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文冠果花和/或文冠果花的提取物在制备治疗预防良性前列腺增生的药物中的应用

阅读:420发布:2021-04-14

专利汇可以提供文冠果花和/或文冠果花的提取物在制备治疗预防良性前列腺增生的药物中的应用专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种文冠果花和/或文冠果花的提取物在制备 治疗 和 预防 良性前列腺增生 的药物中的应用,涉及医疗技术领域,本发明通过大量的体外实验证实,文冠果花对良性前列腺增生具有显著的抑制和治疗作用,以文冠果花作为活性物质制备治疗和/或预防良性前列腺增生的药物,具有良好的药用 基础 。并且,文冠果花为天然 植物 ,以文冠果花作为药物的活性成分也能够避免化学物质可能带来的毒 副作用 。此外,以文冠果花提取物作为活性成分,可有效用于治疗或预防良性前列腺增生,开拓了文冠果花的药用价值,有益于民族药资源的开发与应用,有良好的经济与社会效应。,下面是文冠果花和/或文冠果花的提取物在制备治疗预防良性前列腺增生的药物中的应用专利的具体信息内容。

1.文冠果花和/或文冠果花的提取物在制备治疗和/或预防良性前列腺增生的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,应用提或者有机溶剂提取得到所述文冠果花的提取物。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述水提的方法包括:取文冠果花,加水进行提取,然后分离得到文冠果花提取物;所述水的加入量为文冠果花质量的8~15倍;
优选地,取文冠果花粉末,加8~15倍量的水进行提取;优选地,所述文冠果花粉末过5号筛;
优选地,提取温度为85-95℃。
4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述有机溶剂提取的方法包括:取文冠果花,加有机溶剂进行提取,然后分离得到文冠果花提取物;所述有机溶剂的加入量为文冠果花的8~15倍;
优选地,取文冠果花粉末,加8~15倍量的有机溶剂进行提取;
优选地,提取温度为65-75℃;
优选地,所述有机溶剂优选包括C1-C4醇,优选为乙醇,更优选为60-80v/v%的乙醇。
5.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述水提的方法包括:取文冠果花粉末,加
8~15倍量的水后加热至85-95℃并提取2-4次,每次45-75min,将提取产物趁热抽滤,合并溶液后依次经冷却、浓缩和冻干,得到文冠果花提取物;
优选地,所述有机溶剂提取的方法包括:取文冠果花粉末,加8~15倍量的60-80v/v%乙醇后加热至65-75℃并提取2-4次,每次45-75min,将提取产物趁热抽滤,合并溶液后依次经冷却、浓缩和冻干,得到文冠果花提取物。
6.根据权利要求1-5任一项所述的应用,其特征在于,所述良性前列腺增生的症状包括:排尿困难、尿流变细、滴尿、尿频或夜尿增多中的一种或多种。
7.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述药物的活性成分包括文冠果花和/或文冠果花的提取物。
8.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述药物还包括药学上可接受的辅料。
9.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述药物的剂型包括散剂、胶囊剂、口服液、片剂、滴丸剂、丸剂、注射剂、乳剂、酊剂或混悬剂。
10.根据权利要求7-9任一项所述的应用,其特征在于,所述药物的有效给药剂量为
121-522mg/kg体重,优选为200-500mg/kg,更优选为300-400mg/kg。

说明书全文

文冠果花和/或文冠果花的提取物在制备治疗预防良性前

列腺增生的药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及医疗技术领域,尤其是涉及一种文冠果花和/或文冠果花的提取物在制备治疗和预防良性前列腺增生的药物中的应用

