盐酸万古霉素(Vancomycin Hydrochloride)是来自东方链霉菌(Streptomyces orientalis)或土壤丝菌属(Amycolatopsis orientalis)的糖肽类抗生素。其抗菌谱很 窄，基本上局限于很小一部分革兰氏阳性菌及一些螺旋体，属中等强度的抗生 素，其最低抑菌浓度(MIC)的范围较窄，为0.6～2.5μg/ml，其最低灭菌浓度 (MBCS)等于或大于MIC的两倍。万古霉素可用于治疗各种严重革兰氏阳性茵 感染，安全有效；是耐甲西林金葡菌(MRSA)及耐甲西林表金葡菌(MRSE) 感染所致疾病的首选药物，例如败血症、心内膜炎、骨髓炎、肺炎、肺脓肿、 软组织感染、创口感染、脑膜炎等。盐酸万古霉素用于人工心瓣膜、人造髋关 节、脑脊液分流管、静脉插管等置留器材感染等，有的需合并用药；也用于由 难辨梭状芽孢杆菌引起的相关性腹泻或伪膜性肠炎，特别是危重病人的治疗。 目前，临床治疗肠球菌感染比较困难，万古霉素可抑制肠球菌生长，与氨基糖 甙类抗生素合用，对肠球菌有协同治疗作用。至今，万古霉素的耐药细菌还比 较少见，这可部分归因于万古霉素对其敏感菌细胞的间接作用，这种作用可能 包括对细菌胞质膜渗透性的改变，以及对RNA合成的损害。万古霉素自90年 代以来，一直被国际抗生素专家誉为“人类对付顽固性耐药菌株的最后一道防 线”，通常不作为一线抗菌药物应用，在常用抗菌药物无效时应用。
国外万古霉素主要生产厂商有美国礼莱公司(商品名：Vancocin)和日本 盐野义公司(Shionogi，从礼莱公司引进许可证技术，只生产制剂，1991年在日 本上市；商品名Vancoomycin)，此外还包括丹麦阿尔法玛(Alpharm)公司和德 国SKW公司等。目前所使用的万古霉素制剂主要包括注射用粉针剂和散剂两 种剂型。注射给药由于起效快、生物利用度高等优点，是万古霉素临床使用的 主要给药方式。
万古霉素的稳定性较差，在常温下放置，即可观察到颜色逐渐变红，原因 可能是万古霉素的分子结构中存在酚基及二酚基，酚类的水溶液遇光易水合或 氧化成醌而呈粉红色，这种不稳定性严重制约了万古霉素制剂的发展。美国药 典XXVI版，记载万古霉素注射粉针剂需要加入适当稳定剂，其相关产品的稳 定性为30℃条件下保存两年。按照美国药典的相关规定，万古霉素注射粉针剂 的效价应大于900IU/mg，用水溶解后配成50mg/mL的溶液，在465nm处的吸 收度应小于0.065。
因此，需要通过制剂的处方与工艺研究，筛选合适的工艺和稳定剂配方， 以制备稳定的盐酸万古霉素粉针剂。

本发明的一个目的是提供一种注射用盐酸万古霉素，制剂形式为粉针剂， 该药物粉末的效价大于900IU/mg，用水溶解后配成50mg/mL的溶液，在465nm 处的吸收度小于0.065，pH为2.0～4.0。常温下放置2年，药物仍保持稳定，其 效价和色泽符合上述要求。
注射用盐酸万古霉素粉针由药物盐酸万古霉素、稳定剂和/或抗氧剂组成， 当由药物盐酸万古霉素、稳定剂组成时，盐酸万古霉素重量百分含量为 90.0％～99％(w/w)，稳定剂重量百分含量为1％～10.0％(w/w)；当由药物盐酸 万古霉素、抗氧剂组成时，盐酸万古霉素重量百分含量为95.0％～99％(w/w)， 抗氧剂的重量百分含量为1％～5.0％(w/w)；当由药物盐酸万古霉素、稳定剂 和抗氧剂组成时，盐酸万古霉素重量百分含量为90.0％～98％(w/w)，稳定剂 重量百分含量为1.5％～8.0％(w/w)，抗氧剂的重量百分含量为0.5％～2.0％ (w/w)。稳定剂选用柠檬酸或甘氨酸或谷氨酰胺，抗氧剂选用L-半胱氨 酸。
本发明的第二个目的，是提供制备注射用盐酸万古霉素的方法，通过以下 步骤实现：
取万古霉素盐酸盐，加入稳定剂和/或抗氧剂，加注射用水溶解后，用HCL或NaOH调节pH至2.0～4.0，加入0.05％(W/V)的活性炭，室温搅拌30分 钟，粗滤除去活性炭后，用0.45μm的微孔滤膜精滤，分装于15mL的管制瓶 中，每瓶5mL，置冷冻干燥机制品室板层上，-45℃预冻约6～7小时，开启捕 水器制冷开关，于预冻保温结束后开启真空泵，当真空度读数降至10帕以下 时，逐渐升高制品室温度至-20℃，保温约5～10小时，继续升高制品室温度 至-5℃，保温约20～25小时，当制品温度与板层温度接近时，继续升高板层 温度至约30℃并保温3小时，共冷冻干燥约36小时，充氮气、压塞，轧盖， 得到注射用盐酸万古霉素。
本发明提供的注射用盐酸万古霉素的制备方法，处方组成简单、方法实用 可靠。所选取的主要辅料柠檬酸、甘氨酸、L-半胱氨酸等，均为常用药用 辅料。药物制剂的制造方法采用冷冻干燥法，符合工业化生产的特点。

本发明结合以下实施例作进一步的说明。
实施例1：注射用盐酸万古霉素制备
参见表1，取万古霉素盐酸盐，加入稳定剂，加注射用水溶解后，加入0.05％ (W/V)的活性炭，室温搅拌30分钟，粗滤除去活性炭后，用0.45μm的微孔 滤膜精滤，分装于15mL的管制瓶中，每瓶5mL。置冷冻干燥机制品室板层上， -45℃预冻约6～7小时。开启捕水器制冷开关，于预冻保温结束后开启真空泵， 当真空度读数降至10帕以下时，逐渐升高制品室温度至-20℃，保温约5～10 小时，继续升高制品室温度至-5℃，保温约20～25小时。当制品温度与板层 温度接近时，继续升高板层温度至约30℃并保温3小时。共冷冻干燥约36小 时，充氮气压塞，轧盖，得到注射用盐酸万古霉素。
