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减缓化疗药物 副作用的组合物

阅读：579发布：2020-05-12

专利汇可以提供减缓化疗药物副作用的组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供一种减缓化疗药物副作用的组合物，该组合物含有大豆发酵液，该大豆发酵液是将大豆液与微生物益生菌群共同培养而制得，其中该微生物益生菌群是由双歧杆菌属、芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳酸球菌属及链球菌属的微生物所组成的群组，且该化疗药物为顺铂 (Cisplatin)。本发明有效改善化疗药物顺铂引起的肝肾功能损伤、白血球与血红蛋白数目减少、食量减少及体重减轻的副作用。，下面是减缓化疗药物副作用的组合物专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种减缓化疗药物副作用的组合物，该组合物含有大豆发酵液，该大豆发酵液是将大豆液与微生物益生菌群共同培养而制得，其中该微生物益生菌群是由双歧杆菌属(Bifidobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳酸球菌属(Lactococcus)及链球菌属(Streptococcus)的微生物所组成的群组，且该化疗药物为顺铂(Cisplatin)。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述大豆发酵液为未脱脂的大豆发酵液。
3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述双歧杆菌属的微生物为双岐杆菌(bifidobacterium bifidum)或长双岐杆菌(Bifidobacterium longum)。
4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述芽孢杆菌属的微生物为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。
5.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述乳杆菌属的微生物是选自于由嗜酸乳杆菌(Lactobacillus Acidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、戴白氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)及鼠李醣乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)所组成的群组。
6.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述乳酸球菌属的微生物为乳酸球菌(Lactococcus lactis)。
7.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述链球菌属的微生物为唾液链球菌(Streptococcus salivarius)。
8.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述大豆液与该微生物益生菌群共同培养的体积比例是为100:1。
9.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述化疗药物副作用为肾功能损伤、肝功能损伤、白血球与血红蛋白数目减少、骨髓抑制、摄食量减少或体重减轻。
10.一种医药组合物，包含如权利要求1所述的组合物。
11.一种如权利要求1所述的组合物用于制备减缓化疗药物副作用的药物的用途。
12.如权利要求11所述的用途，其特征在于，所述化疗药物为顺铂。
13.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述化疗药物副作用为肾功能损伤、肝功能损伤、白血球与血红蛋白数目减少、骨髓抑制、摄食量减少或体重减轻。
14.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述大豆发酵液为未脱脂的大豆发酵液。
15.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述双歧杆菌属的微生物为双岐杆菌(bifidobacterium bifidum)或长双岐杆菌(Bifidobacterium longum)。
16.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述芽孢杆菌属的微生物为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。
17.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述乳杆菌属的微生物是选自于由嗜酸乳杆菌(Lactobacillus Acidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、戴白氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)及鼠李醣乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)所组成的群组。
18.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述乳酸球菌属的微生物为乳酸球菌(Lactococcus lactis)。
19.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述链球菌属的微生物为唾液链球菌(Streptococcus salivarius)。

说明书全文

减缓化疗药物 副作用的组合物

技术领域

[0001] 本发明是提供一种组合物，特别是一种能减缓化疗药物副作用的组合物。

背景技术

[0002] 根据卫生署癌症登记相关数据显示，自民国71年起，癌症即跃居国人十大死因第一位，综观癌症发生及死亡情形，皆呈现逐年上升趋势，预计未来癌症仍是影响国人健康重要原因之一。

[0003] 因此，近年来经由医学研究的成果，化学抗癌药物治疗已是癌症的治疗方法之一，通常会合并使用多种化学抗癌药物、抗体或细胞激素来治疗癌症，以期能杀死更多的癌细胞，并避免癌细胞抗药性的产生。化学抗癌药物可经由血液循环杀死手术及放射治疗无法消灭的癌细胞；就细胞生物学的观点来看，癌细胞与正常细胞不同，癌细胞的生长及分裂速度比较快，且不受正常细胞调控机制所掌控，化学抗癌药物就是针对这种特性来杀死癌细胞，但对体内生长较快速的正常细胞也很容易造成伤害，此造成生理功能副作用。另一方面，依癌症的种类与程度不同，所接受的疗程、时间及药物种类也不同，化学抗癌药物治疗的疗程可能为每周、每二周、每三周或每月一次。在两次疗程中间会有一段休息时间，让身体恢复因生理功能副作用所受到的伤害，以便进行下一个疗程。常见的化学抗癌药物治疗的副作用，有恶心、呕吐、口腔炎、腹泻，或便秘、掉发、白血球减少、血小板减少、贫血、倦怠、轻度到中度的骨髓抑制与重要脏器(如心脏、肝脏、肾脏与肺脏等)的损伤与功能性影响。

