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一种检测盐酸伐地那非原料药中有机 溶剂残留量的方法

阅读：521发布：2024-02-25

专利汇可以提供一种检测盐酸伐地那非原料药中有机溶剂残留量的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明属于医药技术领域，具体涉及一种检测盐酸伐地那非原料药中有机溶剂残留的方法，尤其是用顶空毛细管气相色谱同时检测盐酸伐地那非中丙酮、四氢呋喃和二氯甲烷3种有机溶剂残留含量的方法。本发明提供的方法具有操作简便，灵敏度高，专属性强，重复性好，准确度高等特点，可用于盐酸伐地那非原料药的质量控制。，下面是一种检测盐酸伐地那非原料药中有机溶剂残留量的方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种测定盐酸伐地那非原料药中有机溶剂残留含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：通过毛细管气相色谱法对所述盐酸伐地那非原料药进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述盐酸伐地那非中有机溶剂残留含量；
其中，所述盐酸伐地那非原料药是以供试品溶液的形式提供的，所述供试品溶液为盐酸伐地那非的5％磷酸溶液；
所述有机溶剂包括丙酮、四氢呋喃和二氯甲烷；
所述毛细管气相色谱法采用下列条件：
检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为200-300℃，进样口温度为150-250℃，色谱柱为聚乙二醇极性相近的毛细管色谱柱，柱温为30-50℃，维持5-20min，载气是氮气、氦气或氩气，载气流速为1-10ml/min，平衡温度为60-140℃，平衡时间为20-60min。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述毛细管气相色谱法采用下列条件：
检测器温度为250℃，进样口温度为210℃，色谱柱为聚乙二醇毛细管色谱柱，柱温为40℃，维持10min，载气为氮气，载气流速为3.5ml/min，平衡温度为80℃，平衡时间为35min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述毛细管气相色谱法采用标准对照溶液，所述标准对照溶液是丙酮、四氢呋喃和二氯甲烷的混合溶液，并且基于每毫升所述混合溶液，分别含丙酮0.25毫克、四氢呋喃36微克与二氯甲烷3微克。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述毛细管气相色谱法中，基于每毫升所述供试品溶液，盐酸伐地那非的含量为0.05克。
5.一种测定盐酸伐地那非原料药中有机溶剂残留含量的方法，其特征在于，该方法包括：
以聚乙二醇(或极性相近)为固定液的毛细管色谱柱；柱温为40℃，维持10min，进样口温度为210℃，采用氢火焰离子化检测器，检测器温度为250℃；载气为氮气，流速为3.5ml/min；顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为35min，分流比20:1；
配制空白对照溶液：
量取2ml 5％磷酸溶液置所述色谱仪的顶空瓶中，作为所述空白对照溶液；
配制标准对照溶液：
精密量取丙酮、四氢呋喃与二氯甲烷各适量，用5％磷酸溶液定量稀释制成每1毫升中约分别含丙酮0.25毫克、四氢呋喃36微克与二氯甲烷30微克的混合溶液，作为所述标准对照溶液；
配制供试品溶液：
精密称取所述盐酸伐地那非，加入所述5％磷酸溶液溶解并定量稀释成每1毫升中含
0.05克的溶液，作为所述供试样品溶液；以及注入色谱仪，得到色谱图，根据所述色谱图计算得到所述供试样品溶液中有机溶剂成分的种类和含量；
其中，所述有机溶剂成分包括丙酮、四氢呋喃与二氯甲烷。

说明书全文

一种检测盐酸伐地那非原料药中有机 溶剂残留量的方法

技术领域

[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种检测盐酸伐地那非原料药中有机溶剂残留的方法，尤其是用顶空毛细管气相色谱法同时检测盐酸伐地那非中丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷3种有机溶剂残留含量的方法。

背景技术

[0002] 勃起功能障碍(Erectile Dysfunction,ED)，俗称“阳痿”，指男子在性刺激下，持续地不能达到或维持足够硬度的阴茎勃起以完成满意性生活，病程在3个月以上方能临床诊断ED。据流行病学数据(J Androl,2011,32:496)，我国成年男性的ED总体患病率为17.1％，且随年龄的增加而升高，50岁以上人群达到29.1％。按照理论数据测算，我国男性ED患者约达1亿人，已与糖尿病的发病率相近，随着我国高血压、糖尿病和肥胖综合症的发病率上升，由此引发的ED病例也将持续攀升，ED已成为困扰男性的重要疾病之一。

