专利汇可以提供一种筛选多氧霉素B组分高产菌株的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种筛选多 氧 霉素B组分(Polyoxin B)高产菌株的方法,包括配制出发菌株孢子悬液,将稀释后的孢子悬液经过先紫外诱变,再日光灯照射,然后ARTP复合诱变后,涂布于培养基平板并培养,将挑出的各单菌落的一半摇瓶考核,选出多氧霉素B组分含量高的菌株。本发明的筛选方法可以快速地筛选出含量高的菌株,本发明筛选的多氧霉素B组分含量高的菌株,其 发酵 液对苹果斑点落叶病和 烟草 赤星病具有抑制作用。,下面是一种筛选多氧霉素B组分高产菌株的方法专利的具体信息内容。
1.一种筛选多氧霉素B组分高产菌株的方法,其特征在于,包括配制出发菌株孢子悬液,将稀释后的孢子悬液经过先紫外诱变,再日光灯照射,然后ARTP复合诱变后,涂布于培养基平板并培养,将挑出的各单菌落的一半摇瓶考核,选出多氧霉素B组分含量高的菌株。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤1,将多氧霉素出发菌株金色产色链霉菌接种于斜面培养基恒温培养;
步骤2,挑选步骤1培养好的孢子,加入生理盐水,梯度稀释,涂布于斜面培养基平板上,恒温培养后长出单菌落;
步骤3,挑选步骤2饱满合格的单菌落,均匀切开,其中一半用于制作诱变的孢子悬液,另外一半用于摇瓶考核对照;
步骤4,将步骤3切下的半个单菌落加入含甘油的生理盐水,振荡分散制成待诱变孢子悬液;
步骤5,步骤4制成的待诱变孢子悬液滴入ARTP诱变育种仪的载片上,均匀涂开;
步骤6,将滴加到载片的悬液先紫外诱变,再日光灯照射,然后ARTP诱变,得到诱变液;
步骤7,用无菌生理盐水洗下步骤6所述的诱变液;
步骤8,保持黑暗或在红光下,将步骤7所述的诱变液用生理盐水梯度稀释,分别涂布于斜面培养基平板上,恒温培养;
步骤9,挑选步骤8培养突变的若干单菌落,切下所选这些单菌落的一半接种到摇瓶种子培养基,恒温振荡培养,其余半个仍要保留;将步骤3剩余的半个单菌落也接种到摇瓶种子培养基,恒温振荡培养;
步骤10,将步骤9培养的摇瓶种子以5-15%的接种量接种到摇瓶发酵培养基中继续恒温振荡培养;
步骤11,对步骤10的各发酵瓶发酵液中多氧霉素B组分含量进行检测,筛选与出发菌株单菌落比较代谢B组分含量提高的菌株。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤1、2中,培养参数为温度25-28℃培养5-8天。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,以质量百分含量计,所述步骤1、2、8中所述的斜面培养基包括以下成份:玉米粉0.2-0.7%、麦芽糖0.2-0.8%、酵母膏0.3-0.6%、琼脂
1.5-2.5%,其余是蒸馏水,所述的斜面培养基的消前pH为7.0-7.2。
5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤4中,所述的生理盐水为含20wt%甘油的生理盐水。
6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤6中,紫外诱变的参数为:15W紫光灯距离悬液30cm,照射5-60秒;日光照射的参数为:日光灯照射3分钟;ARTP诱变的参数为:
照射功率120W,氦气流量8-12SLM,照射10-180秒。
7.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤8中,所述的培养为于温度25-27℃在暗处培养6-14天。
8.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤9中,所述的培养为在28℃、转速
220rpm恒温摇床培养28-32小时;所述步骤10中,所述的培养为在28℃、转速220rpm恒温摇床培养130-140小时。
9.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤9中,以质量百分含量计,所述的摇瓶种子培养基包括以下成份:玉米粉1.0-2.0%、低温黄豆饼粉1-4%、啤酒酵母粉0.1-
1.0%、果葡糖浆0.5-1.5%、NaCl 0.1-0.3%、CaCO3 0.2-0.4%、KH2PO4 0.05-0.20%,自来水配制,所述的摇瓶种子培养基的消前pH为6.5-6.8。
10.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤10中,以质量百分含量计,所述的摇瓶发酵培养基包括以下成份:玉米粉8-10%、低温黄豆饼粉2.0-3.0%、啤酒酵母粉0.3-
0.5%、鱼粉0.4-0.8%、NaCl 0.1-0.5%、CaCO3 0.1-0.5%、KH2PO4 0.05-0.20%、α-淀粉酶为玉米粉质量的0.005-0.020%,自来水配制,所述摇瓶发酵培养基的pH值为消前6.5-6.8。
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