这里描述的本发明涉及用作药物的化合物，特别是具有内酯环结构 修饰的喜树碱的衍生物，涉及它们的制备方法，涉及它们作为具有拓扑 异构酶I抑制活性的活性试剂的用途，和涉及含有这些化合物作为活性 成分的药物组合物。

                       发明背景

喜树碱是由Wall等(J.Am.Chem.Soc.，88，3888-3890(1966)) 第一次从属于紫树(Nyssaceae)科的中国本生植物喜树(Camptotheca acuminata)树中分离的一种生物碱。该分子由E环中带有内酯的五环 结构构成，其对于细胞毒性是必需的。

有关喜树碱和涉及它们用作药物的问题以及多种这样问题的解决 的综述，参见以申请人名义申请的欧洲专利EP 1044977。

关于使喜树碱能发挥其药学活性所必需的分子的一部分的内酯环 的问题，已经完全解决的一个方面是环本身的稳定性，进而对药物的半 衰期起作用。

以Societède Conseils de Recherches et d′Applications Scientifiques的名义在1997年1月9日公开的专利申请WO 97/00876 中描述了喜树碱，其中内酯环从其原来的α-羟基内酯结构被修饰成β- 羟基内酯结构(高喜树碱(homocamptothecins))，使得内酯环从六个 成环原子变为七个成环原子。这些化合物抑制拓扑异构酶I DNA松弛活 性并且被赋予抗几种肿瘤系的细胞毒性活性。β-羟基内酯结构被定义 为α-羟基内酯结构中羧基碳原子和带有α-羟基的碳原子之间增加一 个碳原子的内酯。为了提高内酯环的稳定性，发明人建议在增加的碳原 子上有取代基，并且指出的取代基是低级烷基和低级烷氧基、卤原子或 羟基。在提到的专利申请中没有提供内酯环稳定性改善的证据。在随后 的专利申请中，1998年7月2日公开的WO 98/28304，同一申请人描述 了带有β-羟基内酯结构的其他喜树碱，其中用能在体内使之复原的基 团将羟基官能化，从而有效提供前面专利申请中描述的分子的前体药物， 并且还解决了现有技术中存在的产品的严重副作用问题。在这个申请中， 同样没有提供已经解决技术难题的实验证据。在J.Med.Chem.，1998， Vol 41，No 27，5410-5419中，和上面提到的专利申请相同的发明人指 出了其中描述为用作提高内酯环的稳定性并从而用作制备其他喜树碱 衍生物的有用模型的手段的位置7上的内酯。还可见Bioorg.Med.Chem. Lett.，9，(1999)2599-2602；Biochemistry，1999，38，15556-15563； Cancer Research，59，2939-2943。高喜树碱A和B环上的其他修饰描 述于WO 00/61146，University of Pittsburgh等，2000年10月19 日公开，和J.Med.Chem.，1999，42，3018-3022，所谓的 ″homosilatecans″，其是有效的稳定的拓扑异构酶I抑制剂。具有其他 修饰的高喜树碱描述于J.Med.Chem.，2000，43，2285-2289， An-cancer Drug Design，(2001)，12，9-19，其中由于A环的氟化而 提高了抗癌活性。关于用氯在12位的取代作用还可见Anti-canner Drug Design，(2001)，16，27-36。

2001年9月18日公开的University of Kentucky的US 6,291,676 中描述了高喜树碱的水溶性问题，其中利用7位(多)烷基胺型的各种 取代作用。

然而新的药物各种问题的设计中很多都遭遇物理化学性质，例如分 子在血浆中的稳定性或者用于配制目的的水溶性，对于更好的治疗指数 存在不断的探索。

                         发明概述

现在令人惊奇地发现带有修饰的内酯环的取代的7-肟喜树碱被赋 予强的抗癌活性并且在血浆中是稳定的。这些化合物具有更好的治疗指 数。

因此这里描述的本发明的目的是通式(I)和(II)的化合物：

其中：

R1是氢或-C(R5)＝N-O-R4基团，其中R4是氢或直链或支链的C1-C5烷基 或C1-C5链烯基，或C3-C10环烷基，或直链或支链的(C3-C10)环烷基-(C1-C5) 烷基，或C6-C14芳基，或直链或支链的(C6-C14)芳基-(C1-C5)烷基，或杂 环基团或直链或支链的杂环-(C1-C5)烷基，所述杂环基团含有至少一个 选自氮原子的杂原子，其任选地被(C1-C5)烷基取代，和/或选自氧和/ 或硫原子的杂原子；所述烷基，链烯基，环烷基，环烷基烷基，芳基， 芳基-烷基，杂环或杂环-烷基任选地被选自下面的一个或多个基团取 代：卤原子，羟基，(C1-C5)烷基，(C1-C5)烷氧基，苯基，氰基，硝基和 -NR6R7，其中R6和R7，相同或不同，是氢、直链或支链(C1-C5)烷基、-COOH基团，或者其药学可接受酯中的一种；或者-CONR8R9基团，其中R8和 R9相同或不同，是氢、直链或支链(C1-C5)烷基；或者

R4是(C6-C10)芳酰基或(C6-C10)芳基磺酰基残基，任选地被选自下面 的一个或多个基团取代：卤原子，羟基，直链或支链(C1-C5)烷基，直链 或支链(C1-C5)烷氧基，苯基，氰基，硝基，-NR10R11，其中R10和R11相同 或不同，是氢、直链或支链(C1-C5)烷基，或者

