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用于治疗干眼症的含有瑞巴派特的新型滴眼剂组合物及其增溶和稳定化方法

阅读：827发布：2020-05-08

专利汇可以提供用于治疗干眼症的含有瑞巴派特的新型滴眼剂组合物及其增溶和稳定化方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及一种用于治疗干眼症的滴眼剂组合物及其制备方法，其特征在于，将难溶性化合物瑞巴派特进行增溶，使其在储存过程中保持稳定而不会发生沉淀，并且含有用作滴眼剂的安全成分。本发明的用于治疗干眼症的滴眼剂组合物的特征在于，含有用于增溶瑞巴派特的碱，并且含有用于保持过饱和稳定状态的稳定剂、用于保持生物相容的pH 7至pH 8的特定种类的缓冲剂和渗透压调节剂。制备方法包括以下步骤：在瑞巴派特或其药学上可接受的盐和稳定剂中添加碱并溶解在水中，获得pH为10～11的水溶液滴眼液；在所述滴眼液中添加缓冲剂和选自非离子型渗透压调节剂中的至少一种渗透压调节剂并溶解，并用酸调节pH至7～8；然后用针式过滤器进行过滤，制成无菌性。所制备的滴眼剂为水溶液状态，在冷冻、冷藏和室温下保持稳定，并且包含干眼症治疗剂，所述干眼症治疗剂在冷冻和室温下、冷藏和室温下交叉储存时也保持稳定。，下面是用于治疗干眼症的含有瑞巴派特的新型滴眼剂组合物及其增溶和稳定化方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种用于治疗干眼症的瑞巴派特滴眼剂组合物的增溶和稳定化方法，其特征在于，含有瑞巴派特作为有效成分的滴眼液的制备方法包括以下步骤：
(a)在瑞巴派特或其药学上可接受的盐和选自至少一种水溶性纤维素衍生物中的稳定剂中添加碱并溶解在水中，获得pH为10～11的水溶液滴眼液，其中所述纤维素衍生物选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素和羟乙基纤维素等；
(b)添加选自氨基己酸或氨基己酸和硼酸中的任一种缓冲剂和选自非离子型渗透压调节剂中的至少一种渗透压调节剂并溶解，并用酸调节pH至7～8，其中所述非离子型渗透压调节剂包括山梨醇、甘露醇、葡萄糖、蔗糖和甘油；
(c)将所述步骤(b)中获得的透明溶液用针式过滤器进行过滤，制成无菌性。
2.根据权利要求1所述的用于治疗干眼症的瑞巴派特滴眼剂组合物的增溶和稳定化方法，其特征在于，将所述瑞巴派特增溶至0.5～2.0w/v％的浓度的无色透明状态。
3.根据权利要求1所述的用于治疗干眼症的瑞巴派特滴眼剂组合物的增溶和稳定化方法，其特征在于，所述稳定剂的浓度为0.2～0.9w/v％。
4.根据权利要求1所述的用于治疗干眼症的瑞巴派特滴眼剂组合物的增溶和稳定化方法，其特征在于，所述缓冲剂的浓度为0.05～0.5w/v％。
5.根据权利要求4所述的用于治疗干眼症的瑞巴派特滴眼剂组合物的增溶和稳定化方法，其特征在于，所述缓冲剂的浓度为0.2～0.4％w/v％。
6.根据权利要求1所述的用于治疗干眼症的瑞巴派特滴眼剂组合物的增溶和稳定化方法，其特征在于，滴眼用水溶液的渗透压为100～300mOsm。
7.根据权利要求6所述的用于治疗干眼症的瑞巴派特滴眼剂组合物的增溶和稳定化方法，其特征在于，滴眼用水溶液的渗透压为130～250mOsm。
8.一种用于治疗干眼症的滴眼剂水溶液组合物，其特征在于，所述滴眼剂水溶液组合物通过权利要求1至7所述的方法制备，所述滴眼剂水溶液组合物的pH为7～8，所述滴眼剂水溶液组合物含有瑞巴派特或其药学上可接受的盐、稳定剂、缓冲剂和渗透压调节剂，其中，所述稳定剂选自至少一种纤维素衍生物，所述纤维素衍生物选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素和羟乙基纤维素等；
所述缓冲剂为选自氨基己酸或氨基己酸和硼酸的混合物中的任一种；
所述渗透压调节剂为选自包括山梨醇、甘露醇、葡萄糖、蔗糖和甘油的非离子型渗透压调节剂中的至少一种。

