29A表示培养72小时后生长在P(CHDM-HOP)表面的HEK293 细胞；且附图29B表示培养72小时后生长在TCPS表面的HEK293细胞。

附图30以图形方式表示侧链结构对本发明三种聚(含磷酸酯)在 磷酸盐缓冲溶液中的体外降解率的影响。

附图31表示在33％的填充量下生物大分子FITC-BSA从聚合物P (CHDM-HOP)中的释放曲线。

附图32以图形方式表示作为30％、10％和1％的填充量的函数的 FITC-BSA的体外释放动力学。

附图33以图形方式表示侧链结构对具有10％填充量的FITC-BSA 的蛋白质释放动力学的体外影响。

附图34表示低分子量药物(阿霉素、顺铂和5-氟尿嘧啶)从P (CHDM-HOP)中释放的情况。

附图35表示组织培养基中IL-2从P(CHDM-HOP)中释放的校准 曲线。

附图36表示在体内黑素瘤模型中进行肿瘤移植后4周的小鼠体内 肿瘤大小分布。

附图37表示在体内黑素瘤模型中进行肿瘤移植后6周的小鼠体内 肿瘤大小分布。

附图38表作为体内黑素瘤模型中4个不同治疗组的时间函数的存 活百分比。

附图39表示本发明两种聚合物组合物的释放曲线，一种在聚合物 P(CHDM-EOP)中包括化疗剂紫杉醇而另一种在聚合物P(CHDM-HOP) 中包括紫杉醇。

附图40表示溶于溶剂中的紫杉醇和在p(DAPG-EOP)中的紫杉醇 对卵巢癌动物模型(OVCAR3)的功效。

附图41表示含有紫杉醇的p(DAPG-EOP)对OVCAR3卵巢癌动物 模型的功效。

附图42表示含有紫杉醇的p(DAPG-EOP)对OVCAR3卵巢癌动物 模型的功效。

附图43表示含有紫杉醇的p(DAPG-EOP)对OVCAR3卵巢癌动物 模型的进一步功效数据。

附图44表示含有紫杉醇的p(DAPG-EOP)对OVCAR3卵巢癌动物 模型的再进一步的功效数据。

发明详述 本发明的聚合物组合物

本文所用的表达术语“哺乳动物受治疗者”指的是任意的哺乳动 物受治疗者，诸如小鼠、大鼠、豚鼠、猫、狗、人、牛、马、绵羊或 其它家畜。表达术语“患有卵巢癌的哺乳动物受治疗者”包括、但不 限于：患有该疾病的一般性症状的受治疗者；从诸如外科手术、化疗 或其它疗法这样的针对该疾病的其它治疗方式中恢复的受治疗者；和 单纯认为是高于卵巢癌平均危害的受治疗者，诸如那些至少部分从过 去的疾病中恢复的受治疗者或那些根据即将患有或已经患有该疾病所 诊断的大量女性受治疗者。

本文所用的术语“治疗”包括：

(i)预防已经预处理疾病、疾患和/或疾病情况而尚未诊断为患 有该疾病的动物发生疾病、疾患或疾病情况。

(ii)抑制疾病、疾患或疾病情况，即阻止其发展；和

(iii)缓解疾病、疾患或疾病情况，即使疾病、疾患和/或疾病 情况退化。

术语“脂族”指的是直链、支链的或环状的烷烃、烯烃或炔烃。 本发明聚(环脂族聚含磷酸酯)组合物中优选的直链或支链脂族基带 有约1-20个碳原子。优选的环脂族基可以带有一个或多个不饱和位 置即双键或三键、而性质上不是芳香基。

本文所用的术语“芳基”指的是带有4n+2π个电子的不饱和环碳 化合物。本文所用的术语“杂环”指的是环上带有一个或多个非碳原 子的饱和或不饱和环化合物，所述的非碳原子例如是氮、氧或硫。“杂 芳基”指的是带有4n＋2个电子的的杂环化合物。

本文所用的术语“非干扰取代基”指的是不与单体发生反应、不 催化、终止或以其它方式干扰聚合反应且不通过分子内或分子间反应 与所得聚合物发生反应的取代基。

本发明的可生物降解和可注射的聚合物组合物包括具有通式I中 所示的重复单体单元的聚合物：

其中X是-O-或-NR4-，其中R4是H或烷基，诸如甲基、乙基、1，2- 二甲基乙基、正丙基、异丙基、2-甲基丙基、2，2-二甲基丙基或叔丁 基、正戊基、叔戊基、正己基、正庚基等。

通式I中的基团Y是-O-、-S-或-NR4-；其中R4如上所定义。

R1和R2各自可以为二价有机部分，它们可以不被取代或被一个或 多个非干扰取代基所取代，条件是该部分及其取代基不以不需要的方 式干扰聚合物的聚合、共聚合或生物降解反应。特别地，R1和R2可以 各自为支链或直链脂族基，优选带有约1-20个碳原子。例如，R1和 R2可以是亚烷基，诸如亚甲基、亚乙基、1-甲基亚乙基、1，2-二甲基 亚乙基、正亚丙基、异亚丙基、2-甲基亚丙基、2，2’-二甲基亚丙基或 叔亚丁基、正亚戊基、叔亚戊基、正亚己基、正亚庚基、正亚辛基、 正亚壬基、正亚癸基、正亚十一烷基、正亚十二烷基等。

R1和R2还可以是亚链烯基，诸如亚乙烯基、亚丙烯基、2-乙烯基 亚丙烯基、正亚丁烯基、3-乙烯基亚丁基、正亚戊烯基、4-(3-丙烯基) 亚己基、正亚辛烯基、1-(4-丁烯基)-3-甲基亚癸基、亚十二碳烯基、 2-(3-丙烯基)亚十二烷基、亚十六碳烯基等。R1和R2还可以是亚炔基， 诸如亚乙炔基、亚丙炔基、3-(2-乙炔基)亚戊基、正亚己炔基、亚十 八炔基(octadecenynylene)、2-(2-丙炔基)亚癸基等。

R1和R2还可以是脂族基，诸如亚烷基、亚链烯基或亚炔基，它们 可以被例如羟基、卤素或氮基这样的非干扰取代基所取代。这类基团 的实例包括但不限于2-氯-正亚癸基、1-羟基-3-乙烯基亚丁基、2-丙 基-6-硝基-10-亚十二炔基等。

此外，R1和R2可以是环脂族基，诸如亚环戊基、2-甲基亚环戊基、 亚环己基、亚环己烯基等。R1和R2各自还可以是诸如亚苯基、亚苄基、 亚萘基、亚菲基等这样的二价芳香基或被非干扰取代基所取代的二价 芳香基。此外，R1和R2各自可以是诸如亚吡咯基、亚呋喃基、亚苯硫 基、亚烷基-亚吡咯基-亚烷基、亚吡啶基(pyridylene)、亚吡啶基 (pyridinylene)、亚嘧啶基等这样的二价杂环基或可以是被非干扰取 代基所取代的这些基团中的任意基团。

优选R1和R2带有约1-20个碳原子且是亚烷基、环脂族基、亚苯 基或具有下列通式的二价基团：

其中Z是氧、氮或硫，且m是1-3。更优选R1和R2各自为具有1 -7个碳原子的支链或直链亚烷基。最优选R1和R2各自为亚甲基、亚 乙基、正亚丙基、2-甲基-亚丙基或2，2’-二甲基亚丙基。

在本发明的一个实施方案中，R1、R2或R1和R2两者可以是能够在 生理环境中被释放的形式的抗肿瘤剂。当在这种方式聚(含磷酸酯) 主链上的抗肿瘤剂部分时，它在由本发明组合物形成的聚合物基质降 解时被释放出来。

本发明聚合物组合物中的L可以是带有1-20个碳原子的二价的 支链或直链脂族基、环脂族基或具有下列通式的基团：

当L是支链或直链亚烷基时，优选亚烷基带有1-7个碳原子，诸 如2-甲基亚甲基或亚乙基。当L是环脂族基时，它可以是任意的二价 环脂族基，条件是它不会干扰组合物中聚合物的聚合或降解反应。有 用的未取代和取代的环脂族L基团的具体实例包括：诸如亚环戊基、 2-甲基亚环戊基、亚环己基、2-氯亚环己基等这样的亚环烷基；诸如 亚环己烯基这样的亚环链烯基；以及在一或多侧带有稠合或桥连的另 外的环状结构的亚环烷基，诸如亚四氢化萘基、亚十氢化萘基和亚降 蒎烷基等。

本发明聚合物组合物中的R3选自H、烷基、烷氧基、芳基、芳氧 基、杂环基或杂环氧基残基组成的组。

当R3是烷基或烷氧基时，它优选含有约1个-约20个碳原子、 甚至更优选约1个-约15个碳原子且最优选约1-7个碳原子。这类 基团的实例包括：甲基、甲氧基、乙基、乙氧基、正丙基、异丙氧基、 正丁氧基、叔丁基、-C8H17；被非干扰取代基所取代的烷基，所述的非 干扰取代基诸如卤素、烷氧基或硝基；与生物活性物质连接而形成侧 链(pendant)药物递送系统的烷基等。

当R3是芳基或相应的芳氧基时，它一般含有约5个-约14个碳 原子、甚至更优选约5个-约12个碳原子且可以含有彼此稠合的一个 或多个环。特别合适的芳香基的实例包括：苯基、苯氧基、萘基、蒽 基、菲基等。

当R3是杂环基或杂环氧基时，它一般含有约5个-约14个环原 子、优选约5个-约12个环原子和一个或多个杂原子。合适的杂环基 的实例包括：呋喃基、噻吩基、吡咯基、异吡咯基、3-异吡咯基、吡 唑基、2-异咪唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、噁唑基、噻唑基、 异噻唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、 1，3，4-噁二唑基、1，2，3，4-噁三唑基、1，2，3，5-噁三唑基、1，2，3-二噁 唑基、1，2，4-二噁唑基、1，3，2-二噁唑基、1，3，4-二噁唑基、1，2，5-噁 三唑基、1，3-oxathiole、1，2-吡喃基、1，4-吡喃基、1，2-吡喃酮基、 1，4-吡喃酮基、1，2-二氧芑基、1，3-二氧芑基、吡啶基、N-烷基吡啶鎓、 哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，2，4-三嗪基、1，2，4-三 嗪基、1，2，3-嗪基、1，2，4-嗪基、1，3，2-嗪基、1，3，5-嗪基、1，4-嗪 基、邻异嗪基、对异嗪基、1，2，5-氧硫杂嗪基(oxathiazine)、1，2，6- 氧硫杂嗪基(oxathiazine)、1，4，2-噁二嗪基、1，3，5，2-噁二嗪基、 氮杂基、噁庚英基、噻庚英基、1，2，4-二氮杂草基、茚基、异茚基、 苯并呋喃基、异苯并呋喃基、硫茚基、异硫茚基、吲哚基、假吲哚基、 2-异吲哚基、1，4-氮茚基、吡喃并[3，4-b]-吡咯基、异吲唑基、吲哚 并嗪基、苯并噁唑基、氨茴基、1，2-苯并吡喃基、1，2-苯并吡喃酮基、 1，4-苯并吡喃酮基、2，1-苯并吡喃酮基、2，3-苯并吡喃酮基、喹啉基、 异喹啉基、1，2(12，)-苯并二嗪基、1，3-苯并二嗪基、萘吡啶基、吡 啶并[3，4-b]-吡啶基、吡啶并[3，2-b]-吡啶基、吡啶并[4，3-b]-吡啶基、 1，3，2-苯并嗪基、1，4，2-苯并异嗪基、1，4-苯并异嗪基、咔唑基、 xanthrene、吖啶基、嘌呤基等。当R3是杂环基或杂环氧基时，它优选 自于呋喃、吡啶、N-烷基吡啶、1，2，3-和1，2，4-三唑基、茚、蒽和嘌 呤环组成的组。

在一个特别优选的实施方案中，R3是烷基、烷氧基、苯基、苯氧 基或杂环氧基且甚至更优选带有1-10个碳原子的烷氧基。最优选R3 是乙氧基或己氧基。

另一方面，侧链R3可以是例如侧链通过离子键或共价键与聚合物 主链悬挂地连接的抗肿瘤剂或某些其它生物活性物质。在这种侧链系 统中，当连接R3与磷原子的键在生理条件下被裂解时，所述的抗肿瘤 剂或其它生物活性物质被释放出来。

数字“h”可以随聚合物中所需的生物降解性和释放特性的不同而 显著改变，不过一般在约5-1,000之间改变。优选n约为5-约500 且最优选n约为5-约200。

当按照本发明的方法使用时，所述的聚合物组合物可使所述抗肿 瘤剂释放入患有卵巢癌的受治疗者腹膜内的时间延长，优选1周以上 的时间期限、更优选2周以上的时间期限。甚至更优选这一时间延长 约3周以上且最优选4周以上的期限，例如4周至1年。

此外，按照本发明方法使用该组合物可使癌症患者的中数生存率 比通过给予含有相同剂量的所述抗肿瘤剂而不含本发明可生物降解的 聚合物的组合物所获得的中数生存率至少提高约10％。优选可使该中 数生存率至少提高约20％；更优选可使该中数生存率至少提高约30 ％；且最优选可使该因素至少提高约40％。