表1  注射用盐酸万古霉素稳定剂组成   品名   R0   R1   R2   R3   R4   R5   R6   R7   R8   R9   R10   R11   盐酸万古霉   素(g)   柠檬酸(mg)   甘氨酸(mg)   天冬酰胺     (mg)   谷氨酰胺     (mg)   注射用水(ml)   10     0   0   0       0       100   10     100   --   --       --       100   10     200   0   0       0       100   10     0   400   0       0       100   10     200   400   0       0       100   100     400   600   -       -       100   10     0   0   100     0   0       100   10     0   0   500       0       100   10     0   0   0       100     0   100   10     0   0   0       500       100   10     100   200   500       0       100   10     100   200   0       500       100
将制备得到的注射用盐酸万古霉素置于60℃条件下，分别于0、10、15 天取样，通过微生物测定法和紫外-可见分光光度法测定万古霉素效价和溶液 的颜色，结果见表2。
万古霉素效价的测定：取万古霉素冻干粉针，精密称定，用灭菌水制成每 1ml中约含1000万古霉素单位的溶液，照抗生素微生物检定法(中国药典2005 年版二部附录XIA)测定。1000万古霉素单位相当于1mg的C66H75Cl2N9O24。 检定条件：检定菌为枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]；培养基为VIII号(pH6.0)； 缓冲液为pH6.0磷酸盐缓冲液；抗生素浓度范围为2.5～12.5μ/ml，培养温度为 35～37℃，培养时间为14～16小时。
万古霉素溶液颜色测定：取万古霉素冻干粉针，用蒸馏水溶解，配成 50mg/ml的溶液，以蒸馏水为空白对照，在465nm处的测定溶液的吸收度。
表2  不同组分的盐酸万古霉素的稳定性考察结果   组分   时间(天)   外观   效价(IU/mg)   465nm处吸收度     R0     0   10   15   微红色粉末   浅红色粉末   浅红色粉末   1020   990   970   0.050   0.085   0.098     R1     0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1018   1010   992   0.051   0.058   0.065     R2     0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1015   1006   994   0.053   0.059   0.061     R3     0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1010   1002   985   0.063   0.062   0.066     R4     0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1005   993   981   0.047   0.053   0.056     R5     0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1009   991   984   0.048   0.055   0.060     R6     0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   996   980   973   0.058   0.061   0.063     R7     0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1008   997   986   0.059   0.064   0.066     R8     0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1011   1001   996   0.056   0.060   0.061     R9     0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   991   983   969   0.054   0.058   0.061     R10     0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1001   995   988   0.042   0.052   0.057     R11     0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1013   1002   997   0.045   0.053   0.055 上述结果说明，组合物中不含稳定剂时，在60℃条件下放置15天，万古 霉素效价变化不明显，但粉末颜色逐渐加深，其水溶液在465nm处的吸收度接 近0.1；在加入稳定剂后在60℃条件下放置15天，粉末外观无变化，其水溶液 在465nm处的吸收度变化不明显，但稳定剂的用量增加后，受总固体量增加的 影响，万古霉素效价略有减小。
