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大麻素受体的杂环调节剂

阅读:508发布:2021-04-14

专利汇可以提供大麻素受体的杂环调节剂专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且提供了调节大麻素受体的杂环化合物。本 发明 说明书 还描述了含有这些化合物的药物组合物、使用这些化合物作为大麻素受体调节剂的方法以及用于合成这些化合物的方法。,下面是大麻素受体的杂环调节剂专利的具体信息内容。

1.一种下列结构式I的化合物或其盐:
其中:
1 4
R 选自NHR ;
2
R 是苯基;
3
R 为氢;和
4
R 选自被一个卤素取代的苯基,以及C3-12环烷基。
2.一种下列结构式III的化合物或其盐:
其中:
R1选自NHR5;
R2是苯基;
R3和R4是氢;
R5选自被一个卤素取代的苯基,以及C3-12环烷基。
3.一种下列结构式V的化合物或其盐:
其中:
1
R 是环己基基;和
2
R 为苯基。
4.一种药物组合物,所述药物组合物包含治疗有效量的化合物,所述化合物选自权利要求1、2或3的化合物或其药学上可接受的盐。
5.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐,其中所述化合物是:
6.一种化合物或其药学上可接受的盐,其中所述化合物是:
7.一种化合物或其药学上可接受的盐,其中所述化合物是:
8.一种下列结构式VI的化合物或其盐:
其中:
-q为0-2的整数;
-X不存在;
-Z表示-O-、-S-或-Se-;
1 4
R 选自NHR ;
2
R 选自C1-6烷基;
3
R 是苯基;
4
R 选自被一个卤素取代的苯基,以及C3-12环烷基;
8 9
R 和R 是氢。
9.权利要求7的化合物在制备药物中的用途,所述药物用于调节大麻素受体。
10.权利要求1的化合物在制备药物中的用途,所述药物用于调节大麻素受体。
11.权利要求2的化合物在制备药物中的用途,所述药物用于调节大麻素受体。
12.权利要求3的化合物在制备药物中的用途,所述药物用于调节大麻素受体。
13.权利要求5的化合物在制备药物中的用途,所述药物用于调节大麻素受体。
14.权利要求6的化合物在制备药物中的用途,所述药物用于调节大麻素受体。
15.权利要求8的化合物在制备药物中的用途,所述药物用于调节大麻素受体。
16.治疗有效量的权利要求7的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗大麻素受体介导的疾病
17.治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗大麻素受体介导的疾病。
18.治疗有效量的权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗大麻素受体介导的疾病。
19.治疗有效量的权利要求3的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗大麻素受体介导的疾病。
20.治疗有效量的权利要求5的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗大麻素受体介导的疾病。
21.治疗有效量的权利要求6的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗大麻素受体介导的疾病。
22.治疗有效量的权利要求8的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗大麻素受体介导的疾病。
23.治疗有效量的权利要求7的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的神经病性疼痛
24.治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的神经病性疼痛。
25.治疗有效量的权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的神经病性疼痛。
26.治疗有效量的权利要求3的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的神经病性疼痛。
27.治疗有效量的权利要求5的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的神经病性疼痛。
28.治疗有效量的权利要求6的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的神经病性疼痛。
29.治疗有效量的权利要求8的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的神经病性疼痛。
30.治疗有效量的权利要求7的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的瘾癖。
31.治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的瘾癖。
32.治疗有效量的权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的瘾癖。
33.治疗有效量的权利要求3的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的瘾癖。
34.治疗有效量的权利要求5的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的瘾癖。
35.治疗有效量的权利要求6的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的瘾癖。
36.治疗有效量的权利要求8的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途,所述药物用于治疗受治疗者的瘾癖。

说明书全文

大麻素受体的杂环调节剂

发明领域

[0001] 本发明涉及新的杂环化合物和组合物及其作为药物用于治疗疾病的用途。本发明提供调节人或动物受治疗者的大麻素受体活性以治疗疾病的方法。
[0002] 相关申请的交叉引用
[0003] 本申请要求2007年7月13日申请的美国专利申请顺序号60/949,536和2008年3月13日申请的美国专利申请顺序号61/036,321的优先权。这些申请通过引用全部结合到本文中。
[0004] 有关联邦政府资助的研究或开发的声明
[0005] 无。
[0006] 联合研究协议各方名称
[0007] 无。
[0008] 序列表参考
[0009] 无。
[0010] 发明背景
[0011] CB1和CB2是属于GPCR家族的两种大麻素受体,具有非常不同的功能和分布。虽然未获得这些受体的X射线结构,但是根据视紫红质(一种GPCR,属于负责视觉感光的蛋白质)的X射线结构,披露了各种各样的模型。Matsuda LA,Lolait SJ,Brownstein MJ,Young AC,Bonner TI,Structure of a Cannabinoid Receptor and FunctionalExpression of the Cloned cDNA(大麻素受体的结构与克隆cDNA的功能性表达),Nature 1990,346:561-4。CB1在中枢神经系统中大量表达,在基底核、小脑、海和皮质以及在外周神经系统中的密度最大,还在诸如睾丸、眼、膀胱和脂肪细胞等部位进行表达。CB2主要在免疫组织中、在细胞(例如胸腺、骨髓、脾脏、胰脏中的细胞)中以及在神经胶质瘤和皮肤肿瘤细胞中表达。最近证实,CB2受体及其基因转录物广泛分布于脑内。第三种大麻素受体似乎作为某种具有大麻素生物活性但不激活CB1和CB2的化学类似物存在。Di Marzo V,Bifulco M,DePetrocellis L,The Endocannabinoid System and Its TherapeuticExploitation(内源性大麻素系统及其治疗应用),Nat Rev Drug Discov2004,3:771-84。
[0012] 发明简述
[0013] 本发明发现了新的调节CB1和CB2的杂环化合物和药物组合物以及合成和使用所述化合物的方法,包括通过给予所述化合物用于治疗患者的大麻素受体介导的疾病的方法。
[0014] 由下列结构式I和结构式III表示和限定用于治疗大麻素受体介导的疾病和病症的一类杂环化合物或其盐、酯或前药:
[0015]
[0016] 结构式I中:
[0017] R1选自NH2、NHR4、NR4R5,所述基团中的任何原子都可被任选取代;
[0018] R2选自氢、芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0019] R3选自氢、卤素、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;和
[0020] R4和R5独立地变化并且选自芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代,
[0021]
[0022] 结构式III中:1 5 5 6
[0023] R 选自NH2、NHR、NRR,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;2
[0024] R 选自氢、芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;3 4
[0025] R 和R 独立选自氢、卤素、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基;5 6
[0026] R 和R 独立选自芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基;且
[0027] 当R2为氢时,R3不为叔丁基、溴、甲基或
[0028] 本文所提供的杂环化合物具有有益的大麻素受体调节活性,并可用于治疗或预防其中大麻素受体起有效作用的疾病或病症。因此,从大的方面来看,提供包含一种或多种所述化合物连同药学上可接受的载体的药物组合物,以及制备和使用所述化合物和组合物的方法。
[0029] 本文还提供用杂环化合物调节大麻素受体的方法。本文提供用于治疗需要这种治疗的患者的大麻素受体介导的疾病(例如神经病性疼痛或瘾癖(addiction))的方法,该方法包括给予所述患者治疗有效量的杂环化合物或组合物。本文所公开的化合物的用途可用在制备治疗因调节大麻素受体而改善的疾病或病症的药物中。
[0030] 若干附图的简述
[0031] 当结合附图阅读本发明时,可更好地理解上文中的概述以及下文中本发明优选实施方案的详述。然而,应当了解的是,本发明并不局限于本文所显示的精确的安排和手段。
[0032] 为了更全面地理解本发明及其优势,下面参照下列描述并结合附图进行说明,附图中:
[0033] 图1A和图1B表示实施例2的化合物的功能活性数据。
[0034] 图2A和图2B表示实施例3的化合物的功能活性数据。
[0035] 图3A和图3B表示实施例5的化合物的功能活性数据。
[0036] 图4表示对于腹膜内(IP)给予的实施例3的化合物,脚爪缩回阈值(pawwithdrawal threshold)相对于时间的变化。
[0037] 图5表示对于鞘内(IT)给予的实施例3的化合物,脚爪缩回阈值相对于时间的变化。
[0038] 图6表示对于腹膜内给予的实施例3的化合物和腹膜内给予的吗啡,异常性疼痛的逆转是时间的函数。
[0039] 图7表示当用于体外和体内生物学研究时制备实施例3的化合物的合成步骤。
[0040] 图8A和图8B表示在重组人CB1和CB2 GTPγ[35S]测定系统中,CP55,940(图8A)和实施例3的化合物(图8B)的表征。计算得到受体活化平,并表示为相对于1μM CP55,940反应的百分比。
[0041] 图9表示在首次用于实验的大鼠( rat)(n=10只/组)中,不同剂量的实施例3的化合物(腹膜内)对热引起的后脚爪缩回潜伏期的作用。1.0mg/kg、3.0mg/kg和
10mg/kg实施例3的化合物和溶媒的最大可能作用百分比(%MPE)的时程(A)和曲线下面*
积(AUC)(B)。#P<0.01,与溶媒相比。P<0.001,与1.0mg/kg或3.0mg/kg实施例3的+
化合物及与溶媒相比。P<0.05,与1.0mg/kg实施例3的化合物及与溶媒相比。各点表示平均值±标准误差(mean±s.e.mean)。
[0042] 图10A表示脊神经结扎后触觉异常性疼痛的发展。图10B表示腹膜内给予紫杉醇4天后触觉异常性疼痛的发展。各点表示平均值±标准误差。
[0043] 图11A、图11B和图11C表示在脊神经结扎神经病性疼痛模型中,实施例3的化合物(腹膜内)对对侧正常、同侧受损大鼠(n=6只/组)的触觉异常性疼痛的作用。实施例3的化合物以剂量依赖性方式提高神经受损脚爪的缩回阈值。图11A表示5.0mg/kg、10mg/kg和15mg/kg实施例3的化合物的时程。图11B表示曲线下面积(AUC)。图11C表示在脊神经结扎神经病性疼痛模型中,在30分钟时实施例3的化合物抗异常性疼痛作用的剂量反应曲线(ED50=7.48(CI 5.6-9.9)mg/kg,腹膜内)。用5mg/kg(腹膜内)选择性CB2拮抗剂AM630进行预治疗拮抗实施例3的化合物的作用。数据表示为平均值±标准误差。
* +
P<0.001,相对于所有其它组。P<0.05,相对于10mg/kg和15mg/kg实施例3的化合物。
[0044] 图12表示在大鼠脊神经结扎神经病性疼痛模型(n=6只/组)中,CB1和CB2选择性拮抗剂对10mg/kg实施例3的化合物(腹膜内)的抗异常性疼痛作用的作用。仅仅腹膜内给予5mg/kgCB1拮抗剂AM251或5mg/kg选择性CB2拮抗剂AM630没有作用。在给予5mg/kgAM600(腹膜内)后15分钟,给予10mg/kg实施例3的化合物(腹膜内)逆转实施例
3的化合物的抗异常性疼痛作用(AM630+实施例3的化合物组)。用5mg/kg AM251(腹膜内)进行预治疗15分钟后,再用10mg/kg实施例3的化合物(腹膜内)进行治疗不影响实*
施例3的化合物的抗异常性疼痛作用(AM251+实施例3的化合物组)。P<0.001,与溶媒+
组、AM251组、AM630组和AM630+实施例3的化合物组相比。P<0.001,与溶媒组和AM251组相比。
[0045] 图13表示在大鼠脊神经结扎神经病性疼痛模型(n=6只/组)中,阿片样物质拮抗剂纳洛对实施例3的化合物和AM1241诱导的抗异常性疼痛作用的作用。实施例3的化合物(10mg/kg,腹膜内)显著降低CB2选择性激动剂AM1241(15mg/kg,腹膜内)的触觉异常性疼痛阈值。给予阿片样物质拮抗剂纳洛酮(10mg/kg,腹膜内)本身不影响脚爪缩回阈值。用10mg/kg纳洛酮(腹膜内)进行预治疗15分钟后,用10mg/kg实施例3的化合物(腹膜内)进行治疗不影响实施例3的化合物的抗异常性疼痛作用(纳洛酮+实施例3的化合物)。用10mg/kg纳洛酮(腹膜内)进行预治疗逆转15mg/kg AM251(腹膜内)的抗* +异常性疼痛作用。P<0.001,与溶媒和AM1241相比。P<0.001,与溶媒组、纳洛酮组和#
纳洛酮+AM1241组相比。P<0.01,与溶媒组和纳洛酮+AM1241组相比。
[0046] 图14A、图14B、图14C和图14D表示大鼠紫杉醇诱发的神经病性疼痛模型(n=8只/组)中,实施例3的化合物(腹膜内)对热痛觉过敏和触觉异常性疼痛的作用。图14A表示实施例3的化合物以剂量依赖性方式抑制紫杉醇引发的热痛觉过敏。在AM630+实施例3的化合物组中,用5mg/kg AM630(腹膜内)进行预治疗15分钟后,用15mg/kg实施例3的化合物(腹膜内)进行治疗逆转实施例3的化合物的抗痛觉过敏作用(P<0.001)。5mg/kg AM1241(腹膜内)对逆转热痛觉过敏的作用明显小于(P<0.05)15mg/kg实施例3的化合物(腹膜内)中所观察到的作用。图14B表示20分钟时计算得到的抑制热痛觉过敏的实施例3化合物的ED50为13.5mg/kg(腹膜内)(95%CI=8.2-22mg/kg)。图14C显示实施例3的化合物剂量依赖性地减轻该模型的触觉异常性疼痛。图14D表示ED50为24mg/*
kg(腹膜内)的%MPE缩回阈值AUC增加。P<0.05以下,与5mg/kg、10mg/kg和15mg/+ **
kg实施例3的化合物组相比。P<0.05以下,与15mg/kg实施例3的化合物组相比。 P<0.05以下,与10mg/kg和15mg/kg实施例3的化合物组相比。
[0047] 图15表示在开始紫杉醇给药的同时给予实施例3的化合物14天[4天与紫杉醇同时给予,此后继续给予10天]导致100%的大鼠防止紫杉醇诱发的神经病。单独给予紫杉醇4天导致100%的大鼠发生神经病。给予实施例3的化合物4天仅仅导致短暂地防止紫杉醇诱发的神经病。在该模型中,褪黑激素不提供针对神经病的任何保护作用。
[0048] 图16A、图16B、图16C和图16D显示实施例3的化合物缺乏大麻素精神活性作用。在腹膜内给予溶媒、实施例3的化合物、WIN55,212-2和氟哌啶醇(n=6只/组)之后,用开阔法(open field)进行了探究行为试验。在60分钟内给下列参数评分:行走距离(图+
16A)、走动时间(图16B)、直立活动次数(图16C)和小区域进入次数(图16D)。P<0.05,*
相对于溶媒和实施例3的化合物。P<0.05,相对于实施例3的化合物。
[0049] 图17表示大鼠(右脚爪)中实施例3的化合物对紫杉醇诱发的神经病的作用。在给予紫杉醇几天内开始发生外周神经病,但是通过给予实施例3的化合物能防止外周神经病。
[0050] 图18表明大鼠中紫杉醇诱发的外周神经病。在给予紫杉醇几天内开始发生外周神经病,到第10天时达到平稳期。
[0051] 图19A和图19B显示大鼠中实施例3的化合物对紫杉醇诱发的神经病的作用。第1组大鼠接受紫杉醇4天,如图18中的大鼠一样。在第2组~第4组中,在给予0.25ml实施例3的化合物或溶媒;NMP、丙二醇和发色团ELP(25%、25%、10%)与无菌水的混合物后
30分钟给予紫杉醇。第2组和第4组再继续每天接受溶媒(第2组)或实施例3的化合物(第4组)达11天。按照上下法(up-down procedure),使用标准化von Frey单丝,每天测定每只动物两只后脚爪的脚爪缩回阈值。正如所表示一样,每天经腹膜内(IP)继续给予
15mg/kg实施例3的化合物完全防止了紫杉醇引发的机械性异常性疼痛的发生。仅仅经腹膜内给予15mg/kg实施例3的化合物4天无法防止紫杉醇引发的机械性异常性疼痛,但却显著防止紫杉醇引发的机械性异常性疼痛趋于严重。
[0052] 发明详述
[0053] 本文提供的新的化合物包括由下列结构式II限定的化合物或其盐、酯或前药:
[0054]
[0055] 其中:
[0056] R1选自NH2、NHR3、NR3R4,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0057] R2选自氢、芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;和
[0058] R3和R4独立选自芳基、烷基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0059] 本文提供的新的化合物还包括由下列结构式IV限定的化合物或其盐、酯或前药:
[0060]
[0061] 其中:
[0062] R1选自NH2、NHR3、NR3R4,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0063] R2选自氢、芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0064] R3和R4独立选自芳基、烷基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;且2 1
[0065] 当R 为氢时,R 不为NH2、
[0066] 本文提供的新的化合物还包括由下列结构式V限定的化合物或其盐、酯或前药:
[0067]
[0068] 其中:
[0069] R1选自环己基基、哌啶基和邻碘苯胺基;和
[0070] R2为任选取代的苯基;
[0071] 本文提供的新的化合物还包括由下列结构式VI限定的化合物或其盐、酯或前药:
[0072]
[0073] 其中:
[0074] -q为0-2的整数;
[0075] -X不存在或存在并表示-O-、-S-、-Se-、NR6、SO-、-SO2-;
[0076] -Z表示-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-Se-或NR7;
[0077] R1选自NH2、NHR4、NR4R5、芳基、杂芳基、烷基(aheteroaryl alkyl)、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0078] R2选自氢、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基、烷氧基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0079] R3选自芳基、杂芳基、烷基(a heteroaryl,alkyl)、环烷基、杂环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0080] R4和R5独立地变化并且选自芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0081] R6选自氢、芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0082] R7选自氢、芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代。
[0083] 本文提供的新的化合物还包括下列结构式VII限定的化合物或其盐、酯或前药:
[0084]
[0085] 其中:
[0086] -q为0-2的整数;
[0087] -X不存在或存在并表示-O-、-S-、-Se-、NR6、SO-、-SO2-;
[0088] -Z表示-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-Se-或NR7;