说明书全文

用于治疗干眼症的含有瑞巴派特的新型滴眼剂组合物及其增

溶和稳定化方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种用于治疗干眼症的滴眼剂水溶液的制备及其组合物，其中将瑞巴派特稳定地增溶，并且含有对人体安全的添加剂成分，具有优异的治疗效果。

[0002] 通过利用本发明的水溶液，可以提供以治疗干眼症为目的的滴眼剂组合物。

[0003] 完全是水溶液状态的滴眼液具有高生物利用率，使用者无抗拒心理且使用便利，并且在无菌制备和质量控制方面经济且高效。

[0004] 滴眼液由于其制剂的特性，在制备后的配送和使用方面有各种储存形式，例如冷藏、室温和高温条件等。

[0005] 因此，在这些各种条件下，确保稳定性的关键在于保持作为最初设定的质量状态的溶液状态。

[0006] 此外，对于确保长期使用的安全性，重要的是使用在滴眼剂的实际施用途径中安全的添加剂进行制备。

[0007] 因此，本发明人将难溶性瑞巴派特增溶至足够高的浓度水平，并使用适合于滴眼剂施用途径的安全的添加剂，从而制备出长时间具有稳定的理化性质的新型滴眼剂水溶液。

背景技术

[0008] 韩国的干眼症患者每年都在增加，从2004年的110万名增加到2014年的214万名，呈增加趋势，因此许多患者在日常生活中感到不便，生活质量降低，严重时遭受视力受损的痛苦。

[0009] 干眼症的病因有很多种，但治疗剂有限。

[0010] 市售的干眼症治疗剂有作为免疫抑制剂的环孢菌素、促进黏液分泌的地夸磷索钠和瑞巴派特、防止眼睛干燥并促进上皮细胞的治愈的透明质酸滴眼液等。

[0011] 其中，已知瑞巴派特促进黏蛋白并分泌黏液而对干眼症有效，目前在日本以UD 2％悬浮滴眼液进行售卖。

[0012] 该产品为制成白色悬浮剂的产品，具有悬浮剂引起的副作用，例如灼热感、刺痛感和视线模糊现象等。

[0013] 此外，在制备方面，与溶液状态的制剂相比，无法进行过滤灭菌或蒸汽灭菌，因此灭菌所需的工艺设计变得复杂，并且在无菌性的质量控制和保证方面存在许多困难。

[0014] 为了克服上述问题，需要开发一种安全且有效的溶液状态的新型滴眼液。

[0015] 作为涉及这种溶液状态的滴眼液的现有文献，最先开发瑞巴派特滴眼剂的大冢制药公司的韩国授权专利第100281865号(2000年11月22日)中记载了制成溶液状态，但是其中记载了使用额外的溶解添加剂，并且该滴眼液的pH为8.3～9.3，因此在施用滴眼剂时可能会引起刺激感和黏膜损伤。

[0016] 常规滴眼剂的pH优选不超过8，与体液相同的pH 7至pH 8范围是生物相容的。

[0017] 瑞巴派特几乎不溶于水，当pH越升高至碱性，则溶解度增加而易于溶解。

[0018] 但是，当pH降低至生物体的pH范围时，在碱性条件下增溶的瑞巴派特的溶解度急剧减小而发生沉淀。

[0019] 国际公开专利公报WO2008/074853(2008年06月26日公开)号中公开了一种组合物，其中作为粘度增强剂使用羟丙基甲基纤维素，作为等渗剂使用二醇类，作为缓冲剂使用无机盐，以保持含有瑞巴派特的水溶液的稳定性。

[0020] 但是，所述文献的组合物同样存在在弱碱性条件下溶解并长时间放置时形成沉淀物的问题。

[0021] 韩国公开专利第2011-27786(2011年03月16日公开)号中记载了通过利用氨基酸和作为溶解助剂的聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇等制备的水溶液状态的滴眼液组合物，但是该主要添加剂聚乙二醇难以用作滴眼剂。

