首页 / 专利库 / 专利权 / 第I章 / 国际申请 / 请求书 / 保护类型 / 专利 / 一种耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体

一种耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体

阅读:438发布:2021-04-14

专利汇可以提供一种耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且通过体外分子定向进化获得耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体,属于基因工程技术领域。本 发明 公开了由嗜热藻(Thermosynechococcuselongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基作为亲本,经体外分子定向进化获得的热 稳定性 提高的突变体。在突变体的 氨 基酸序列中,涉及到的氨基酸突变Val43Thr、Ser45Ala和Ala143Pro中的一种或几种组合。在65℃下 半衰期 t50来表示,这些突变体的 热稳定性 较亲本得到了提高。本 专利 也公开了编码别藻蓝蛋白β亚基突变体的DNA序列和宿主细胞。,下面是一种耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体专利的具体信息内容。

1.一种耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体,其特征在于:所述突变体为野生型嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-ApcB)的43位、45位和143位中的一种或几种位点的突变。
2.按权利要求1所述的耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体,其特征在于:所述野生型嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-ApcB)的Val-43突变为Thr。
3.按权利要求1所述的耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体,其特征在于:所述野生型嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-ApcB)的Ser-45突变为Ala。
4.按权利要求1所述的耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体,其特征在于:所述野生型嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-ApcB)的Ala-143突变为Pro。
5.按权利要求1所述的耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体,其特征在于:由亲本嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-ApcB)进行体外分子定向进化,通过易错PCR和定点突变,获得别藻蓝蛋白β亚基43位、45位和143位中的一种或几种突变组合的突变体。
6.按权利要求5所述的耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体,其特征在于:所述用于表达所述突变体的表达载体为大肠杆菌表达载体;宿主细胞为大肠杆菌。

说明书全文

一种耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体

技术领域

[0001] 本发明涉及基因工程技术领域,具体的说是一种耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体。

背景技术

[0002] 别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)藻类重要的色素蛋白,与藻红蛋白、藻蓝蛋白和连接蛋白等一起构成藻胆体,具有光能捕获和传递的作用。每分子的别藻蓝蛋白含有两条结构相似的多肽链α和β,α亚基和β亚基分别含有约160~180个基酸残基,二者的比例通常为1:1。每个亚基上分别共价连接有一个藻蓝胆素(PCB)色基,使别藻蓝蛋白具有特定的吸收光谱,λmax≈650nm。目前,别藻蓝蛋白已获得高纯度晶体,并通过高分辨率的X-射线晶体衍射确定了高级结构,别藻蓝蛋白是(αβ)3三聚体,美国结构生物学合作研究协会的蛋白质数据库(http://www.pdb.org/)已经收录了5个别藻蓝蛋白的高级结构。别藻蓝蛋白作为一种天然的荧光试剂,拥有诸多优点:1、别藻蓝蛋白在含环境中高度可溶,非特异性结合的影响小。2、别藻蓝蛋白所发荧光为远红光,不为其它生物物质自发猝灭;3、别藻蓝蛋白的荧光激发和发射的斯托克斯位移较大;4、藻胆蛋白易于与其它分子结合,形成多种交联体可以用位于可见光区的单一激发光激发,发射不同颜色的荧光。
[0003] 别藻蓝蛋白作为荧光试剂也存在一些不足:1、从藻类提取别藻蓝蛋白工艺复杂,成本高,价格昂贵,如Cyanotech等公司别藻蓝蛋白售价高达5000-35000美元/克(参:http://www.phycobiliprotein.com);2、尤其是,别藻蓝蛋白在高度稀释时解离为单体,造成别藻蓝蛋白光谱畸变。专利“一种制备别藻蓝蛋白荧光蛋白质的方法,200710029673.X”,“一种别藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法(申请号:200810157782.4)”,提供了一种利用基因工程方法生产制备重组别藻蓝蛋白亚基的方法,相对于天然别藻蓝蛋白,重组别藻蓝蛋白亚基属于蛋白单体,不存在单体和多聚体之间的变化。但是这类重组蛋白质的热稳定性较低,在与核酸交联制备荧光探针过程中容易失活,热稳定下差限制了其应用范围。
[0004] 体外分子定向进化属于非理性设计,是指在实验室通过模拟达尔文自然进化的过程,针对某一蛋白质的编码基因,通过诱变技术构建突变体库,然后在一定的筛选压下,获得某些特性得以改善或提高的突变体。体外分子进化在提高蛋白质热稳定性方面取得了很大的成功。
[0005] 大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚,外源基因表达水平高,抗污染能力强等特点,是分子生物学和生物技术产业化过程中重要的工具。