R4是多氨基烷基残基；或者

R4是糖基残基；

R5是氢，直链或支链的C1-C5烷基，直链或支链的C1-C5链烯基，C3-C10 环烷基，直链或支链的(C3-C10)环烷基-(C1-C5)烷基，C6-C14芳基，直链 或支链的(C6-C14)芳基-(C1-C5)烷基；

R2和R3相同或不同，是氢、羟基、直链或支链(C1-C5)烷氧基；

n＝1或2，

Z选自氢，直链或支链的C1-C4烷基；

N1-氧化物，外消旋混合物，它们各自的对映异构体，它们各自的非 对映异构体，它们的混合物，和它们的药学可接受盐，前提是，在式(I) 中，R1，R2和R3不能同时是氢。

本发明包括上面提到的式(I)和(II)的化合物作为药物、特别是用 作拓扑异构酶I抑制剂的药物的活性成分的用途。源自拓扑异构酶I抑 制作用的治疗应用中，我们应该提到肿瘤和寄生虫或病毒感染的治疗。

本发明包括含有与药学可接受载体和赋形剂混合的作为活性成分 的式(I)和/或式(II)的化合物的药物组合物。

本发明还包括式(I)和(II)的化合物以及关键中间体产物的制备方 法。

                      本发明的详细描述

在本发明的框架内，理解直链或支链的C1-C5烷基的例子包括甲基， 乙基，丙基，丁基，戊基和它们的可能的异构体，例如异丙基，异丁基， 和叔丁基。

直链或支链的C1-C5链烯基的例子是次甲基，亚乙基，乙烯基，烯丙 基，炔丙基，丁烯，和戊烯，其中碳-碳双键可以处于亚烷基环的各种可 能的位置，在允许的异构情况下其也可以是支化的。

C3-C10环烷基的例子是环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环辛基， 和多环基团，例如，金刚烷基。

直链或支链的(C3-C10)环烷基-(C1-C5)烷基的例子是环丙基甲基，2- 环丙基乙基，1-环丙基乙基，3-环丙基丙基，2-环丙基丙基，1-环丙基 丙基，环丁基甲基，2-环丁基乙基，1-环丁基乙基，3-环丁基丙基，2- 环丁基丙基，1-环丁基丙基，环己基甲基，2-环己基乙基，1-环己基乙 基，3-环己基丙基，2-环己基丙基，1-环己基丙基，5-环己基戊基，3- 环己基戊基，3-甲基-2-环己基丁基，1-金刚烷基乙基，2-金刚烷基乙 基，金刚烷基甲基。

直链或支链的(C6-C14)芳基或(C6-C14)芳基-(C1-C5)烷基的例子是苯 基，1-或2-萘基，蒽基，苄基，2-苯基乙基，1-苯基乙基，3-苯基丙基， 2-蒽基丙基，1-蒽基丙基，萘基甲基，2-萘基乙基，1-萘基乙基，3- 萘基-丙基，2-萘基丙基，1-萘基丙基，环己基甲基，5-苯基戊基，3- 苯基戊基，3-甲基-2-苯基丁基。

直链或支链的杂环或杂环-(C1-C5)烷基的例子是噻吩基，喹啉基， 吡啶基，N-甲基哌啶基，5-四唑基，2-(4，5-二氢噁唑基)，1，2，4-噁二 唑烷-3-基-5-酮，嘌呤和嘧啶碱基，例如尿嘧啶基，任选地根据在上面一 般定义中指明的被取代。

(C6-C10)芳酰基的例子是苯甲酰基和萘甲酰基。

(C6-C10)芳基磺酰基的例子是甲苯磺酰基和苯甲酰基磺酰基。

卤原子的例子是氟，氯，溴和碘。

取代基的例子是五氟苯基，4-苯基苄基，2，4-二氟苄基，4-氨基丁 基，4-羟基丁基，二甲基氨基乙基，p-硝基苯甲酰基，p-氰基苯甲酰基。

多氨基烷基残基的例子是-(CH2)m-NR12-(CH2)p-NR13-(CH2)q-NH2，其 中m，p和q是包括2-6的整数，而R12和R13是直链或支链(C1-C5)烷 基，例如4-氨基丁基-2-氨基乙基，3-氨基-丙基-4-氨基丁基，3-氨基 丙基-4-氨基丁基-3-氨基丙基。

糖基残基的例子是6-D-半乳糖基和6-D-葡糖基。

药学可接受盐的例子是，在碱性是氮原子的情况下，与药学可接受 酸的盐，无机酸和有机酸，例如，盐酸，硫酸，乙酸，或者，在酸基的情 况下，例如羧基，与药学可接受碱的盐，例如，碱金属和碱土金属氢氧化 物，氢氧化铵和胺类，包括杂环胺。

第一组优选的化合物包括其中内酯环是7-或8-元，特别是7-元的 式(I)化合物。

第二组优选的化合物包括其中内酯环是5-元的式(II)化合物。

在上面提到的两组优选的化合物中，优选的那些是式(I)化合物， 其中R4不为氢，并且特别是直链或支链的C1-C5烷基或C1-C5链烯基， 或C3-C10环烷基，或(C3-C10)环烷基-(C1-C5)烷基，或直链或支链的C6-C14 芳基，或(C6-C14)芳基-(C1-C5)烷基，或直链或支链的杂环基团或杂环 -(C1-C5)烷基，所述杂环基团含有至少一个选自氮原子的杂原子，其任选 地被(C1-C5)烷基取代，和/或氧和/或硫原子的杂原子；所述烷基，链烯 基，环烷基，芳基，芳基-烷基，杂环或杂环-烷基任选地被选自下面的一 个或多个基团取代：卤原子，羟基，(C1-C5)烷基，(C1-C5)烷氧基，苯基， 氰基，硝基，-NR6R7，其中R6和R7相同或不同，是直链或支链(C1-C5)烷 基，-COOH基团，或者其药学可接受酯中的一种；或者-CONR8R9基团，其 中R8和R9相同或不同，是氢，直链或支链(C1-C5)烷基；根据的是上面作 为例子描述的定义。

