一种支持产物高表达的CHO细胞无血清培养基
专利汇可以提供一种支持产物高表达的CHO细胞无血清培养基专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种CHO细胞无血清培养基，主要成分包括 氨 基酸，无机盐成分，维生素、微量元素、 酵母 水 解 物及 白蛋白 等成分。本发明的CHO细胞无血清培养基，不含任何血清组分，无动物源成分，相比其他无血清培养基，增加了其 亲和性 。细胞从血清培养基或者其他无血清培养基可直接接种到此无血清培养基中，正常生长，免除了繁琐的驯化过程。本发明提高了CHO细胞的生长 密度 及其活率，增加了细胞在其中的耐受性能，延长生长平台维持时间,最重要的是提高了CHO工程细胞在其中表达外源蛋白的能 力 ，大大提升产物的产量。，下面是一种支持产物高表达的CHO细胞无血清培养基专利的具体信息内容。
1.一种CHO细胞无血清培养基，其特征在于，由以下浓度的组分组成的：
物质名称 添加浓度（mg/L）
氨基酸
甘氨酸 150-750
L-丙氨酸 5-50
L-精氨酸盐酸盐 200-630
L-天冬酰胺 300-1500
L-天冬氨酸 110-320
L-半胱氨酸盐酸盐 50-200
L-谷氨酸 135-250
L-组氨酸盐酸盐 160-500
L-异亮氨酸 125-525
L-亮氨酸 50-450
L-赖氨酸盐酸盐 55-280
L-蛋氨酸 45-375
L-苯丙氨酸 30-160
L-脯氨酸 56-90
L-丝氨酸 220-355
L-苏氨酸 120-350
L-色氨酸 110-230
L-酪氨酸二钠 250-450
L-缬氨酸 250-460
L-胱氨酸 100-300
羟脯氨酸 2.4-3.5
维生素
氯化胆碱 130-250
D-泛酸钙 5-8
叶酸 1.7-3.5
烟酰胺 3.7-6.6
盐酸吡哆醇 6.5-9.5
核黄素 0.5-2.3
硫胺素盐酸盐 3.8-5.6
维生素B12 1-10
肌醇 10-100
硫辛酸 5-10
生物素 0.003-0.03
视黄醇 0.005-0.5
对氨基苯甲酸 0.008-0.015
无机盐
二水氯化钙 100-200
碳酸氢钠 1000-4000
七水硫酸镁 50-150
氯化钾 500-950
氯化钠 2500-5000
七水合磷酸氢二钠 100-300
微量元素
偏矾酸铵 0.00015-0.00036
偏硅酸钠 0.002-0.05
四水氯化锰 0.00002-0.0001
六水氯化钴 0.001-0.002
六水氯化铝 0.0001-0.0005
六水氯化铬 0.00001-0.0001
六水氯化镍 0.00001-0.0001
八水氧氯化锆 0.00001-0.0001
二氧化锗 0.00003-0.0003
七水硫酸锌 0.1-1
七水硫酸亚铁 0.25-1
五水硫酸铜 0.002-0.02
亚硒酸钠 0.0005-0.005
碳水化合物及其他成分
亚油酸 0.02-0.2
亚麻酸 0.005-0.05
卵磷脂 0.5-5
硬脂酸 0.01-0.025
棕榈油酸 0.003-0.009
葡萄糖 3000-6000
丙酮酸钠 50-200
酵母水解物 200-1000
腐胺盐酸盐 0.2-2
重组人胰岛素 1-10
普朗尼克68 500-2000
牛磺酸 100-250
抗坏血酸 50-200
硫酸葡聚糖 10-50
氢化可的松 0.1-0.5
乙醇胺 0.25-0.75
胸腺嘧啶 0.08-0.8
柠檬酸铁 2000-10000
重组人血清白蛋白 0.2-0.5
吐温-80 1-5
余量为水。
2.根据权利要求1所述的CHO细胞无血清培养基，其特征在于，由以下浓度的组分组成：
物质名称 添加浓度（mg/L）
氨基酸
甘氨酸 650
L-丙氨酸 46
L-精氨酸盐酸盐 324
L-天冬酰胺 850
L-天冬氨酸 240
L-半胱氨酸盐酸盐 118
L-谷氨酸 187
L-组氨酸盐酸盐 235
L-异亮氨酸 220
L-亮氨酸 430
L-赖氨酸盐酸盐 166
L-蛋氨酸 207
L-苯丙氨酸 122
L-脯氨酸 74.5
L-丝氨酸 256
L-苏氨酸 156
L-色氨酸 153.3