[0004] 顺铂(Cisplatin，CDDP)是一种含铂的抗癌药物，即顺式-二氯二氨合铂(II)，棕黄色粉末，属于细胞周期非特异性药物，为目前最常使用的化学抗癌药物之一。自1970年代以来，陆续发现Cisplatin在治疗卵巢癌、生殖细胞癌、头颈癌、食道癌、肺癌、膀胱癌、子宫颈癌以及子宫内膜癌等方面，都扮演重要的角色。它是铂类药物中最早被合成的一个，结构最简单且作用机理明确；顺铂进入体内后，一个氯缓慢被水分子取代，形成[PtCl(H2O)+(NH3)2]，其中的水分子很容易脱离，从而铂与DNA碱基一个位点发生配位。然后另一个氯脱离，铂与DNA单链内两点或双链发生交叉联结(cross-linking)，抑制癌细胞的DNA复制过程，使之发生细胞凋亡。它的发现又导致了其他铂类抗癌药物的研制，包括卡铂、奥沙利铂、奈达铂及赛特铂等；其明显的副作用为恶心、呕吐、食欲不振、白血球减少、耳毒性、末梢神经病变、高尿酸血症与肾功能受损，其中急性肾损伤，一直是临床医师想要克服之处。不论是注射药物前给予大量点滴或是药物，在临床上依旧无法完全避免肾脏功能受到影响。

发明内容

[0005] 有鉴于此，本发明提供一种减缓化疗药物副作用的组合物，该组合物含有大豆发酵液，该大豆发酵液是将大豆液与微生物益生菌群共同培养而制得，其中该微生物益生菌群是由双歧杆菌属(Bifidobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳酸球菌属(Lactococcus)及链球菌属(Streptococcus)的微生物所组成的群组，且该化疗药物为顺铂(Cisplatin)。

[0006] 在本发明一实施例中，其中该大豆发酵液为未脱脂的大豆发酵液。

[0007] 在本发明一实施例中，其中该双歧杆菌属的微生物为双岐杆菌(bifidobacterium bifidum)或长双岐杆菌(Bifidobacterium longum)；该芽孢杆菌属的微生物为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)；该乳杆菌属的微生物是选自于由嗜酸乳杆菌(Lactobacillus Acidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、戴白氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)及鼠李醣乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)所组成的群组；该乳酸球菌属的微生物是为乳酸球菌(Lactococcus lactis)；该链球菌属的微生物是为唾液链球菌(Streptococcus salivarius)。

[0008] 在本发明一实施例中，其中该大豆液与该微生物益生菌群共同培养的体积比例为100:1。

[0009] 在本发明一实施例中，其中该化疗药物副作用为选自于由肾功能损伤、肝功能损伤、白血球与血红蛋白数目减少、骨髓抑制、摄食量减少及体重减轻所组成的群组。

[0010] 本发明另提供一种医药组合物，其包含该减缓化疗药物副作用的组合物。

[0011] 本发明另提供一种减缓化疗药物副作用的组合物的用途，其中该化疗药物副作用是选自于由肾功能损伤、肝功能损伤、白血球与血红蛋白数目减少、骨髓抑制、摄食量减少及体重减轻所组成的群组。

[0012] 虽然本发明已以实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明，任何所属技术领域中具有通常知识者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作些许的更动与润饰，故本发明的保护范围当事后付之申请专利范围所界定者为准。附图说明