背景技术

[0002] 良性前列腺增生(BPH)是老年男性常见的一种泌尿系统疾病,是由男性随年龄的增长而引起的前列腺非癌性肥大。前列腺增生时,可收缩尿道,引起尿流微弱、膀胱排空不全、夜尿、排尿困难、膀胱出口梗阻等多种症状,这些与BPH相关的症状称为下尿路症状(LUTS),BPH已成为患者影响生活质量的主要表现。
[0003] 临床上主要用α1-受体阻滞剂和5α-还原酶抑制剂治疗良性前列腺增生。α1-受体阻滞剂,包括多沙唑嗪、特拉唑嗪和坦索罗辛,是最初的治疗前列腺增生的药物,缓解放松平滑肌附近地区的前列腺和膀胱颈部。另一方面,主要应用的药物5α-还原酶抑制剂,如非那雄胺,通过减少双氢睾(DHT)生产,从而缓解前列腺的肥大。肥大的前列腺,在5α-还原酶的催化下转换由睾丸激素转换成DHT,导致前列腺DHT的增长平,从而加速了前列腺基质细胞和上皮细胞的增生,导致前列腺增生。
[0004] 文冠果是蒙医常用药材,为无患子科植物文冠果(Xanthoceras sorbifolium Bunge)。目前尚未见文冠果花在预防或治疗良性前列腺增生作用的基础研究报道。
[0005] 有鉴于此,特提出本发明。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于提供文冠果花和/或文冠果花的提取物在制备治疗和/或预防良性前列腺增生的药物中的应用,以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。
[0007] 本发明提供了文冠果花和/或文冠果花的提取物在制备治疗和/或预防良性前列腺增生的药物中的应用。
[0008] 进一步的,应用水提或者有机溶剂提取得到所述文冠果花的提取物。
[0009] 进一步的,所述水提的方法包括:取文冠果花,加水进行提取,然后分离得到文冠果花提取物;所述水的加入量为文冠果花质量的8~15倍;
[0010] 优选地,取文冠果花粉末,加8~15倍量的水进行提取;优选地,所述文冠果花粉末过5号筛;
[0011] 优选地,提取温度为85-95℃;
[0012] 优选地,所述水提的方法包括:取文冠果花粉末,加8~15倍量的水后加热至85-95℃并提取2-4次,每次45-75min,将提取产物趁热抽滤,合并溶液后依次经冷却、浓缩和冻干,得到文冠果花提取物。
[0013] 进一步的,所述有机溶剂提取的方法包括:取文冠果花,加有机溶剂进行提取,然后过滤得到文冠果花提取物;所述有机溶剂的加入量为文冠果花的8~15倍;
[0014] 优选地,取文冠果花粉末,加8~15倍量的有机溶剂进行提取;
[0015] 优选地,提取温度为65-75℃;
[0016] 优选地,所述有机溶剂包括C1-C4醇,优选为乙醇,更优选为60-80v/v%的乙醇;
[0017] 优选地,所述有机溶剂提取的方法包括:取文冠果花粉末,加8~15倍量的60-80v/v%乙醇后加热至65-75℃并提取2-4次,每次45-75min,将提取产物趁热抽滤,合并溶液后依次经冷却、浓缩和冻干,得到文冠果花提取物。
[0018] 进一步的,所述良性前列腺增生症状包括:排尿困难、尿流变细、滴尿、尿频或夜尿增多中的一种或多种。
[0019] 进一步的,所述药物的活性成分包括文冠果花和/或文冠果花的提取物。
[0020] 进一步的,所述药物还包括药学上可接受的辅料。
[0021] 进一步的,所述药物的剂型包括散剂、胶囊剂、口服液、片剂、滴丸剂、丸剂、注射剂、乳剂、酊剂或混悬剂。
[0022] 进一步的,所述药物的有效给药剂量为121-522g/kg体重,优选为200-500mg/kg,更优选为300-400mg/kg。
[0023] 相比于现有技术,本发明具有如下有益效果:
[0024] 本发明通过大量的体外实验证实,以文冠果花作为活性物质可以显著降低丙酸睾酮诱导的良性前列腺增生模型大鼠前列腺IL-6、IL-8及TNF-α的表达量,同时抑制血清和前列腺组织DHT和PCNA的表达,说明文冠果花对良性前列腺增生具有显著的抑制和治疗作用,以文冠果花作为活性物质制备治疗和/或预防良性前列腺增生的药物,具有良好的药用基础。并且,文冠果花为天然植物,以文冠果花作为药物的活性成分也能够避免化学物质可能带来的毒副作用。相比于文冠果其他部位,在开花季节文冠果花有大量的产量,从而可以减轻药用资源的浪费。此外,以文冠果花提和/或文冠果花的提取物为活性成分,可有效用于治疗或预防良性前列腺增生,开拓了文冠果花的药用价值,有益于民族药资源的开发与应用,有良好的经济与社会效应。附图说明
