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烟台补血草抗肿瘤有效组分提取物及其制备方法和用途

阅读：185发布：2020-05-12

专利汇可以提供烟台补血草抗肿瘤有效组分提取物及其制备方法和用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了烟台补血草抗肿瘤有效组分提取物及其制备方法和用途。烟台补血草抗肿瘤有效部位提取物是通过烟台补血草醇提后，获得环己烷、乙酸乙酯、正丁醇、水四个有效部位。烟台补血草有效部位可以抑制多种癌细胞株增殖，特别对白血病HL‑60和K562细胞、乳腺癌 MCF‑7细胞、肺癌A549细胞、宫颈癌 Hela细胞、肝癌HepG‑2细胞等肿瘤细胞株的抑制作用显著，以乙酸乙酯部位抗肿瘤活性最明显，抗癌谱较广，并且烟台补血草有效部位具有诱导白血病细胞HL‑60分化的作用，因此，可用于制备开发抗肿瘤药物，尤其是对于白血病治疗研究具有重要的意义。，下面是烟台补血草抗肿瘤有效组分提取物及其制备方法和用途专利的具体信息内容。

权利要求

1.烟台补血草抗肿瘤有效部位提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述提取物是烟台补血草的乙酸乙酯提取物；
其有效组分提取物制备方法包括如下步骤：
步骤1：将烟台补血草全草粉碎，用95%乙醇浸提三次,合并提取液，减压浓缩去乙醇，得总浸膏；
步骤2：将步骤1得到的总浸膏，加蒸馏水搅拌均匀成悬浮液，装入分液漏斗中，水层按照极性由小到大的顺序，依次用环己烷、乙酸乙酯、正丁醇溶液进行萃取，将环己烷、乙酸乙酯、正丁醇及水萃取液旋转蒸发分别减压浓缩后，即得烟台补血草抗肿瘤有效部位提取物；
所述被提取的烟台补血草为经过乙醇浸泡并干燥的全草，包括根、茎、叶和花；
所述的抗肿瘤为烟台补血草抗肿瘤有效部位提取物体外抑制白血病HL-60及K562细胞增殖、诱导白血病细胞HL-60定向分化。
2.根据权利要求1所述的烟台补血草抗肿瘤有效部位提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征是：所述的抗肿瘤药物是烟台补血草抗肿瘤有效部位提取物与药学上可接受的载体或辅料组成。
3.根据权利要求1所述的烟台补血草抗肿瘤有效部位提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述药物组合物是以本发明的有效部位为有效成分，与药学上可接受的载体所组成，并以适合药用的制剂形式存在，这些制剂形式可以是片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、粉针剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、滴丸剂和贴剂。

说明书全文

烟台补血草抗肿瘤有效组分提取物及其制备方法和用途

技术领域

[0001] 本发明涉及天然药物提取及应用领域，具体是指具有抗肿瘤活性的烟台补血草提取物及其制备方法和用途。

背景技术

[0002] 恶性肿瘤发病率不断升高，目前已经成为人类因疾病死亡的主要原因。其中，肺癌、肝癌和胃癌是主要的实体肿瘤死亡原因，三者约占总恶性肿瘤死亡率的60%，而白血病是危害血液系统的主要恶性疾病。目前针对恶性肿瘤主要的治疗手段是放疗、化疗，但放化疗在临床上副作用大易产生耐药，使得临床疗效减低。因此，开发新的低毒、高效、安全的药物成为治疗肿瘤的迫切需要。中国的传统医药历史悠久，很多中药本身具有抗肿瘤活性，并且可以起到调节免疫功能抑制肿瘤，具有整体治疗的效果。从天然药物中寻找高效低毒的抗肿瘤活性的先导化合物，一直是国内外抗癌药物研究的热点，并且有效的活性单体和中草药有效部位的抗癌复方剂都具有重要的临床应用价值。