最初一组特别优选的化合物由带有7-元内酯环的式(I)化合物组 成，其中，特别是：

R，S-7-甲氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-乙氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-异丙氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(2-甲基丁氧基)亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(1-叔丁氧基)亚氨基甲基-高喜树碱(ST2127)；

R，S-7-(4-羟基丁氧基)亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-三苯基甲氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-羧基甲氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-氨基乙氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(N，N-二甲基氨基乙氧基)亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-烯丙氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-环己基氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-环己基甲氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-环辛基氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-环辛基甲氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-苄基氧基亚氨基甲基-高喜树碱(ST2143)；

R，S-7-(苄基氧基)亚氨基苯基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(1-苄基氧基)亚氨基乙基-高喜树碱；

R，S-7-(1-叔丁氧基)亚氨基乙基-高喜树碱；

R，S-7-对-硝基苄基氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-对-甲基苄基氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-五氟苄基氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-对-苯基苄基氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(2，4-二氟苄基甲氧基)亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(4-叔丁基苯基甲氧基)亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(1-金刚烷基氧基)亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(1-金刚烷基甲氧基)亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(2-萘基氧基)亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(9-蒽基甲氧基)亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(6-尿嘧啶基)甲氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(4-吡啶基)甲氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-(2-噻吩基)甲氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-[(N-甲基)-3-哌啶基]甲氧基亚氨基甲基-高喜树碱；

R，S-7-羟基亚氨基苯基甲基-高喜树碱。

这些化合物中，最优选的那些是R，S-7-(1-叔丁氧基)亚氨基甲基- 高喜树碱(ST2127)和R，S-7-苄基氧基亚氨基甲基-高喜树碱(ST2143)。

第二组特别优选的化合物由带有5-元内酯环的式(II)化合物组成， 并且具有和前面基团R1一样的定义。

这些化合物中，最优选的那些是{10-[(E)-(叔丁氧基亚氨基)甲 基]-3-乙基-1，13-二氧-11，13-二氢-1H，3H-呋喃并(furo)[3′，4′：6，7] 中氮茚并[1，2-b]喹啉-3-基}乙酸(ST2196)，(10-{(E)-[(苄氧基)亚 氨基]甲基}-3-乙基-1，13-二氧-11，13-二氢-1H，3H-呋喃并(furo) [3′，4′：6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3-基)乙酸(ST2285)和(3-乙基 -1，13-二氧-11，13-二氢-1H，3H-呋喃并(furo)[3′，4′：6，7]中氮茚并 [1，2-b]喹啉-3-基)乙酸(ST2085)。

在本发明第一个优选的实施方案中，就通式(I)化合物而言，其中内 酯环是7-或8-元的。在本发明第二个优选的实施方案中，就通式(II)化 合物而言，其中内酯环是5-元的。

用下面描述的并且对于根据本发明的优选化合物举例说明的方法 能制备式(I)化合物。

对式(I)和(II)涵盖的所有的化合物应用下面的反应流程图对于本 领域技术人员是显而易见的，因为其充分描述了，一方面，带有7-/8- 元内酯环，另一方面，带有5-元环的两类化合物的制备方法。两个结构 式涵盖的各种化合物的制备在于7位的取代基不同。

在上面提到的EP 104977中充分而完全地描述了这种制备。

关于其中R1是氢的式(I)和(II)化合物，起始化合物是喜树碱，根据 上面针对R2和R3的定义在8和9位任选地被取代。

在其中R1不是氢的式(I)和(II)化合物的情况下，在喜树碱原内酯 环修饰之前不能发生获得最终化合物的7位的官能化作用，扩展到7或 8元的情况和限制到5元的情况都是如此。为了这个目的，证明发现用于 合成途径的合适的中间体产物是必需的。这种关键中间体是7-(二烷氧 基甲基)喜树碱。这种新的化合物是本发明的另一个目的。其中，优选的 化合物是7-(二甲氧基甲基)喜树碱。在无机酸例如硫酸，和合适的氧化 系统，例如硫酸铁/过氧化氢，然后另一种氧化剂，例如二氧化锰的存 在下，喜树碱与也能用作反应介质的期望的醇反应，获得7-(二烷氧基 甲基)喜树碱。