[0022] 聚乙二醇通常用于增溶难溶性物质，但是用于滴眼用途时，会对眼睛黏膜产生刺激感，并且仅可以使用少量，在安全性方面，优选不使用聚乙二醇。

[0023] 特别地，在如干眼症等的容易复发并需要长期使用的制剂中，优选不使用聚乙二醇。

[0024] 为了使这种副作用最小化，韩国授权专利第101718733(2017年03月16日授权)号中公开了一种制备方法，其中将瑞巴派特与碱一同溶解在水中，pH为8.5以上，然后作为再结晶抑制剂利用环糊精类来包合瑞巴派特，以保持透明溶液状态而进行增溶。

[0025] USP中环糊精被记载为螯合剂(Sequestering Agent)。

[0026] 但是，环糊精类还未被美国和韩国的监管机构批准用作滴眼剂的添加剂，其仅在欧洲使用。

[0027] 在欧洲FDA中，对眼睛的环糊精的剂量的安全性还不为人所知。

[0028] 据记载，欧洲FDA批准的产品扶他林(voltaren)中使用羟丙基-γ-环糊精(hydroxypropylgamma-cyclodextrin)且使用的含量为2％，产品吲哚美辛(Indocid)中使用2-羟丙基-β-环糊精(2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin)作为主要成分并使用以摩尔比计为25倍的环糊精(cyclodextrin)，即主要成分为0.1％时，使用4.3％的环糊精(参考US08/706,268)。

[0029] 但是，Jansen T等在文献中指出环糊精类为5％以上时对角膜诱发毒性，因此不适合用于眼科用制剂(Lens Eye Toxic Res.1990；7(3-4):459-68)。

[0030] 所述授权专利中记载了环糊精的使用量是主要成分的1.5～6倍，使用3％～12％。

[0031] 对此，由于没有3％以上的环糊精类用作药物赋形剂的数据，因此需要提供额外的毒性数据。

[0032] 此外，在实施例中也是制成pH为8以上，因此可知依然存在生物相容性问题。

[0033] 该发明公开了水溶液状态的滴眼液，但是该水溶液状态的稳定性试验中对部分条件仅在有限时间内进行了试验，因此难以被评价为其实现了完全的溶液状态的稳定化。

[0034] 因此，需要从该发明开发一种足够安全稳定的滴眼用水溶液。

[0035] 此外，韩国公开专利公报第2017-0039347号(2017年04月11日公开)中也记载了利用环糊精类和氨基酸的水溶液滴眼剂组合物，但存在与上述专利相同的问题。

[0036] 本发明人发现将难溶性瑞巴派特进行增溶后调节至生物相容的pH范围时纤维素衍生物也能够保持长期稳定的状态，因此选择纤维素衍生物类作为稳定剂，由此完成了本发明，所述纤维素衍生物安全且适用于滴眼剂。

[0037] 此外，本发明人发现用作缓冲剂的各种物质中氨基己酸在防止主要成分沉淀的方面具有与稳定剂协同抑制的特性，因此选择所述氨基己酸并用于本发明以进一步提高制剂的稳定性。

[0038] 氨基己酸是具有抗炎效果的化合物，作为滴眼剂的最少使用量是将10mg/ml的药物每天施用5～6次，每次施用2～3滴。

[0039] 已知氨基己酸是具有缓冲剂功能的添加剂，当以滴眼用药物的最少使用量的1/5以内使用时，完全没有安全性问题，韩国食品药品管理局也公布了这一事实。

[0040] 滴眼剂由于其制剂的特性，使用者通常冷藏储存，并且季节性地暴露在冬天和夏天等温差很大的温度条件下。

[0041] 在这些条件下，确保滴眼剂的理化安全性是非常重要的，特别是使难溶性药物增溶时是更加重要的。

[0042] 因此，本发明中开发成完全是滴眼用水溶液的状态，从而制备出在冷藏、室温、加速和交叉储存时均稳定的组合物。

[0043] 本发明的制剂在实际配送和使用环境中可暴露的各种储存条件下也具有稳定的理化性质，因此能够克服发生沉淀等不稳定性。

[0044] [现有技术文献]

[0045] [专利文献]

[0046] (专利文献1)KR100281865B

[0047] (专利文献2)WO2008074853A

[0048] (专利文献3)KR1020110027786A

[0049] (专利文献4)KR101718733B

[0050] (专利文献5)KR1020170039347B

[0051] [非专利文献]

[0052] (文献1)Lens Eye Toxic Res.1990；7(3-4):459-68.