[0013] 图1是小鼠体重变化的曲线图；第23日不同组数值旁所标示的小写英文如不相同代表彼此间具有显著统计差异，负对照组a：35.95±0.64、2倍剂量组d：31.86±0.67、1倍剂量组d：31.11±0.25、5倍剂量组cd：30.69±0.59、正对照组cb：27.48±1.25及比较例1b：24.94±1.07(单位：公克)，显著水平订为α<0.05。

[0014] 图2是小鼠摄食量变化的曲线图；第23日不同组数值旁所标示的小写英文如不相同代表彼此间具有显著统计差异，比较例2a：0.52、正对照组ab：2.06、5倍剂量组bc：3.25、1倍剂量组c：4.46、2倍剂量组c：:4.00及负对照组d：6.27，显著水平订为α<0.05。

[0015] 图3是小鼠肝、肾功能变化的数据图；(A)谷草转氨酶(AST)和(B)谷丙转氨酶(ALT)为肝功能评估，(C)肝酸肌(Cre)和(D)尿素氮(BUN)为肾功能评估；不同组上方所标示的小写英文如不相同代表彼此间具有显著统计差异，a与b两者以不同字母表示为两者有统计上的差异，表示两者数值是有意义的不同，显著水平订为α<0.05。

[0016] 图4是小鼠的肾脏组织病理切片图。

[0017] 图5是小鼠的骨髓腔组织病理切片图。

具体实施方式

[0018] 本发明为检验本发明的组合物中所含的大豆发酵液是否具有缓解化疗药物顺铂(Cisplatin)引起生理毒副作用的功效性试验评估。本发明采用实验动物模式(in vivo)，并依照目前临床上已知各项Cisplatin可能产生的化疗毒副作用，如：食欲不振、体重减轻、白血球减少、骨髓抑制及肝肾功能受损等，评估是否具有缓解临床化疗药物Cisplatin引起生理毒副作用的功效。

[0019] 实施例1.本发明的组合物中含有的大豆发酵液的制备方法

[0020] 本发明是将未脱脂的非基因改造大豆使用磨浆机磨浆，以大豆与水的体积比例为1比16的大豆液加入黑糖、矿盐加热后，无需过滤即得大豆液体培养基，供微生物益生菌群培养使用。

[0021] 该大豆液体培养基分别与双歧杆菌属(Bifidobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳酸球菌属(Lactococcus)及链球菌属(Streptococcus)的微生物按照乳酸菌发酵方式(如同营发酵或异营发酵)分别进行液态培养，再添加该大豆液体培养基进行放大培养，最后将各个菌种混合在一起，添加该大豆液体培养基进行最终培养；其中最终培养以真空袋做为平面袋式发酵容器，发酵温度控制在38℃，发酵时间为168小时以上。

[0022] 本发明的一实施例中，上述双歧杆菌属(Bifidobacterium)的微生物为双岐杆菌(bifidobacterium bifidum)或长双岐杆菌(Bifidobacterium longum)；该芽孢杆菌属的微生物为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)；该乳杆菌属的微生物是选自于由嗜酸乳杆菌(Lactobacillus Acidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、戴白氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)及鼠李醣乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)所组成的群组；该乳酸球菌属的微生物为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)；以及该链球菌属的微生物为唾液链球菌(Streptococcus salivarius)。

[0023] 本发明的另一实施例中，该微生物益生菌群优选为由双岐杆菌、长双岐杆菌、凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、戴白氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李醣乳杆菌、乳酸球菌以及唾液链球菌所组成的群组。

[0024] 本发明的又一实施例中，其中该大豆液与该微生物益生菌群共同培养的体积比例为100:1，其中双岐杆菌占总体积的0.10～0.30％、长双岐杆菌占总体积的0.05～0.15％；凝结芽孢杆菌占总体积的0.10～0.30％；嗜酸乳杆菌占总体积的0.10～0.30％、干酪乳杆菌占总体积的0.10～0.30％、戴白氏乳杆菌占总体积的0.10～0.30％、副干酪乳杆菌占总体积的0.100～0.30％、植物乳杆菌占总体积的0.100～0.30％、鼠李醣乳杆菌占总体积的0.100～0.30％；乳酸球菌占总体积的0.05～0.15％以及唾液链球菌占总体积的
0.05～0.15％。

