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一种枇杷叶总倍半萜苷提取物的应用

阅读：165发布：2023-02-05

专利汇可以提供一种枇杷叶总倍半萜苷提取物的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种枇杷叶总倍半萜苷提取物的应用。更具体地，公开了一种枇杷叶总倍半萜苷提取物在制备治疗高血脂及非酒精性脂肪肝药物中的应用，其中，所述的一种枇杷叶总倍半萜苷提取物按照201410802741.1 专利制备获得。申请人在科学实验的基础上发现，所述的一种枇杷叶总倍半萜苷提取物可显著改善2型糖尿病小鼠脂质代谢，减轻2型糖尿病小鼠肝脏细胞变性坏死，减少脂质沉积，防止非酒精性脂肪肝的形成，可作为治疗高血脂及2型糖尿病性非酒精性脂肪肝的药物或保健品进一步研究开发。，下面是一种枇杷叶总倍半萜苷提取物的应用专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种枇杷叶总倍半萜苷提取物在制备降血脂及治疗非酒精性脂肪肝药物方面的应用；
所述枇杷叶总倍半萜苷提取物通过以下步骤制备：
取干燥枇杷叶1kg，粉碎，用质量百分浓度为80%的乙醇溶液10L在70℃下回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，减压浓缩至有沉淀析出，3000转/分钟离心15分钟，取上清液备用；
称取AmberliteTMXAD16大孔吸附树脂800g，加入适量蒸馏水，在室温下放置过夜，使树脂充分溶胀，湿法装柱，用95%乙醇流动清洗柱子，最后用蒸馏水充分淋洗柱子至流出液无乙醇味，放置过夜；
将上述上清液缓缓流过处理和平衡过的大孔树脂柱，先用去离子水冲洗，再用不同浓度的乙醇梯度洗脱，收集乙醇浓度为60%-80%之间的洗脱液，流出液经TLC展开，喷洒香草醛-硫酸试剂显淡紫色，减压浓缩收集液，备用；
浓缩液进一步流过经处理过的聚酰胺柱，200mesh，200g，先用去离子水洗脱，再用水-甲醇梯度洗脱，收集甲醇浓度为0-20%之间的洗脱液，回收溶剂，干燥，得到总倍半萜苷提取物。
2.一种枇杷叶总倍半萜苷提取物在制备治疗高血脂及2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病药物方面的应用；
所述枇杷叶总倍半萜苷提取物通过以下步骤制备：
取干燥枇杷叶1kg，粉碎，用质量百分浓度为80%的乙醇溶液10L在70℃下回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，减压浓缩至有沉淀析出，3000转/分钟离心15分钟，取上清液备用；
称取AmberliteTMXAD16大孔吸附树脂800g，加入适量蒸馏水，在室温下放置过夜，使树脂充分溶胀，湿法装柱，用95%乙醇流动清洗柱子，最后用蒸馏水充分淋洗柱子至流出液无乙醇味，放置过夜；
将上述上清液缓缓流过处理和平衡过的大孔树脂柱，先用去离子水冲洗，再用不同浓度的乙醇梯度洗脱，收集乙醇浓度为60%-80%之间的洗脱液，流出液经TLC展开，喷洒香草醛-硫酸试剂显淡紫色，减压浓缩收集液，备用；
浓缩液进一步流过经处理过的聚酰胺柱，200mesh，200g，先用去离子水洗脱，再用水-甲醇梯度洗脱，收集甲醇浓度为0-20%之间的洗脱液，回收溶剂，干燥，得到总倍半萜苷提取物。
3.权利要求1或2所述枇杷叶总倍半萜苷提取物的应用，其特征在于：所述药物的剂型为片剂、颗粒剂、散剂或胶囊剂。

说明书全文

一种枇杷叶总倍半萜苷提取物的应用

技术领域

[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及一种从中药枇杷叶中得到的总倍半萜苷提取物在治疗高血脂及2型糖尿病性非酒精性脂肪肝的药物或保健品上的应用。

