呼吸道疾病的治疗
阅读：670发布：2020-05-11
专利汇可以提供呼吸道疾病的治疗专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供适用于通过吸入法经 肺 给予的药物组合物，所述组合物包含格列 酮 (例如吡格列酮或罗格列酮)和一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂，且其中组合物的格列酮含量由至少95％重量的5R对映异构体和小于5％重量的5S对映异构体组成。本发明还提供 治疗 用途 和药盒。，下面是呼吸道疾病的治疗专利的具体信息内容。
1.一种用于通过吸入法经肺给药而治疗炎性呼吸道疾病的格列酮，其中所吸入的格列酮由至少95％重量的5R对映异构体和小于5％重量的5S对映异构体组成。
2.格列酮在制备用于通过吸入法经肺给药而治疗炎性呼吸道疾病的药物中的用途，其中所述药物的格列酮含量由至少95％重量的5R对映异构体和小于5％重量的5S对映异构体组成。
3.一种治疗炎性呼吸道疾病的方法，其包括通过吸入法经肺给予患有所述疾病的患者治疗有效量的格列酮，其中所吸入的格列酮由至少95％重量的5R对映异构体和小于5％的
5S对映异构体组成。
4.权利要求3要求保护的方法，其中所述患者还另外给予一定量的支气管扩张药物和/或其它抗炎药，其中所述格列酮R5对映异构体的量和所述常规呼吸系统治疗药的量共同构成治疗有效量。
5.权利要求1要求保护的所述应用的格列酮、权利要求2要求保护的用途或者权利要求3或权利要求4要求保护的治疗方法，其中所述炎性呼吸道疾病选自轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、类固醇抵抗性哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、囊性纤维变性、肺水肿、肺栓塞、肺炎、肺肉样瘤病、矽肺、肺纤维变性、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征、肺气肿、慢性支气管炎、肺结核和肺癌。
6.权利要求1要求保护的所述应用的格列酮、权利要求2要求保护的用途或者权利要求3或权利要求4要求保护的治疗方法，其中所述炎性呼吸道疾病是慢性阻塞性肺病。
7.一种适于吸入法经肺给予的药物组合物，所述组合物包含格列酮和一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂，且其中所述组合物的格列酮含量由至少95％重量的5R对映异构体和小于5％重量的5S对映异构体组成。
8.权利要求7要求保护的药物组合物，其另外包含一种或多种选自以下的其它治疗药：抗炎药、支气管扩张药、化痰药、镇咳药、白三烯抑制剂和抗生素。
9.权利要求1、权利要求5或权利要求6要求保护的所述应用的格列酮、权利要求2、权利要求5或权利要求6要求保护的用途、权利要求3、权利要求4、权利要求5或权利要求6要求保护的治疗方法、或者权利要求7或权利要求8要求保护的药物组合物，其中所述格列酮是吡格列酮或罗格列酮。
10.一种用于治疗患者呼吸系统疾病的药盒，所述药盒包括第一剂型和第二剂型，所述第一剂型包含权利要求7要求保护的组合物，所述第二剂型包含选自以下的其它治疗药：
抗炎药、支气管扩张药、化痰药、镇咳药、白三烯抑制剂和抗生素。
呼吸道疾病的治疗
[0002] 发明背景
[0003] 已清楚了解多种呼吸道疾病和病症，其中许多疾病和疾病有交叉和相互作用的病因。这些疾病中最普遍和流行的两种是慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘。呼吸道疾病具有显著炎性成分。例如，COPD和重度哮喘的现有疗法主要集中在使用短效和长效支气管扩张药或者作为单一疗法或者长效β2激动剂支气管扩张药与吸入性皮质甾类(ICS)的组合疗法来减轻症状。对于ICS单用或与β2激动剂组合，令人失望的抗炎数据使得迫切需要寻找COPD的有效抗炎药。已经清楚的是，COPD是一种慢性炎症性疾病，它涉及在肺部以及也可能是全身先天性和获得性免疫应答的细胞之间复杂的相互作用。根据深入研究得出的一种假设是新的可确证的抗炎药是否可终止或减缓COPD特异性的功能减退。降低恶化的频率和严重程度已经成为COPD疗法越来越重要的目标，因为恶化后患者的预后差。预期在COPD和哮喘中的抗炎疗法降低恶化的频率和严重程度。还预期治疗也会改善肺功能和生命质量的下降。
[0005] 过氧化物酶体增殖受体γ受体(PPARγ)激动剂是一类增加糖尿病患者对葡萄糖的敏感性的药物。一般认为生理上激活的PPARγ增加外周组织对胰岛素的敏感性，因此促进葡萄糖从血液中清除并产生所需要的抗糖尿病效果。
[0006] 从专利和其它文献中了解到许多PPARγ激动剂，但是目前只有两种获准临床用于糖尿病，即罗格列酮和吡格列酮。参见Campbell IW，Curr Mol Med.2005 May；5(3)：349-63。这两种化合物是噻唑烷二酮类(“TZD类”或“格列酮类”)，在实践中通过口服途径给药用于全身性递送。
[0007] 除其对葡萄糖代谢的作用以外，已发表的许多报告表明，罗格列酮还发挥抗炎作用。例如，(i)已报道了罗格列酮在糖尿病患者中发挥与抗炎作用一致的作用(Haffner等，Circulation.2002 Aug 6；106(6)：679-84；Marx 等，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2003 Feb 1；23(2)：283-8)；(ii)已报道了罗格列酮在许多动物炎症模型中发挥抗炎作用，包括：角叉菜胶诱发的足爪肿胀(Cuzzocrea等，Eur.J.Pharmacol.2004 Jan 1；483(1)：79-93)、TNBS诱发性结肠炎(Desreumanux等，J.Exp.Med.2001 Apr 2；193(7)：
827-38；Sanchez-Hidalgo 等，Biochem.Pharmacol.2005 Jun 15；69(12)：1733-44)、实验性脑脊髓炎(Feinstein等，Ann.Neurol.2002 Jun；51(6)：694-702)、胶原诱发性关节炎(Cuzzocrea等，Arthritis Rheum.2003 Dec；48(12)：3544-56)和佐剂诱发性关节炎(Shiojiri等，Eur.J.Pharmacol.2002 Jul 19；448(2-3)：231-8)、角叉菜胶诱发性胸膜炎(Cuzzocrea等，Eur.J.Pharmacol.2004 Jan 1；483(1)：79-93)、卵清蛋白诱发性肺炎(Lee等，FASEB J.2005 Jun；19(8)：1033-5)和LPS诱发性肺组织中性白细胞增多(Birrell等，Eur.Respir.J.2004 Jul；24(1)：18-23)以及(iii)已报道了罗格列酮在分离细胞中发挥抗炎作用，包括鼠巨噬细胞的iNOS表达(Reddy等，Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.2004 Mar；286(3)：L613-9)、人支气管上皮细胞中TNFα诱导的MMP-9活性(Hetzel等，Thorax.2003 Sep；58(9)：778-83)、人气道平滑肌细胞增殖(Ward等，Br.J.Pharmacol.2004Feb；141(3)：517-25)和嗜中性粒细胞的MMP-9释放(WO
0062766-这是2000年的吗？)。PPARγ激动剂还显示在以下模型中有效：肺纤维变性模型(Milam等，Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol，2008，294(5)：L891-901)和肺动脉高血压模型(Crossno等，Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol，2007，292(4)：L885-897)。
827-38；Sanchez-Hidalgo 等，Biochem.Pharmacol.2005 Jun 15；69(12)：1733-44)、实验性脑脊髓炎(Feinstein等，Ann.Neurol.2002 Jun；51(6)：694-702)、胶原诱发性关节炎(Cuzzocrea等，Arthritis Rheum.2003 Dec；48(12)：3544-56)和佐剂诱发性关节炎(Shiojiri等，Eur.J.Pharmacol.2002 Jul 19；448(2-3)：231-8)、角叉菜胶诱发性胸膜炎(Cuzzocrea等，Eur.J.Pharmacol.2004 Jan 1；483(1)：79-93)、卵清蛋白诱发性肺炎(Lee等，FASEB J.2005 Jun；19(8)：1033-5)和LPS诱发性肺组织中性白细胞增多(Birrell等，Eur.Respir.J.2004 Jul；24(1)：18-23)以及(iii)已报道了罗格列酮在分离细胞中发挥抗炎作用，包括鼠巨噬细胞的iNOS表达(Reddy等，Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.2004 Mar；286(3)：L613-9)、人支气管上皮细胞中TNFα诱导的MMP-9活性(Hetzel等，Thorax.2003 Sep；58(9)：778-83)、人气道平滑肌细胞增殖(Ward等，Br.J.Pharmacol.2004Feb；141(3)：517-25)和嗜中性粒细胞的MMP-9释放(WO
0062766-这是2000年的吗？)。PPARγ激动剂还显示在以下模型中有效：肺纤维变性模型(Milam等，Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol，2008，294(5)：L891-901)和肺动脉高血压模型(Crossno等，Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol，2007，292(4)：L885-897)。
[0008] 根据对肺相关细胞中抗炎活性的观察，表明可使用其它PPARγ激动剂用于治疗炎性呼吸道疾病，包括哮喘、COPD、囊性纤维变性和肺纤维变性。参见WO0053601、WO0213812和WO0062766。这些研究建议包括通过全身性口服途径和肺部吸入途径两者给药。
[0009] 遗憾的是，PPARγ激动剂还具有有害的心血管作用，包括血液稀释(haemodilution)、外周水肿和肺水肿及充血性心力衰竭(CHF)。这些作用也被认为是由PPARγ的活化引起的。特别是已投入大量努力研究PPARγ激动剂通过与肾的PPARγ受体结合而妨碍体液平衡的正常维持的假设。参见Guan等，Nat.Med.2005；11(8)：861-6和Zhang等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2005 28；102(26)：9406-11。通过全身递药的口服途径用PPARγ激动剂治疗还与体重的不当增加有关。
[0010] 已知与充血性心力衰竭(CHF)的其它临床人群相比，COPD患者处于较高风险(Curkendall等，Ann Epidemiol，2006；16：63-70；Padeletti M等，Int J Cardiol.2008；125(2)：209-15)，因此十分重要的是，将这些患者的PPARγ受体的全身性活化保持在最低限度以避免将观察到的CHF增加的可能性。通过吸入途径给予呼吸系统药物是将抗炎药靶向肺部而同时将药物的全身性暴露保持在低点，从而降低全身活性和观察到的副作用的可能性的一种方法。
[0011] 吡格列酮具有以下结构式(I)：
[0012]
[0013] 其可以命名为5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮。在吡格列酮的噻唑烷-二酮环5位上的碳原子(上式(I)中用箭头标注)是不对称的，因此吡格列酮具有两个对映异构体，即5R和5S对映异构体。
[0014] 罗格列酮具有以下结构式(II)，可命名为5-(4-{2-[甲基(吡啶-2-基)氨基]乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮。罗格列酮的噻唑烷-二酮环5位上的碳原子(下式(II)中用箭头标注)也是不对称的，因此罗格列酮也具有两个对映异构体，即5R和5S对映异构体。
[0015]
[0016] 罗格列酮的5S对映异构体对PPARγ受体的结合亲和力比5R对映异构体的结合亲和力高(30nM与2μM，Parks等，1998，Bioorg.Med.Chem.Lett.8(24)：3657-8)。至于格列酮类的另一个成员利格列酮(Rivoglitazone)，5S对映异构体也具有比5R对映异构体高的受体结合亲和力(参见WO2007100027的第13页)。
[0017] 在实践中，通过全身递药的口服途径以5R和5S对映异构体的混合物(1∶1外消旋混合物)给予吡格列酮和罗格列酮以治疗糖尿病。已知在口服给药后，这些化合物的各个对映异构体和格列酮家族的成员一般在体内快速达到平衡(参见例如J.Clin.Pharmacol.2007，47，323-33；Rapid Commun.Mass Spectrom.2005，19，1125-9；J.Chromatography，835(2006)，40-46；Biopharmaceutics and Drug Disposition 1997，