[0089] R1选自NH2、NHR4、NR4R5、芳基、杂芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0090] R2选自氢、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基、烷氧基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0091] R3选自芳基、杂芳基、烷基、环烷基、杂环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0092] R4和R5独立地变化并且选自芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0093] R6选自氢、芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0094] R3和R6结合在一起可形成含有3-10个碳原子并最终被一个或多个杂原子或者13
被-CO-、-SO-、-SO2-、-CHOH-或-NR -间隔开来的环烷基;
[0095] R7选自氢、芳基、烷基、环烷基、芳烷基、烯基和炔基,所述基团中的任何碳原子都可被任选取代;
[0096] R8和R9选自氢、烷基、烷氧基,或者R8和R9结合在一起可形成羰基。
[0097] 本文所使用的下列术语具有规定的含义。
[0098] 本文单独或组合使用的术语“酰基”是指与烯基、烷基、芳基、环烷基、杂芳基、杂环基或任何其它部分连接的羰基,其中连接羰基的原子是碳。“乙酰基”是指-C(O)CH3基团。“烷基羰基”或“烷酰基”是指烷基通过羰基与母体分子部分连接。这类基团的实例包括甲基羰基和乙基羰基。酰基的实例包括甲酰基、烷酰基和芳酰基。
[0099] 本文单独或组合使用的术语“烯基”是指具有一个或多个双键并含有2-20个、优选2-6个碳原予的直链或支链基。亚烯基是指在两个或更多个位置上连接的碳-碳双键系统,例如亚乙烯基[(-CH=CH-),(-C::C-)]。合适烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、2-甲基丙烯基、1,4-丁二烯基等。
[0100] 本文单独或组合使用的术语“烷氧基”是指烷基醚基团,其中术语烷基如下定义。合适烷基醚基团的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。
[0101] 本文单独或组合使用的术语“烷基”是指含有1-20(包括20)个、优选1-10个、更优选1-6个碳原子的直链或支链烷基。烷基可如本文定义的一样被任选取代。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、辛基、壬基(noyl)等。本文单独或组合使用的术语“亚烷基”是指由直链或支链饱和烃基衍生的在两个或更多个位置上连接的饱和脂族基,例如亚甲基(-CH2-)。
[0102] 本文单独或组合使用的术语“烷基氨基”是指烷基通过氨基与母体分子部分连接。合适的烷基氨基可以是一烷基化或二烷基化形成基团,例如N-甲基氨基、N-乙基氨基、N,N-二甲基氨基、N,N-乙基甲基氨基等。
[0103] 本文单独或组合使用的术语“烷叉基(alkylidene)”是指烯基中碳-碳双键的1个碳原子属于烯基与之连接的部分。
[0104] 本文单独或组合使用的术语“烷硫基”是指烷基硫醚(R-S-)基团,其中术语烷基如上定义,并且其中硫可以被单氧化或双氧化。合适烷基硫醚基团的实例包括甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、异丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基、甲磺酰基、乙亚磺酰基等。
[0105] 本文单独或组合使用的术语“炔基”是指具有一个或多个三键且含有2-20个、优选2-6个、更优选2-4个碳原子的直链或支链烃基。“亚炔基”是指碳-碳三键在2个位置上连接,例如亚乙炔基(-C:::C-,-C≡C-)。炔基的实例包括乙炔基、丙炔基、羟基丙炔基、丁炔-1-基、丁炔-2-基、戊炔-1-基、3-甲基丁炔-1-基、己炔-2-基等。
[0106] 本文单独或组合使用的术语“酰氨基”和“氨基甲酰基”是指如下定义的氨基通过羰基与母体分子部分连接,反之亦然。本文单独或组合使用的术语“C-酰氨基”是指-C(=O)-NR2基团,其中R如本文定义。本文单独或组合使用的术语“N-酰氨基”是指RC(=O)NH-基团,其中R如本文定义。本文单独或组合使用的术语“酰氨基”包括酰基通过氨基与母体部分连接。“酰氨基”的实例为乙酰氨基(CH3C(O)NH-)。
[0107] 本文单独或组合使用的术语“氨基”是指-NRR’,其中R和R’独立选自氢、烷基、酰基、杂烷基、芳基、环烷基、杂芳基和杂环烷基,所述任一基团本身可被任选取代。
[0108] 本文单独或组合使用的术语“芳基”是指含有1、2或3个环的碳环芳族系统,其中这类环可以悬挂方式连接在一起,或者可以稠合。术语“芳基”包括芳族基团例如苄基、苯基、基、蒽基、菲基、茚满基、茚基、轮烯基、薁基、四氢萘基和联苯基。
[0109] 本文单独或组合使用的术语“芳基烯基”或“芳烯基”是指芳基通过烯基与母体分子部分连接。
[0110] 本文单独或组合使用的术语“芳基烷氧基”或“芳烷氧基”是指芳基通过烷氧基与母体分子部分连接。
[0111] 本文单独或组合使用的术语“芳基烷基”或“芳烷基”是指芳基通过烷基与母体分子部分连接。
[0112] 本文单独或组合使用的术语“芳基炔基”或“芳炔基”是指芳基通过炔基与母体分子部分连接。
[0113] 本文单独或组合使用的术语“芳基烷酰基”或“芳烷酰基”或“芳酰基”是指由芳基取代的烷烃羧酸衍生的酰基,例如苯甲酰基、萘甲酰基(napthoyl)、苯乙酰基、3-苯丙酰基(氢化肉桂酰基)、4-苯丁酰基、(2-萘基)乙酰基、4-氯氢化肉桂酰基等。
[0114] 本文单独或组合使用的术语“芳氧基”是指芳基通过氧基与母体分子部分连接。
[0115] 根据本发明,术语烷基应理解为是指直链、任选支链和任选氟化基团。在某些实施方案中,具有6-12个碳原子的烷基为2-甲基-戊-2-基、3,3-二甲基-丁-1-基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十二烷基。含有1-3个碳原子的“烷基”为分别含有1-3个碳原子的直链或支链基团。优选含有1-3个碳原子的烷基为甲基、乙基、正丙基或2-丙基。术语“烷氧基”应理解为是指含有1-3个碳原子的基团,例如甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基。
[0116] 术语“芳基”是指苯基或萘基,最终被以下基团单取代或二取代:至少一个卤素、含有1-3个碳原子的烷基、烷氧基、芳基、硝基官能团、聚醚基、杂芳基、苯甲酰基、烷基酯基、羧酸、被乙酰基或苯甲酰基任选保护的羟基、或者被乙酰基或苯甲酰基任选保护或者被至少一个含有1-12个碳原子的烷基任选取代的氨基官能团。
[0117] 术语“杂芳基”是指芳基被一个或多个杂原子间隔开来,例如噻吩基、噻唑基或咪唑基,其被以下基团任选取代:至少一个卤素、含有1-3个碳原子的烷基、烷氧基、芳基、硝基官能团、聚醚基、杂芳基、苯甲酰基、烷基酯基、羧酸、被乙酰基或苯甲酰基任选保护的羟基、或者被乙酰基或苯甲酰基任选保护或者被至少一个含有1-6个碳原子的烷基任选取代的氨基官能团。
[0118] 术语“聚醚基”是指含有被至少一个氧原子间隔开来的2-6个碳原子的聚醚基,例如甲氧基甲氧基、乙氧基甲氧基或甲氧基乙氧基甲氧基。
[0119] 术语“卤素原子”包括但不限于氟、氯或溴原子。
[0120] 本文单独或组合使用的术语“苯并(benzo/benz)”是指由苯衍生的二价基团C6H4=。实例包括苯并噻吩和苯并咪唑。
[0121] 本文单独或组合使用的术语“氨基甲酸酯”是指氨基甲酸(-NHCOO-)的酯,其可自氮端或酸端与母体分子部分连接,并可如本文定义的一样被任选取代。
[0122] 本文单独或组合使用的术语“O-氨基甲酰基”是指-OC(O)NRR’基团,其中R和R’如本文定义。
[0123] 本文单独或组合使用的术语“N-氨基甲酰基”是指ROC(O)NR’-基团,其中R和R’如本文定义。
[0124] 本文使用的术语“羰基”当单用时包括甲酰基[-C(O)H],当组合使用时为-C(O)-基团。
[0125] 本文使用的术语“羧基”是指-C(O)OH或相应的“羧酸根”阴离子,例如在羧酸盐中的“羧酸根”阴离子。“O-羧基”是指RC(O)O-基团,其中R如本文定义。“C-羧基”是指-C(O)OR基团,其中R如本文定义。
[0126] 本文单独或组合使用的术语“氰基”是指-CN。
[0127] 本文单独或组合使用的术语“环烷基”又或者“碳环”是指饱和或部分饱和的单环、二环或三环烷基,其中每个环状部分含有3-12个、优选5-7个碳原子环成员,且可任选为苯并稠合环系,其可如本文定义的一样被任选取代。这类环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、八氢萘基、2,3-二氢-1H-茚基、金刚烷基等。本文使用的“二环”和“三环”往往包括稠环系统(例如十氢萘、八氢萘)以及多环(多中心)饱和或部分不饱和的类型。后一类型的异构体一般以二环[1,1,1]戊烷、樟脑、金刚烷和二环[3,2,1]辛烷为例。
[0128] 本文单独或组合使用的术语“酯”是指桥接两个部分的羧基连接在碳原子上。
[0129] 本文单独或组合使用的术语“醚”是指桥接两个部分的氧基连接在碳原子上。
[0130] 本文单独或组合使用的术语“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
[0131] 本文单独或组合使用的术语“卤代烷氧基”是指卤代烷基通过氧原子与母体分子部分连接。
[0132] 本文单独或组合使用的术语“卤代烷基”是指含义如上述定义的烷基中一个或多个氢被卤素置换。具体包括的有一卤代烷基、二卤代烷基和多卤代烷基。举一个例子来说,一卤代烷基在基团内可能具有碘原子、溴原子、氯原子或氟原子。二卤代和多卤代烷基可能具有两个或更多个相同的卤素原子或者具有不同卤代基团的组合。卤代烷基的实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。“卤代亚烷基”是指卤代烷基连接在两个或更多个位置上。实例包括氟亚甲基(-CFH-)、二氟亚甲基(-CF2-)、氯亚甲基(-CHCl-)等。
[0133] 本文单独或组合使用的术语“杂烷基”是指完全饱和或含有1-3个不饱和度的由规定数目的碳原子及1-3个选自O、N和S的杂原子组成的稳定的直链或支链,或环状烃基,或其组合,其中氮原子和硫原子可任选被氧化,氮杂原子可任选被季铵化。杂原子O、N和S可在杂烷基内部任何位置上被置换。至多两个杂原子可以邻接,例如-CH2-NH-OCH3。
[0134] 本文单独或组合使用的术语“杂芳基”是指3-7元、优选5-7元不饱和杂单环或稠合多环,其中至少一个稠环是不饱和的,其中至少一个原子选自O、S和N。该术语还包括稠合多环基,其中杂环基与芳基稠合,其中杂芳基与另外的杂芳基稠合,或者其中杂芳基与环烷基稠合。杂芳基的实例包括吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三唑基、吡喃基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、吲哚基、异吲哚基、吲嗪基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、吲唑基、苯并三唑基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并吡喃基、苯并噁唑基、苯并噁二唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并二氢吡喃基、香豆素基(coumarinyl)、苯并吡喃基、四氢喹啉基、四唑并哒嗪基、四氢异喹啉基、噻吩并吡啶基、呋喃并吡啶基、吡咯并吡啶基等。示例性的三环杂环基包括咔唑基、benzidolyl、菲咯啉基、氧芴基、吖啶基、菲啶基、呫吨基等。
[0135] 本文单独或组合使用的术语“杂环烷基”与可互换的“杂环基”分别是指含有至少1个、优选1-4个、更优选1-2个杂原子作为环成员的饱和、部分不饱和或完全不饱和单环、二环或三环杂环基,其中各个所述杂原子可独立选自氮、氧和硫,并且其中优选在每个环中有3-8个环成员,更优选在每个环中有3-7个环成员,最优选在每个环中有5-6个环成员。
“杂环烷基”和“杂环基”往往包括砜、亚砜、叔氮环成员的N-氧化物以及碳环稠环系统和苯并稠环系统;另外,两个术语还包括其中杂环如本文的定义一样与芳基或另一个杂环基稠合的系统。以下列基团为例说明本发明的杂环基:氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基、二氢异吲哚基、二氢异喹啉基、二氢噌啉基、二氢苯并二氧杂环己烯基、二氢[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶基、苯并噻唑基、二氢吲哚基、二氢吡啶基、1,3-二氧杂环己烷基、1,4-二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、异二氢吲哚基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基、四氢吡啶基、哌啶基、硫代吗啉基等。杂环基可被任选取代,除非被明确禁止。
[0136] 本文单独或组合使用的术语“肼基”是指两个氨基通过单键连接,即-N-N-。
[0137] 本文单独或组合使用的术语“羟基”是指-OH。
[0138] 本文单独或组合使用的术语“羟基烷基”是指羟基通过烷基与母体分子部分连接。
[0139] 本文单独或组合使用的术语“亚氨基”是指=N-。
[0140] 本文单独或组合使用的术语“亚氨基羟基”是指=N(OH)和=N-O-。
[0141] 术语“在主链中”是指自基团与本发明化合物的连接点开始的最长邻接或相邻的碳原子链。
[0142] 术语“异氰酸基”是指-NCO基团。
[0143] 术语“异硫氰酸基”是指-NCS基团。
[0144] 术语“原子的直链”是指独立选自碳、氮、氧和硫的原子的最长直链。
[0145] 本文单独或组合使用的术语“低级”是指含有1-6(包括6)个碳原子。
[0146] 本文单独或组合使用的术语“mercaptyl”是指RS-基团,其中R如本文定义。
[0147] 本文单独或组合使用的术语“硝基”是指-NO2。
[0148] 本文单独或组合使用的术语“氧基”或“氧杂”是指-O-。
[0149] 本文单独或组合使用的术语“氧代”是指=O。
[0150] 术语“全卤代烷氧基”是指烷氧基中的全部氢原子都被卤素原子置换。
[0151] 本文单独或组合使用的术语“全卤代烷基”是指烷基中的全部氢原子都被卤素原子置换。
[0152] 本文单独或组合使用的术语“磺酸根”、“磺酸”、“磺酸基”是指-SO3H基团和当磺酸用于形成盐时磺酸根的阴离子。
[0153] 本文单独或组合使用的术语“硫基”是指-S-。
[0154] 本文单独或组合使用的术语“亚磺酰基”是指-S(O)-。
[0155] 本文单独或组合使用的术语“磺酰基”是指-S(O)2-。
[0156] 术语“N-磺酰胺基”是指RS(=O)2NR’-基团,其中R和R’如本文定义。
[0157] 术语“S-磺酰胺基”是指-S(=O)2NRR’基团,其中R和R’如本文定义。
[0158] 本文单独或组合使用的术语“硫杂”和“硫代”是指-S-基团或者其中氧被硫置换的醚。硫代基团的氧化衍生物,即亚磺酰基和磺酰基,也包括在硫杂和硫代的定义中。
[0159] 本文单独或组合使用的术语“巯基(thiol)”是指-SH基团。
[0160] 本文使用的术语“硫代羰基”,单用时包括硫基-C(S)H基团,组合使用时为-C(S)-基团。
[0161] 术语“N-硫代氨甲酰基”是指ROC(S)NR’-基团,其中R和R’如本文定义。
[0162] 术语“O-硫代氨甲酰基”是指-OC(S)NRR’基团,其中R和R’如本文定义。
[0163] 术语“硫氰酸基”是指-CNS基团。
[0164] 术语“三卤代甲烷磺酰胺基”是指X3CS(O)2NR-基团,其中X为卤素,R如本文定义。
[0165] 术语“三卤代甲磺酰基”是指X3CS(O)2-基团,其中X为卤素。
[0166] 术语“三卤代甲氧基”是指X3CO-基团,其中X为卤素。
[0167] 本文单独或组合使用的术语“三取代的甲烷基”是指硅(silicone)基团在其三个自由价上被如取代氨基定义中所列基团取代。实例包括三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基等。
[0168] 本文的任何定义均可与任何其它定义联合使用以描述复合结构基团。按照惯例,任何这类定义的拖尾元素是连接母体部分的元素。例如,复合基团烷基酰氨基可表示烷基通过酰氨基与母体分子连接,术语烷氧基烷基可表示烷氧基通过烷基与母体分子连接。
[0169] 当某一基团定义为“零”时,所指的是所述基团不存在。
[0170] 术语“任选取代(的)”是指被修饰的基团(anteceding group)可以是取代或未取代的。当被取代时,“任选取代”基团的取代基可包括而不限于一个或多个独立选自下列基团的取代基或者特别指定的单独或组合的一组基团:低级烷基、低级烯基、低级炔基、低级烷酰基、低级杂烷基、低级杂环烷基、低级卤代烷基、低级卤代烯基、低级卤代炔基、低级全卤代烷基、低级全卤代烷氧基、低级环烷基、苯基、芳基、芳氧基、低级烷氧基、低级卤代烷氧基、氧代、低级酰氧基、羰基、羧基、低级烷基羰基、低级羧基酯、低级羧酰氨基、氰基、氢、卤素、羟基、氨基、低级烷基氨基、芳基氨基、酰氨基、硝基、巯基、低级烷硫基、芳硫基、低级烷基亚磺酰基、低级烷基磺酰基、芳基亚磺酰基、芳基磺酰基、芳硫基、磺酸酯、磺酸、三取代的甲硅烷基、N3、SH、SCH3、C(O)CH3、CO2CH3、CO2H、吡啶基、噻吩、呋喃基、低级氨基甲酸酯和低级脲。两个取代基可以连接在一起形成含有0-3个杂原子的5、6或7元稠合碳环或杂环,例如形成亚甲基二氧基或亚乙基二氧基。任选取代的基团可以是未取代的(例如-CH2CH3)、完全取代的(例如-CF2CF3)、一取代的(例如-CH2CH2F)或介于完全取代和一取代之间任何水平的取代(例如-CH2CF3)。如果叙述了取代基但未对取代做限定,则包括取代和未取代的两种形式。如果取代基限定为“取代的”,则明确是指取代形式。另外,可视需要限定特定部分不同组别的任选取代基;在这些情况下,一般在紧接术语“被......任选取代”中“被”字之后限定任选的取代内容。
[0171] 除非另有说明,否则术语R或术语R’单独出现且没有数字标号时,是指选自以下的部分:氢、烷基、环烷基、杂烷基、芳基、杂芳基和杂环烷基,所述任何基团均可被任选取代。这类R和R’基团应理解为如本文定义一样被任选取代。不论R基团有无数字标号,n就选定的基团而言,每个R基团,包括R、R’和R(其中n=(1、2、3,...n)),每个取代基和每个术语都应理解为独立于其它的每一个。如果任何变量、取代基或术语(例如芳基、杂环基、R等)在结构式或通用结构中出现不止一次时,其每次出现时的定义都独立于其它每次出现时的定义。本领域技术人员要进一步理解的是,某些基团可自书写的任一端与母体分子连接或者可占据元素链的某一位置。因此,仅举例来说,不对称基团(例如-C(O)N(R)-)可在碳或氮上与母体部分连接。
[0172] 不对称中心存在于本发明的化合物中。根据手性碳原子周围取代基的构型,用符号“R”或“S”标明这些中心。应当了解的是,本发明包括所有的立体化学异构体,包括非对映异构体、对映异构体和差向异构体以及d-异构体和l-异构体及其混合物。化合物的各个立体异构体可由含有手性中心的市售原料进行合成来制备,或者通过制备对映体产物的混合物后,接着分离(例如转化)成非对映体的混合物,接着通过分离或重结晶、色谱技术、手性色谱柱上对映异构体的直接分离或本领域已知的任何其它合适的方法,来制备化合物的各个立体异构体。特定化学结构的起始化合物或是市售的,或可通过本领域已知技术制备并拆分。另外,本发明的化合物可作为几何异构体存在。本发明包括所有顺式(cis)、反式(trans)、顺(syn)、反(anti)、同侧(entgegen)(E)和异侧(zusammen)(Z)异构体及其合适的混合物。另外,化合物可作为互变异构体存在;本发明提供所有互变异构体。另外,本发明的化合物可以非溶剂化形式及溶剂化形式与药学上可接受的溶剂(例如水、乙醇等)一起存在。一般而言,对于本发明,将溶剂化形式视为等同于非溶剂化形式。
[0173] 旋光异构体是具有相同分子式但其旋转平面偏振光的方式不同的化合物。有两种旋光异构体的形式。第一种旋光异构体是彼此互为镜像但彼此无法重叠的化合物。这些异构体称为“对映异构体”。第二种旋光异构体是不是镜像但每个分子旋转平面偏振光的分子,被称为旋光的。这类分子称为“非对映异构体”。非对映异构体不仅在于它们旋转平面偏振光的方式不同,而且还在于它们的物理性质不同。术语“旋光异构体”更尤其包含呈纯的形式或呈混合物形式的对映异构体和非对映异构体。
[0174] 术语“化学键”是指两个原子之间或者当原子通过化学键连接时被视为较大亚结构的组成部分的两个部分之间的共价键。化学键可为单键、双键或三键,除非另有说明。分子的绘图中两个原子间的短划线表示在该位置可存在或不存在额外的化学键。
[0175] 术语“联合疗法”是指给予两种或更多种治疗药以治疗本公开内容中所描述的治疗性病症或疾病。这类给予包括以基本同时的方式共同给予这些治疗药,例如以具有固定的活性成分比率的一粒胶囊剂或以各活性成分的多粒单独胶囊剂。另外,这类给予还包括按序贯方式使用各种类型的治疗药。在任一种情况下,治疗方案均可在治疗本文所述的疾病或病症时提供药物组合的有益作用。
[0176] “大麻素受体调节剂”本文是用来指对于大麻素受体活性的EC50或IC50不超过约100μM、更通常不超过约50μM的化合物,正如在下文中概述的大麻素受体测定法中所测定的一样。“EC50”是激活大麻素受体的活性至最大水平半数的调节剂浓度。“IC50”是降低大麻素受体的活性至最大水平半数的调节剂浓度。该测定将在实验期间进行。
[0177] 本文描述的术语“调节剂”表示可在任何已知的或尚待发现/鉴定的大麻素受体上起完全激动剂、部分激动剂、逆激动剂或拮抗剂作用的任何化合物。
[0178] 现已发现本文所述化合物具有针对大麻素受体的调节活性,对于大麻素受体的EC50或IC50不超过约10μM,更优选不超过约5μM,甚至更优选不超过约1μM,最优选不超过约200nM,正如本文所述试验所测定的一样。
