减轻抗癌药副作用的药剂
阅读：283发布：2020-05-12
专利汇可以提供减轻抗癌药副作用的药剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了含有类凝血酶的、减轻抗癌药 副作用 的药剂。，下面是减轻抗癌药副作用的药剂专利的具体信息内容。
1.类凝血酶在制备用于减轻细胞毒类抗癌药副作用的药剂中的用途，其中所述副作用是骨髓抑制或心毒性，所述类凝血酶是从纤维蛋白原生成纤维蛋白I的蛋白酶。
2.根据权利要求1的用途，其中所述类凝血酶选自巴曲酶、安克洛酶和响尾蛇酶。
3.根据权利要求1的用途，其中所述类凝血酶是巴曲酶。
4.根据权利要求1的用途，其中所述细胞毒类抗癌药选自烷基化药物、抗癌抗生素和铂基药物。
5.根据权利要求1的用途，其中所述细胞毒类抗癌药选自环磷酰胺、阿霉素和顺铂。
6.根据权利要求1的用途，其中骨髓抑制是由细胞毒类抗癌药所引起的。
7.根据权利要求6的用途，其中所述细胞毒类抗癌药选自烷基化药物、抗癌抗生素和铂基药物。
8.根据权利要求6的用途，其中所述细胞毒类抗癌药选自环磷酰胺、阿霉素和顺铂。
9.根据权利要求1的用途，其中心毒性是由抗癌抗生素所引起的。
10.根据权利要求9的用途，其中所述抗癌抗生素是阿霉素。
减轻抗癌药副作用的药剂
技术领域
[0001] 本发明涉及含有类凝血酶的、减轻抗癌药副作用的药剂，其包括凝血酶样酶。
背景技术
[0003] 特别是，因为恶性程度高的恶性肿瘤诸如黑素瘤、肺癌、肝癌和胰腺癌的早期诊断是困难的，当被诊断为恶性肿瘤时，原发瘤和转移瘤可能已经同时存在，并且在很多情况下不可能进行外科手术。在这些情况下，采用多种抗癌药的联合化疗被广泛用于治疗这些恶性肿瘤。
[0004] 目前，已知细胞毒类抗癌药诸如烷化剂、抗代谢物、抗癌抗生素、植物生物碱、铂基药物是被广泛用于临床的抗癌药。然而，细胞毒类抗癌药不仅对癌细胞造成损伤，而且对具有活跃的细胞分裂的正常细胞也造成损伤。由于细胞毒类抗癌药所引起的副作用，诸如骨髓抑制、心毒性、造血功能障碍、消化紊乱、脱发等，导致不能给予癌治疗所需的有效量的药物，这是细胞毒类抗癌药的致命缺陷。
[0005] 环磷酰胺(一种烷基化药物)，被广泛用于临床，因为它对急性白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等是有效的。环磷酰胺是通过使DNA烷基化而阻断细胞增殖并从而抑制DNA功能的药物。因为该药物不仅阻断癌细胞的增殖，而且还阻断正常细胞的增殖，可以发生副作用。已知的副作用是呕吐、腹泻、脱发、骨髓抑制等。
[0006] 阿霉素(多柔比星)，作为抗癌抗生素，被广泛用于临床，对包括血癌诸如急性白血病和恶性淋巴瘤，以及实体瘤诸如肺癌、乳腺癌和骨肉瘤在内的多种癌有效。然而，已知阿霉素可引起诸如骨髓抑制、心毒性、口腔炎、消化紊乱和脱发的副作用。特别是，阿霉素引起的心毒性是严重的副作用，其造成临床问题并导致剂量受限。(William Lown J等人：Strand scission of DNA by bound adriamycin and daunorubicin in the presence of reducing agents.Biochem.Biophys.Res.Commun.，76(3)：705-710，1977)。
[0007] 顺铂(铂基药物)是广谱抗癌药。然而，由于诸如消化紊乱(主要包括恶心或呕吐)、全身不适、肾衰竭和造血功能障碍的副作用使得临床剂量受到限制。另外，为了减轻这些副作用，合成了被称作卡铂的顺铂衍生物。虽然卡铂引起的副作用低于顺铂引起的副作用，但是卡铂的问题在于其抗癌活性弱。
[0008] 在这样的情况下，迫切地需要开发减轻抗癌药副作用的药物用于临床应用。迄今为止，报导了减轻抗癌药副作用的一种试剂。这种试剂的特征在于包含用于减轻细胞毒类抗癌药的副作用的硝基三唑衍生物(日本专利No.3482418)。该文献报道说硝基三唑衍生物抑制体重减轻，体重减轻是许多抗癌药的副作用。