18(4)，305-24；Chem.Pharm.Bull 1984，32，(11)4460-65；T.J.Med.Chem.1991，34，
319-25)，因此口服给予基本纯的异构体与口服给予外消旋混合物之间实际上没有差别。
特别对吡格列酮来说，在向美国食品和药品管理局(FDA)的递交书中已指出在啮齿动物糖尿病模型中口服给予外消旋体或各个对映异构体后在活性上没有差别(www.fda.gov/medwatch/SAFETY/2007/Sep PI/Actoplus Met PI.pdf)：
18(4)，305-24；Chem.Pharm.Bull 1984，32，(11)4460-65；T.J.Med.Chem.1991，34，
319-25)，因此口服给予基本纯的异构体与口服给予外消旋混合物之间实际上没有差别。
特别对吡格列酮来说，在向美国食品和药品管理局(FDA)的递交书中已指出在啮齿动物糖尿病模型中口服给予外消旋体或各个对映异构体后在活性上没有差别(www.fda.gov/medwatch/SAFETY/2007/Sep PI/Actoplus Met PI.pdf)：
[0018] “(吡格列酮)含有一个不对称碳，该化合物以外消旋混合物合成和使用。吡格列酮的两种对映异构体在体内相互转化。两种对映异构体之间不存在药理活性上的差异”。
[0019] 似乎没有研究以外消旋或单一对映异构体形式经肺吸入罗格列酮或吡格列酮(或甚至任何其它格列酮)的影响。有关直接与肺组织接触时，任一化合物或者任何其它格列酮的5R和5S对映异构体的可能平衡的报道似乎未曾发表过。
[0020] 整体来看，PPARγ激动剂的格列酮类的特征是分子中存在噻唑烷-2，4-二酮基团(A)，常作为(噻唑烷-2，4，二酮-5-基)甲基苯基(B)的组成部分：
[0021]
[0022] 且由箭头标注的环碳原子编号为噻唑烷酮环的5位。本文使用的术语“格列酮”是指PPARγ激动剂化合物，其结构包括噻唑烷-2，4-二酮基团(A)或(噻唑烷-2，4，二酮-5-基)甲基苯基(B)。
[0023] 除了已批准并销售的罗格列酮和吡格列酮外，还有已知来自专利和科技文献的大量格列酮类。已知的实例包括下列格列酮类：
[0024]
[0025]
[0026] 发明简述
[0027] 本发明基于这样的发现：即通过吸入法治疗炎性呼吸道疾病时，格列酮的5R-对映异构体比5S-对映异构体更有效。从通过吸入法治疗动物模型的炎性呼吸道疾病证明了此原理，其中已证实吡格列酮和罗格列酮的5R-对映异构体具有活性，而5S-对映异构体基本上无活性。这个研究结果得出的结论是：吸入性经肺给予格列酮的5R-对映异构体、特别是吡格列酮或罗格列酮的5R-对映异构体，所获得的化合物的抗炎作用比同样给予外消旋体所获得的抗炎作用更有效，同时与口服给药相比具有低的全身性暴露和副作用降低的益处。
[0029] 图1柱状图表示在最终暴露后24小时，鼻内给予实验室小鼠溶媒(0.2％吐温80的盐溶液)、5S-吡格列酮(1μg/kg或3μg/kg)、5R-吡格列酮(1μg/kg或3μg/kg)或外消旋吡格列酮(3μg/kg)对由烟草烟雾诱导的BAL细胞数目的影响。
[0030] 图2柱状图表示在最终暴露后24小时，鼻内给予实验室小鼠溶媒(0.2％吐温80的盐溶液)、5S-吡格列酮(1μg/kg或3μg/kg)、5R-吡格列酮(1μg/kg或3μg/kg)或外消旋吡格列酮(3μg/kg)对由烟草烟雾诱导的BAL嗜中性粒细胞数目的影响。
[0031] 图3柱状图表示在最终暴露后24小时，鼻内给予实验室小鼠溶媒(0.2％吐温80的盐溶液)、5S-罗格列酮(3μg/kg或10μg/kg)、5R-罗格列酮(3μg/kg或10μg/kg)或外消旋罗格列酮(10μg/kg)对烟草烟雾诱导的BAL细胞数目的影响。
[0032] 图4柱状图表示在最终暴露后24小时，鼻内给予实验室小鼠溶媒(0.2％吐温80的盐溶液)、5S-罗格列酮(3μg/kg或10μg/kg)、5R-罗格列酮(3μg/kg或10μg/kg)或外消旋罗格列酮(10μg/kg)对烟草烟雾诱导的BAL嗜中性粒细胞数目的影响。
[0033] 发明详述
[0034] 本文使用的术语“格列酮”具有上述含义，即为其结构包括噻唑烷-2，4-二酮基团(A)或(噻唑烷-2，4，二酮-5-基)甲基苯基(B)的PPARγ激动剂化合物。
[0035] 本文使用的术语“吡格列酮”或“吡格列酮成分”是指上述结构式(I)的化合物5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮或其药学上可接受的盐。
[0036] 本文使用的术语“罗格列酮”或“罗格列酮成分”是指上述结构式(II)的化合物5-(4-{2-[甲基(吡啶-2-基)氨基]乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮或其药学上可接受的盐。
[0037] 本文使用的术语“对映异构体过量”或其缩写“e.e.”定义为以下百分比：
[0038] ((R-S)/(R+S))x100％
[0039] 其中R和S是样品中R对映异构体和S对映异构体各自的重量分数。因此对于含有95％重量的5R-对映异构体和5％的5S-对映异构体的格列酮样品，R对映异构体超出S对映异构体的对映异构体过量为((95-5)/(95+5))x100＝90％。
[0040] 一方面，本发明提供一种适用于通过吸入法经肺给予的药物组合物，所述组合物包含格列酮、特别是吡格列酮或罗格列酮，以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂，其中组合物的格列酮含量由至少95％重量的5R-对映异构体和小于5％的5S-对映异构体组成。
[0041] 另一方面，本发明提供用于通过吸入法经肺给药而治疗炎性呼吸道疾病的格列酮(例如吡格列酮或罗格列酮)，其中吸入的格列酮由至少95％重量的5R-对映异构体和小于5％的5S-对映异构体组成。
[0042] 又一方面，本发明提供格列酮(例如吡格列酮或罗格列酮)在制备通过吸入法经肺给药治疗炎性呼吸道疾病的药物中的用途，其中药物的格列酮含量由至少95％重量的5R-对映异构体和小于5％的5S-对映异构体组成。
[0043] 又一方面，本发明提供一种治疗炎性呼吸道疾病的方法，所述方法包括通过吸入法经肺给予患有这类疾病的患者治疗有效量的格列酮(例如吡格列酮或罗格列酮)，其中吸入的格列酮由至少95％重量的5R-对映异构体和小于5％的5S-对映异构体组成。
[0044] 在本发明的所有方面，格列酮成分(例如吡格列酮或罗格列酮成分)可通过鼻或口吸入。优选通过口吸入。
[0045] 在本发明的所有方面，格列酮成分(例如吡格列酮或罗格列酮)应优选含有尽可能少的5S-对映异构体。例如，5R-对映异构体可构成至少97％、或至少98％、或至少99％重量的格列酮成分。
[0046] 在本发明的所有方面，格列酮成分(例如吡格列酮或罗格列酮成分)可与PPARγ激动剂以外的用于预防和治疗呼吸道疾病的一种或多种其它治疗药伴随应用，或者与PPARγ激动剂以外的用于预防和治疗呼吸道疾病的一种或多种其它治疗药序贯或同时给予。
[0047] 在本发明的所有方面，目前最优选的格列酮成分是吡格列酮。
[0048] 在本发明的所有方面，其中炎性呼吸道疾病可选自例如轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、类固醇抵抗性哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、囊性纤维变性、肺水肿、肺栓塞、肺炎、肺肉样瘤病(pulmonary sarcoisosis)、矽肺、肺纤维变性、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征、肺气肿、慢性支气管炎、肺结核和肺癌。
[0050] 药学上可接受的无机碱包括金属离子。更优选的金属离子包括但不限于合适的碱金属盐、碱土金属盐和其它生理学上可接受的金属离子。由无机碱得到的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、三价铁盐、二价铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等和其常用化合价的盐。示例性的盐包括铝盐、钙盐、锂盐、镁盐、钾盐、钠盐和锌盐。特别优选的为铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。
[0051] 由药学上可接受的有机无毒碱得到的盐，包括以下胺的盐：伯胺、仲胺和叔胺，部分包括三甲胺、二乙胺、N，N′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因；取代胺，包括天然存在的取代胺；环胺；以及季铵阳离子。这类碱的实例包括精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、海巴胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。
[0052] 本发明化合物的示例性药学上可接受的酸加成盐可由下列酸制备，包括而不限于甲酸、乙酸、丙酸、苯甲酸、琥珀酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、马来酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、硝酸、抗坏血酸、葡糖醛酸、马来酸、富马酸、丙酮酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、异柠檬酸、昔萘酸(xinajfoic acid)、酒石酸、三氟乙酸、双羟萘酸、丙酸、邻氨基苯甲酸、甲磺酸(mesylic acid)、萘二磺酸(napadisylate acid)、草乙酸、油酸、硬脂酸、水杨酸、对羟基苯甲酸、烟酸、苯乙酸、扁桃酸、恩波酸(双羟萘酸)、甲磺酸、磷酸、膦酸、乙磺酸、苯磺酸、泛酸、甲苯磺酸、2-羟基乙磺酸、磺胺酸、硫酸、水杨酸、环己基氨基磺酸、藻酸(algenic acid)、β-羟基丁酸、半乳糖二酸和半乳糖醛酸。示例性的药学上可接受的盐包括盐酸和氢溴酸的盐。
[0053] 本发明的组合物可用于治疗炎性呼吸道疾病，例如哮喘(轻度、中度或重度)，例如支气管哮喘、变应性哮喘、内源性哮喘、外源性哮喘、运动后哮喘、药物性哮喘(包括阿司匹林性哮喘和NSAID性哮喘)和粉尘性哮喘、类固醇抵抗性哮喘；支气管炎，包括传染性支气管炎和嗜酸性粒细胞支气管炎；慢性阻塞性肺病(COPD)；囊性纤维变性；肺纤维化，包括隐源性纤维变性肺泡炎、特发性肺纤维变性、特发性间质性肺炎、抗肿瘤疗法并发的肺纤维化和慢性感染，包括肺结核和曲霉病以及其它真菌感染；肺移植术并发症；肺血管系统的脉管炎性疾病和血栓性疾病，及肺高压(包括肺动脉高血压)；镇咳活性，包括与气道炎症和分泌疾病治疗相关的慢性咳嗽及医源性咳嗽；急性和慢性鼻炎，包括药物性鼻炎和血管运动性鼻炎；常年性和季节性变应性鼻炎，包括神经性鼻炎(rhinitis nervosa)(枯草热)；鼻息肉病；急性病毒感染，包括感冒和由呼吸道合胞体病毒、流感病毒、冠状病毒(包括SARS)和腺病毒所致急性病毒感染、肺水肿、肺栓塞、肺炎、肺肉样瘤病、矽肺、农夫肺和相关疾病；过敏性肺炎、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征、肺气肿、慢性支气管炎、肺结核和肺癌。具体地讲，本发明的方法和组合物包括预防和治疗呼吸系统疾病COPD。
[0054] 本文使用的术语“慢性阻塞性肺病”或“COPD”是指一组生理症状，包括慢性支气管炎、慢性咳嗽、咳痰、劳力性呼吸困难和可能或不可能部分可逆的显著进行性气道缩窄/气流减少。肺中还可能存在肺气肿。COPD是一种疾病，其特征在于：对慢性吸入微粒的异常炎症反应而引起的进行性气道气流受限。
[0055] 在患有该疾病的患者中，肺中的气体交换差导致血液中的氧气水平降低、二氧化碳水平升高和呼吸短促。COPD的慢性气道阻塞因为酶破坏肺实质引起肺弹性丧失而复杂化。与其说是单一病理情况，还不如说COPD是包括慢性阻塞性支气管炎和肺气肿的综合性术语。
[0056] 适于经口或鼻通过吸入法给予的组合物是已知的，且可以包括已知用于这类组合物的载体和/或稀释剂。组合物可含有0.01-99％重量的吡格列酮或罗格列酮成分。优选单位剂量包含1μg-50mg的吡格列酮或罗格列酮成分。
[0057] 最合适的剂量水平可由本领域技术人员用已知的任何合适方法确定。然而，应理解的是，用于任何特定患者的具体用量将取决于许多因素，包括要使用的具体化合物的活性、患者的年龄、体重、饮食、一般健康状况和性别、给药时间、给药途径、排泄率、任何其它药物的使用和接受治疗的疾病的严重程度。最适剂量可通过本领域必需的临床试验确定。