[0003] 《欧洲泌尿外科学会男性性功能障碍诊疗指南(2013年版)》、《日本ED诊治指南(2008年版)》以及由中华医学会男科分会于2004年发布的《男子勃起功能障碍诊治指南》中均将PDE5抑制剂列为ED治疗的一线药物。目前主流药物为辉瑞的西地那非(Viagra，万艾可)、礼来的他达那非(Cialis，希爱力)和拜耳的伐地那非(Levitra，艾力达)。这三种药物在药理学作用方面基本相似，都是通过选择性抑制PDE5，上调cGMP，在性刺激作用下促进一氧化氮(NO)释放，使阴茎血管平滑肌舒张，海绵体血流增加、血窦充血，从而促进勃起。

[0004] 盐酸伐地那非(Vardenafil)是由拜耳和葛兰素史可公司研制的新一代强效、高选择性PDE5抑制剂，是继西地那非、他达拉非之后第3个治疗ED的口服药。与第一代西地那非相比，伐地那非在分子结构上进行了优化，具有用量小、起效快、作用持久、耐受性良好、副作用小等诸多优点，是迄今为止发现的起效最快的PDE5抑制剂(可在10min起效)。大量临床研究表明，它对各种病因、各种程度、各种年龄段的ED患者均有显著疗效，尤其是针对难治性ED和糖尿病性ED。同时，伐地那非也是全球首个采用量化指标(勃起持续时间)进行临床研究的PDE5抑制剂，证实其可以安全、有效延长伴有或不伴有基础性疾病ED患者的勃起持续时间。

[0005]

[0006]

[0007] 各国药典均要求对原料药进行残留溶剂检查，以控制生产过程中使用的有机溶剂或挥发性杂质在原料药中的残留量，以保证用药安全。本发明针对盐酸伐地那非的合成制备工艺中使用及反应产生的有机溶剂有丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷及N,N-二甲基甲酰胺，由于N,N-二甲基甲酰胺使用量较小且易溶于水，在后续几次水洗操作中可将其完全去除。故针对合成工艺引入的丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷3种有机溶剂残留，利用顶空毛细管气相色谱法，并选择在合适的色谱条件下同时检测这3种有机溶剂残留的含量，更好地控制产品内在质量。

发明内容

[0008] 本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。本发明的发明人认为盐酸伐地那非中残留的丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷3种有机溶剂会影响药物的安全性，因此，需要对其中的丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷3种有机溶剂残留进行检测。

[0009] 本发明所要解决的技术问题是，提供一种检测盐酸伐地那非中有机溶剂残留的方法，利用气相色谱法简便、快速、准确的特点，同时检测盐酸伐地那非中的丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷3种有机溶剂残留量。鉴于丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷为常见的低沸点有机溶剂，考虑到盐酸伐地那非三水合物在5％磷酸溶液中溶解，同时5％磷酸溶液与这三种残留有机溶剂差别较明显，故选用5％磷酸溶液作为样品配制溶剂。

[0010] 根据国内外药典和相关技术指导原则相关规定和要求，由于这三种溶剂沸点不高且极性差异较小，参照常用溶剂的气相检测方法，选用毛细管柱顶空进样法进行方法筛选，分离度试验结果显示各溶剂的分离度良好，初步确定了本品残留溶剂检测方法的色谱条件。后续通过详细的方法学验证研究，结果表明该色谱条件下各残留溶剂的各考察项目均符合要求。

[0011] 本发明通过下列技术方案解决上述技术问题。

[0012] 一种检测盐酸伐地那非中有机溶剂残留的方法，用顶空毛细管气相色谱同时检测盐酸伐地那非中丙酮、四氢呋喃与二氯甲烷3种有机溶剂残留量，其步骤具体为：

[0013] 色谱条件：以聚乙二醇(或极性相近)为固定液的毛细管色谱柱；柱温为40℃，维持10min，进样口温度为210℃，采用氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度为250℃；载气为氮气，流速为3.5ml/min；顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为35min，分流比20:1。

[0014] 对照品溶液的配制：精密量取丙酮、四氢呋喃与二氯甲烷各适量，用5％磷酸溶液定量稀释制成每1ml中约分别含丙酮0.25mg、四氢呋喃36μg与二氯甲烷30μg的混合溶液，摇匀即得；

[0015] 供试品溶液的配制：精密称取本品约1.0g，置20ml量瓶中，加5％磷酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得；