[0179] 术语“治疗有效的”往往限定用于治疗疾病或病症的活性成分的量。该用量可达到减轻或消除所述疾病或病症的目标。
[0180] 术语“药学上可接受的”是指适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性和变态反应的化合物(或盐、前药、互变异构体、两性离子形式等)与合理的利益/险比相称并有效用于其既定用途。
[0181] 本文使用的涉及患者的“治疗”往往包括预防。术语“患者”是指包括人在内的所有哺乳动物。患者的实例包括人、、狗、猫、山羊、绵羊、猪和兔。优选患者为人。
[0182] 术语“前药”是指体内产生更高活性的化合物。本发明的某些化合物可还以前药存在,可参见Hydrolysis in Drug and ProdrugMetabolism:Chemistry,Biochemistry,and Enzymology,Testa,Bernard和Wiley-VHCA,Zurich,Switzerland 2003。本文所述化合物的前药是化合物结构上的修饰形式,易于在生理条件下进行化学变化以提供所述化合物。另外,可在离体环境中通过化学方法或生化方法将前药转化成所述化合物。例如,前药当与合适的酶或化学试剂一起放入透皮贴剂库中时,可慢慢转化为所述化合物。前药常常是有益的,因为在某些情况下,它们比化合物或母体药物更易于给药。例如,它们通过口服给药是生物可利用的,而母体药物则不是。前药还可在药物组合物中具有优于母体药物的改进的溶解度。本领域已知各种前药衍生物,例如依赖于前药的水解裂解或氧化激活的前药衍生物。前药的一个非限制性实例可为作为酯(“前药”)给予、但之后代谢水解成羧酸这种活性实体的化合物。其它实例包括化合物的肽基衍生物。
[0183] 本发明的化合物可作为药学上可接受的盐存在。本发明包括上文所列化合物的盐形式,特别是酸加成盐。合适的盐包括与有机酸无机酸两者形成的盐。这类酸加成盐通常可以是药学上可接受的。然而,非药学上可接受的盐的盐类可用于所述化合物的制备与纯化。也可形成加成盐并且是药学上可接受的。有关盐的制备和选择的更完整论述可参见Stahl,P.Heinrich,Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use,Wiley-VCHA,Zurich,Switzerland,2002。
[0184] 本文使用的术语“药学上可接受的盐”表示本发明化合物的盐或两性离子形式,其为水溶性或油溶性的,或者为可分散的和如本文定义的药学上可接受的。盐可在化合物的最终分离与纯化期间制备,或者单独使游离碱形式的合适化合物与合适的酸反应制备。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、L-抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate/besylate)、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、二葡糖酸盐、甲酸盐、富马酸盐、龙胆酸盐、戊二酸盐、甘油磷酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟乙磺酸盐(依西酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、DL-扁桃酸盐、 磺酸盐、甲磺酸盐、亚萘基磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、膦酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、焦谷氨酸盐、琥珀酸盐、磺酸盐、酒石酸盐、L-酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、甲苯磺酸盐(para-toluenesulfonate/p-tosylate)和十一烷酸盐。同样,本发明化合物的碱性基团可用以下基团季铵化:甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物;二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯;癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物;以及苄基和苯乙基溴化物。可用于形成药学上可接受的加成盐的酸的实例包括盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸等无机酸以及草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸等有机酸。还可通过化合物与碱金属或碱土离子配位来形成盐。因此,本发明包括本发明化合物的钠盐、盐、镁盐和盐等。
[0185] 可以在化合物的最终分离与纯化期间使羧基与合适的碱反应形成碱加成盐(例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)或与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺反应形成碱加成盐。药学上可接受的盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁和,以及无毒的季铵阳离子,例如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因、二苄胺、N,N-二苄基苯乙胺、1-ephenamine和N,N′-二苄基乙二胺。用于形成碱加成盐的其它代表性的有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
[0186] 可通过使游离碱形式的合适化合物与合适的酸反应来制备化合物的盐。本专利所披露的新的化合物可以药学上可接受的盐的形式制备,该盐可由无毒的无机碱或有机碱制备,包括但不限于铝盐、铵盐、钙盐、盐、盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐、包括天然存在的取代胺在内的取代胺、环状胺和碱性离子交换树脂,例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、乙胺、2-二乙基氨基乙醇(diethylaminoethano)、1,2-二甲氨基乙醇、乙醇胺(ethanolarnine)、乙二胺、N-乙基-吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、海巴胺、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三羟甲基氨基甲烷(trishydroxylmethyl amino methane)、三丙胺和氨丁三醇。
[0187] 如果本专利所披露的新的化合物是碱性的,则盐可制成药学上可接受的盐的形式,该盐可由无毒无机酸或有机酸制备,包括但不限于盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、酒石酸、柠檬酸、乙酸、富马酸、烷基磺酸、萘磺酸、对甲苯磺酸、樟脑酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸和琥珀酸。
[0188] 虽然本发明的化合物可能作为未加工的化学药品给予,但是也可作为药物制剂提供。因此,本发明提供药物制剂,所述药物制剂包含化合物或其药学上可接受的盐、酯、前药或溶剂化物,以及一种或多种其药学上可接受的载体和任选一种或多种其它的治疗成分。从与制剂的其它成分相容且对其接受者无害的意义上来说,载体必须是“可接受的”。合适的制剂取决于所选择的给药途径。可采用本领域清楚了解的适当的本领域众所周知的任何技术、载体和赋形剂;例如参见Remington’s Pharmaceutical Sciences。可按照实际已知的方法,通过例如以下步骤制备本发明的药物组合物:常规混合、溶解、制粒、制锭(dragee-making)、研碎、乳化、包胶囊、包封或压制过程。
[0189] 剂型包括适于口服、胃肠外(包括皮下、真皮内、肌内、静脉内、关节内和髓内)、腹膜内、经黏膜、经皮、直肠和局部(包括皮肤、含服、舌下和眼内)给药的剂型,尽管最合适的途径可取决于例如接受治疗者的病症和疾病。剂型可适当地呈单位剂型,并可通过制药领域众所周知的任何方法制备。所有方法都包括将本发明的化合物或其药学上可接受的盐、酯、前药或其溶剂化物(“活性成分”)与构成一种或多种辅助成分的载体相混合的步骤。总的来说如下制备剂型:将活性成分与液体载体或微细固体载体或两者充分均匀地混合,然后必要时,使产物成形成为所需要的剂型。
[0190] 适于口服给药的本发明剂型可呈独立单位,例如各含有预定量的活性成分的胶囊剂、扁囊剂或片剂;呈散剂或颗粒剂;呈水性液体或非水性液体中的溶液剂或混悬剂;或呈水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。活性成分也可呈大丸剂(bolus)、药糖剂或糊剂。
[0191] 可以口服使用的药物剂型包括片剂、由明胶制成的两节式胶囊剂(push-fit capsule)以及由明胶和增塑剂(例如甘油或山梨糖醇)制成的软密封胶囊剂。片剂可任选与一种或多种辅助成分一起经压制或模制制备。可将自由流动形式的活性成分(例如粉末或颗粒),任选与粘合剂、惰性稀释剂或润滑剂表面活性剂或分散剂混合后,在合适的机器中压制来制备压制片。可以将用惰性液体稀释剂湿润的化合物粉末的混合物在合适的机器中进行模制来制备模制片。片剂可任选包衣或划痕,并可如此制备以提供其中活性成分慢速释放或控速释放。口服给药的所有剂型都应为适于这类给药的剂量。两节式胶囊剂可含有活性成分并掺入填充剂(例如乳糖)、粘合剂(例如淀粉)和/或润滑剂(例如滑石粉或硬脂酸镁),任选稳定剂。在软质胶囊剂中,可将活性化合物溶于或悬浮于合适的液体中,例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。另外,可加入稳定剂。为锭剂芯(Dragee core)提供了合适的包衣材料。为此,可以使用浓糖溶液,这可任选含有阿拉伯树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普胶、聚乙二醇和/或二氧化清漆溶液(lacquersolution)和合适有机溶剂或溶剂混合物。可向片剂或锭剂包衣材料中加入染料或颜料用于识别或者以表示活性化合物剂量的不同组合。
[0192] 适于通过口服途径给药的剂型的一个实例包含0.60g实施例16的化合物、10.00g NMP、64.40g LABRAFIL M1944 CS和25.00gLABRASOL 。
[0193] 化合物可配制成通过注射进行胃肠外给药,例如通过推注或连续输注。注射用剂型可呈添加了防腐剂的单位剂型,例如安瓿或多剂量容器中的单位剂型。组合物可呈诸如油性或水性溶媒中的混悬剂、溶液剂或乳剂的这类形式,并可含有配方剂(formulatory agent),例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。剂型可以多剂量或多剂量容器(例如密封的安瓿和小瓶)提供,并可以粉针剂形式或在冷冻干燥(冻干)条件下保存,临用前只需要加入无菌液体载体,例如盐水或无菌无热原水。临用时配制的注射溶液剂和混悬剂可由前述类型的无菌粉针剂、颗粒剂和片剂制备。
[0194] 用于胃肠外给药的剂型包括活性化合物的水性和非水性(油性)无菌注射溶液剂,其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使剂型与预期接受治疗者血液等渗的溶质;以及水性和非水性无菌混悬剂,其可包括悬浮剂和增稠剂。合适亲脂性溶剂或溶媒包括脂肪油(例如芝麻油)或合成的脂肪酸酯(例如油酸乙酯或甘油三酯)或脂质体。水性注射混悬剂可含有增加混悬剂粘度的物质,例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选混悬剂还可含有合适的稳定剂或增加化合物溶解度的物质以供制备高度浓缩的溶液。
[0195] 适于通过胃肠外途径给药的剂型的一个实例包含1.00g实施例3的化合物、30.00gNMP、30.00g丙二醇、10.00g CREMOPHOR ELP、10.00g EtOH(95%)和19.00g盐水溶液。
[0196] 除前述剂型以外,还可将化合物配制成贮库制剂。这类长效剂型可通过植入(例如皮下或肌内)或者通过肌内注射给予。因此,举例来说,可将化合物与合适的聚合材料或疏水材料(例如作为可接受的油中的乳剂)或离子交换树脂一起配制,或者配制成微溶衍生物,例如微溶盐。
[0197] 对于含服或舌下给药,组合物可呈按常规方法配制的片剂、糖锭剂、软锭剂或凝胶剂形式。这类组合物可包含调味基料(例如蔗糖和阿拉伯树胶或西黄蓍胶)中的活性成分。
[0198] 化合物还可配制成含有可可脂、聚乙二醇或其它甘油酯等常规栓剂基料的直肠用组合物,例如栓剂或滞留型灌肠剂。
[0199] 可以局部给予本发明的化合物,即非全身性给药。这包括将本发明的化合物外用于表皮或口腔,以及将这类化合物滴注到、眼和鼻中,使得化合物不会大量进入血流。相比之下,全身性给药是指口服、静脉内、腹膜内和肌内给药。
[0200] 适于局部给药的剂型包括适于穿过皮肤到达发炎部位的固体、液体或半液体制剂,例如凝胶剂、搽剂、洗剂、乳膏剂、软膏剂或糊剂以及适于给予眼、耳或鼻的滴剂。对于局部给药,活性成分可占剂型的0.001%-10%(重量/重量),例如1%-2%(重量)。然而,它可占剂型的多达10%(重量/重量),但优选可占剂型的5%(重量/重量)以下,更优选0.01%-1%(重量/重量)。
[0201] 更特别预期本发明的药物组合物通过局部途径用于治疗皮肤和黏膜,并可呈液体或半液体形式(例如软膏剂、乳膏剂)或呈固体形式(例如散剂)。还可呈混悬剂的形式(例如聚合微球剂或聚合物贴剂和水凝胶剂)以供控释。这种局部组合物可以是无水形式、含水形式或乳液形式。局部使用化合物的浓度一般占组合物总重量的0.001%和10%(重量)之间,优选介于0.01%和1%(重量)之间。
[0202] 适于通过局部途径给药的剂型的一个实例包含3.00g实施例13的化合物、35.00g NMP、25.00g LABRASOL 、15.00g油酸、12.00gCOMPRITOL 888ATO和10.00g EtOH。
[0203] 本文提供的化合物还可应用于化妆品,特别是身体和头发卫生保健,更特别是用于调节和/或恢复皮肤脂质代谢。
[0204] 本文提供化妆品用途的组合物,所述组合物在生理上可接受的载体中包含至少一种用于身体或头发卫生保健的本文所述的化合物。化妆品组合物包含化妆品可接受的载体中的至少一种化合物和/或其旋光异构体或几何异构体或其盐,并可呈液体或半液体形式(例如软膏剂、乳膏剂)或者呈固体形式(例如粉剂)。还可呈混悬剂形式(例如聚合微球剂或聚合物贴剂和水凝胶剂)以供控释。这种局部组合物可以是无水形式、呈含水形式或呈乳液形式。化妆品组合物中化合物的浓度为占组合物总重量的0.001%和5%(重量)之间。最后,本发明的主题是改善皮肤的美容方法,它在于将包含至少一种本文提供的化合物的组合物应用于皮肤。
[0205] 对于吸入给药,本发明的化合物便于由吹入器、喷雾器加压包装(nebulizer pressurized pack)或递送气雾剂喷雾的其它合适方法递送。加压包装可装入合适的推进剂,例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。在压缩气雾剂的情况下,可通过安装递送计量的来确定剂量单位。或者,对于通过吸入法或吹入法给药,本发明的化合物可呈干粉组合物的形式,例如化合物和合适粉末基料(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。组合物粉末可呈装入例如胶囊、针筒、明胶包装或泡罩包装的单位剂型,可借助吸入器或吹入器由此包装给予粉末。
[0206] 优选的单位剂型是含有如下给出的有效剂量的活性成分或其合适分数的单位剂型。
[0207] 应当了解的是,除上文特别提及的成分以外,本发明的剂型可包括本领域常用的与所述剂型类型有关的其它物质,例如适于口服给药的物质可包括矫味剂。
[0208] 可按0.1-500mg/kg/天的剂量口服或通过注射给予本发明的化合物。成人的剂量范围一般为5mg/天~2g/天。按独立单位提供的片剂或其它剂型可适当地含有适量的本发明化合物,所述化合物在此剂量或多个相同剂量下是有效的,例如含有5mg~500mg的单位,常常约为10mg~200mg的单位。
[0209] 按约0.001mg/kg体重~100mg/kg体重的日剂量,以1-3次摄取量给予本发明的某些化合物。另外,一般可以占组合物重量的0.001%和10%(重量)之间、优选0.01%和1%(重量)之间的浓度全身性使用某些化合物。
[0210] 可与载体材料混合以制备单一剂型的活性成分的量将随待治疗的宿主和具体的给药方式而变化。
[0211] 可以经口服、局部或通过注射等各种方式给予本发明的化合物。主治医生将负责给予患者的化合物的精确量。任何特定患者的具体剂量水平将取决于各种因素,包括所用具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、药物组合、待治疗的确切病症和待治疗的适应症或病症的严重程度。同样,给药途径也可随病症及其严重程度而变化。
[0212] 在某些情况下,可适当给予至少一种本文所述的杂环化合物(或其药学上可接受的盐、酯或前药)以及另一种治疗药。仅举例来说,如果患者在接受本文的一种化合物时遇到的一种副作用高血压,则可适当给予抗高血压药以及最初的治疗药。或者,仅举例来说,可通过给予辅助药来提高本文所述一种化合物的治疗功效(即辅助药本身仅可具有最低的治疗益处,但与另一治疗药组合时,对患者的整体治疗益处增加)。或者,仅举例来说,可通过给予本文所述的一种化合物及同样具有治疗益处的另一种治疗药(这还包括治疗方案)来增加由患者体验的益处。仅举例来说,在包括给予本文所述的一种化合物的疼痛治疗中,通过给患者提供另一种疼痛治疗药可使治疗益处增加。无论如何,不论待治疗的疾病、障碍或病症,由患者体验的总体益处可能仅仅是加入两种治疗药,或者患者可体验协同益处。
[0213] 可行的联合疗法的具体但非限制性的实例包括使用本发明的化合物连同惰性或活性化合物或包括以下成分在内的其它药物:润湿剂、香味增强剂、防腐剂、稳定剂、湿度调节剂、pH调节剂、渗透压调节剂、乳化剂、UV-A和UV-B掩蔽剂、抗氧化剂、脱色剂(例如氢醌或曲酸)、软化剂、增湿剂(例如甘油、PEG 400或尿素)、抗皮脂溢药或抗痤疮药(例如过氧化苯甲酰)、抗生素(例如红霉素和四环素)、抗真菌剂(例如酮康唑(ketoconazole))、头发再生促进药(例如米诺地尔(Minoxidil)(2,4-二氨基-6-哌啶并嘧啶3-氧化物))、非甾体抗炎药、类胡萝卜素和尤其p-胡萝卜素、抗屑病药(例如地蒽酚(anthralin)及其衍生物、维A酸即RAR或RXR受体配体、皮质类固醇或雌激素、α-羟基酸和α-酮酸或其衍生物(例如乳酸、苹果酸、柠檬酸)及其盐、酰胺或酯或者p-羟基酸或其衍生物(例如水杨酸)及其盐、酰胺或酯、离子通道阻断剂(例如钾通道阻断剂),又或者,更具体用于与已知干预免疫系统的药物、抗惊厥药组合的药物组合物包括且不限于托吡酯(topiramate)、托吡酯类似物、卡马西平(carbamazepine)、丙戊酸、拉莫三嗪(lamotrigine)、加巴喷丁(gabapentin)、苯妥英(phenytoin)等及其混合物或药学上可接受的盐。不用说,本领域技术人员务必小心选择将要加到这些组合物中的其它化合物,以使得所设计的加入不会或基本上不会对本质上与杂环化合物混合的有利性质产生不利影响。
[0214] 无论如何,可以按任何顺序或甚至同时给予多种治疗药(其中至少一种为本发明的化合物)。如果同时给予,则多种治疗药可以单一的合并形式或以多种形式提供(仅举例来说,或作为单一丸剂或作为两种单独的九剂)。治疗药之一可按多剂量给予,或者两种都可按多剂量给予。如是不是同时给药,则多剂量间的给药时机可以是范围介于几分钟到四周之间的任何时间段。
[0215] 因此,另一方面,本文提供用于治疗需要这种治疗的人或动物受治疗者的大麻素受体介导的疾病的方法,该方法包括给予需要治疗的受治疗者适量的有效降低或预防疾病的杂环化合物以及至少另一种本领域已知的用于治疗所述疾病的药物的步骤。
[0216] 在相关方面,具有至少一种本文所述的新的杂环化合物的治疗组合物可以与一种或多种用于治疗大麻素介导的疾病的其它药物联合用药。
[0217] 此外,本文提供治疗需要这种治疗的人或动物受治疗者的某些疾病和适应症的方法。本文所述的杂环化合物可以单用或与治疗以下疾病的其它药物和化合物联用:神经病性疼痛、瘾癖(包括尼古丁、可卡因、阿片样物质、印度大麻(hashish)、大麻、酒精依赖、食物)、癌症(包括黑素瘤、淋巴瘤和神经胶质瘤)、炎症(包括自身免疫炎症(autoimmune inflammation))、心血管疾病、肝纤维变性、肥胖症、骨质疏松症和其它骨病。使用本文所公开的化合物的其它适应症包括痤疮、银屑病、变应性接触性皮炎、焦虑症、强直和震颤、膀胱功能障碍、预防流产和子宫外妊娠、图雷特综合征(Tourette’s)、帕金森病(Parkinson’s disease)、中风、青光眼和其它眼疾(包括眼内压)、腹泻和恶心。上述这类治疗的每一种均包括给予需要治疗的受治疗者治疗有效量的本文所述的杂环化合物以减轻或预防这类疾病或适应症的步骤。
[0218] 除用于人的治疗以外,本发明的化合物和制剂还可用于兽用以治疗陪伴动物、珍稀动物和农场动物,包括哺乳动物、啮齿动物等。更优选的动物包括马、狗和猫。这些杂环化合物还有助于神经元生长和发育。
[0219] 因此,在治疗、改善或预防其中涉及大麻素受体的综合征、障碍或疾病的方法中,本文所述的化合物可以单用或者可与另一种药物或化合物联用,所述障碍或疾病包括但不限于眼疾(例如青光眼)、疼痛、控制食欲、调节代谢、糖尿病、社交障碍和心境障碍、癫痫发作相关病症、物质滥用障碍、学习障碍认知障碍和/或记忆障碍、肠疾病、胃肠疾病、呼吸道疾病、自主活动障碍、运动障碍、免疫疾病或炎症以及控制器官收缩和肌肉痉挛。
[0220] 本文提供的化合物还可用于提高学习、认知和/或记忆;调节细胞生长;提供神经保护等。本文提供的化合物还可用于治疗与细胞分化和增殖有关的质化疾病相关皮肤疾患,尤其用于治疗痤疮,用于治疗伴有或没有细胞增殖疾病的其它皮肤疾患,尤其是所有银屑病形式,用于治疗所有真皮或表皮增殖,用于预防或治疗瘢痕疾病(cicatrization disorder),用在伴有免疫组分的皮肤疾患或普通疾患的治疗中,用在暴露于UV辐射所引起的皮肤疾病的治疗中,以及还用于对抗脂肪分泌功能障碍,用于修复或对抗皮肤衰老,用于预防或治疗瘢痕疾病,用在色素沉着疾病的治疗中。
