专利汇可以提供一种许氏平鲉精原干细胞的分离和移植方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及卵胎生鱼类精原干细胞分离及移植方法,具体的说是一种许氏平鲉精原干细胞的分离和移植方法。将处于5月龄-1龄或性腺发育初期的雄性许氏平鲉的完整性腺经消化酶消化离心,获得精原干细胞,然后通过显微注射将精原干细胞移植至仔鱼 腹腔 。本发明提供了一种卵胎生鱼类精原干细胞分离和移植方法,该方法分离并移植后的精原干细胞经 荧光 标记后可在受体鱼内观测到供体生殖细胞的迁移和增殖过程。该方法的为 海 水 鱼类种质资源的保存、保护以及新品种的培育提供了新方法。,下面是一种许氏平鲉精原干细胞的分离和移植方法专利的具体信息内容。
1.一种许氏平鲉精原干细胞的分离,其特征在于:将处于5月龄-1龄或性腺发育初期的雄性许氏平鲉的完整性腺经消化酶消化离心,分离获得精原干细胞。
2.按权利要求1所述的许氏平鲉精原干细胞的分离,其特征在于:将许氏平鲉的精巢(性腺)剪碎后加入至5-10倍体积的L-15培养基液中混合,加入混合物质量0.004%的胶原酶和混合物质量0.03%的中性酶消化,消化过程中反复进行吹打混匀,使精原干细胞充分解离3-4h。
3.按权利要求1或2所述的许氏平鲉精原干细胞的分离方法,其特征在于:将消化分离后细胞分解液过滤得解离的细胞团,而后向其中加入L-15培养基离心收集沉淀,沉淀在经L-15培养基础洗涤,洗涤后经L-15培养基重悬,并通过胎盘蓝染色确定精原干细胞的比率以及活性;即获得结构清晰、无杂质、高成活率的精原干细胞。
4.一种许氏平鲉精原干细胞的移植方法,其特征在于:将权利要求1所述精原干细胞悬液经终浓度为0.2%荧光染料PKH26进行染色,并用L-15培养基重悬细胞,洗涤染料,收集细胞悬液。
5.按权利要求4所述的许氏平鲉精原干细胞的移植方法,其特征在于:采集许氏平鲉7-
10日龄仔鱼并用玻璃针将细胞悬液注入仔鱼腹腔脊椎骨与肠中间部位,每尾仔鱼注射约
105-106个精原干细胞,即实现精原干细胞的移植。
6.按权利要求5所述的许氏平鲉精原干细胞的移植方法,其特征在于:所述移植于4℃下24-30h,而后将移植后仔鱼置于1-5%双抗(青霉素/链霉素)灭菌自然海水中静水孵化,微充气,即得嵌合体仔鱼。
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