181 |
特异性高表达棕榈酰化缺失MTDH的MDA-MB-231细胞株及构建方法 |
CN201711336611.3 |
2017-12-14 |
CN109957581A |
2019-07-02 |
朴海龙; 刘晓龙; 李同明 |
本发明涉及一种敲除野生型MTDH后重新高表达棕榈酰化缺失MTDH的MDA‑MB‑231细胞株及其构建方法。利用CRIPR/Cas9系统将乳腺癌细胞系MDA‑MB‑231中内源表达的MTDH进行敲除,之后通过定点突变的方式构建MTDH中棕榈酰化位点和sgRNA识别序列处Protospacer Adjacent Motif(PAM)位点同时突变的MTDH表达载体,借助慢病毒体系和抗性筛选获得特异性高表达棕榈酰化缺失MTDH的MDA‑MB‑231细胞株。经测序和Western Blot检测细胞株中MTDH突变及高表达,最终成功构建内源MTDH敲除而棕榈酰化缺失MTDH特异性高表达的细胞株,可作为研究MTDH棕榈酰化修饰在乳腺癌发生发展中的分子作用机制及所参与代谢调控过程的理想细胞株。 |
182 |
一种膜蛋白CD14的抗体的制备方法及应用 |
CN201611259551.5 |
2016-12-30 |
CN106636121A |
2017-05-10 |
华权高; 沈鹤霄; 马峰; 罗绍祥; 肖颖; 舒芹; 徐春雷 |
本发明公开了一种膜蛋白CD14的抗体的制备方法及其应用,包括以下步骤:步骤(1):获取CD14抗体重链及轻链可变区序列;步骤(2):构建重链轻链表达载体;步骤(3):共转293T细胞表达CD14抗体,用抗性筛选含有两种质粒的细胞株293T细胞,诱导后获得含有人类抗体恒定区的膜蛋白CD14抗体。本发明是通过用细胞直接作为抗原免疫小鼠后,小鼠的免疫系统直接识别细胞表面的膜蛋白。 |
183 |
重组lunasin多肽在毕赤酵母中的诱导表达、纯化以及活性鉴定方法 |
CN201610182761.2 |
2016-03-28 |
CN105647960A |
2016-06-08 |
任贵兴; 朱莹莹; 顿宝庆; 么杨; 王智 |
本发明公开了一种重组lunasin多肽在毕赤酵母中的诱导表达、纯化以及活性鉴定方法,该诱导表达以及纯化方法包括:1)重组表达质粒的构建:设计带有EcoR I和Not I酶切位点Lunasin序列,并设计特异性扩增引物,进行PCR扩增获得目的基因片段;2)筛选高抗性重组基因工程菌株;3)重组luansin多肽的发酵生产;4)重组luansin多肽的分离纯化:得到纯度为93%的重组lunasin多肽。本发明首次提出使用毕赤酵母表达系统制备lunasin多肽,通过基因工程的方法使luansin多肽的规模化生产可以得以实现。毕赤酵母表达lunasin多肽成本低,产量高,分立纯化步骤简单。 |
184 |
双歧杆菌功能基因无痕敲除方法的建立 |
CN201310070885.8 |
2013-03-06 |
CN103146739B |
2014-11-26 |
万翠香; 魏华; 夏慧玲; 许恒毅; 章昭琳 |
一种双歧杆菌功能基因无痕敲除方法的建立,该建立方法包括构建serpin基因自杀型打靶载体UPD;以pDG7为骨架,装载上双歧杆菌的启动子,构建双歧杆菌-大肠杆菌的穿梭表达载体pDG-Hup;在pDG-Hup基础上构建Cre酶基因的双歧杆菌-大肠杆菌穿梭表达载体pDG-hup-cre;将打靶载体转化入双歧杆菌,通过同源重组得到双歧杆菌serpin基因缺失株;利用位点特异性重组酶体系Cre-loxp系统,将双歧杆菌基因组中引入的壮观霉素spc基因移除,实现了双歧杆菌抗性基因的无痕敲除。本发明利用同源重组的原理获得双歧杆菌功能基因的缺失株,可应用于双歧杆菌功能基因的敲除,改良菌种。 |