[0221] 大麻素制品被用于医药和消遣目的历史长达多个世纪。大麻素存在于大麻(Cannabis sativa L)中。在1964年就鉴定出主要的活性成分四氢大麻酚(Δ9-THC)。Gaoni Y,Mechoulam R,Isolation,Structure,andPartial Synthesis of an Active Constituent of Hashish(印度大麻活性组分的分离、结构和部分合成),J Am Chem Soc
1964,86:1646-7。在1990年代初期阐明了内源性大麻素系统。目前,已经鉴定出属于GPCR家族的两种受体CB1和CB2、5种内源脂质配体和参与其合成和代谢的酶。Matsuda LA,Lolait SJ,Brownstein MJ,Young AC,Bonner TI,Structure Of A Cannabinoid Receptor And Functional Expression Of TheCloned Cdna(大麻素受体的结构和克隆Cdna的功能性表达),Nature1990,346:561-4。
[0222] CB1在中枢神经系统中以及在外周神经系统(例如睾丸、眼、膀胱和脂肪细胞)中大量表达,其中在基底核、小脑、海马和皮质中的密度水平最高。CB2主要在免疫组织和细胞(例如胸腺、骨髓、脾脏、胰脏中的细胞)以及在神经胶质瘤和皮肤肿瘤细胞中表达。
[0223] 最新研究表明,CB2受体及其基因转录物广泛分布于脑中。脑内多病灶性表达的CB2免疫反应性表明,CB2受体在脑内起作用,并且可能涉及抑郁症和物质滥用。参见例如Onaivi ES,Ishiguro H,Gong J-P,Patel S,Perchuk A,Meozzi PA,Myers L,Mora Z,Tagliaferro P,Gardner E,Brusco A,Akinshola BE,Liu Q-R,Hope B,Iwasaki S,Arinami T,Teasenfitz L,Uhl GR,Discovery of the Presence and FunctionalExpression of Cannabinoid CB2 Receptors in Brain(脑内大麻素CB2受体的存在和功能性表达的发现 ),Ann NY Acad Sci 2006,1074:514-536;Berghuis P,Rajnicek AM,Morozov YM,Ross RA,Mulder J,Urban GM,Monory K,Marsicano G,Matteoli M,Canty A,Irving AJ,Katona I,Yanagawa Y,Rakic P,Lutz B,Mackie K,Harkany T,Hardwiring theBrain:Endocannabinoids Shape Neuronal Connectivity(大脑硬连线:内源性大麻素决定神经元连通性),Science 2007,316:1212-1216;Kalsi V,Fowler CJ,Therapy Insight:
Bladder Dysfunction Associated With MultipleSclerosis(治疗前景:与多发性硬化相关的膀胱功能障碍),Nat ClinPract Urol 2005,2:492-501;Kathuria S,Gaetani S,Fegley D,Valino F,Duranti A,Tontini A,Mor M,Tarzia G,Rana GL,Calignano A,Giustino A,Tattoli M,Palmery M,Cuomo V,Piomelli D,Modulation of AnxietyThrough Blockade of Anandamide Hydrolysis(通过阻断花生四烯酸乙醇酰胺水解调节焦虑症),Nat Med 2003,9:76-81;Baker D,Pryce G,Croxford JL,Brown P,Pertwee RG,Huffman JW,Layward L,Cannabinoids Control Spasticity and Tremor in a Multiple Sclerosis Model(大麻素控制多发性硬化模型的强直和震颤),Nature 2000,404:84-87。此外,内源性大麻素系统涉及变应性接触性皮炎。Karsak M,Gaffal E,Date R,Wang-Eckhardt L,Rehnelt J,Petrosino S,Starowicz K,Steuder R,Schlicker E,Cravatt B,Mechoulam R,Buettner R,Werner S,Di Marzo V,Tuting T,Zimmer A,Attenuation of Allergic Contact Dermatitis Throughthe Endocannabinoid System(通过内源性大麻素系统减轻变应性接触性皮炎),Science 2007,316:1494-7。
[0224] 另外,研究为大麻素系统在包括食物消耗和体重在内的若干生理功能中的作用提供了支持,其中CB1受体活化导致食物消耗增加和体重增加。Fride,E.,Endocannabinoids in the Central Nervous System--anOverview(有关中枢神经系统中的内源性大麻素的综述),Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids 2002,66:221-33。之后,CB1受体阻断降低食物消耗并导致体重减轻。Van Gaal LF,Rissanen AM,Scheen AJ,Ziegler O,Rossner S,Effects Of The Cannabinoid-1 ReceptorBlocker Rimonabant On Weight Reduction And Cardiovascular RiskFactors In Overweight Patients:1-Year Experience From The RIO-EuropeStudy(大麻素-1受体阻滞药利莫纳班对体重减轻的作用与体重超重患者的心血管风险因子:一年RIO欧洲研究的经验),The Lancet 2005,365:1389-1397。
[0225] CB1/CB2受体的调节剂一直用于不同的临床或临床前研究。Steffens S,Veillard NR,Arnaud C,Pelli G,Burger F,Staub C,Zimmer A,Frossard J-L,Mach F,Low Dose Oral Cannabinoid Therapy ReducesProgression of Atherosclerosis in Mice(低剂量口服大麻素疗法减缓小鼠动脉粥样硬化的进程),Nature 2005,434:782-786。例如,CB1激动剂被用于治疗恶心、图雷特综合征、帕金森病、青光眼、癌症、腹泻和中风。Guzman M,Cannabinoids:Potential Anticancer Agents(大麻素:潜在的抗癌药),Nature Reviews Cancer 2003,3:745-755。另外,CB2激动剂被用于治疗疼痛、神经胶质瘤、淋巴瘤和炎症。Maresz K,Pryce G,Ponomarev ED,Marsicano G,Croxford JL,Shriver LP,Ledent C,Cheng X,Carrier EJ,Mann MK,Giovannoni G,Pertwee RG,Yamamura T,BuckleyNE,Hillard CJ,Lutz B,Baker D,Dittel BN,Direct Suppression of CNSAutoimmune Inflammation Via the Cannabinoid Receptor CB1 on Neuronsand CB2 on Autoreactive T Cells(通过神经元上的大麻素受体CB1和自体反应性T细胞上的CB2直接抑制CNS自身免疫炎症),Nat Med 2007,13:492-497。
[0226] 再者,CB1拮抗剂被用于治疗肥胖症和瘾癖。Crowley VEF,YeoGSH,O′Rahilly S,Obesity Therapy:Altering the EnergyIntake-and-Expenditure Balance Sheet(肥胖症疗法:改变能量摄取与消耗平衡表),Nature Reviews Drug Discovery 2002,1:276-286;Trang T,Sutak M,Jhamandas K,Involvement of Cannabinoid(CB1)-Receptors inthe Development and Maintenance of Opioid Tolerance(大麻素(CB1)受体参与阿片样物质耐受性的发生和维持),Neuroscience 2007,146:1275-1288;Teixeira-Clerc F,Julien B,Grenard P,Van Nhieu JT,Deveaux V,Li L,Serriere-Lanneau V,Ledent C,Mallat A,Lotersztajn S,CB1 Cannabinoid Receptor Antagonism:A New Strategy For theTreatment of Liver Fibrosis(CB1大麻素受体拮抗作用:治疗肝纤维变性的新策略),Nat Med 2006,12:671-676。例如,CB1拮抗剂SR141716A减少小鼠的食物摄取。Di Marzo V,Goparaju SK,Wang L,Liu J,Batkai S,Jarai Z,Fezza F,Miura GI,Palmiter RD,Sugiura T,Kunos G,Leptin-Regulated Endocannabinoids Are Involved In Maintaining FoodIntake(瘦蛋白调节的内源性大麻素参与维持食物摄取),Nature 2001,410:822-5。
同样,有研究列举了治疗药瘾的CB1大麻素拮抗剂。Maldonado R,Valverde O,Berrendero F,Involvement Of TheEndocannabinoid System In Drug Addiction(内源性大麻素系统参与药物成瘾),Trends Neurosci 2006,29:225-32。大麻素减弱由癌症和炎症性疾病引起的深层组织痛觉过敏。Kehl LJ,Hamamoto DT,Wacnik PW,Croft DL,Norsted BD,Wilcox GL,Simone DA,A Cannabinoid AgonistDifferentially Attenuates Deep Tissue Hyperalgesia In Animal Models OfCancer And Inflammatory Muscle Pain(癌症和炎症性肌肉疼痛动物模型中大麻素激动剂差异性减弱深层组织痛觉过敏),Pain 2003,103:
175-86。大麻素还在骨质疏松症和其它骨病治疗中具有很大的潜。Idris AI,van′t Hof RJ,Greig IR,Ridge SA,Baker D,Ross RA,RalstonSH,Regulation Of Bone Mass,Bone Loss And Osteoclast Activity ByCannabinoid Receptors(由大麻素受体调节的骨质量、骨丢失和破骨细胞活性),Nat Med 2005,11:774-9。大麻素还能够降低眼内压。SzczesniakAM,Kelly ME,Whynot S,Shek PN,Hung O.Ocular hypotensive effects ofan intratracheally delivered liposomal delta9-tetrahydrocannabinolpreparation in rats(大鼠中经气管内递送脂质体Δ9-四氢大麻酚制剂对降低眼内压力的作用),J Ocul Pharmacol Ther.2006年6月;22(3):160-7。研究还表明CB1涉及小鼠的子宫外妊娠。Wang H,Guo Y,Wang D,Kingsley PJ,Marnett LJ,Das SK,DuBois RN,Dey SK,AberrantCannabinoid Signaling Impairs Oviductal Transport of Embryos(大麻素信号转导异常有损胚胎的输卵管转运),Nat Med 2004,10:1074-1080。
[0227] 某些已发表的数据表明,人角质形成细胞参与外周内源性大麻素系统。CB1受体涉及表皮分化和皮肤发育。Maccarrone M,Di Rienzo M,Battista N,Gasperi V,Guerrieri P,Rossi A,Finazzi-Agro A,TheEndocannabinoid System In Human Keratinocytes.Evidence ThatAnandamide Inhibits Epidermal Differentiation ThroughCB1Receptor-Dependent Inhibition Of Protein Kinase C,Activation Protein-1,And Transglutaminase(人角质形成细胞中的内源性大麻素系统:花生四烯酸乙醇酰胺通过CB1受体依赖性地抑制蛋白激酶C、活化蛋白-1和转谷氨酰胺酶而抑制表皮分化的证据),J Biol Chem 2003,278:33896-903。因此,大麻素调节剂可用于治疗皮肤疾病。
[0228] 最新研究表明,大麻素抑制角质形成细胞增殖,因此支持大麻素在银屑病治疗中的潜在作用。Wilkinson JD,Williamson EM,Cannabinoids Inhibit Human Keratinocyte Proliferation Through ANon-CB1/CB2 Mechanism And Have A Potential Therapeutic Value In TheTreatment Of Psoriasis(大麻素通过非CB1/CB2机制抑制人角质形成细胞增殖并在银屑病治疗中具有潜在的治疗价值),J Dermatol Sci 2007,45:87-92。还有研究披露大麻素受体是治疗黑素瘤的新靶标。BlazquezC,Carracedo A,Barrado L,Real PJ,Fernandez-Luna JL,Velasco G,Malumbres M,Guzman M,Cannabinoid Receptors As Novel Targets ForThe Treatment Of Melanoma(作为治疗黑素瘤新靶标的大麻素受体),Faseb J 2006,20:2633-5。
[0229] 制备化合物的通用合成方法
[0230] 下列流程可用来实施本发明。
[0231] 式I、式II、式III、式IV和式V化合物的通用合成流程:
[0232]
[0233] 利用碱(例如碳酸铯或氢化钠)使相应的碘苯酚a(Z=O,碘苯胺,Z=N,可用于吲哚类似物)烷基化,可得到式I、式II、式III、式IV和式V化合物,例如得到酚醚b。在氢化物供体(例如甲酸铵或有机金属衍生物)存在下,使酚醚进行过渡金属元素(例如镍或钯)催化的环化,以得到环化的2,3-二氢苯并呋喃(或吲哚)产物c。对酯进行皂化后,得到相应的羧酸d,采用例如HATU、DIEA的肽偶联方法,得到相应的酰胺衍生物e(R1=NHR)。采用Weinreb酰胺(R1=NHOMe)以供有机金属的加入(例如己基锂等),得到酮产物f,其中R1为例如烷基或芳基。
[0234] 通过下列实施例对本发明作进一步阐述。
[0235] 实施例1
[0236] 3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(2-碘-苯基)-酰胺
[0237]
[0238] A)4-碘-3-(2-甲基-烯丙氧基)-苯甲酸甲酯
[0239] 向3-羟基-4-碘苯甲酸甲酯(1.5g,5.4mmol)的无水甲基乙基酮(60ml)溶液中依次加入碳酸钾细粉(1.49g,10.78mmol)和3-溴-2-甲基-丙烯(0.81ml,1.1g,8.15mmol)。将反应混合物在70℃下加热4小时。将混合物稀释过滤,用水洗涤后,经MgSO4干燥。蒸发溶剂后,真空蒸发残留的溴丙烯,得到需要的烷基化酯,为黄色油状物。质量:1.4g,收率:
78%。
1
[0240] NMR(CDCl3,H):1.90(3H,d,J=1.2Hz),3.94(3H,s),4.56(2H,s),5.06(1H,d,J=1.2Hz),5.25(1H,d,J=1.2Hz),7.38(1H,dd,J=8.1Hz,J=1.8Hz),7.44(1H,d,J=1.8Hz),7.88(1H,d,J=1.8Hz)。
[0241] B)3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸甲酯
[0242] 向实施例4(A)中得到的4-碘-3-(2-甲基-烯丙氧基)-苯甲酸甲酯(455mg,1.37mmol)的DMF(15ml)溶液中加入碳酸钾(379mg,2.74mmol)、四丁基氯化铵(380mg,
1.37mmol)、乙酸钯(25.6mg,0.136mmol)的DMF(5ml)溶液和苯基酸(200mg,1.64mmol)。
将所得混合物在115℃下搅拌3小时,冷却至室温,经二氧化硅过滤,用水洗涤,经MgSO4干燥后浓缩。进行柱色谱法处理(硅胶,庚烷/CH2Cl2:4/6),得到368mg(95%)标题化合物,为结晶的略带褐色的油状物。熔点:52℃。
1
[0243] NMR(CDCl3,H):1.38(3H,s),2.86(1H,d,J = 14Hz),2.93(1H,d,J = 14Hz),3.89(3H,s),4.12(1H,d,J = 8.7Hz),4.55(1H,d,J = 8.7Hz),6.93-6.98(3H,m),
7.22-7.24(3H,m),7.38(1H,d,J=1.2Hz),7.59(1H,dd,J1=7.5Hz,J2=1.2Hz)。
[0244] C)3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸
[0245] 将实施例4(B)中得到的3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸甲酯(300mg,1.06mmol)、氢氧化钠(260mg,6.5mmol)、乙醇(10ml)和水(1ml)与四氢呋喃(10ml)的混合物在室温下搅拌12小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(Na2SO4)后,在旋转蒸发器中浓缩。得到产物,为白色固体(300mg,100%)。熔点:165℃。
1
[0246] NMR(CDCl3,H):1.39(3H,s),2.87(1H,d,J = 14Hz),2.93(1H,d,J = 14Hz),4.14(1H,d,J=8.7Hz),4.57(1H,d,J=8.7Hz),6.96-7.00(3H,m),7.22-7.25(3H,m),
7.45(1H,d,J=1.2Hz),7.65(1H,dd,J1=7.8Hz,J2=1.2Hz)。
[0247] D)3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(2-碘-苯基)-酰胺
[0248] 向3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(80mg,0.3mmol)和2-碘苯胺(72mg,0.33mmol)与二氯甲烷(3ml)和DMF(2ml)的搅拌悬浮液中加入六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(125mg,0.33mmol),然后加入N,N-二异丙基乙胺(58mg,78μl,0.45mmol,mL)的DMF(1ml)溶液。将反应混合物在环境温度下搅拌18小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(MgSO4)后浓缩,得到酰胺,将其用快速色谱法纯化(AcOEt/庚烷:4/6)。选择的柱太小,则选择较大的柱(AcOEt/庚烷:4/6),得到22mg所需酰胺,为浅黄色固体(16%)。
[0249] NMR(CDCl3,1H):1.44(3H,s),2.92(1H,d,J=13.2Hz),2.98(1H,d,J=13.2Hz),4.21(1H,d,J = 8.7Hz),4.62(1H,d,J = 8.7Hz),6.98-7.00(2H,m),7.07(1H,d,J =
7.8Hz),7.26-728(4H,m),7.46(1H,dd,J1=4.5Hz,J2=8.4Hz),7.61(1H,d,J=1.2Hz),
7.85(1H,dd,J1=1.2Hz,J2=7.8Hz),8.46(1H,dd,J1=1.5Hz,J2=8.4Hz),8.74(1H,dd,J1=1.5Hz,J2=4.5Hz)。
[0250] 实施例2
[0251] 3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸环己基酰胺
[0252]
[0253] A)4-碘-3-(2-甲基-烯丙氧基)-苯甲酸甲酯
[0254] 向3-羟基-4-碘苯甲酸甲酯(1.5g,5.4mmol)的无水甲基乙基酮(60ml)溶液中依次加入碳酸钾细粉(1.49g,10.78mmol)和3-溴-2-甲基-丙烯(0.81ml,1.1g,8.15mmol)。将反应混合物在70℃下加热4小时。将混合物稀释过滤,用水洗涤后,经MgSO4干燥。蒸发溶剂后,真空蒸发残留的溴丙烯,得到需要的烷基化酯,为黄色油状物。质量:1.4g,收率:
78%。
[0255] NMR(CDCl3,1H):1.90(3H,d,J=1.2Hz),3.94(3H,s),4.56(2H,s),5.06(1H,d,J=1.2Hz),5.25(1H,d,J=1.2Hz),7.38(1H,dd,J=8.1Hz,J=1.8Hz),7.44(1H,d,J=1.8Hz),7.88(1H,d,J=1.8Hz)。