[0009] 另外，蝶呤衍生物或新蝶呤衍生物据报导是癌转移抑制剂的活性组分和用于抗癌药的副作用治疗剂(日本专利No.3156112)。该文献解释说蝶呤和新蝶呤衍生物可以抑制癌转移，给存活带来益处；并减轻蒽醌类抗癌药的副作用诸如心毒性。
[0010] 巴曲酶(batroxobin)，是来源于矛头蝮蛇moojeni亚种(Bothrops atrox moojeni)的毒液中的类凝血酶，据报道在抑制恶性肿瘤的转移和增殖方面是有效的(Chmielewska J 等 人：Effect of defibrination with batroxobin on growth and metastasis of JW sarcoma in mice.Europ.J.Cancer，16：919-923，1980)。在该文献中所公开的技术基于这样的假设，即纤维蛋白原作为障碍物起保护恶性肿瘤细胞免受免疫系统攻击的作用。在该技术中，类凝血酶降低纤维蛋白原水平，从而使得免疫系统更容易攻击恶性肿瘤细胞，导致巴曲酶阻断肿瘤细胞的增殖和转移。但是不存在有关巴曲酶与抗癌药副作用的减轻之间的联系的报导。
发明内容
[0011] 在上述专利文件中的硝基三唑衍生物、蝶呤衍生物和新蝶呤衍生物目前未在临床中作为药物被使用。因此，迫切地需要开发有效减轻抗癌药副作用、特别是诸如骨髓抑制和心毒性的严重副作用的药物。
[0013] 也就是说，本发明涉及含有类凝血酶的、减轻抗癌药副作用的药剂。具体地，本发明如下：
[0014] (1)减轻抗癌药副作用的药剂，其中所述药剂含有类凝血酶。
[0015] (2)根据(1)的减轻副作用的药剂，其中所述类凝血酶是从纤维蛋白原生成纤维蛋白I的蛋白酶。
[0016] (3)根据(1)的减轻副作用的药剂，其中所述类凝血酶选自巴曲酶、安克洛酶(ancrod)和响尾蛇酶(crotalase)。
[0017] (4)根据(1)的减轻副作用的药剂，其中所述类凝血酶是巴曲酶。
[0018] (5)根据(1)的减轻副作用的药剂，其中所述抗癌药是细胞毒类抗癌药。
[0019] (6)根据(5)的减轻副作用的药剂，其中所述细胞毒类抗癌药选自烷基化药物、抗癌抗生素和铂基药物。
[0020] (7)根据(5)的减轻副作用的药剂，其中所述细胞毒类抗癌药选自环磷酰胺、阿霉素和顺铂。
[0021] (8)根据(1)的减轻副作用的药剂，其中所述副作用是由抗癌药所引起的骨髓抑制或心毒性。
[0022] (9)根据(1)的减轻副作用的药剂，其中所述副作用是由细胞毒类抗癌药所引起的骨髓抑制。
[0023] (10)根据(9)的减轻副作用的药剂，其中所述细胞毒类抗癌药选自烷基化药物、抗癌抗生素和铂基药物。
[0024] (11)根据(9)的减轻副作用的药剂，其中所述细胞毒类抗癌药选自环磷酰胺、阿霉素和顺铂。
[0025] (12)根据(1)的减轻副作用的药剂，其中所述副作用是由抗癌抗生素所引起的心毒性。
[0026] (13)根据(12)的减轻副作用的药剂，其中所述抗癌抗生素是阿霉素。
[0027] (14)一种用于受试者的、减轻抗癌药副作用的方法，包括对该受试者给予有效量的类凝血酶。
[0028] (15)类凝血酶用于制备减轻抗癌药副作用的药剂的应用。
[0029] 本发明的减轻抗癌药副作用的药剂可以有效地减轻抗癌药的副作用；特别是严重副作用，诸如骨髓抑制和心毒性，如以下实施例所示。也就是说，在给予抗癌药的同时或在给予抗癌药之后给予本发明的减轻抗癌药副作用的药剂，每天一次或两次，本发明的减轻抗癌药副作用的药剂可以显著地减轻抗癌药的副作用。因此，本发明对抗癌药治疗作出了巨大贡献。附图说明
[0031] 图2是巴曲酶组的左心室心肌组织的光学显微镜照片(H&E染色，X400)；
[0032] 图3是阿霉素组的左心室心肌组织的光学显微镜照片(H&E染色，X200)；和[0033] 图4是巴曲酶+阿霉素组的左心室心肌组织的光学显微镜照片(H&E染色，X200)。
[0034] 实施本发明的最佳方式
[0035] 以下提供了本发明的详细说明。
