技术领域
[0001] 本
发明属于
植物栽培与育种技术领域,尤其涉及一种矮牵牛耐涝性的评价方法。
背景技术
[0002] 矮牵牛(Petunia×hybrida)为茄科多年生草本植物,是重要的园林景观花卉,原产南美阿根廷,现世界各地广泛栽培。矮牵牛花大而多,开花繁盛花期长,色彩丰富,是优良的花坛和种植钵花卉,也可自然式丛植,还可作为切花(王跃兵.园林新优景观植物-小花矮牵牛盆栽技术探析[J].现代
园艺,2019(01):58-59)。
气候适宜或
温室栽培可四季开花。可以广泛用于花坛布置,花槽配置,景点摆设,窗台点缀和家庭装饰等。矮牵牛属长日照植物,喜温暖和阳光充足的环境,不耐霜冻,怕雨涝。所以盆栽矮牵牛宜用疏松肥沃和排
水良好的砂壤土,以防止长期积水,烂根死亡。而我国南方地区
地下水位偏高,夏季梅雨季节降雨多、强度大造成
土壤粘重、排水不良,易发生涝害,导致土壤供
氧不足,产生低氧涝害。7-9月份正值矮牵牛的生长旺季,严重影响了矮牵牛的生理代谢以及生长发育。目前多采用遮荫、人工倒去盆中积水等措施来缓解涝害,但费时、费
力,效果甚微,难以应用于规模化的园林绿化管理中。因此涝渍胁迫是导致生产中花卉品质低下和损耗的危害之一,已成为花卉规模化生产和拓展其园林应用的
瓶颈。
[0003] 减少涝害的主要途径除通过水利设施降低地下水位外,最根本有效的方法是选育耐涝性较好的品种应用于生产。植物的耐涝能力因植物类型、种源、品种的不同而有很大差异,其实质是基因型差异在表型上的体现。前人在矮牵牛的抗热、抗病等方面的研究都取得了一些成就,但对矮牵牛耐涝性的研究却鲜见报道。因而通过外观形态指标,建立一个简单明了,能客观反映矮牵牛涝害真实状况的耐涝性评价体系,筛选耐涝种质资源,为矮牵牛耐涝分子育种奠定
基础。
[0004] 有鉴于此,特提出本发明。
发明内容
[0005] 针对
现有技术中存在的问题,本发明的目的是提供一种矮牵牛耐涝性的评价方法,基于地上部
叶片颜色、叶片萎蔫程度、茎杆颜色、形态变化,建立一种快捷有效能客观反映涝害真实状况的耐涝评价体系,对不同矮牵牛株系的耐涝性进行正确评价,发掘优良耐涝种质资源。
[0006] 为了实现上述目的,本发明提供的一种矮牵牛耐涝性的评价方法,所述评价方法包括如下步骤:
[0007] (1)选择试验材料
[0008] 选用生长状态相一致的生长周期为8周的矮牵牛根苗作为试验材料,将植株栽培到相同的涝渍胁迫的环境中,所述涝渍胁迫的环境为对矮牵牛根苗采用盆栽淹水鉴定法,淹水过土面2-3cm,持续淹水4d;
[0010] 以植物在淹水过程中的表型变化,包括叶片颜色、叶片萎蔫程度、茎杆颜色和茎杆形态作为评价的指标;
[0011] (3)确定评价指标的评价指数
[0012] 1)根据叶片颜色指标定级范围及得分标准,可分为:
[0013] I级:全株绿叶得4分;
[0014] II级:近水处叶片黄绿色得3分;
[0015] III级:近水处叶片黄化得2分;
[0016] IV级:黄化占全株1/2得1分;
[0017] 2)根据叶片萎蔫程度指标定级范围及得分标准,可分为:
[0018] I级:叶片保持常态得4分;
[0019] II级:近水处叶片略显卷缩得3分;
[0020] III级:中下部叶片略卷下垂、萎蔫得2分;
[0021] IV级:全株叶片严重卷缩、近水处叶片腐烂得1分;
[0022] 3)根据茎杆颜色指标定级范围及得分标准,可分为:
[0023] I级:茎杆为正常绿色为自然色得3分;
[0024] II级:中下部茎杆呈黄绿色得2分;
[0025] III级:全株茎杆呈黄绿色得1分;
[0026] 4)根据茎杆形态指标定级范围及得分标准,可分为:
[0027] I级:茎秆自然挺拔得3分;
[0028] II级:茎秆顶稍萎蔫下垂得2分;
[0029] III级:全株茎杆下垂,近水处水渍状腐烂得1分;
[0030] (4)矮牵牛耐涝等级的确定
[0031] 在不进行加权处理条件下计算4项指标的总得分后,确定4级制的耐涝等级及命名:
[0032] I级:分值10-14为耐涝;
[0033] II级:分值7-9为中度耐涝;
[0034] III级:分值≤6为不耐涝。
[0035] 本发明提供的一种矮牵牛耐涝性的评价方法,具有如下有益效果:
[0036] 1.对目前矮牵牛耐涝研究工作基础薄弱以及耐涝鉴定方法不完善等
缺陷,基于地上部叶片颜色、叶片萎蔫程度、茎杆颜色、形态变化,建立一种快捷有效能客观反映涝害真实状况的耐涝评价体系,对不同矮牵牛株系的耐涝性进行正确评价,发掘优良耐涝种质资源。
[0037] 2.通过直观的形态变化差异建立矮牵牛耐涝评价体系,该方法可以从形态上快速分辨出种质资源的耐涝性,操作简单有效,可客观反映植株涝害真实状况,是当前较为系统的针对矮牵牛涝害真实状况进行研究的一套方法。
附图说明
[0038] 图1为本发明提供的一种牛前述耐涝性的评价方法的不同等级的外观差异示意图。
[0039] 附图说明:
[0040] I:耐涝等级为I级的矮牵牛;
[0041] II:耐涝等级为II级的矮牵牛;
[0042] III:耐涝等级为III级的矮牵牛;
具体实施方式
[0043] 下面结合具体
实施例和附图对本发明做进一步说明,以助于理解本发明的内容。
[0044] 如图1所示,为本发明提供的一种矮牵牛耐涝性的评价方法,评价方法包括如下步骤:
[0045] (1)选择试验材料
[0046] 选用生长状态相一致的生长周期为8周的矮牵牛根苗作为试验材料,将植株栽培到相同的涝渍胁迫的环境中,所述涝渍胁迫的环境为对矮牵牛根苗采用盆栽淹水鉴定法,淹水过土面2-3cm,持续淹水4d;
[0047] (2)选定评价的指标
[0048] 以植物在淹水过程中的表型变化,包括叶片颜色、叶片萎蔫程度、茎杆颜色和茎杆形态作为评价的指标;
[0049] (3)确定评价指标的评价指数
[0050] 1)根据叶片颜色指标定级范围及得分标准,可分为:
[0051] I级:全株绿叶得4分;
[0052] II级:近水处叶片黄绿色得3分;
[0053] III级:近水处叶片黄化得2分;
[0054] IV级:黄化占全株1/2得1分;
[0055] 2)根据叶片萎蔫程度指标定级范围及得分标准,可分为:
[0056] I级:叶片保持常态得4分;
[0057] II级:近水处叶片略显卷缩得3分;
[0058] III级:中下部叶片略卷下垂、萎蔫得2分;
[0059] IV级:全株叶片严重卷缩、近水处叶片腐烂得1分;
[0060] 3)根据茎杆颜色指标定级范围及得分标准,可分为:
[0061] I级:茎杆为正常绿色为自然色得3分;
[0062] II级:中下部茎杆呈黄绿色得2分;
[0063] III级:全株茎杆呈黄绿色得1分;
[0064] 4)根据茎杆形态指标定级范围及得分标准,可分为:
[0065] I级:茎秆自然挺拔得3分;
[0066] II级:茎秆顶稍萎蔫下垂得2分;
[0067] III级:全株茎杆下垂,近水处水渍状腐烂得1分;
[0068] (4)矮牵牛耐涝等级的确定
[0069] 在不进行加权处理条件下计算4项指标的总得分后,确定4级制的耐涝等级及命名:
[0070] I级:分值10-14为耐涝;
[0071] II级:分值7-9为中度耐涝;
[0072] III级:分值≤6为不耐涝。