使喜树碱，或者其7-(二烷氧基甲基)衍生物在19位的羰基经历选 择性还原，获得相应的19，20-二羟基衍生物。在室温至50℃的温度下， 在醇溶剂的存在下，在还原剂例如混合的Al或B的氢化物，并且如方 案中例示的氢硼化钠1至10当量的存在下，进行还原作用1-16小 时。接着蒸发溶剂，并且在下面的步骤中使用粗产物，其中用1至10当 量的氧化剂，例如高碘酸盐或乙酸铅使19，20-二羟基衍生物形式的E 环开环。该反应方便地在有机溶剂中进行，例如甲苯，二氯甲烷或乙酸， 反应时间是1至24小时，温度范围是室温至50℃。真空去除溶剂，并且 通过色谱法或一些其他等价方法最后纯化产物。接着将这样获得的中间 产物溶解于合适的溶剂介质，优选溶剂的混合物，然后使进行公知的 Reformatsky反应，其中ω-溴代羧酸合适地被选作式(I)或(II)针对的 n值的官能。在这一点上，在涉及式(I)化合物的本发明的实施方案的上 下文中，向溶解于合适的溶剂混合物，例如二氯甲烷，乙酸和二甲基甲酰 胺，任选地在酸(例如，三氟乙酸或路易斯酸)的存在下和在缩合剂(二环 己基碳化二亚胺-DCC-或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐 酸盐)或脱水剂(例如，硫酸钠或镁，或分子筛)的存在下，向Reformatsky 反应的产物加入1至10当量的合适的羟胺NH2OR4，其也是盐的形式，其 中R4具有上述定义，时间范围是1至24小时，温度范围是室温至溶 剂沸点，获得最后的式(I)化合物。提高去除溶剂和通过色谱法进行最后 的纯化来分离最终产物。或者，在本发明第二个优选的实施方案的上下 文中，即其中内酯环是5-元的式(II)化合物，Reformatsky反应的产物 溶解于有机溶剂的混合物，例如二氯甲烷，乙酸和乙腈之后，在0℃至 溶剂的沸点的温度范围用1至10当量的氧化剂(例如，铬酸，吡啶鎓重 铬酸盐-PDC-氧化锰，Na2RuO4)处理30分钟至24小时。然后真空去除 溶剂并且通过色谱法纯化产物。将得到的化合物溶解于合适的有机溶剂， 例如，二氯甲烷或者含水溶剂，并且用有机或无机酸酸解，例如三氟乙 酸，盐酸，或高氯酸，时间范围是1至24小时，温度范围是0℃至溶 剂的沸点。然后去除后者并且通过结晶分离产物。如果期望，如上所述 产物最后与羟胺NH2OR4反应。如果期望得到式(II)化合物，其中Z是氢， 则将通过上述方法获得的化合物进行合适的处理，根据本领域技术人员 常见的常规酯解方法释放羧基功能。

上面提到的专利EP 1044977中充分描述了与羟胺NH2OR4的反应，这 是制备可能的N-氧化物。

用文献中报道的常规方法获得药学可接受盐，不需要任何进一步描 述。

本发明描述的化合物是拓扑异构酶I抑制剂，因此用作药物，特别 用于治疗因抑制所述拓扑异构酶受益的疾病。特别地，根据本发明的化 合物显示抗增殖活性，因此由于其治疗活性而被使用并且具有使得它们 适合药物组合物配制的物理化学性质。

药物组合物含有产生显著治疗作用量的至少一种作为活性成分的 式(I)和/或式(II)化合物。本发明包括的组合物完全是常规的并且 用制药工业常规操作的方法获得。根据选择的给药途径，组合物是固体 或液体形式，适合口服，肠胃外，或静脉内给药。根据本发明的组合物 和活性成分一起含有至少一种药学可接受载体或赋形剂。特别有用的是 配药佐剂，例如增溶剂、分散剂、悬浮剂和乳化剂。

式(I)化合物还可以与其他活性成分混合使用，例如，其他抗癌药物 或者具有抗寄生虫或抗病毒活性的其他药物，以分开的和单一剂量形 式。

根据本发明的化合物用作具有抗癌活性的药物，例如，治疗肺癌， 例如非-微小细胞瘤肺癌，或结肠直肠癌或前列腺癌或神经胶质瘤。

在人肿瘤细胞系统中，利用抗增殖活性试验作为评价细胞毒性可能 性的方法，分析了根据本发明的化合物的细胞毒性活性。

使用的细胞系是称作NCI H460的非-微小细胞瘤肺腺癌，属于NSCLC (非小细胞肺癌)类。

                         抗癌活性

为了评价根据本发明的化合物的作用，评价它们的抗非-微小细胞 瘤肺癌细胞系(NCI-H460)的细胞毒性。在含有10％胎牛血清和50微克 /毫升浓度硫酸庆大霉素的RPMI 1640(GIBCO)的培养物中维持培养 从美国典型培养物中心(ATCC)获得的细胞。

将细胞接种到96-孔板中250微升体积中并且在37℃下温育24小 时。第二天，以1μM至0.004μM标量浓度加入研究化合物，并且在 含有5％CO2的潮湿气氛下将细胞在37℃下又温育2小时。将细胞清洗 三次，每次颠倒平板并且加入PBS。加入200微升/孔的含有10％FCS的 RPMI 1640，并且将平板在37℃下又温育72小时。第5天，反转平板 去除生长培养基，并且加入200微升/孔的PBS和50微升的80％冷的 TCA。平板在冰中温育至少1小时。通过反转去除TCA；通过浸入蒸馏 水中将板清洗3次，并且首先在吸水纸(blotting paper)上干燥之后 置于热风喷射器(jet of hot air)下。向所有的孔中加入200微升 的1％乙酸中的0.4％sulforodamine B。平板在室温下又温育30分钟。 通过反转去除sulforodamine B；通过在1％乙酸中浸入三次清洗平板， 然后首先在吸水纸上干燥之后置于热风喷射器下。向所有的孔中加入 200微升的Tris碱10mM，并且将平板搅动至少20分钟。使用 Multiskan分光光度计在540nm下测定光密度。

表1代表对于测试的各个化合物的IC50值，也就是能抑制50％细胞存 活的浓度，使用ALLFIT软件处理。

                   表1

产物              NCI-H460

                  IC50(μM)

