技术领域
背景技术
[0002] 目前,硬质基片形式的生物芯片的制作,主要是将玻璃片或
硅片等硬质基片经表面化学处理后,直接在基片上合成探针,或者将合成好的探针、
抗体、
抗原等生物样品点加到基片上,通过化学结合反应,将生物样品固定在硬质基片上,它的优点在于样品固定牢固,精
密度好,但它的缺点在于玻璃片片基边框效应明显,精密度仍未能满足临床使用要求,生物样品与片基结合量低,固定样品活性降低快等。
发明内容
[0003] 本发明所要解决的技术问题是:提供一种能降低芯片片基边框效应,精密度能满足临床使用要求,生物样品与片基结合量高,固定样品活性降低慢的生物芯片片基处理方法。
[0004] 本发明的技术方案是:
[0005] (1)将H2SO4与H2O2按体积比50%-80%∶20%-50%搅拌混匀,配成芯片片基处理液;
[0006] (2)将芯片片基浸入片基处理液中,室温处理12-36小时;
[0007] (3)取出纯化
水超声洗涤5次,10min/次;
[0009] (5)浸入5%-30%KOH溶液,室温反应30-120分钟;
[0010] (6)取出用纯化水冲洗3次;
[0011] (7)60摄氏度烘干;
[0012] (8)冷却至室温;
[0013] (9)将3-
氨丙基三乙
氧基硅烷用纯化水配成1%-12%溶液后,加入0.1%果糖配成硅化溶液;
[0014] (10)浸入硅化溶液中,室温避光反应30分钟;
[0015] (11)取出用超纯水漂洗2次;
[0016] (12)120-180摄氏度干燥30分钟;
[0017] (13)冷却至室温;
[0018] (14)将戊二
醛配成1%-10%水溶液后加入1%果糖,用5%NaOH溶液调pH至8.0-10,制成醛化溶液;
[0019] (15)将硅化片基进入醛化溶液,30-45摄氏度反应10-90分钟;
[0020] (16)超纯水漂洗6次;
[0021] (17)110摄氏度干燥10-40分钟;
[0022] (18)冷却至室温。
[0023] 有益效果:本发明的生物芯片片基处理方法,通过在片基前处理中加入H2SO4与H2O2以及KOH对表面进行预处理,在表面活化过程中加入果糖和适当的硅烷浓度、戊二醛浓度以及适度的高温
烘烤,制出的生物芯片片基,边框效应低,精密度高,固定样品活性降低慢,生物样品与片基结合量高。
具体实施方式
[0024] 下面结合
实施例对本发明进行详细说明。
[0025] 实施例1
[0026] (1)将H2SO4与H2O2按体积比50%∶50%搅拌混匀,配成片基处理液[0027] (2)浸入片基处理液中,室温处理12小时
[0028] (3)取出纯化水超声洗涤5次,10min/次
[0029] (4)风干
[0030] (5)浸入5%KOH溶液,室温反应30分钟
[0031] (6)取出用纯化水冲洗3次
[0032] (7)60摄氏度烘干
[0033] (8)冷却至室温
[0034] (9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成1%溶液后,加入0.1%果糖配成硅化溶液
[0035] (10)浸入硅化溶液中,室温避光反应30分钟
[0036] (11)取出用超纯水漂洗2次
[0037] (12)120摄氏度干燥30分钟
[0038] (13)冷却至室温
[0039] (14)将戊二醛配成1%水溶液后加入1%果糖,用5%NaOH溶液调pH至8.0,制成醛化溶液
[0040] (15)将硅化片基进入醛化溶液,30摄氏度反应10分钟
[0041] (16)超纯水漂洗6次
[0042] (17)110摄氏度干燥10分钟
[0043] (18)冷却至室温
[0044] 实施例2
[0045] (1)将H2SO4与H2O2按体积比55%∶45%搅拌混匀,配成片基处理液[0046] (2)浸入片基处理液中,室温处理16小时
[0047] (3)取出纯化水超声洗涤5次,10min/次
[0048] (4)风干
[0049] (5)浸入10%KOH溶液,室温反应50分钟
[0050] (6)取出用纯化水冲洗3次
[0051] (7)60摄氏度烘干
[0052] (8)冷却至室温
[0053] (9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成3%溶液后,加入0.1%果糖配成硅化溶液
[0054] (10)浸入硅化溶液中,室温避光反应30分钟
[0055] (11)取出用超纯水漂洗2次
[0056] (12)130摄氏度干燥30分钟
[0057] (13)冷却至室温
[0058] (14)将戊二醛配成2%水溶液后加入1%果糖,用5%NaOH溶液调pH至8.2,制成醛化溶液
[0059] (15)将硅化片基进入醛化溶液,34摄氏度反应20分钟
[0060] (16)超纯水漂洗6次
[0061] (17)110摄氏度干燥15分钟
[0062] (18)冷却至室温
[0063] 实施例3
[0064] (1)将H2SO4与H2O2按体积比60%∶40%搅拌混匀,配成片基处理液[0065] (2)浸入片基处理液中,室温处理20小时
[0066] (3)取出纯化水超声洗涤5次,10min/次
[0067] (4)风干
[0068] (5)浸入15%KOH溶液,室温反应70分钟
[0069] (6)取出用纯化水冲洗3次
[0070] (7)60摄氏度烘干
[0071] (8)冷却至室温