[0036] 可理解的是，除非另有说明，否则用于本说明书中的术语具有本领域常用的含义。因此，除非另有定义，否则在本说明书中使用的全部技术术语和科学名词具有本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同含义。如果在本说明书中定义的术语的含义与本领域的常用含义不同的话，则相对于本领域的常用含义应当优先使用在本说明书中定义的含义。
[0037] 本说明书中使用术语的含义列举如下。
[0038] 在本说明书中使用的术语“类凝血酶”是指与具有凝固纤维蛋白原特征的凝血酶以外的蛋白酶。类凝血酶的具体实例包括巴曲酶、安克洛酶、响尾蛇酶、flavoxobin、asperase、acutin、botropase、clotase、gabonase、venzyme等。
[0039] 类凝血酶根据其底物、纤维蛋白原的作用部位而被分成三类：(i)蛋白酶(诸如巴曲酶、安克洛酶和响尾蛇酶)，其从纤维蛋白原中只分离纤维蛋白肽A以生成纤维蛋白I；(ii)蛋白酶(诸如gabonase)，其从纤维蛋白原中分离纤维蛋白肽A和血纤维蛋白肽B以生成纤维蛋白II(即，纤维蛋白)；和(iii)蛋白酶(诸如venzyme)，其从纤维蛋白原中主要分离血纤维蛋白肽B。
[0040] 在本说明书中，术语“纤维蛋白I”是指当从纤维蛋白原只分离纤维蛋白肽A时生成的单体。该纤维蛋白I还被称作Des A纤维蛋白。另外，术语“纤维蛋白肽A”是对应于纤维蛋白原的Aα链的NH2末端处的16个氨基酸的肽。
[0041] 另外，在本说明书中，巴曲酶、安克洛酶、响尾蛇酶、flavoxobin、asperase、acutin等作为从纤维蛋白原生成纤维蛋白I的蛋白酶的实例被提及。
[0042] 本发明优选的类凝血酶包含巴曲酶、安克洛酶、响尾蛇酶(Stocker KF：Snake venom proteins affecting hemostasis and fibrinolysis，in Medical Use of Snake Venom Proteins，Stocker KF，ed.，CRC Press，Boston，p130-131；1990)。在上述的这些类凝血酶中，特别优选巴曲酶。
[0043] 巴曲酶是来源于矛头蝮蛇moojeni亚种的毒液中的类凝血酶，是具有36,000Da分子量的糖蛋白。
[0044] 凝血酶是具有糖蛋白结构的酶，是存在于机体内的凝血酶原被激活得到的。就糖蛋白结构的而言，凝血酶和巴曲酶是类似的酶。然而，凝血酶与巴曲酶的不同点在于凝血酶不仅从纤维蛋白原分离纤维蛋白肽A而且从纤维蛋白原分离纤维蛋白肽B，并生成纤维蛋白。另外，尽管巴曲酶不作用于除了纤维蛋白原以外的任何凝血因子，但是凝血酶与巴曲酶的不同点在于凝血酶作用于除了纤维蛋白原以外的其它凝血因子。
[0045] 巴曲酶是已知物质，并且可以根据被审查的日本专利申请No.S57-10718(日本专利No.1118129)公报中所述的方法来制备。或者，其可容易地得自东菱药品工业株式会社(Tobishi Pharmaceuticals Co.，Ltd.)(东京，日本)及其子公司北京托毕西药业有限公司(Beijing Tobishi Pharmaceuticals，Co.，Ltd.)(北京，中国)。
[0046] 安克洛酶是马来亚蝮蛇(Agkistrodon rhodostoma)的毒液由来的类凝血酶，是分子量约为35,400Da的糖蛋白。安克洛酶与巴曲酶的类似之处在于它们都是从纤维蛋白原只分离纤维蛋白肽A以生成纤维蛋白I的类凝血酶(Stocker KF：Snake venom proteins affecting hemostasis and fibrinolysis，in Medical Use of Snake Venom Proteins，Stocker KF，ed.，CRC Press，Boston，p134-135；1990)。
[0047] 响尾蛇酶是东部菱背响尾蛇(Crotalus adamanteus)的毒液由来的类凝血酶，是分子量约为32,700Da的糖蛋白。响尾蛇酶与巴曲酶的类似之处在于它们都是从纤维蛋白原只分离纤维蛋白肽A以生成纤维蛋白I的类凝血酶(Stocker KF：Snake venom proteins affecting hemostasis and fibrinolysis，in Medical Use of Snake Venom Proteins，Stocker KF，ed.，CRC Press，Boston，p140-141；1990)。