[0025] 最终培养所得的大豆发酵液经加热灭菌及过滤后，以浓缩机浓缩至比重1.2左右，可溶性固形物浓度可达65Brix左右，即制得本发明组合物中所含的大豆发酵液。其中该发酵液可为液体，或经由喷雾干燥、流动床干燥以形成粉剂型浓缩大豆发酵物。

[0026] 实施例2.比较例的制备

[0027] 比较例是依据以下一般方法制备的大豆发酵液，比较例为以脱脂的非基因改造大豆与水的体积比例为1比10，加热后再过滤得到大豆液体培养基。另一方面，分别将乳酸菌及酵母菌加入琼脂培养基，该琼脂培养基是使用海藻与牛肉煮的肉汁加入盐、糖、琼脂做成，再将所产生的菌落依生长特性不同，以不同比例接种至前述大豆液体培养基，进行分类培养；再将分类培养的乳酸菌群及酵母菌与大豆液体培养基共同培养，其发酵温度控制在36℃至43℃，发酵时间为150小时；经加热灭菌及过滤后；最后排除约95％的水分，即得到浓缩的大豆发酵液；该浓缩液置于室温至少二个月以分离浓缩液，取上层的液体，经磁滤器过滤后制得大豆发酵液，该大豆发酵液是于以下的比较例中使用。

[0028] 实施例3.大豆异黄酮总含量比较

[0029] 为了解本发明与比较例所使用的大豆发酵液的成份差异，本发明利用高效液相色谱法进行检测，其结果如表一，其显示本发明使用未脱脂的较稀大豆液(大豆与水的体积比例为1比16)所制造的大豆发酵液，其相较于比较例组使用脱脂的较浓大豆液(大豆与水的比例为1比10)，并以乳酸菌及酵母菌发酵所制造的大豆发酵液，本发明含有非常高的游离胺基酸及大豆异黄酮。

[0030] 表一、大豆异黄酮总含量比较表

[0031]

[0032] 实施例4.服用剂量

[0033] 为了评估本发明组合物所含的大豆发酵液，是否具有缓解化疗药物顺铂(Cisplatin)引起生理毒副作用的功效，而进行试验评估。该大豆发酵液分为「低、中、高」三种剂量，以1倍大豆发酵液代表低剂量，每公斤体重每日有效成分摄取剂量为0.033mL；以2倍大豆发酵液代表中剂量，每公斤体重每日有效成分摄取剂量为0.066mL；以5倍大豆发酵液代表高剂量，每公斤体重每日有效成分摄取剂量为0.165mL，并另外增加正对照组、负对照组及比较例组，共计六组。其中，正对照组为注射造成骨髓抑制剂量8mg/kg的Cisplatin及服用蒸馏水；负对照组为注射生理食盐水及服用蒸馏水；以及比较例组为注射造成骨髓抑制剂量8mg/kg的Cisplatin及服用每公斤体重每日有效成分摄取剂量为
0.133mL的大豆发酵液。

[0034] 由于人体与不同实验小鼠的代谢速率有所差异，因此必须将人体剂量换算成实验小鼠服用剂量，故本发明依据2005年美国食品药物管理局所公告的实验初期估算方法(Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers)进行动物试验。人体与小鼠的换算系数为12.3倍，故小鼠服用1倍、2倍及5倍该大豆发酵液剂量分别为每公斤体重每日有效成分摄取剂量为0.4125mL、0.825mL及2.06mL；大豆发酵液比较例每公斤体重每日有效剂量为
1.639mL。若以小鼠体重30g为例作计算，每只小鼠每日于1倍、2倍及5倍实施例1的大豆发酵液剂量分别要喂食0.0124mL、0.0248mL及0.062mL；大豆发酵液比较例剂量为0.049mL。
小鼠一般采用经口管灌方式(gavage)，必要时得混入饲料或饮水中。

