一种皮肤保护肽OM-TV16及其制备方法与应用
专利汇可以提供一种皮肤保护肽OM-TV16及其制备方法与应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种 皮肤 保护肽OM-TV16及其制备方法与应用。所述的皮肤保护肽OM-TV16的 氨 基酸序列为TVWGFRPTNPKPKPPG。本发明从绿臭蛙皮肤分泌物中提取到一种促皮肤创伤修复的活性多肽，该多肽具有来源天然、高活性等特点。纯化得到的促皮肤创伤修复多肽OM-TV16显示了较强的创伤恢复活性，表明本发明“皮肤保护肽OM-TV16”有较大的医疗、 化妆品 应用前景。本发明所述的皮肤保护肽OM-TV16具有高效促进皮肤创伤修复的强活性的有益特点。，下面是一种皮肤保护肽OM-TV16及其制备方法与应用专利的具体信息内容。
1.一种皮肤保护肽OM-TV16，其特征在于所述的皮肤保护肽OM-TV16的氨基酸序列为TVWGFRPTNPKPKPPG。
2.一种权利要求1所述的皮肤保护肽OM-TV16的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
A、用电刺激法取贵州绿臭蛙的皮肤分泌物，溶解于PBS，真空冷冻干燥后得到物料a于-
80℃保存备用；
B、将物料a溶解于水中得到物料b，物料b经离心后收集上清液得到物料c，物料c经超滤得到物料d；
C、将物料d溶解于水中得到物料e，将物料e进行高效液相色谱反相层析得到目标物皮肤保护肽OM-TV16。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于B步骤中所述的水为超纯水。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于B步骤中所述的离心是在转速10000~
15000r/min下离心15 25min。
~
5.根据权利要求2或4所述的制备方法，其特征在于所述的离心的温度控制在3 5℃。
~
6.根据权利要求2或4所述的制备方法，其特征在于B步骤中所述的超滤是采用Amicon超滤器超滤，截留分子量为10 kDa。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于C步骤中所述的水为去离子水。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的高效液相色谱反相层析是将物料e上样到预先用含0.1%三氟乙酸的超纯水平衡好的Hypersil ODS2 5 mm柱子，在流速为
1ml/min的条件下，用乙腈在线性梯度条件下进行洗脱，检测波长为220nm。
9.一种权利要求1所述的皮肤保护肽OM-TV16的应用，其特征在于所述的皮肤保护肽OM-TV16在制备促创伤修复保健食品、化妆品或药品中的应用。
一种皮肤保护肽OM-TV16及其制备方法与应用
技术领域
背景技术
发明内容
80℃保存备用；
B、将物料a溶解于水中得到物料b，物料b经离心后收集上清液得到物料c，物料c经超滤得到物料d；
C、将物料d溶解于水中得到物料e，将物料e进行高效液相色谱反相层析得到目标物皮肤保护肽OM-TV16。
图3为所述多肽OM-TV16在小鼠全皮创伤模型中的创面修复活性图。
具体实施方式
80℃保存备用；
B、将物料a溶解于水中得到物料b，物料b经离心后收集上清液得到物料c，物料c经超滤得到物料d；
C、将物料d溶解于水中得到物料e，将物料e进行高效液相色谱反相层析得到目标物皮肤保护肽OM-TV16。
新型促皮肤创伤修复肽OM-TV16分离纯化和鉴定
1、分离纯化
从贵州采集的绿臭蛙，用电刺激法取其皮肤分泌物（溶解于PBS），真空冷冻干燥，-80℃保存备用。
纯化得到的新型促皮肤创伤修复肽 OM-TV16 在全自动蛋白质序列测定仪（岛津PPSQ-
31A）上经 Edman 降解法，测定了新型促皮肤创伤修复肽 OM-TV16 氨基酸全序列，结果表明新型促皮肤创伤修复肽 OM-TV16 的氨基酸序列为TVWGFRPTNPKPKPPG。