ST2084            ＞1

ST2085            ＞1

ST2127            0.026

ST2143            0.007

ST2196            ＞1

ST2285            ＞1

参照上面给出的流程图，下面的实施例进一步详细描述本发明。

制备1

7-(二甲氧基甲基)喜树碱(ST2337)的合成

搅拌下用冰浴冷却下，向1.53g(4.4毫摩尔)的喜树碱在92毫 升甲醇中的悬浮液中缓慢加入9.2毫升的H2SO4 96％，将混合物的温度保 持低于50℃。将这样获得的悬浮液加热至回流温度；达到50℃时，加入 46毫克的FeSO4·7H2O之后滴加3毫升的H2O2 30％，将反应保持在回流温 度。将反应搅拌2小时，通过TLC检查起始物的消失。反应完全时，将 悬浮液冷却至25℃并且加入2.8毫升的MnO2；将混合物搅拌2小时， 通过TLC检查中间体产物的消失。然后让悬浮液通过Gooch过滤器上放 置的一层硅藻土层过滤。将滤液浓缩至25毫升之后倾入NaHCO3的水溶 液中使得获得pH6的溶液。过滤沉淀并且在硅胶色谱柱上纯化(洗脱剂： CH2Cl2/MEOH 99/1)。获得1.02g(2.42毫摩尔，55％)产物，其为黄色 固体。

C23H22N2O6(422，4)；m.p.(分解)＝201℃；

Rf＝0.5(CH2Cl2/MeOH 92/8)。

MS(IS)：[M+Na]+＝445；[M-1]-＝421，

元素分析：计算值：C 65.40，H 5.21，N 6.64；实测值：C65.37，H 5.22，N 6.67。

1H NMR(CDCl3)δ＝1.00-1.06(t，3H，CH3)，1.82-1.97(m，2H，CH2)， 3.40(s，3H，CH3)，3.43(s，3H，CH3)，5.28-(5.33-5.72)-5.78(dd，2H，CH2)， 5.47(s，2H，CH2)，6.24(s，1H，CH)，7.62-7.70(m，2H，CH+CHAr)，7.78- 7.84(t，1H，CHAr)，8.23-8.33(m，2H，CHAr)。

13C NMR(CDCl3)δ＝8.0；31.9；52.1；52.9；53.2；66.7；72.9；98.1；100.5； 119.0；124.6；125.9；127.8；128.4；130.5；138.4；146.2；149.4；150.2； 152.7；158.0；174.1。

制备2

中间产物2a的合成

向70毫升的MeOH中2.12g(56毫摩尔，3.3当量)的NaBH4的溶 液加入7.2g(17毫摩尔)的7-二甲基乙缩醛喜树碱( 1a)：将这样获 得的混合物在室温下搅拌1小时。在这项操作之后加入丙酮破坏过量的 NaBH4，并且将溶液干燥。通过在硅胶上的急骤层析来纯化粗反应产物(洗 脱梯度CH2Cl2/MeOH 92/8 CH2Cl2/MeOH 7/3)，得到3.7g(8.7毫摩尔， 51％)的产物，其为黄色固体。

C23H24N2O6(424.5)；Rf＝0.41(第一种异构体)，0.35(第二种异构体) (CH2Cl2/MeOH 92/8)。

MS(IS)：[MH]+＝425；[M+Na]+＝447；[M-1]-＝423。

元素分析：计算值：C 65.09，H 5.66，N 6.60；实测值C 65.12， H 5.68，N 6.57。

1H NMR(DMSO-d6)δ＝0.84-0.90(t，3H，CH3)，1.65-1.73(m，2H，CH2)， 3.38(s，6H，CH3)，4.43-(4.50-4.57)4.64(dd，2H，CH2)，4.98(s，1H，CH)， 5.28(s，2H，CH2)，6.32(s，1H，CH)，7.38(s，1H，CH)，7.66-7.73(t，1H， CHAr)，7.8-7.88(t，1H，CHAr)，8.14-8.17(d，1H，CHAr)，8.3-8.33(d，1H， CHAr)。

13C NMR(DMSO-d6)δ＝7.6；32.4；50.7；53.1；53.5；58.2；70.1；78.3； 92.5；96.0；98.4；100.3；123.1；124.9；127.3；129.4；129.9；137.6；142.3； 148.3；150.1；153.1；157.1。

制备3

中间产物3a的合成

向100毫升的CH3COOH中5.52g(1 3毫摩尔)的 2a的溶液加入4.17 g的NaIO4(19.5毫摩尔，1.5当量)。混合物在室温下搅拌16小时； 在这项操作之后，将溶液浓缩并且用CH2Cl2稀释，然后用NaHCO3萃取至 中性pH。有机相用Na2SO4干燥并且蒸发至干。通过在硅胶上的急骤层析 来进行纯化(洗脱剂：CH2Cl2/MeOH 98/2)，得到3.58g(8.48毫摩 尔，65％)的产物，其为黄色固体。

C23H22N2O6(422.4)；m.p.(分解)＝150℃；

Rf＝0.6(CH2Cl2/MeOH 95/5)。

元素分析：计算值：C 65.40，H 5.21，N 6.64；实测值C 65.39， H 5.23，N 6.61。

MS(IS)：[MH]+＝423；[M+Na]+＝445。

1H NMR(DMSO-d6)δ＝1.07-1.2(t，3H，CH3)，2.96-3.3(m，2H，CH2)， 3.37(s，6H，CH3)，5.12(s，2H，CH2)，5.18(s，2H，CH2)，6.37(s，1H，CH)， 7.38(s，1H，CH)，7.73-7.79(t，1H，CHAr)，7.86-7.92(t，1H，CHAr)，8.16- 8.20(d，1H，CHAr)，8.27(s，1H，CH)，8.33-8.37(d，1H，CHAr)。