[0256] B)3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸甲酯
[0257] 向实施例4(A)中得到的4-碘-3-(2-甲基-烯丙氧基)-苯甲酸甲酯(455mg,1.37mmol)的DMF(15ml)溶液中加入碳酸钾(379mg,2.74mmol)、四丁基氯化铵(380mg,
1.37mmol)、乙酸钯(25.6mg,0.136mmol)的DMF(5ml)溶液和苯基硼酸(200mg,1.64mmol)。
将所得混合物在115℃下搅拌3小时,冷却至室温,经二氧化硅过滤,用水洗涤,经MgSO4干燥后浓缩。进行柱色谱法处理(硅胶,庚烷/CH2Cl2:4/6),得到368mg(95%)标题化合物,为结晶的略带褐色的油状物。熔点:52℃。
[0258] NMR(CDCl3,1H):1.38(3H,s),2.86(1H,d,J = 14Hz),2.93(1H,d,J = 14Hz),3.89(3H,s),4.12(1H,d,J = 8.7Hz),4.55(1H,d,J = 8.7Hz),6.93-6.98(3H,m),
7.22-7.24(3H,m),7.38(1H,d,J=1.2Hz),7.59(1H,dd,J1=7.5Hz,J2=1.2Hz)。
[0259] C)3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸
[0260] 将实施例4(B)中得到的3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸甲酯(300mg,1.06mmol)、氢氧化钠(260mg,6.5mmol)、乙醇(10ml)和水(1ml)与四氢呋喃(10ml)的混合物在室温下搅拌12小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(Na2SO4)后,在旋转蒸发器中浓缩。得到产物,为白色固体(300mg,100%)。熔点:165℃。
[0261] NMR(CDCl3,1H):1.39(3H,s),2.87(1H,d,J = 14Hz),2.93(1H,d,J = 14Hz),4.14(1H,d,J=8.7Hz),4.57(1H,d,J=8.7Hz),6.96-7.00(3H,m),7.22-7.25(3H,m),
7.45(1H,d,J=1.2Hz),7.65(1H,dd,J1=7.8Hz,J2=1.2Hz)。
[0262] D)3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸环己基酰胺
[0263] 向之前在实施例4(C)中得到的3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(80mg,0.3mmol)和环己胺(33mg,38μl,0.33mmol)与二氯甲烷(3ml)和DMF(2ml)的搅拌悬浮液中加入六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(125mg,0.33mmol),然后加入N,N-二异丙基乙胺(58mg,78μl,0.45mmol,mL)的DMF(1ml)溶液。将反应混合物在环境温度下搅拌18小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(MgSO4)后浓缩,得到酰胺,将其用快速色谱法纯化(AcOEt/庚烷:4/6),得到70mg白色固体(收率:67%)。
[0264] NMR(CDCl3,1H):1.15-1.28(3H,m),1.34-1.46(5H,m),1.6-1.78(3H,m),1.99-2.04(2H,m),2.00-2.04(2H,m),2.86(1H,d,J=13.2Hz),2.92(1H,d,J=13.2Hz),
3.96(1H,m),4.11(1H,d,J=8.7Hz),4.54(1H,d,J=8.7Hz),5.85(1H,m),6.92(1H,d,J=7.5Hz),6.96-6.99(2H,m),7.10(1H,d,J=1.5Hz),7.22-728(4H,m)。
[0265] 实施例3
[0266] 3-苄基-3-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-6-甲酸-哌啶酰胺
[0267]
[0268] 向之前在实施例1(C)中得到的3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(80mg,0.3mmol)和哌啶(28mg,33μl 0.33mmol)与二氯甲烷(3ml)和DMF(2ml)的搅拌悬浮液中加入六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(125mg,0.33mmol),然后加入N,N-二异丙基乙胺(58mg,78μl,0.45mmol,mL)的DMF(1ml)溶液。将反应混合物在环境温度下搅拌18小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(MgSO4)后浓缩,得到酰胺,将其用快速色谱法纯化(AcOEt/庚烷:4/6),得到50mg白色固体(收率:50%)。
[0269] NMR(CDCl3,1H):1.36(3H,s),1.54-1.67(6H,m),2.85(1H,d,J = 13.2Hz),2.90(1H,d,J=13.2Hz),3.35(2H,m),3.68(2H,m),4.09(1H,d,J=8.7Hz),4.53(1H,d,J=8.7Hz),6.75(1H,m),6.88(1H,dd,J1=7.5Hz,J2=1.2Hz),6.94(1H,d,J=7.5Hz),
7.00(2H,m),7.21-7.24(3H,m)。
[0270] 实施例4
[0271] 3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-5-甲酸-邻碘酰苯胺
[0272]
[0273] A)4-羟基-3-碘-苯甲酸
[0274] 将4-羟基苯甲酸(0.037mol,5.1g)溶于100ml甲醇。加入碘化钠(0.037mol,5.54g)和氢氧化钠(0.037mol,1.48g)各1当量后,使该溶液冷却至0℃。在0-3℃下,在
75分钟内滴加次氯酸钠水溶液(64ml,4.0%NaOCl)。当每一滴触及溶液时,出现红色,并几乎立即褪色。将所得无色浆液在0-2℃下搅拌1小时,然后用40ml 10%硫代硫酸钠水溶液处理。加入4M HCl水溶液使混合物酸化。产物结晶后滤出,得到1.1g。加入乙酸乙酯(250ml)后,分离各层。有机层用盐水(240ml)、水洗涤,然后经MgSO4干燥。蒸发溶剂后,得到4.3g白色粉末。将水相酸化至pH 1。加入乙酸乙酯(250ml)后,分离各层。有机层用盐水(240ml)、水洗涤,然后经MgSO4干燥。蒸发溶剂后,得到8.22g白色粉末。
[0275] B)4-羟基-3-碘苯甲酸甲酯
[0276] 将3-碘-4-羟基苯甲酸(7.25g,27.4mmol)和硫酸(1.9ml,36mmol)的甲醇溶液在55℃下搅拌6小时。TLC(二氯甲烷):原料30%。将该溶液在室温下搅拌12小时。TLC(二氯甲烷):原料10%,在55℃下搅拌2小时。冷却后,加入乙酸乙酯(200ml),用碳酸氢钠调节混合物至pH 3。有机层用水洗涤2次,然后经MgSO4干燥。过滤后,在40℃下旋转蒸发,得到白色固体。固体用己烷研磨,滤出后减压干燥。质量=4.47g。收率:59%。
[0277] C)3-碘-4-(2-甲基-烯丙氧基)-苯甲酸甲酯
[0278] 向4-羟基-3-碘苯甲酸甲酯(1.5g,5.4mmol)的无水甲基乙基酮(60ml)溶液中依次加入碳酸钾细粉(1.49g,10.78mmol)和3-溴-2-甲基-丙烯(0.81ml,1.1g,8.15mmol)。将反应混合物在70℃下加热4小时。将混合物稀释过滤,用水洗涤后,经MgSO4干燥。蒸发溶剂后,真空蒸发残留的溴丙烯,得到需要的烷基化酯,为黄色油状物。质量:1.77,收率:
98%。
[0279] 1H(CDCl3):1.88(3H,d,J=1.2Hz),3.09(3H,s),4.54(2H,s),5.04(1H,d,J =1.2Hz),5.19(1H,d,J=1.2Hz),6.80(1H,d,J=8.7Hz),7.98(1H,dd,J=8.7Hz,J=
1.8Hz),8.46(1H,d,J=1.8Hz)。
[0280] D)3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-5-甲酸甲酯
[0281] 向3-碘-4-(2-甲基-烯丙氧基)-苯甲酸甲酯(455mg,1.37mmol)的DMF(15ml)溶液中加入碳酸钾(379mg,2.74mmol)、四丁基氯化铵(380mg,1.37mmol)、乙酸钯(25.6mg,0.136mmol)的DMF(5ml)溶液和苯基硼酸(200mg,1.64mmol)。将所得混合物在115℃下搅拌3小时,冷却至室温,经二氧化硅过滤,用水洗涤,经MgSO4干燥后浓缩。进行柱色谱法处理(硅胶,庚烷/CH2Cl2:4/6),得到202mg(52%)标题化合物,为浅褐色油状物。
[0282] NMR(CDCl3,1H):1.39(3H,s),2.87(1H,d,J = 15Hz),2.93(1H,d,J = 15Hz),3.89(3H,s),4.13(1H,d,J=9Hz),4.59(1H,d,J=9Hz),6.74(1H,d,J=8.4Hz),6.9992H,m),7.22-7.24(3H,m),7.72(1H,d,J=1.8Hz),7.89(1H,dd,J1=8.4Hz,J2=1.8Hz)。
[0283] E)3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-5-甲酸
[0284] 将3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-5-甲酸甲酯(125mg,0.44mmol)、氢氧化钠(120mg,3mmol)、乙醇(6ml)和水(1ml)与四氢呋喃(6ml)的混合物在室温下搅拌12小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(Na2SO4)后,在旋转蒸发器中浓缩。得到产物,为略带褐色的油状物(116mg,97%)。
[0285] NMR(CDCl3,1H):1.30(3H,s),2.77(1H,d,J = 13Hz),2.83(1H,d,J = 13Hz),4.05(1H,d,J = 9Hz),4.52(1H,d,J = 9Hz),6.67(1H,d,J = 8.4Hz),6.86-6.89(2H,m),7.11-7.14(3H,m),7.69(1H,d,J=1.8Hz),7.89(1H,dd,J1=8.4Hz,J2=1.8Hz),
11.41(1H)。
[0286] F)-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-5-甲酸-邻碘酰苯胺
[0287] 向3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-5-甲酸(60mg,0.225mmol)和2-碘苯胺(54mg,0.25mmol)与二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)的搅拌悬浮液中加入六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)与N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液。将反应混合物在环境温度下搅拌18小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(MgSO4)后浓缩,得到酰胺,将其用快速色谱法纯化(AcOEt/庚烷:3/7),得到10mg(10%)略带褐色的固体。
[0288] NMR(CDCl3,1H):1.45(3H,s),2.88(1H,d,J=13.5Hz),2.98(1H,d,J=13.5Hz),4.24(1H,d,J=9Hz),4.70(1H,d,J=9Hz),6.89(1H,d,J=8.4Hz),6.96-7.02(3H,m),
7.22-7.28(3H,m),7.46(2H,dd,J1=4.5Hz,J2=8.4Hz),7.89(1H,d,2.1Hz),8.16(1H,dd,J=1.8Hz,j=8.4Hz),8.47(1H,dd,J1=1.2Hz,J2=8.4Hz)。
[0289] 实施例5
[0290] 3-苄基-3-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸-环己基酰胺
[0291]
[0292] A)4-羟基-3-碘-苯甲酸
[0293] 将4-羟基苯甲酸(0.037mol,5.1g)溶于100ml甲醇。加入碘化钠(0.037mol,5.54g)和氢氧化钠(0.037mol,1.48g)各1当量后,使该溶液冷却至0℃。在0-3℃下,在
75分钟内滴加次氯酸钠水溶液(64ml,4.0%NaOCl)。当每一滴触及溶液时,出现红色,并几乎立即褪色。将所得无色浆液在0-2℃下搅拌1小时,然后用40ml 10%硫代硫酸钠水溶液处理。加入4M HCl水溶液使混合物酸化。产物结晶后,滤出,得到1.1g。加入乙酸乙酯(250ml)后,分离各层。有机层用盐水(240ml)、水洗涤,然后经MgSO4干燥。蒸发溶剂后,得到4.3g白色粉末。将水相酸化至pH 1。加入乙酸乙酯(250ml),分离各层。有机层用盐水(240ml)、水洗涤,然后经MgSO4干燥。蒸发溶剂后,得到8.22g白色粉末。
[0294] B)4-羟基-3-碘苯甲酸甲酯
[0295] 3-碘-4-羟基苯甲酸(7.25g,27.4mmol)和硫酸(1.9ml,36mmol)的甲醇溶液在55℃下搅拌6小时。TLC(二氯甲烷):原料30%。将该溶液在室温下搅拌12小时。TLC(二氯甲烷):原料10%,并在55℃下搅拌2小时。冷却后,加入乙酸乙酯(200ml),用碳酸氢钠调节混合物至pH 3。有机层用水洗涤2次,然后经MgSO4干燥。过滤后,在40℃下旋转蒸发,得到白色固体。固体用己烷研磨,滤出后减压干燥。质量=4.47g。收率:59%。
[0296] C)3-碘-4-(2-甲基-烯丙氧基)-苯甲酸甲酯
[0297] 向4-羟基-3-碘苯甲酸甲酯(1.5g,5.4mmol)的无水甲基乙基酮(60ml)溶液中依次加入碳酸钾细粉(1.49g,10.78mmol)和3-溴-2-甲基-丙烯(0.81ml,1.1g,8.15mmol)。将反应混合物在70℃下加热4小时。将混合物稀释过滤,用水洗涤后,经MgSO4干燥,蒸发溶剂后,真空蒸发残留的溴丙烯,得到需要的烷基化酯,为黄色油状物。质量:1.77,收率:
98%。
[0298] 1H(CDCl3):1.88(3H,d,J=1.2Hz),3.09(3H,s),4.54(2H,s),5.04(1H,d,J =1.2Hz),5.19(1H,d,J=1.2Hz),6.80(1H,d,J=8.7Hz),7.98(1H,dd,J=8.7Hz,J=
1.8Hz),8.46(1H,d,J=1.8Hz)。
[0299] D)3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-5-甲酸甲酯
[0300] 向3-碘-4-(2-甲基-烯丙氧基)-苯甲酸甲酯(455mg,1.37mmol)的DMF(15ml)溶液中加入碳酸钾(379mg,2.74mmol)、四丁基氯化铵(380mg,1.37mmol)、乙酸钯(25.6mg,0.136mmol)的DMF(5ml)溶液和苯基硼酸(200mg,1.64mmol)。将所得混合物在115℃下搅拌3小时,冷却至室温,经二氧化硅过滤,用水洗涤,经MgSO4干燥后浓缩。进行柱色谱法处理(硅胶,庚烷/CH2Cl2:4/6),得到202mg(52%)标题化合物,为略带褐色的油状物。
[0301] NMR(CDCl3,1H):1.39(3H,s),2.87(1H,d,J = 15Hz),2.93(1H,d,J = 15Hz),3.89(3H,s),4.13(1H,d,J=9Hz),4.59(1H,d,J=9Hz),6.74(1H,d,J=8.4Hz),6.9992H,m),7.22-7.24(3H,m),7.72(1H,d,J=1.8Hz),7.89(1H,dd,J1=8.4Hz,J2=1.8Hz)。
[0302] E)3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-5-甲酸
[0303] 将3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-5-甲酸甲酯(125mg,0.44mmol)、氢氧化钠(120mg,3mmol)、乙醇(6ml)和水(1ml)与四氢呋喃(6ml)的混合物在室温下搅拌12小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(Na2SO4)后,在旋转蒸发器中浓缩。得到产物,为略带褐色的油状物(116mg,97%)。
[0304] NMR(CDCl3,1H):1.30(3H,s),2.77(1H,d,J = 13Hz),2.83(1H,d,J = 13Hz),4.05(1H,d,J = 9Hz),4.52(1H,d,J = 9Hz),6.67(1H,d,J = 8.4Hz),6.86-6.89(2H,m),7.11-7.14(3H,m),7.69(1H,d,J=1.8Hz),7.89(1H,dd,J1=8.4Hz,J2=1.8Hz),
11.41(1H)。
[0305] F)3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-5-甲酸环己基酰胺
[0306] 向之前在实施例4(E)中得到的3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-5-甲酸(60mg,0.225mmol)和环己胺(25mg,29μl,0.25mmol)与二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)的搅拌悬浮液中加入六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol),然后加入N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌18小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(MgSO4)后浓缩,得到酰胺,为白色固体。该固体用庚烷和二氯甲烷9/1的混合物洗涤,得到38mg白色固体(收率:48%)。浓缩滤液后,所得白色固体用庚烷和二氯甲烷(9/1)的混合物洗涤,得到13mg白色固体。
[0307] NMR(CDCl3,1H):1.19-1.28(3H,m),1.3-1.45(9H,m),2.02(2H,m),2.86(1H,d,J=13.5Hz),2.92(1H,d,J=13.5Hz),3.91-3.97(2H,m),4.14(1H,d,J=8.7Hz),4.57(1H,d,J=8.7Hz),5.73(1H,m),6.75(1H,d,J=8.4Hz),6.96-6.99(2H,m),7.23-7.26(4H,m),
7.56(1H,dd,J=1.8Hz,j=8.4Hz)。
[0308] 实施例6
[0309] 3-苄基-3-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸-哌啶酰胺
[0310]
[0311] 向之前在实施例4(E)中得到的3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-5-甲酸(60mg,0.225mmol)和哌啶(21mg,25μl,0.25mmol)与二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)的搅拌悬浮液中加入六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液。将反应混合物在环境温度下搅拌18小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(MgSO4)后浓缩,得到酰胺,将其用快速色谱法纯化(AcOEt/庚烷:4/6),得到54mg(71.5%)所需酰胺,为无色油状物。1
[0312] NMR(CDCl3,H):1.37(3H,s),1.58-1.69(6H,m),2.86(1H,d,J = 13.5Hz),2.92(1H,d,J=13.5Hz),3.51(4H,宽峰),4.10(1H,d,J=8.7Hz),4.54(1H,d,J=8.7Hz),
6.73(1H,d,J=8.1Hz),6.98-7.03(3H,m),7.18-7.23(4H,m)。
[0313] 实施例7
[0314] 3-苄基-3-甲基-2,3-二氢苯并呋喃-5-甲酸(2,2-二甲基-丙基)-酰胺
[0315]
[0316] 按类似于实施例6的方法,使之前在实施例1(C)中得到的3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(60mg,0.225mmol)、新戊胺(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为无色油状物。NMR(CDCl3):δ0.98(s,9H),1.37(s,6H),2.86(d,
1H),2.91(d,1H),3.26(d,2H),4.12(d,1H),4.54(d,1H),6.08(br s,1H),6.95(d,1H),
6.98-7.00(m,2H),7.12(d,1H),7.23-7.25(m,3H),7.29(dd,1H)。
[0317] 实施例8
[0318] 3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(四氢-吡喃-4-基甲基)-酰胺
[0319]