[0048] 上述的类凝血酶诸如巴曲酶、安克洛酶和响尾蛇酶在本发明中可以是天然产物或基因重组产品。
[0050] 术语“细胞毒类抗癌药”是指对细胞核的DNA或细胞周期表现出任何影响以发挥抗癌效果的抗癌药。细胞毒类抗癌药的具体实例包括烷化剂、抗代谢物、抗癌抗生素、铂基药物和植物碱等。
[0052] 抗代谢物包括甲氨蝶呤和其它的叶酸拮抗剂；氟尿嘧啶、替加氟、卡莫氟和其它的抗嘧啶类；阿糖胞苷、安西他滨、依诺他滨和其它的阿糖胞苷；巯嘌呤、硫肌苷和其它的嘌呤拮抗剂等。
[0053] 抗癌抗生素包括阿霉素、多柔比星、柔红霉素、阿柔比星、吡柔比星和其它的小红莓类；博来霉素、培洛霉素和其它的博来霉素类；丝裂霉素C和其它的丝裂霉素放线菌素D和其它的放线菌素类；新制癌菌素和其它的多肽等。
[0054] 铂基药物包括顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂等。
[0055] 植物碱包括长春碱、长春新碱、长春地辛、紫杉醇、多西他赛、依托泊苷、喜树碱、伊立替康等。
[0056] 本发明的减轻副作用的药剂可以表现出在减轻环磷酰胺、阿霉素和顺铂的副作用方面特别有效。
[0057] 另外，本发明的减轻副作用的药剂可以表现出不仅减轻给予单独的抗癌药时发生的副作用的作用，而且也减轻同时给予多种抗癌药时发生的副作用。
[0058] 术语“抗癌药的副作用”是指在抗癌药给药时所见到的治疗上不必要的作用，或者是可能引起临床紊乱的作用。
[0059] 抗癌药的副作用的实例包括骨髓抑制、心毒性、脱发、消化紊乱(包括恶心、呕吐、腹泻)、肾机能障碍、全身不适、口腔炎等。在这些提到的副作用中，本发明在减轻严重的副作用诸如骨髓抑制和心毒性方面可显示巨大的能力。
[0060] 术语“骨髓抑制”是指抗癌药损伤正常的造血干细胞所引起的红细胞(RBCs)、白细胞(WBCs)和血小板(Plts)减少。骨髓抑制由来的症状包括由于造血障碍所导致的贫血，由于白细胞减少所导致的感染，由于血小板减少所导致的出血等等。当使用细胞毒类抗癌药(特别是烷基化药物、抗癌抗生素和铂基药物)时，骨髓抑制是容易发生的副作用。当骨髓抑制的严重程度最坏时，分化WBCs、RBCs和Plts的造血干细胞被破坏。这种破坏有时导致严重的贫血、致命性传染病、出血(颅内出血、胃肠出血、肺出血)，并且最终可导致死亡。因此，骨髓抑制是严重性较高的副作用。
[0061] 术语“心毒性”是指由抗癌药所引起的心肌组织或心肌细胞的紊乱。据说诸如充血性心力衰竭和心律不齐等症状是由心毒性来的。当使用抗癌抗生素(尤其是包括阿霉素在内的小红莓类)时，心毒性是容易发生的副作用。在组织病理学研究中，心肌组织内出现明显的收缩带是心毒性的评价标准。心毒性的程度根据抗癌药的使用量而定。当心毒性的严重程度高时，其引起充血性心力衰竭，最终可导致死亡。因此，心毒性是严重性较高的副作用。
[0062] 本发明可非常有效地减轻由环磷酰胺、顺铂和阿霉素引起的副作用。由环磷酰胺、顺铂和阿霉素引起的典型的副作用如下：
[0063] 环磷酰胺
[0064] 骨髓抑制、呕吐、腹泻、脱发等。
[0065] 阿霉素
[0066] 心毒性、骨髓抑制、口腔炎、消化紊乱、脱发等。
[0067] 顺铂
[0068] 消化紊乱、全身不适、骨髓抑制、造血功能障碍、肾病等。
[0069] 术语“减轻”是指在缺乏本发明的药剂的条件下由抗癌药所引起的副作用通过给予本发明的药剂得以缓解。术语“减轻”是指所述副作用不仅通过本发明的药剂而得以缓解，而且本发明的药剂本身不发生副作用。
[0070] 在日本药典的制剂总则中的任何制剂可适用于本发明的药剂的制剂。实例包括用于直接在体内施用的注射剂(包括悬浮剂和乳剂)；膏剂(包括脂膏剂、乳膏剂(霜剂)，水溶性膏剂等)，吸入剂，液体剂(包括眼用溶液剂，洗鼻剂等)，栓剂，贴剂，泥敷剂，洗剂和其它的外用制剂；和内用制剂，包括片剂(包括糖包衣片剂、薄膜包衣片剂和明胶包衣片剂)，液体剂，胶囊，颗粒，粉剂(包括粒剂)，丸剂，糖浆剂，含片等。这些制剂可以通过日本药典的制剂总则中所述的方法制备。