背景技术

[0002] 糖尿病（Diabetes mellitus，DM）属多病因代谢性疾病，其特点是持续慢性高血糖，伴随胰岛素（Insulin）分泌及/或作用缺陷所引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。目前，糖尿病已经成为世界各国的主要卫生保健问题，预计2025年全世界糖尿病人将突破3.33亿。糖尿病主要分为1型糖尿病和2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus, T2DM），其中T2DM占90%左右。T2DM的主要特征是外周组织的胰岛素抵抗（Insulin Resistant, IR）和胰岛β细胞分泌胰岛素相对不足。随着T2DM患病人数增多，病程延长，各种并发症随之而来，影响肝脏、肾脏、血管、神经系统等的功能。其中非酒精性脂肪性肝病（Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD）是T2DM的一种重要的并发症，NAFLD是指由酒精和其它明确的肝损伤因素之外的原因导致的，以肝细胞脂肪变性和脂肪沉积为特征的临床病理综合征，NAFLD与T2DM、肥胖及血脂紊乱同时存在，被视为代谢综合征的肝脏表现。约50%的T2DM患者同时存在NAFLD，并且NAFLD是T2DM的一个危险因素，糖尿病患者发展为非酒精性脂肪肝病的风险系数是非糖尿病患者的3倍。

[0003] 研究表明，胰岛素抵抗（Insulin resistance，IR）是2型糖尿病和脂肪肝形成的共同作用机制。在2型糖尿病的发病机制中IR起到了重要作用，IR时不能有效地抑制肝脏葡萄糖的输出和有效地促进葡萄糖进入肌肉组织，从而引起血糖升高导致2型糖尿病。在脂肪肝的发病机制中IR亦发挥着重要作用，一方面IR促进了脂肪分解为游离脂肪酸，游离脂肪酸随血液进入肝脏，在肝细胞内合成脂肪；另一方面，IR可抑制肝细胞内脂肪的分解代谢，引起肝细胞内脂肪积聚，从而导致脂肪肝的形成。因此改善IR对糖尿病合并非酒精性脂肪肝病有一定的治疗作用。

[0004] 枇杷叶是蔷薇科枇杷属植物枇杷（Eriobotrya japonica (Thunb.) Lindl.）的干燥叶，作为一味常用中药，收载于历版中国药典供中医临床使用，具有清肺止咳、降逆止呕等作用，用于治疗肺热咳嗽、气逆喘气、胃热呕逆、烦热口渴等症状，符合中医治疗糖尿病“消渴”的范畴。国内已公开的发明专利（200810018820.8，200810024412.3，200410015695.7，201410802741.1）分别指出了枇杷叶总三萜酸、总黄酮和总倍半萜苷具有抗糖尿病作用。本课题组前期研究发现，总倍半萜苷作为枇杷叶的重要活性成分之一，具有改善IR，治疗2型糖尿病的作用。本发明通过建立高糖高脂诱导的2型糖尿病小鼠模型，全面模拟2型糖尿病病理条件下机体对脂质的代谢和消耗，考察枇杷叶总倍半萜苷干预下2型糖尿病小鼠脂质的代谢和消耗，以及对非酒精性脂肪肝的影响，评价枇杷叶总倍半萜苷的降脂活性及对非酒精性脂肪肝的治疗作用，对防治高血脂及糖尿病合并非酒精性脂肪肝病的药物研发具有积极意义。

发明内容

[0005] 本发明要解决的技术问题是一种枇杷叶总倍半萜苷提取物在制药领域中的应用，提供了一种枇杷叶总倍半萜苷提取物在制备治疗高血脂及糖尿病合并非酒精性脂肪肝药物或保健品方面的应用。

[0006] 为了达到上述目的，本发明根据专利201410802741.1所述的制备方法，获得了一种枇杷叶总倍半萜苷提取物。以上述方法制备得到的枇杷叶总倍半萜苷提取物，包含以橙花叔醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷和橙花叔醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷两种倍半萜苷为代表的化学成分，该提取物中总倍半萜苷的质量百分含量>50%。

[0007] 上述枇杷叶总倍半萜苷提取物在一定浓度下可以显著降低小鼠血浆中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）含量，减少脂质在肝脏中的累积，减轻糖尿病小鼠肝脏细胞的变性坏死，提示其具有降血脂功能，且具有治疗非酒精性脂肪肝的作用，可以应用于制备治疗高血脂及糖尿病合并非酒精性脂肪肝病药物或保健品。

[0008] 所述治疗高血脂及糖尿病合并非酒精性脂肪肝病药物或保健品分别为含有治疗有效剂量或功效成分的枇杷叶总倍半萜苷提取物在药学上可接受的载体和保健食品。附图说明

[0009] 图1枇杷叶总倍半萜苷提取物治疗非酒精性脂肪肝。（A）正常组；（B）2型糖尿病性脂肪肝小鼠；（C）50 mg/kg枇杷叶总倍半萜苷提取物；（D）150 mg/kg枇杷叶总倍半萜苷提取物。