[0320] 按类似于实施例6的方法,使之前在实施例1(C)中得到的3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(60mg,0.225mmol)、4-(氨基甲基)四氢吡喃(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为无色油状物。NMR(CDCl3):δ1.30-1.45(m,
9H),1.65(d,2H),2.86(d,1H),2.91(d,1H),3.23-3.40(m,4H),3.98(dd,2H),4.12(d,1H),
4.54(d,1H),6.23(br s,1H),6.94(d,1H),6.98-7.00(m,2H),7.12(d,1H),7.23-7.25(m,
3H),7.28(dd,1H)。
[0321] 实施例9
[0322]
[0323] 按类似于实施例6的方法,使之前在实施例1(C)中得到的3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(60mg,0.225mmol)、吗啉(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为无色油状物。NMR(CDCl3):δ1.36(s,6H),2.86(d,1H),2.90(d,
1H),3.46-3.72(br m,8H),4.10(d,1H),4.54(d,1H),6.77(d,1H),6.90(dd,1H),6.95(d,
1H),7.00(dd,1H),7.22-7.26(m,3H)。
[0324] 实施例10
[0325] 3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(2,2-二甲基-丙基)-甲基-酰胺
[0326]
[0327] 按类似于实施例6的方法,使之前在实施例1(C)中得到的3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(60mg,0.225mmol)、N-叔丁基甲胺(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-与二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为无色油状物。NMR(CDCl3):δ1.35(s,6H),1.49(s,
9H),2.85-2.88(m,5H),4.08(d,1H),4.51(d,1H),6.78(d,1H),6.89(d,1H),6.93(dd,1H),
6.97-7.00(m,2H),7.20-7.24(m,3H)。
[0328] 实施例11
[0329] 3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸((S)-1,2,2-三甲基-丙基)-酰胺
[0330]
[0331] 按类似于实施例6的方法,使之前在实施例1(C)中得到的3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(60mg,0.225mmol)、(S)-(+)-3,3-二甲基-2-丁胺(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为无色油状物。NMR(CDCl3):δ0.97(s,
9H),1.15(d,3H),1.36(s,3H),2.86(d,1H),2.93(d,1H),4.06-4.13(m,2H),4.54(d,1H),
6.93(d,1H),6.99(dd,1H),7.10(dd,1H),7.23-7.29(m,5H)。
[0332] 实施例12
[0333] 3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸((R)-1,2,2-三甲基-丙基)-酰胺
[0334]
[0335] 按类似于实施例6的方法,使之前在实施例1(C)中得到的3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(60mg,0.225mmol)、(R)-(-)-3,3-二甲基-2-丁胺(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为无色油状物。
[0336] 实施例13
[0337] [3-(4-氯-苄基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-基]-哌啶-1-基-甲酮
[0338]
[0339] A)3-(4-氯-苄基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸甲酯
[0340] 将4-碘-3-(2-甲基-烯丙氧基)-苯甲酸甲酯(455mg,1.37mmol)的DMF(15ml)溶液加到碳酸钾(379mg,2.74mmol)、四丁基氯化铵(380mg,1.37mmol)、乙酸钯(25.6mg,0.136mmol)的DMF(5ml)溶液和4-氯苯基硼酸(256mg,1.64mmol)中,在140℃下进行微波照射21分钟。所得混合物经二氧化硅过滤,用水洗涤,经MgSO4干燥后浓缩。进行柱色谱法处理(硅胶,庚烷/CH2Cl2:5/5),得到160mg(37%)标题化合物,为略带褐色的油状物。
[0341] B)3-(4-氯-苄基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸
[0342] 将3-(4-氯-苄基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸甲酯(100mg,0.32mmol)、氢氧化钠(100mg,2.5mmol)、乙醇(3ml)和水(0.5ml)与四氢呋喃(4ml)的混合物在室温下搅拌12小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(Na2SO4)后,在旋转蒸发器中浓缩。得到产物,为白色固体。(质量:89mg,
92%)。
[0343] C)[3-(4-氯-苄基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-基]-哌啶-1-基-甲酮[0344] 按类似于实施例6的方法,使之前在实施例13(B)中得到的3-(4-氯-苄基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(0.225mmol)、哌啶(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为无色油状物。NMR(CDCl3):δ1.36(s,3H),2.84(t,1H),
3.33(br s,2H),3.67(br s,2H),4.10(d,1H),4.48(d,1H),6.74(s,1H),6.88-6.91(m,4H),
7.2(d,2H)。
[0345] 实施例14
[0346] (3-甲基-3-萘-1-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-基)-哌啶-1-基-甲酮
[0347]
[0348] A)3-甲基-3-萘-1-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸甲酯
[0349] 将4-碘-3-(2-甲基-烯丙氧基)-苯甲酸甲酯(455mg,1.37mmol)的DMF(15ml)溶液加到碳酸钾(379mg,2.74mmol)、四丁基氯化铵(380mg,1.37mmol)、乙酸钯(25.6mg,0.136mmol)的DMF(5ml)溶液和1-萘基硼酸(282mg,1.64mmol)中,在100℃下进行微波照射10分钟,因为150℃下15分钟未完成反应。所得混合物经二氧化硅过滤,用水洗涤,经MgSO4干燥后浓缩。进行柱色谱法处理(硅胶,庚烷/CH2Cl2:4/6),得到196mg(43%)标题化合物,为略带褐色的油状物。
[0350] B)3-甲基-3-萘-1-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸
[0351] 将3-甲基-3-萘-1-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸甲酯(150mg,0.45mmol)、氢氧化钠(150mg,3.75mmol)、乙醇(5ml)和水(1ml)与四氢呋喃(5ml)的混合物在室温下搅拌12小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(Na2SO4)后,在旋转蒸发器中浓缩。得到产物,为褐色油状物(质量:128mg,
89%)。
[0352] C)(3-甲基-3-萘-1-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-基)-哌啶-1-基-甲酮[0353] 按类似于实施例6的方法,通过之前在实施例14(B)中得到的3-甲基-3-萘-1-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(0.225mmol)、哌啶(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为无色油状物。NMR(CDCl3):δ1.43(s,H),3.30(brd,3H),3.50(d,1H),3.67(br s,2H),4.09(d,1H),4.58(d,1H),6.74(m,2H),7.19(dd,1H),7.32-7.43(m,
3H),7.75(d,1H),7.81(d,1H)。
[0354] 实施例15
[0355] (3-甲基-3-萘-2-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-基)-哌啶-1-基-甲酮
[0356]
[0357] A)3-甲基-3-萘-2-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸甲酯
[0358] 将4-碘-3-(2-甲基-烯丙氧基)-苯甲酸甲酯(455mg,1.37mmol)的DMF(15ml)溶液加到碳酸钾(379mg,2.74mmol)、四丁基氯化铵(380mg,1.37mmol)、乙酸钯(25.6mg,0.136mmol)的DMF(5ml)溶液和2-萘基硼酸(282mg,1.64mmol)中,在150℃下进行微波照射16分钟。所得混合物经二氧化硅过滤,用水洗涤,经MgSO4干燥后浓缩。进行柱色谱法处理(硅胶,庚烷/CH2Cl2:4/6),得到100mg(22%)标题化合物,为结晶的略带褐色的油状物。
[0359] B)3-甲基-3-萘-2-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸
[0360] 将PhD001.125(80mg,0.24mmol)、氢氧化钠(90mg,2.25mmol)、乙醇(4ml)和水(1ml)与四氢呋喃(4ml)的混合物在室温下搅拌12小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(Na2SO4)后,在旋转蒸发器中浓缩。得到产物,为白色固体(质量:52mg,收率:68%)。
[0361] C)(3-甲基-3-萘-2-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-基)-哌啶-1-基-甲酮[0362] 按类似于实施例6的方法,使之前在实施例15(B)中得到的3-甲基-3-萘-2-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(0.225mmol)、哌啶(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为无色油状物。NMR(CDCl3):δ1.41(s,H),3.04(d,2H),3.34(br s,2H),3.68(br s,2H),4.09(d,1H),4.60(d,1H),6.74(m,2H),6.88(dd,1H),6.95(d,2H),7.12(dd,1H),7.42-7.46(m,3H),7.69-7.74(m,2H),7.79(dd,1H)。
[0363] 实施例16
[0364] [3-((E)-己-2-烯基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-基]-哌啶-1-基-甲酮
[0365]
[0366] A)3-((E)-己-2-烯基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸甲酯
[0367] 将4-碘-3-(2-甲基-烯丙氧基)-苯甲酸甲酯(65mg,0.2mmol)的DMF(2ml)溶液加到碳酸钾(54mg,0.39mmol)、四丁基氯化铵(54mg,0.2mmol)、乙酸钯(3.5mg,0.02mmol)的DMF(5ml)溶液和1-戊烯-1-基硼酸(26mg,0.23mmol)中。将所得混合物在微波照射下搅拌(160℃,15分钟)后,冷却至室温,经二氧化硅过滤,用水洗涤,经MgSO4干燥后浓缩。进行柱色谱法处理(硅胶,庚烷/CH2Cl2:4/6),得到标题化合物,为接近无色的油状物。
[0368] B)3-((E)-己-2-烯基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸
[0369] 将3-((E)-己-2-烯基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸甲酯(200mg,0.73mmol)、氢氧化钠(200mg,5mmol)、乙醇(7ml)和水(1ml)与四氢呋喃(7ml)的混合物在室温下搅拌12小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(Na2SO4)后,在旋转蒸发器中浓缩。得到产物,为结晶的无色油状物(质量:
155mg,82%)。
[0370] C)[3-((E)-己-2-烯基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-基]-哌啶-1-基-甲酮
[0371] 按类似于实施例6的方法,使之前在实施例16(B)中得到的3-((E)-己-2-烯基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(0.225mmol)、哌啶(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为无色油状物。NMR(CDCl3):δ0.86(t,3H),1.23-1.40(m,5H),1.95(dd,2H),2.28(d,2H),3.35(br s,2H),3.34(brs,2H),3.67(br s,2H),4.13(d,
1H),4.40(d,1H),5.24-5.34(m,1H),5.40-5.50(m,1H),6.77(d,1H),6.88(dd,1H),7.06(d,
1H)。
[0372] 实施例17
[0373] 3-((E)-己-2-烯基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸环己基酰胺
[0374]
[0375] 按类似于实施例6的方法,使之前在实施例16(B)中得到的3-((E)-己-2-烯基)-3-甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(0.225mmol)、环己胺(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为无色油状物。NMR(CDCl3):δ0.86(t,3H),1.19-2.03(m,13H),2.28(d,2H),3.89-4.02(m,1H),4.14(d,1H),4.41(d,1H),5.23-5.29(m,1H),
5.42-5.47(m,1H),5.85(d,1H),7.09(d,1H),7.11(d,1H),7.27(dd,1H)。
[0376] 实施例18
[0377] 3-甲基-3-萘-1-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸环己基酰胺
[0378]
[0379] 按类似于实施例6的方法,使之前在实施例14(B)中得到的3-甲基-3-萘-1-基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-甲酸(0.225mmol)、环己胺(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为无色油状物。NMR(CDCl3):δ1.20-1.59(m,11H),2.00(d,2H),3.38(dd,2H),3.90-3.98(m,1H),4.09(d,1H),4.57(d,1H),5.85(d,1H),6.84(d,1H),
7.12-7.17(m,3H),7.33-7.46(m,3H),7.75(d,1H),7.82-7.87(m,2H)。
[0380] 实施例19
[0381] 3-苄基-3-甲基-6-(哌啶-1-羰基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮
[0382]
[0383] A)4-碘-3-(2-甲基-丙烯酰氨基)-苯甲酸甲酯
[0384] 向3-氨基-4-碘苯甲酸甲酯(1.67g,6mmol)和甲基丙烯酸(568mg,6.6mmol)与二氯甲烷(60ml)和DMF(60ml)的搅拌悬浮液中加入六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(2.5g,6.6mmol),然后加入N,N-二异丙基乙胺(1.16g,1560μl,9mmol)的DMF(20ml)溶液。将反应混合物在环境温度下搅拌24小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(MgSO4)后浓缩,得到酰胺,将其用快速色谱法纯化(AcOEt/庚烷:5/5)。
[0385] B)3-苄基-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-甲酸甲酯
[0386] 按类似于实施例1B的方法,使实施例19(A)中得到的4-碘-3-(2-甲基-丙烯酰氨基)-苯甲酸甲酯(1.37mmol)的DMF(20ml)溶液、碳酸钾(379mg,2.74mmol)、四丁基氯化铵(380mg,1.37mmol)、乙酸钯(25.6mg,0.136mmol)和苯基硼酸(200mg,1.64mmol)进行反应,用快速色谱法纯化(AcOEt/庚烷:4/6)后,得到预期的衍生物,为无色油状物。
[0387] C)3-苄基-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-甲酸
[0388] 按类似于实施例1C的方法,使实施例19(B)中得到的3-苄基-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-甲酸甲酯(1.06mmol)、氢氧化钠(260mg,6.5mmol)、乙醇(10ml)和水(1ml)的四氢呋喃(10ml)溶液进行反应,得到预期的衍生物,为白色固体。
[0389] D)3-苄基-3-甲基-6-(哌啶-1-羰基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮
[0390] 按类似于实施例6的方法,使之前在实施例19(C)中得到的3-苄基-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-甲酸(0.225mmol)、环己胺(0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)和DMF(1ml)溶液、六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(HATU)(94mg,0.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,59μl,0.34mmol)的DMF(1ml)溶液进行反应,用快速色谱法纯化(AcOEt/庚烷:7/3)后,得到预期的衍生物,为无色油状物。
[0391] 实施例20
[0392] (3-苄基-3-甲氧基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-基)-哌啶-1-基-甲酮
[0393]
[0394] A)[3-(2-氯甲基-烯丙氧基)-4-碘-苯基]-哌啶-1-基-甲酮
[0395] 将碳酸铯(940mg,2.88mmol)、3-羟基-4-碘-苯甲酸甲酯(400mg,1.44mmol)、3-氯-2-氯甲基-1-丙烯(360mg,2.88mmol)与二甲基甲酰胺20ml的混合物在室温下搅拌
48小时。加入1.2M盐酸溶液使反应介质酸化后,用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤,干燥(Na2SO4),在旋转蒸发器中浓缩后,用快速色谱法纯化。
[0396] B)1-(4-碘-3-{[2-(甲氧基甲基)丙-2-烯基]氧基}苯甲酰基)哌啶
[0397] 向[3-(2-氯甲基-烯丙氧基)-4-碘-苯基]-哌啶-1-基-甲酮(200mg,0.48mmol)的无水甲基乙基酮(5.3ml)溶液中加入甲醇钠(124.46mg,0.56mmol)。将反应混合物在70℃下加热4小时。在80℃下加热5小时后,再加入0.1ml甲醇钠。使反应物在室温下静置过夜。将混合物稀释过滤,用水洗涤后,经MgSO4干燥。蒸发溶剂后,真空蒸发残留的溴丙烯,得到需要的烷基化酯,为黄色油状物。质量:210mg,收率:100%(粗的)。所需化合物用快速色谱法纯化(AcOEt/庚烷:4/6)。
[0398] C)(3-苄基-3-甲氧基甲基-2,3-二氢-苯并呋喃-6-基)-哌啶-1-基-甲酮
[0399] 按类似于实施例1(B)的方法,使实施例20(B)中得到的1-(4-碘-3-{[2-(甲氧基甲基)丙-2-烯基]氧基}苯甲酰基)哌啶(0.4mmol)的DMF(6ml)溶液、碳酸钾(111mg,0.8mmol)、四丁基氯化铵(111mg,0.4mmol)、乙酸钯(7mg,0.38mmol)和苯基硼酸(60mg,
0.5mmol)进行反应,用快速色谱法纯化(AcOEt/庚烷:4/6)之后,得到预期的衍生物,为无色油状物。