[0058] 本发明的组合物可与其它治疗药联用，所述其它治疗药可用于治疗/预防/抑制或改善本发明化合物对之有用的疾病或病症。因此，这样的其它的治疗药可以通过其常规采用的途径和量，与格列酮成分、特别是吡格列酮或罗格列酮成分一起同时或序贯给予。如果本发明的化合物与一种或多种其它治疗药同时给予，则优选除吡格列酮成分以外还含有所述其它治疗药的药物组合物。因此，除格列酮成分、特别是吡格列酮或罗格列酮成分以外，本发明的药物组合物还包括另含有一种或多种其它活性成分的药物组合物。
[0059] 用于与本发明的格列酮成分/组合物、特别是吡格列酮或罗格列酮成分/组合物的联合疗法的合适治疗药包括一种或多种选自以下的其它治疗药：抗炎药、支气管扩张药、化痰药、镇咳药、白三烯抑制剂和抗生素。
[0060] 用于与本发明的格列酮成分/组合物、特别是吡格列酮或罗格列酮成分/组合物的联合疗法的合适的治疗药包括：(1)类固醇药物，例如皮质甾类，例如倍氯米松(例如作为一丙酸酯或二丙酸酯)、氟尼缩松、氟替卡松(例如作为丙酸酯或糠酸酯)、环索奈德、莫米松(例如作为糠酸酯)、莫米松地奈德(mometasone desonide)、罗氟奈德(rofleponide)、氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、萘非可特、地夫可特、醋酸卤泼尼松、氟轻松、醋酸氟轻松、氯可托龙、替泼尼旦(tipredane)、泼尼卡酯、二丙酸阿氯米松、卤米松、利美索龙、丙酸地泼罗酮、曲安西龙、倍他米松、氟氢可的松、去氧皮质酮、艾泼诺酯(etiprendnol dicloacetate)等。类固醇药物还可包括在临床或临床前开发用于呼吸道疾病的类固醇，例如GW-685698、GW-799943、GSK870086、QAE397、NCX-1010、NCX-1020、NO-地塞米松、PL-2146、NS-126(旧称ST-126)以及下列国际专利申请中提及的化合物：WO0212265、WO0212266、WO02100879、WO03062259、WO03048181和WO03042229。类固醇药物另外还可包括开发中的具有降低副作用特征的下一代分子，例如选择性糖皮质激素受体激动剂(SEGRA)，包括ZK-216348和国际专利申请WO-00032585、WO-000210143、WO-2005034939、WO-2005003098、WO-2005035518和WO-2005035502中提及的化合物及其功能等同物和功能衍生物；(2)β2-肾上腺素受体激动剂，例如沙丁胺醇、班布特罗、特布他林、非诺特罗、福莫特罗、富马酸福莫特罗、沙美特罗、昔萘酸沙美特罗、阿福特罗、酒石酸阿福特罗(arfomoterol tartrate)、茚达特罗((indacaterol)QAB-149)、卡莫特罗(carmoterol)、吡库特罗、BI 1744 CL、GSK159797、GSK59790、GSK159802、GSK642444、GSK678007、GSK96108、克仑特罗、丙卡特罗、比托特罗和溴沙特罗、TA-2005以及以下专利或专利申请的化合物：
EP1440966、JP05025045、WO93/18007、WO99/64035、US2002/0055651、US2005/0133417、US2005/5159448、WO00/075114、WO01/42193、WO01/83462、WO02/66422、WO02/70490、WO02/76933、WO03/24439、WO03/42160、WO03/42164、WO03/72539、WO03/91204、WO03/99764、WO04/16578、WO04/016601、WO04/22547、WO04/32921、WO04/33412、WO04/37768、WO04/37773、WO04/37807、WO0439762、WO04/39766、WO04/45618、WO04/46083、WO04/71388、WO04/80964、EP1460064、WO04/087142、WO04/89892、EP01477167、US2004/0242622、US2004/0229904、WO04/108675、WO04/108676、WO05/033121、WO05/040103、WO05/044787、WO04/071388、WO05/058299、WO05/058867、WO05/065650、WO05/066140、WO05/070908、WO05/092840、WO05/092841、WO05/092860、WO05/092887、WO05/092861、WO05/090288、WO05/092087、WO05/080324、WO05/080313、US20050182091、US20050171147、WO05/092870、WO05/077361、DE10258695、WO05/111002、WO05/111005、WO05/110990、US2005/0272769、WO05/110359、WO05/121065、US2006/0019991、WO06/016245、WO06/014704、WO06/031556、WO06/032627、US2006/0106075、US2006/0106213、WO06/051373、WO06/056471、WO08/096112、WO08/104790、WO08/096119、WO08/096112；(3)白三烯调节剂，例如孟鲁司特或普仑司特；(4)抗胆碱能药，例如选择性毒蕈碱性-3(M3)受体拮抗剂，例如异丙托溴铵、噻托(tiotropium)、噻托溴铵(Spiriva )、glycopyrollate、NVA237、LAS34273、GSK656398、GSK233705、GSK 573719、LAS35201、QAT370 和 oxytropium bromide；(5) 磷酸二酯酶-IV(PDE-IV)抑制剂，例如罗氟司特或西洛司特；(6)镇咳药，例如可待因或dextramorphan；(7)非甾体抗炎药(NSAID)，例如布洛芬或酮洛芬；(8)化痰药，例如N乙酰半胱氨酸或弗多司坦(fudostein)；(9)祛痰/黏液促动(mucokinetic)调节剂，例如氨溴索、高渗溶液(例如盐水或甘露醇)或表面活性剂；(10)肽类化痰药，例如重组人脱氧核糖核酸酶I(α链道酶和rhDNase)或螺杀菌素；(11)抗生素，例如阿奇霉素、妥布霉素和氨曲南；以及(12)p38MAP激酶抑制剂，例如GSK 856553和GSK 681323。
EP1440966、JP05025045、WO93/18007、WO99/64035、US2002/0055651、US2005/0133417、US2005/5159448、WO00/075114、WO01/42193、WO01/83462、WO02/66422、WO02/70490、WO02/76933、WO03/24439、WO03/42160、WO03/42164、WO03/72539、WO03/91204、WO03/99764、WO04/16578、WO04/016601、WO04/22547、WO04/32921、WO04/33412、WO04/37768、WO04/37773、WO04/37807、WO0439762、WO04/39766、WO04/45618、WO04/46083、WO04/71388、WO04/80964、EP1460064、WO04/087142、WO04/89892、EP01477167、US2004/0242622、US2004/0229904、WO04/108675、WO04/108676、WO05/033121、WO05/040103、WO05/044787、WO04/071388、WO05/058299、WO05/058867、WO05/065650、WO05/066140、WO05/070908、WO05/092840、WO05/092841、WO05/092860、WO05/092887、WO05/092861、WO05/090288、WO05/092087、WO05/080324、WO05/080313、US20050182091、US20050171147、WO05/092870、WO05/077361、DE10258695、WO05/111002、WO05/111005、WO05/110990、US2005/0272769、WO05/110359、WO05/121065、US2006/0019991、WO06/016245、WO06/014704、WO06/031556、WO06/032627、US2006/0106075、US2006/0106213、WO06/051373、WO06/056471、WO08/096112、WO08/104790、WO08/096119、WO08/096112；(3)白三烯调节剂，例如孟鲁司特或普仑司特；(4)抗胆碱能药，例如选择性毒蕈碱性-3(M3)受体拮抗剂，例如异丙托溴铵、噻托(tiotropium)、噻托溴铵(Spiriva )、glycopyrollate、NVA237、LAS34273、GSK656398、GSK233705、GSK 573719、LAS35201、QAT370 和 oxytropium bromide；(5) 磷酸二酯酶-IV(PDE-IV)抑制剂，例如罗氟司特或西洛司特；(6)镇咳药，例如可待因或dextramorphan；(7)非甾体抗炎药(NSAID)，例如布洛芬或酮洛芬；(8)化痰药，例如N乙酰半胱氨酸或弗多司坦(fudostein)；(9)祛痰/黏液促动(mucokinetic)调节剂，例如氨溴索、高渗溶液(例如盐水或甘露醇)或表面活性剂；(10)肽类化痰药，例如重组人脱氧核糖核酸酶I(α链道酶和rhDNase)或螺杀菌素；(11)抗生素，例如阿奇霉素、妥布霉素和氨曲南；以及(12)p38MAP激酶抑制剂，例如GSK 856553和GSK 681323。
[0061] 一方面，本发明提供用于吸入性给药的本发明的格列酮成分、特别是吡格列酮或罗格列酮成分与其它抗炎药和支气管扩张药物组合的组合产品(即三联组合产品)，包括但不限于昔萘酸沙美特罗/丙酸氟替卡松(Advair/Seretide )、富马酸福莫特罗/布地奈德(Symbicort )、富马酸福莫特罗/糠酸莫米松、富马酸福莫特罗/丙酸倍氯米松(Foster )、富马酸福莫特罗/丙酸氟替卡松(FlutiForm )、茚达特罗/糠酸莫米松、茚达特罗/QAE-397、GSK159797/GSK 685698、GSK159802/GSK 685698、GSK642444/GSK685698、富马酸福莫特罗/环索奈德、酒石酸阿福特罗/环索奈德。
[0062] 又一方面，本发明提供用于吸入性给药的本发明的格列酮成分、特别是吡格列酮或罗格列酮成分与其它支气管扩张药物组合产品、特别是B2激动剂/M3拮抗剂组合产品的组合(即三联组合产品)，包括但不限于昔萘酸沙美特罗/噻托溴铵、富马酸福莫特罗/噻托溴铵、BI 1744CL/噻托溴铵、茚达特罗/NVA237、茚达特罗(indacterol)/QAT-370、福莫特罗/LAS34273、GSK159797/GSK 573719、GSK159802/GSK573719、GSK642444/GSK 573719、GSK159797/GSK 233705、GSK159802/GSK 233705、GSK642444/GSK 233705和同一分子既有β2激动剂又有M3拮抗剂活性的化合物(二元功能性)，例如GSK 961081。
[0063] 因此又一方面，本发明提供用于治疗患者呼吸系统疾病的药盒，所述药盒包括第一种剂型，所述剂型包含适用于通过吸入法经肺给药的组合物，所述组合物包含格列酮、特别是吡格列酮或罗格列酮和一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂，其中组合物的格列酮含量由至少95％重量的5R-对映异构体和小于5％的5S-对映异构体组成；所述药盒还包含例如上述其它治疗药的第二剂型，其选自抗炎药、支气管扩张药、化痰药、镇咳药、白三烯抑制剂和抗生素。
[0064] 对于通过吸入法递送，活性化合物优选为微粒剂的形式。微粒剂可通过各种技术制备，包括喷雾干燥、冷冻干燥和微粉化。在粉碎产生微粒后，检查化合物的粒径分布(PSD)，本领域常通过确定d10、d50和d90值来描述粒径分布。平均粒径，即平均等效直径，定义为粉末(微粒)的50％(量)大于等效直径，而其它50％(量)小于等效直径。因此，平均粒径表示为等效d50。对于吸入性用途，需要d50小于10微米，优选小于5微米。
[0065] 举例来说，可将本发明的组合物制成由喷雾器递送的悬浮剂或制成液体抛射剂中的气雾剂，例如用于压力定量吸入器(PMDI)。适用于PMDI的抛射剂为本领域技术人员所知，包括CFC-12、HFA-134a、HFA-227、HCFC-22(CCl2F2)和HFA-152(CH4F2和异丁烷)。
[0066] 在本发明的一个优选实施方案中，本发明的组合物为干粉形式，用于使用干粉吸入器(DPI)递送。许多的DPI类型是已知的。
[0067] 通过吸入法递送的微粒剂可与有助于递送和释放的赋形剂一起配制。例如在干粉制剂中，微粒剂可与有助于由DPI注入肺的大型载体颗粒一起配制。合适的载体颗粒是已知的，包括乳糖颗粒；它们的质量中值空气动力学直径可大于90μm。