L-酪氨酸二钠 306.8
L-缬氨酸 323
L-胱氨酸 185
羟脯氨酸 2.79
维生素
氯化胆碱 155.5
D-泛酸钙 6.21
叶酸 1.97
烟酰胺 4.57
盐酸吡哆醇 9.12
核黄素 1.07
硫胺素盐酸盐 4.22
维生素B12 3.6
肌醇 79
硫辛酸 8.83
生物素 0.011
视黄醇 0.026
对氨基苯甲酸 0.01
无机盐
二水氯化钙 150
碳酸氢钠 3700
七水硫酸镁 77
氯化钾 500
氯化钠 4500
七水合磷酸氢二钠 250
微量元素
偏矾酸铵 0.00022
偏硅酸钠 0.0025
四水氯化锰 0.00008
六水氯化钴 0.0011
六水氯化铝 0.0003
六水氯化铬 0.00005
六水氯化镍 0.00005
八水氧氯化锆 0.00005
二氧化锗 0.00005
七水硫酸锌 0.9
七水硫酸亚铁 0.95
五水硫酸铜 0.0135
亚硒酸钠 0.00179
碳水化合物及其他成分
亚油酸 0.098
亚麻酸 0.015
卵磷脂 3.4
硬脂酸 0.0183
棕榈油酸 0.007
葡萄糖 5000
丙酮酸钠 170
酵母水解物 550
腐胺盐酸盐 0.49
重组人胰岛素 5
普朗尼克68 1000
牛磺酸 200
抗坏血酸 110
硫酸葡聚糖 25
氢化可的松 0.4
乙醇胺 0.5
胸腺嘧啶 0.54
柠檬酸铁 8000
重组人血清白蛋白 0.3
吐温-80 1.5
余量为水。
3.根据权利要求1所述的CHO细胞无血清培养基，其特征在于，由以下浓度的组分组成：
物质名称 添加浓度（mg/L）
氨基酸
甘氨酸 650
L-丙氨酸 30
L-精氨酸盐酸盐 300
L-天冬酰胺 1000
L-天冬氨酸 150
L-半胱氨酸盐酸盐 150
L-谷氨酸 200
L-组氨酸盐酸盐 200
L-异亮氨酸 320
L-亮氨酸 430
L-赖氨酸盐酸盐 185
L-蛋氨酸 200
L-苯丙氨酸 150
L-脯氨酸 60
L-丝氨酸 285
L-苏氨酸 250
L-色氨酸 200
L-酪氨酸二钠 423
L-缬氨酸 405
L-胱氨酸 155
羟脯氨酸 3.0
维生素
氯化胆碱 150
D-泛酸钙 5.8
叶酸 3.3
烟酰胺 4.2
盐酸吡哆醇 8.5
核黄素 1.8
硫胺素盐酸盐 4.5
维生素B12 5.0
肌醇 25
硫辛酸 8.5
生物素 0.025
视黄醇 0.3
对氨基苯甲酸 0.01
无机盐
二水氯化钙 150
碳酸氢钠 3700
七水硫酸镁 77
氯化钾 900
氯化钠 4500
七水合磷酸氢二钠 250
微量元素
偏矾酸铵 0.00031
偏硅酸钠 0.045
四水氯化锰 0.00008
六水氯化钴 0.0015
六水氯化铝 0.0004
六水氯化铬 0.00003
六水氯化镍 0.00003
八水氧氯化锆 0.00003
二氧化锗 0.00003
七水硫酸锌 0.5
七水硫酸亚铁 0.8
五水硫酸铜 0.015
亚硒酸钠 0.004
碳水化合物及其他成分
亚油酸 0.15
亚麻酸 0.035
卵磷脂 1.5
硬脂酸 0.021
棕榈油酸 0.005
葡萄糖 5000
丙酮酸钠 100
酵母水解物 800
腐胺盐酸盐 1.5
重组人胰岛素 8
普朗尼克68 1500
牛磺酸 180
抗坏血酸 150
硫酸葡聚糖 30
氢化可的松 0.3
乙醇胺 0.55
胸腺嘧啶 0.3
柠檬酸铁 3000
重组人血清白蛋白 0.4
吐温-80 3.5
余量为水。
4.权利要求1～3中任一项所述的CHO细胞无血清培养基的制备方法，其特征在于：取上述组分，根据其各自溶解特性分类溶解，然后混合，溶解于去离子水中，调节溶液pH值在
7.0-7.4之间，渗透压在300～350 mOsm/kg之间，过滤除菌后即得成品培养基。
5.权利要求1～3中任一项所述的CHO细胞无血清培养基在培养悬浮CHO细胞中的应用。
一种支持产物高表达的CHO细胞无血清培养基
技术领域
背景技术
发明内容
物质名称 添加浓度（mg/L）
氨基酸
甘氨酸 150-750
L-丙氨酸 5-50
L-精氨酸盐酸盐 200-630
L-天冬酰胺 300-1500
L-天冬氨酸 110-320