185 |
一株用于防治棉花黄萎病的假单胞菌及其应用 |
CN201210006218.9 |
2012-01-10 |
CN102533603B |
2013-04-10 |
唐灿明; 赵明文; 韩琴; 李顺鹏 |
本发明属于生物农药技术领域,涉及一株用于防治棉花黄萎病的假单胞菌及其应用。假单胞菌(Pseudomonas sp.)841P-3,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日期:2011年12月13日,保藏号:CGMCC No.5583。所述的保藏号为CGMCC No.5583的假单胞菌841P-3在防治棉花黄萎病中的应用。通过微生物发酵获得大量假单胞菌841P-3菌株,且能产生诱导系统抗性,对人畜无毒,对农作物物毒害,绿色环保,防治棉花枯黄萎病效果显著,具有良好的生物农药开发前景。 |
186 |
利用酵母表达系统生产菊糖果糖转移酶的方法 |
CN201210187069.0 |
2012-06-08 |
CN102653739A |
2012-09-05 |
江波; 沐万孟; 战荣荣 |
利用酵母表达系统生产菊糖果糖转移酶的方法,属于基因工程技术领域。本发明步骤包括(1)菊糖果糖转移酶基因(ift)的克隆,通过双酶切构建重组载体X-IFTase;(2)重组载体X-IFTase转化入毕赤酵母感受态细胞,营养缺陷型筛选及抗生素抗性筛选阳性转化子,即得产菊糖果糖转移酶酵母工程菌;(3)工程菌液体发酵分泌生产活性菊糖果糖转移酶。本发明实现了菊糖果糖转移酶的酵母分泌表达,获得具有活性的菊糖果糖转移酶,对于新型功能性甜味剂双果糖酐III的酶法工业化生产具有广泛的应用前景和意义。 |
187 |
一株用于防治棉花黄萎病的假单胞菌及其应用 |
CN201210006218.9 |
2012-01-10 |
CN102533603A |
2012-07-04 |
唐灿明; 赵明文; 韩琴; 李顺鹏 |
本发明属于生物农药技术领域,涉及一株用于防治棉花黄萎病的假单胞菌及其应用。假单胞菌(Pseudomonas sp.)841P-3,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日期:2011年12月13日,保藏号:CGMCC No.5583。所述的保藏号为CGMCC No.5583的假单胞菌841P-3在防治棉花黄萎病中的应用。通过微生物发酵获得大量假单胞菌841P-3菌株,且能产生诱导系统抗性,对人畜无毒,对农作物物毒害,绿色环保,防治棉花枯黄萎病效果显著,具有良好的生物农药开发前景。 |
188 |
青枯菌新胞外蛋白PopW的基因工程应用 |
CN200910029118.6 |
2009-01-13 |
CN101457228A |
2009-06-17 |
刘红霞; 李建刚; 郭坚华 |
本发明公开了一个青枯菌新胞外蛋白PopW的基因工程应用,属于基因工程技术领域。设计引物,以基因组DNA为模板,使用高保真pfu聚合酶扩增PopW的编码区序列,产物连接至蛋白表达载体pET30a(+)载体,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白表达,用镍柱纯化PopW蛋白。亚细胞定位研究表明,该蛋白定位在植物的细胞壁上。在温室条件下,PopW还能诱导烟草抗烟草花叶病毒的侵染。说明PopW可诱导烟草系统获得抗性,为以后作为生物农药防治病害提供了很大的可能,具有重要的社会效益和经济效益。 |