[0071] 另外，本发明的药剂根据其剂型可包含药理学可接受的固体或液体载体或常规的介入治疗基质。药理学可接受的固体或液体载体的实例包括溶剂、稳定剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、助悬剂、缓冲剂、等渗剂、着色剂、增稠剂、赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、包衣剂、矫正剂等。
[0072] 载体的具体实例包括水，乳糖，蔗糖，果糖，葡萄糖，甘露醇，山梨醇和其它的糖和糖醇，结晶纤维素，甲基纤维素，乙基纤维素，羟丙基纤维素，低取代羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯，乙酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯，羧甲基纤维素，羧甲基纤维素钙，羧甲基纤维素钠，交联羧甲基纤维素钠，羧甲基乙基纤维素，乙酸邻苯二酸纤维素和其它纤维素及相关衍生物；玉米淀粉，小麦淀粉，米淀粉，马铃薯淀粉，糊精，预胶化淀粉，部分预胶化淀粉，羟丙基淀粉，羧甲基淀粉钠，环糊精，支链淀粉和其它淀粉及相关衍生物；琼脂，海藻酸钠，阿拉伯胶，明胶，胶原，虫胶，黄蓍胶，黄原胶(天然)和其它的天然高分子(海藻、植物粘液、蛋白等)；聚乙烯吡咯烷酮，氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物，甲基丙烯酸共聚物，羧乙烯基聚合物，聚乙烯醇，二甲聚硅氧烷和其它的合成高分子，；橄榄油，可可脂，巴西棕榈蜡，牛脂，氢化油，大豆油，芝麻油，山茶油，石蜡，液体状石蜡，黄蜂蜡，白矿色凡士林脂，椰子油，微晶蜡和其它的油脂；硬脂酸，硬脂酸铝，硬脂酸钙，硬脂酸镁，柠檬酸三乙酯，三醋酸甘油酯，中链脂肪酸三酸甘油酯，硬脂，十四烷酸异丙酯，和其它脂肪酸及其衍生物；甘油，十八醇，鲸蜡醇，丙二醇，聚乙二醇和其它醇和多元醇；氧化锌，磷酸氢钙，沉淀碳酸钙，合成硅酸铝，二氧化硅无水物，高岭土，无水氢氧化铝凝胶，合成铝碳酸镁，二氧化钛，滑石，膨润土，硅酸铝镁，硫酸铝钾，次没食子酸铋，次水杨酸铋，乳酸钙，碳酸氢钠和其它的无机物质和金属盐化合物；蔗糖脂肪酸的蔗糖酯，硬脂酸聚烃氧酯，氢化蓖麻油聚氧化乙烯醚，聚氧化乙烯聚丙烯二醇，倍半油酸山梨坦，三油酸山梨坦，单硬脂酸山梨坦，单棕榈酸山梨糖醇酐酯，单月桂酸山梨醇酐酯，聚山梨酯，单硬脂酸甘油酯，十二烷基硫酸钠，聚桂醇和其它表面活性剂；色素；香料等。
[0075] 本发明的药剂的给药时间可以根据抗癌药的类型、剂量来确定。优选在给予抗癌药的同时或给予抗癌药之后给予本发明的药剂。
[0076] 本发明的药剂的给药量根据患者体重、疾病性质和状况而变，例如应为0.1-50巴曲酶单位(以下简称BU)的巴曲酶，作为类凝血酶，在成年人类的情况下可以每天给予一次。成年人类用的优选剂量是隔天一次(一个剂量是1-20BU)。在外用制剂的情况下，所述剂量是0.01-500mg/g。
[0077] 巴曲酶单位是表示巴曲酶酶活性的单位；2BU是当将0.1ml的巴曲酶溶液加入到在37℃下的0.3ml的包含柠檬酸的标准人血浆中时，在19.0±0.2秒内实现凝血的活性。
[0078] 例如，本发明的药剂可以通过以下方式被给予至受试者：静脉滴注，静脉注射，动脉内注射，肌肉内注射，皮下注射，皮内注射，心内注射，腹腔注射，鞘内注射，直肠内给药，舌下给药，经鼻给药，经皮给药，将通过用生理盐水稀释类凝血酶制备的制剂吸入或局部给药到受损的器官和/或组织内。通常，优选用100ml或更多的生理盐水稀释类凝血酶，并在1小时或更长时间，将其滴注投予受试者。
[0079] 本发明使用的药剂为类凝血酶的巴曲酶。巴曲酶对小鼠、大鼠、兔和狗的急性毒性(LD50(BU/kg))如下表1所示。通过静脉内给予巴曲酶评价急性毒性试验。
[0080] 表1.巴曲酶的急性毒性(i.V.)
