技术领域
[0001] 本
发明涉及药物分析技术，更具体地说，涉及一种替吉奥胶囊有关物质的高效液相色谱法测定方法。
背景技术
[0002] 胃癌是我国主要
恶性肿瘤之一，在恶性肿瘤中占首位。每年死亡约16万人，占恶性肿瘤死亡的23.03％。自上世纪60年代以来，5-氟尿嘧啶一直是
治疗胃肠道恶性肿瘤的
基础用药。目前绝大多数治疗胃肠道肿瘤的规范方案中均包含5-氟尿嘧啶或其衍
生物。为了进一步提高5-氟尿嘧啶的疗效，降低5-氟尿嘧啶的毒
副作用，国内外制药企业进行了一系列改进，开发出数种疗效更好、毒副作用更小的5-氟尿嘧啶衍生物或复方制剂产品。替加氟和优福定均已先后上市。
[0003] 替吉奥胶囊是一种类似于且优于“优福定”(替加氟+尿嘧啶)的口服复方抗肿瘤药，由日本大鹏药品工业株式会社开发，于1999年3月上市。替吉奥胶囊是以替加氟为主体，加入吉美嘧啶以阻止氟尿嘧啶活化物降解，增强抗癌作用；再加入奥替拉西
钾保护胃肠粘膜，减少消化道反应。三者按摩尔比为为1∶0.4∶1制成的口服胶囊制剂，用于胃癌、结肠直肠癌及头颈部肿瘤的治疗。
[0004] 在日本，替吉奥胶囊于1999年被批准用来治疗晚期胃癌，2001年被批准用来治疗头颈部癌症，2003年被批准用来治疗
结直肠癌，2004年被批准用来治疗非小细胞
肺癌。多年的临床应用证明，替吉奥胶囊是安全有效的抗癌药物。据统计，日本目前晚期胃癌的化疗，有80％以上的病例使用替吉奥胶囊，治疗有效率可达44.6％。
[0005] 替吉奥胶囊为复方制剂，在有关物质液相色谱图中，3个主成分色谱峰之间以及3个主成分色谱峰与辅料峰、
溶剂峰和杂质峰之间的分离度能否达到要求是控制本品
质量的关键。
发明内容
[0006] 本发明的目的是提供一种用高效液相色谱法分析测定替吉奥胶囊有关物质的方法，可用于终产品的质量控制。
[0007] 本发明提供一种用高效液相色谱测定替吉奥胶囊有关物质的方法，采用了十八烷基
硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以甲醇为有机相与
水相的混合溶剂作为流动相，水相中含有阳离子对
试剂。
[0008] 本发明提供一种用高效液相色谱测定替吉奥胶囊有关物质的方法，其中，流动相中的有机相为甲醇，甲醇与水相的体积比例为：30～5∶70～95。
[0009] 本发明提供一种用高效液相色谱测定替吉奥胶囊有关物质的方法，其中，流动相中的有机相为甲醇，甲醇与水相的体积比例为：10∶90。
[0010] 本发明提供一种用高效液相色谱测定替吉奥胶囊有关物质的方法，其中，所述水相为
磷酸盐缓冲液，其浓度为0.05mol/L。
[0011] 本发明提供一种用高效液相色谱测定替吉奥胶囊有关物质的方法，其中，所述水相中的阳离子对试剂为0.1重量％～0.5重量％的四丁基氢
氧化铵。
[0012] 本发明提供一种用高效液相色谱测定替吉奥胶囊有关物质的方法，其中，所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵的一种或其混合物。
[0013] 本发明提供一种用高效液相色谱测定替吉奥胶囊有关物质的方法，其中，所述磷酸盐为磷酸二氢钾。
[0014] 本发明提供一种用高效液相色谱测定替吉奥胶囊有关物质的方法，包括如下步骤：
[0015] 1)取替吉奥胶囊内容物适量，加流动相制成每1ml约含替加氟0.4mg、吉美嘧啶0.116mg与奥替拉西钾0.392mg的样品溶液；
[0016] 2)设置流动相流速为0.5～1.5ml/min，流动相的流速优选为1ml/min；检测
波长220nm～240nm，最佳检测波长为220nm；选用C18色谱柱；色谱柱柱温25℃～40℃，柱温最佳为35℃；
[0017] 3)取1)的样品溶液10～20μl，优选15μl，注入高效液相色谱仪，完成替吉奥胶囊有关物质的测定；
[0018] 这里，以甲醇为有机相与水相的混合溶剂作为流动相，水相中含有阳离子对试剂；流动相中甲醇与水相的体积比例为：30～5∶70～95，优选10∶90；
[0019] 所述水相为磷酸盐缓冲液，其浓度为0.05mol/L；所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵的一种或其混合物，优选磷酸二氢钾；
[0020] 所述水相中的阳离子对试剂为0.1重量％～0.5重量％的四丁基
氢氧化铵。
[0021] 本发明提供一种用高效液相色谱测定替吉奥胶囊有关物质的方法，包括如下步骤：
[0022] 1)取替吉奥胶囊内容物适量，加流动相制成每1ml约含替加氟0.4mg、吉美嘧啶0.116mg与奥替拉西钾0.392mg的样品溶液；
[0023] 2)设置流动相流速为1ml/min；检测波长为220nm；选用C18色谱柱；色谱柱柱温为35℃；
[0024] 3)取1)的样品溶液15μl，注入高效液相色谱仪，完成替吉奥胶囊有关物质的测定；
[0025] 这里，以甲醇为有机相与水相的混合溶剂作为流动相，水相中含有阳离子对试剂；流动相中甲醇与水相的体积比例为10∶90；
[0026] 所述水相为磷酸盐缓冲液，其浓度为0.05mol/L；所述磷酸盐选自磷酸二氢钾；