发明内容

[0006] 本发明目的在于提供一种耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体。
[0007] 本发明采用的技术方案为:
[0008] 一种耐热的重组别藻蓝蛋白β亚基突变体,所述突变体为野生型嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-ApcB)的43位、45位和143位中的一种或几种位点的突变。
[0009] 所述野生型嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-ApcB)的Val-43突变为Thr。
[0010] 所述野生型嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-ApcB)的Ser-45突变为Ala。
[0011] 所述野生型嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-ApcB)的Ala-143突变为Pro。
[0012] 由亲本嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-ApcB)进行体外分子定向进化,通过易错PCR和定点突变,获得别藻蓝蛋白β亚基43位、45位和143位中的一种或几种突变组合的突变体。
[0013] 所述用于表达所述突变体的表达载体为大肠杆菌表达载体;宿主细胞为大肠杆菌。
[0014] 另,以65℃下半衰期t50来表示,由下表可知各个突变体的热稳定性较亲本得到了提高。
[0015] 表1突变体氨基酸突变位点及其半衰期
[0016]
[0017] 本发明的有益效果:本发明运用易错PCR、定点突变等方法对嗜热藻别藻蓝蛋白β亚基体外定向进化,获得了嗜热藻别藻蓝蛋白β亚基突变体,以半衰期t50表示,突变体的热稳定性得到了提高。