189 |
棉花抗虫深棕色纤维新品种的选育方法 |
CN200710177140.6 |
2007-11-09 |
CN101427654A |
2009-05-13 |
杜雄明; 孙君灵; 周忠丽; 潘兆娥; 贾银华; 刘国强; 庞保印 |
本发明公开了一种抗棉铃虫的深棕色彩色棉(深棕色纤维)的选育方法,本发明以转基因抗虫棉品系SGK9708为基础材料,通过选育、抗虫性鉴定,获得抗虫性纯合(100%)、枯黄萎病的抗性增强、皮棉产量比原材料也提高15.0%左右的转基因抗虫棉SGK9708提高系,以其为母本,与深棕色、高产、黄色花药新品系棕263进行杂交,通过多年单株系统选择,选育出一系列抗棉铃虫、深棕色彩色棉新品系,包括B2K8、R12-1等。利用本方法选育的深棕色彩色棉,不仅解决了深棕色彩色棉的抗棉铃虫等鳞翅目昆虫,降低农药使用量,保护了环境,同时纤维品质、皮棉产量也大幅度提升。 |
190 |
一种植物源生态农药及其配制工艺 |
CN01131257.2 |
2001-09-05 |
CN1335073A |
2002-02-13 |
罗萌 |
本发明涉及一种植物源生态农药及其配制工艺,是一种从高寒地区野生针叶林等多种植物中提取的至少含有四环三萜、氨基寡糖素、芳香油、异戊二烯等植物活化剂的生态农药,它同时能激发植物产生系统获得性抗性,诱导植物内部的免疫机制,起到抗病、防病的目的,具有施用剂量低、易于降解、无明显残留、成本低廉、使用方便、储存稳定、应用范围广等特点,该农药对于棉枯萎病与黄萎病具有特别显著的抑制作用。 |
191 |
普通野生稻抗白叶枯病近等基因系及其培育方法 |
CN99111577.5 |
1999-08-18 |
CN1241630A |
2000-01-19 |
章琦; 赵炳宇; 王春连; 杨文才; 阚更生; 邢全党; 周永力; 林世成 |
本发明涉及一个能鉴定和检测对水稻白叶枯病具特异性的水稻黄单胞菌菌系PX099。培育了携有普通野生稻抗稻白叶枯病新基因Xa23的近等基因系。构建了集生物技术、植物病理、遗传育种及分子标记多学科获得携有普通野生稻1个罕见的优异高度抗病新基因Xa23近等基因系的系统技术体系。本发明在迄今同类近等基因系中,其携有的新基因是抗谱最广、抗性异入效应极强,能有效改良我国杂交稻和籼稻抗病性的特点。 |
192 |
一种无抗生素介入的细菌表达系统的构建方法及应用 |
CN202210978289.9 |
2022-08-16 |
CN115820707A |
2023-03-21 |
白芳; 岳卓; 吴卫辉; 程志晖; 靳永新 |
本发明提供了一种无抗生素介入的细菌表达系统的构建方法及应用,涉及原核表达技术领域。本发明提供了以减毒铜绿假单胞菌PAK‑JΔ6菌株为基础菌,删除嘌呤合成关键基因purEK,获得腺嘌呤营养缺陷型铜绿假单胞菌PAK‑JΔ6(Ade)。本发明通过引入携带purEK操纵子的质粒pExoS54(Ade)回补PAK‑JΔ6(Ade)背景菌株的营养缺陷,使其可在无嘌呤的培养基中生长。本发明利用purEK操纵子替换掉质粒上原有的氨苄青霉素抗性(AmpR)基因盒,利用腺嘌呤营养限制作为pExoS54(Ade)质粒的维持压力,从而避免了抗生素的使用。 |
193 |
特异性高表达棕榈酰化缺失MTDH的MDA-MB-231细胞株及构建方法 |
CN201711336611.3 |