[0072] (9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成5%溶液后,加入0.1%果糖配成硅化溶液
[0073] (10)浸入硅化溶液中,室温避光反应30分钟
[0074] (11)取出用超纯水漂洗2次
[0075] (12)140摄氏度干燥30分钟
[0076] (13)冷却至室温
[0077] (14)将戊二醛配成3%水溶液后加入1%果糖,用5%NaOH溶液调pH至8.5,制成醛化溶液
[0078] (15)将硅化片基进入醛化溶液,38摄氏度反应30分钟
[0079] (16)超纯水漂洗6次
[0080] (17)110摄氏度干燥20分钟
[0081] (18)冷却至室温
[0082] 实施例4
[0083] (1)将H2SO4与H2O2按体积比65%∶35%搅拌混匀,配成片基处理液[0084] (2)浸入片基处理液中,室温处理24小时
[0085] (3)取出纯化水超声洗涤5次,10min/次
[0086] (4)风干
[0087] (5)浸入20%KOH溶液,室温反应90分钟
[0088] (6)取出用纯化水冲洗3次
[0089] (7)60摄氏度烘干
[0090] (8)冷却至室温
[0091] (9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成7%溶液后,加入0.1%果糖配成硅化溶液
[0092] (10)浸入硅化溶液中,室温避光反应30分钟
[0093] (11)取出用超纯水漂洗2次
[0094] (12)150摄氏度干燥30分钟
[0095] (13)冷却至室温
[0096] (14)将戊二醛配成5%水溶液后加入1%果糖,用5%NaOH溶液调pH至9.0,制成醛化溶液
[0097] (15)将硅化片基进入醛化溶液,40摄氏度反应50分钟
[0098] (16)超纯水漂洗6次
[0099] (17)110摄氏度干燥30分钟
[0100] (18)冷却至室温
[0101] 实施例5
[0102] (1)将H2SO4与H2O2按体积比70%∶30%搅拌混匀,配成片基处理液[0103] (2)浸入片基处理液中,室温处理28小时
[0104] (3)取出纯化水超声洗涤5次,10min/次
[0105] (4)风干
[0106] (5)浸入25%KOH溶液,室温反应110分钟
[0107] (6)取出用纯化水冲洗3次
[0108] (7)60摄氏度烘干
[0109] (8)冷却至室温
[0110] (9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成9%溶液后,加入0.1%果糖配成硅化溶液
[0111] (10)浸入硅化溶液中,室温避光反应30分钟
[0112] (11)取出用超纯水漂洗2次
[0113] (12)160摄氏度干燥30分钟
[0114] (13)冷却至室温
[0115] (14)将戊二醛配成7%水溶液后加入1%果糖,用5%NaOH溶液调pH至9.5,制成醛化溶液
[0116] (15)将硅化片基进入醛化溶液,42摄氏度反应70分钟
[0117] (16)超纯水漂洗6次
[0118] (17)110摄氏度干燥35分钟
[0119] (18)冷却至室温
[0120] 实施例6
[0121] (1)将H2SO4与H2O2按体积比80%∶20%搅拌混匀,配成片基处理液[0122] (2)浸入片基处理液中,室温处理36小时
[0123] (3)取出纯化水超声洗涤5次,10min/次
[0124] (4)风干
[0125] (5)浸入30%KOH溶液,室温反应120分钟
[0126] (6)取出用纯化水冲洗3次
[0127] (7)60摄氏度烘干
[0128] (8)冷却至室温
[0129] (9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成12%溶液后,加入0.1%果糖配成硅化溶液
[0130] (10)浸入硅化溶液中,室温避光反应30分钟
[0131] (11)取出用超纯水漂洗2次
[0132] (12)180摄氏度干燥30分钟
[0133] (13)冷却至室温
[0134] (14)将戊二醛配成10%水溶液后加入1%果糖,用5%NaOH溶液调pH至10.0,制成醛化溶液
[0135] (15)将硅化片基进入醛化溶液,45摄氏度反应90分钟
[0136] (16)超纯水漂洗6次
[0137] (17)110摄氏度干燥40分钟
[0138] (18)冷却至室温
[0139] 表1是本发明实施例1-6的测试部分结果
[0140] 表1中用于测试的原料分别为:
[0141] 固定蛋白:AFP(Alpha-Fetoprotein)抗体(河南博赛生物生产)
[0142]
信号抗体:辣根过氧化物酶标记AFP抗体(河南博赛生物生产)
[0143] 封闭剂:小
牛血清(上海普龙生物生产)
[0144] 反应洗液:0.1mol/l Tris-Hcl(上海美季生物生产)
[0145] 发光底物:SuperSignal ELISA Femto Maximum Sensitivity Substrate(美国pierce生产)
[0146] 测试时用美国biodot公司的喷点点样
机器人将固定蛋白按4*12阵列方式点于玻片表面后,经反应读取信号,进行分析。
[0147] 表1:测试结果
[0148]