具体实施方式

[0018] 热稳定性提高的别藻蓝蛋白β亚基(holo-ApcB)突变体:
[0019] 耐热的holo-ApcB突变体,由亲本嗜热藻(Thermosynechococcuselongatus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-ApcB)基因出发,进行体外分子定向进化,通过易错PCR和定点突变,获得holo-ApcB突变体,亲本holo-ApcB氨基酸序列SEQ ID NO:1中在某些氨基酸取代位置发生突变,在突变体的氨基酸序列中,包括氨基酸突变Val43Thr、Ser45Ala和Ala143Pro以及上述氨基酸两个或三个突变的组合。以t50表示holo-ApcB亲本和突变体的热稳定性,holo-ApcB突变体的稳定性得到了提高,各突变体的t50如表1所示。
[0020] 表1holo-ApcB亲本和突变体的半衰期
[0021]
[0022] 下列实施例中涉及到的培养基配方如下:
[0023] LB液体培养基:蛋白胨1%,酵母提取物0.5%,NaCl 1%,pH 7.0
[0024] LB固体培养基:在LB液体培养集中,加入1%琼脂粉。
[0025] 培养基中单位为(W/V%)。
[0026] 实施例1、基因的克隆和表达载体的构建
[0027] 以嗜热藻(Thermosynechococcus elongatus BP-1)基因组DNA为模板,利用特异引物apcBF和apcBR进行别藻蓝蛋白β亚基基因的扩增。
[0028] 以聚胞藻Synechocystis sp.PCC6803基因组DNA为模板,利用特异引物Ho1F和Ho1R进行PCR扩增,获得Ho1基因。
[0029] 以聚胞藻Synechocystis sp.PCC6803基因组DNA为模板,利用特异引物PcyAF和PcyAR进行PCR扩增,获得PcyA基因。
[0030] PCR扩增条件:94℃预变性5min,94℃变性1min,54℃,退火1min,72℃延伸1min,30个循环。
[0031] 其中扩增apcB基因上下游引物分别为:
[0032] apcBF:ATAGAGCTCGATGCA AGACGCGATTACCG
[0033] apcBR:ATAGCGGCCGCTTAGCTTAAGCCAGAGCAG
[0034] 下划线表示酶切位点,分别为SacI和NotI。
[0035] 扩增ho1基因上下游引物分别为:
[0036] Ho1F:5’TGCATATGAGTGTCAACTTAGCTTCCCAG3’
[0037] Ho1R:5’TTGATATCCTAGCCTTCGGAGGTGGCGAG3’
[0038] 酶切位点分别为:NdeI和EcoRV
[0039] 扩增pcyA基因上下游引物分别为:
[0040] pcyAF:5’TTGATATCAATAAGGAGATATCACATGGCCGTCACTGATTTAAGTTTGACC3’[0041] pcyAR:5’TGCTCGAGTTATTGGATAACATCAAATAAGAC3’
[0042] 酶切位点分别为:EcoRV和XhoI
[0043] PCR产物分别经DNA纯化试剂盒纯化后,其中apcB基因用SacI和NotI酶切;酶切产物与经过同样双酶切的质粒pRSFDuet-1进行连接,构建的质粒命名为pRSFDuet-apcB。Ho1基因用NdeI和EcoRV双酶切,pcyA基因用EcoRV和XhoI双酶切。将Ho1和pcyA基因依次连接于pCDFDuet-1质粒中,构建获得的质粒命名为pCDFDuet-PCB。通过DNA序列测定测序保证序列的正确性。将pRSFDuet-apcB和pCDFDuet-PCB等量混合后转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,将转化细胞涂布于含有100μg/mL卡那霉素和50μg/mL壮观霉素的LB平板上,筛选得到阳性克隆。
[0044] 实施例2、嗜热藻别藻蓝蛋白β亚基基因apcB的随机突变以及突变体库的构建[0045] 利用表2中的PCR体系,以实施例1中构建好的质粒pRSFDuet-apcB为模板进行PCR扩增,向holo-ApcB基因中分别引入核苷酸突变。
[0046] 表2易错PCR扩增体系
[0047]PCR Grade Water 36μL
10×TITANIUM Taq缓冲液 5μL
MnSO4(8mM) 4μL
dGTP(2mM) 1μL
50×Diversify dNTP Mix 1μL
50×dNTP Mix 0μL
Primer Mix 1μL
Tamplate(模板) 1μL
TITANIUM Taq酶 1μL
[0048] 其中上下游引物为:
[0049] MutF:CGAATTCGAGCTCGATGCAAGACGCGATTA
[0050] MutR:GCATTATGCGGCCGCTTAGCTTAAGCCAGA
[0051] PCR扩增条件:94℃,预变性30S;94℃变性30S;68℃,退火延伸1min,25个循环,68℃,保温1min。
[0052] 易错PCR扩增产物经DNA纯化试剂盒纯化后,经过限制性内切酶SacI和NotI酶切,酶切产物再经过胶回收纯化,回收产物与经过同样双酶切的质粒pRSFDuet-apcB进行连接,连接产物和质粒pCDFDuet-PCB混匀后转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。转化产物转移至装有3mL LB培养基(含有100μg/mL卡那霉素和50μg/mL壮观霉素)的试管中,37℃,100RPM条件下培养。当培养物至OD600为0.5左右时,试管中加入1mM的IPTG,让后将试管放入28℃培养箱中继续培养。8小时后,取出试管放置在4℃箱中,备用。
[0053] 实施例3、热稳定holo-apcB突变体的筛选
[0054] 将实施例2中准备好的大肠杆菌菌液,离心后弃上清,菌体用20mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)洗涤,并用磷酸盐缓冲液悬浮,使OD600为0.1,然后取1mL放入1.5EP管中。将EP管置于37℃水浴锅中,黑暗条件下,处理16小时。处理后的菌液用于流式细胞仪初步筛选。
[0055] 初筛:利用流式细胞仪对热稳定的突变体进行初步筛选,流式细胞仪的激发光设定为488nm,荧光检测波长设定为643nm,分选速度设定为每分钟3000个细胞。将分选后的大肠杆菌细胞涂布于含有100μg/mL卡那霉素和50μg/mL壮观霉素的LB平板上,37℃下过夜培养,平板上长出的克隆即为初步筛选得到菌株。