[0003] 烟台补血草Limoniumfranchetii（Debx.）Kuntze属白花丹科(Plumbaginaceae，又称蓝雪科) 补血草属( LimoniumMiller)，为中国特有种; 因其花冠淡紫色( 有时上部无色) ，萼檐由淡紫红色渐变为白色，又称为紫花补血草。本种为稀有种，仅分布于辽宁、山东半岛至江苏东北部，被列为国家第二批稀有濒危植物。全世界补血草属植物资源约有300种，我国有17种，分布南北各省。该属植物含黄酮、生物碱、多糖、有机酸、鞣质、挥发油等成分，具有补血、止血、散瘀、抗菌消炎及抗肿瘤等功效，而最新的研究表明补血草属植物还具有保肝、抗病毒、抑制α－葡萄糖苷酶等药理活性。补血草属植物化学成分的研究是近年来的热点，主要有中华补血草化学成分的研究、黄花补血草挥发性化学成分研究、二色补血草化合物含量测定以及化合物提取工艺的研究等。目前，尚无相关烟台补血草化学成分及其药理活性的文献报道，也未见与本发明中的烟台补血草提取物制备方法、用途有关的报道。

发明内容

[0004] 发明所要解决的技术问题的目的在于克服上述不足之处，研究设计烟台补血草提取物及其提取分离方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。

[0005] 本发明的目的之一是，提供一种从烟台补血草中提取具有抗肿瘤作用的有效部位。

[0006] 本发明的目的之二是，提供一种简单的制备方法提取得到烟台补血草中具有抗肿瘤作用的提取物。

[0007] 本发明的目的之三是，提供一种以所说部位为有效成分的药物组合物。

[0008] 本发明的目的之四是，提供所说有效部位在制备抗肿瘤及相关药物中的应用。

[0009] 本发明的技术方案如下：

[0010] 烟台补血草抗肿瘤有效组分提取物，它是烟台补血草全草干燥后粉碎，加入95%乙醇浸提三次，合并提取液，减压浓缩，滤液蒸去乙醇后，加蒸馏水搅拌均匀成悬浮液，水层按照极性由小到大的顺序，先后用环己烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。将环己烷、乙酸乙酯、正丁醇及水萃取物分别减压浓缩回收溶剂后，得到四个部位烟台补血草抗肿瘤有效组分提取物。

[0011] 一种制备上述的烟台补血草抗肿瘤有效组分提取物的方法，它包括以下步骤：

[0012] （1）烟台补血草为原料，药材烟台补血草干燥后粉碎，加入95%乙醇均匀搅拌，静置24h，重复三次，过滤，合并得到提取液。

[0013] （2）步骤（1）的提取液浓缩去除乙醇后，得到总浸膏，加2-5倍体积水搅拌成悬浮液，将水提液与环己烷体积比 1:1 进行萃取，萃取三次，合并环己烷萃取液。回收环己烷， 40℃真空干燥机干燥，得到环己烷部位。

[0014] （3）将环己烷萃取后的水层与乙酸乙酯体积比 1:1进行萃取，萃取三次，合并萃取液。回收乙酸乙酯，30℃真空干燥机干燥，得到乙酸乙酯部位。

[0015] （4）将已经过环己烷和乙酸乙酯萃取过的水层溶液与正丁醇体积比1:1 进行萃取，萃取三次，合并萃取液。回收正丁醇，60℃真空干燥机干燥，得到正丁醇部位。

[0016] （5）将水提取物采用冷冻干燥的方法浓缩干燥，得到水部位。以上四个极性部位即为烟台补血草有效组分提取物。

[0017] 本发明进一步提供了烟台补血草抗肿瘤有效部位提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。以人白血病细胞株 HL-60 及K562、人肝癌细胞株 HepG2、人肺腺癌细胞株 A549、人乳腺癌细胞MCF-7、人子宫颈癌细胞株Hela为检测瘤株，以抑制肿瘤细胞增殖能力为活性指标进行抗肿瘤活性实验。实验结果表明，在体外细胞毒实验中，四个部位可以抑制肿瘤细胞的增殖，具有细胞毒作用，乙酸乙酯部位表现更好的抗肿瘤活性。并且，环己烷部位和水部位表现为对人白血病细胞株HL-60很好的诱导分化的活性，可用于制备抗肿瘤治疗药物。

[0018] 本发明还提供了以所述方法制备的有效部位的药物组合物。所述药物组合物是以本发明的有效部位为有效成分，与药学上可接受的载体所组成，并以适合药用的制剂形式存在，这些制剂形式可以是片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、缓释片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂、口服液、合剂、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、滴丸剂和贴剂等。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

[0019] 有益效果

[0020] （1）本发明的优点和效果在于采用溶剂提取、萃取等常规方法，首次发现烟台补血草环己烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位及水部位具有抗肿瘤活性，该有效组分经实验证明具有体外抑制肿瘤细胞生长的活性。