实施例2：注射用盐酸万古霉素制备
参见表3，取万古霉素盐酸盐，加入抗氧剂，加注射用水溶解后，加入0.05％ (W/V)的活性炭，室温搅拌30分钟，粗滤除去活性炭后，用0.45μm的微孔 滤膜精滤，分装于15mL的管制瓶中，每瓶5mL。置冷冻干燥机制品室板层上， -45℃预冻约6～7小时。开启捕水器制冷开关，于预冻保温结束后开启真空泵， 当真空度读数降至10帕以下时，逐渐升高制品室温度至-20℃，保温约5～10 小时，继续升高制品室温度至-5℃，保温约20～25小时。当制品温度与板层 温度接近时，继续升高板层温度至约30℃并保温3小时。共冷冻干燥约36小 时，充氮气压塞，轧盖，得到注射用盐酸万古霉素。
表3  注射用盐酸万古霉素稳定剂组成   品名   R10   R11   R12   R13   盐酸万古霉素(g)   维生素C(mg)   亚硫酸氢钠(mg)   L-半胱氨酸(mg)   注射用水(ml)   10   50   0   0   100   10   0   100   0   100   10   0   0   200   100   10   0   0   500   100
将制备得到的注射用盐酸万古霉素置于60℃条件下，分别于0、10、15 天取样，测定万古霉素效价和溶液的吸收度，结果参见表4。
表4  盐酸万古霉素中不同组分抗氧剂的稳定性考察结果   组   分   时间(天)   外观   效价(IU/mg)   465nm处吸收度   R12   0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1026   1009   998   0.032   0.078   0.089   R13   0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1020   1007   996   0.042   0.057   0.066   R14   0   10   微红色粉末   微红色粉末   1016   1003   0.048   0.054   15   微红色粉末   997   0.058   R15   0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1012   1001   991   0.049   0.055   0.059
上述结果说明，在组合物中加入抗氧剂后，于60℃条件下放置15天，万 古霉素效价变化不明显，粉末外观无变化，处方13～15的水溶液在465nm处 的吸收度变化不明显，以维生素C为抗氧剂的处方，其水溶液颜色加深比较明 显。
实施例3：注射用盐酸万古霉素制备
参见表5，取万古霉素盐酸盐，加入稳定剂柠檬酸、甘氨酸、谷氨酰胺和 抗氧剂L-半胱氨酸，加注射用水溶解后，加入0.05％(W/V)的活性炭，室温 搅拌30分钟，粗滤除去活性炭后，用0.45μm的微孔滤膜精滤，分装于15mL 的管制瓶中，每瓶5mL。置冷冻干燥机制品室板层上，-45℃预冻约6～7小时。 开启捕水器制冷开关，于预冻保温结束后开启真空泵，当真空度读数降至10 帕以下时，逐渐升高制品室温度至-20℃，保温约5～10小时，继续升高制品 室温度至-5℃，保温约20～25小时。当制品温度与板层温度接近时，继续升 高板层温度至约30℃并保温3小时。共冷冻干燥约36小时，充氮气、压塞， 轧盖，得到注射用盐酸万古霉素。
表5  稳定剂与抗氧剂合用的注射用盐酸万古霉素组成   品名   R16   R17   R18   R19   R20   盐酸万古霉   素(g)   柠檬酸(mg)   甘氨酸(mg)   谷氨酰胺   (mg)   亚硫酸氢钠   (mg)     L-半胱氨酸     (mg)   注射用水     (ml)     10   300   500     --     50       --       100       10   100   200     500      --       100       100       10   50   100     250     100       --       100       10   50   100     250     --       200       100       10   50   100     --     --       500       100  
将制备得到的注射用盐酸万古霉素置于60℃条件下，分别于0、15天取样， 测定万古霉素效价和溶液的颜色，结果参见表6。