[0081]动物物种 LD50值(BU/kg)
小鼠(ddy) 192～210
大鼠(Wistar) 105～110
兔(NW) ＞300
狗(mongrel) 190～208
小鼠(ddy) 192～210
大鼠(Wistar) 105～110
兔(NW) ＞300
狗(mongrel) 190～208
[0082] 尽管以下通过简要说明制剂及其实施例而提供了本发明的详细说明，但是本发明不限于这些制剂和实施例。
[0083] 制剂1
[0084] 使用巴曲酶作为类凝血酶，制备了具有以下组成的减轻抗癌药的副作用的药剂。
[0085]
[0086] 实施例1
[0087] 巴曲酶对由阿霉素引起的致命毒性的减轻效果
[0088] 使用巴曲酶(以下简称DF-521)作为类凝血酶，其由北京托毕西药业有限公司(Beijing Tobishi Pharmaceutical Co.，Ltd.)(北京，中国)以东菱迪芙(Dong Ling Di Fu)商品名制备。
[0089] 使用抗癌药阿霉素(以下简称ADM)，其由上海医药(集团)有限公司华联制药厂(Hualian Pharmaceutical Factory of Shanghai Pharmaceutical(Group)Co.，Ltd)制备。
[0090] 将实验动物雄性C57BL/6小鼠(体重：19-22g)分成三组：对照组，阿霉素组(ADM组)和阿霉素+巴曲酶组(ADM+DF-521组)，每组10只小鼠。对对照组给予生理盐水。
[0091] 阿霉素组腹腔给予剂量为3mg/kg的阿霉素，隔天一次。对阿霉素+巴曲酶组同时腹腔给予剂量为3mg/kg的阿霉素和30BU/kg的巴曲酶，隔天一次。给药共进行18次。在第一次给予剂量后第41天终止实验。对死亡数进行总计，并且从死亡率计算存活率。结果如表2所示。
[0092] 表2
[0093]组别 存活数/总数(存活率％)
对照组 10/10(100％)
ADM组 4/10*(40％)
ADM+DF-521组 10/10#(100％)
对照组 10/10(100％)
ADM组 4/10*(40％)
ADM+DF-521组 10/10#(100％)
[0094] *p＜0.05，与对照组比较。
[0095] #p＜0.05，与ADM组比较。
[0096] 如表2所示，在阿霉素组中有六只小鼠死亡。认为小鼠死亡应归于由阿霉素引起的诸如骨髓抑制、心毒性等的总体副作用。另一方面，在阿霉素+巴曲酶组中的全部小鼠存活。该结果表示阿霉素+巴曲酶组的存活率显著高于(p＜0.05)阿霉素组的存活率。表明巴曲酶可以减轻由阿霉素引起的副作用。
[0097] 实施例2
[0098] 巴曲酶对由环磷酰胺引起的骨髓抑制的减轻效果
[0099] 使用巴曲酶(以下简称DF-521)作为类凝血酶，其由北京托毕西药业有限公司(北京，中国)以东菱迪芙(Dong Ling Di Fu)商品名制备。
[0100] 使用抗癌药环磷酰胺(以下简称CPA)，其由山西普德药业有限公司(Shanxi Powerdone Pharmaceutical Co.，Ltd.)制备。
[0101] 将实验动物雄性C57BL/6小鼠(体重：20-24g)分成三组：对照组，环磷酰胺组(CPA组)和环磷酰胺+巴曲酶组(CPA+DF-521组)，每组5只小鼠。对对照组给予生理盐水，隔天一次。对环磷酰胺组腹腔给予剂量为100mg/kg的环磷酰胺，隔天一次。对环磷酰胺+巴曲酶组同时腹腔给予剂量为100mg/kg的环磷酰胺和30BU/kg的巴曲酶，隔天一次。在第四次给药后(在首次给药后第7天)，在乙醚麻醉条件下使用EDTA抗凝血剂从股动脉收集血液，并测量白细胞数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白值(Hb)和血小板计数(Plt)。
[0102] 通过以下过程测量了小鼠的骨髓有核细胞计数(BMNC)/股骨。从小鼠的2个股骨取得骨髓样品，将该骨髓用2ml生理盐水冲洗，并制备骨髓细胞悬浮液。将20微升的骨髓细胞悬浮液置于380微升的3％的乙酸溶液中。在破坏红血细胞后，使用血细胞计数板在显微镜下进行BMNC计数。然后计算BMNC计数/股。
[0103] 将上述BMNC、WBC、RBC、Plt计数和Hb值作为由环磷酰胺引起的骨髓抑制的评价指标。结果见表3。
[0104] 表3
[0105]
[0106] *p＜0.05，与对照组比较。