制备4

中间产物4a的合成

保持在氩气下和搅拌下，通过滴加0.87毫升(6.8毫摩尔)的氯代三 甲基甲硅烷将60毫升无水(蒸馏)Et2O中7.6g(116毫摩尔)锌的悬 浮液活化。将悬浮液搅拌15分钟，然后提高到回流温度。去除油浴，以 一定速度滴加17.5毫升(118毫摩尔)的溴乙酸叔丁酯使得混合物保持 在回流温度下：得到无色溶液。恢复加热之后，将反应在回流温度下保持 1小时；在该阶段结束之后，加入45毫升无水(蒸馏)THF中的2.3g(5.45 毫摩尔) 3a的悬浮液，将反应保持在氩气下。1小时之后，混合物变成 黄色溶液，加入200毫升的饱和氯化铵溶液并且用CH2Cl2萃取；有机相 用Na2SO4干燥，蒸发溶剂并且通过在硅胶上的急骤层析来纯化粗产物(洗 脱梯度：CH2Cl2→CH2Cl2/MeOH 98/2)，得到1.6g(3.14毫摩尔，58％) 的产物，其为黄色固体。

C28H34N2O7(510.6)；m.p.(分解)＝190℃；

Rf＝0.3(CH2Cl2/MeOH 98/2)；Rf＝0.5(CH2Cl2/MeOH 95/5)。

MS(IS)：[MH]+＝511；[M+Na]+＝533；[M-1]-＝509。

元素分析：计算值：C 65.88，H 6.67，N 5.49；实测值C 66.00， H 6.68，N 5.47。

1H NMR(CDCl3)δ＝0.90-0.95(t，3H，CH3)，1.38(s，9H，t-Bu)，1,93-2,08 (m，2H，CH2)，2,8-(2,86-3,08)3，14(dd，2H，CH2)，3.4(s，6H，CH3)，5.06- (5.01-5.13)-5.17(d，2H，CH2)，5.47(s，2H，CH2)，6.24(s，1H，CH)，7.47 (s，1H，CH)，7.64-7.69(t，1H，CHAr)，7.79-7.84(t，1H，CHAr)，8.23-8.32 (m，2H，CHAr)。

13C NMR(CDCl3)δ＝8.4；28.2；34.8；45.5；52.0；53.0；53.1；59.1；82.7； 100.6；101.0；124.8；125.9；128.0；128.2；130.0；130.4；130.5；138.6； 142.4；148.9；152.9；155.2；162.6；172.6。

制备5

中间产物5a的合成

将383毫克(0.75毫摩尔)的 4a和564毫克(1.5毫摩尔，2当量) 的PDC悬浮于4毫升的无水CH2Cl2中；搅拌下将这样获得的混合物置 于室温下。16小时之后通过蒸发去除溶剂并且通过在硅胶柱上的急骤层 析来纯化这样获得的粗产物(洗脱剂：CH2Cl2/MeOH 99/1)，得到280毫 克(0.55毫摩尔，74％)的产物。

C28H30N2O7(506.5)；m.p.(分解)＝210℃；

Rf＝0.64(CH2Cl2/MeOH 95/5)

MS(IS)：[M+Na]+＝529；[M-1]-＝505。

元素分析：计算值：C 66.40，H 5.93，N 5.53；实测值C 66.42， H 5.96，N 5.53。

1H NMR(CDCl3)δ＝0.83-0.90(t，3H，CH3)，1.33(s，9H，CH3)，1.97- (2.06-2.15)2.24(双重峰，2H，CH2)，2.90-(2.95-3.00)3.05(dd， 2H，CH2)，3.42(s，6H，CH3)，5.58(s，2H，CH2)，6.28(s，1H，CH)，7.39(s， 1H，CH)，7.68-7.76(t，1H，CHAr)，7.82-7.88(t，1H，CHAr)，8.23-8.27(d， 1H，CHAr)，8.33-8.37(d，1H，CHAr)。

13C NMR(CDCl3)δ＝7.6；28.1；31.6；43.8；52.5；53.1；53.2；82.2；85.0； 93.8；100.5；114.3；124.9；126.4；129.1；130.5；130.9；139.1；149.4；151.8； 152.4；156.2；167.0；167.4；169.9。

实施例1

{10-[(E)-(叔丁氧基亚氨基)甲基]-3-乙基-1，13-二氧-11，13-二 氢-1H，3H-呋喃并(furo)[3′，4′：6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3-基} 乙酸(ST2196)

向1.4毫升的CH3COOH中71毫克(0.14毫摩尔) 5a溶液加入44毫 克(0.35毫摩尔，2.5当量)的tBuONH2·HCl；将这样获得的混合物在80 ℃下搅拌并且避光16小时。然后通过蒸发去除CH3COOH。这样获得的 粗产物避光保存，通过在硅胶柱上的层析来纯化(洗脱梯度：CH2Cl2→ CH2Cl2/MeOH 85/15)，得到45毫克(0.09毫摩尔，68％)的产物。