[0016] 精密量取上述对照品溶液2ml顶空进样，各峰之间的分离度应符合要求。另精密量取上述供试品溶液和对照品溶液各2ml顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。

[0017] 利用本发明所述的方法，能够有效地对盐酸伐地那非中的3种残留有机溶剂含量进行同时检测。

[0018] 根据本发明的实施例，发明人通过下列一系列系统的方法学研究对该检测方法的各种性能进行了评价：

[0019] 根据本发明的实施例，发明人通过检测方法的适用性试验和专属性试验对方法的可靠性进行了评价。在适用性试验中，分离度是最重要的评价指标。根据本发明的实施例中的实验结果，空白溶剂对各待测残留溶剂峰检测无干扰，相邻溶剂峰间的分离度均大于1.5，丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为3.0％、4.0％、8.6％，均小于10.0％，可见多次重复测定结果之间的离散程度很小，由此，可见根据本发明实施例的检测方法可以以较高的可靠性快速准确测定盐酸伐地那非原料药中有机溶剂的残留。

[0020] 根据本发明的实施例，发明人通过检测限和定量限试验对检测方法的灵敏性进行了评价。检测限和定量限是指在给定的可靠程度内可以从样品中检测和准确定量待测物质的最小浓度或最小量根据，是评价方法灵敏度的关键指标。根据本发明的实施例中的实验结果，本发明的顶空毛细管气相色谱法，丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷的检测限分别相当于样品浓度的2.001ppm、1.627ppm、2.743ppm；丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷的定量限分别相当于样品浓度的7.845ppm、4.849ppm、10.619ppm。说明该检测方法可以以较高的灵敏性快速准确测定盐酸伐地那非原料药中有机溶剂的残留。

[0021] 根据本发明的实施例，发明人通过线性试验对该检测方法的线性范围进行了评价。线性回归是利用数理统计中的回归分析，来确定两种或两种以上变数间相互依赖的定量关系的一种统计分析方法之一，变量的相关关系中最为简单的是线性相关关系，设随机变量与变量之间存在线性相关关系，则由试验数据得到的点,将散布在某一直线周围。根据本发明的实施例中的实验结果，丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷在定量限浓度至120％样品浓度范围内，浓度与峰面积线性回归方程的相关系数R均大于0.99，各线性方程的y轴截距与100％浓度时响应值之比的绝对值分别为1.4％、0.6％、4.2％，均小于10.0％。落在该范围内的丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷的含量均可以通过相应的线性方程计算得到，从而该检测方法可以准确测定盐酸伐地那非原料药中有机溶剂的残留。

[0022] 根据本发明的实施例，发明人通过重复性试验对该检测方法的精密度进行了评价。重复性试验是指相同的方法，同一试验材料，在相同的条件下获得的一系列结果之间的一致程度。相同的条件是指同一操作者，同一测量仪器，同一地点，相同的测量程序和短暂时间内重复测量。中间精密度试验更换分析人员、分析日期。根据本发明的实施例中的实验结果，重复性试验中6份相同浓度加标供试品溶液中丙酮、四氢呋喃及二氯甲烷的回收率均在80.0-120.0％之间，发明人还通过中间精密度试验对该检测方法的精密度进行了检测，结果RSD均小于10.0％。12份供试品溶液中丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷的平均回收率均在80.0％-120.0％之间，RSD均小于10.0％，中间精密度良好，该检测方法可以以较高的精密性快速准确测定盐酸伐地那非原料药中有机溶剂的残留。

[0023] 根据本发明的实施例，发明人通过加样回收率试验对该检测方法的准确度进行了评价。回收率试验是在检测的样品中添加一定量的标准物质，测试添加进去的标准物质的回收率，可以衡量前处理或测试过程中的基体干扰、样品的交叉污染、样品损失、仪器性能等。根据本发明的实施例中的实验结果，在80％-120％浓度水平范围内三个高中低浓度9份样品中丙酮、四氢呋喃及二氯甲烷的回收率均在80.0％-120.0％之间，RSD值均小于10.0％，该检测方法可以以较高的准确度快速测定盐酸伐地那非原料药中有机溶剂的残留。

[0024] 根据本发明的实施例，上述顶空毛细管气相色谱检测盐酸伐地那非原料药中有机溶剂残留的方法具有高效性、灵敏性、专属性和准确性，可以对盐酸伐地那非原料药的质量进行有效控制。