[0107] **p＜0.01，与对照组比较。
[0108] ##p＜0.01，与CPA组比较。
[0109] 环磷酰胺组的BMNC、WBC、RBC计数显著低于对照组(p＜0.05或p＜0.01)。另一方面，环磷酰胺+巴曲酶组的BMNC和WBC计数显著高于环磷酰胺组的BMNC和WBC计数(p＜0.01)。另外，当环磷酰胺+巴曲酶组的RBC和Plt计数以及Hb值与环磷酰胺组的相应指标比较时，没有观察到变化。
[0110] 在本实施例中，证实了巴曲酶可以减轻由环磷酰胺引起的BMNC计数和WBC计数的降低。因此，可以理解，巴曲酶可以减轻由环磷酰胺引起的骨髓抑制。
[0111] 实施例3
[0112] 巴曲酶对由阿霉素引起的骨髓抑制的减轻效果
[0113] 使用巴曲酶(以下简称DF-521)作为类凝血酶，其由北京托毕西药业有限公司(北京，中国)以东菱迪芙(Dong Ling Di Fu)商品名制备。
[0114] 使用抗癌药阿霉素(以下简称ADM)，其由上海制药集团有限公司华联制药厂(Hualian Pharmaceutical Factory of Shanghai Pharmaceutical(Group)Co.，Ltd)制备。
[0115] 将实验动物，雄性C57BL/6小鼠(体重：19-22g)分成三组：对照组，阿霉素组(ADM组)和阿霉素+巴曲酶组(ADM+DF-521组)，每组5-10只小鼠(n＝5或10)。对对照组给予生理盐水，隔天一次。对阿霉素组腹腔给予剂量为3mg/kg的阿霉素，隔天一次。对阿霉素+巴曲酶组同时腹腔给予剂量为3mg/kg的阿霉素和30BU/kg的巴曲酶，隔天一次。在第九次给药后，终止实验，在乙醚麻醉条件下使用EDTA抗凝血剂从股动脉收集血液。然后测量WBC、RBC计数和Hb值。
[0116] 另外，通过以下过程测量了小鼠的骨髓有核细胞(BMNC)计数/股骨。从小鼠的2个股骨取得骨髓样品，将该骨髓用2ml生理盐水冲洗，并制备骨髓细胞悬浮液。将20微升的骨髓细胞悬浮液置于380微升的3％的乙酸溶液中。在破坏红血细胞后，使用血细胞计数板在显微镜下进行BMNC计数。然后计算BMNC计数/股骨。
[0117] 将上述BMNC、RBC、WBC计数和Hb值作为由阿霉素引起的骨髓抑制的评价指标。结果见表4。
[0118] 表4
[0119]
[0120] **p＜0.01，与对照组比较。
[0121] #p＜0.05，与ADM组比较。
[0122] 在阿霉素组中，BMNC、WBC、RBC计数和Hb值全部显著低于对照组(p＜0.01)。另一方面，阿霉素+巴曲酶组的BMNC计数和Hb值显著高于阿霉素组(p＜0.05)。另外，在阿霉素+巴曲酶组中的WBC计数与阿霉素组相比时没有改变。然而，虽然阿霉素+巴曲酶组的RBC计数与阿霉素组相比显示向上趋势，但是在这两组之间没有统计学显著差异。
[0123] 在本实施例中，证实了巴曲酶可以减轻由阿霉素引起的BMNC计数和Hb值的降低。因此，可以理解，巴曲酶可以减轻由阿霉素引起的骨髓抑制。
[0124] 实施例4
[0125] 巴曲酶对由顺铂引起的骨髓抑制的减轻效果
[0126] 使用巴曲酶(以下简称DF-521)作为类凝血酶，其由北京托毕西药业有限公司(北京，中国)以东菱迪芙(Dong Ling Di Fu)商品名制备。
[0127] 使用抗癌药顺铂(以下简称DDP)，其由云南个旧生物化学医药有限公司制备。
[0128] 将实验动物雄性C57BL/6小鼠(体重：20-22g)分成三组：对照组，顺铂组(DDP组)和顺铂+巴曲酶组(DDP+DF-521组)，每组10只小鼠。对对照组给予生理盐水，隔天一次。对顺铂组腹腔给予剂量为0.8mg/kg的顺铂，隔天一次。对顺铂+巴曲酶组同时腹腔给予剂量为0.8mg/kg的顺铂和30BU/kg的巴曲酶，隔天一次。在第17次给药后(在首次给药后第33天)，终止实验。在乙醚麻醉条件下使用抗凝血剂EDTA从股动脉收集血液，并测量WBC、RBC、Plt计数和Hb值。
[0129] 另外，通过以下过程测量了小鼠的骨髓有核细胞(BMNC)计数/股骨。从小鼠的2个股骨取得骨髓样品，将该骨髓用2ml生理盐水冲洗，并制备骨髓细胞悬浮液。将20微升的骨髓细胞悬浮液置于380微升的3％的乙酸溶液中。在破坏红血细胞后，使用血细胞计数板在显微镜下进行BMNC计数。然后计算BMNC计数/股骨。