[0027] 所述水相中的阳离子对试剂为0.1重量％～0.5重量％的四丁基氢氧化铵。
[0028] 孙莉公开了HPLC法测定替吉奥片3种成分的含量(《中国药事》，2008年第22卷第11期，pp984-6)，采用KromasilC18色谱柱；流动相：磷酸二氢钾缓冲溶液(取磷酸二氢钾1.36g，加水800mL与三乙胺10mL，用磷酸调pH至4.5)-甲醇(85∶15)，流速：1.0mL·min-1，检测波长：266nm，进样量：10μL，柱温：室温，应用该方法进行替吉奥胶囊的检测时，在有关物质检查中，奥替拉西钾
碱破坏色谱图(参见图6)中2.9分钟的杂质色谱峰与主峰3.1分钟无法完全分离，且奥替拉西钾出峰略早，易受辅料及溶剂干扰。本发明提供的检测方法提高分离度和专属性，其有关物质检查，主峰与相邻杂质峰能达到完全分离；
使得3个主成分峰与杂质峰达到更好的分离效果，从而快速准确的实现了替吉奥胶囊有关物质的测定，从而保证了替吉奥胶囊的质量可控。
附图说明
[0029] 图1：替加氟原料的高效液相色谱图。
[0030] 图2：吉美嘧啶原料的高效液相色谱图。
[0031] 图3：奥替拉西钾原料的高效液相色谱图。
[0032] 图4：空白辅料的高效液相色谱图。
[0033] 图5：替吉奥胶囊的高效液相色谱图。
[0034] 图6：替吉奥胶囊的高效液相色谱图(对照)
具体实施方式
[0035] 以下
实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。
[0036] 实施例1
[0037] 仪器与条件
[0038] Agilent 1200高效液相色谱仪；色谱柱：Diamonsil C18柱，5μ，250×4.6mm；紫外检测波长：220nm；流动相：磷酸盐缓冲液(0.05mol/L，0.2％四丁基氢氧化铵溶液)-甲醇(90∶10)；柱温：35℃；流速：1ml/min。
[0039] 实验步骤
[0040] 称取替加氟原料约20mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0041] 取供试品溶液，照上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，结果见图1(图1中保留时间为20.172min的色谱峰为替加氟的色谱峰)。
[0042] 实施例2
[0043] 仪器与条件
[0044] Agilent 1200高效液相色谱仪；色谱柱：Diamonsil C18柱，5μ，250×4.6mm；紫外检测波长：220nm；流动相：磷酸盐缓冲液(0.05mol/L，0.2％四丁基氢氧化铵溶液)-甲醇(90∶10)；柱温：35℃；流速：1ml/min。
[0045] 实验步骤
[0046] 称取吉美嘧啶原料约19.6mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0047] 取供试品溶液，照上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，结果见图2(图2中保留时间为13.596min的色谱峰为吉美嘧啶的色谱峰)。
[0048] 实施例3
[0049] 仪器与条件
[0050] Agilent 1200高效液相色谱仪；色谱柱：Diamonsil C18柱，5μ，250×4.6mm；紫外检测波长：220nm；流动相：磷酸盐缓冲液(0.05mol/L，0.2％四丁基氢氧化铵溶液)-甲醇(90∶10)；柱温：35℃；流速：1ml/min。
[0051] 实验步骤
[0052] 称取奥替拉西钾原料约5.8mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0053] 取供试品溶液，照上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，结果见图3(图3中保留时间为6.394min的色谱峰为奥替拉西钾的色谱峰)。
[0054] 实施例4
[0055] 仪器与条件
[0056] Agilent 1200高效液相色谱仪；色谱柱：Diamonsil C18柱，5μ，250×4.6mm；紫外检测波长：220nm；流动相：磷酸盐缓冲液(0.05mol/L，0.2％四丁基氢氧化铵溶液)-甲醇(90∶10)；柱温：35℃；流速：1ml/min。
[0057] 实验步骤
[0058] 取替吉奥胶囊内容物适量(约相当于替加氟20mg、吉美嘧啶5.8mg与奥替拉西钾19.6mg)，置50ml量瓶中，加流动相适量超声使溶解，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。取供试品溶液，照上述条件进行高效液相分析，并同法进行辅料空白试验，结果见图4、图5。
[0059] 图4证明，辅料空白不干扰测定；图5中保留时间为6.387min的色谱峰为奥替拉西钾的色谱峰，保留时间为13.584min的色谱峰为吉美嘧啶的色谱峰，保留时间为20.179min的色谱峰为替加氟的色谱峰，按面积归一法计算，其有关物质总杂质小于2.0％，结果表明替吉奥胶囊的有关物质达到制剂的要求，本法可以用于替吉奥胶囊的质量控制。