[0021] （2）本发明首次发现烟台补血草的环己烷部位和水部位具有诱导人白血病细胞HL-60细胞分化的活性，适宜开发成抗白血病中药新药。

[0022] （3）本发明拓展了抗肿瘤药物的原料渠道，扩大了烟台补血草的用途，使烟台补血草发展成为抗肿瘤药物的新原料，可显著提高烟台补血草的药用价值。附图说明

[0023] 图1是烟台补血草提取物抗肿瘤活性实验IC50值（µg/mL）的示意图。

[0024] 图2是瑞氏染色观察烟台补血草提取物对HL-60细胞分化影响的示意图。

具体实施方式

[0025] 以下所列实施有助于本领域技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

[0026] 实施例1：烟台补血草抗肿瘤有效部位提取物的制备

[0027] 将烟台补血草全草干燥粉碎，取混合物1500g，加入8-10倍量的95%乙醇浸泡2-3天，萃取醇溶性成分，重复三次，合并3次提取液，30℃ 40℃减压回收乙醇至无醇味，得到总~浸膏，加蒸馏水搅拌均匀成悬浮液，装入分液漏斗中，加等体积的环己烷萃取三次，合并环己烷萃取液，减压回收，40℃真空干燥机干燥至恒重，得到环己烷部位。剩下的水液减压除去残留的环己烷后，用等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收，30℃真空干燥机干燥至恒重，得到乙酸乙酯部位。剩下的水层溶液减压除去残留的乙酸乙酯后，用等体积的正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，减压回收，60℃真空干燥机干燥至恒重，得到正丁醇部位。最后将水提取物采用冷冻干燥的方法浓缩干燥，得到水部位。

[0028] 实施例2：烟台补血草提取物抗肿瘤活性的研究

[0029] 以实施例1得到的烟台补血草抗肿瘤有效部位提取物为受试药物，取处于对数生长期的多种肿瘤细胞（采用的肿瘤细胞株有如下几种：人白血病细胞株HL-60及K562、人肝癌细胞株HepG2、人肺腺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞MCF-7、人子宫颈癌细胞株Hela），用含 10%小牛血清的 RPMI-1640 完全培养液调节细胞浓度，每孔 8000 个细胞 180μL 接种于
96 孔细胞培养板中，置 37℃、5%CO2 培养箱中过夜,次日加药。将不同提取部位的样品溶液配制成初始浓度为 1mg/mL的母液，对倍稀释，每孔加入稀释好的药物 20μL，以 PBS 为阴性对照。加样培养 72h 后,每孔加入5mg/mL的 MTT 20μL，继续培养 4 h，然后快速翻板法弃去孔内液体,每孔加 100μL 的 DMSO,振荡 10min，于酶标仪上 570nm 波长处检测各孔的 OD 值，并使用GraphPad Prism 软件计算各提取部位的 IC50 值。结果见表1。由结果可知，烟台补血草提取物四个部位具有良好的肿瘤抑制效果，以乙酸乙酯部位抗肿瘤效果最明显。

[0030] 实施例3：烟台补血草提取物对急性髓系白血病HL-60细胞诱导分化的影响[0031] 以实施例1得到的烟台补血草抗肿瘤有效部位提取物为受试药物，用终浓度25μg/mL的不同部位提取物处理处于对数生长期的 HL-60 细胞，以 5×104个/mL细胞浓度铺于 24 孔板，置 37℃、5%CO2培养箱中培养 5d，收集各组细胞，涂片，瑞氏染色，显微镜下观察细胞形态并照相，观察细胞大小、核浆比、细胞核形状、胞浆染色等特点。结果表明，烟台补血草四个部位的提取物处理白血病 HL-60 细胞5d 后，光镜下观察细胞形态学发生明显变化（见图2 ）。表现为核染色质浓缩，核浆比例降低，核偏于一侧，有凹陷和分叶，细胞向成熟阶段分化，尤其以环己烷部位和乙酸乙酯部位最为明显，说明烟台补血草提取物对 HL-60 细胞均有一定的诱导分化的能力。因此，烟台补血草提取物可以用于制备抗肿瘤的药物，尤其可以作为诱导分化剂用于白血病的治疗。

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