将人角质形成细胞（HaCaT）在含有 10% 胎牛血清（FBS, BI, Israel）的 DMEM/F12 培养基（BI, Israel）中培养，并在 37℃ 在含 5% 的二氧化碳培养箱中孵育。然后将细胞消化转移至 24 孔板（2.5×10 5 细胞/孔）中培养 HaCaT 12-24 小时，待单层细胞铺满孔底后用无菌黄色 200 μL 移液管尖端（Axygen, USA）在孔底中央竖直划痕，并用 PBS 洗涤两次去除划下的细胞。随后，每孔加入 500 µL 含有浓度为25 nM、50 nM、100 nM的OM-TV16和浓度为50nM的 OM-LV20 (阳性对照）的 DMEM/F12 无血清培养基，阴性对照组在490 μL的无血清培养基中加入10 mL PBS，每组三孔。用倒置显微镜 （Primovert microscope, Zeiss, Germany）在加样后 0、6、12、18 和 24 小时拍摄单层细胞划痕愈合的图像，其余时间放回二氧化碳培养箱继续孵育。使用图像分析软件 Image J（NIH, Bethesda, MD, USA）分析计算划痕面积，细胞迁移率用划痕后各时间点划痕区域的总面积相对于刚划痕时划痕面积的百分比表示，即划痕愈合率。结果如图2A-B所示: OM-TV16 组和阳性组（OM-LV20）相对于PBS组对 HaCaT 细胞划痕修复均比较明显（P<0.005）。
选 5-6 周龄 SPF 级昆明小鼠，雄性，体重为 22 25g。在饲养房进行单独饲养三天，让~
其适应环境，然后构建小鼠全皮层缺损模型，具体实验过程如下：首先用 1% 的戊巴比妥钠溶液腹腔注射麻醉小鼠（0.1 ml/20g)，然后于造模前将小鼠背部毛发推剪干净，并用医用酒精（75%乙醇）对背部皮肤消毒；最后用灭菌眼科镊提起小鼠背部中央皮肤，用打孔器凿出两个大小对称的孔，直径约为 8 mm，创伤深度达肌肉外的筋膜层形成全皮层缺损创口。术后将小鼠放在加热器旁待其醒后放回饲养室单独继续正常饲养。建模后将小鼠随机分为4组（每组 3 只），前3组左侧创面分别用 25 nM、50 nM、100 nM的OM-TV16肽溶液表面涂抹治疗，右侧创面加等量生理盐水作为阴性对照；最后一组左侧创面用康复新液（KFX，1 mg/mL，美洲大蠊乙醇提取物，内蒙古京新药业有限公司，中国，Z15020805）作为阳性对照，右侧创面用生理盐水；于损伤当天开始每天早晚治疗两次，每次每孔给药约 20 μL。同时于损伤当天开始进行拍照记录损伤后0d、2 d、4 d、6 d、8 d 小鼠背部皮肤创面情况，最后通过 Image J 软件计算创伤修复率。结果如图3所示：创伤图片显示小鼠全皮层损伤模型随着时间的增长，创口逐渐恢复，且样品 OM-TV16 中的 50 nM组和康复新组的恢复最好。图 3A-B显示：生理盐水组的创伤修复率明显低于康复新组或者多肽组；多肽处理组的创伤修复率显著高于生理盐水组（P<0.005）。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种非掺杂白光发光层串联有机电致发光器件及其制作方法 | 2020-05-08 | 461 |
| 一种光能美白梭织提花布的制造方法 | 2020-05-11 | 447 |
| 一种基于多波长光子筛阵列的光纤耦合器 | 2020-05-11 | 30 |
| 偏振膜、偏振片、及偏振膜的制造方法 | 2020-05-08 | 451 |
| 一种激光二极管的发射功率自动调整电路及方法 | 2020-05-08 | 550 |
| 波长转换装置及光源系统 | 2020-05-08 | 857 |
| 一种双声光调Q的U形谐振腔激光器 | 2020-05-08 | 698 |
| 一种污水管道COD速检仪及其方法 | 2020-05-08 | 787 |
| 一种高有机质土壤中痕量叶绿素的测定方法 | 2020-05-08 | 721 |
| 一种紫外可见分光光度计 | 2020-05-08 | 235 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