[0056] 复筛:将流式细胞仪初步筛选得到的菌株接种入25mL LB培养基中(含有100μg/mL卡那霉素和50μg/mL壮观霉素),37℃条件下培养,菌体生长至0.5左右时加入1mM的IPTG。将培养转入28℃培养箱中继续培养。诱导16小时后,离心收集菌体。按照每克湿菌体加入30mL结合缓冲液(20mmol/L磷酸钠,0.5mol/L氯化钠,20mmol/L咪唑,pH7.4)比例,将菌体重悬,4℃条件下超声破碎细胞30min。破碎液在9000rpm,4℃条件下离心30min,2+
收集上清液,上样于Ni 亲和色谱柱,用5倍柱体积的结合缓冲液(结合缓冲液为20mmol/L磷酸钠,500mol/L氯化钠,20mmol/L咪唑,pH7.4)冲洗色谱柱后,用洗脱缓冲液(洗脱缓冲液为20mmol/L磷酸钠,500mol/L氯化钠,500mmol/L咪唑,pH 7.4)洗脱。洗脱液经G-25脱盐柱脱盐后即得到目的蛋白。
[0057] 测定各突变体的半衰期,获得三个热稳定性明显提高的突变体。通过DNA序列测定,利用三联体密码确定holo-ApcB氨基酸序列发生突变的位点。三个突变体半衰期及其氨基酸突变位点如表3所示。
[0058] 表3突变体突变位点及其半衰期
[0059]突变体 氨基酸取代位置 t50 t50提高倍数
亲本 2.3h 1.0
-
突变体1-3 Val43Thr 3.3h 1.4
突变体1-6 Ser45Ala 4.8h 2.1
突变体1-7 Ala143Pro 3.9h 1.7
[0060] 实施例4、holo-ApcB突变体半衰期的测定
[0061] 取纯化后的holo-ApcB亲本及其突变体蛋白溶液,分装到1.5mL EP管中,每管0.5mL。将EP管置于65℃水浴锅中,黑暗条件下热处理。样品分别热处理0、1、2、3、4小时,用荧光分光光度计测定蛋白样品的荧光强度。激发光为590nm,测定643nm下的荧光强度。
计算热处理后holo-ApcB突变体的残余荧光强度,已残余荧光强度百分比的自然对数对时间做图,直线的斜率即为失活常数Kinact,由公式t50=LN(2)/Kinact,即得到突变体在65℃下的半衰期。
[0062] 实施例5、定点突变组合holo-ApcB突变体的基因突变位点
[0063] 经过易错PCR突变文库的构建和筛选,得到了表3中的holo-ApcB突变体。为了进一步提高其热稳定性,将其中的突变体位点进行定点突变组合(定点突变可以利用市场上销售的定点试剂盒进行),将含有上述突变位点组合的PCR产物经过限制性内切酶SacI和NtI酶切,酶切产物再经过胶回收纯化,回收产物与经过同样双酶切的质粒进行连接,并将连接产物转化大肠杆菌BL21(DE3),得到表达菌株。
[0064] 按照实施例3的方法纯化蛋白,按照实施例4的方法测定突变体的半衰期,得到了65℃下热稳定性进一步提高的突变体,如表4所示。
[0065] 表3突变体突变位点及其半衰期
[0066]
[0067] 上面列举的是本发明的若干个实施例,显然,本发明不限于以上实施例。SEQ ID NO:1
[0068] 嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基[0069] 1 MET Gln Asp Ala Ile Thr Ala Val Ile Asn Ala Ser Asp Val Gln Gly Lys Tyr Leu Asp
[0070] 21 Thr Ala Ala MET Glu Lys Leu Lys Ala Tyr Phe Ala Thr Gly Glu Leu Arg Val Arg Ala
[0071] 41 Ala Ser Val Ile Ser Ala Asn Ala Ala Asn Ile Val Lys Glu Ala Val Ala Lys Ser Leu
[0072] 61 Leu Tyr Ser Asp Ile Thr Arg Pro Gly Gly Asn MET Tyr Thr Thr Arg Arg Tyr Ala Ala
[0073] 81 Cys Ile Arg Asp Leu Asp Tyr Tyr Leu Arg Tyr Ala Thr Tyr Ala MET Leu Ala Gly Asp
[0074] 101 Pro Ser Ile Leu Asp Glu Arg Val Leu Asn Gly Leu Lys Glu Thr Tyr Asn Ser Leu Gly
[0075] 121 Val Pro Ile Ala Ala Thr Val Gln Ala Ile Gln Ala MET Lys Glu Val Thr Ala Ser Leu
[0076] 141 Val Gly Ala Asp Ala Gly Lys Glu MET Gly Ile Tyr Phe Asp Tyr Ile Cys Ser Gly Leu
[0077] 161 Ser ***
[0078] (a)序列特征:
[0079] ●长度:161
[0080] ●类型:氨基酸序列
[0081] ●链型:单链
[0082] ●拓扑结构:线性
[0083] (b)分子类型:蛋白质
[0084] (c)假设:否
[0085] (d)反义:否
[0086] (e)最初来源:嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)
[0087] SEQ ID NO:2
[0088] 嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基突变体[0089] 1 MET Gln Asp Ala Ile Thr Ala Val Ile Asn Ala Ser Asp Val Gln Gly Lys Tyr Leu Asp
[0090] 21 Thr Ala Ala MET Glu Lys Leu Lys Ala Tyr Phe Ala Thr Gly Glu Leu Arg Val Arg Ala
[0091] 41 Ala Ser Thr Ile Ala Ala Asn Ala Ala Asn Ile Val Lys Glu Ala Val Ala Lys Ser Leu
[0092] 61 Leu Tyr Ser Asp Ile Thr Arg Pro Gly Gly Asn MET Tyr Thr Thr Arg Arg Tyr Ala Ala