[0400] 另外的式I-V化合物包括:
[0401]
[0402] 另外的式VI化合物包括:
[0403]
[0404] 生物活性测定法
[0405] CB1结合测定法
[0406] 在含有50mM Tris HCl(pH 7.4)、5mM MgCl2、2.5mM EDTA和0.3%牛血清白蛋白(BSA)的缓冲液中,在试验化合物不存在或存在下,将细胞膜匀浆物(25μg蛋白质)与3
0.5nM[H]CP 55940(参比标准[Rinaldi-Carmona,1996#1320])在37℃下孵育120分钟。在
10μMWIN 55212-2存在下测定非特异性结合。孵育之后,将样品通过用0.3%PEI预浸泡的玻璃纤维过滤器(GF/B;Packard)真空快速过滤,使用96样本细胞收获器(Unifilter;
Packard),用冷的含有50mM Tris HCl(pH7.4)和0.5%BSA的缓冲液漂洗几次。过滤器经干燥,然后使用闪烁混合液(Microscint 0;Packard)在闪烁计数器(Topcount;Packard)中统计放射性。结果用对照放射性配体特异性结合的抑制百分比表示。在每项实验中,对若干个浓度的参比标准化合物进行了测定,获得竞争曲线,由此计算得到其IC50。
[0407] CB2结合测定法
[0408] 在含有50mM HEPES/Tris HCl(pH 7.4)、5mM MgCl2、2.5mMEGTA和0.1%BSA的缓3
冲液中,在试验化合物不存在或存在下,将细胞膜匀浆物(15μg蛋白质)与0.8nM[H]WIN
55212-2(参比标准[Munro,1993#1321])在37℃下孵育120分钟。在10μM WIN 55212-2存在下测定非特异性结合。孵育之后,将样品通过用0.3%PEI预浸泡的玻璃纤维过滤器(GF/B;Packard)真空快速过滤,使用96样本细胞收获器(Unifilter;Packard),用冰冷的含有50mM Tris HCl(pH 7.4)和0.5%BSA的缓冲液漂洗几次。过滤器经干燥,然后使用闪烁混合液(Microscint 0;Packard),在闪烁计数器(Topcount;Packard)中统计放射性。
结果用对照放射性配体特异性结合的抑制百分比表示。在每项实验中,对若干个浓度的参比标准化合物进行了测定,获得竞争曲线,由此计算得到其IC50。
[0409] CB1/CB2功能测定法
[0410] 根据参比激动剂,以8种浓度一式两份绘制CB1和CB2的剂量反应曲线。大麻素受体的参比激动剂为CP55,940。参见图1A、图1B、图2A、图2B、图3A和图3B。
[0411] 将膜(CB1、ES-110-MG或CB2、ES-111-MG)与GDP(体积∶体积)混合,在冰上孵35
育至少15分钟。同时,恰好在开始反应之前将GTPγ[ S]与微珠(体积∶体积)混合。将下列试剂依次加到Optiplate各孔中:50μl配体、20μl膜∶GDP混合物、用于激动剂测定
35
的10μl测定缓冲液和20μl GTPγ[ S]∶微珠混合物。板用顶部密封盖覆盖,在定轨摇床上振荡2分钟,然后在室温下孵育30~60分钟。然后将板按2000rpm离心10分钟,在室温下孵育1~4小时,用PerkinElmer TopCount读数器统计1分钟。
[0412] 应用上述测定法,得到某些杂环化合物与CB1和CB2受体的结合数据,参见下表1和表2。
[0413] 表1
[0414] CB1-结合数据
[0415]
[0416] 表2
[0417] CB2-结合数据
[0418]
[0419] 应用上述功能测定法,得到CB1和CB2受体的活性,见下表3和表4。图1-3中同样绘制了该数据的曲线图。
[0420] 表3
[0421] CB1功能活性
[0422]实施例 对照特异性结合CB1 GTP结合的 %活化平均值 化合物功能
编号 的抑制百分比 EC50(nM)
2 68 0 -35.79 逆激动剂
3 71 0 22.85 激动剂
5 43 0 -36.02 逆激动剂
[0423] 表4
[0424] CB2功能活性数据
[0425]实施例 对照特异性结合CB2 GTP结合的 %活化平均值 化合物功能
编号 的抑制百分比 EC50(nM)
2 85 478.69 52.94 激动剂
3 91 160.09 87.2 激动剂
5 72 408.51 55.71 激动剂
[0426] 体内测定法
[0427] I.评价大鼠的机械性异常性疼痛
[0428] 所有实验都用雄性Sprague-Dawley大鼠(200-250g)进行。在室温下,将大鼠单独关养在垫有软垫料的塑料笼内,保持12小时光暗周期,任意进食饮水。
[0429] 手术步骤
[0430] 整个手术步骤用经吸入100%氧气中的异氟烷麻醉、在5%下诱导并维持在2%的大鼠进行。在本研究中排除手术后出现神经缺陷的动物。每天给予一次预防性抗生素(恩氟沙星5mg/kg,皮下)和镇痛药(丁丙诺啡0.2-0.5mg/kg或吗啡2.5mg/kg,均皮下给药)共3天。
[0431] 腰5/6脊神经结扎(神经结扎模型)
[0432] 按照Kim和Chung的下列方法诱发神经病性疼痛:Kim SH,ChungJM.Anexperimental model for peripheral neuropathy produced bysegmental spinal nerve ligation in the rat(大鼠中通过节段脊神经结扎产生的外周神经病实验模型).Pain
1992;50:355-63。将大鼠麻醉并使之俯卧在显微手术台上。在背部开一中线切口,在L4-S2水平上将右椎旁肌(paraspinal muscle)与棘突分离开来。小心地取出L6横突,确定L4/5脊神经。用6-0号丝缝线把L5神经紧紧地扎住。然后,把右L6脊神经正好放在骶骨汇合点尾部内侧,并用丝缝线紧紧地扎住。
[0433] 鞘内插管
[0434] 脊神经结扎后两周后,在按照Yaksh和Rudy所描述的方法用异氟烷麻醉的同时,将鞘内导管(PE-10管)插入大鼠体内。Yaksh TL,RudyTA.Chronic catheterization of the spinal subarachnoid space(脊髓蛛网膜下腔的长期插管).Physiology&Behavior1976;17:1031-6。在颈背部开一中线切口。剥离开连接颅骨的肌肉,露出池膜。用小尖刀(stab blade)切开该膜,然后将8.5cm聚乙烯(PE-10)导管通过池口插入,小心地经尾部穿过进入L1-L3脊髓节段的鞘内间隙。将导管末端穿过额骨上方的皮下间隙,用10μl盐水冲洗,然后用一小段金属丝栓住。在放入鞘内导管后5-7天,对动物进行了测试。
[0435] 结果
[0436] 为了评价机械性异常性疼痛,用一序列von Frey毛(von Frey hair)(范围0.4-15g)测量机械性脚爪缩回阈值。把大鼠放入有金属丝网底的升高的有机玻璃箱(28cmx15cmx18cm)内,并让其在里面待上15-20分钟以适应试验环境。让大鼠在有金属丝网底的透明塑料笼内适应30分钟。用标准化von Frey细长纤维短暂拴在后脚爪上6秒钟以测定药物注射(腹膜内或鞘内)前后的脚爪缩回阈值。使用劲度呈指数增加的系列von Frey细丝(0.4g、0.7g、1.2g、2.0g、3.6g、5.5g、8.5g和15g)来测量不受约束的大鼠清醒时后脚爪缩回的50%阈值。ChaplanSR,Bach FW,Pogrel JW,Chung JM,Yaksh TL.Quantitative assessmentof tactile allodynia in the ratpaw(大鼠脚爪触觉异常性疼痛的定量评价).Journal of Neuroscience Methods 1994;53:55-63。把细丝在足趾底面轻轻弯曲的压力而引起的脚爪敏捷缩回定义为阳性反应,在6秒钟内不发生缩回定义为阴性反应。相继按递增或增减的顺序用细丝触碰后脚爪,直到反应阈值交叉(允许von Frey细丝每次增加之间约为10秒钟)。每当阈值交叉,便反转提供刺激的方向,并重新开始该程序。在第一次阈值检测后,收集4次反应,采用内推法推导出50%缩回阈值。如果其中反应阈值落到检测范围之外,则指定连续阴性反应或阳性反应的刺激极限分别为15.00g和0.25g。
[0437] 药物
[0438] 用二甲亚砜(DMSO)配制实施例3的化合物。
[0439] 结果
[0440] 如图4所示,按30mg/kg腹膜内给予0.5ml实施例3的化合物引起机械性脚爪缩回阈值提高。腹膜内给药后5分钟内,观察到两种药物的峰值效应。对于实施例3的化合物,2小时观察期之后维持高阈值(15g)。
[0441] 如图5所示,鞘内给予实施例3的化合物引起机械性脚爪缩回阈值提高,并在90分钟观察期内持续。动物中未观察到行为异常或副作用。
[0442] 腹膜内(IP)给予实施例3的化合物与吗啡的比较见图6。
[0443] 结论
[0444] 在神经病性疼痛动物模型中,实施例3的化合物当腹膜内给药时是非常有效的镇痛药。实施例3的化合物看来是较长时间起效的化合物。
[0445] II.体外受体放射性配体结合研究
[0446] AM630和AM251购自Tocris Bioscience(Ellisville,MI,USA)。AM1241和纳洛酮购自Sigma-Aldrich Corp.(St.Louis,MO,USA)。WIN 55,212-2、AM1241、紫杉醇和所有用于合成实施例3的化合物的化学药品均购自Sigma-Aldrich,St.Louis,MO。
[0447] 如图7所示方法合成实施例3的化合物。简单来讲,使间羟基苯甲酸碘化(NaI、NaOCl、NaOH、MeOH),得到3-羟基-4-碘-苯甲酸(收率80%)。通过酯化(MeOH、H2SO4),得到相应的苯甲酸甲酯。然后使用碳酸钾的甲基乙基酮溶液,使苯酚衍生物与3-溴-2-甲基-丙烯偶合,收率为98%。使所得化合物进行Pd催化的串联式环化/Suzuki偶合反应,得到相应的杂环,收率为95%。Szlosek-Pinaud,M.等,EfficientSynthetic Approach to Heterocycles Possessing the3,3-Disubstituted-2,3-Dihydrobenzofuran Skeleton Via DiversePalladium-Catalyzed Tandem Reactions(通过各种钯催化的串联式反应将杂环加工成3,3-二取代-2,3-二氢苯并呋喃骨架的有效合成方法),Tetrahedron,2007,63:3340-9。在皂化(收率97%)和与哌啶偶合(收率71%)后,得到结构3的化合物。
[0448] 实施例3的化合物的分析数据
[0449] 1-[(3-苄基-3-甲基-2,3-二氢-1-苯并呋喃-6-基)羰基]哌啶,1HNMR(CDCl3):δ1.37(s,3H),1.58-1.69(m,6H),2.8(d,J = 13.5Hz,1H),2.90(d,J = 13.5Hz,1H),
3.34(br s,2H),3.68(br s,2H),4.09(d,J=8.7Hz,1H),4.53(d,J=8.7Hz,1H),6.75(d,J=1.2Hz,1H),6.88(dd,J=1.2Hz,J=7.5Hz)6.94(d,J=7.5Hz,1H),6.99-7.02(m,2H),
13
7.22-7.24(m,3H)。 C NMR(CDCl3):δ24.56(CH3),24.64(CH2),25.67(CH2),26.56(CH2),
43.15(CH2),46.22(C),46.57(CH2),48.75(CH2),82.28(CH2),108.20(CH),119.09(CH),
123.43(CH),126.58(CH),127.99(CH),130.36(CH),136.21(C),136.75(C),137.26(C),+
159.47(C),170.19(C=O)。对于C22H25NO2的HRMS(ES+)计算值(M+H),m/e,336.1964;实测值336.1958。
[0450] 使用选择性表达人CB1受体的中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)膜,在竞争性结合实验中,以不同浓度一式两份对实施例3的化合物进行了筛选。Mukherjee,S.等,Species Comparison and PharmacologicalCharacterization of Rat and Human CB2 Cannabinoid Receptors(大鼠与人CB2大麻素受体的物种比较和药理学表征),Eur J Pharmacol,2004,505:1-9。竞争性结合实验在96孔板(Masterblock ,目录号786201,Greiner Bio-One)中进行,板中装有结合缓冲液(50mM Tris(pH 7.4)、2.5mM EDTA、0.5%不含蛋白酶的BSA、
3
皂苷(saponine)10μg/ml)、重组膜提取物(2μg蛋白质/孔)和1nM[H]SR141716A(GE Healthcare,TRK1028,42Ci/mmol,在结合缓冲液中稀释)。在10μM CP55,940(Tocris,Bioscience,Ellisville,MI,USA)存在下,测定非特异性结合。将最终体积为0.1ml的样品在25℃下孵育60分钟,然后在室温下过滤到在0.05%苄泽(Brij)中预浸泡2小时的GF/C Unifilter微量培养板(Perkin Elmer,目录号6005177)中。滤器用4ml冷的结合缓冲
3
液洗涤6次,通过液体闪烁计数法测定结合的[H]SR141716A。运用一位点竞争方程式(one site competition equation),通过非线性回归求出IC50。运用Cheng Prusoff方程式(Ki=IC50/(1+(L/KD)),其中L=放射性配体在测定中的浓度,KD=放射性配体对受体的亲和力),计算得出抑制常数(Ki)。
[0451] 使用选择性表达人CB2受体的中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)膜,在竞争性结合实验中,以不同浓度一式两份对实施例3的化合物进行了筛选。Mukherjee,S.等,Species Comparison and PharmacologicalCharacterization of Rat and Human CB2 Cannabinoid Receptors(大鼠与人CB2大麻素受体的物种比较和药理学表征),Eur J Pharmacol,2004,505:1-9。竞争性结合实验在96孔板(Masterblock ,目录号786201,Greiner Bio-One)中进行,板中装有结合缓冲液(50mM Tris(pH 7.4)、2.5mM EDTA、0.5%不含蛋白酶的BSA)、
3
重组膜提取物(0.25μg蛋白质/孔)和1nM[H]CP55,940(PerkinElmer,NEX-1051,161Ci/mmol,在结合缓冲液中稀释)。在10μM CP55940(Tocris,Bioscience,Ellisville,MI,USA)存在下测定非特异性结合。将最终体积为0.1ml的样品在30℃下孵育60分钟,然后在室温下过滤到在0.5%PEI中预浸泡2小时的GF/B Unifilter微量培养板(Perkin Elmer,目录号6005177)上。滤器用4ml冷的缓冲液(50mM Tris(pH 7.4)、2.5mM EDTA、0.5%不含
3
蛋白酶的BSA)洗涤6次,通过液体闪烁计数法测定结合的[H]CP55940。运用一位点竞争方程式,通过非线性回归求出IC50。运用Cheng Prusoff方程式(Ki=IC50/(1+(L/KD)),其中L=放射性配体在测定中的浓度,KD=放射性配体对受体的亲和力),计算得到抑制常数(Ki)。
[0452] GTPγ[35S]功能测定法
[0453] 在表达重组hCB1(人CB1)受体或hCB2(人CB2)受体的CHO膜提取物中,采用35 35
GTPγ[ S]测定法评价了功能活性。该测定法依赖于GTPγ[ S]这种放射性标记的不可水解的GTP类似物在G蛋白偶联受体激动剂结合时与G蛋白的结合。在该系统中,激动剂刺
35 35
激GTPγ[ S]结合,而中性拮抗剂无作用,逆激动剂则降低GTPγ[ S]基础结合。
[0454] 在第一测定阶段的4小时内,将实施例3的化合物溶于100%DMSO,浓度为10mM(主溶液)。对于剂量反应曲线用100%DMSO进行预稀释,然后在测定缓冲液中稀释
100倍,浓度为比待测浓度高2倍。按以下8种浓度一式两份测定实施例3的化合物的激动剂和拮抗剂活性:10μM、3μM、1μM、0.3μM、0.1μM、0.03μM、0.01μM和0.001μM,其中CP55,940(Tocris,Bioscience,Ellisville,MI,USA)作为参比激动剂。对于GTPγS,将膜与稀释于测定缓冲液中的GDP混合,得到30μM溶液(体积∶体积),在冰上孵育至少15分
35
钟。同时,将GTPγ[ S](GE Healthcare,目录号SJ1308)与恰好在开始反应之前按50mg/ml(0.5mg/10μl)(体积∶体积)稀释于测定缓冲液的微珠(PVT-WGA(GE Healthcare,RPNQ001))混合。将下列试剂依次加到Optiplate(Perkin Elmer)各孔中:50μl配体或参比拮抗剂(AM251)、20μl膜∶GDP混合物、10μl参比激动剂(CP55,940)(按历史
35
EC80(30nM))和20μl GTPγ[ S]∶微珠混合物。板用顶部密封盖覆盖,在定轨摇床上振荡2分钟,然后在室温下孵育1小时。然后将板按2000rpm离心10分钟,用PerkinElmer TopCount读数器统计1分钟/孔。通过使用参比化合物CP55,940来监测实验再现性。对于重复测定,试验中容许的最大变化为重复测定平均值的±20%左右。CB1或CB2的功效(Emax)用相对于CP55,940功效的百分比表示。
[0455] cAMP活化测定法
[0456] 在大鼠CB1(rCB1)和rCB2受体上按以下8种浓度一式两份测定实施例3的化合物的激动剂活性:10μM、3μM、1μM、0.3μM、0.1μM、0.03μM、0.01μM和0.001μM。用含有5
5mM EDTA的PBS剥离在无抗生素培养基中生长到对数中期的重组细胞,离心,以16.6x10个细胞/ml的浓度重新悬浮于测定缓冲液中。在96孔板进行了测定。对于试验,将12μl
3
细胞(2x10 个细胞/孔)按递增浓度与12μl激动剂混合。在室温下孵育10分钟后,按与历史EC80相当的最终激动剂浓度,加入6μl参比激动剂(CP55,940)。然后将板在室温下孵育30分钟。加入裂解缓冲液后,根据生产商说明书,用得自Cis-BioInternational(目录号62AM2PEB)的HTRF试剂盒,对cAMP浓度进行了评估。
[0457] 体内生物活性研究
[0458] 按照M.D.Anderson Cancer Center,University of Texas动物管理与使用委员会批准的实验程序,使用体重为120-150g的成年雄性Sprague Dawley(Harlan Sprague Dawley,Indianapolis,IN)大鼠。以12/12小时光/暗周期,动物按每笼3只关养,水和食物颗粒可任饮任食。
[0459] 腰5/6脊神经结扎疼痛模型
[0460] 整个手术过程在100%O2中的异氟烷深度麻醉下进行。按照前述方法进行脊神经结扎(SNL)。Kim,S.H.等,An Experimental Model forPeripheral Neuropathy Produced by Segmental Spinal Nerve Ligation inthe Rat(大鼠中通过分段脊神经结扎产生的外周神经病实验模型),Pain,1992,50:355-63。简单来讲,腰脊柱上方的中线切口将左L6横突暴露出来。然后取出该横突,分离左L5和L6脊神经,两根神经用6-0号丝缝线紧紧地扎住。每天给予一次预防性抗生素(诺氟沙星5mg/kg,皮下)和镇痛药(丁丙诺啡0.2-0.5mg/kg或吗啡2.5mg/kg,皮下给药)共3天。所有实验都在脊神经结扎后10-14天进行。
[0461] 紫杉醇诱发的神经病模型
[0462] 大鼠各组每天接受腹膜内注射溶媒或每天1.0mg/kg紫杉醇连续4天,最终累积剂量为4mg/kg;采用注射体积为1ml/kg。Polomano,R.C.等,A Painful Peripheral Neuropathy in the Rat Produced by theChemotherapeutic Drug,Paclitaxel(由化疗药物紫杉醇引起的大鼠疼痛性外周神经病),Pain,2001,94:293-304。我们的实验中所采用的溶媒同临床用于紫杉醇注射的溶媒,是由10%盐水和乳浮EL 及环氧乙烷的混合物组成的。在第0天建立了后脚爪机械性刺激(见下文)的基线反应,每天继续直到证实神经病的发生。
[0463] 机械性缩回阈值的评价
[0464] 将大鼠放进有金属丝网底的隔室中,使之在测试前适应最少30分钟。按照前述方法,使用劲度呈对数递增的系列Von Frey细丝(0.41g、0.70g、1.20g、2.00g、3.63g、5.50g、8.50g和15.1g)(Stoelting,Wood Dale,IL),对机械敏感性进行了评价,用上下法计算
50%缩回阈值概率。Chaplan,S.R.等,Quantitative Assessment of Tactile Allodyniain the Rat Paw(大鼠脚爪触觉异常性疼痛的定量评价),J.Neurosci.Methods,1994,53:
55-63;Dixon,W.,The Up-and-Down Method for SmallSamples(用于小样本的上下法),J.Am.Stat.Assoc.,1965,60:967-78。简单地说,自2.0g试探开始,在阴性或阳性缩回反应之后,分别以递增或增减的顺序将细丝作用于后脚爪跖面6-8秒钟。采用自反应中首次发生改变起的6次连续反应来计算缩回阈值(单位:克)。如果其中反应阈值落在检测范围之外,则指定连续阴性反应或阳性反应的刺激极限分别为15.00g和0.25g。如下计算最大可能作用百分比(%MPE):([用药后阈值-基线阈值]/[截止阈值(15g)-基线阈值])×100。
[0465] 热脚爪缩回潜伏期的评价