[0035] 实施例5.动物试验模块

[0036] 本发明采用约6周大的美国癌症研究所(Institute of Cancer Research，ICR)雄性小鼠(购自乐斯科生物科技股份有限公司)，体重约30至35公克，并以小鼠饲料(Rodent.Laboratory Chow 5001,Purina.Co.，美国)与水进行喂食。

[0037] 本发明的动物试验分组是以随机的方式将60只ICR小鼠分为以下6组，每组10只，并给予7天环境适应期，的后连续进行16天依照以下剂量以管灌方式喂食，过程中会连续观察与纪录实验小鼠的体重、摄食量与活动力等。喂食期间给予腹腔注射抗癌药物Cisplatin，并于第三次注射抗癌药物Cisplatin后三天(第23天)进行牺牲与样本采样，试验分组如下：

[0038] (1)负对照组：以体重30g小鼠为例，注射生理食盐水及管喂0.3mL蒸馏水。

[0039] (2)正对照组：三次腹腔注射Cisplatin(8mg/kg)造成抑制骨髓造血功能的小鼠模式；并同时管灌喂食0.3mL蒸馏水。

[0040] (3)1倍剂量组：三次腹腔注射上述剂量的Cisplatin后，以30g小鼠为例，每日连续以管灌喂食0.0124mL实施例1的大豆发酵液加蒸馏水至体积0.3mL。

[0041] (4)2倍剂量组：三次腹腔注射上述剂量的Cisplatin后，以30g小鼠为例，每日连续以管灌喂食0.0248mL实施例1的大豆发酵液加蒸馏水至体积0.3mL。

[0042] (5)5倍剂量组：三次腹腔注射上述剂量的Cisplatin后，以30g小鼠为例，每日连续以管灌喂食0.062mL实施例1的大豆发酵液加蒸馏水至体积0.3mL。

[0043] (6)比较例组：三次腹腔注射上述剂量的Cisplatin后，以30g小鼠为例，每日连续以管灌喂食0.049mL比较例加蒸馏水至体积0.3mL管喂。

[0044] 负对照组、正对照组、不同剂量的实施例1的大豆发酵液与比较例的试验样品，皆采取经口管灌方式给予相同体积的溶液，连续喂食后进行以下相关的评估测试。

[0045] 实施例6.小鼠体重变化的量测

[0046] 连续喂食不同剂量的实施例1的大豆发酵液为期16天，每周测量两次小鼠体重，直至死亡当天(第23天)。结果如第一图所示，在适应期间(第1天至第7天)与开始喂食该大豆发酵液后(第8天至第19天)各组的体重均无显著的差异(P>0.05)；在体重的变化趋势上，发现在第二次给予腹腔注射抗癌药物Cisplatin及生理实验水后，小鼠明显受到注射或药物的影响而呈现体重下滑的趋势；然而在注射生理食盐水的负对照组体重于第22天后明显增加直至死亡当日(第23天)，回归到正常的生长发育曲线。在第23天时，各组体重开始具有显著差异，各组体重依序分别为：负对照组35.95±0.64公克、正对照组27.48±1.25公克、比较例1的24.94±1.07公克、1倍剂量组31.11±0.25公克、2倍剂量组31.86±0.67公克和5倍剂量组30.69±0.59公克。负对照组体重显著高于其他五组(P<0.05)，正对照组与比较例1两组在体重上最轻，且彼此无显著差异(P>0.05)；相较于正对照组，服用实施例1的大豆发酵液1倍、2倍剂量组可显著且有效地减缓体重下降(P<0.05)。因此，依检测结果显示，服用本发明的实施例1的大豆发酵液能对Cisplatin造成动物体重的下降可达到显著的改善。

[0047] 实施例7.小鼠摄食量变化的量测

[0048] 各组摄食量的变化如第二图所示，在负对造组发现其摄食量显著高于其他五组(P<0.05)，且在实验期间并无明显变化。正对照组与比较例2在注射Cisplatin后第1天可观察到摄食量已有明显下降的趋势，其发生的时间比上述影响体重生长的影响更为提早，推测可能是因为Cisplatin药物所造成的食欲减低的副作用影响，且两组间无显著性差异。同时，服用实施例1的大豆发酵液1倍、2倍及5倍组的摄食量与正对照组比较后，可观察到服用实施例1的大豆发酵液1倍、2倍可有效减缓Cisplatin所造成的摄食量下降(P<0.05)