本发明组合物中所用的聚合物优选自于下列物质组成的组：

和V 其中R1、R2、R3和n如上述所定义。

在通式II的聚合物中，R5选自与R1和R2相同的基团，且L是优 选具有下列通式的基团：

通式II中x∶y的摩尔比可以随所需聚合物的溶解度、所需的玻璃 化转变温度(Tg)、所需的聚合物的稳定性、所需最终聚合物的刚度和 该聚合物中所需生物降解性和释放特性的不同而显著改变。不过，x∶y 的摩尔比一般在约20∶0-1∶20之间改变。当y是0时，所形成的聚 合物是均聚物。然而，优选x∶y之比约为1∶15-约15∶1、更优选约 10∶1-约1∶1。

在合成本聚合物时，控制x∶y的摩尔比的最常用方式在于改变“x” 部分与“y”部分的进料比。进料比可以方便地在99∶-1∶99之间改 变，例如95∶5、90∶10、85∶15、80∶20、75∶25、70∶30、65∶35、 60∶40、55∶45、50∶50、45∶55、20∶80、15∶85等。优选单体的 进料比在约90∶10-约50∶50之间改变，甚至更优选在约80∶20- 约50∶50之间改变，且最优选在约80∶20-约50∶50之间改变。

当可生物降解的聚合物具有通式II时，优选R3是烷氧基、芳氧 基或杂环氧基；x约为0.1-30、更优选约0.2-20、最优选≥1(例如， 约2-20)；且y是2。

在通式III和IV的优选聚合物中：

M1和M2各自独立为(1)带有约1-20个碳原子、甚至更优选约1 -7个碳原子的支链或直链脂族基或(2)带有约1-20个碳原子的支 链或直链，氧基-、羧基-或氨基-脂族基，诸如亚乙氧基、2-甲基亚 乙氧基、亚丙氧基、亚丁氧基、亚戊氧基、亚十二烷氧基、亚十六烷 氧基等；

x和y各自约为1-1,000；

x∶y的摩尔比可以随聚合物中所需的生物降解性和释放特性的不 同而极大地改变，而一般约为1；

n∶(x或y)的摩尔比可以随聚合物中所需的生物降解性和释放特 性的不同而极大地改变，而一般在约200∶1-1∶200、优选100∶1 -1∶100、更优选约50∶1-约1；50之间改变；且

q∶r的摩尔比可以随聚合物中所需的生物降解性和释放特性的不 同而极大地改变，而一般在约1∶200-200∶1、优选约1∶150-约150∶ 1且最优选约1∶99-99∶1之间改变。

在通式III中，优选M1和L各自带有1-7个碳原子。更优选M1 是亚乙基或甲基取代的亚甲基且L是亚乙基。

在通式IV中，优选M1和M2各自为支链或直链亚烷基或亚烷氧基、 更优选它们带有1-20个碳原子。甚至更优选M1和M2中的至少一个是 有选自于下列的通式的亚烷基或亚烷氧基：-(CH2)a-、-(CH2)a-O-和 -(CH2)a-O-(CH2)b-，其中a和b各自为1-7。

当任一M1和M2为带有1-20个碳原子的支链或直链的氧基-脂族 基团时，它可以是：例如，二氧亚烷基，诸如二氧亚甲基、二氧亚乙 基、1，3-二氧亚丙基、2-甲氧基-1，3-二氧亚丙基、1，3-二氧-2-甲基 亚丙基、二氧-正亚戊基、二氧-正十八碳烯基、亚甲氧基-亚甲氧基、 亚乙氧基-亚甲氧基、亚乙氧基-亚乙氧基、亚乙氧基-1-亚丙氧基、亚 丁氧基-正亚丙氧基、亚十五碳氧基-亚甲氧基等。当M1和M2为支链或 直链，二氧-脂族基团时，它优选具有通式-O-(CH2)a-O-或 -O-(CH2)a-O-(CH2)b-，其中a和b各自为1-7。

当任一M1和M2为带有1-20个碳原子的支链或直链，羧基-脂族 基团时，它可以是例如、诸如相应于下列物质的二价基团这样的二价 羧酸酯：甲酸甲酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸正丙酯、乙酸异丙酯、 乙酸正丁酯、丙酸乙酯、丙酸烯丙酯、丙烯酸正丁酯、丁酸正丁酯、 氯乙酸乙烯酯、2-甲氧基羰基环己酮、2-乙酰氧基环己酮等。当M1和 M2为支链或直链，羧基-脂族基团时，  它优选具有通式 -CHR'-CO-O-CHR”-，其中R’和R”各自独立为H、烷基、烷氧基、芳基、 芳氧基、杂环基或杂环氧基。

当任一M1和M2为带有1-20个碳原子的支链或直链，氨基-脂族 基团时，它可以是二价胺，诸如-CH2NH-、-(CH2)2N-、-CH2(C2H5)N-、 -n-C4H9-NH-、-t-C4H9-NH-、-CH2(C3H6)N-、-C2H5(C3H6)N-、-CH2(C8H17)N-等。当M1或M2为支链或直链，氨基-脂族基团时，它优选具有通式 -(CH2)a-NR’，其中R’是H或低级烷基，且“a”为1-7。

优选M1和/或M2是具有通式-O-(CH2)a-、其中a为1-7的亚烷基； 最优选M1和/或M2是二价亚乙基。在另一个特别优选的实施方案中， M1和M2分别是正亚戊基和相应于乙酸甲酯的二价基。

在一个优选的实施方案中，通式III和IV中的L是带有1-20 个碳原子的支链或直链脂族基、更优选带有1-7个碳原子的亚烷基， 诸如亚乙基或甲基取代的亚甲基。

在通式IV的另一种特别优选的聚合物中，M1和M2各自为亚烷基或 亚烷氧基；L是亚烷基；X是-O-；且R3是烷氧基。最优选本发明中所 用的可生物降解的聚合物包括通式VI中所示的重复单体单元： 其中x∶y的摩尔比约为1； n∶(x或y)的摩尔比约为200∶1-1∶200；且 n约为5-5,000。 当所用的聚合物具有通式V时：

优选R1和R2各自独立为直链或支链脂族基，诸如带有1-7个碳 原子的支链或直链亚烷基，例如亚甲基或亚乙基，它们可以不被取代 或被一个或多个非干扰取代基所取代；

L是不被取代或被非干扰取代基所取代的二价环脂族基，诸如亚 环己基；

R3选自H、烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、杂环基或杂环氧基组成 的组(优选诸如乙氧基或己氧基这样的烷氧基)；且

n约为5-5,000、甚至更优选5-500。

本发明组合物中所用的聚合物的分子量可以随是需要刚性固体状 态(高分子量)还是需要可流动或柔性状态(低分子量)的不同而广 泛改变。不过，一般来说，重均分子量(Mw)一般可以在约2,000- 约400,000道尔顿、优选约2,000-约200,000道尔顿且甚至更优选 约2,000-60,000道尔顿之间改变。最优选Mw在约10,0000-55,000 之间改变。数均分子量(Mn)也可以广泛改变，而一般在约1,000- 约200,000道尔顿、优选约1,000-约100,000道尔顿且甚至更优选 约1,000-约50,000道尔顿的范围。最优选Mn在约8,000-45,000 道尔顿之间改变。

测定分子量的优选方法通过凝胶渗透色谱法(“GPC”)来进行，例 如混合柱、CH2Cl2溶剂、光散射检测器和离线dn/dc。

本发明中所用聚合物的玻璃化转变温度(Tg)可以随R1和R2支化 度、用于制备聚合物的含磷单体的相对比例等的不同而广泛改变。当 本发明的制品是刚性固体时，Tg优选在约-10℃-约80℃的范围、甚 至更优选约0-50℃的范围且最优选约25℃-约35℃的范围。

在其它实施方案中，优选Tg低至足以维持本发明组合物在体温下 的可流动性。由此优选本发明中所用聚合物的玻璃化转变温度约为0 ℃-约37℃、更优选约0℃-约25℃。

优选本发明中所用的可生物降解的聚合物足够纯以便其自身是生 物相容性的且在生物降解时可保持生物相容性。所谓“生物相容性” 指的是生物降解产物或聚合物本身在注入或紧密接触血管化组织时是 无毒性的且仅导致最低限度的组织刺激性。因为在本发明聚合物组合 物中不需要存在有机溶剂，所以更容易实现对生物相容性的要求。

然而，本发明中所用的聚合物优选溶于为易于合成、纯化和操作 的一种或多种常用有机溶剂。常用有机溶剂包括诸如乙醇、氯仿、二 氯甲烷(二亚甲基氯(dimethylene chloride))、丙酮、乙酸乙酯、 DMAC、N-甲基吡咯烷酮、二甲基甲酰胺和二甲亚砜这样的溶剂。该聚 合物优选溶于上述溶剂中的至少一种。

本发明的聚合物还可以包括其它生物相容性单体单元，条件是它 们不干扰本发明的生物降解特性和所需的流动特性。这类另外的单体 单元可在设计靶向药物递送所需精确释放分布或其它应用所需生物降 解性的精确比率方面提供甚至更大的灵活性。然而，当使用这类另外 的单体单元时，它们的使用量应足够低以确保产生具有诸如刚性、粘 度、流动性、柔韧性或特定形态的所需物理特性的可生物降解的共聚 物。

这类另外的生物相容性单体的实例包括在下列其它物质中发现的 重复单元：聚(含磷酸酯)、聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(己内酯)、 聚(酐)、聚(酰胺)、聚(尿烷)、聚(酯酰胺)、聚(原酸酯)、聚(二 噁酮)、聚(缩醛)、聚(酮缩醛)、聚(碳酸酯)、聚(原碳酸酯)、聚 (磷腈)、聚(羟基丁酸酯)、聚(羟基戊酸酯)、聚(草酸亚烷基酯)、 聚(琥珀酸亚烷基酯)、聚(苹果酸)、聚(氨基酸)、聚(乙烯吡咯烷 酮)、聚(乙二醇)、聚(羟基纤维素)、甲壳质、脱乙酰壳多糖及上述 物质的共聚物、三元共聚物或组合或混合物。

当使用另外的单体单元时，优选具有低晶化度且更为疏水的那些 单体。具有所需物理特性的特别优选的重复单元来源于聚(丙交酯)、 聚(己内酯)和这些与乙交酯的共聚物，其中存在更多的非晶区。 磷酸酯聚合物的一般合成方法

制备聚(磷酸酯)最常用的一般反应按照下列反应式进行的二氯 磷酸酯与二醇之间的脱去氯化氢反应：

另外通过适当取代的二氯化物与二醇类之间的缩合反应可以获得 大部分聚(磷酸酯)。

按照两步缩合反应由乙二醇制备了聚(亚磷酸酯)。将20％摩尔 过量的二甲基亚磷酸酯用于与乙二醇反应、随后通过高温在寡聚体中 除去甲氧基膦酰基端基。

熔融缩聚的优点在于它可避免使用溶剂和大量的其它添加剂，由 此使得纯化过程更为简单。还可以提供具有适当高分子量的聚合物。 然而，通常需要某些严格的条件且还可以导致链酸解(或如果有水存 在下的水解)。如果聚合物主链对氢原子夺取反应或与随后的大分子基 团再化合的氧化反应敏感，那么还可以发生诸如交联反应这样不需要 的加热诱导的副反应。

为了将这些副反应减少到最低限度，聚合反应也可以在溶液中进 行。溶液缩聚要求预聚物和磷成分溶于常用溶剂。一般来说，使用氯 化有机溶剂，诸如氯仿、二氯甲烷或二氯乙烷。

溶液聚合优选在有等摩尔量反应剂和化学计算量的酸性接受体、 通常诸如吡啶或三乙胺这样的叔胺存在的情况下进行。使用溶液聚合 的反应时间倾向于比使用熔融聚合的反应时间长。然而，因为可以使 用总体较柔和的反应条件，所以副反应被减少到最低限度且更多的敏 感性官能团可以被引入聚合物。此外，使用溶液聚合几乎不可能获得 高分子量。

当需要高反应速率时，可以使用界面聚合。所用的柔和反应条件 将副反应减少到最低限度且在作为溶液法中原料的二醇与二氯化物之 间不需要化学计量等值。然而，酰基氯的水解可以发生在碱性水相中。 在水中具有一定溶解性的敏感性二氯化物一般发生水解而非聚合。可 以将冠醚类或叔铵氯化物这样的相转移催化剂用于使离子化二醇达到 界面以促进缩聚反应。界面缩聚后所得聚合物的产率和分子量受到反 应时间、单体的摩尔比、不溶混溶剂的体积比、酸性接受体的类型以 及相转移催化剂的类型和浓度的影响。

聚合反应的目的在于形成一种包括(i)二价有机重复单元和(ii) 含磷酸酯重复单元的聚合物。结果可以是一种均聚物、相对均匀的共 聚物或带有一定不均匀微晶结构的嵌段共聚物。这三种实施方案中的 任意一种充分适合于用作控释介质。

尽管该反应可以在溶液中通过界面缩聚或通过任何其它便利的聚 合方法批量进行，但是优选该反应在溶液条件下进行。特别有用的溶 剂包括二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、甲苯 或任意其它不同的惰性有机溶剂。

特别地，当使用溶液聚合反应时，在聚合反应过程中存在酸性接 受体是有利的。特别合适类型的酸性接受体包括诸如吡啶、三甲胺、 三乙胺、取代的苯胺类和取代的氨基吡啶类这样的叔胺类。最优选的 酸性接受体是取代的氨基吡啶即4-二甲氨基吡啶(“DMAP”)。