2017-12-14 |
CN109957581B |
2023-01-03 |
朴海龙; 刘晓龙; 李同明 |
本发明涉及一种敲除野生型MTDH后重新高表达棕榈酰化缺失MTDH的MDA‑MB‑231细胞株及其构建方法。利用CRIPR/Cas9系统将乳腺癌细胞系MDA‑MB‑231中内源表达的MTDH进行敲除,之后通过定点突变的方式构建MTDH中棕榈酰化位点和sgRNA识别序列处Protospacer Adjacent Motif(PAM)位点同时突变的MTDH表达载体,借助慢病毒体系和抗性筛选获得特异性高表达棕榈酰化缺失MTDH的MDA‑MB‑231细胞株。经测序和Western Blot检测细胞株中MTDH突变及高表达,最终成功构建内源MTDH敲除而棕榈酰化缺失MTDH特异性高表达的细胞株,可作为研究MTDH棕榈酰化修饰在乳腺癌发生发展中的分子作用机制及所参与代谢调控过程的理想细胞株。 |
194 |
一种基于BERT语义增强的因果关系抽取方法 |
CN202210184092.8 |
2022-02-23 |
CN114548117A |
2022-05-27 |
朱广丽; 孙争艳; 魏苏波; 张顺香; 许鑫; 吴厚月 |
本发明公开了一种基于BERT语义增强的因果关系抽取方法。所述因果关系抽取方法包括:因果关系候选词库、BERT预训练、因果关系抽取。该方法是一种快速提取文本中存在的因果关系的信息抽取技术,核心任务是在LeakGAN对抗神经网络模型的架构下建立基本模型和增强模型进行对抗学习获得高区分度的特征,分析评论文本中存在的因果关系,实现语义增强下的深层次抽取。该方法基于对抗神经网络的对抗性学习更有区分度的特征,提高因果关系抽取的准确度,可应用于事件预测、问答系统以及情景生成等方面。 |
195 |
一种提高长牡蛎度夏存活率的制种方法 |
CN202010815546.8 |
2020-08-14 |
CN112005938A |
2020-12-01 |
丛日浩; 李莉; 张国范; 丁芳芳; 赵泽民; 王威; 王鲁平 |
本发明涉属于海洋生物技术中贝类遗传育种领域,具体地说,涉及一种提高长牡蛎度夏存活率的制种方法。该方法包括:亲本选择、选育系构建、稚贝优化和种质纯化等步骤。本发明利用牡蛎在不同发育阶段的抗性特征,在稚贝期和成贝期分别采用干露和高温两种极端急性环境胁迫对牡蛎进行高效筛查,提高了选育效率,并缩短了选育周期,显著提升牡蛎的度夏存活率。本方法具有实用性强、效果显著、易于推广的优点。通过本发明可获得度夏存活率高的牡蛎新品系种质,显著降低牡蛎养殖产业的系统风险。 |
196 |
一种防治猕猴桃溃疡病的方法 |
CN202010046697.1 |
2020-01-16 |
CN111165236A |
2020-05-19 |
张虎 |
本发明提供了一种防治猕猴桃溃疡病的方法,属于植物病害防治技术领域。植物的碳营养素为阳、以氮为首的矿质营养素为阴,植物的生殖生长为阴、营养生长为阳;猕猴桃植株的阴阳不平衡是导致猕猴桃溃疡病发生的关键原因,阴盛阳虚会导致猕猴桃植株免疫力下降,被腐杆病菌感染后,诱发猕猴桃溃疡病。通过调整营养阴阳养平衡、环境阴阳平衡,系统升阳降阴,使植株阴阳得到平衡获从而获得防病治病的效果。本发明通过阴阳平衡调整,不仅提升了植株的抗性,还能提高农作物的产量和品质,而且因为提高了产量,并降低了成本。 |
197 |
一种检测水体重金属镉的微生物学方法 |
CN201410842170.4 |
2014-12-24 |
CN104946681B |
2019-05-07 |