L-半胱氨酸盐酸盐 50-200
L-谷氨酸 135-250
L-组氨酸盐酸盐 160-500
L-异亮氨酸 125-525
L-亮氨酸 50-450
L-赖氨酸盐酸盐 55-280
L-蛋氨酸 45-375
L-苯丙氨酸 30-160
L-脯氨酸 56-90
L-丝氨酸 220-355
L-苏氨酸 120-350
L-色氨酸 110-230
L-酪氨酸二钠 250-450
L-缬氨酸 250-460
L-胱氨酸 100-300
羟脯氨酸 2.4-3.5
维生素
氯化胆碱 130-250
D-泛酸钙 5-8
叶酸 1.7-3.5
烟酰胺 3.7-6.6
盐酸吡哆醇 6.5-9.5
核黄素 0.5-2.3
硫胺素盐酸盐 3.8-5.6
维生素B12 1-10
肌醇 10-100
硫辛酸 5-10
生物素 0.003-0.03
视黄醇 0.005-0.5
对氨基苯甲酸 0.008-0.015
无机盐
二水氯化钙 100-200
碳酸氢钠 1000-4000
七水硫酸镁 50-150
氯化钾 500-950
氯化钠 2500-5000
七水合磷酸氢二钠 100-300
微量元素
偏矾酸铵 0.00015-0.00036
偏硅酸钠 0.002-0.05
四水氯化锰 0.00002-0.0001
六水氯化钴 0.001-0.002
六水氯化铝 0.0001-0.0005
六水氯化铬 0.00001-0.0001
六水氯化镍 0.00001-0.0001
八水氧氯化锆 0.00001-0.0001
二氧化锗 0.00003-0.0003
七水硫酸锌 0.1-1
七水硫酸亚铁 0.25-1
五水硫酸铜 0.002-0.02
亚硒酸钠 0.0005-0.005
碳水化合物及其他成分
亚油酸 0.02-0.2
亚麻酸 0.005-0.05
卵磷脂 0.5-5
硬脂酸 0.01-0.025
棕榈油酸 0.003-0.009
葡萄糖 3000-6000
丙酮酸钠 50-200
酵母水解物 200-1000
腐胺盐酸盐 0.2-2
重组人胰岛素 1-10
普朗尼克68 500-2000
牛磺酸 100-250
抗坏血酸 50-200
硫酸葡聚糖 10-50
氢化可的松 0.1-0.5
乙醇胺 0.25-0.75
胸腺嘧啶 0.08-0.8
柠檬酸铁 2000-10000
重组人血清白蛋白 0.2-0.5
吐温-80 1-5
余量为水。
具体实施方式
物质名称 添加浓度（mg/L）
氨基酸
甘氨酸 650
L-丙氨酸 46
L-精氨酸盐酸盐 324
L-天冬酰胺 850
L-天冬氨酸 240
L-半胱氨酸盐酸盐 118
L-谷氨酸 187
L-组氨酸盐酸盐 235
L-异亮氨酸 220
L-亮氨酸 430
L-赖氨酸盐酸盐 166
L-蛋氨酸 207
L-苯丙氨酸 122
L-脯氨酸 74.5
L-丝氨酸 256
L-苏氨酸 156
L-色氨酸 153.3
L-酪氨酸二钠 306.8
L-缬氨酸 323
L-胱氨酸 185
羟脯氨酸 2.79
维生素
氯化胆碱 155.5
D-泛酸钙 6.21
叶酸 1.97
烟酰胺 4.57
盐酸吡哆醇 9.12
核黄素 1.07
硫胺素盐酸盐 4.22
维生素B12 3.6
肌醇 79
硫辛酸 8.83
生物素 0.011
视黄醇 0.026
对氨基苯甲酸 0.01
无机盐
二水氯化钙 150
碳酸氢钠 3700
七水硫酸镁 77
氯化钾 500
氯化钠 4500
七水合磷酸氢二钠 250
微量元素
偏矾酸铵 0.00022
偏硅酸钠 0.0025
四水氯化锰 0.00008
六水氯化钴 0.0011
六水氯化铝 0.0003
六水氯化铬 0.00005
六水氯化镍 0.00005
八水氧氯化锆 0.00005
二氧化锗 0.00005
七水硫酸锌 0.9
七水硫酸亚铁 0.95
五水硫酸铜 0.0135
亚硒酸钠 0.00179
碳水化合物及其他成分
亚油酸 0.098
亚麻酸 0.015
卵磷脂 3.4
硬脂酸 0.0183
棕榈油酸 0.007
葡萄糖 5000
丙酮酸钠 170
酵母水解物 550
腐胺盐酸盐 0.49
重组人胰岛素 5
普朗尼克68 1000
牛磺酸 200