在本发明的一个特别优选的实施方案中，例如，通过一种方法来 制备通式III或IV的可生物降解的聚合物，该方法包括下列步骤：

(a)使至少一种具有通式VII、VIII或IX的杂环化合物与一种 具有通式H-Y-L-Y-H的引发剂反应而生成通式X或XI的预聚物： 其中M1、M2和X如上述所定义； 在通式H-Y-L-Y-H中，Y和L如上述所定义； 所生成的预聚物如下列通式所示：

其中X、M1、M2、Y、L、R、x、y、q和r如上述所定义；和

(b)进一步使所得的预聚物与通式XII的二卤代磷酸酯反应而生 成通式III或IV的聚合物： 其中“halo”是Br、Cl或I；且R3如上述所定义。 第一个反应步骤(a)的功能在于使用引发剂使通式VII、VIII 或IX的杂环化合物开环。通式VII、VIII或IX的有用杂环化合物的 实例包括己内酯类、己内酰胺类、诸如甘氨酸酐这样的氨基酸酐类、 碳酸环亚烷基酯类、二噁酮类、乙交酯类、丙交酯类等。

当本发明的化合物具有通式III时，仅可以将含有M1的通式VII 中的一种杂环化合物用于制备步骤(a)中的预聚物。当本发明的化合 物具有通式IV时，则可以将含有M1的通式VII的杂环化合物与含有 M2的通式VIII的杂环化合物的组合物用于步骤(a)。另一方面，当本 发明的化合物具有通式IV时，可以将含有M1和M2的通式IX的单杂环 化合物用于步骤(a)。

合适的引发剂的实例包括各种带有至少两个活性氢的化合物 (H-Y-L-Y-H)，其中L是连接基团且如上述所定义；而Y可以是-O-、 -S-或-NR4，其中R4如上述所定义。连接基团L可以是例如亚烷基这样 的直链基团，但它可以被一个或多个另外的含活性氢的基团所取代。 例如，L可以是被一个或多个另外的烷基所取代的亚烷基，它们各自 带有活性氢部分，诸如-OH、-SH或NH2。在这种方式中，使用支链活 性氢引发剂来制备各种支化聚合物以便将所得聚合物设计成具有所需 特性。然而，当支化聚合物与酰基氯反应时，生成交联聚合物。

反应步骤(a)可以在各种不同温度下进行，这取决于所用的溶剂、 所需的分子量、反应剂对形成副反应的敏感性和存在的催化剂。然而， 优选反应步骤(a)在约0℃-熔融条件的约+235℃的温度下进行。在 有些情况下使用阳离子或阴离子催化剂可以在低温下进行。

尽管反应步骤(a)可以在溶液中通过界面缩聚或通过任何其它便 利的聚合方法批量进行，但是优选反应步骤(a)在熔融条件下进行。

通式X中特别有用的预聚物的实例包括：

(i)来源于聚己内酯的OH-封端的预聚物

H-[-O(CH2)5-CO-]x-O-CH2-CH2-O-[-CO-(CH2)5-O-]y-H；

(ii)来源于聚己内酰胺的NH-封端的预聚物(锦纶-6)

H-[-NH-(CH2)5-CO-]x-NH-CH2-CH2-NH-[-CO-(CH2)5-NH-]y-H；

(iii)来源于聚丙交酯的OH-封端的预聚物

H-[-OCH(CH3)-CO-]x-O-CH2-CH2-O-[-Co-CH(CH3)-O-]y-H；和 (iv)来源于聚三亚甲基碳酸酯的OH-封端的预聚物

H-[-O(CH2)3-O-CO-]x-O-CH2-CH2-O-[-CO-O-(CH2)3-O-]y-H。 通式XI中特别有用的预聚物的实例包括： (i)来源于丙交酯和乙交酯的OH-封端的共聚物 (ii)来源于丙交酯和己内酯的OH-封端的共聚物 (iii)来源于乙交酯和己内酯的OH-封端的共聚物

步骤(b)的聚合目的在于生成包括(i)步骤(a)产生的预聚物 和(ii)互连磷酸化单元的聚合物。产物可以是具有微晶结构的嵌段 共聚物，它特别适合于用作控释介质。

本发明的聚合步骤(b)可以在稍低于步骤(a)温度的温度下进 行，不过也可以在宽范围内改变，这取决于所用聚合反应的类型、存 在的一种或多种催化剂、所需的分子量和反应剂对不需要副反应的敏 感性。当使用熔融条件时，该温度可以在约0℃-150℃之间改变。不 过，当聚合步骤(b)在溶液聚合反应中进行时，它-般在约-40℃- 100℃的温度下进行。 抗肿瘤剂

一般来说，本发明的抗肿瘤剂可以在宽范围内改变，这取决于对 抑制、破坏或预防卵巢癌所选择的药理策略。可以将抗肿瘤剂作为单 一的实体或实体组合物的形式描述。使用具有高水溶性以及具有低水 溶性的抗肿瘤剂来设计组合物、制品和方法以便产生一种具有控释速 率的递送系统。

术语抗肿瘤剂包括但不限于：烷基化剂，诸如卡铂和顺式铂氨； 氮芥烷基化剂；亚硝基脲烷基化剂，诸如卡氮芥(BCNU)；抗代谢物， 诸如氨甲喋呤；嘌呤类似物抗代谢物，诸如5-氟尿嘧啶(5-FU)和吉 西他滨；激素抗肿瘤药，诸如性瑞林、亮丙瑞林和他莫昔芬；天然抗 肿瘤药，诸如阿地白介素、白细胞介素-2、docetaxel、依托泊苷 (VP-16)、α干扰素、紫杉醇和维A酸(ATRA)；抗生素天然抗肿瘤药， 诸如博来霉素、更生霉素、柔红霉素、阿霉素和丝裂霉素；以及长春 花生物碱天然抗肿瘤药，诸如长春碱和长春新碱。优选所述的抗肿瘤 剂选自紫杉醇、BCNU、卡铂和顺式铂氨组成的组。最优选所述的抗肿 瘤剂是紫杉醇。

此外，即使不考虑抗肿瘤剂本身，也可以将下列其它药物与所述 的抗肿瘤剂联用：更生霉素、盐酸柔红霉素、docetaxel、盐酸阿霉素、 阿法依泊汀、依托泊苷(VP-16)、丙氧鸟苷钠、硫酸双生霉素、α干扰 素、乙酸亮丙瑞林、盐酸哌替啶、盐酸美沙酮、盐酸雷尼替丁、硫酸 长春碱和叠氮胸苷(AZT)。例如，近来已经将5-氟尿嘧啶与肾上腺素 和牛胶原蛋白一起配制成特别有效的联用药物。

再进一步说，还可以使用下列氨基酸、肽类、多肽类、蛋白质、 多糖类和其它大分子：白细胞介素1-18，包括突变体和类似物；干 扰素或细胞因子，诸如干扰素α、β和γ；激素类，诸如黄体素释放激素 (LHRH)和类似物和促性腺素释放激素(GnRH)；生长因子，诸如转化 生长因子-β(TGF-β)、成纤维细胞生长因子(FGF)、神经生长因子 (NGF)、生长激素释放因子(GHRF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细 胞生长因子同源因子(FGFHF)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素生长 因子(IGF)；肿瘤坏死因子-α&β(TNF-α&β)；侵染素抑制因子 一2(IIF-2)；骨形态发生蛋白1-7(BMP 1-7)；促生长素抑制素；胸 腺素-α-1；γ-球蛋白；超氧物歧化酶(SOD)；补体因子；抗血管生成 因子；抗原物质和前体药物。

在特别优选的实施方案中，本发明的组合物可以包括其它生物活 性物质、优选治疗药物或前体药物，例如，其它化疗剂、抗生素、抗 病毒药、抗真菌药、消炎药和抗凝血药、用于癌症疫苗应用的抗原或 相应的前体药物。

可以使用不同形式的抗肿瘤剂和/或其它生物活性剂。它们包括但 不限于诸如不带电荷的分子、分子络合物、盐、醚类、酯类、酰胺类 等这样的形式，它们可以在植入、注入或以其它方式置于身体内时以 生物方式被激活。

在一个优选的实施方案中，适合于腹膜内给药来治疗患有卵巢癌 的哺乳动物受治疗者的可生物降解的聚合物组合物包括：

(a)紫杉醇和

(b)一种可生物降解的聚合物，它包括通式VI中所示的重复单 体单元： 其中x∶y的摩尔比为约1； n∶(x或y)的摩尔比约为200∶1-1∶200；且 n约为5-5,000。 生物降解和释放特性

可生物降解的聚合物与不可生物降解的聚合物的差别在于它们可 以在体内疗法中被降解。该过程一般包括将所述聚合物分解成其单体 亚单位的步骤。一般来说，用于本发明的聚合物的最终水解分解产物 是环脂族二醇、脂族醇和磷酸酯。所有这些降解产物可能是无毒性的。 然而，水解的中间体寡聚产物可以具有不同特性。因此，一般在一种 或多种毒性分析后测定用于插入体内的可生物降解聚合物、甚至一种 由显然无害单体结构合成的聚合物的毒理学特性。

存在许多本领域技术人员所公知的检测毒性和/或生物相容性的 不同方式。然而，按照下列方式使用诸如GT3TKB肿瘤细胞这样的活癌 细胞来进行典型的体外检测试验：

将200微升不同浓度的降解聚合物产物置于以104/孔的密度接种 了人胃癌细胞(GT3TKB)的96-孔组织培养平板上。将该降解聚合物 产物用GT3TKB细胞培养48小时。可以将试验结果绘制成相对生长％ 与组织培养孔内降解聚合物的浓度的图。

还可以通过众所周知的体内生物相容性检测试验、诸如通过在大 鼠中皮下植入或注射的方式来评价聚合物，从而证实所述系统水解而 在插入部位没有明显的刺激性或炎症。

通式I聚合物的特征通常在于至少部分受到控制的随该聚合物含 磷酸酯键水解而变化的生物降解率。其它因素也是重要的。例如，可 生物降解的聚合物的寿命在体内还取决于其分子量、结晶性、生物稳 定性和交联度。一般来说，分子量越大，则结晶性越高且生物稳定性 越高、生物降解较慢。此外，聚合物的降解率可以进一步通过选择不 同长度的侧链而得到控制。因此，降解时间可以在很宽的范围内改变、 优选从1天以内至几个月。

因此，侧链的结构可以影响包括生物活性物质的组合物的释放特 性。例如，预计使磷酸酯侧链转化成更为亲脂性的、更为疏水的或庞 大基团这一过程使降解过程放缓。因此，从含有小脂族基团侧链的聚 合物组合物中释放比从含有庞大芳香侧链的聚合物组合物中释放快 捷。

本文所用的表达方式“延长释放”包括但不限于各种类型的释放， 诸如控释、定时释放、缓释、延缓释放、长效和脉动递送、以不同比 例发生的瞬时释放。使用本领域技术人员众所周知的步骤能够获得延 长释放、控释、定时释放、缓释、延缓释放、长效、脉动递送或瞬时 释放。这些特定技术或步骤本身并不构成本发明的发明点。 聚合物组合物

使用具有治疗功效的量的抗肿瘤剂，所述用量在很大程度上可以 根据所用特定抗肿瘤剂的不同而在很宽的范围内改变。混入组合物的 抗肿瘤剂的量还取决于所需的释放分布、生物作用所要求的活性剂浓 度和必须因治疗而释放的生物活性物质的时间长度。优选将生物活性 物质与不同填充量的本发明的聚合物基质混合，该步骤优选在室温和 不需要有机溶剂的条件下进行。

除维持组合物所需的物理特性的可接受溶液或分散液粘度以外， 对所混入的抗肿瘤剂的用量来说没有临界的上限值。混入递送系统的 抗肿瘤剂的下限值取决于药物的活性和治疗所需的时间长度。因此， 所述抗肿瘤剂的用量既不应较小以致于它不能产生所需的生理作用、 也不能较大以致于抗肿瘤剂在不受控制的条件下释放。

一般来说，在这些限制范围内，可以将约1％-约65％用量的抗 肿瘤剂混入本递送系统。然而，可以将较低用量用于实现特别有效的 抗肿瘤剂的有效治疗水平。

此外，本发明的聚合物组合物还可以包括本发明聚合物与其它生 物相容性聚合物或共聚物的掺合物，条件是其它的聚合物或共聚物不 会以不需要的方式干扰所述组合物的生物降解特性或机械特性。本发 明聚合物与这类其它聚合物的掺合物可以在设计靶向药物递送所需的 精确释放分布或所需生物降解的精确比例方面提供更大的灵活性。这 类其它生物相容性聚合物的实例包括其它的聚(含磷酸酯)、聚(碳酸 酯)、聚(酯)、聚(原酸酯)、聚(酰胺)、聚(尿烷)、聚(亚氨基- 碳酸酯)和聚(酐)。

药物上可接受的高分子载体还可以包括各种其它物质。由于不受 限制，所以这类物质可以包括稀释剂、粘合剂和粘附剂、润滑剂、崩 解剂、着色剂、填充剂、调味剂、增甜剂和诸如缓冲剂和吸收剂这样 的其它物质以制备特定的医用组合物，条件是这些其它物质中没有一 种会干扰本发明聚合物组合物所需的生物相容性、生物降解性和物理 状态。