[0025] 为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案,下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施方式,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0026] 图1为文冠果花提取物对BPH大鼠的前列腺视觉比较,其中,图1中的A为正常组前列腺;B为模型组前列腺;C为非那雄胺(阳性对照)组前列腺;D和E分别为文冠果花水提取物高剂量组和低剂量组前列腺;F为G分别为文冠果花乙醇提取物高剂量组和低剂量组前列腺;
[0027] 图2为文冠果花提取物对BPH大鼠的前列腺指数的影响,其中,图2中的N为正常组、M为模型组、P为阳性对照组、WEH为文冠果花水提取物高剂量组、WEL为文冠果花水提取物低剂量组、EEH为文冠果花乙醇提取物高剂量组和EET为文冠果花乙醇提取物低剂量组;
[0028] 图3为文冠果花提取物对BPH大鼠的前列腺组织形态变化的影响,其中,图3中A为正常大鼠前列腺HE染色图、B为模型大鼠前列腺HE染色图、C为阳性对照大鼠前列腺HE染色图、D为文冠果花水提取物高剂量大鼠前列腺HE染色图、E为文冠果花水提取物低剂量大鼠前列腺HE染色图、F为文冠果花乙醇提取物高剂量大鼠前列腺HE染色图和G为文冠果花乙醇提取物低剂量大鼠前列腺HE染色图;
[0029] 图4为文冠果花提取物对BPH大鼠的血清及前列腺DHT的影响,其中,图4中A为血清DHT;B为前列腺DHT;
[0030] 图5为文冠果花提取物对BPH大鼠的前列腺IL-6、IL-8和TNF-α的影响,其中,图5中A为前列腺IL-6;B为前列腺IL-8;C为前列腺TNF-α;
[0031] 图6为文冠果花提取物对BPH大鼠的前列腺PCNA蛋白表达的影响。

具体实施方式

[0032] 下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
[0033] 根据本发明的一个方面,提供了文冠果花和/或文冠果花的提取物在制备治疗和/或预防良性前列腺增生的药物中的应用。
[0034] 本发明通过大量的体外实验证实,以文冠果花作为活性物质可以显著降低丙酸睾酮诱导的良性前列腺增生模型大鼠前列腺IL-6、IL-8及TNF-α的表达量,同时抑制血清和前列腺组织DHT和PCNA的表达,说明文冠果花可通过减小血清及前列腺DHT和/或减小前列腺指数和/或抑制前列腺PCNA的表达治疗或预防良性前列腺增生,以文冠果花作为活性物质制备治疗和/或预防良性前列腺增生的药物,具有良好的药用基础。并且,文冠果花为天然植物,以文冠果花作为药物的活性成分也能够避免化学物质可能带来的毒副作用。此外,以文冠果花和/或文冠果花的提取物作为活性成分,可有效用于治疗或预防良性前列腺增生,开拓了文冠果花的药用价值,有益于民族药资源的开发与应用,有良好的经济与社会效应。
[0035] 需要说明的是,本发明中所述的文冠果花是无患子科植物文冠果(Xanthoceras sorbifolium Bunge)的花。
[0036] 本文中,术语“治疗”或“预防”具有医学上的一般含义,并在本文特别地是指对可能罹患所述良性前列腺增生的哺乳动物个体采用本发明的药物进行处理,以期对所述疾病产生治疗、治愈、缓解、防止、预防等作用。
[0037] 治疗和/或预防指的是文冠果花既可以用于治疗良性前列腺增生,也可以用于预防良性前列腺增生,可以根据是预防性用途还是治疗性用途调整以文冠果花为活性物质的药物的给药剂量或给药频率。例如,在预防性用途中,可以以相对低频的率和/或相对低的剂量长期给药;在治疗性用途中,可以以相对高的频率和/或相对高的剂量给药,至个体表现出疾病症状的部分或完全改善,在此之后,可以转为预防方案。
[0038] 可选地,所述良性前列腺增生症状包括:排尿困难、尿流变细、滴尿、尿频或夜尿增多中的一种或多种。