[0466] 为了测定对有害灼热的敏感性,将大鼠放在保持在30℃的透明玻璃表面上的有机玻璃箱中,并使之适应30分钟。采用由发热投射灯和电子定时器组成的热试验装置。在将投射灯放到后脚爪跖面正下方后,开启该装置。用数字计时器记录响应辐射热的脚爪缩回潜伏期。使用30秒钟截止以防止可能的组织损伤。测量基线后,腹膜内给予3组首次用于实验的大鼠(n=10)1.0mg/kg、3.0mg/kg或10mg/kg实施例3的化合物。在药物注射前以及腹膜内注射后5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、45分钟、60分钟、90分钟和120分钟时,每只大鼠测定反应潜伏期两次。如下计算最大可能作用百分比(%MPE):([用药后潜伏期-基线潜伏期]/[截止时间(30秒钟)-基线潜伏期])×100。
[0467] 开放场隔室试验(Open field Chamber Testing)
[0468] 采用装有三对16个红外阵列以连续监测动物活动的自动化开放场隔室(Med Associates ENV-515试验环境,St.Albans,VT)43.2cm×43.2cm×30.5cm(长(L)×宽(W)×高(H)),测定实施例3的化合物、WIN55212-2和氟哌啶醇对首次用于实验的大鼠潜在的CNS作用。大鼠在腹膜内给药后15分钟分别进行了测试。红外光束的设置为水平相距2.5cm,高度为超出底部3cm,直立阵列(rearing array)设置在离底部12cm处。把盒子内的区域(area)划分成4个等分象限(小区域(zone)),并采集每个象限内和跨象限(小区域进入(zone entries))的数据。走动活动被定义为至少5cm的活动,并用象限编码。当大鼠的直立行动离底部最少12cm时记录为直立活动。小区域进入定义为(从一个小区域)进入另一个小区域。当大鼠在走动活动期间走过的距离远到进入一个新的小区域以斩断该小区域的2组光电束时,计为进入小区域。
[0469] 数据分析
[0470] 运 用 BMDP 2007((Statistical Solutions,Saugus,MA,USA) 和 GraphPad Prism(4.03版;Graph Pad Software Inc.,San Diego,CA,USA)进行了统计分析。采用单因素方差分析(ANVOA)、重复测量ANVOA分析或t检验(适当时)对数据进行了分析。如果ANVOA是显著的,则采用Tukey-Kramer事后(post hoc)分析进行多组比较。应用梯形法则计算出曲线下面积(AUC)。结果表示为平均值±标准误差,且P<0.05时视为显著。运用Tallarida和Murray的药理学软件程序,获得了对剂量-反应曲线和统计学的分析结果,并包括了ED50值及其95%置信区间(CI)的计算。Tallarida,R.J.等,Manual of Pharmacologic Calculations WithComputer Programs,第二版,New York:
Springer-Verlag,1987。
[0471] 结果
[0472] 实施例3的化合物体外表征
[0473] 在选择性表达hCB2受体的CHO膜中进行了竞争性结合测定,实施例3的化合物从3
人受体置换[H]CP55,490的Ki值为422±123nM。在hCB1受体(高达10μM)方面,实施例3的化合物没有显示出可检测的放射性配体置换。参见紧接的下表5。
[0474] 表5
[0475] 放射性配体竞争性结合测定法
[0476]
[0477] 在GTPγ[35S]功能测定中,在hCB2方面,实施例3的化合物的EC50值为128±32nM,其中Emax为88%。在hCB1受体方面,实施例3的化合物不引起任何激动活性或拮抗活性。在cAMP活化测定中,在rCB2受体方面,实施例3的化合物的EC50为21.7±7.9nM。
在rCB1受体方面,实施例3的化合物不具有任何活性。参见紧接的下表6。
[0478] 表6
[0479] GTPγ[35S]功能测定和cAMP活化测定
[0480]
[0481] 首次用于实验的大鼠中实施例3的化合物的作用
[0482] 腹膜内给予1mg/kg或3mg/kg实施例3的化合物并不阻断应用于首次用于实验的大鼠后脚爪的热刺激的伤害感受作用。将实施例3的化合物剂量增加至10mg/kg(腹膜内)引起短暂的抗伤害感受作用(图9)。
[0483] SNL神经病性疼痛模型中实施例3的化合物对触觉异常性疼痛的作用
[0484] 大鼠中,手术后一周SNL引发触觉异常性疼痛,正如使用VonFrey细丝,对机械性刺激的脚爪缩回阈值降低至2.5±0.19g所表明的一样(图10A)。实施例3的化合物治疗按剂量相关方式减轻触觉异常性疼痛,其ED50为7.48mg/kg(腹膜内)(95%CI=5.6-9.9mg/kg)。比起用5mg/kg实施例3的化合物观察到的情况,较高的剂量(10mg/kg和15mg/kg)产生显著的抗异常性疼痛作用(图11A、图11B和图11C)。
[0485] 采用受体选择性拮抗剂,在SNL模型中对实施例3的化合物的受体特异性进行了研究(图12)。用CB2受体选择性拮抗剂AM630(5mg/kg,腹膜内)进行预治疗,显著逆转由腹膜内给予10mg/kg实施例3的化合物诱导的抗异常性疼痛作用(P<0.001)。Hosohata,35
Y. 等,AM630Antagonism of Cannabinoid-Stimulated[ S]GTP Gamma S Binding in
35
theMouse Brain(小鼠脑中AM630对大麻素刺激的[ S]GTPγS结合的拮抗作用),Eur.J.Pharmacol,1997,321:R1-3;Ross,R.A.等,Agonist-InverseAgonist Characterization at CB1 and CB2 Cannabinoid Receptors ofL759633,L759656,and AM630(CB1和CB2大麻素受体上L759633、L759656和AM630的激动剂-逆激动剂表征),Br.J.Pharmacol.,
1999,126:665-72。相比之下,用选择性CB1受体拮抗剂AM251(5mg/kg,腹膜内)进行预治
123
疗,对实施例3的化合物诱导的抗异常性疼痛作用不起作用。Gatley,S.J.等, I-labeled AM251:A Radioiodinated LigandWhich Binds In Vivo to Mouse Brain Cannabinoid CB1
123
Receptors( I标记的AM251:一种与小鼠脑大麻素CB1受体体内结合的放射性碘标记的配体),Eur J Pharmacol,1996,307:331-8。与溶媒治疗的动物相比,仅用CB1或CB2受体拮抗剂按照用于本研究的剂量治疗的大鼠在脚爪缩回阈值方面没有任何变化(图12)。
[0486] 腹膜内给予15mg/kg CB2配体AM1241,产生显著(P<0.001)不同于溶媒的抗异常性疼痛作用(图13)。Ibrahim,M.M.,Activation of CB2Cannabinoid Receptors by AM1241 Inhibits Experimental NeuropathicPain:Pain Inhibition by Receptors Not Present in the CNS(由AM1241激活的CB2大麻素受体抑制实验性神经病性疼痛:通过不存在于CNS中的受体抑制疼痛),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,2003,100:10529-33。然而,10mg/kg实施例3的化合物(腹膜内)的抗异常性疼痛作用显著(P<0.001)大于用15mg/kg AM1241(腹膜内)观察到的抗异常性疼痛作用。AM1241具有依赖于β-内啡肽和μ-阿片样物质受体系统的抗伤害感受作用,该作用被给予纳洛酮或β-内啡肽的抗血清阻断。
Ibrahim,M.M.等,CB2 Cannabinoid Receptor Activation Produces Antinociceptionby Stimulating Peripheral Release of Endogenous Opioids(CB2大麻素受体活化通过刺激内源阿片样物质的外周释放而产生抗伤害感受作用),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,2005,
102:3093-8。为了研究实施例3的化合物的抗异常性疼痛作用是否是通过μ-阿片样物质受体依赖性活性介导的,在给予实施例3的化合物前15分钟,给SNL大鼠注射阿片样物质受体拮抗剂纳洛酮(10mg/kg,腹膜内)。纳洛酮预治疗对实施例3的化合物的抗异常性疼痛活性不起作用(图13,P<0.001)。然而,在同样条件下,用纳洛酮进行预治疗显著逆转由15mg/kg AM1241(腹膜内)诱导的镇痛作用(图13,P<0.01)。
[0487] 通过大麻素受体亚型2(CB2)调节剂预防化学疗法诱发的外周神经病
[0488] CB2激动剂能够抑制由化疗药物诱发的神经病性伤害感受。本文提供预先给予或与化疗药物一起共同给予CB2调节剂(或任何其它药物)以预防这种外周神经病的发生。
[0489] 紫杉醇是一种用于癌症化学疗法的抗肿瘤药物。紫杉醇用来治疗患有癌、卵巢癌、乳腺癌、头颈部癌和卡波西肉瘤(Kaposi′s sarcoma)晚期类型的患者。神经病性疼痛是一种与使用紫杉醇有关的副作用。Mielke,S.等,Peripheral neuropathy:a persisting challenge inpaclitaxel-based regimes(外周神经病:基于紫杉醇方案的长期挑战),Eur J Cancer,2006,42:24-30。神经病性疼痛,一种致虚弱性疾病,以严重的持续疼痛为特征,对传统的止痛法不起反应。这个副作用还与使用其它抗肿瘤药物有关,例如长春花属生物碱(例如长春新碱)、其它紫杉烷类(taxanes)衍生物或铂衍生物(例如顺铂)。在美国,每年归因于神经病性疼痛的医疗保健费用将近400亿美元。Turk,D.,Clinicaleffectiveness and cost-effectiveness of treatments for patients with chronicpain(慢性疼痛患者治疗的临床疗效和成本效用),Clin J Pain,2002,18:355-65。对于神经病性疼痛还没有有效或令人满意的治疗方法。Warms,C.A.等,Treatments for chronic pain associated with spinal cordinjuries:many are tried,few are helpful(脊髓损伤相关性慢性疼痛的治疗:很少有用的多种尝试),Clin J Pain,2002,18:154-63。
[0490] 化学疗法诱发的神经病性疼痛是剂量依赖性的;其机制可能伴有形态到初级传入。最近,CB2因缺乏使用CB1激动剂常见的精神活性副作用而具有额外的
优势,成为治疗神经病性疼痛的新靶标。Cox,M.L.,The antinociceptive effect of[Delta]9-tetrahydrocannabinol in thearthritic rat involves the CB2
cannabinoid receptor(关节炎大鼠中[Δ]9-四氢大麻酚的抗伤害感受作用涉及
CB2大 麻 素 受 体 ),European Journalof Pharmacology,2007,570:50-56;Beltramo,M. 等,C2 receptor-mediatedantihyperalgesia:possible direct involvement of neural mechanisms(C2受体介导的抗痛觉过敏:可能直接涉及神经机制),Eur J Neurosci,2006,23:1530-8;Ibrahim,M.M.,CB2 cannabinoid receptor mediation ofantinociception(CB2大麻素受体介导抗伤害感受),Pain,2006,122:36-42;Guindon,J. 等,Cannabinoid CB2 receptors:a therapeutictarget for the treatment of inflammatory and neuropathic pain(大麻素CB2受体:一种用于治疗炎症性疼痛和神经病性疼痛的治疗靶标),Br JPharmacol,2007。
[0491] 外周神经损伤诱导CB2蛋白在大鼠感觉神经元中表达。Wotherspoon,G.,Peripheral nerve injury induces cannabinoid receptor 2protein expression in rat sensory neurons(外周神经损伤诱导大麻素受体2蛋白在大鼠感觉神经元中表达),Neuroscience,2005,135:235-45。CB2mRNA在神经病大鼠的背根神经节(DRG)中表达,并且在神经病大鼠脊髓中上调。CB2 mRNA表达还发生在培养的脊髓小胶质细胞中,并且在反应性小胶质细胞中上调。Beltramo,M.,CB2 receptor-mediatedantihyperalgesia:possible direct involvement of neutral mechanicms(CB2受体介导的抗痛觉过敏:可能直接涉及神经机制),Eur J Neurosci,2006,23:1530-8;Ashton,J.C.,Class M:The Cannabinoid CB2 Receptor as aTarget for Inflammation-Dependent Neurodegeneration(M 类:作为炎症依赖性神经变性靶标的大麻素CB2受体),Current Neuropharmacology,
2007,5:73-80;Romero-Sandoval,A. 等,Spinal Cannabinoid ReceptorType 2 Activation Reduces Hypersensitivity and Spinal Cord GlialActivation after Paw Incision(脊髓大麻素受体2型活化减轻脚爪切开后的超敏反应和脊髓神经胶质的活化),Anesthesiology,2007,106:787-794。
[0492] CB2激动剂具有神经保护作用,并日渐成为用于治疗脱髓鞘疾病(例如多发性硬化)的靶标。Arevalo-Martin,A.等,CB(2)cannabinoidreceptors as an emerging target for demyelinating diseases:fromneuroimmune interactions to cell replacement strategies(日渐用作脱髓鞘疾病的CB(2)大麻素受体:从神经免疫相互作用到细胞置换策略),Br JPharmacol,2007。例如,用选择性CB2激动剂JWH-015治疗不仅将Theiler鼠脑脊髓炎病毒感染小鼠脊髓中的小胶质细胞形态转变为正常,而且还显著改善神经复原和髓鞘再形成过程。Arevalo-Martin,A.等,Therapeutic action of cannabinoids in a murine model of multiplesclerosis,(多发性硬化鼠模型中大麻素的治疗作用),J Neurosci 2003,23:2511-6。大麻素终止主要组织相容性复合体II类抗原表达,并降低浸润CD4T细胞的数目。CB2激动剂的这种保护机制归因于炎性细胞因子释放或活性氧类别减少和/或保护分子(例如TGFa)或抗炎细胞因子(例如IL-10)的产生增加。Sagrego,O.等,Cannabinoids andneuroprotection in basal ganglia disorders(基底核病症中的大麻素与神经保护),Mol Neurobiol,2007,36:82-91。
[0493] 在紫杉醇治疗的大鼠中,使用CB2激动剂产生剂量依赖性地减轻机械性异常性疼痛和机械性痛觉过敏,该作用的持续时间依赖于所研究的CB2激动剂的作用时间。有证据表明,对于CB1和CB2活性的非特异性大麻素激动剂能够防止由顺铂引发的机械性异常性疼痛。Vera,G.等,WIN 55,212-2 prevents mechanical allodynia but notalterations in feeding behaviour induced by chronic cisplatin in the rat(WIN 55,212-2防止大鼠的机械性异常性疼痛但不改变长期顺铂诱导的进食行为),Life Sci,2007,81:468-79。本文提供防止化学疗法诱发的外周神经病发生的疗法。给予实施例3的化合物这种新的CB2选择性激动剂可防止由紫杉醇诱发的神经病性疼痛的发生。
[0494] (A)紫杉醇诱发的神经病
[0495] 首先,进行了证实紫杉醇可以产生紫杉醇诱发的神经病的大鼠模型的实验。将盐水和CREMOPHOR ELP 10%的混合物用作紫杉醇的溶媒。按1.0mg/kg的浓度,给化学疗法治疗的大鼠组(18只大鼠)腹膜内连续注射4天,使最终累积剂量为4mg/kg。
[0496] 神经病性疼痛的评价。按照上下法,使用标准化von Frey单丝(monofilament),每天测定每只动物两只后脚爪的脚爪缩回阈值。使用劲度呈指数增加的系列von Frey细丝(0.4g、0.7g、1.2g、2.0g、3.6g、5.5g、8.5g和15.1g),测量不受约束的大鼠清醒时两只后脚爪缩回的50%阈值。Chaplan,S.R.,Quantitative assessment of tactile allodynia inthe rat paw(大鼠脚爪触觉异常性疼痛的定量评价),Journal ofNeuroscience Methods,1994,53:55-63。因细丝在脚爪跖面轻轻弯曲的压力而引起的脚爪敏捷缩回定义为阳性反应,在6秒钟内不缩回视为阴性反应。将系列细丝按劲度递增或递减顺序相继接触后脚爪直到反应阈值交叉(使每次增量之间约为10秒钟)。每当阈值交叉,便反转提供刺激的方向,并重新开始该方法。在第一次阈值检测后,收集4次反应,采用内推法推导出50%缩回阈值。如果其中反应阈值落到检测范围之外,则指定连续阴性或阳性反应的刺激极限分别为15.1g和0.25g。图17和图18表示这些实验的结果及在几天内外周神经病开始发生。图18表示到第10天时达到平稳期。
[0497] B)预防由紫杉醇诱发的神经病
[0498] 设计这些实验以证实给予实施例3的化合物后30分钟给予紫杉醇可防止神经病的发生。按紧接的上文(A)部分标题为“紫杉醇诱发的神经病”中的描述,给予第1组大鼠紫杉醇达4天。在第2组中,经腹膜内注射剂量为15mg/kg的实施例3的化合物给药后30分钟,给予紫杉醇。在第3组中,给予实施例3的化合物的溶媒后30分钟,给予紫杉醇。按照紧接的上文(A)部分标题为“紫杉醇诱发的神经病”中的描述,按照上下法,使用标准化vonFrey单丝每天测定每只动物两只后脚爪的脚爪缩回阈值。结果见图17。
[0499] 图19A和图19B表示的实验结果是其中给予3组大鼠0.25ml实施例3的化合物或溶媒;NMP、丙二醇、发色团ELP(25%、25%、10%)与无菌水的混合物后30分钟给予紫杉醇。3个实验组中,2个组每天继续接受溶媒或实施例3的化合物多11天。按照紧接的(A)部分标题为“紫杉醇诱发的神经病”中的描述,按照上下法,使用标准化von Frey单丝每天测定每只动物两只后脚爪的脚爪缩回阈值。按照紧接的(A)部分标题为“紫杉醇诱发的神经病”中的描述,给予第4组大鼠组紫杉醇4天。如图19A和图19B中所示,每天继续腹膜内(IP)给予15mg/kg实施例3的化合物完全防止了紫杉醇引发的机械性异常性疼痛的发生。只给予15mg/kg实施例3的化合物4天无法防止紫杉醇引发的机械性异常性疼痛,但却显著防止紫杉醇引发的机械性异常性疼痛趋于严重。
[0500] 紫杉醇诱发的神经病性疼痛模型中实施例3的化合物对触觉异常性疼痛的作用[0501] 在紫杉醇给药开始后10天,100%的大鼠发生了触觉异常性疼痛,正如使用Von Frey细丝,右脚爪和左脚爪分别对机械性刺激的脚爪缩回阈值降低至2.9±0.19g和2.8±0.15g所证实的一样(图10B)。相对于用溶媒治疗,实施例3的化合物以剂量依赖性方式抑制紫杉醇引发的热痛觉过敏(图14A和图14B)和机械性异常性疼痛(图14C和图
14D)。20分钟时这种抑制最大。在20分钟时,对于抑制热痛觉过敏,计算出的实施例3的化合物的ED50为13.5mg/kg(腹膜内)(95%CI=8.2-22mg/kg)(图14B)。用AM630(5mg/kg,腹膜内)进行预治疗显著逆转腹膜内给予15mg/kg实施例3的化合物给药15分钟后诱发的抗痛觉过敏作用(P<0.001)(图14A)。5mg/kg AM1241(腹膜内)对逆转热痛觉过敏的作用明显小于(P<0.05)15mg/kg实施例3的化合物(腹膜内)所观察到的作用(图
14A)。实施例3的化合物剂量依赖性地减轻该模型的触觉异常性疼痛,正如%MPE缩回阈值AUC(图14C)增加的观察一样,其ED50为24mg/kg(腹膜内)(图14D)。
[0502] 给予实施例3的化合物防止与紫杉醇给药相关的神经病的发生
[0503] 在开始紫杉醇给药的同时给予实施例3的化合物14天[4天与紫杉醇同时给予,此后继续给予10天]导致100%的大鼠防止紫杉醇诱发的神经病(图15)。给予实施例3的化合物4天仅仅导致短暂地防止紫杉醇诱发的神经病。在该模型中,褪黑激素不提供针对神经病的任何保护作用。
[0504] 开放场隔室试验
[0505] 与实施例3的化合物(15mg/kg,腹膜内)大不相同,腹膜内给予7mg/kg WIN 55,212-2和腹膜内给予1mg/kg氟哌啶醇显著(P<0.05)减少大鼠的探究行为,这由行走总距离(图10A)、走动所花费的时间(图10B)、开放场区域内直立(图10C)和小区域进入(图
10D)的减少得到证实。Herzberg,U.等,The Analgesic Effects of R(+)-WIN 55,212-2 Mesylate,a High Affinity Cannabinoid Agonist,in a Rat Model of Neuropathic Pain(神经病性疼痛大鼠模型中高亲和力大麻素激动剂R(+)-WIN 55,212-2甲磺酸盐的镇痛作用),Neurosci Lett,1997,221:157-60。
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说明书全自动输送装置 2020-05-11 232
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