为了递送抗肿瘤剂或某些其它生物活性物质，将所述的活性剂或 物质加入到所述聚合物组合物中。将所述的活性剂或物质溶解以便形 成在所述聚合物组合物中具有适当恒定浓度的均匀溶液或将其分散以 便在所述聚合物组合物内以所需的“填充”水平(每克包括生物活性 物质在内的总组合物中生物活性物质的克数，通常表示为百分比)形 成混悬液或分散液。

尽管可以将可生物降解聚合物或生物活性物质溶于少量无毒性溶 剂而使生物活性剂更有效地在柔性或可流动性组合物中产生非晶态整 体分布或精细分散体，但是在一个优选的实施方案中，本发明的优点 在于不需要溶剂而形成可流动性组合物。此外，优选可以避免使用溶 剂，这是因为一旦将含有溶剂的聚合物组合物整体或部分置于体内， 那么溶剂就会从所述聚合物中分散或扩散出来其必须被身体处理和消 除，从而在疾病(和/或治疗该疾病的其它疗法)可能会对身体产生有 害影响时给身体的清除能力附加额外的负担。

然而，当将溶剂用于促进混合或维持本发明聚合物组合物的流动 性时，它应是无毒性的、否则是生物相容性的且应以最小量使用。在 置于生命体内的任何物质中不应使用有明显毒性的溶剂，即使是将这 些物质部分置于体内也是如此。这类溶剂也不能在给药部位上使组织 产生刺激性或坏死。

当使用时，合适的生物相容性溶剂的实例包括N-甲基-2-吡咯烷 酮、2-吡咯烷酮、乙醇、丙二醇、丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、甲乙 酮、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、四氢呋喃、己内酰胺、二甲基-亚砜、 油酸或1-十二烷基氮杂环庚-2-酮。优选的溶剂包括N-甲基-2-吡咯烷 酮、2-吡咯烷酮、二甲亚砜和丙酮，这是因为它们的溶剂化能力和它 们的生物相容性所导致的。

本发明的聚合物组合物可以是柔性或可流动的物质。所谓“可流 动的”指的是在体温下的一段时间内呈现含有所述物质的空间形状的 能力。例如，包括能够喷洒到一定部位的、使用按照有例如23-计量 针头的手工操作的注射器注射或通过导管递送的液体组合物。

不过，术语“可流动的”含义还包括在室温下是高粘度的“凝胶样” 物质，可以通过倾倒、从管中挤压或使用商购强力注射装置中的任意 一种注射而将所述物质递送至所需部位，就高粘度而仍然是可流动的 物质而言，所述的注射装置提供的注射压力比单独用手工方式产生的 注射压力高。当所用的聚合物本身是可流动的时，甚至当它是粘性时， 不需包括可流动的生物相容性溶剂，不过，微量或残量的生物相容性 溶剂仍然可以存在。可以通过聚合物的分子量并通过在聚合物主链中 混合环己烷二甲醇的顺式-和反式异构体来调节聚合物的粘度。

可以通过各种途径来给予本发明的聚合物组合物。例如，如果它 是可流动的，那么可以将其进行注射而在注射后形成一种暂时生物屏 障以覆盖或包封内部器官或组织。还可以将本发明的聚合物组合物用 于产生对固体植入装置的包封层。

然而，更重要的是，本发明的聚合物组合物可以在一段时间内对 抗肿瘤剂产生可控制和有效释放，甚至在较大生物大分子的情况下也 是如此。 植入物和递送系统

在可生物降解聚合物递送系统的最筒单的形式中，它由抗肿瘤剂 于带有引入聚合物主链的不稳定(可生物降解)键的聚合物基质中所 得到的溶液或分散液组成。在一个特别优选的实施方案中，例如，在 手术摘除可见的癌组织过程中或之后，将包括本发明组合物的固体制 品通过植入、注射、腹腔镜插入腹膜内、或以其它方式于所治疗受治 疗者的腹膜内。

组合物中的抗肿瘤剂和聚合物可以形成一种均匀基质或可以按照 一定方式将生物活性物质包封在所述聚合物内。例如，可以首先将生 物活性物质包封在微球体中且然后以维持至少部分微球体结构的方式 与聚合物混合。或者，生物活性物质可以充分地与本发明的聚合物不 溶混，使得它作为小液滴被分散在所述聚合物中而不是溶解在所述聚 合物中。

作为一种结构性医疗装置，本发明的聚合物组合物除是一种在体 内降解成无毒性残基的组合物外，它还可作为具有适合于插入腹膜内 的特殊化学、物理和机械特性的各种物理形式提供。

可以按照几种方式来制备可生物降解的药物递送制品。可以使用 常规的挤压或注模技术对聚合物进行熔融处理；或可以通过下列步骤 来制备这些产品：溶于合适的溶剂；随后形成所述装置且随后通过蒸 发或提取、例如通过喷雾干燥除去溶剂。通过这些方法可以将所述聚 合物制成几乎任意大小或所需形状的制品，例如植入固体片或胶片或 注射用棒条、微球体或其它微粒。典型的医用制品还包括诸如与诸如 其它植入装置上的可降解织物或包封材料的层压材料相同的植入物。

抗肿瘤剂从聚合物基质中的释放一般至少与该基质在体内降解同 样快捷。某些抗肿瘤剂，该活性剂仅在聚合物降解至非扩散物质与体 液接触的程度后被释放出来。当聚合物开始降解时，完全被聚合物基 质包围的生物活性物质开始释放。

然而，由于这种机理，所以以物理方式缠结在刚性固体植入物结 构中的长肽链可能倾向于与基质一起降解并从肽链残余物上断裂，由 此释放不完整的分子片段。不过，当将本发明的聚合物组合物设计成 柔性时，所述聚合物一般在肽或蛋白质部分释放后降解。在一种特别 优选的机理中，当肽链从本发明组合物中释放时，该组合物在其自身 或聚合物降解前保持柔性且至少部分使大分子蛋白质通过聚合物基质 扩散。

由此一般通过基质结构中的通道来对蛋白质从组合物中的起始释 放比例进行扩散控制，这种释放比例与蛋白质的分子量成反比。然而， 一旦聚合物开始降解，则保留在基质中的蛋白质也可以通过侵蚀力被 释放。

本发明可生物降解的无定形基质一般含有与其它链连接的聚合物 链。这些连接方式可以通过基质内聚合物链的简单缠结而生成，这与 氢键或范德华相互作用或聚合物结晶区之间的相互作用或实际上是离 子的相互作用相反。另一方面，可以将合成嵌段共聚物或掺合两种不 同聚合物用于生成具有广泛可变的物理和机械特性的粘性油灰样物 质。

在一个特别优选的实施方案中，本发明的组合物是充分可流动的 以便将其注入体内。特别重要的是注射的组合物在注射或以其它方式 插入腹腔后对组织产生最低限度的刺激性。

在一个实施方案中，可以将本发明的聚合物组合物用于制成软的， 药物递送“储库”：例如，可以将它作为液体通过注射方式给药，而它 可以保持足够的粘性以便将药物维持在注射部位周围的局部区域内。 如此制成的储库的降解时间可以在几天至一年或一年以上的范围内改 变，这取决于所选择的聚合物及其分子量。通过使用可流动形式的聚 合物组合物，甚至可以消除对制备缺口的需求。在任意情况中，柔性 或流动性递送“储库”会调节它在体内占有空间的形状而将对周围组 织的损伤降至最低限度。

当本发明的聚合物组合物是柔性或可流动性时，可以将它置于包 括诸如腹膜这样的腔在内的身体内的任意位置、将其喷洒在开放的伤 口上倾在其上或用作手术过程中的部位递送系统。当可流动时，还可 以将本发明的组合物作为暂时屏障而例如在腹腔手术后起预防不同类 型组织彼此粘连的作用，这是由于其包封组织、器官和假体装置的能 力所导致的。

一旦插入，则本发明的聚合物组合物应保持至少部分与诸如血液、 内部器官分泌物这样的生物液体、粘膜等的接触。通常在从刚性、柔 性或可流动性生物降解聚合物基质中扩散或溶解后，植入或注入的组 合物会以受控速率释放包含在其基质内的抗肿瘤剂，直到该物质耗尽 为止。

下列实施例用来解释本发明的优选实施方案而不用来限定本发 明。所有聚合物分子量均为平均分子量。除非另有说明，所有百分比 均以所制备的最终递送系统或制剂的重量百分比为基准且所有组分的 总和等于100％重量。

                实施例 实施例1：共聚物P(BHET-EOP/TC，80/20)的合成

在氩蒸汽中，将10g的1，4-双(羟乙基)对苯二酸酯(BHET)、9.61g 的4-二甲氨基吡啶(DMAP)和70mL的二氯甲烷放入安装有漏斗的250mL 烧瓶中。通过搅拌将烧瓶中的溶液冷却至-40℃并通过漏斗逐滴加入 5.13g二氯代磷酸乙酯(EOP)(使用前经蒸馏)溶于20mL二氯甲烷所 得到的溶液。在添加过程完成后，在室温下将该混合物搅拌4小时以 便形成均聚物BHET-EOP。

然后逐滴加入1.60g对苯二酰氯(TC)(获自Aldrich Chemical Company并在使用前用己烷重结晶)溶于20mL二氯甲烷所得到的溶液。 将温度逐渐升至45-50℃并将该反应混合物保持回流过夜以便完成均 聚物P(BHET-EOP)与另外的单体TC的共聚合而形成共聚物P (BHET-EOP/TC)。

接着蒸发溶剂并将残余物重新溶于约100-200mL氯仿。将氯仿溶 液用饱和NaCl溶液洗涤3次、用无水Na2SO4各自并骤冷入乙醚。将所 得的沉淀重新溶于氯仿并再次骤冷入乙醚。过滤出产生的坚硬黄白色 固体沉淀并在真空中干燥。产率为82％。

P(BHET-EOP/TC，80/20)的结构通过1H-NMR、31P-NMR和FT-IR 光谱确定，正如附图1和2中所示。结构还通过元素分析来证实、与 理论比例极为相关。元素分析的结果如附图3中所示。

首先通过凝胶渗透色谱法、使用聚苯乙烯作为校准标准物来测定 P(BHET-EOP/TC，80/20)的分子量。从产生的图中确定重均分子量(Mw) 约为6100且数均分子量(Mn)约为2200，正如附图4中所示。这种 共聚物的蒸汽压渗透法(“VPO”)得到约7900的Mn值。这些分子量研 究结果还如附图3中所示。

实施例2：P(BHET-EOP/TC)的进料比变化形式

除起始聚合步骤过程中所用EOP与TC的进料比例外，按照上述实 施例1中所述的步骤制备一系列其它P(BHET-EOP/TC)的共聚物并分 别改变共聚合步骤。结果如下列表1中所示。根据EOP/TC的进料比例 可以从如下所示的公式中计算出“x”值。例如，在上述实施例1中制 备的P(BHET-EOP/TC，80/20)中，x为8。

                                表1

            P(BHET-EOP/TC)中EOP与TC的进料比的变化形式 E0P与TC的进料比*  100/0   95/5   90/10    85/15   80/20  50∶50     “x”    -     38    18     11.4     8     2

*二氯代磷酸乙酯与对苯二酰氯的进料比。 实施例3：均聚物P(BHDPT-EOP)的合成和分离

将上述实施例5中制备的BHDPT单体与酸性接受体4-二甲氨基吡 啶(DMAP)溶于二氯甲烷。使用干冰/丙酮浴将所得溶液冷却至-70℃ 并缓慢加入等摩尔量的二氯代磷酸乙酯(EOP)。然后将该反应混合物 加热并回流过夜。通过过滤除去聚合过程中形成的盐。用饱和NaCl溶 液将剩余的聚合物溶液(滤液)洗涤3次并用乙醚沉淀该均聚物。 实施例4：共聚物P(BHDPT-EOP/TC)的合成

通过上述两步溶液共聚合合成P(BHDPT-EOP)与TC的共聚物。 在室温下BHDPT与EOP之间的反应已经进行1小时后，将反应烧瓶在 干冰/丙酮浴中冷却。向该烧瓶中缓慢加入适量的TC(TC与EOP合并 的摩尔数等于BHDPT的摩尔数)。然后将该反应混合物加热并回流过 夜。通过过滤除去聚合过程中形成的盐。用饱和NaCl溶液将剩余的聚 合物溶液(滤液)洗涤3次并使均聚物从乙醚沉淀中沉淀出来。 实施例5：聚(含磷酸酯)P(BHDPT-HOP/TC)的合成

通过两步溶液聚合合成P(BHDPT-HOP)与TC的共聚物。在室温 下BHDPT与HOP之间的反应已经进行1小时后，将反应烧瓶在干冰/ 丙酮浴中冷却。向该烧瓶中缓慢加入适量的TC(TC与HOP合并的摩尔 数等于BHDPT的摩尔数)。然后将该反应混合物加热并回流过夜。通过 过滤除去共聚合过程中形成的盐。用饱和NaCl溶液将剩余的聚合物溶 液(滤液)洗涤3次并使共聚物从乙醚沉淀中沉淀出来。 实施例6：其它二醇变化形式

通过使TC与正丙二醇或2-甲基丙二醇(其结构如下所示)反应 来合成结构上与BHET和BHDPT相关的对苯二酸二醇酯类以便生成相应 的对苯二酸二醇酯。                         -CH2CH2CH2-                         