[0069] 如上所述，可根据所使用的吸入器系统计量给予组合物。除活性化合物以外，给药剂型另外可含有赋形剂，例如抛射剂(例如在计量气雾器的情况下为Frigen)、表面活性物质、乳化剂、稳定剂、防腐剂、矫味剂、填充剂(例如在粉末吸入器的情况下为乳糖)或者其它活性化合物(适当时)。
[0070] 对于吸入法而言，可获得多种系统，其可利用吸入技术产生和给予适于患者的最适粒径的气雾剂。除了使用连接器(贮雾瓶、膨胀器)和梨形容器(例如NebulatorVolumatic )以及发射喷雾的自动装置(Autohaler )以外，对于计量气雾剂，特别是在粉末吸入器的情况下，还可获得许多技术解决方案(例如Diskhaler Rotadisk
Turbohaler 或吸入器，例如EP-A-0505321中的描述)。
Turbohaler 或吸入器，例如EP-A-0505321中的描述)。
[0071] 制备格列酮对映异构体的方法
[0072] 可以采用手性HPLC分离格列酮类(参见例如下述方法1-3和5-7)。手性柱包括CHIRALPAK AD、AD-H、AS-V、50801、IA、IC、OD、OF、OG、OJ、OK和OZ。优选的HPLC手性柱为使用乙醇和变化的TFA、优选0.05-0.2％TFA洗脱的CHIRALPAK AD-H和CHIRALPAK IA。
[0073] 用吡格列酮为例，拆分的一个替代方法参见流程2(另参见实施例10)。
[0074] 流程2
[0075]
[0076] 旋光拆分方法的最新综述文章：E.Fogassy等，Tetrahedron：asymmetry，2008，19，519-536；S.H.Wilen，Topics in Stereochemistry，Wiley-Interscience：NY，1972，
6，107， 主 编 E.L.Eliel，N.L.Allinger；P.Newman，Optical resolution Procedures of Chiral Compounds 1-3，拆分信息中心(Resolution Information Center)，NY，
1978-1984；J.Jaques，S.H.Wilen，A.Collett，Enantiomers Racemates and Resolutions，Wiley-Interscience：NY，1991；R.A.Scheldon，Chirotechnology，Marcel Dekker，NY，
1993；Optical Resolutions via diastereomeric salt formation，CRC Press，2002，主编David Kozma。
6，107， 主 编 E.L.Eliel，N.L.Allinger；P.Newman，Optical resolution Procedures of Chiral Compounds 1-3，拆分信息中心(Resolution Information Center)，NY，
1978-1984；J.Jaques，S.H.Wilen，A.Collett，Enantiomers Racemates and Resolutions，Wiley-Interscience：NY，1991；R.A.Scheldon，Chirotechnology，Marcel Dekker，NY，
1993；Optical Resolutions via diastereomeric salt formation，CRC Press，2002，主编David Kozma。
[0077] 常用的手性酸拆分剂包括而不限于二苯甲酰酒石酸、二甲氧基苯酰酒石酸、二甲苯甲酰酒石酸、酒石酸、phencyphos、chlocyphos、anicyphos、磷酸氢1，1′-联萘-2，2′-二酯、樟脑磺酸、溴樟脑磺酸、樟脑酸、苯乙基磺酸、苹果酸、扁桃酸、4-溴扁桃酸、4-甲基扁桃酸、乳酸和查耳酮磺酸。
[0078] 更优选的手性酸拆分剂包括(-)-O，O’-二苯甲酰基-L-酒石酸(无水)、(-)-O，O’-二苯甲酰基-L-酒石酸一水合物、(-)-二-O-对甲苯甲酰基-L-酒石酸、L-(+)-酒石酸和(-)-二-对甲氧基苯基(p-anisolyl)-L-酒石酸。
[0079] 最优选的手性酸拆分剂为(-)-O，O’-二苯甲酰基-L-酒石酸(无水)。
[0080] 可以不同的化学计量关系使用手性酸拆分剂进行拆分。可按1份(I)比10份手性酸(II)的比率、更优选按1份(I)比5份手性酸(II)的比率、最优选按1份(I)比2份手性酸(II)的比率使用上述拆分剂。甚至更优选为1份(I)比1份手性酸(II)的比率。
[0081] 多种溶剂可用于与手性酸(II)一起形成非对映体盐(III)。优选的溶剂可包括乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、1，4-二氧杂环己烷、丙酮、乙腈、MeOH、EtOH、IPA、1-丙醇、1，2-二甲氧基乙烷、乙醚、二氯乙烷、叔丁基甲醚、1-丁醇、2-丁醇、叔丁醇、2-丁酮、甲苯、环己烷、庚烷、己烷、H2O、DMF、石油醚和CHCl3。
[0082] 最优选的溶剂为乙腈。
[0083] 溶剂可彼此组合使用，优选的组合包括10％HCl/H2O、10％H2O/DMF、10％H2O/EtOH、10％H2O/IPA、不同份数的甲醇和水、不同份数的甲醇和水与HCl、不同份数的CHCl3和乙酸乙酯、不同份数的EtOH和水、不同份数的IPA和水、不同份数的1-丙醇和水以及不同份数的CHCl3和二噁烷。
[0084] 更优选的溶剂组合包括不同份数的CHCl3和二噁烷、不同份数的CHCl3和乙酸乙酯、不同份数的甲醇和水与不同份数的HCl和甲醇和水。
[0085] 常用的手性胺拆分剂包括而不限于1-苯基乙胺、辛可尼丁、辛可宁、奎尼丁、可待因、吗啡、士的宁、番木鳖碱、奎宁、麻黄碱、氨基丁醇、脱氢枞胺(dehydroabiethylamine)、2-苯甘氨醇、1，2-环己二胺、1-萘基乙胺、2-氨基-1-苯基丙烷-1，3-二醇、4-氯-1-苯胺、N-(4-甲氧基苄基)-1-苯基乙胺、葑胺、N-苄基-1-苯基乙胺、N-(4-二甲基氨基苄基)-1-苯基乙胺、3-氨基-2，2-二甲基-3-苯基丙-1-醇、鹰爪豆碱、脯氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸、组氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酰胺、精氨酸、高精氨酸、N-α-乙酰基赖氨酸、N-ε-乙酰基赖氨酸和鸟氨酸。
[0086] 最优选的手性胺拆分剂为L-赖氨酸。
[0087] 可以不同的化学计量关系使用手性胺拆分剂进行拆分。可按1份(I)比10份手性胺(IV)的比率、更优选按1份(I)比5份手性胺(IV)的比率、最优选按1份(I)比1份手性胺(IV)的比率使用上述拆分剂。
[0088] 多种溶剂可用于与手性胺(IV)一起形成非对映体盐(V)。优选的溶剂可包括乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、1，4-二氧杂环己烷、丙酮、乙腈、MeOH、EtOH、IPA、1-丙醇、1，2-二甲氧基乙烷、乙醚、二氯乙烷、叔丁基甲醚、1-丁醇、2-丁醇、叔丁醇、2-丁酮、甲苯、环己烷、庚烷、己烷、H2O、DMF、石油醚和CHCl3。
[0089] 参考文献K.Akiba等，Bull.Chem.Soc.Jpn.，1974，47(4)，935-937；R.A.Bartsch等，JACS，2001，123(31)，7479披露了杂环nitrosimines的分解，并可应用于格列酮类的合成和拆分。因此，用吡格列酮为例，合成/拆分的一个替代方法可参见流程3：
[0090] 流程3
[0091]
[0092] 当然，可以使最终产物重结晶以提高对映体纯度。
[0093] 参考文献T.Sohda等，Chem.Pharm.Bull.，1984，32(11)，4460-5披露了相关化合物的手性合成，并可适用于其它格列酮类的合成。因此，用吡格列酮为例，合成的一个替代方法可参见流程4：
[0094] 流程4
[0095]
[0096] 当然，可以使最终产物重结晶以提高对映体纯度。
[0097] 参考文献J.R.Falck等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，2008，18，1768-1771披露了相关化合物的手性合成，并可适用于格列酮类的合成。因此，用吡格列酮为例，合成的一个替代方法可参见流程5(另参见实施例13)。
[0098] 流程5
[0099]
[0100] 当然，可以使最终产物重结晶以提高对映体纯度。
[0101] 在罗格列酮的情况下，参考文献J.Chem.Soc.Perkin Trans.I，1994，3319-3324指出，5-[1-{4-[3-(甲基-吡啶-2-基-氨基)-丙氧基]-苯基}-甲-(E)-亚基]-噻唑烷-2，4-二酮可应用生物催化作用还原。所建议的用于生物催化作用的酵母菌株为深红酵母(Rhodotorula rubra)(或胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa))和粘红酵母(Rhodotorula glutinis)。因此用吡格列酮为例，格列酮类的一个替代制备法可参见流程
6：
6：
[0102] 流程6
[0103]
[0104] 或者，在手性配体存在下，使用铑和铱催化剂进行5-[1-{4-[2-(5-乙基-吡啶-2-基)-乙氧基]-苯基}-甲-(E)-亚基]-噻唑烷-2，4-二酮的不对称氢解是本领域技术人员已知的方法(另参见下述实施例12)。
[0105] 下列实施例说明吡格列酮和罗格列酮对映异构体的制备，以及本发明所依据的生物学结果：
[0106] 化学实施例
[0107] 通用实验详细资料
[0108] 实验部分中所使用的缩略语：
[0109] c＝浓度；h＝小时；H2O＝蒸馏水；HPLC＝高效液相色谱法；LCMS＝液相色谱法-质谱法；MeOH＝甲醇；TFA＝三氟乙酸；DMSO＝二甲亚砜；HCl＝盐酸；EtOH＝乙醇；IPA＝异丙醇；EtOAc＝乙酸乙酯；THF＝四氢呋喃；NH4Cl＝氯化铵；LDA＝二异丙基氨基锂；min＝分钟；RT＝室温；Rt＝保留时间；e.e.＝对映异构体过量；MP-Carbonate＝大孔碳酸甲基聚苯乙烯三乙铵(0.5％无机抗静电剂)。d.e.＝非对映体过量；SL-W003-2＝(S)-1-[(S)-2-(2í-二苯基膦基苯基)二茂铁基]乙基二环己基膦；Rh(COD)2BF4＝双(1，
5-环辛二烯)四氟硼酸铑I；吡格列酮＝5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，
3-噻唑烷-2，4-二酮；L-DBTA＝L-二苯甲酰酒石酸
5-环辛二烯)四氟硼酸铑I；吡格列酮＝5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，
3-噻唑烷-2，4-二酮；L-DBTA＝L-二苯甲酰酒石酸
[0110] 采用ACD实验室10版给出结构的命名。
[0111] 从以下质谱仪中获得NMR谱：带有在400MHz下操作的5mm反相检测三共振探针的Varian Unity Inova 400质谱仪，或者带有在400MHz下操作的5mm反相检测三共振TXI探针的Bruker Avance DRX 400质谱仪，或者带有在300MHz下操作的标准5mm双频探针的Bruker Avance DPX 300质谱仪。位移以相对于四甲基硅烷的ppm给出。旋光度采用带有5x25mm套层样品管的AA-10R自动偏光计测量。不对称氢解实验采用Biotage Endeavor氢化设备进行。
[0112] 所有溶剂和商用试剂原样使用。
[0113] 使用液相色谱-质谱法(LC/MS)和液相色谱系统：
[0114] 方法1
[0116] 方法2
[0117] CHIRALPAK 1A(250x4.6mm，5μM)，用EtOH+0.05％TFA洗脱-流速0.7ml/分钟。检测-设置为280nM波长的嵌入式DAD
[0118] 方法3
[0119] CHIRALCEL OD-RH(150X4.6mm)，用90％MeOH+10％H2O洗脱-流速0.5ml/分钟。检测-设置为254nM波长的嵌入式UV检测
[0120] 方法4
[0121] 带 有 C18-反 相 柱(100×3.0mm Higgins Clipeus，粒 径5μm) 的 Waters Micromass ZQ2000，用A：水+0.1％甲酸；B：乙腈+0.1％甲酸洗脱。梯度：
[0122]
[0123] 检测-MS、ELS、UV(100μl分流至带有嵌入式UV检测器的MS)。MS电离方法-电喷雾(正离子)
[0124] 方法5
[0125] CHIRALPAK IA(250x21mm，5μm)，用乙醇+0.2％TFA洗脱-流速13ml/分钟。检测-设置为220nM波长的嵌入式UV检测
[0126] 方法6
[0127] Chiral-AGP(150x4.0mm，5μM)，用A：86％10mM磷酸二氢钾缓冲液(pH 7.0)；B：14％乙腈+0.1％甲酸洗脱-流速0.8ml/分钟。检测-设置为254nM波长的嵌入式DAD
[0128] 方法7