抗坏血酸 110
硫酸葡聚糖 25
氢化可的松 0.4
乙醇胺 0.5
胸腺嘧啶 0.54
柠檬酸铁 8000
重组人血清白蛋白 0.3
吐温-80 1.5
余量为水。
物质名称 添加浓度（mg/L）
氨基酸
甘氨酸 500
L-丙氨酸 30
L-精氨酸盐酸盐 500
L-天冬酰胺 505
L-天冬氨酸 240
L-半胱氨酸盐酸盐 130
L-谷氨酸 155
L-组氨酸盐酸盐 290
L-异亮氨酸 450
L-亮氨酸 125
L-赖氨酸盐酸盐 250
L-蛋氨酸 125
L-苯丙氨酸 60
L-脯氨酸 60
L-丝氨酸 350
L-苏氨酸 300
L-色氨酸 215
L-酪氨酸二钠 400
L-缬氨酸 400
L-胱氨酸 252
羟脯氨酸 3.3
维生素
氯化胆碱 215
D-泛酸钙 7.5
叶酸 3.2
烟酰胺 5.8
盐酸吡哆醇 7.5
核黄素 2.1
硫胺素盐酸盐 5.0
维生素B12 8.2
肌醇 50
硫辛酸 6.2
生物素 0.02
视黄醇 0.3
对氨基苯甲酸 0.013
无机盐
二水氯化钙 180
碳酸氢钠 3700
七水硫酸镁 120
氯化钾 500
氯化钠 4500
七水合磷酸氢二钠 250
微量元素
偏矾酸铵 0.0003
偏硅酸钠 0.03
四水氯化锰 0.00005
六水氯化钴 0.0015
六水氯化铝 0.0003
六水氯化铬 0.00005
六水氯化镍 0.00005
八水氧氯化锆 0.00005
二氧化锗 0.00005
七水硫酸锌 0.2
七水硫酸亚铁 0.5
五水硫酸铜 0.01
亚硒酸钠 0.003
碳水化合物及其他成分
亚油酸 0.15
亚麻酸 0.03
卵磷脂 1.5
硬脂酸 0.012
棕榈油酸 0.004
葡萄糖 4500
丙酮酸钠 100
酵母水解物 850
腐胺盐酸盐 1.5
重组人胰岛素 8
普朗尼克68 1500
牛磺酸 150
抗坏血酸 150
硫酸葡聚糖 50
氢化可的松 0.2
乙醇胺 0.6
胸腺嘧啶 0.2
柠檬酸铁 5000
重组人血清白蛋白 0.4
吐温-80 1.5
余量为水。
物质名称 添加浓度（mg/L）
氨基酸
甘氨酸 650
L-丙氨酸 30
L-精氨酸盐酸盐 300
L-天冬酰胺 1000
L-天冬氨酸 150
L-半胱氨酸盐酸盐 150
L-谷氨酸 200
L-组氨酸盐酸盐 200
L-异亮氨酸 320
L-亮氨酸 430
L-赖氨酸盐酸盐 185
L-蛋氨酸 200
L-苯丙氨酸 150
L-脯氨酸 60
L-丝氨酸 285
L-苏氨酸 250
L-色氨酸 200
L-酪氨酸二钠 423
L-缬氨酸 405
L-胱氨酸 155
羟脯氨酸 3.0
维生素
氯化胆碱 150
D-泛酸钙 5.8
叶酸 3.3
烟酰胺 4.2
盐酸吡哆醇 8.5
核黄素 1.8
硫胺素盐酸盐 4.5
维生素B12 5.0
肌醇 25
硫辛酸 8.5
生物素 0.025
视黄醇 0.3
对氨基苯甲酸 0.01
无机盐
二水氯化钙 150
碳酸氢钠 3700
七水硫酸镁 77
氯化钾 900
氯化钠 4500
七水合磷酸氢二钠 250
微量元素
偏矾酸铵 0.00031
偏硅酸钠 0.045
四水氯化锰 0.00008
六水氯化钴 0.0015
六水氯化铝 0.0004
六水氯化铬 0.00003
六水氯化镍 0.00003
八水氧氯化锆 0.00003
二氧化锗 0.00003
七水硫酸锌 0.5
七水硫酸亚铁 0.8
五水硫酸铜 0.015
亚硒酸钠 0.004
碳水化合物及其他成分
亚油酸 0.15
亚麻酸 0.035
卵磷脂 1.5
硬脂酸 0.021
棕榈油酸 0.005
葡萄糖 5000
丙酮酸钠 100
酵母水解物 800
腐胺盐酸盐 1.5
重组人胰岛素 8
普朗尼克68 1500
牛磺酸 180
抗坏血酸 150
硫酸葡聚糖 30
氢化可的松 0.3
乙醇胺 0.55
胸腺嘧啶 0.3
柠檬酸铁 3000
重组人血清白蛋白 0.4
吐温-80 3.5
余量为水。
接种后每天连续取样进行细胞计数，同时采取台盼蓝染色法计算细胞的活率。
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