然后使这些对苯二酸二醇酯类与EOP反应而生成相应的均聚物。 接着将如此生成的均聚物用于生产如上述实施例4中所述与TC的第二 步反应中的本发明共聚物。 实施例7：P(BHET-EOP/TC)共聚物的玻璃化转变温度

用示差扫描量热法(DSC)将P(BHET-EOP/TC，80/20)和P (BHET-EOP/TC，50/50)的玻璃化转变温度(Tg)分别测定为24.5℃ 和62.2℃。附图4表示这两种聚合物的DSC曲线。测定不同EOP/TC 进料比的4种其它P(BHET-EOP/TC)的Tg并将结果制表，正如下列 表2中所示：

                            表2

        (BHET-EOP/TC)聚合物的玻璃化转变温度(Tg’s) EOP与TC的    比*    100/0   95/5   90/10   85/15   80/20   50∶50  Tg(℃)    19.1   20.7   21.2   29.8   24.5   62.2 *二氯代磷酸乙酯与对苯二酰氯的进料比。 当EOP的比例减少且TC的比例增加时，Tg增加。 实施例8：P(BHDPT-EOP/TC)共聚物的玻璃化转变温度 另外进行对苯二酰氯(TC)比例增加对P(BHDPT-EOP/TC)聚合

物的Tg的影响的研究。结果如表3中所示：

                表3

EOP/TC比例对P(BHDPT-EOP/TC)的Tg的影响    摩尔比(BHDPT/EOP/TC)*     Tg(℃)     100∶100∶0     14     100∶100∶0     19     100∶90∶10     16     100∶85∶15     24     100∶80∶20     23     100∶75∶25     33     100∶75∶25     49     100∶50∶50     43

*TC与EOP的总摩尔量等于BHDPT的摩尔量。 实施例9：不同R基团的玻璃化转变温度

另外进行一种研究以便证实对由下列一系列带有不同R基团的二 醇类制备的共聚物的玻璃化转变温度(Tg)的影响：

其中R是-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-和 -CH2CH(CH3)2CH2-。结果如表4中所示：

                表4

    改变的“R”基团对聚合物的Tg的影响 正如表4中所示，当R基团的大小和支化度增加时，Tg增加。此 外，当Tg改变时，所述聚合物的物理状态改变。特别地，当Tg增加 时，所述聚合物从橡胶态转变成细粉。 实施例10：本发明聚合物的溶解性

测定均聚物P(BHET-EOP，100/0)和下列嵌段共聚物在有机溶剂 中的溶解度：

    P(BHET-EOP，95/5)、

    P(BHET-EOP，90/10)、

    P(BHET-EOP，85/15)、

    P(BHET-EOP，80/20)和

    P(BHET-EOP，50/50)。

用于试验的有机溶剂是氯仿、二氯甲烷、N-甲基吡啶(NMP)、二 甲基甲酰胺(DMF)和二甲亚砜(DMSO)。将这些溶解度试验的结构概 括在下面的表5中。

                                        表5     聚合物   CHCl3   CH2Cl2     NMP     DMP     DMSO P(BHET-EOP，100/0)   易溶   易溶 溶解性良好 溶解性良好 溶解性良好 P(BHET-EOP，95/5)   易溶   易溶 溶解性良好 溶解性良好 溶解性良好 P(BHET-EOP，90/10)   易溶   易溶 溶解性良好 溶解性良好 溶解性良好 P(BHET-EOP，85/15) 相对可溶 相对可溶 溶解性良好 溶解性良好 溶解性良好 P(BHET-EOP，80/20) 相对可溶 相对可溶 溶解性良好 溶解性良好 溶解性良好 P(BHET-EOP，50/50)   不溶   不溶 加热溶解 加热溶解 加热溶解

结果证明这些聚合物在有机溶剂中的溶解度随EOP/TC之比的增 加而增加。 实施例11：聚合物的粘度

在40℃下用乌氏粘度计测定一系列不同进料比的P (BHET-EOP/TC)聚合物的特性粘数。结果如下列表6中所示。

                                表6

                    P(BHET-EOP/TC)聚合物的特性粘数 EOP与TC的比*   100/0    95/5    90/10    85/15    80/20     50∶50   [η](dL/g)   .081    .089    .148    .146    0.180      N.D.       +

*二氯代磷酸乙酯与对苯二酰氯的进料比。

+没有检测P(BHET-EOP，50/50)的特性粘数，因为它不溶于氯 仿。 实施例12：体外降解

通过溶液浇铸法来制备P(BHET-EOP/TC，80/20)与P (BHET-EOP/TC，85/15)的薄膜并在真空中干燥2天。从这些薄膜片 上切下1mm厚和6mm直径的圆片。在37℃下将各共聚物的3个圆片置 于4mL的磷酸缓冲盐水(PBS)(0.1M，pH7.4)中。将这些圆片在不 同的时间点处从PBS中取出、用蒸馏水洗涤并干燥过夜。

如附图7A和7B中所示分析一段时间内样品的分子量改变和重量 损耗。P(BHET-EOP，80/20)的重均分子量在3天内减少了约20％。 18天后，P(BHET-EOP，85/15)和P(BHET-EOP，80/20)圆片在质 量上已经分别损耗了约40％和20％。

该数据表明了精细调节共聚物降解率的可能性并证实所述共聚物 在磷酸酯成分(EOP)增加时变得更加水解不稳定。

对含有不同EOP与TC进料比的P(BHDPT-EOP)共聚物重复相同 的过程。附图6是一段时间内由分子量改变确定的均聚物P (BHDPT-EOP)和下列嵌段共聚物的降解程度的图解表示： P(BHDPT-EOP，85/15)、 P(BHDPT-EOP，75/25)和 P(BHDPT-EOP，50/50)。 实施例13：P(BHET-EOP/TC)共聚物的体内降解和紫杉醇的体外释 放

附图7A和7B表示通过重量损耗确定的P(BHET-EOP/TC，80/20) 的体内降解。附图7C表示紫杉醇在体外从薄膜中的释放。 实施例14：P(BHET-EOP/TC，80/20)的体外生物相容性/细胞毒性

通过在用共聚物P(BHET-EOP/TC，80/20)包被的盖玻片上培养 人胚肾(HEK)细胞来评价P(BHET-EOP/TC，80/20)共聚物的细胞毒 性。作为对照组，另外在用TCPS包被的盖玻片上培养HEK细胞。与相 同HEK细胞在TCPS上培养时相对较低的用量相比，在共聚物包被的盖 玻片上培养的细胞在所有时间处均表现出正常形态且在2天内明显增 殖。 实施例15：P(BHET-EOP/TC，80/20)的体内生物相容性

由P(BHET-EOP/TC，80/20)制成100mg聚合物胶片且作为对照 公知乳酸和乙醇酸的共聚物(75/25，“PLGA”)具有生物相容性。将 这些胶片插在麻醉状态下的SPF Sprague-Dawley大鼠右肢的肌层之 间。在特定的时间取出胶片并由合格的病理学家使用下列评分标准对 备好的周围组织进行组织病理学分析：

  评分     刺激等级

   0       无刺激性

 0-200     轻微刺激

200-400    轻度刺激

400-600    中度刺激

600以上    严重刺激

组织病理学分析结果如下列表7中所示。

                        表7

                        植入部位(肌注)上的炎症反应           聚合物    3天    7天   14天   1个月   (Mo.)   2个月   (Mo.)   3个月   (Mo.)     P(BHET-EOP/TC.80/20)    151    116   163    98    60    35         PLGA(75/25)    148    98   137    105    94    43

证实含磷酸酯共聚物P(BHET-EOP/TC，80/20)具有类似于PLGA 参照胶片(wafer)表现出的可接受的生物相容性。 实施例16：包封FITC-BSA的P(BHET-EOP/TC，80/20)微球体的制 备

通过双乳剂/溶剂萃取法、使用FITC标记的牛血清清蛋白 (FITC-BSA)作为模型蛋白质药物来制备微球体。将100μL的FITC-BSA 溶液(10mg/mL)加入到100mg P(BHET-EOP/TC，80/20)溶于1mL二 氯甲烷所得到的溶液中并在冰上通过声波振荡乳化15秒。立即将所得 的乳剂倾入5mL的1％聚乙烯醇(PVA)和5％NaCl的涡旋水溶液中。 将涡旋维持1分钟。将所得乳剂倾入20mL的0.3％PVA和5％NaCl水 溶液中，将该体系剧烈搅拌。加入25mL的2％异丙醇溶液并将该混合 物持续搅拌1小时以确保萃取完全。通过以3000×g离心收集产生的 微球体并用水洗涤3次且冻干。除将水用作内部水相外，按照相同方 式制备空心微球体。

为增加包封功效使这些制备条件最佳化、改进微球体的形态并将 破裂释放减少到最低限度。所得的微球体大部分具有5-20μm直径且 表现出平滑的表面形态。附图8表示通过电子显微镜证实的微球体的 大小和平滑度。

通过测试所述微球体在0.5N NaOH溶液中水解过夜后的FITC来 测定FITC-BSA的填充量。通过与标准曲线比较来测定填充量，所述的 标准曲线通过制备一系列FITC-BSA溶于0.5N NaOH的溶液来生成。便 利地获得1.5、14.1和22.8wt.％的蛋白质填充量。

通过将俘获的FITC-BSA的量与经荧光分析法获得的溶液中的初 始量进行比较在不同的填充量时测定微球体对FITC-BSA的包封功效。 正如下列表8中所示，获得了84.6％和99.6％的包封功效。这些结果 证明可便利地获得70-90％的包封功效。

                        表8

    P(BHET-EOP/TC，80/20)中FITC-BSA的包封功效和填充量   填充量(％)  高填充量(22.8％)  低填充量(1.5％)   包封功效(％)      99.6      84.6

此外，据使用聚焦荧光显微镜测定包封的FITC-BSA均匀分布在微 球体内。 实施例17：含有利多卡因的P(BHET-EOP/TC，80/20)微球体的制 备

在600mL烧杯中通过混合1.35g的PVA与270mL的去离子水来制 备0.5％w/v聚乙烯醇(PVA)的水溶液。将该溶液搅拌1小时并过滤。 通过在9mL二氯甲烷中混合900mg的P(BHET-EOP/TC，50/50)共聚 物和100mg的利多卡因并涡旋混合来制备共聚物/药物溶液。

当使用塔顶混合器以800rpm搅拌所得PVA溶液时，逐滴加入聚合 物/药物溶液。将该混合物搅拌1.5小时。接着将由此形成的微球体过 滤、用去离子水洗涤并冻干过夜。本实验产生625mg填充有3.7％w/w 利多卡因的微球体。

另外通过相同工艺由P(BHET-EOP/TC，50/50)制备含利多卡因 的微球体。本实验产生676mg填充有5.3％w/w利多卡因的微球体。 实施例18：由P(BHET-EOP/TC.80/20)其聚物制备的微球体的体 外释放动力学

将5mg含有FITC-BSA的P(BHET-EOP/TC，80/20)微球体悬浮于 1mL的pH 7.4的磷酸缓冲盐水(PBS)中并将其置于加热至37℃的温 度的振动器中。在不同的时间点处将该混悬液以3000×g旋转10分钟 并吸出500μl的上清液液体样品且将其用新制的PBS取代。随后通过 在519nm处测定吸取样品的荧光强度来确定从微球体中释放的 FITC-BSA。

随着比例的增加，将50mg的P(BHET-EOP/TC，80/20)微球体悬 浮于装有10mL磷酸缓冲盐水(PBS)的瓶中。在培养箱中将该瓶加热 至37℃的温度并以220rpm振摇。吸取上清液样品并在不同时间点处 替换且通过在492nm处的分光光度测定法来分析释放入样品中的 FITC-BSA的量。

结果显示在前2天内有超过80％的包封的FITC-BSA释放，而约5 ％的其它量在37℃下的10天后释放在PBS中。FITC-BSA以不同填充 量从P(BHET-EOP/TC，80/20)微球体中的释放动力学如附图11中所 示。 实施例19：由P(BHDPT-EOP/TC，50/50)共聚物制备的微球体的体 外释放动力学

在37℃下将约10mg填充有利多卡因的P(BHDPT-EOP/TC，50/50) 微球体置于振动器上的PBS中(0.1M，pH7.4)。定期吸取培养溶液并 通过HPLC检测释放入样品中的利多卡因的量。附图10和11表示产生 的释放动力学。

随后对由P(BHDPT-EOP/TC，50/50)制备的微球体进行同样的过 程。附图10和11还表示利多卡因从这些微球体中的释放动力学。 实施例20：共聚物对细胞的体外细胞毒性检测试验

以不同浓度将P(BHET-EOP/TC，80/20)微球体加入到96-孔组 织培养平板中。然后以104个细胞/孔的密度给各孔接种人胃癌细胞 (GT3TKB)。在37℃下将该细胞用所述微球体培养48小时。通过MTT 检测试验分析所得细胞的增殖率并绘制成相对生长％与组织培养孔中 共聚物微球体浓度的示意图。结果如附图14中所示。 实施例21：聚合物降解产物对GT3TKB肿瘤细胞的毒性检测试验

在37℃下使约100-150mg的下列各聚合物在20mL的1M NaOH中 分别降解1-2天：

    PLLA(Mw＝14,000)

    P(BHET-EOP)

    PCPP∶SA(20∶80)

    聚(L-赖氨酸)(Mw＝88,000)