[0093] 81 Cys Ile Arg Asp Leu Asp Tyr Tyr Leu Arg Tyr Ala Thr Tyr Ala MET Leu Ala Gly Asp
[0094] 101 Pro Ser Ile Leu Asp Glu Arg Val Leu Asn Gly Leu Lys Glu Thr Tyr Asn Ser Leu Gly
[0095] 121 Val Pro Ile Ala Ala Thr Val Gln Ala Ile Gln Ala MET Lys Glu Val Thr Ala Ser Leu
[0096] 141 Val Gly Pro Asp Ala Gly Lys Glu MET Gly Ile Tyr Phe Asp Tyr Ile Cys Ser Gly Leu
[0097] 161 Ser ***
[0098] (a)序列特征:
[0099] ●长度:161
[0100] ●类型:氨基酸序列
[0101] ●链型:单链
[0102] ●拓扑结构:线性
[0103] (b)分子类型:蛋白质
[0104] (c)假设:否
[0105] (d)反义:否
[0106] (e)最初来源:嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)
[0107] SEQ ID NO:3
[0108] 嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基的核苷酸序列
[0109] 1 ATGCAAGACG CGATTACCGC TGTCATCAAC GCCTCTGACG TGCAAGGCAA ATACCTCGAC
[0110] 61 ACCGCCGCCA TGGAGAAGCT GAAAGCTTAC TTCGCAACGG GTGAACTACG GGTGCGGGCT
[0111] 121 GCAAGCGTCA TCAGTGCCAA TGCCGCCAAC ATTGTCAAAG AAGCAGTGGC CAAATCCCTG
[0112] 181 CTGTACTCTG ACATCACCCG TCCCGGTGGC AACATGTACA CCACCCGTCG CTATGCAGCC
[0113] 241 TGTATCCGCG ACCTCGACTA CTACCTGCGC TATGCCACCT ATGCCATGTT GGCTGGAGAT
[0114] 301 CCTTCTATCC TCGATGAGCG GGTGCTCAAT GGGTTGAAAG AAACCTACAA CTCCTTGGGT
[0115] 361 GTGCCCATCG CTGCCACTGT CCAAGCCATC CAAGCCATGA AAGAAGTCAC CGCCAGCTTG
[0116] 421 GTGGGTGCAG ATGCCGGCAA AGAAATGGGC ATCTACTTTG ACTACATCTG CTCTGGCTTA
[0117] 481 AGCTAA
[0118] (a)序列特征:
[0119] ●长度:486
[0120] ●类型:基序列
[0121] ●链型:单链
[0122] ●拓扑结构:线性
[0123] (b)分子类型:DNA
[0124] (c)假设:否
[0125] (d)反义:否
[0126] (e)最初来源:嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)
[0127] SEQ ID NO:4
[0128] 嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基突变体的核苷酸序列
[0129] 1 ATGCAAGACG CGATTACCGC TGTCATCAAC GCCTCTGACG TGCAAGGCAA ATACCTCGAC
[0130] 61 ACCGCCGCCA TGGAGAAGCT GAAAGCTTAC TTCGCAACGG GTGAACTACG GGTGCGGGCT
[0131] 121 GCAAGCACCA TCGCTGCCAA TGCCGCCAAC ATTGTCAAAG AAGCAGTGGC CAAATCCCTG
[0132] 181 CTGTACTCTG ACATCACCCG TCCCGGTGGC AACATGTACA CCACCCGTCG CTATGCAGCC
[0133] 241 TGTATCCGCG ACCTCGACTA CTACCTGCGC TATGCCACCT ATGCCATGTT GGCTGGAGAT
[0134] 301 CCTTCTATCC TCGATGAGCG GGTGCTCAAT GGGTTGAAAG AAACCTACAA CTCCTTGGGT
[0135] 361 GTGCCCATCG CTGCCACTGT CCAAGCCATC CAAGCCATGA AAGAAGTCAC CGCCAGCTTG
[0136] 421 GTGGGTCCAG ATGCCGGCAA AGAAATGGGC ATCTACTTTG ACTACATCTG CTCTGGCTTA
[0137] 481 AGCTAA
[0138] (a)序列特征:
[0139] ●长度:486
[0140] ●类型:碱基序列
[0141] ●链型:单链
[0142] ●拓扑结构:线性
[0143] (b)分子类型:DNA
[0144] (c)假设:否
[0145] (d)反义:否
[0146] (e)最初来源:嗜热藻(Thermosynechococcus elongtus BP-1)
高效检索全球专利

专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台,是提供专利分析,专利查询,专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。

我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据,免费查、免费专利分析。

申请试用

分析报告

专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析,涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度,系统通过AI智能系统对图表进行解读,只需1分钟,一键生成行业专利分析报告。

申请试用

QQ群二维码
意见反馈