[0073] 其中,本发明提供了对矮牵牛PhERF2 6个转基因株系及其野生型的耐涝性进行评价,ERF(Ethylene Responsive Factor)转录因子是植物AP2/ERF转录因子超家族的一个亚家族,广泛参与植物各种逆境胁迫反应的调控,在转基因育种应用中具有巨大潜力。矮牵牛乙烯响应因子PhERF2属于ERF型转录因子VII亚族,与拟南芥AtRAP2.2(Related to Apetala2.2)高度同源,现有的研究已证实RAP2.2是拟南芥调控涝渍响应的重要基因。PhERF2作为转录激活因子或转录抑制因子在转录水平激活或抑制靶标基因表达,在植物抗逆反应中起重要作用。因此本发明采用PhERF2过表达株系C、D、I和RNAi沉默株系1A、1B、4B以及野生型WT为试材,对矮牵牛PhERF2 6个转基因株系及其野生型的耐涝性进行评价。
[0074] 对矮牵牛PhERF2 6个转基因株系与及其野生型的耐涝性评价方法,包含如下步骤:
[0075] (1)选择试验材料
[0076] 选用生长状态相一致的生长周期为8周的采用PhERF2过表达株系C、D、I和RNAi沉默株系1A、1B、4B以及野生型WT作为试验材料,采用盆栽淹水鉴定法,淹水过土面2-3cm,持续淹水4d采用盆栽淹水鉴定法,淹水过土面2-3cm,持续淹水4d;
[0077] (2)选定评价的指标
[0078] 以植物在淹水过程中的表型变化,包括叶片颜色、叶片萎蔫程度、茎杆颜色和茎杆形态作为评价的指标;
[0079] (3)确定评价指标的评价指数
[0080] 1)根据叶片颜色指标定级范围及得分标准,可分为:
[0081] I级:全株绿叶得4分;
[0082] II级:近水处叶片黄绿色得3分;
[0083] III级:近水处叶片黄化得2分;
[0084] IV级:黄化占全株1/2得1分;
[0085] 2)根据叶片萎蔫程度指标定级范围及得分标准,可分为:
[0086] I级:叶片保持常态得4分;
[0087] II级:近水处叶片略显卷缩得3分;
[0088] III级:中下部叶片略卷下垂、萎蔫得2分;
[0089] IV级:全株叶片严重卷缩、近水处叶片腐烂得1分;
[0090] 3)根据茎杆颜色指标定级范围及得分标准,可分为:
[0091] I级:茎杆为正常绿色为自然色得3分;
[0092] II级:中下部茎杆呈黄绿色得2分;
[0093] III级:全株茎杆呈黄绿色得1分;
[0094] 4)根据茎杆形态指标定级范围及得分标准,可分为:
[0095] I级:茎秆自然挺拔得3分;
[0096] II级:茎秆顶稍萎蔫下垂得2分;
[0097] III级:全株茎杆下垂,近水处水渍状腐烂得1分;
[0098] (4)矮牵牛耐涝等级的确定
[0099] 在不进行加权处理条件下计算4项指标的总得分后,确定4级制的耐涝等级及命名:
[0100] I级:分值10-14为耐涝;
[0101] II级:分值7-9为中度耐涝;
[0102] III级:分值≤6为不耐涝。
[0103] 得出牵牛PhERF2 6个转基因株系及其野生型的耐涝性评价的实验结果(详见表1):
[0104] 表1矮牵牛形态涝害指数与耐涝等级
[0105]
[0106] 表1表明,利用矮牵牛耐涝评价体系已筛选出PhERF2过表达株系C、D、I为3份耐涝资源,可应用于矮牵牛耐涝育种。
[0107] 本文中应用了具体个例对发明构思进行了详细阐述,以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离该发明构思的前提下,所做的任何显而易见的
修改、等同替换或其他改进,均应包含在本发明的保护范围之内。