[0130] 将上述BMNC、WBC、RBC、Plt计数和Hb值作为由顺铂引起的骨髓抑制的评价指标。结果见表5。
[0131] 表5
[0132]
[0133] *p＜0.05，与对照组比较。
[0134] **p＜0.01，与对照组比较。
[0135] #p＜0.05，与DDP组比较。
[0136] ##p＜0.01，与DDP组比较。
[0137] 顺铂组的BMNC和Plt计数显著低于对照组(p＜0.01)。但是，顺铂组的WBC、RBC计数和Hb值与对照组相比没有改变。另一方面，顺铂+巴曲酶组的BMNC和Plt计数显著高于顺铂组的BMNC和Plt计数(p＜0.05)。另外，虽然顺铂+巴曲酶组的RBC计数和Hb值显著高于顺铂组的相应指标(p＜0.05和p＜0.01)，但是在顺铂+巴曲酶组与顺铂组之间的WBC计数方面没有差异。
[0138] 在本实施例中，证实了巴曲酶可以减轻由顺铂引起的BMNC和Plt计数的降低。因此，可以理解，巴曲酶可以减轻由顺铂引起的骨髓抑制。
[0139] 实施例5
[0140] 巴曲酶对由阿霉素引起的心毒性的减轻效果
[0141] 使用巴曲酶(以下简称DF-521)作为类凝血酶，其由北京托毕西药业有限公司(北京，中国)以东菱迪芙(Dong Ling Di Fu)商品名制备。
[0142] 使用抗癌药阿霉素(以下简称ADM)，其由深圳万乐药业有限公司(Main Luck Pharmaceuticals Inc.)制备。
[0143] 将实验动物C57BL/6雄性小鼠(体重：16-18g)分成四组：对照组(10只小鼠)，巴曲酶组(7只小鼠)，阿霉素组(7只小鼠)，和阿霉素+巴曲酶组(7只小鼠)。对每组小鼠6
进行脊背右侧皮下注射在0.3ml的肿瘤细胞悬浮液中的3×10 个B16-BL6鼠恶性黑色素瘤细胞的接种。在肿瘤细胞接种一天后，对对照组腹腔注射生理盐水，一天一次；对巴曲酶组腹腔注射巴曲酶(20BU/kg)，一天一次；对阿霉素组腹腔注射阿霉素(3mg/kg)，间隔两天一次；对阿霉素+巴曲酶组腹腔注射阿霉素(3mg/kg)，间隔两天一次，和在给予阿霉素之后腹腔注射20BU/kg巴曲酶，一天一次。在20天连续给药后，在乙醚麻醉条件下摘除每组的心脏。在心脏组织用福尔马林固定后，制备用石蜡包埋的切片，并进行苏木精-曙红(H&E)染色。在光学显微镜下对经过染色的心脏组织切片进行病理学检查。
进行脊背右侧皮下注射在0.3ml的肿瘤细胞悬浮液中的3×10 个B16-BL6鼠恶性黑色素瘤细胞的接种。在肿瘤细胞接种一天后，对对照组腹腔注射生理盐水，一天一次；对巴曲酶组腹腔注射巴曲酶(20BU/kg)，一天一次；对阿霉素组腹腔注射阿霉素(3mg/kg)，间隔两天一次；对阿霉素+巴曲酶组腹腔注射阿霉素(3mg/kg)，间隔两天一次，和在给予阿霉素之后腹腔注射20BU/kg巴曲酶，一天一次。在20天连续给药后，在乙醚麻醉条件下摘除每组的心脏。在心脏组织用福尔马林固定后，制备用石蜡包埋的切片，并进行苏木精-曙红(H&E)染色。在光学显微镜下对经过染色的心脏组织切片进行病理学检查。
[0144] 在巴曲酶组的左心室心肌组织中(图2)，与对照组的左心室心肌组织比较时未发现异常。
[0145] 另一方面，在阿霉素组的左心室心肌组织中(图3)，与对照组相比观察到异常。特别是心肌细胞排列杂乱，并且观察到被称作收缩带(箭头A)的病理组织。在收缩带中，一些心肌细胞强烈收缩，导致凝集变成波浪排列，以及心肌纤维的常规条纹状结构消失，而是形成了嗜酸性增厚带，其具有心肌细胞无规则间隔的结构。另外，在许多心肌细胞中发生肌浆裂解或丧失，并且细胞浆染色变薄。而且，在心肌细胞中，发生了细胞浮肿或嗜酸变性和坏死(箭头B)，胞间隙变宽，在心肌细胞基质中出现浮肿(箭头C)。这些异常导致心肌病，引起充血性心力衰竭，并从而充当心毒性的指示指标。
[0146] 相比之下，阿霉素+巴曲酶组的左心室心肌组织(图4)没有在阿霉素组中所见到的心肌间质性水肿或收缩带形成。另外，虽然在少量心肌细胞中看到了细胞浆溶出(箭头)，但是很少看见嗜酸变性。
[0147] 在本实施例中证实了，在阿霉素+巴曲酶组的心肌组织中的异常程度低于阿霉素组。因此，可以理解，巴曲酶可以减轻由阿霉素引起的心毒性。
[0148] 工业实用性
[0149] 本发明可以显著减轻抗癌药的副作用。因此，本发明可被用于使用抗癌药进行的癌症治疗中。
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