[0039] 为了使有效成分能够更高效的被利用,优选使用文冠果花的提取物制备治疗和/或预防良性前列腺增生的药物。
[0040] 需要说明的是,天然药物提取物的获得方式及现有技术较成熟且有报道,本文在此不做详细解释,本领域技术人员可以通过现有的任意方式获取文冠果花提取物。
[0041] 在一些优选的实施方式中,应用水提或者有机溶剂提取得到所述文冠果花的提取物。
[0042] 本实施方式中文冠果花提取物的制备工艺简便,成本低且提取率高,为该提取物的工业化生产提供了良好的基础。
[0043] 具体地,所述水提的方法包括:取文冠果花,加水进行提取,然后分离得到文冠果花提取物,所述水的加入量为文冠果花质量的8~15倍。当采用上述方式进行水提时,提取效率高。其中,水的用量例如可以为,但不限于8倍量、9倍量、10倍量、11倍量、12倍量、13倍量、14倍量或15倍量。需要说明的是,可采用本领域可接受的常规分离方式进行分离,例如可以为,但不限于过滤、离心或静置等。
[0044] 为了使有效成分提取更充分、提取效率更高,优选地,取文冠果花粉末,加8~15倍量的水进行提取。优选地,所述文冠果花粉末过5号筛。优选地,提取温度为85-95℃,例如可以为,但不限于85℃、88℃、90℃、92℃或95℃。
[0045] 在一些更具体的实施方式中,所述水提的方法包括:取文冠果花粉末,加8~15倍量的水后加热至85-95℃并提取2-4次,每次45-75min,将提取产物趁热抽滤,合并溶液后依次经冷却、浓缩和冻干,得到文冠果花提取物。
[0046] 其中,“趁热”指的是温度维持在70-95℃时进行抽滤;“冷却”的温度为室温(20-25℃)。
[0047] 具体地,所述有机溶剂提取的方法包括:取文冠果花,加有机溶剂进行提取,然后分离得到文冠果花提取物,所述有机溶剂的加入量为文冠果花的8~15倍;当采用上述方式进行有机溶剂提取时,提取效率高。其中,有机溶剂的用量例如可以为,但不限于8倍量、9倍量、10倍量、11倍量、12倍量、13倍量、14倍量或15倍量。需要说明的是,可采用本领域可接受的常规分离方式进行分离,例如可以为,但不限于过滤、离心或静置等。
[0048] 为了使有效成分提取更充分、提取效率更高,优选地,取文冠果花粉末,加8~15倍量的有机溶剂进行提取;优选地,提取温度为65-75℃,例如可以为,但不限于65℃、68℃、70℃、72℃或75℃。
[0049] 优选地,所述有机溶剂包括C1-C4醇,优选为乙醇,更优选为60-80v/v%的乙醇;
[0050] 在一些更具体的实施方式中,所述有机溶剂提取的方法包括:取文冠果花粉末,加8~15倍量的60-80v/v%乙醇后加热至65-75℃并提取2-4次,每次45-75min,将提取产物趁热抽滤,合并溶液后依次经冷却、浓缩和冻干,得到文冠果花提取物。
[0051] 在一些优选的实施方式中,所述药物的活性成分包括文冠果花和/或文冠果花的提取物。
[0052] 文冠果花可通过减小血清及前列腺DHT和/或减小前列腺指数和/或抑制前列腺PCNA的表达治疗或预防良性前列腺增生,因此,以文冠果花作为药物活性成分,能够对良性前列腺增生起到有效的治疗或预防作用,同时安全无毒,副作用小。基于此,当使用文冠果花的提取物作为药物的活性成分时,该药物同样能够对良性前列腺增生起到有效的治疗或预防作用。
[0053] 在一些优选的实施方式中,所述药物还包括药学上可接受的辅料。
[0054] 需要说明的是,本文中,“药学上可接受的”表示,当以常用剂量使用时没有毒副作用,从而可被政府或其他与其相当的管理组织批准或已被批准该药用于哺乳动物,更特别的是用于人。药学上可接受的辅料是指生产药品和/或调配处方时,使用的赋形剂和/或附加剂,是指除活性成分外,在安全性方面已进行了合理的评估,并且包含在药物制剂中的物质。具体地,在本实施方式中,所述药学上可接受的辅料选自溶剂、分散剂、助悬剂、表面活性剂增稠剂、稀释剂、等渗剂、乳化剂、防腐剂粘合剂、稳定剂、水合剂、乳化加速剂、吸附剂、缓冲剂、着色剂香味剂、甜味剂、离子交换剂或抗化剂中的一种或多种。在本实施方式所述的药物中添加上述药学上可接受的辅料中的一种或多种,能够起到赋型、充当载体或提高稳定性的作用,并且,还可具有助溶或缓释等功能。