吕建新; 吕攀攀; 王伍; 卢彬彬; 林炜炜 |
本发明涉及一种检测重金属镉的微生物学方法,具体涉及一种检测镉大肠杆菌工程菌株的构建方法及其检测水中镉方法的建立。本发明所述工程菌株的构建,首先采用Red重组系统敲除大肠埃希氏菌镉抗性zntA和zntR基因,然后采用基因敲入技术将pmerR‑MerR(M)‑pmerR‑gfpmut2报告基因置换到zntR编码基因位置后获得。本发明所述工程菌株对镉的最低检测范围符合《污水综合排放标准》‑‑‑GB8978‑1996,克服了基于质粒载体的工程菌株具有荧光本底值高、检测信号差等缺陷。本发明所述工程菌株可与AAS等理化分析法互补分析镉的生物有效性及其总量,为客观评价镉的生物毒性大小提供依据。 |
198 |
一株检测镉的大肠埃希氏菌 |
CN201410842190.1 |
2014-12-24 |
CN105132346B |
2019-01-25 |
吕建新; 吕攀攀; 王伍; 卢彬彬; 林炜炜 |
本发明涉及一种检测重金属镉的微生物学方法,具体涉及一种检测镉大肠杆菌工程菌株的构建方法及其检测水中镉方法的建立。本发明所述工程菌株的构建,首先采用Red重组系统敲除大肠埃希氏菌镉抗性zntA和zntR基因,然后采用基因敲入技术将pmerR‑MerR(M)‑pmerR‑gfpmut2报告基因置换到zntR编码基因位置后获得。本发明所述工程菌株对镉的最低检测范围符合《污水综合排放标准》‑‑‑GB8978‑1996,克服了基于质粒载体的工程菌株具有荧光本底值高、检测信号差等缺陷。本发明所述工程菌株可与AAS等理化分析法互补分析镉的生物有效性及其总量,为客观评价镉的生物毒性大小提供依据。 |
199 |
一种基于工厂化育种系统的节水抗旱稻加代方法 |
CN201811158355.8 |
2018-09-30 |
CN109122145A |
2019-01-04 |
王飞名; 罗利军; 张安宁; 刘毅; 余新桥; 刘国兰; 毕俊国; 张分云; 孔德艳; 叶水烽 |
本发明公开了一种基于工厂化育种系统的节水抗旱稻加代与选择方法,具体包括以下步骤:一是将水稻杂交早期世代种子在育秧盘内旱直播,确保预期密度和正常矮壮生长;二是对25‑30天秧龄的秧苗在工厂内进行短日照处理,促进提前进入幼穗分化;三是在生殖生长期进行抗旱性筛选,初步获得抗旱性强的单株,按“一粒传”法收种进入下一个世代;四是在高世代进行产量、米质、抗性鉴定。利用本发明可以实现节水抗旱稻的快速加代并使材料趋于稳定,一年可种植3‑4代,在加代同时进行节水抗旱性的筛选,有效提高节水抗旱稻育种的效率。 |
200 |
一种运用CRISPR/Cas9基因编辑系统创制紫果番茄突变体的方法和应用 |
CN201810895852.X |
2018-08-08 |
CN109097387A |
2018-12-28 |
邱正坤; 曹必好; 侯军晓; 黄泽军; 崔霞 |
本发明公开一种运用CRISPR/Cas9基因编辑系统创制紫果番茄突变体的方法和应用,涉及番茄生物技术和转基因技术领域。本发明通过设计SlMYBATV突变靶位点,构建CRISPR/Cas9-gRNA(pHSE401-gRNA)表达载体,利用农杆菌介导法导入含有Aft位点的栽培番茄LA1996,以卡纳霉素抗性标记筛选获得阳性转基因植物;经基因测序和表型观察确定的纯合突变且不含外援基因插入的株系,即为完全丧失SlMYBATV功能、果实呈紫色的番茄突变体。本发明可以极显著提高番茄果皮中花青素的含量,在番茄高品质分子育种中具有良好的应用前景。 |