对所有聚合物观察到其完全降解。然后用20mL的1M Hcl中和该 溶液。

将约200μL的不同浓度的降解聚合物产物置于96-孔组织培养平 板中并以104个细胞/孔的密度给各孔接种人胃癌细胞(GT3TKB)。将 降解的聚合物产物用GT3TKB细胞培养48小时。将试验结果绘制成相 对生长％与组织培养孔中降解聚合物的示意图且如附图13中所示。

使用由单体BHET和均聚物BHET-EOP制备的微球体进行另外的毒 性检测试验并与由LA和PLLA制备的微球体进行对比。将试验结果绘 制成相对生长％与组织培养孔中聚合物或微球体浓度示意图且如附图 14中所示。 实施例22：聚(L-丙交酯-共-磷酸乙酯)[聚(LAEG-EOP)]的合成

将20g(0.139mole)的(3S)-顺式-3，6-二甲基-1，4-二噁烷-2，5- 二酮(L-丙交酯)(获自Aldrich Chemical Company、用乙酸乙酯重 结晶、升华并再次用乙酸乙酯重结晶)和0.432g(6.94mmol)的乙二 醇(99.8％、无水、来自Aldrich)置于充有干燥氩气的250mL圆底 烧瓶中。将该烧瓶在真空中密封并置于加热至140℃的烘箱中。通过 不时的振摇使烧瓶在该温度下保持约48小时。

然后给该烧瓶充满干燥的氩气并置于加热至135℃的油浴中。在 氩蒸汽中，加入1.13g的二氯代磷酸乙酯并不断搅拌。在搅拌1小时 后，给该体系施加低度真空(约20mmHg)且使该体系稳定过夜。在完 成前1小时，施加高度真空。冷却后，将聚合物溶于200mL氯仿并骤 冷入1升乙醚两次而得到黄白色沉淀，将其在真空中干燥。

通过NMR光谱法证实所获得的聚合物是所需的产物聚(L-丙交酯 -co-乙基-磷酸酯)[聚(LAEG-EOP)]，正如附图6和7中所示。 实施例23：P(LAGE-EOP)的特性

如上述实施例22中所述制备(x或y)/n＝10∶1的P(LAEG-EOP) 聚合物。通过GPC、使用聚苯乙烯作为标准物来分析所得的聚(L-磷酸 酯-co-酯)且产生的示意图确定Mw为33,000而Mn为4800，正如附图 16中所示。

在40℃下的氯仿(CH3Cl)中测定粘度并测定为0.315dL/g。将该 聚合物溶于乙酸乙酯、丙酮、乙腈、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、N- 甲基吡咯烷酮、二甲基甲酰胺和二甲亚砜。该聚合物形成一种易脆的 薄膜且通过DSC测定的Tg为51.5℃，正如附图17A和17B中所示。 实施例24：聚(L-丙交酯-共-磷酸己酯)[聚(LAEG-HOP)]的合成

除用二氯代磷酸己酯(“HOP”)替代EOP(二氯代磷酸乙酯)外， 也通过实施例22中所述的方法来制备第二种具有下列结构的聚(L-丙 交酯-磷酸酯)： 实施例25：P(LAGE-EOP)和P(LAEG-HOP)的特性

首先通过凝胶渗透色谱法(GPC)、使用聚苯乙烯作为校准标准物 来测定实施例22的聚磷酸酯-co-酯聚合物P(LAGE-EOP)和实施例24 的聚合物P(LAEG-HOP)的重均分子量(Mw)，正如附图18中所示。然 后使各样品保持与室温空气接触以测试环境下未保护的储存能力。1 个月后，再次测定各聚合物的Mw。结果(绘制在附图19中)表明： 在未保护的环境条件下1个月后，尽管p(LAGE-EOP)的Mw减少了约 三分之一，但是p(LAGE-HOP)的Mw保持相当的恒定，甚至表现出轻 度增加。另外参见附图20。

接着在50℃和200MPa的压力下通过压缩模塑法由各聚合物制备 降解研究用的圆片。该圆片具有4mm直径、1.5mm厚度和40mg重。在 37℃下通过将这些圆片置于4mL的0.1M PBS(pH7.4)中来进行降解 研究。在达8天的不同时间点处取出一式两份的样品、用蒸馏水洗涤 并在真空中干燥过夜。分析样品的重量损耗和分子量改变(GPC)且结 果如附图4A、4B、10A和10B中所示。两种聚合物P(LAGE-EOP)和P (LAGE-HOP)表现出有利的降解分布。 实施例26：P(LAEG-EOP)的体内生物相容性

由P(LAEG-EOP)制成100mg聚合物胶片且作为对照公知乳酸和 乙醇酸的共聚物[“PLGA(RG755)”]具有生物相容性。将这些胶片插 在麻醉状态下的成年SPF Sprague-Dawley大鼠右肢的肌层之间。在特 定的时间取出胶片并由合格的病理学家使用下列评分标准对备好的周 围组织进行组织病理学分析：

  评分     刺激等级

   0       无刺激性

 0-200     轻微刺激

200-400    轻度刺激

400-600    中度刺激

600以上    严重刺激

组织病理学分析结果如下列表9中所示。

                            表9

                  植入部位(肌注)上的炎症反应    聚合物   3天   7天   14天  1个月  2个月  3个月 P(LAGE-EOP)   130   123   180   198   106   99 PLGA(RG755)   148   98   137   105   94   43

另外参见附图23。证实含磷酸酯共聚物P(LAGE-EOP)具有类似 于PLGA参照胶片表现出的可接受的生物相容性。

在给雄性S-D大鼠肌注微球体后进行类似试验，将移植部位巨噬 细胞计数与刺激评分制表，如下所示：   3天   7天  14天   31天     聚合物    #  刺激    #   刺激    #  刺激    #  刺激   P(BHET-EOP/TC)      80/20   247   轻度   298   轻度   196   轻微     32   轻微   P(BHET-EOP/TC)     82.5/17.5   445   中度   498   中度   406   中度     38   轻微度   P(BHET-EOP/TC)     85/15   161   轻度   374   轻度   586*   中度     274   轻度   P(CHDM-HOP)   399   轻度   169   轻微度   762   严重     607   严重   P(BHET-EOP/TC)     90/10   206   轻度   476   中度   557   中度     72   轻微度   P(DAPG-EOP)1∶10   360   轻度   323   轻度   569   中度     96   轻微度   PLGA(RG755)   419   中度   331   中度   219   轻度     150   轻微度   对照(无聚合物)   219   轻度    -    -   -   -     -     -

#＝平均计数

*该组中仅有两只动物。

在皮下注入雄性S-D大鼠后进行进一步的试验，将移植部位巨噬 细胞计数与刺激评分制表，如下所示：    7天   14天   31天             组     #     刺激     #    刺激     #     刺激    仅载体(0.7ml)(n＝3)     0     -     0    -     0     -       乙酸(0.7ml)(n＝3)     208     轻度     166    轻微    20     轻微   p(dL)乳酸(89g/kg)0.7ml)       (n＝3)     302     轻度     37    轻微度     0     -   P(DAPG-HOP)(89g/kg)       0.7ml)(n＝6)     355     轻度     192    轻微    101     轻微   P(CHDM-HOP)(89g/kg)       0.7ml)(n＝6)     652     严重     352    轻度    633     严重   P(BHET-EOP/TC)(89g/kg)       0.7ml)(n＝6     325     轻度     423    中度    197     轻微        载体(2.0ml)(n＝3)   65     轻微   0      -     0      -        乙酸(2.0ml)(n＝3)   267     轻度   334     轻度    32     轻微    p(dL)乳酸(267g/kg)2.0ml)            (n＝3)   85     轻微   18     轻微    279     轻度    p(DAPG-HOP)(267g/kg)         2.0ml)(n＝6)   386     轻度   273     轻度    279     轻度    P(CHDM-HOP)(267g/kg)        2.0ml)(n＝6)   471     中度   599     中度    618     严重    p(BHET-EOP/TC)(267g/kg)        2.0ml)(n＝6)   292     轻度   327     轻度    178     轻微

#＝平均计数 实施例27：含有具有10％理论填充量的FITC-BSA的共聚物微球体的 制备

将100mL的FITC-BSA溶液(以100mg/mL溶于水)加入到100mg P (LAEG-EOP)溶于1mL二氯甲烷所得到的溶液中并在冰上通过声波振 荡乳化15秒。立即将所得的乳剂倾入5mL的1％聚乙烯醇(PVA)溶 于5％NaCl所得到的涡旋溶液中并将涡旋维持1分钟。然后将由此形 成的乳剂倾入20mL的0.3％PVA的5％NaCl溶液中，将该体系剧烈搅 拌。加入25mL的2％异丙醇溶液并将该混合物持续搅拌1小时以确保 萃取完全。通过以3000×g离心收集产生的微球体并用水洗涤3次且 冻干。

通过使用作为第二水相的5％NaCl溶液或另外含有1％PEG 8000 的5％NaCl溶液来制备不同微球体制剂。将另一种技术用于通过将该 混合物搅拌过夜而蒸发溶剂。由此通过溶剂蒸发而形成微球体。 实施例28：包封功效和填充量的评价

通过测试所述微球体在0.5N NaOH溶液中水解过夜后的FITC来 测定FITC-BSA的填充量。通过与标准曲线比较来测定填充量，所述的 标准曲线通过制备一系列FITC-BSA溶于0.5N NaOH的溶液来生成。通 过将俘获的FITC-BSA的量与经荧光分析法获得的溶液中的初始量进 行比较来测定微球体的包封功效。FITC-BSA的包封功效(％)和填充 量(％)如下列表10中所示。

                        表10

               FITC-BSA的包封功效和填充量   填充量(％)  高填充量(24.98％)  低填充量(1.5％)   包封功效(％)      98.10      91.70 实施例29：共聚物的细胞毒性

以不同浓度将含有P(LAEG-EOP)的微球体加入到96-孔组织培 养平板中。然后以104个细胞/孔的比例给各孔接种人胃癌细胞 (GT3TKB)。接着在37℃下将该细胞用孔中的微球体培养48小时。通 过MTT检测试验分析所述细胞的增殖率并将结果绘制成相对生长％与 组织培养孔中共聚物微球体浓度的示意图，正如附图24中所示。 实施例30：制造方法对FITC-BSA从微球体中释放的影响

将50mg的本发明聚合物微球体悬浮于装有10mL PBS的瓶中并在 37℃和220rpm的速率下将该瓶在培养箱中振摇。在不同时间点处更换 上清液并在492nm处通过分光光度测定法分析释放的FITC-BSA的量。 将结果绘制成FITC-BSA从所述微球体中的累积释放％与以小时计的 时间的示意图，正如附图25中所示。 实施例31：使用聚乙烯醇作为非溶剂相制备含有利多卡因的P (LAEG-EOP)微球体

在600mL烧杯中通过混合1.05g的PVA与210mL的去离子水来制 备0.5％w/v聚乙烯醇(PVA)溶于去离子水所得到的溶液。将该溶液 搅拌1小时并过滤。通过在7mL二氯甲烷中混合630mg的聚合物和70mg 的利多卡因并通过涡旋进行混合来制备聚合物/药物溶液。使用塔顶混 合器以500rpm搅拌所述PVA溶液并逐滴加入聚合物/药物溶液。在混 合30分钟后，向搅拌的PVA溶液中加入200mL的冷去离子水。将所得 的混合物总计搅拌3.5小时。将形成的微球体铝出、用去离子水洗涤 并冻干过夜。

由此获得填充了4.2％w/w利多卡因的微球体。在37℃下将约10mg 微球体置于振荡器上的磷酸缓冲盐水(0.1M，pH7.4)中并定期取样。 将结果绘制成利多卡因释放％与以天数计的时间的示意图，正如附图 25中所示。 实施例32：P(DAPG-EOP)的合成

如下制备聚(L-丙交酯-共-磷酸丙酯)[“P(DAPG-EOP)”]的d，l 外消旋混合物：

获得的产物为一种可溶于有机溶剂的白色固体。随着反应条件的 不同，获得不同的特性粘数和不同的分子量，正如下列概括形式所表 示的：   基质  反应时间/温度  Eq EOPCl2     Mw     IV  3.0eq  Reillex  18小时/回流     1.05     --     0.06  3.0eq  Reillex  40小时/回流     1.05     --     0.06  3.0eq  Reillex &  0.1％(w/w)  DMAP  18小时/回流     1.05     --     0.08  3.0eq  Reillex  18小时/回流     1.00     --     0.06     基质   反应时间   /温度   Eq EOPCl2     Mw     IV   2.5eq   TEA；0.5   eq DMAP   15   分钟/室温     1.05     --     0.42   2.5eq   TEA；0.5   eq DMAP   18   小时/回流     1.05     --     0.27   2.5eq   TEA；0.5   eq DMAP   约2.5   天/回流     1.05     --     0.39   2.5eq   TEA；0.1   eq DMAP   1小时/4℃；   2小时/室温     1.01     --     0.06   2.5eq   TEA；0.5   eq DMAP   1小时/4℃；   2小时/室温     1.01     91,100     0.47   2.5eq   TEA；0.5   eq DMAP   1小时/4℃；   2小时/室温     1.01     95,900     (Mn     44,200；     Mw/Mn     2.2)     0.42   1.1eq   DMAP   1小时/4℃；   2小时/室温     1.01     --     0.08   1.5eq   TEA；0.5   eq DMAP   1小时/4℃；   2小时/室温     1.01     --     0.23   2.5eq   TEA；0.5   eq DMAP   1小时/4℃；   17小时/室温     1.00     28,400     0.25   2.5eq   TEA；0.5   eq DMAP   1小时/4℃；   2小时/室温     1.00     26,800     (Mn     12,900；     Mw/Mn     2.1)     0.23   2.5eq   TEA；0.5   eq DMAP   1小时/4℃；   2小时/室温     1.01     14,700     0.16   2.5eq   TEA；0.5   eq DMAP   1小时/4℃；   2小时/室温     1.01     32,200     (Mn     13,000；     Mw/Mn     2.5)     0.32   3.0eq   DMAP   1小时/4℃；   2小时/室温     1.00     --     0.20   2.5eq   TEA；0.5   eq DMAP   1小时/4℃；   2小时/室温     1.00     --     0.22 实施例33：使用硅油作为非溶剂相制备含有利多卡因的P(DAEG-EOP) 微球体