[0055] 在一些优选的实施方式中,所述药物的剂型包括散剂、胶囊剂、口服液、片剂、滴丸剂、丸剂、注射剂、乳剂、酊剂或混悬剂。根据药物施用方式的不同或用药需求的不同,可选择地将药物制备为上述剂型中的一种或多种。需要进行说明的是,本发明的文冠果花活性成分,可以以保健品、功能性食品、食品和食物添加剂等的形式提供或存在。可采用药物制剂领域的常规技术,通过药品生产的常规手段得到本发明的提取物作为原料有效成分,选择任意一种或多种要学上可接受的载体或辅料或辅助活性成分进行混合,然后形成所需的剂型,来制备本发明的提取物所需剂型。
[0056] 在一些优选的实施方式中,所述药物的有效给药剂量为121-522mg/kg体重,例如可以为,但不限于121mg/kg体重、150mg/kg体重、180mg/kg体重、200mg/kg体重、250mg/kg体重、300mg/kg体重、350mg/kg体重、400mg/kg体重、450mg/kg体重、500mg/kg体重或522mg/kg体重,优选为200-500mg/kg体重,更优选为300-400mg/kg体重。
[0057] 当有效给药剂量在上述范围内时,对良性前列腺增生的预防和/或治疗作用更明显,见效更快。
[0058] 为了有助于更清楚的理解本发明的内容,现结合具体的实施例详细介绍如下。
[0059] 实施例1、文冠果花提取物的制备
[0060] 1.文冠果花水提取物的制备
[0061] 文冠果花干燥粉500g,加8倍蒸馏水,加热至90℃并提取,提取3次,每次1h,提取物趁热抽滤,合并溶液,冷却,浓缩,冻干,即得文冠果花水提取物。
[0062] 2.文冠果花乙醇提取物的制备
[0063] 文冠果花干燥粉500g,加8倍浓度为70%的乙醇,加热至70℃并提取,提取3次,每次1h,提取物趁热抽滤,回收乙醇,合并溶液,冷却,浓缩,冻干,即得文冠果花乙醇提取物。
[0064] 实施例2、文冠果花提取物对丙酸睾酮致良性前列腺增生大鼠抑制作用[0065] 1.材料
[0066] 雄性SPF级Wistar大鼠,10周龄,70只,体重180~200g,购于北京大学医学部,实验动物许可证号:SYXK(京)2018-0262,饲养于内蒙古医科大学实验动物中心,环境温度25℃、湿度36%,自由饮食饮水。丙酸睾酮(批号:14252412)购自Macklin生化科技有限公司,IL-6(批号:MM-0190R1);IL-8(批号:MM-0180R1);TNF-α(批号:MM-0175R1)购自江莱生物公司,PSA试剂盒(批号:JL10345);DHT试剂盒(批号:JL12137)均购自酶免公司,PCNA试剂盒(批号:AB29)购自ABCAM公司。
[0067] 2.实验方法
[0068] 2.1大鼠BPH模型建立
[0069] 取60只大鼠,每日皮下注射丙酸睾酮(TP,3mg/kg),连续28天,既得BPH模型大鼠。此模型为经典模型且实验动物模型中应用广泛。
[0070] 2.2分组与给药
[0071] 除正常组10只大鼠外,其余模型鼠按照随机数表法分为模型组、非那雄胺(阳性对照)组(10mg/kg)、文冠果花水提取物高剂量组(484mg/kg)和低剂量组(121mg/kg)、文冠果花乙醇提取物高剂量组(552mg/kg)和低剂量组(138mg/kg),给药周期为28天。
[0072] 3.检测指标
[0073] 3.1前列腺指数及视觉比较
[0074] 结果如附图说明的图1和图2所示,与正常组相比丙酸睾酮可以显著地提高模型组大鼠前列腺指数(IP),表明造模成功,其中文冠果花提取物抑制了IP的增高,因此文冠果花提取物具有显著的抑制大鼠前列腺指数作用(图2);视觉比较分析结果表明,与正常组组相比BHP模型组的前列腺明显肥大,其中文冠果花提取物可以减小前列腺组织(图1)。
[0075] 3.2前列腺组织病理形态变化
[0076] 大鼠前列腺组织病理形态检测步骤如下:将石蜡包埋的前列腺组织切成5μm,置于载玻片,二甲苯使石蜡切片脱蜡,按梯度进行乙醇脱水后,先进行苏木素染色5min,水洗后盐酸乙醇分化5s,自来水返蓝15min,置于伊红染色5min,脱水,透明即可封片,镜检拍照。