[0129] CHIRALPAK 1A(250x4.6mm，5μM)， 用 A，0.05 ％ TFA/EtOH；B， 庚 烷；D，IPA(A∶B∶D＝40∶30∶30)洗脱-流速0.7ml/分钟。检测-设置为225nM波长的嵌入式DAD
[0130] 检测-MS、ELS、UV PDA。MS电离方法-电喷雾(正/负离子)
[0131] 方法8
[0132] 带有Acquity BEH或Acquity BEH Shield RP18 1.7μM 100x2.1mm C18-反相柱的Waters Micromass ZQ2000，用A：水+0.1％甲酸；B：乙腈+0.1％甲酸洗脱。梯度：
[0133]
[0134] 检测-MS、ELS、UV PDA。MS电离方法-电喷雾(正/负离子)
[0135] 方法9
[0136] 带有CHIRALPAK IA(150x4.6mm，5μm)的Agilent 1100系列，用A：庚烷，B：乙醇+0.05％TFA洗脱-流速0.5ml/分钟。检测-嵌入式偏振计和设置为270nM波长的UV检测。梯度：
[0137]
[0138] 方法10
[0139] Phenomenex Gemini C18-反相柱(250×21.20mm，5μm粒径)，用A：水+0.1％甲酸；B：甲醇+0.1％甲酸洗脱。梯度-15分钟内50％A/50％B-5％A/95％B-流速18mL/分钟。检测-设置为254nM波长的嵌入式UV检测器。
[0140] 方法11
[0141] Phenomenex Luna 3微米C18(2)30x4.6mm，用A：水+0.1％甲酸；B：乙腈+0.1％甲酸洗脱。梯度：
[0142]
[0143] 检测-MS、ELS、UV(200μl/分钟分流至带有嵌入式HP1100DAD检测的MS)。MS电离方法-电喷雾(正离子和负离子)
[0144] 所有反应都在氮气氛下进行，除非另有说明。外消旋罗格列酮用作游离碱，而外消旋吡格列酮用作游离碱或用作标注的HCl盐。
[0145] 实施例1
[0146] (5R)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮三氟乙酸盐
[0147]
[0148] 标题化合物(480mg)采用方法1分离。LCMS(方法4)：Rt 6.00分钟，m/z+ 25 1
357[M-CF3CO2H]。[α]D +104°(c 1.0，MeOH)。e.e.(方法2)≥98％，Rt 4.69分钟。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.02-11.88(1H，bs)，8.68-8.60(1H，d，J 1.7)，8.32-8.23(1H，d，J 7.7)，7.90-7.82(1H，d，J 8.4)，7.14-7.06(2H，d，J 8.7)，6.85-6.78(2H，d，J 8.7)，
4.85-4.78(1H，dd，J 4.4，8.9)，4.35-4.27(2H，t，J 6.2)，3.40-3.34(2H，t，J 6.1)，
3.28-3.21(1H，dd，J 4.3，14.3)，3.05-2.97(1H，dd，J 9.0，14.3)，2.77-2.67(2H，q，J
7.6)，1.22-1.14(3H，q，J 7.5)。
357[M-CF3CO2H]。[α]D +104°(c 1.0，MeOH)。e.e.(方法2)≥98％，Rt 4.69分钟。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.02-11.88(1H，bs)，8.68-8.60(1H，d，J 1.7)，8.32-8.23(1H，d，J 7.7)，7.90-7.82(1H，d，J 8.4)，7.14-7.06(2H，d，J 8.7)，6.85-6.78(2H，d，J 8.7)，
4.85-4.78(1H，dd，J 4.4，8.9)，4.35-4.27(2H，t，J 6.2)，3.40-3.34(2H，t，J 6.1)，
3.28-3.21(1H，dd，J 4.3，14.3)，3.05-2.97(1H，dd，J 9.0，14.3)，2.77-2.67(2H，q，J
7.6)，1.22-1.14(3H，q，J 7.5)。
[0149] 实施例2
[0150] (5S)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮三氟乙酸盐
[0151]
[0152] 标题化合物(674mg)采用方法1分离。LCMS(方法4)：Rt 6.01分钟，m/z+ 25 1
357[M-CF3CO2H]。[α]D -76°(c 1.0，MeOH)。e.e.(方法2)≥98％，Rt 7.00分钟。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.02-11.88(1H，bs)，8.68-8.60(1H，d，J 1.7)，8.32-8.23(1H，d，J 7.7)，7.90-7.82(1H，d，J 8.4)，7.14-7.06(2H，d，J 8.7)，6.85-6.78(2H，d，J 8.7)，
4.85-4.78(1H，dd，J 4.4，8.9)，4.35-4.27(2H，t，J 6.2)，3.40-3.34(2H，t，J 6.1)，
3.28-3.21(1H，dd，J 4.3，14.3)，3.05-2.97(1H，dd，J 9.0，14.3)，2.77-2.67(2H，q，J
7.6)，1.22-1.14(3H，q，J 7.5)。
357[M-CF3CO2H]。[α]D -76°(c 1.0，MeOH)。e.e.(方法2)≥98％，Rt 7.00分钟。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.02-11.88(1H，bs)，8.68-8.60(1H，d，J 1.7)，8.32-8.23(1H，d，J 7.7)，7.90-7.82(1H，d，J 8.4)，7.14-7.06(2H，d，J 8.7)，6.85-6.78(2H，d，J 8.7)，
4.85-4.78(1H，dd，J 4.4，8.9)，4.35-4.27(2H，t，J 6.2)，3.40-3.34(2H，t，J 6.1)，
3.28-3.21(1H，dd，J 4.3，14.3)，3.05-2.97(1H，dd，J 9.0，14.3)，2.77-2.67(2H，q，J
7.6)，1.22-1.14(3H，q，J 7.5)。
[0153] 实施例3
[0154] (5R)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮[0155]
[0156] 将MP-Carbonate(389mg，1.06mmol)加入(5R)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮三氟乙酸盐(100mg，0.21mmol)的MeOH(100mL)溶液中，于室温搅拌2小时，过滤后树脂状物用MeOH(3X10mL)洗涤。将滤液真空浓缩，得到标题化合物(35mg，47％)。e.e.(方法2)92.90％，Rt 6.27分钟。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.44-11.11(1H，bs)，8.34-8.29(1H，d，J 1.9)，7.55-7.49(1H，dd，J 2.2，7.9)，7.24-7.20(1H，d，J 7.8)，7.12-7.05(2H，d，J 8.6)，6.84-6.77(2H，d，J 8.6)，4.78-4.71(1H，dd，J 4.3，9.1)，4.30-4.19(1H，d，J 4.3)，3.24-3.18(2H，d)，3.11-3.03(2H，t，J 6.6)，3.00-2.92(1H，dd，J 9.2，14.2)，2.59-2.50(2H，q，J 7.6)，
1.17-1.09(3H，t，J 7.7)。
1.17-1.09(3H，t，J 7.7)。
[0157] 实施例4
[0158] (5R)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮盐酸盐
[0159]
[0160] 将 约 1.25M HCl/MeOH(0.33mL，0.33mmol) 加 入 (5R)-5-{4-[2-(5- 乙 基 吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮(得自实施例3)(30mg，0.084mmol)与MeOH(5mL)的悬浮液中，于室温搅拌1小时。真空除去溶剂，得到标题化合物(32.4mg，100％)。LCMS(方法4)：Rt 5.95分钟，m/z 357[M-HCl+]。e.e(方法3)93.2％，Rt 12.10
24
分钟。根据单晶X射线衍射分析，C-5的立体化学结构为(R)构型。[α]D +108°(c
1
1.0，MeOH)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.03-11.88(1H，bs)，8.68-8.62(1H，d，J
1.7)，8.34-8.25(1H，d，J 7.9)，7.91-7.83(1H，d，J 8.3)，7.14-7.05(2H，d，J 8.7)，
6.86-6.77(2H，d，J 8.7)，4.85-4.77(1H，dd，J 4.3，8.9)，4.38-4.28(2H，t，J 6.0)，
3.42-3.36(2H，t，J 6.2)，3.28-3.20(1H，dd，J 9.0，14.2)，3.06-2.96(1H，dd，J 9.0，
14.2)，2.77-2.67(2H，q，J 7.7)，1.23-1.15(3H，t，J 7.7)。随后用MeOH-EtOAc或MeOH-Et2O重结晶，得到标题化合物，其e.e.＞97％。
24
分钟。根据单晶X射线衍射分析，C-5的立体化学结构为(R)构型。[α]D +108°(c
1
1.0，MeOH)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.03-11.88(1H，bs)，8.68-8.62(1H，d，J
1.7)，8.34-8.25(1H，d，J 7.9)，7.91-7.83(1H，d，J 8.3)，7.14-7.05(2H，d，J 8.7)，
6.86-6.77(2H，d，J 8.7)，4.85-4.77(1H，dd，J 4.3，8.9)，4.38-4.28(2H，t，J 6.0)，
3.42-3.36(2H，t，J 6.2)，3.28-3.20(1H，dd，J 9.0，14.2)，3.06-2.96(1H，dd，J 9.0，
14.2)，2.77-2.67(2H，q，J 7.7)，1.23-1.15(3H，t，J 7.7)。随后用MeOH-EtOAc或MeOH-Et2O重结晶，得到标题化合物，其e.e.＞97％。
[0161] 实施例5
[0162] (5S)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮[0163]
[0164] 采用实施例3所述方法的类似方法自(5S)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮三氟乙酸盐开始制备标题化合物(28mg，37％)。e.e.(方法2)90.9％，Rt 9.21分钟。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.44-11.11(1H，bs)，
8.34-8.29(1H，d，J 1.9)，7.55-7.49(1H，dd，J 2.2，7.9)，7.24-7.20(1H，d，J 7.8)，
7.12-7.05(2H，d，J 8.6)，6.84-6.77(2H，d，J8.6)，4.78-4.71(1H，dd，J 4.3，9.1)，
4.30-4.19(1H，d，J 4.3)，3.24-3.18(2H，d)，3.11-3.03(2H，t，J 6.6)，3.00-2.92(1H，dd，J 9.2，14.2)，2.59-2.50(2H，q，J 7.6)，1.17-1.09(3H，t，J 7.7)。
8.34-8.29(1H，d，J 1.9)，7.55-7.49(1H，dd，J 2.2，7.9)，7.24-7.20(1H，d，J 7.8)，
7.12-7.05(2H，d，J 8.6)，6.84-6.77(2H，d，J8.6)，4.78-4.71(1H，dd，J 4.3，9.1)，
4.30-4.19(1H，d，J 4.3)，3.24-3.18(2H，d)，3.11-3.03(2H，t，J 6.6)，3.00-2.92(1H，dd，J 9.2，14.2)，2.59-2.50(2H，q，J 7.6)，1.17-1.09(3H，t，J 7.7)。
[0165] 实施例6
[0166] (5S)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮盐酸盐
[0167]
[0168] 采用实施例4所述方法的类似方法，自(5S)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮(得自实施例2)开始制备标题化合物(25.7mg，100％)。+