具体实施方式

[0010] 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

[0011] 实施例1：

[0012] 根据专利201410802741.1所述的制备方法，取干燥枇杷叶1 kg，粉碎，用质量百分比浓度为80%的乙醇溶液10 L在70℃下回流提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，减压浓缩至有沉淀析出，3000转/分钟离心15分钟，取上清液备用。

[0013] 称取AmberliteTM XAD16大孔吸附树脂800g，加入适量蒸馏水，在室温下放置过夜，使树脂充分溶胀，湿法装柱，用95%乙醇流动清洗柱子，最后用蒸馏水充分淋洗柱子至流出液无乙醇味，放置过夜。

[0014] 将上述上清液缓缓流过上述处理和平衡过的大孔树脂柱，先用去离子水冲洗，再用不同浓度的乙醇梯度洗脱，收集乙醇浓度为60-80%之间的洗脱液，流出液经TLC展开，喷洒香草醛-硫酸试剂显淡紫色；减压浓缩收集液，备用。

[0015] 上述浓缩液进一步流过经处理过的聚酰胺（200mesh，200g）柱，先用去离子水洗脱，再用水-甲醇梯度洗脱，收集甲醇浓度为0-20%之间的洗脱液，回收溶剂，干燥，得到总倍半萜苷提取物。

[0016] 实施例2：枇杷叶总倍半萜苷提取物体内降脂活性研究

[0017] 2型糖尿病肥胖小鼠模型的建立：普通级昆明种小鼠，雄性，体重（20±2）g，购自南京市江宁区青龙山动物繁殖场，随机取5只作为空白组饲喂正常饲料，其余小鼠适应环境3日后喂食高脂饲料（配方：颗粒标准饲料66.7%，蔗糖15%，猪油12%，鸡蛋5%，胆固醇1%，猪胆盐0.3%），禁食12h（不禁水），腹腔注射70mg/kg STZ（链脲佐菌素溶于PH 4.2-4.5 的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液中，现配现用，冰浴保存），连续注射两天。1周后小鼠眼内眦取血测定小鼠空腹血糖值，小鼠空腹血糖高于7.8mmol/L并出现多饮多尿症状的小鼠被选为糖尿病模型小鼠。

[0018] 实验方法：造模成功后将小鼠随机分为模型组（M）、阳性药吡格列酮组10mg/kg（PIO）及枇杷叶倍半萜苷组，其中枇杷叶倍半萜苷组给予按照实施例1制备获得的枇杷叶倍半萜苷50mg/kg（低剂量组，BL）、150mg/kg（高剂量组，BH），并灌胃给药，每日一次，连续4周，模型组和空白组给予等体积的0.5% CMC-Na。4周后小鼠摘眼球取血，测定血清中甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇。

[0019] 实验结果：

[0020] 表1 枇杷叶总倍半萜苷对小鼠TG、TC、HDL、LDL的影响

[0021]

[0022] 如表1所示，与模型组相比，给予枇杷叶总倍半萜苷提取物后，一定浓度下（50 mg/kg，150 mg/kg）可显著降低糖尿病肥胖小鼠血浆中TG、TC、HDL、LDL的含量，并呈现剂量相关性（P<0.05）。该结果提示枇杷叶总倍半萜苷提取物具有降低糖尿病小鼠血脂的作用。

[0023] 实施例3：枇杷叶总倍半萜苷提取物治疗非酒精性脂肪肝

[0024] 按照实施例2中所述造模及实验方法，给药4周后摘取肝脏。福尔马林固定肝脏组织样本72h后，按照常规脱水透明、浸蜡、包埋，制成5μm厚石蜡切片，苏木精-伊红(HE)染色后光镜下观察肝组织的病理变化情况。

[0025] 实验结果：正常肝组织未见发生明显病理改变，高糖高脂饲养的糖尿病模型小鼠的肝脏切片中，肝细胞出现典型的胞浆疏松变性、气球样变性和脂肪沉积等。枇杷叶总倍半萜苷提取物治疗组小鼠肝细胞变性、坏死表现普遍减轻，仅见到少数肝细胞出现混浊肿胀，且多为散在分布（图1）。该结果提示枇杷叶总倍半萜苷提取物具有治疗糖尿病引起的非酒精性脂肪肝的作用。

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