具体实施方式

[0025] 下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

[0026] 一般方法：除非明确说明，在下列实施例中采用下述仪器和条件进行分析：

[0027] 仪器：岛津GC-2014气相色谱仪，FID检测器，HS-20顶空进样器。

[0028] 色谱条件：以聚乙二醇(或极性相近)为固定液的毛细管色谱柱；柱温为40℃，维持10min，进样口温度为210℃，采用氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度为250℃；载气为氮气，流速为3.5ml/min；顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为35min，分流比20:1。

[0029] 溶液配制：

[0030] 空白溶剂：量取磷酸50ml，加水稀释至1000ml，摇匀即得。

[0031] 定位溶液：精密称取丙酮、四氢呋喃与二氯甲烷各适量，分别用5％磷酸溶液稀释制成甲醇浓度约为0.25mg/ml、四氢呋喃浓度约为36μg/ml、二氯甲烷浓度约为30μg/ml的溶液，摇匀即得各溶剂的定位溶液。

[0032] 对照品溶液：精密称取丙酮、四氢呋喃与二氯甲烷各适量，用5％磷酸溶液稀释制成每1ml中约含甲醇0.25mg、四氢呋喃36μg、二氯甲烷30μg的混合溶液，摇匀即得作为对照品溶液。

[0033] 供试品溶液：精密称取本品约1.0g，置20ml量瓶中，加5％磷酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

[0034] 实施例1系统适用性试验和专属性试验

[0035] 精密量取空白溶剂、定位溶液、以及丙酮、四氢呋喃与二氯甲烷混合对照品溶液，各取2ml，顶空进样，分别记录色谱图。在上述色谱条件下各组分可以得到较好的分离，各组分保留时间及分离度见表1，系统适用性图谱见附图1。

[0036] 表1系统适用性及专属性试验结果

[0037]

[0038]

[0039] 结果分析：结果显示空白溶剂对各残留溶剂峰检测无干扰，供试品溶液仅检出丙酮峰；混合对照品溶液连续进样6次，相邻溶剂峰间的分离度均大于1.5，丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷峰面积的RSD分别为3.0％、4.0％、8.6％，均小于10.0％，该方法的系统适用性及专属性良好，符合要求。

[0040] 实施例2检测限和定量限试验

[0041] 以信噪比S/N＝3计算检测限，以信噪比S/N＝10计算定量限，依次分别稀释丙酮、四氢呋喃和二氯甲烷的混合对照品液。取2ml顶空进样。记录色谱图，检测限及定量限测定结果见表2-3。

[0042] 表2检测限测定结果

[0043]

[0044] 表3定量限测定结果

[0045]

[0046]

[0047] 结果分析：试验结果显示，在该残留溶剂分析方法中，丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷的检测限分别相当于样品浓度的2.001ppm、1.627ppm、2.743ppm，定量限分别相当于样品浓度的7.845ppm、4.849ppm、10.619ppm。故该残留溶剂分析方法灵敏度良好。

[0048] 实施例3线性及范围试验

[0049] 取丙酮、四氢呋喃和二氯甲烷的混合对照品液适量，用5％磷酸溶液依次稀释成七个系列浓度的溶液。分别精密量取各浓度的溶液2ml置顶空瓶中进样，记录色谱图，以对照品峰面积为纵坐标，丙酮、四氢呋喃和二氯甲烷对照品浓度为横坐标做线性回归。结果如下：

[0050] 丙酮回归方程：y＝5028.9616x–16801.0853，相关系数R＝0.9996，y轴截距/100％浓度响应值的绝对值：1.4％。各浓度水平响应因子的RSD为7.0％。结论:丙酮在0.5026μg/ml～301.5μg/ml(即定量限至进样浓度120％)浓度之间的线性关系良好。

[0051] 四氢呋喃回归方程：y＝9909.0236x–2183.7219相关系数R＝0.9988，y轴截距/100％浓度响应值的绝对值：0.6％。各浓度水平响应因子的RSD为3.6％。结论：四氢呋喃在
0.3678μg/ml～44.13μg/ml(即定量限至进样浓度120％)浓度之间的线性关系良好。

[0052] 二氯甲烷回归方程：y＝5788.6169x–7034.0179相关系数R＝0.9962y轴截距/100％浓度响应值的绝对值：4.2％。各浓度水平响应因子的RSD为14.2％。结论：二氯甲烷在
0.6002μg/ml～36.01μg/ml(即定量限至进样浓度120％)之间的线性关系良好。