LCMS(方法4)：Rt 5.94分钟，m/z 357[M-HCl]。e.e.(方法3)92.7％，Rt 13.25分钟。根
23 1
据单晶X射线衍射分析，C-5的立体化学结构为(S)构型。[α]D -104°(c 1.0，MeOH)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.03-11.88(1H，bs)，8.68-8.62(1H，d，J 1.7)，8.34-8.25(1H，d，J 7.9)，7.91-7.83(1H，d，J 8.3)，7.14-7.05(2H，d，J 8.7)，6.86-6.77(2H，d，J 8.7)，
4.85-4.77(1H，dd，J 4.3，8.9)，4.38-4.28(2H，t，J 6.0)，3.42-3.36(2H，t，J 6.2)，
3.28-3.20(1H，dd，J 9.0，14.2)，3.06-2.96(1H，dd，J 9.0，14.2)，2.77-2.67(2H，q，J
7.7)，1.23-1.15(3H，t，J 7.7)。随后用MeOH-EtOAc或MeOH-Et2O重结晶，得到标题化合物，其e.e.＞97％。
LCMS(方法4)：Rt 5.94分钟，m/z 357[M-HCl]。e.e.(方法3)92.7％，Rt 13.25分钟。根
23 1
据单晶X射线衍射分析，C-5的立体化学结构为(S)构型。[α]D -104°(c 1.0，MeOH)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.03-11.88(1H，bs)，8.68-8.62(1H，d，J 1.7)，8.34-8.25(1H，d，J 7.9)，7.91-7.83(1H，d，J 8.3)，7.14-7.05(2H，d，J 8.7)，6.86-6.77(2H，d，J 8.7)，
4.85-4.77(1H，dd，J 4.3，8.9)，4.38-4.28(2H，t，J 6.0)，3.42-3.36(2H，t，J 6.2)，
3.28-3.20(1H，dd，J 9.0，14.2)，3.06-2.96(1H，dd，J 9.0，14.2)，2.77-2.67(2H，q，J
7.7)，1.23-1.15(3H，t，J 7.7)。随后用MeOH-EtOAc或MeOH-Et2O重结晶，得到标题化合物，其e.e.＞97％。
[0169] 实施例7
[0170] (5R)-5-(4-{2-[甲基(吡啶-2-基)氨基]乙氧基}苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮三氟乙酸盐
[0171]1
[0172] 标题 化合 物(149mg)采 用方 法5分离。Rt 7.14 分钟。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.04-11.86(1H，s)，7.99-7.94(1H，dd，J 1.1，6.2)，7.92-7.83(1H，t，J 6.6)，7.27-7.15(1H，d，J 8.7)，7.13-7.05(2H，d，J 8.6)，6.88-6.82(1H，t，J 6.6)，6.81-6.76(2H，d，J 8.7)，4.83-4.78(1H，dd，J 4.4，8.8)，4.18-4.12(2H，t，J 5.3)，
3.99-3.94(2H，t，J 5.3)，3.27-3.20(1H，dd，J 4.2，14.4)，3.18(3H，s)，3.05-2.97(1H，dd，J 8.9，14.6)。
3.99-3.94(2H，t，J 5.3)，3.27-3.20(1H，dd，J 4.2，14.4)，3.18(3H，s)，3.05-2.97(1H，dd，J 8.9，14.6)。
[0173] 实施例8
[0174] (5R)-5-(4-{2-[甲基(吡啶-2-基)氨基]乙氧基}苄基)-1，3-噻唑烷-2，4-二酮盐酸盐
[0175]
[0176] 采用实施例3和4所述方法的类似方法，自(5R)-5-{4-[2-甲基-2-吡啶基氨基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮三氟乙酸盐开始制备标题化合物(38mg，26 +
64％)。[α]D +100°(c 1.0，MeOH)。LCMS(方法4)：Rt 5.41分钟，m/z 358[M-HCl]。
1
e.e.(方法6)85.7％，Rt 8.03分钟。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.09-11.81(1H，s)，
7.98-7.94(1H，dd，J 1.1，6.3)，7.93-7.82(1H，m)，7.31-7.14(1H，bs)，7.13-7.05(2H，d，J 8.5)，6.90-6.82(1H，t，J 6.7)，6.80-6.76(2H，d，J 8.5)，4.84-4.78(1H，dd，J 4.4，
8.9)，4.19-4.12(2H，t，J 5.2)，4.02-3.94(2H，t，J 5.2)，3.27-3.21(1H，dd，J 4.4，10.1)，
3.20(3H，s)，3.05-2.97(1H，dd，J 9.0，14.2)。
64％)。[α]D +100°(c 1.0，MeOH)。LCMS(方法4)：Rt 5.41分钟，m/z 358[M-HCl]。
1
e.e.(方法6)85.7％，Rt 8.03分钟。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.09-11.81(1H，s)，
7.98-7.94(1H，dd，J 1.1，6.3)，7.93-7.82(1H，m)，7.31-7.14(1H，bs)，7.13-7.05(2H，d，J 8.5)，6.90-6.82(1H，t，J 6.7)，6.80-6.76(2H，d，J 8.5)，4.84-4.78(1H，dd，J 4.4，
8.9)，4.19-4.12(2H，t，J 5.2)，4.02-3.94(2H，t，J 5.2)，3.27-3.21(1H，dd，J 4.4，10.1)，
3.20(3H，s)，3.05-2.97(1H，dd，J 9.0，14.2)。
[0177] 具有大于90％e.e.的R-对映异构体可采用以下文献方法获得：J.Chem.Soc.Perkin Trans.1.1994，3319-3324。
[0178] 实施例9
[0179] (5S)-5-(4-{2-[甲基(吡啶-2-基)氨基]乙氧基}苄基)-1，3-噻唑烷-2，4-二酮盐酸盐一水合物
[0180]
[0181] 标 题 化 合 物 (123mg)采 用 以 下 文 献 方 法 获 得：J.Chem.Soc.Perkin23
Trans.1.1994，3319-3324。[α]D -100°(c 1.0，MeOH)。LCMS(方法4)：Rt 5.44分钟，m/+
z 358[M-HCl]。e.e.(方法6)92.7％，Rt 8.99分钟。根据单晶X射线衍射分析，C-5的立
1
体化学结构为(S)构型。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.01-11.88(1H，s)，7.98-7.94(1H，dd，J 1.4，6.1)，7.93-7.86(1H，t，J 7.7)，7.31-7.18(1H，m)，7.12-7.05(2H，d，J 8.7)，
6.90-6.83(1H，t，J 6.3)，6.81-6.75(2H，d，J 8.7)，4.83-4.78(1H，dd，J 4.5，8.8)，
4.19-4.13(2H，t，J 5.1)，4.02-3.96(2H，t，J 5.1)，3.26-3.22(1H，m)，3.21(3H，s)，
3.05-2.97(1H，dd，J 8.8，14.0)。
Trans.1.1994，3319-3324。[α]D -100°(c 1.0，MeOH)。LCMS(方法4)：Rt 5.44分钟，m/+
z 358[M-HCl]。e.e.(方法6)92.7％，Rt 8.99分钟。根据单晶X射线衍射分析，C-5的立
1
体化学结构为(S)构型。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.01-11.88(1H，s)，7.98-7.94(1H，dd，J 1.4，6.1)，7.93-7.86(1H，t，J 7.7)，7.31-7.18(1H，m)，7.12-7.05(2H，d，J 8.7)，
6.90-6.83(1H，t，J 6.3)，6.81-6.75(2H，d，J 8.7)，4.83-4.78(1H，dd，J 4.5，8.8)，
4.19-4.13(2H，t，J 5.1)，4.02-3.96(2H，t，J 5.1)，3.26-3.22(1H，m)，3.21(3H，s)，
3.05-2.97(1H，dd，J 8.8，14.0)。
[0182] 实施例10
[0183] (5R)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮(-)-O，O’-二苯甲酰基-L-酒石酸盐
[0184]
[0185] 10a.向(5R)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮盐酸盐(50mg)(实施例4)和(-)-二苯甲酰基-L-酒石酸(50mg)的混合物中加入MeOH(1.5mL)。在滴加H2O的同时快速搅拌澄清溶液直到保持浑浊。使反应物于环境温度静置48小时以上，经过滤收集固体，得到标题化合物(43mg)。(方法7)99.01％Rt 10.83分钟，0.98％Rt 15.83分钟；d.e.98.03％。
[0186] 10b.将(-)-二苯甲酰基-L-酒石酸(1.0g，2.79mmol)与H2O(20mL)的浆料于环境温度搅拌，在5分钟内加入5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮盐酸盐(1.01g，2.57mmol)的MeOH(20mL)溶液。加入完成时，加入实施例10a的产物(5mg)，搅拌反应物93小时。将反应物过滤，并将固体干燥，得到标题化合物(0.863g)。
(方法7)79.72％，Rt 10.82分钟；20.27％，Rt 15.14分钟；d.e.59.45％。
(方法7)79.72％，Rt 10.82分钟；20.27％，Rt 15.14分钟；d.e.59.45％。
[0187] 10c.将实施例10b的产物(0.863g)溶于含有1M HCl(1.21mL)的MeOH(8.5mL)中，滴加H2O(5mL)。加入实施例10a的产物(1mg)，接着滴加H2O(2.3mL)。将反应物搅拌22小时，过滤，固体用H2O-MeOH(2∶1，3mL)洗涤后，于40℃高真空干燥，得到标题化合物(0.582g)。(方法7)93.2％，Rt 10.82分钟；6.8％，Rt 15.14分钟；d.e.86.4％。
[0188] 10d.将实施例10c的产物(0.582g)溶于含有1M HCl(0.795mL)的MeOH(5.5mL)中，滴加H2O(2mL)。加入实施例10a的产物(1mg)，接着滴加H2O(3.5mL)。将反应物搅拌22小时，过滤，固体用H2O-MeOH(2∶1，3mL)洗涤，并于40℃高真空干燥，得到标题化合
1
物(0.453g)。(方法7)97.3％，Rt 10.65分钟；2.7％，Rt 14.83分钟；d.e.94.6％。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：14.25-13.60(bs，1H，D2O可交换)，12.05-12.00(bs，1H，D2O可交换)，8.37(d，J＝2.0Hz，1H)，8.02(d，J＝7.6Hz，4H)，7.73(t，J＝7.6Hz，2H)，7.60(t，J＝7.6Hz，5H)，7.29(d，J＝8.0Hz，1H)，7.13(d，J＝8.8Hz，2H)，6.86(d，J＝8.8Hz，2H)，
5.88(s，2H)，4.86(q，J＝4.4Hz，1H)，4.30(t，J＝6.8Hz，2H)，3.30(dd，J＝4.0 & 10.0Hz，
1H)，3.13(t，J＝6.8Hz，2H)，3.04(dd，J ＝5.2 & 9.2Hz，1H)，2.60(q，J＝ 7.6Hz，2H)，
1.17(t，J＝7.6Hz，3H)。
1
物(0.453g)。(方法7)97.3％，Rt 10.65分钟；2.7％，Rt 14.83分钟；d.e.94.6％。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：14.25-13.60(bs，1H，D2O可交换)，12.05-12.00(bs，1H，D2O可交换)，8.37(d，J＝2.0Hz，1H)，8.02(d，J＝7.6Hz，4H)，7.73(t，J＝7.6Hz，2H)，7.60(t，J＝7.6Hz，5H)，7.29(d，J＝8.0Hz，1H)，7.13(d，J＝8.8Hz，2H)，6.86(d，J＝8.8Hz，2H)，
5.88(s，2H)，4.86(q，J＝4.4Hz，1H)，4.30(t，J＝6.8Hz，2H)，3.30(dd，J＝4.0 & 10.0Hz，