[0077] 结果如附图说明的图3所示,与正常组相比BPH组间质成分显著增多,腺泡体积增大,腺上皮细胞排序紊乱,结组织增生明显;文冠果花提取物组间质成分有所减小,腺上皮细胞排序紊乱的现象在不同程度上较为缓解,有少部分的腺泡排序密集现象(图3)。
[0078] 3.3前列腺IL-6、IL-8及TNF-α测定
[0079] 大鼠前列腺组织IL-6、IL-8及TNF-α蛋白测定步骤如下:将组织加PBS剪碎匀浆,反复冻融,离心取上清,BCA测总蛋白量;血清样本4度1000xg离心15分钟,取上清。标准品液配制参见说明书;10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释;洗涤液:用重蒸水1:20稀释。加样:每孔各加入标准品50μl,样本孔加入40μl检测缓冲液和10μl样本。每孔加入酶标试剂100μl,置37℃暗处反应60分钟。洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干,每孔加入AB显色底物TMB各50μl,避光,37℃孵育15min然后每孔加入50μl终止液混匀,30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
[0080] 结果如附图说明的图4所示,与正常组相比,模型组IL-6增高,而文冠果花乙醇提取药物组与模型组相比p值有显著性差异;与正常组相比,模型组IL-8增高,与模型组相比水提取物低剂量组、乙醇提取物高剂量组和乙醇提取物低剂量组IL-8的p值均有统计学意义;与正常组相比,模型组TNF-α增高,与模型组相比水提取物高剂量组和乙醇提取物高剂量组的p值有统计学意义。
[0081] 3.4前列腺DHT及血清DHT测定
[0082] 蛋白质测定步骤如前所示。
[0083] 结果如附图说明的图5所示,与正常组相比,模型组血清和组织中的DHT增高且有统计学意义,此结果表明,造模成功;与模型组相比各提取物DHT含量降低且有统计学意义,因此文冠果花提取物有抑制血清和前列腺组织DHT的作用。
[0084] 3.5前列腺PCNA表达
[0085] 总蛋白提取:从-80℃取出组织,置于上,用研钵研磨,研钵中加入300ul组织裂解液,置于冰上裂解1h,12000rpm离心15min,取上清,将样品100℃煮沸10min,12000rpm离心1min,分装后于-20℃储存。SDS-PAGE电泳:根据目的蛋白分子量大小配制不同浓度的胶,等胶凝固好后,拔去梳子,电泳缓冲液清洗上样孔,将准备好的样品上样,恒压80V,30min之后恒压120V,1h。免疫印迹:电泳结束后,将PAGE胶从玻板上卸下,装配转膜三明治,恒流,300mA转60min,将蛋白转移到PVDF膜上。免疫发光:用封闭液(含5%脱脂奶粉的TBST溶液)室温封闭膜1h,用新配制的封闭液稀释一抗,TMEM106C蛋白抗体稀释比1:500,4℃,一抗孵育过夜,用TBST洗膜三次:每次5min,用封闭液稀释各蛋白一抗对应的二抗(鼠二抗1:
3000),室温下孵育膜1h,用TBST洗膜三次,每次5min,将膜置于平铺好的保鲜膜上,按1:1比例混合A液和B液(Thermo,supersignal west pico),将混合液均匀滴加于膜上,反应60s,将膜在吸水纸上沥干多余的ECL底物反应液,置于平板上,放入化学发光成像仪中,曝光,拍照记录。
[0086] 结果如附图说明的图6所示,与正常组相比,模型组的PCNA蛋白表达量明显增多,而在文冠果花水提取物高剂量组和乙醇提取物高剂量组能明显抑制BPH大鼠前列腺组织的PCNA表达量,因此提示,文冠果花水提取物高剂量组和乙醇提取物高剂量组可以通过抑制PCNA的表达来降低前列腺组织增生,从而预防或治疗良性前列腺增生。
[0087] 本发明未尽事宜为公知。
[0088] 以上对本发明所提供的文冠果花提取物在制备用于预防和/或治疗良性前列腺增生的药物中的新应用进行了详细的解释。在本文中应用了具体的实例对本发明的原理以及实施方式进行了进一步的阐释。最后应说明的是:以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
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