在400mL烧杯中通过混合3mL的Span-85与150mL的硅油并使用 设定为500rpm的塔顶搅拌器混合来制备商购自Aldrich商品名为 Span-85的2％失水山梨醇三油酸酯的硅油溶液。通过在4.5mL二氯甲 烷中溶解400mg上述实施例33中制备的聚合物和100mg利多卡因来制 备聚(L-丙交酯-co-乙基-磷酸酯)P(DAPG-EOP)聚合物的d，l外消旋 混合物/药物溶液。将所得的聚合物/药物溶液逐滴加入到硅油/山梨糖 醇酯类混合物中、同时搅拌。将该混合物搅拌1小时15分钟。将由此 形成的微球体滤出并用石油醚洗涤以除去硅油/山梨糖醇酯类混合物 且冻干过夜。

由此形成450mg填充了7.6％w/w利多卡因的微球体。在37℃下 将约10mg微球体置于振荡器上的磷酸缓冲盐水(0.1M，pH7.4)中并 定期取样。将结果绘制成利多卡因释放％与以天数计的时间的示意图。

对于P(DAPG-EOP)微球体，获得类似的数据，正如附图26A、 26B、26C、26D、26E和26F中所示。 实施例34：聚(含磷酸酯)微球体在小鼠腹腔内的生物相容性

如下测试本发明可生物降解的聚(磷酸酯)微球体的生物相容性：

制备3种30mg/mL的冻干聚(L-丙交酯-co-乙基-磷酸酯)微球 体的样品，第一种具有大于75微米的直径、第二种具有75-125微米 范围的直径且第三种具有125-250微囊范围的直径。将各样品腹膜内 注入18只一组具有原始体重为25g的雌性CD-1小鼠体内。给各组中 的动物称重、处死并在第2、7和14天以及在第1、2和3个月时进行 尸检。将尸检过程中检测到的任何损害分成0-4的等级，其中0表示 对治疗没有反应而4表示对治疗有重度反应。

观察到炎症损害只限于与微球体相关的腹膜表面或脂肪组织内且 适合于体外分离和包封。在2-7天时观察到病灶集中在带有间皮瘤增 生的多灶性支持性腹膜脂肪织炎处，但逐渐被巨噬细胞浸润所溶解而 在稍后的处死时由纤维包封微球体。还观察到了与炎症反应相关的微 球体与肝和横隔膜偶发粘附。在腹部或胸部器官内没有观察到与微球 体相关的损害。整个研究期限过程中检测的微球体在处死早期时看起 来是透明的而在稍后在内部生成结晶物质。没有观察到对身体生长的 作用。观察到的腹膜反应只限于直接与微球体接触的区域而对主要的 胸部或腹部器官没有明显的有害作用。

类似的将DAPG-EOP腹膜内注入雄性或雌性S-D大鼠的过程产生下 列结果：   剂量水平     测试物质   测试中的起始号  累积的死亡率a   (mg/kg)     M     F     M     F     0   10％葡聚糖40的    0.9％盐水溶液     25     25     0     0     30     DAPG-EOP     25     25     1     0     100     DAPG-EOP     25     25     0     0     300     DAPG-EOP     25     25     0     0

a代表研究过程中发现的死亡或濒临死亡条件下处死的动物

M＝雄性；F＝雌性 实施例35：聚(含磷酸酯)P(反式-CHDM-HOP)的合成

在氩蒸汽中，将10g的反式-1，4-环己烷二甲醇(CHDM)、1.794g 的4-二甲氨基吡啶(DMAP)、15.25ml(14.03g)的N-甲基吗啉(NMM) 和50mL的二氯甲烷转入安装有漏斗的250mL烧瓶中。通过搅拌将烧瓶 中的溶液冷却至-15℃并通过漏斗加入15.19g二氯代磷酸己酯(HOP) 溶于30mL二氯甲烷所得到的溶液。将该反应混合物的温度逐步升至沸 点并在回流温度下维持过夜。

将该反应混合物过滤并将滤液蒸发至干。将残余物重新溶于 100ml的氯仿。将该溶液用0.1M的HCl与NaCl的混合物溶液洗涤、 用无水Na2SO4干燥苯并骤冷入500ml乙醚。收集产生的可流动的沉淀 并在真空中干燥至形成一种清澈的淡黄色胶状聚合物，它具有粘性糖 浆的流动性。该聚合物的产率为70-80％。通过附图27中所示的 31P-NMR和1H-NMR光谱并通过FT-IR光谱确定了P(反式-CHDM-HOP) 的结构。通过如附图28中所示的凝胶渗透色谱法(GPC)、使用聚苯乙 烯作为校准标准物来测定分子量(Mw＝8584；Mn＝3076)。 实施例36：聚(含磷酸酯)P(顺式和反式-CHDM-HOP)的合成

除将顺式和反式-1，4-环己烷二甲醇用作原料外，通过如上述实施 例34中所述的步骤制备聚(含磷酸酯)P(顺式/反式-1，4-环己烷二 甲醇己基磷酸酯)。正如所预计的，产物顺式-/反式-P(CHDM-HOP)的 粘性低于实施例34中获得的反式异构体。 实施例37：低分子量P(CHDM-HOP)的合成

在氩蒸汽中，将10g的反式-1，4-环己烷二甲醇(CHDM)、15.25ml (14.03g)的N-甲基吗啉(NMM)和50mL的二氯甲烷转入安装有漏斗 的250mL烧瓶中。通过搅拌将烧瓶中的溶液冷却至-40℃并通过漏斗加 入15.19g二氯代磷酸己酯(HOP)溶于20mL二氯甲烷所得到的溶液并 再用10mL的二氯甲烷冲洗漏斗。然后将该混合物的温度逐步升至室温 并持续搅拌4小时。

将该反应混合物过滤并将滤液蒸发至干。将残余物重新溶于 100ml的氯仿。将该溶液用0.5M的HCl-NaCl的溶液混合物洗涤、用 饱和NaCl溶液洗涤、用无水Na2SO4干燥并骤冷入1∶5的乙醚-石油 混合物中。收集产生的油状沉淀并在真空中干燥至形成一种清澈的淡 黄色粘性物质。通过1H-NMR、31P-NMR和FT-IR光谱证实了产物的结构。 实施例38：聚(含磷酸酯)P(反式-CHDM-BOP)的合成

在氩蒸汽中，将10g的反式-1，4-环己烷二甲醇(CHDM)、0.424g 的(5％)4-二甲氨基吡啶(DMAP)、15.25mL(14.03g)的N-甲基吗 啉(NMM)和50mL的二氯甲烷转入安装有漏斗的250mL烧瓶中。通过 搅拌将烧瓶中的溶液冷却至-40℃。通过漏斗加入13.24g二氯代磷酸 丁酯(BOP)溶于20mL二氯甲烷所得到的溶液并再用10mL二氯甲烷冲 洗漏斗。将该混合物的逐步加热至沸点并持续回流4小时。将该反应 混合物过滤并将滤液蒸发至干，注意保持温度低于60℃。将残余物重 新溶于100ml的氯仿。将形成的溶液用0.5M的HCl-NaCl的溶液洗涤、 用饱和NaCl洗涤、用无水Na2SO4干燥并骤冷入1∶5的乙醚-石油混 合物中。收集产生的油状沉淀并在真空中干燥而产生-种清澈的淡黄 色粘性物质。 实施例39：P(反式-CHDM-HOP)的流变特性

P(反式-CHDM-HOP)在室温下保持可流动的凝胶样状态。该聚合 物在25℃下具有327Pa s的恒稳粘度(附图29B中所示)和67.5KJ/mol 的流动活性能量(附图29A中所示)。 实施例40：P(反式-CHDM-HOP)的体外细胞毒性

通过旋转包被法用P(反式-CHDM-HOP)包被盖玻片。然后将包被 的盖玻片干燥并通过在罩中用UV照射过夜来灭菌。将P(反式 -CHDM-HOP)包被的盖玻片平板固定在6-孔平板的各孔底部。将5×105 个HEK293(人胚肾)细胞平板固定入各孔并在37℃下培养72小时。 使用组织培养物聚苯乙烯(TCPS)作为阳性对照检验所得细胞的形态。 生长在P(CHDM-HOP)表面的细胞以轻度缓慢的速率增殖，正如附图 30中所示。然而，生长在聚合物表面上的细胞形态与生长在TCPS表 面上的细胞形态类似。 实施例41：P(CHDM-烷基磷酸酯)的体外降解

如上所述制备下列各聚(磷酸酯)：

                                  表11     聚合物      侧链     P(CHDM-HOP)     -O-己基     P(CHDM-BOP)     -O-T基     P(CHDM-EOP)     -O-乙基

在37℃下将50mg的各聚合物样品在5mL的0.1M、pH7.4的磷酸 缓冲盐水(PBS)中培养。在不同的时间点处倾出上清液并将该聚合物 样品用蒸馏水洗涤3次。然后将该聚合物样品用氯仿提取并将氯仿溶 液蒸发至干。通过与原始的50mg样品进行比较来分析残余物的重量损 耗。附图31以图解方式表示了侧链结构对聚(磷酸酯)在PBS中的体 外降解速率的影响。 实施例42：蛋白质通过P(CHDM-HOP)的体外释放分布

以2∶1(w/w)的比例将聚合物P(CHDM-HOP)与蛋白质FITC-BSA (牛血清清蛋白、一种用荧光标记FITC标记的蛋白质；“FITC-BSA”) 混合(33％的填充量)。将测定量(66mg或104mg)的聚合物-蛋白质 掺合物置于10ml的一种磷酸盐缓冲液PBS(0.1M，pH7.4)中。在定 期间隔(约每天)离心样品并取出上清液且进行吸收光谱测定(501nm)， 而将新鲜量的缓冲液加入到该样品中。将累积释放的FITC-BSA百分比 与时间绘图产生的释放曲线以图解方式表示在附图32中。在两种情况 中蛋白质的填充量均为33重量％。 实施例43：不同填充量下的体外蛋白质释放分布

在室温下以不同填充量(1％、10％和30％)将FITC-BSA与P (CHDM-HOP)混合至所得混合物形成均匀的糊状物为止。将60mg的蛋 白质填充的聚合物糊置于6mL的0.1M磷酸盐缓冲液中并在37℃下不 断振摇。在不同的时间点处离心样品并用新制的缓冲液替换上清液。 通过在501nm处进行UV分光光度测定来确定上清液中释放的 FITC-BSA。附图7以图解方式表示了作为填充量函数的FITC-BSA的体 外释放动力学。 实施例44：侧链结构对FTTC-BSA的体外蛋白质释放动力学的影响

如上所述制备下列3种聚合物：

    P(CHDM-EOP)、

    P(CHDM-BOP)和

    P(CHDM-HOP)

在室温下以10％的填充量将FITC-BSA与各聚合物混合以便形成 均匀的糊状物。将60mg的蛋白质填充的聚合物糊置于6mL的0.1M磷 酸盐缓冲液中并在37℃下不断振摇。在不同的时间点处离心样品并用 新制的缓冲液替换上清液。通过在501nm处进行UV分光光度测定来确 定上清液中释放的FITC-BSA。附图34以图解方式表示了蛋白质上的 侧链变化形式对10％填充量的FITC-BSA的蛋白质释放动力学的影响。 实施例45：小分子量药物从P(CHDM-HOP)中的体外释放

在室温下通过将100mg的P(CHDM-HOP)与1mg的所需药物混合 而分别制备含有阿霉素、顺式铂氨或5-氟尿嘧啶的P(CHDM-HOP)糊 状物。将等分的60mg药物填充的糊状物置于6mL的0.1M的磷酸盐缓 冲液中、同时不断振摇，其中对各药物的三份样品进行测试。在不同 的时间点处用新制的缓冲溶液替换上清液。通过分别在484nm和280nm 处进行UV分光光度测定来对上清液中的阿霉素和5-氟尿嘧啶的含量 进行定量。使用原子吸收分光光度计测定顺式铂氨的浓度。附图9A表 示三种低分子量药物从P(CHDM-HOP)中的释放情况。