1H)，3.13(t，J＝6.8Hz，2H)，3.04(dd，J ＝5.2 & 9.2Hz，1H)，2.60(q，J＝ 7.6Hz，2H)，
1.17(t，J＝7.6Hz，3H)。
[0189] 实施例11
[0190] (5R)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮盐酸盐
[0191]
[0192] 11a.将实施例10d的产物于35℃溶于含有37％HCl(0.134mL)的MeOH(2.25mL)中。将溶液过滤后，将EtOAc(9mL)倒入搅拌溶液中，将混合物搅拌20分钟。经过滤收集白色固体，用EtOAc洗涤后，于30℃高真空干燥，得到标题化合物(0.181g)。(方法7)98.3％，Rt10.65分钟；1.7％，Rt 14.83分钟，e.e.96.6％。LCMS(方法8)：Rt 2.90分钟99.39％，m/z + + 1
357[MH-HCl]。LCMS(方法11)Rt 2.91分钟，m/z 357[MH-HCl]。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：
δ12.0(1H，s)，8.70(1H，d，J 1.7Hz)，8.36(1H，bd，J 8.3Hz)，7.93(1H，d，J8.2Hz)，7.15，
6.87(4H，A2B2q，J 8.7Hz)，4.86(1H，dd，J 4.4，8.9Hz)，4.38(2H，t，J 6.3Hz)，3.44(2H，t，J
6.2Hz)，3.29(1H，dd，J 4.3，14.2Hz)，3.06(1H，dd，J 9.0，14.3Hz)，2.78(2H，q，J 7.6Hz)，
1.23(3H，t，J 7.6Hz)。
357[MH-HCl]。LCMS(方法11)Rt 2.91分钟，m/z 357[MH-HCl]。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：
δ12.0(1H，s)，8.70(1H，d，J 1.7Hz)，8.36(1H，bd，J 8.3Hz)，7.93(1H，d，J8.2Hz)，7.15，
6.87(4H，A2B2q，J 8.7Hz)，4.86(1H，dd，J 4.4，8.9Hz)，4.38(2H，t，J 6.3Hz)，3.44(2H，t，J
6.2Hz)，3.29(1H，dd，J 4.3，14.2Hz)，3.06(1H，dd，J 9.0，14.3Hz)，2.78(2H，q，J 7.6Hz)，
1.23(3H，t，J 7.6Hz)。
[0193] 11b.实施例10c的产物(1g)同样可按实施例11a所述方法进行反应，得到标题化合物(473mg)。(方法7)95.6％，Rt 10.65分钟；4.3％，Rt 14.83分钟，e.e.91.3％。所有其它的特征数据都与实施例11a的特征数据相同。
[0194] 实施例12
[0195] (5R)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮[0196]
[0197] 在手套箱中制备Rh(COD)2BF4(10.6mg，26.1μmol)与DCM(9.5mL)的贮备溶液。称取配体SL-W003-2(8.4mg，12.5μmol)装入小瓶中，加入500μL Rh(COD)2BF4贮备溶液。将5-[1-{4-[2-(5-乙基-吡啶-2-基)-乙氧基]-苯基}-甲-(E)-亚基]-噻唑烷-2，4-二酮(35mL MeOH中含有78.2mg的4.5mL贮备溶液)的溶液加入含有催化剂溶液的反应小瓶中。小瓶用N2(5x)和H2(5x)吹扫，最后充入25bar的H2。18小时后，释放H2，将反应小瓶用N2吹扫(3x)。取出反应小瓶的样品，用等体积的含有1％甲酸的EtOH稀释。e.e.(方法
9)75％，Rt 36.11分钟。
9)75％，Rt 36.11分钟。
[0198] 实施例13
[0199] (5R)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮盐酸盐
[0200]
[0201] 13a.甲磺酸2-(5-乙基-吡啶-2-基)-乙酯
[0202]
[0203] 在0℃、氮气氛下，向2-(5-乙基-吡啶-2-基)-乙醇(25.34g)和三乙胺(46.7mL)的DCM(130mL)溶液中加入甲烷磺酰氯(15.56mL)，然后将反应混合物加热至室温，搅拌过夜。再加入一份甲烷磺酰氯(3.88mL)，搅拌反应物30分钟。反应物用DCM稀释后，用H2O和盐水洗涤。有机层经干燥(MgSO4)后，将溶液浓缩，得到标题化合物(38.24g，为红色油1
状物)。H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.39(d，J＝2.2Hz，1H)，7.47(dd，J＝7.7，2.3Hz，1H)，
7.14(d，J ＝ 7.7Hz，1H)，4.64(t，J ＝ 6.5Hz，2H)，3.19(t，J ＝ 6.5Hz，2H)，2.90(s，3H)，
2.64(q，J＝7.6Hz，2H)，1.25(t，J＝7.6Hz，3H)。
状物)。H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.39(d，J＝2.2Hz，1H)，7.47(dd，J＝7.7，2.3Hz，1H)，
7.14(d，J ＝ 7.7Hz，1H)，4.64(t，J ＝ 6.5Hz，2H)，3.19(t，J ＝ 6.5Hz，2H)，2.90(s，3H)，
2.64(q，J＝7.6Hz，2H)，1.25(t，J＝7.6Hz，3H)。
[0204] 13b.3-{4-[2-(5-乙基-吡啶-2-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸甲酯
[0205]
[0206] 将实施例13a的产物(12.72g)的甲苯(50mL)溶液滴加入3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯(10g)和碳酸钾(23.01g)与甲苯(180mL)的搅拌混合物中。将反应物加热回流23小时，然后置于室温90小时。反应混合物用H2O处理，并用三份乙醚萃取。合并的萃取物用H2O洗涤两次，用盐水洗涤一次，干燥后蒸发。残余物用色谱法纯化(用20-40％EtOAc/石油1
醚(bp＝40-60℃)洗脱)，得到标题产物(10.73g，为黄色固体)。H NMR(400MHz，CDCl3)：
δ8.39(d，J＝2.1Hz，1H)，7.44(dd，J＝7.8，2.4Hz，1H)，7.18(d，J＝7.8Hz，1H)，7.08，
6.83(A2B2q，J＝8.6Hz，4H)，4.31(t，J＝6.7Hz，2H)，3.66(s，3H)，3.22(t，J＝6.7Hz，2H)，
2.87(t，J＝7.6Hz，2H)，2.66-2.55(m，4H)，1.24(t，J＝7.6Hz，3H)。
醚(bp＝40-60℃)洗脱)，得到标题产物(10.73g，为黄色固体)。H NMR(400MHz，CDCl3)：
δ8.39(d，J＝2.1Hz，1H)，7.44(dd，J＝7.8，2.4Hz，1H)，7.18(d，J＝7.8Hz，1H)，7.08，
6.83(A2B2q，J＝8.6Hz，4H)，4.31(t，J＝6.7Hz，2H)，3.66(s，3H)，3.22(t，J＝6.7Hz，2H)，
2.87(t，J＝7.6Hz，2H)，2.66-2.55(m，4H)，1.24(t，J＝7.6Hz，3H)。
[0207] 13c.3-{4-[2-(5-乙基-吡啶-2-基)-乙氧基]-苯基}-丙酸
[0208]
[0209] 将实施例13b的产物(10.73g)溶于1，4-二噁烷/水(350/100mL)中，加入氢氧化锂一水合物(4.3g)，搅拌反应物过夜。减压蒸发除去二噁烷，悬浮液用H2O稀释后，用2.0M1
HCl处理直到pH为6-7。将固体过滤后干燥，得到标题化合物(9.57g)。H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.41(d，J＝2.3Hz，1H)，7.52(dd，J＝7.9，2.3Hz，1H)，7.25(d，J＝7.9Hz，1H)，
7.11，6.81(A2B2q，J＝8.6Hz，4H)，4.27(t，J＝6.6Hz，2H)，4.0(bs，2H，COOH+水)3.24(t，J＝6.6Hz，2H)，2.90(t，J＝7.6Hz，2H)，2.68-2.59(m，4H)，1.24(t，J＝7.6Hz，3H)。
HCl处理直到pH为6-7。将固体过滤后干燥，得到标题化合物(9.57g)。H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.41(d，J＝2.3Hz，1H)，7.52(dd，J＝7.9，2.3Hz，1H)，7.25(d，J＝7.9Hz，1H)，
7.11，6.81(A2B2q，J＝8.6Hz，4H)，4.27(t，J＝6.6Hz，2H)，4.0(bs，2H，COOH+水)3.24(t，J＝6.6Hz，2H)，2.90(t，J＝7.6Hz，2H)，2.68-2.59(m，4H)，1.24(t，J＝7.6Hz，3H)。
[0210] 13d.(R)-4-苄基-3-(3-{4-[2-(5-乙基-吡啶-2-基)-乙氧基]-苯基}-丙酰基)-噁唑烷-2-酮
[0211]
[0212] 将实施例13c的产物(9.0g)和(R)-(+)-4-苄基噁唑烷酮(2.67g)与三乙胺(8.38mL)和甲苯(90mL)的悬浮液加热至80℃。滴加新戊酰氯(3.71mL)保持温度介于
80℃和85℃之间。然后将反应物加热至回流22.5小时。使反应物冷却至室温，使反应物在H2O-EtOAc之间进行分配，水层用EtOAc萃取两次，将合并的有机物干燥(MgSO4)并浓缩。
用硅胶色谱法纯化粗产物(用0-40％EtOAc-环己烷洗脱)，得到标题产物(2.06g，为白色固体)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.39(d，J＝2.2Hz，1H)，7.45(dd，J＝7.9，2.2Hz，1H)，
7.36-7.24(m，3H)，7.21-7.12(m，5H)，6.84(d，J ＝ 8.6Hz，2H)，4.65(m，1H)，4.32(t，J ＝
6.6Hz，2H)，4.16(m，2H)，3.33-3.12(m，5H)，3.04-2.87(m，2H)，2.74(dd，J ＝ 9.5，13.4Hz，
1H)，2.63(q，J＝7.6Hz，2H)，1.24(t，J＝7.6Hz，3H)。
80℃和85℃之间。然后将反应物加热至回流22.5小时。使反应物冷却至室温，使反应物在H2O-EtOAc之间进行分配，水层用EtOAc萃取两次，将合并的有机物干燥(MgSO4)并浓缩。
用硅胶色谱法纯化粗产物(用0-40％EtOAc-环己烷洗脱)，得到标题产物(2.06g，为白色固体)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.39(d，J＝2.2Hz，1H)，7.45(dd，J＝7.9，2.2Hz，1H)，
7.36-7.24(m，3H)，7.21-7.12(m，5H)，6.84(d，J ＝ 8.6Hz，2H)，4.65(m，1H)，4.32(t，J ＝
6.6Hz，2H)，4.16(m，2H)，3.33-3.12(m，5H)，3.04-2.87(m，2H)，2.74(dd，J ＝ 9.5，13.4Hz，
1H)，2.63(q，J＝7.6Hz，2H)，1.24(t，J＝7.6Hz，3H)。
[0213] 13e.(R)-4-苄基-3-((R)-3-{4-[2-(5-乙基-吡啶-2-基)-乙氧基]-苯基}-2-硫氰酸基-丙酰基)-噁唑烷-2-酮
[0214]
[0215] 于-78℃、氩气氛下，向LDA(0.528mmol)的THF/己烷(3/0.3mL)溶液中滴加实施例13d的产物(0.20g)的THF(4mL)溶液。30分钟后，滴加N-硫氰酸琥珀酰亚胺(JACS，2004，126，10216-7)(0.137g)的THF(2mL)溶液。再于-78℃ 110分钟后，用饱和NH4Cl水溶液(5mL)猝灭反应，加热至室温。用三份各15mL的EtOAc萃取混合物，合并的有机层经干燥(Na2SO4)后减压蒸发至少量体积。加入甲苯(20mL)后减压蒸发。将残余物溶于DCM(3mL)，于-20℃保存16小时。可溶性物质用硅胶色谱法纯化(用20-50％EtOAc/环己烷洗脱)，用相同方法再纯化含杂质流分，得到1∶2.4摩尔比率的标题产物和琥珀酰亚胺(0.121g，
1
无色半固体)。H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.60(bs，1H琥珀酰亚胺)8.40(d，J＝2.3Hz，
1H)，7.47(dd，J ＝ 7.8，2.3Hz，1H)，7.39-7.12(m，8H)，6.85(d，J ＝ 8.7Hz，2H)，5.07(dd，J ＝ 8.1，7.2Hz，1H)，4.63(m，1H)，4.32(t，J ＝ 6.7Hz，2H)，4.24-4.11(m，2H)，3.47(dd，J＝14.0，8.0Hz，1H)，3.33(dd，J＝13.4，3.2Hz，1H)，3.28-3.16(m，3H)，2.84(dd，J＝9.3，