C26H25N3O6(475.5)；m.p.(分解)＝228℃；

Rf＝0.3(CH2Cl2/MeOH 9/1)。

MS(IS)：[MH]+＝476；[M+Na]+＝498；[M-1]-＝474。

元素分析：计算值：C 65.68，H 5.26，N 8.84；实测值：C65.70，H 5.29，N 8.83。

1H NMR(DMSO-d6)δ＝0.63-0.7(t，3H，CH3)，1.5(s，9H，tBu)，2.07- 2.17(m，2H，CH2)，2.97-(3.03-3.23)3.29(dd，2H，CH2)，5.36(s，2H， CH2)，7.64(s，1H，CH)，7.73-7.79(t，1H，CHAr)，7.89-7.96(t，1H，CHAr)， 8.16-8.20(d，1H，CHAr)，8.60-8.63(d，1H，CHAr)，9.30(s，1H，CHAr)。

13C NMR(CDCl3)δ＝7.6；27.8；29.9；31.2；42.6；53.1；81.9；85.2；94.2； 114.2；123.2；125.8；127.1；129.0；130.8；130.9；132.8；142.2；149.8； 151.7；152.7；156.2；167.2；170.1。

实施例2

(10-{(E)-[(苄氧基)亚氨基]甲基}-3-乙基-1，1 3-二氧-11，13-二 氢-1H，3H-呋喃并(furo)[3′，4′：6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3-基) 乙酸(ST2285)

向2毫升的CH3COOH中102毫克(0.2毫摩尔) 5a溶液加入80毫克 (0.5毫摩尔，2.5当量)的PhCH2-ONH2·HCl；将溶液在80℃下搅拌并且避 光16小时。然后通过蒸发去除CH3COOH。这样获得的粗产物避光保存， 通过在硅胶柱上层析来纯化(洗脱梯度：CH2Cl2→CH2Cl2/MeOH 8/2)，得 到62毫克(0.12毫摩尔，61％)的产物。

C29H23N3O6(509.5)；m.p.(分解)＝188℃；

Rf＝0.53(CH2Cl2/MeOH 9/1)。

MS(IS)：[M+Na]+＝532；[M-1]-＝508。

元素分析：计算值：C 68.37，H 4.52，N 8.25；实测值：C68.41，H 4.50，N 8.27。

1H NMR(DMSO-d6)δ＝0.64-0.70(t，3H，CH3)，2.05-2.17(m，2H，CH2)， 2.84-(2.90-3.12)3.18(dd，2H，CH2)，5.2(s，2H，CH2)，5.4(s，2H，CH2)， 7.36-7，58(m，5H，CHAr)，7.62(s，1H，CH)，7.72-7.78(t，1H，CHAr)，7.85- 7.90(t，1H，CHAr)，8.12-8.16(d，1H，CHAr)，8.54-8.58(d，1H，CHAr)，9.32 (s，1H，CHAr)。

13C NMR(CDCl3)δ＝7.0；30.6；42.1；52.6；77.8；84.8；93.6；113.5；122.6； 125.2；126.7；128.2；128.5；128.6；128.9；130.2；130.3；131.2；136.0； 143.2；149.1；151.0；152.0；155.6；166.9；169.7；170.1。

实施例3

R，S-7-(1-叔丁氧基)亚氨基甲基-高喜树碱(ST2127)

向10毫升的CH3COOH中510毫克(1毫摩尔) 4a溶液加入314毫 克(2.5毫摩尔，2.5当量)的tBuO.NH2·HCl；溶液在80℃下避光保持16 小时。然后通过蒸发去除CH3COOH。这样获得的粗产物溶解于CH2Cl2并且避光，用水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，蒸发溶剂，并且通过在硅 胶柱上的层析来纯化粗产物，保持避光(洗脱剂：CH2Cl2/二噁烷9/1)， 得到160毫克(0.35毫摩尔，34％)的固体黄色产物。

C26H27N3O5(461,5)；m.p.(分解)＝284℃；

Rf＝0.4(CH2Cl2/MeOH 95/5)。

MS(IS)：[MH]+＝462；[M+Na]+＝484；[M-1]-＝460。

元素分析：计算值：C 67.68，H 5.86，N 9.11；实测值：C67.65，H 5.88，N 9.13。

1H NMR(CDCl3)δ＝0.87-1.03(t，3H，CH3)，1.55(s，9H，CH3)，1.7-1.9 (broad，1H，OH)，1.92-2.1(m，2H，CH2)，3.26-(3.32-3.38)3.44(dd，2H， CH2)，5.13-(5.21-5.36)5.44(dd，2H，CH2)，5.35-(5.41-5.62)5.68(dd，2H， CH2)，7，43-7，50(m，2H，CH+CHAr)，7，60-7，65(t，1H，CHAr)，7.88-7.95 (t，2H，CH)，8.86(s，1H，CHAr)。

13C NMR(CDCl3)δ＝8.3；27.9；35.8；42.7；53.4；62.4；73.9；82；101.1； 122.9；123.4；125.1；125.5；128.3；130.1；130.4；132.5；142.1；144.7； 149.0；151.6；156.4；160.0；1716。

使用圆二色性检测器在手性柱上对(R，S)ST 2127的HPLC分析表 明，分离了两种对映异构体。

用下面的条件，经HPLC通过在手性柱上的制备型色谱法分离(R，S) ST 2127的对映异构体：

柱子：(S，S)-DACH-DNB 5/100；

洗脱剂：CH2Cl2/n-HEXANE(80/20)+1％MetOH；

流速：1ml/min；

T：22℃；

λ360nm UV检测器。

第一个洗出的级分e.e.99.46％，相应于(+)ST2127＝ST2522， 通过与具有正[α]D的喜树碱类比，对R构型进行归属。

IC50＝18nM±0.2(H460)。

第二个洗出的级分e.e.99.46％，相应于(-)ST2127＝ST2523， [α]D＝-48.11±0.15(c＝1.17；CHCl3-MetOH 4∶1)。