[0053] 结果分析：试验结果显示，在该残留溶剂分析方法中，丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷在定量限浓度至120％样品浓度范围内，浓度与峰面积线性回归方程的相关系数R均大于0.99，各线性方程的y轴截距与100％浓度响应值之比的绝对值分别为1.4％、0.6％、4.2％，均小于10.0％，各溶剂各线性浓度峰面积响应因子的RSD值均小于20.0％。故本品残留溶剂分析方法在定量限浓度至进样浓度120％范围内，峰面积与样品浓度的线性良好，符合要求。

[0054] 实施例4精密度试验

[0055] 4.1重复性试验

[0056] 精密称取盐酸伐地那非约1.0g置20ml量瓶中，加入丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷对照品混合溶液0.5ml，用5％磷酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为加标供试品溶液。平行6份。取2ml顶空进样，记录色谱图。测定结果见表4-6。

[0057] 表4丙酮重复性试验结果

[0058]

[0059]

[0060] 表5四氢呋喃重复性试验结果

[0061]

[0062] 表6二氯甲烷重复性试验结果

[0063]

[0064]

[0065] 结果分析：重复性试验中6份相同浓度加标供试品溶液中丙酮、四氢呋喃及二氯甲烷的回收率均在80.0％～120.0％之间，回收率的RSD均小于10.0％，重复性试验结果符合要求。

[0066] 4.2中间精密度

[0067] 中间精密度试验更换分析人员、分析日期，中间精密度试验仪器条件与重复性试验相同。精密量取2ml加标供试品溶液，顶空进样，记录色谱图。测定结果见表7-9。

[0068] 表7中间精密度丙酮试验结果(分析员2)

[0069]

[0070]

[0071] 表8中间精密度四氢呋喃试验结果(分析员2)

[0072]

[0073] 表9中间精密度二氯甲烷试验结果(分析员2)

[0074]

[0075]

[0076] 结果分析：分析员2中间精密度试验中6份相同浓度加标供试品溶液中丙酮、四氢呋喃及二氯甲烷的回收率均在80.0～120.0％之间，回收率的RSD均小于10.0％，中间精密度的试验结果符合验证要求。

[0077] 结合两名分析员的试验数据，12份供试品溶液中丙酮的平均回收率为95.7％，RSD为3.1％，12份供试品溶液中四氢呋喃的平均回收率为96.3％，RSD为3.4％，12份供试品溶液中二氯甲烷的平均回收率为93.0％，RSD为5.5％。12份样品中各溶剂平均回收率均在90.0％～110.0％之间，RSD均小于10.0％，该残留溶剂分析方法的精密度良好，符合要求。

[0078] 实施例5准确度试验

[0079] 称密称量盐酸伐地那非1.0g共9份，分别加入丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷对照品混合溶液0.4，0.5，0.6ml置入20ml量瓶，平行操作3份，用5％磷酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为回收率样品溶液。取2ml顶空进样，记录色谱图，由下式计算回收率。测定结果见表10-12。回收率％＝(测得量-样品量)/加入量×100％

[0080] 表10丙酮回收率试验结果

[0081]

[0082]

[0083] 表11四氢呋喃回收率试验结果

[0084]

[0085]

[0086] 表12二氯甲烷回收率试验结果

[0087]

[0088]

[0089] 结果分析：在80％～120％浓度水平范围内三个不同浓度中丙酮回收率在92.59％～99.28％之间，平均值为96.5％，RSD为2.5％,；四氢呋喃回收率在93.26％～103.53％之间，平均值为98.7％，RSD为3.6％；二氯甲烷回收率在85.29％～105.80％之间，平均值为95.2％，RSD为7.7％。各溶剂9份样品的回收率均在80％～120％之间，9份样品的回收率的RSD值均小于10％，符合要求，故该残留溶剂分析方法的准确度良好。

[0090] 实施例6样品溶剂残留检测

[0091] 取中试3批盐酸伐地那非原料药样品检测，按本发明中所述残留溶剂检测方法进行检测，结果见表13。

[0092] 表13中试3批样品溶剂残留测定结果

[0093]名称样品1 样品2 样品3
丙酮 0.006％ 0.010％ 0.03％
四氢呋喃未检出未检出未检出
二氯甲烷未检出未检出未检出

附图说明

[0094] 图1为盐酸伐地那非化学分子式；

[0095] 图2为丙酮、四氢呋喃与二氯甲烷残留溶剂专属性典型气相色谱图。

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