13.4Hz，1H)，2.76(s，4H琥珀酰亚胺)2.63(q，J＝7.6Hz，2H)，1.24(t，J＝7.6Hz，3H)。
1
无色半固体)。H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.60(bs，1H琥珀酰亚胺)8.40(d，J＝2.3Hz，
1H)，7.47(dd，J ＝ 7.8，2.3Hz，1H)，7.39-7.12(m，8H)，6.85(d，J ＝ 8.7Hz，2H)，5.07(dd，J ＝ 8.1，7.2Hz，1H)，4.63(m，1H)，4.32(t，J ＝ 6.7Hz，2H)，4.24-4.11(m，2H)，3.47(dd，J＝14.0，8.0Hz，1H)，3.33(dd，J＝13.4，3.2Hz，1H)，3.28-3.16(m，3H)，2.84(dd，J＝9.3，
13.4Hz，1H)，2.76(s，4H琥珀酰亚胺)2.63(q，J＝7.6Hz，2H)，1.24(t，J＝7.6Hz，3H)。
[0216] 13f. 硫 代 氨 基 甲 酸 S-((R)-2-((R)-4- 苄 基 -2- 氧 代 - 噁 唑烷-3-基)-1-{4-[2-(5-乙基-吡啶-2-基)-乙氧基]-苄基}-2-氧代-乙基)酯
[0217]
[0218] 在氩气氛下，将实施例13e的产物(51mg)溶于THF/水(2/1ml)后，用三(二甲基膦氧化)铂(Tet.Lett.，2002，43，8121)(4mg)处理。将反应物加热至40℃持续2小时，然后冷却至室温。加入EtOAc(10mL)，有机相经干燥(Na2SO4)，浓缩，用硅胶(2g)色谱法纯化(用40-70％EtOAc/环己烷洗脱)，得到1∶3.3摩尔比率的标题产物和琥珀酰亚胺(0.029g，为
1
无色半固体)。H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.66(bs，1H琥珀酰亚胺)8.39(d，J＝2.0Hz，1H)，
7.47(dd，J＝7.9，2.2Hz，1H)，7.37-7.17(m，6H)，7.17，6.81(A2B2q J＝8.5Hz，4H)，5.74(t，J ＝ 7.9Hz，1H)，5.63(bs，2H)，4.53(m，1H)，4.30(t，J ＝ 6.7Hz，2H)，4.08(dd，J ＝ 8.9，
2.5Hz，1H)，3.95(dd，J ＝ 8.9，7.8Hz，1H)，3.31(dd，J ＝ 13.5，3.1Hz，1H)，3.26-3.18(m，
3H)，2.96(dd，J＝13.5，8.1Hz，1H)，2.74(s，4H琥珀酰亚胺)，2.72(dd，J＝13.5，9.8Hz，
1H)，2.63(q，J＝7.6Hz，2H)，1.24(t，J＝7.6Hz，3H)。
1
无色半固体)。H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.66(bs，1H琥珀酰亚胺)8.39(d，J＝2.0Hz，1H)，
7.47(dd，J＝7.9，2.2Hz，1H)，7.37-7.17(m，6H)，7.17，6.81(A2B2q J＝8.5Hz，4H)，5.74(t，J ＝ 7.9Hz，1H)，5.63(bs，2H)，4.53(m，1H)，4.30(t，J ＝ 6.7Hz，2H)，4.08(dd，J ＝ 8.9，
2.5Hz，1H)，3.95(dd，J ＝ 8.9，7.8Hz，1H)，3.31(dd，J ＝ 13.5，3.1Hz，1H)，3.26-3.18(m，
3H)，2.96(dd，J＝13.5，8.1Hz，1H)，2.74(s，4H琥珀酰亚胺)，2.72(dd，J＝13.5，9.8Hz，
1H)，2.63(q，J＝7.6Hz，2H)，1.24(t，J＝7.6Hz，3H)。
[0219] 13g.(5R)-5-{4-[2-(5-乙基吡啶-2-基)乙氧基]苄基}-1，3-噻唑烷-2，4-二酮盐酸盐
[0220]
[0221] 将实施例13f的产物溶于MeOH(10mL)，加入H2O(10ml)，得到浑浊溶液。将其置于室温2.5小时，然后加入1M HCl(0.15mL)。使溶液蒸发至干后，将残余物溶于含有浓HCl(0.0015mL)的MeOH(0.1mL)中。加入EtOAc(5mL)，减压稍微浓缩溶液，使白色固体沉淀。除去溶液，固体(7mg)用EtOAc洗涤。该产物用制备型HPLC纯化(方法10)，合并含有第一洗脱成分的流分后，用1M HCl(1mL)处理并蒸发至干，得到1∶0∶0.19摩尔比率的标题产物和琥珀酰亚胺(0.002g，无色胶状物)。(方法7)99.175％，Rt 10.65分钟；0.825％，Rt 14.83分钟；e.e.98.35％。LCMS(方法11)Rt 2.9分钟，m/z 357[MH+]。1H NMR(300MHz，d4-MeOH)：8.62(bd，1H)，8.42(dd，J ＝ 8.2，2.0Hz，1H)，7.98(d，J ＝ 8.2Hz，1H)，7.16，
6.85(A2B2q，J＝8.7Hz，4H)，4.68dd，J＝8.7，4.2Hz，1H)，4.38(t，J＝5.8Hz，2H)，3.34(m被掩蔽，1H)，3.11(dd，J＝14.3，8.8Hz，1H)，2.87(q，J＝7.6Hz，2H)，2.68(s，4H琥珀酰亚胺)，1.33(t，J＝7.6Hz，3H)。
6.85(A2B2q，J＝8.7Hz，4H)，4.68dd，J＝8.7，4.2Hz，1H)，4.38(t，J＝5.8Hz，2H)，3.34(m被掩蔽，1H)，3.11(dd，J＝14.3，8.8Hz，1H)，2.87(q，J＝7.6Hz，2H)，2.68(s，4H琥珀酰亚胺)，1.33(t，J＝7.6Hz，3H)。
[0222] 生物学结果：
[0223] 实施例14
[0224] COPD炎症临床前小鼠模型-烟草烟雾诱发的肺炎。
[0225] 之前的研究已经证实，在每日烟草烟雾(TS)暴露连续4天或11天的最终烟草烟雾(TS)暴露后24小时，在支气管肺泡灌洗液(BAL)中回收的炎性细胞数目显著升高，所述暴露后24小时的时间点用于本文报告的研究中。
[0226] 小鼠的TS暴露方案、得到支气管肺泡灌洗液(BAL)、用于细胞分类计数的细胞离心涂片(cytospin slide)的制备概述如下。
[0227] 将小鼠连续4天或11天每日暴露于TS
[0228] 在该暴露方案中，将小鼠每组5只暴露于单独的透明聚碳酸酯室(27cmx16cmx12cm)内。使香烟的TS以100ml/分钟的流速进入暴露室。为了把由反复暴露于高水平TS(6支香烟)引起的任何潜在问题降至最低，在暴露期内，逐步增加小鼠暴露于TS的香烟量直至最大6支香烟。4天使用的暴露方案如下：
[0229] 第1天：4支香烟(暴露约32分钟)
[0230] 第2天：4支香烟(暴露约32分钟)
[0231] 第3天：6支香烟(暴露约48分钟)
[0232] 第4天：6支香烟(暴露约48分钟)
[0233] 11天暴露使用的暴露方案如下：
[0234] 第1天：2支香烟(暴露约16分钟)
[0235] 第2天：3支香烟(暴露约24分钟)
[0236] 第3天：4支香烟(暴露约32分钟)
[0237] 第4天：5支香烟(暴露约40分钟)
[0238] 第5-11天：6支香烟(暴露约48分钟)
[0239] 以相同的持续时间将另一组小鼠每天暴露于空气中作为对照(无TS暴露)。
[0240] 支气管肺泡灌洗液(BAL)分析
[0241] 如下进行支气管肺泡灌洗：将裁短至约8mm的Portex尼龙静脉插管(pink luer fitting)插入气管。磷酸缓冲盐水(PBS)用作灌洗液。轻轻灌输0.4ml的体积，使用1ml注射器抽取3次，然后加到微量离心管中，在后续测定前保持在冰浴上。
[0242] 细胞计数：
[0244] 如下进行细胞分类计数：
[0245] 将剩余的细胞沉淀稀释成约105个细胞/ml。将500μl的体积加入细胞离心涂片机漏斗中，以800rpm离心8分钟。使载玻片风干，按照专利品说明书，使用‘Kwik-Diff’溶液(Shandon)染色。风干时，盖上盖片，使用光学显微镜进行分类细胞计数。公正的操作人员使用光学显微镜计数多达400个细胞。采用标准形态测量技术分辨细胞。
[0246] 药物治疗
[0247] 啮齿动物(例如小鼠和大鼠)是专性鼻腔呼吸者(obligate nasal breather)，因此口服递送吸入试验材料(例如治疗药)不会产生良好的肺暴露。因此，在啮齿动物中，将治疗药递送至肺一般通过鼻内、气管内或者通过在暴露室中的全身气雾剂暴露吸入来实现。
[0248] 暴露室方法利用大量试验材料，一般保留用于吸入毒理学研究而不是药理学功效研究。气管内给药是非常有效的递送方法，因为几乎所有试验材料都被递送至肺部，但这完全是侵入性技术。尤其对于小鼠的研究，在技术上也相当费力，因为气管直径相当小。鼻内途径比气管内途径较少侵入性，因此特别适于重复给药研究，例如下述4-11天小鼠模型。鼻内给药后，约50％给予的剂量会递送至肺部(Eyles JE，Williamson ED和Alpar HO.1999，Int J Pharm，189(1)：75-9)。
[0249] 作为口腔吸入的替代途径，鼻内给予小鼠溶媒(0.2％吐温80的盐溶液)、5S-吡格列酮(按实施例6制备)(3μg/kg)、5S-吡格列酮(按实施例6制备)(1μg/kg)、5R-吡格列酮(按实施例4制备)(3μg/kg)、5R-吡格列酮(按实施例4制备)(1μg/kg)或外消旋吡格列酮(3μg/kg)。小鼠对照组每天暴露于空气(最多50分钟/天)前1小时接受溶媒。最终TS暴露后24小时进行BAL。所有化合物作为HCl盐以折算成碱的剂量给予。
[0250] 在第二个实验中，鼻内给予小鼠溶媒(0.2％吐温80的盐溶液)、5S-罗格列酮(按实施例9制备)(3μg/kg)、5S-罗格列酮(按实施例9制备)(10μg/kg)、5R-罗格列酮(按实施例8制备)(3μg/kg)、5R-罗格列酮(按实施例8制备)(10μg/kg)或外消旋罗格列酮(10μg/kg)。小鼠对照组每天暴露于空气(最多50分钟/天)前1小时接受溶媒。在最终TS暴露后24小时进行了BAL。所有化合物作为HCl盐以折算成游离碱的剂量给予。
[0251] 数据管理和统计分析
[0252] 所有结果以每只动物的各数据点提供，并计算出各组的平均值。由于正常状态的检验为正数，因此对数据进行单因素方差检验分析(ANOVA)，接着进行多重比较的Bonferroni校正从而检验治疗组间的显著性。“p”值＜0.05视为有统计显著性。应用以下公式，用Excel电子数据表自动计算细胞数据的抑制百分比：
[0253]
[0254] 运用上述公式手工计算其它参数的抑制数据。
[0255] 如图1所示，在暴露于TS后，吡格列酮的两种对映异构体对BAL细胞总数的活性之间有明显的差异。通过鼻内途径给予1μg/kg和3μg/kg时，吡格列酮5R-对映异构体(e.e.97.8％)显著抑制由TS诱导的BAL细胞流入。相比之下，5S-对映异构体(e.e.97.5％)在所测定的任一剂量下都不能抑制BAL细胞炎症。
[0256] 在观察BAL细胞离心涂片后，测定了BAL嗜中性粒细胞数。与对BAL总细胞的活性一致，两种剂量的吡格列酮5R-对映异构体均显著抑制由TS暴露诱导的BAL嗜中性粒细胞数，而吡格列酮5S-对映异构体不起作用(图2)。
[0257] 3μg/kg剂量的外消旋吡格列酮(其含有50％吡格列酮5R-对映异构体)同样显著抑制由TS诱导的BAL细胞总数和BAL嗜中性粒细胞。
[0258] 如图3所示，在暴露于TS后，罗格列酮的两种对映异构体对BAL细胞总数的活性有明显差异。通过鼻内途径给予3μg/kg和10μg/kg时，罗格列酮5R-对映异构体(e.e.85.7％)显著抑制由TS诱导的BAL细胞流入。相比之下，5S-对映异构体
(e.e.92.7％)在所测定的任一剂量下都不能抑制BAL细胞炎症。
(e.e.92.7％)在所测定的任一剂量下都不能抑制BAL细胞炎症。
[0259] 在观察BAL细胞离心涂片后，测定了BAL嗜中性粒细胞数。与对BAL总细胞的活性一致，两种剂量的罗格列酮5R-对映异构体均显著抑制由TS暴露诱导的BAL嗜中性粒细胞数，而罗格列酮5S-对映异构体不起作用(图2)。
[0260] 10μg/kg剂量的外消旋罗格列酮(其含有50％罗格列酮的5R-对映异构体)同样显著抑制由TS诱导的BAL细胞总数和BAL嗜中性粒细胞。
[0261] 总之，两项研究的结果将吡格列酮和罗格列酮两者的5R-对映异构体鉴定为具有抑制BAL细胞流入所需要的抗炎活性，而5S-对映异构体则不具有所述抗炎活性。
[0262] 虽然罗格列酮5R-对映异构体制备物的对映异构体过量小于最佳值(即85.7％而不是＞90％)，但仍观察到两种对映异构体的活性差异性。这就表明，与本文提供的数据相比，罗格列酮5R-对映异构体的最佳制备物可能具有相似的活性甚至更高的活性。因此，本文提供的数据表示含有至少95％重量的罗格列酮5R-对映异构体的制备物可获得的有效效果。
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