通过与具有负[α]D的喜树碱类比，S构型归于ST2523。

IC50＝＞200nM(H460)。

实施例4

R，S-7-苄基氧基亚氨基甲基-高喜树碱(ST2143)

向10毫升的CH3COOH中510毫克(1毫摩尔) 4a溶液加入400毫克 (2.5毫摩尔)的PhCH2ONH2·HCl；溶液在80℃下避光搅拌16小时。然后 通过蒸发去除CH3COOH。这样获得的粗产物通过在硅胶柱上的层析来 纯化(洗脱剂：CH2Cl2/二噁烷9/1)，得到223毫克(0.45毫摩尔，45％) 的固体黄色产物。

C29H25N3O5(495.5)；m.p.(分解)＝263℃；

Rf＝0.48(CH2Cl2/MeOH 95/5)。

MS(IS)：[MH]+＝496；[M+Na]+＝518；[M-1]-＝494。

元素分析：计算值：C 70.30，H 5.05，N 8.48；实测值；C70.33，H 5.09，N 8.47。

1H NMR(CDCl3)δ＝0.95-1.02(t，3H，CH3)，1.99-2.06(m，2H，CH2)， 3，04-(3，08-3，18)3，42(dd，2H，CH2)，5，32(s，2H，CH2)，5.42-(5.44-5.63) 5.70(dd+s，4H，CH2+CH2)，7.33-7.56(m，5H，CHAr)，7.63-7.69 (m， 2H，CH+CHAr)，7.80-7.84(t，1H，CHAr)，8.16-8.22(m，2H，CHAr)，9.10 (s，1H，CH)。

13C NMR(CDCl3)δ＝8.4；36.5；42.6；52.9；62.2；73.6；78.1；101.1；123.0； 123.1；125.3；126.2；128.3；128.5；128.8；129.1；130.3；130.4；131.4； 136.5；144.0；144.4；149.2；152.5；156.4；159.7；172.1。

实施例5

(3-乙基-1，1 3-二氧-11，13-二氢-1H，3H-呋喃并(furo) [3′，4′：6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3-基)乙酸叔丁酯(ST2084)

向10毫升无水CH2Cl2中1g(2.3毫摩尔) 4b的溶液加入1.73g (4.6毫摩尔，2当量)的PDC。将混合物在室温下搅拌16小时。这个阶 段结束时将反应干燥，并且通过在硅胶柱上的急骤层析来纯化(洗脱剂： CH2Cl2/MeOH 95/5)。得到726毫克(1.68毫摩尔，73％)黄色固体产物。

C25H24N2O5(432.5)；m.p.(分解)＝190℃；

Rf＝0.5(CH2Cl2/MeOH 95/5)。

MS(IS)：[MH]+＝432；[M+Na]+＝455。

元素分析：计算值：C 69.44，H 5.56，N 6.48；实测值：C69.46，H 5.55，N 6.51。

1H NMR(CDCl3)δ＝0.83-0.88(t，3H，CH3)，1.35(s，9H，t-Bu)，1.95-2.27 (m(double multiplet)，2H，CH2)，2.91-(2.96-3.01)3.06(dd，2H，CH2)， 5.38(s，2H，CH2)，7.36(s，1H，CH)，7.68-7.75(t，1H，CHAr)，7.83-7.90(t， 1H，CHAr)，7.97-8.00(d，1H，CHAr)，8.22-8.25(d，1H，CHAr)，8.46(s，1H， CHAr)。

13C NMR(CDCl3)δ＝7.5；28.1；31.6；43.7；50.6；82.2；85.2；94.0；114.3； 128.5；128.9；130.1；131.2；131.7；149.3；151.8；153.0；167.4；170.2。

实施例6

(3-乙基-1，13-二氧-11，13-二氢-1H，3H-呋喃并(furo) [3′，4′：6，7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-3-基)乙酸(ST2085)

将110毫克(0.25毫摩尔)的EM 21/2溶解于1.5毫升的1∶1 CH2Cl2/TFA混合物中。将混合物在室温下搅拌16小时。然后蒸发溶剂 至干，得到94毫克产物，为黄色固体(0.25毫摩尔，定量产率)。

C21H16N2O5(376.4)；m.p.(分解)＝242℃；

Rf＝0.25(CH2Cl2/MeOH 95/5)。

MS(IS)：[MH]+＝377；[M+Na]+＝399；[M-1]-＝375。

元素分析：计算值：C 67.02，H 4.26，N 7.45；实测值C 67.05， H 4.28，N 7.49。

1H NMR(DMSO-d6)δ＝0.64-0.70(t，3H，CH3)，2.03-2.16(m，2H，CH2)， 3.05-(3.10-3.30)3.35(dd，2H，CH2)，4.00-4.75(broad，1H，OH)，5.33(s， 2H，CH2)，7.65(s，1H，CH)，7.73-7.78(t，1H，CHAr)，7.84-7.90(t，1H， CHAr)，8.15-8.18(d，2H，CHAr)，8.73(d，1H，CHAr)。

13C NMR(CDCl3)δ＝7.7；31.2；41.6；51.5；85.3；94.5；113.5；129.0； 129.1；129.4；129.8；131.4；131.9；132.6；148.8；152.5；153.5；156.0； 167.4；170.5；170.6。