表6  稳定剂与抗氧剂合用的注射用盐酸万古霉素在60℃条件下的稳定性   组   分   时间(天)   外观   效价(IU/mg)   465nm处吸收度   R16   0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1012   1003   995   0.043   0.052   0.059   R17   0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1010   1001   994   0.040   0.054   0.057   R18   0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1016   1004   996   0.048   0.053   0.056   R19   0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1024   1008   999   0.044   0.051   0.056   R20   0   10   15   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1021   1007   998   0.046   0.055   0.060
上述结果说明，在组合物中合用稳定剂与抗氧剂后，于60℃条件下放置 15天，万古霉素效价变化不明显，粉末外观无变化，处方18、19的各种稳定 剂与抗氧剂的用量较少。
实施例4：注射用盐酸万古霉素制备
按照实施例3中组分19的配比，取万古霉素盐酸盐，加入稳定剂柠檬酸、 甘氨酸、谷氨酰胺和抗氧剂L-半胱氨酸，加注射用水溶解后，用HCL或NaOH调节pH至2.0～4.0，加入0.05％(W/V)的活性炭，室温搅拌30分钟，粗滤除 去活性炭后，用0.45μm的微孔滤膜精滤，分装于15mL的管制瓶中，每瓶5mL。 置冷冻干燥机制品室板层上，-45℃预冻约6～7小时。开启捕水器制冷开关， 于预冻保温结束后开启真空泵，当真空度读数降至10帕以下时，逐渐升高制 品室温度至-20℃，保温约5～10小时，继续升高制品室温度至-5℃，保温约 20～25小时。当制品温度与板层温度接近时，继续升高板层温度至约30℃并 保温3小时。共冷冻干燥约36小时，充氮气、压塞，轧盖，得到注射用盐酸 万古霉素。
将制备得到的注射用盐酸万古霉素置于60℃条件下，分别于0、15天取样， 测定万古霉素效价和溶液的颜色，结果参见表7。
表7  调节不同pH的注射用盐酸万古霉素在60℃条件下的稳定性   pH   时间(天)   外观   效价(IU/mg)   465nm处吸收度     1.5     0     15   微红色粉末     浅红色粉末   1015     978   0.034     0.078     2.0     0     15   微红色粉末     微红色粉末   1017     981   0.033     0.060     2.5     0     15   微红色粉末     微红色粉末   1019     992   0.034     0.055     3.0     0     15   微红色粉末     微红色粉末   1018     997   0.032     0.049     3.5     0     15   微红色粉末     微红色粉末   1016     993   0.035     0.050     4.0     0     15   微红色粉末     微红色粉末   1020     987   0.036     0.056     4.5     0     15   微红色粉末     微红色粉末   1014     982   0.038     0.066     5.0     0     15   微红色粉末     浅红色粉末   1011     972   0.040     0.089
结果说明，冻干时溶液的pH对产品的稳定性有一定的影响，溶液的pH 大于4.0或小于2.0时，所制备的冻干粉末稳定性较差，因此在制备中应调节 溶液的pH在2.0～4.0之间。
实施例5：注射用盐酸万古霉素长期稳定性考察
取万古霉素盐酸盐1500g，加入柠檬酸7.5g、甘氨酸15.0g、谷氨酰胺37.5g、 抗氧剂L-半胱氨酸30.0g，加注射用水溶解后，用HCL或NaOH调节pH至 2.0～4.0，加入0.05％(W/V)的活性炭，室温搅拌30分钟，粗滤除去活性炭 后，用0.45μm的微孔滤膜精滤，分装于15mL的管制瓶中，每瓶5mL。置冷 冻干燥机制品室板层上，-45℃预冻约6～7小时。开启捕水器制冷开关，于预 冻保温结束后开启真空泵，当真空度读数降至10帕以下时，逐渐升高制品室 温度至-20℃，保温约5～10小时，继续升高制品室温度至-5℃，保温约20～ 25小时。当制品温度与板层温度接近时，继续升高板层温度至约30℃并保温3 小时。共冷冻干燥约36小时，充氮气、压塞，轧盖，得到注射用盐酸万古霉 素。
将制备得到的注射用盐酸万古霉素置于25℃、相对湿度65％条件下，分别 于0、3、6、9、12、18、24个月取样，测定万古霉素效价和溶液的颜色，结 果参见表8。
表8  注射用盐酸万古霉素长期稳定性考察结果   时间   (月)   外观   效价(IU/mg)   465nm处吸收度   0   3   6   9   12   18   24   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   微红色粉末   1018   1009   1004   997   991   984   973   0.029   0.031   0.035   0.041   0.045   0.053   0.060
结果说明，按本发明提供的制剂组合及制备方法制备的注射用盐酸万古霉 素的稳定性较好，在25℃条件下放置2年，药物仍保持稳定，其效价大于 900IU/mg，用水溶解后配成50mg/mL的溶液，在465nm处的吸收度小于0.065。