[0049] 比较各组间在Cisplatin给予前后的本身摄食量差异如表二所示，正对照组与比较例2在注射Cisplatin前后的摄食量比较相较分别下降了69.26±3.01％与92.76±3.13％。另一方面，注射Cisplatin前后服用本发明的实施例1的大豆发酵液1倍、
2倍与5倍剂量组的摄食量比较仅下降45.17±4.90％、41.12±9.00％与45.55±0.57％。
根据上述结果，补充本发明的实施例1的大豆发酵液1倍、2倍与5倍剂量均可显著改善Cisplatin所造成摄食量比率下降情形(P<0.05)。

[0050] 表二、小鼠摄食量变化的量测结果

[0051]

[0052] 实施例8.小鼠的肝、肾毒性效果评估

[0053] 在第23天小鼠死亡后，将小鼠血液经离心所得血清样本，用以检测肝、肾指数相关联的生化数值分析，其项目包括：肝酸肌(Cre)、尿素氮(BUN)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)的浓度，其浓度越高代表肝、肾毒性越高，本次血清样品则是通过外部医检单位(立人医事检验所)，采用血液自动分析仪(Hitachi 7060,Hitachi,东京,日本)进行检验。

[0054] 结果如第三图所示，正对照组于上述四项检测指标中均显著高于负对照组及服用实施例1的大豆发酵液的三个剂量组(P<0.05)，此结果显示本实验所注射的Cisplatin的方式与剂量的确能引起肝肾功能的损伤；在服用实施例1的大豆发酵液的三个剂量组，相较于正对照组均有显著的下降(P<0.05)且与负对照组无显著差异；同时，服用实施例1的大豆发酵液的三个剂量组上并无显著性差异。因此，依检测结果显示，对于化疗药物Cisplatin引起的肝、肾损伤，在服用本发明的实施例1的大豆发酵液后均能显著的抑制Cisplatin所造成的肝肾损伤。

[0055] 实施例9.小鼠全血细胞计数(complete blood count，CBC)的检测

[0056] 全血细胞计数(CBC)检测项目：参考多数国际学术文献的方法，在连续喂食与Cisplatin注射后，以颌下静脉采集血液于K2-EDTA抗凝血管，并使其均匀混合反应后，立即进行CBC分析检测。项目如下：RBC(红血球计数)、WBC(白血球计数)、Hb(血色素)、Hct(血容积)、MCV(平均红血球容积)、MCH(平均红血球血色素)与MCHC(平均红血球血色素比)。本部分实验为使用CBC分析仪(型号ADVIA 2120，拜耳)分析不同处理组的血球细胞相变化。

[0057] 结果如表三所示，在注射Cisplatin后，正对照组的WBC、MCV与MCH三项指标，相较于负对照组均呈现显著下降情况(P<0.05)，此现象也与临床所观察到的一些副作用相同，注射化疗药物后均会造成白血球与血红蛋白下降的现象。另一方面，在服用实施例1的大豆发酵液5倍剂量组，相较于正对照组具有显著提升WBC的数值(P<0.05)，且与负对照组并无差异(P>0.05)；在与贫血严重度相关的MCH与MCV方面，前者MCH在实施例1的大豆发酵液1倍与2倍剂量组均显著高于正对照组(P<0.05)；后者MCV，在实施例1的大豆发酵液2倍剂量组显著高于正对照组(P<0.05)。依检测结果显示，对于CBC的数据分析上，服用本发明的实施例1的大豆发酵液能提升Cisplatin所造成WBC、MCV与MCH下降现象，可能对于贫血与骨髓抑制上具有减缓的功能。

[0058] 表三、小鼠全血细胞计数(complete blood count，CBC)的检测结果

[0059]