附图9B表示诸如紫杉醇这样的疏水小分子从p(CHDM-HOP)中的 释放情况。 实施例46：阿霉素和顺式铂氨从P(CHDM-HOP)中的体外释放分布

在室温下通过将300mg的P(CHDM-HOP)与6mg的阿霉素和6mg 顺式铂氨混合来制备一种糊状物。在37℃下将100mg该糊状物样品在 10mL的磷酸盐缓冲液(pH7.4)中培养、同时振摇。在不同的时间点 处离心样品，吸取9mL的上清液并用新制的缓冲溶液替换。通过在 484nm处进行UV分光光度测定来检测吸取的上清液以测定释放入吸取 上清液中的阿霉素的量并通过原子吸收分光光度计测定顺式铂氨的释 放情况。附图36表示以图解方式表示顺式铂氨和阿霉素从P (CHDM-HOP)中同时释放。 实施例47：P(反式-CHDM-HOP)的体内生物相容性

如实施例1中所述合成聚合物P(反式-CHDM-HOP)。为了有助于 注射，以10％的浓度和20体积％将乙醇加入聚合物以降低粘度。将 25μL单独的聚合物、25μL含有10％乙醇的聚合物和25μL含有20％ 乙醇的聚合物的样品注入Sprague Dawley大鼠背部肌肉。在注射后3 天或13天时收集注射部位周围的组织、进行石蜡组织学处理、用曙红 染料苏木精染色并分析。将药用级硅油注入对照组大鼠。

对注射了用乙醇稀释的聚合物的大鼠背部肌肉部分的组织学检查 表明没有急性炎症反应。巨噬细胞存在的水平可与注射了药用级硅油 的对照组相比拟且在第3天或第13天时所取的任意样品中均不存在嗜 中性粒细胞。 实施例48：体内肿瘤模型中白细胞介素-2和阿霉素从P(CHDM-HOP) 的受控递送

冻干的白细胞介素-2(“IL-2”)商购自Chiron、小鼠干扰素-γ (“mIFN-γ”)获自Boehringer Mannheim且盐酸阿霉素(“DOX”)获自 Sigma。6-8周龄的C57BL/6小鼠获自Charles River。将攻击性黑 素瘤细胞系B16/F10用于在小鼠体内生成肿瘤并通过每周传代维持该 细胞。如实施例35中所述合成聚合物P(CHDM-HOP)。

如下列表12中所示将小鼠随机分成组。将注射黑素瘤细胞系的细 胞的该天表示为第0天。各小鼠的左侧腹接受皮下注射50μl(105)溶 于磷酸缓冲盐水(PBS)中的肿瘤细胞。在第3天或第7天给带有肿瘤 的小鼠的右侧腹选择性注射下列制剂之一：(1)IL-2药团(bolus)； (2)DOX药团；(3)IL-2聚合物糊(paster)；(4)DOX聚合物糊；(5) 含有IL-2和DOX的聚合物糊；或(6)含有IL-2和mIFN-γ的聚合物 糊。对照组和阴性对照组在第3天或第7天不接受进一步的注射。

在注射前通过将适量的IL-2或DOX溶于50μl的等渗溶液来制备 IL-2或DOX的药团制剂。通过将50μl的无菌P(CHDM-HOP)与药物 混合至均匀来制备IL-2、DOX、IL-2和DOX的混合物或IL-2和mIFN-γ 的聚合物糊剂。

                表12：体内肿瘤模型小鼠的分组         组  小鼠数量    注射日          制剂       对照组     5     --           无     阴性对照组     5     --           无     IL-2药团     8     3        0.8×106IU     DOX药团     8     3          0.5mg     DOX药团     8     7          0.5mg     IL-2糊     10     3        0.8×106IU     IL-2糊     10     7        0.8×106IU     DOX糊     10     3          0.5mg     DOX糊     10     7          0.5mg   糊(IL-2+DOX)     10     3      0.8×106IU+0.5mg   糊(IL-2+DOX)     10     7      0.8×106IU+0.5mg  糊(IL-2+mIFN-γ)     10     3          106IU

在肿瘤生长的第28天和第42天测定不同小鼠的肿瘤大小。结果 如下列表13中所示，该表表示第28天和第42天肿瘤体积生长的数据 和每个药物分组实验存活的小鼠的数量。按照Osieka等在1981年所 述的方法将肿瘤体积计算为长度与宽度平方乘积的一半。

表13：CHDM-HOP聚合物作为黑素瘤模型中细胞因子和药物递送的载体     组 小鼠起始   数量        肿瘤注射后肿瘤体积(mm3±SEM*)        28天         42天             小鼠存活的数量   对照组     5      无肿瘤         无肿瘤 阴性对照组     5    2458±1070.7         5656        4          1 药团IL- 2(3天)     8    1946±505.6      3282±1403.3        8          4 药团Dox (3天)     8  1218.9±304.1    3942.5±1818        8          5 药团DOx (7天)     8  1661.2±301.8    4394.3±741.3        8          3 糊IL- 2(3天)     10   934.1±230      3183±1223.4        10          5 糊IL- 2(7天)     10  2709.8±397.3     10491±2485.5        10          3 糊Dox (3天)     10    1410±475.3    4648.9±1202.2        8          7 糊DOx (7天)     10    1480±287      3915±1739.7        9          4 糊 (IL-2+ DOX)(3天)     10   657.3±248.9    3362.8±1120.1        8          7 糊 (IL-2+ DOX)(7天)     10   857.2±243.6    3449.8±1285.9        8          5 糊 (IL-2+ mIFN-γ) (3天)     10  1217.9±168.4    4469.8±2018.7        9          4

*平均值的标准误差

以这些测定值为基础，将肿瘤大小分布以图解方式表示在28天的 附图37(植入肿瘤后4周)和42天的附图38(植入肿瘤后6周)中。 按照对带有肿瘤的小鼠给予的不同治疗方式将这些图再分成小图。

28天时结果表明：与对照组(未治疗的肿瘤)和注射IL-2药团 相比，接受聚合物/IL-2糊注射的小鼠组延缓了肿瘤生长。然而，就 不接受聚合物/IL-2糊注射直到第7天的小鼠组而言，截止到第7天 肿瘤已经成为实体大小且因此没有观察到肿瘤大小的明显降低。

使用IL-2与DOX的联用药物观察到了肿瘤明显减小。用注射含有 IL-2和DOX的聚合物糊治疗的肿瘤平均大小明显小于对照组肿瘤。特 别地，与对照组的2458mm3相反，在第3天接受IL-2和DOX/聚合物糊 的小鼠的平均肿瘤大小为657.3mm3。甚至当将治疗延缓至肿瘤生长的 第7天时，使用含有IL-2和DOX的聚合物糊制剂仍然观察到了治疗作 用。

肿瘤生长第42天的结果还证实第3天注射含有IL-2和DOX的聚 合物糊可在延缓肿瘤生长方面产生最佳结果。在本发明的聚合物糊中 使用IL-2和DOX的联合疗法在多数试验动物中导致出现肿瘤大小变 小。根据附图15中所示的分布数据，与仅在一只小鼠体内单独注射 DOX聚合物糊相比，有4只使用IL-2和DOX聚合物糊疗法的小鼠带有 的肿瘤小于1000mm3。此外，正如在肿瘤生长第42天时评价的，显然 单独的IL-2不会产生所需的作用。尽管在第28天时具有小肿瘤尺寸 的良好分布，但是看起来长期存活数据受到不利影响，不仅是因为在 该时间点处的肿瘤生长，而且是因为在较长时间期限内缺乏IL-2的持 续受控递送。由于使用了IL-2和DOX的聚合物糊制剂，所以聚合物降 解缓慢，从而使得一段时间内治疗剂的扩散速率逐步降低。

然而，由于在各组内存在肿瘤大小分布差异，所以在表13中观察 到的平均肿瘤大小没有形成完整的图。对本发明治疗显著性的更完整 的评价可以通过比较来自附图38分布图的数据来获得，附图38表示 植入肿瘤后6周时肿瘤大小的分散性，而存活曲线表示在附图39中， 该附图表示第42天测定前所有组中小鼠大量死亡，但是不包括在第3 天接受注射含有单独的DOX或IL-2和DOX的联合用药物的糊的动物 组。因此，总而言之，这些数据表明糊中IL-2与DOX的联合疗法可显 著延缓肿瘤生长并延长生命。

认为注射含DOX的聚合物糊后约3-4天的早期死亡至少部分是由 于DOX的毒性作用所导致的，从而使体弱动物死亡。相应注射DOX药 团不会产生早期死亡，这可能是由于药团注射的DOX快速分布并从体 内清除所导致的。 实施例49：将紫杉醇引入P(CHDM-HOP)或P(CHDM-EOP)

以约50％的浓度将100mg的各聚合物p(CHDM-HOP)或p (CHDM-EOP)溶于乙醇。在所述聚合物完全溶解后，向该溶液中加入 5mg紫杉醇粉(一种化疗药物)并搅拌至该粉末完全溶解为止。然后 将该溶液倾入冰水以沉淀聚合物组合物。将所得混悬液离心、滗析并 冻干过夜，从而获得一种粘性胶态产物。 实施例50：体外紫杉醇从P(CHDM-HOP)或P(CHDM-EOP)中的释放

在37℃下的1.7mL的塑料微型离心管中，用1mL 80％PBS与20 ％PEG 400的缓冲液混合物培养测试用实施例20的两种5mg紫杉醇 聚合物制剂。制备测试用各制剂的4份样品。在特定的时间点处(约 每天)倾出PBS：PEG缓冲液以便通过HPLC进行紫杉醇分析并向微型离 心管中加入新制的缓冲液。在第26天时终止释放研究，此时用一种溶 剂提取聚合物中剩余的紫杉醇以便使紫杉醇达到质量平衡。

所得紫杉醇从两种聚合物中释放的释放曲线如附图18中所示。紫 杉醇的总回收率就P(CHDM-HOP)制剂而言为65％而就P(CHDM-EOP) 制剂而言为75％。 实施例51：体外紫杉醇从P(DAPG-EOP)中的释放

通过溶剂蒸发法、使用乙酸乙酯作为溶剂和0.5％PVA水溶液作为 非溶剂来制备P(DAPG-EOP)微球体。所得微球体为具有约20-150μm、 最优选20-50μm范围颗粒大小的球形。

在37℃下的PBS(pH7.4)中进行紫杉醇从所述微球体中的体外 释放。为了维持蓄储条件，将辛醇层置于PBS上部以便连续提取释放 的紫杉醇。使用HPLC法对释放的紫杉醇进行定量并用重量法获得聚合 物的体外质量损耗。紫杉醇从所述微球体中的体外释放是缓慢而持续 的并伴有聚合物的质量损耗，正如附图41中所示。 实施例52：紫杉醇从P(DAPG-EOP)中的体内释放

在实施例52中如上所述制备P(DAPG-EOP)微球体且对裸鼠进行 体内紫杉醇从该微球体中释放的研究。在注射后第1、14和28天时从 各测试动物体内采集血浆并通过HPLC与MS-MS检测来分析紫杉醇浓 度。为了进行有效研究，测试动物接受腹膜内注射获自携带者动物的 人卵巢癌细胞系OVCAR3。在注射细胞后第1天还腹膜内给予混有紫杉 醇或混有紫杉醇而不含可生物降解聚合物的P(DAPG-EOP)微球体。 另外监测动物的存活率。

在单独腹膜内给予微球体后，在至少28天的时间内在血浆中获得 持续浓度的紫杉醇，正如表14中所示：

                        表14

                   紫杉醇血浆浓度 紫杉醇浓度(ng/ml) 微球体形式的紫杉 醇(125mmg/kg) 紫杉醇w/o聚合物   (120mg/kg)     1天     38.98±8.53   357.67±36.39     14天     4.50±1.21     动物死亡     28天     3.98±0.99     动物死亡

当腹膜内给予可比拟剂量的紫杉醇时，裸鼠可能因毒性而不耐受 该剂量。

可生物降解聚合物微球体递送系统令人意外地可有效治疗动物模 型OVCAR3中的卵巢癌。正如附图42中所示，获得了优于不使用可生 物降解聚合物的紫杉醇的功效。 实施例53：P(DAPG-EOP)紫杉醇的中数存活数据

将含有10mg/kg或40mg/kg紫杉醇的P(DAPG-EOP)微球体注入 患有卵巢癌的测试动物腹膜内。给其它测试动物注射相同剂量水平的 溶于有机溶剂的紫杉醇(商购自商品名太平洋紫杉素)。监测测试动物 并注意中数存活时间。将结果概括如下：       给予的物质    中数存活时间         对照组        23天    太平洋紫杉素10mg/kg        64天    太平洋紫杉素40mg/kg        67天  微球体中的紫杉醇10mg/kg        69天  微球体中的紫杉醇40mg/kg        115天

将这些结果以图解方式列在附图43中且表明给予可生物降解微 球体形式的紫杉醇的测试动物的中数存活时间令人意外地显著增加。

比较不同组剂量水平得到下列相似数据：         给予的物质     中数存活时间           对照组        30天     太平洋紫杉素40mg/kg        77天   微球体中的紫杉醇4mg/kg        83天   微球体中的紫杉醇10mg/kg        95天   微球体中的紫杉醇40mg/kg      ＞110天

将这些结果以图解方式列在附图44中且证实给予可生物降解微 球体形式的紫杉醇的测试动物的中数存活时间令人意外地显著增加。 该数据的其它图解表示由附图45和46提供。

虽然由此描述了本发明，但是显然可以按照许多方式对其进行改 变。并不将这类改变看作是脱离本发明的实质和范围且所有这类修改 均包括在下列权利要求的范围内。

发明背景