[0060] 数值表示为Mean±SEM，各处理组数值标示的小写英文如不相同代表组间具有显著性差异，显著水平订为P<0.05。

[0061] 实施例10.小鼠的肾脏组织病理切片

[0062] 各组间小鼠病理评分详述于表四，其组织病理切片图，如第四图所示，肾脏伤害严重度等级分为1至3个等级，在严重度等级判定为3的动物，可发现广泛性的严重肾小管上皮细胞变性与坏死、肾小管扩张与肾小管腔内出现透明圆柱体(hyaline cast)及肾间质有少量炎症细胞浸润等现象；在严重度等级判定为2的动物，仅出现部分区域性、中等程度的肾小管上皮细胞变性与坏死、肾小管腔出现hyaline cast；在严重度等级判定为1的动物，仅出现极轻微的肾小管变性坏死。

[0063] 在第23天小鼠牺牲时，负对照组的肾脏组织均无出现任何非特异性病变。在正对照组肾脏组织切片可发现其造成伤害的区域主要为肾脏皮质部，且病变大都位于近端肾小管，肾丝球体则无明显病理变化，且半数动物符合病理评估严重度等级判定为3的肾脏损伤。在比较例3的肾脏组织切片，可观察到大区域的肾小管上皮细胞发生变性坏死，且肾小管腔中存在大量hyaline cast，经由统计分析得知与正对照组无明显差异。然而，在在实施例1的大豆发酵液2倍与5倍剂量组皆可发现显著的改善Cisplatin造成的肾脏病变，两组间与正对照组比较后分别具有统计上的显著性差异(P<0.05)，组织型态学上仅发现少数动物发生皮质部轻微的区域性肾小管变性坏死。

[0064] 表四、小鼠肾毒性组织病理切片评分结果。

[0065]

[0066] 1.肾脏切片来评断肾脏损坏程度，例如：0/10代表这组小鼠共10只，有0只在这各个损坏状况的级距；5/10代表这组老鼠共10只，有5只在这各个损坏状况的级距。

[0067] 2.病理切片评分结果统计方法用Mann–Whitney U test测试不同处理间是否具有差异。不同组别上标显示的小写英文如不相同代表彼此间具有显著差异。a

[0068] 与cisplatin组别具有显著差异P<0.003b

[0069] 与cisplatin组别具有显著差异P<0.021c

[0070] 与cisplatin组别具有显著差异P<0.027

[0071] 实施例11.小鼠的骨髓腔组织病理切片

[0072] 各组的骨髓腔组织病理切片图，如第五图所示，在第23天小鼠死亡时，负对照组可观察到骨髓腔内有正常数量与比例的红血球前趋细胞、骨髓芽球与巨核细胞。在正对照组与比较例4的红血球前趋细胞与巨核细胞的数量，显著受到cisplatin的抑制，且骨髓腔细胞密度也呈现降低的情形，与出现少量的凋亡细胞。然而，在服用实施例1的大豆发酵液三个剂量组，在组织学上皆发现显著性的改善Cisplatin造成的骨髓抑制的情形，例如:可观察到红血球前趋细胞与巨核细胞出现于骨髓腔、维持骨髓腔内细胞密度等。

[0073] 综上所述，本发明藉由活体动物实验结果显示，服用本发明实施例1的大豆发酵液能显著地减缓Cisplatin造成的体重下降与摄食量下降；以CBC的数据分析与骨髓腔组织病理切片显示，亦能改善Cisplatin所造成WBC、MCV与MCH下降现象，对于贫血与骨髓抑制上具有减缓的功能；在评估化疗药物引起的肝、肾损伤上，服用本发明实施例1的大豆发酵液均能显著的抑制Cisplatin所造成的血清中肝肾损伤指针，由肾脏组织病理的观察与量化后的结果也显示，能有效改善Cisplatin造成的肾伤害。此结果显示未来在Cisplatin化疗药物使用前、后，可利用服用本发明含该大豆发酵液的组合物，以营养补充的方式减缓相关不适的副作用，以提升治疗过程的生活质量，以减少癌症患者在使用或服用其他相关抑制副作用的药物。

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