发明内容

[0053] 要解决的技术问题

[0054] 本发明涉及一种水溶液状态的滴眼剂，所述滴眼剂中使施用现有的瑞巴派特悬浮剂和溶液制剂时产生的副作用最小化并具有提高的生物利用率，本发明的目的在于提供一种滴眼剂组合物及其增溶和稳定化方法，所述滴眼剂组合物在各种储存条件下长期保持稳定而不会发生沉淀，使用可用作滴眼剂的安全的添加剂，并且显示出生物相容的pH范围。

[0055] 本发明的目的在于通过所述制剂技术提供一种用于治疗干眼症的有效的制剂。

[0056] 技术方案

[0057] 为了解决上述现有技术中的问题，本发明中不使用额外的增溶剂或溶解助剂，而是使用用于增溶瑞巴派特的碱性物质调节水溶液的pH至10～11，将瑞巴派特溶解为水溶液状态，并使用对人体无害的稳定剂、缓冲剂和非离子型渗透压调节剂，从而完成了本发明。

[0058] 本发明的药理成分瑞巴派特的浓度优选为0.5～2.0w/v％，更优选为1.0～1.5w/v％。

[0059] 所述瑞巴派特的浓度小于0.5w/v％时，其药效会降低，所述瑞巴派特的浓度超过2.0w/v％时，可能会生成晶体，导致稳定性降低，并且其药效的协同效应也微乎其微。

[0060] 所述碱性物质通常具有强碱性的OH基团，当使用这些碱性物质时，使用少量也能够有效地实现增溶，并且NaOH、KOH等可以用于滴眼剂。

[0061] 本发明的特征在于，含有用于调节增溶的瑞巴派特的pH至生物水平而使其稳定化的添加剂，并且使用现有的各种稳定剂中对人体无害且具有水溶性或水溶胀性的选自黄原胶、聚维酮、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素和羧甲基纤维素等中的一种以上。

[0062] 优选地，由选自作为纤维素衍生物的羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素和羧甲基纤维素中的一种以上组成。

[0063] 所述稳定剂的使用浓度为0.1～1.0w/v％，优选为0.4～0.6w/v％。

[0064] 所述稳定剂的使用浓度小于0.1w/v％时，可能会生成晶体，所述稳定剂的使用浓度超过1.0w/v％时，可能会产生副作用。

[0065] 缓冲剂起到将瑞巴派特以增溶状态在生物相容的pH范围储存时能够保持的功能，在各种缓冲剂中，可以单独使用氨基己酸或混合使用氨基己酸和硼酸，所述缓冲剂的使用浓度为0.1～1.0w/v％，优选为0.2～0.5w/v％。

[0066] 所述缓冲剂的使用浓度小于0.1w/v％时，会发生结晶化，所述缓冲剂的使用浓度超过1.0w/v％时，可能会对人体产生副作用。

[0067] 使用所述稳定剂和缓冲剂是因为本发明人发现各种稳定剂和缓冲剂的上述成分的组合对瑞巴派特的稳定化最有效，由此完成了本发明。

[0068] 渗透压调节剂用于调节滴眼剂的渗透压，其特征在于，为了调节渗透性，可以使用常规的渗透压调节剂，但原则上特别是排除离子型的NaCl和KCl等，优选使用选自包括山梨醇、甘露醇、葡萄糖、蔗糖和甘油等的非离子型渗透压调节剂中的至少一种。

[0069] 本发明人发现使用大量的NaCl和KCl等电解质型渗透压调节剂时，在储存过程中与瑞巴派特形成盐而容易形成沉淀物，因此排除使用该渗透压调节剂。

[0070] 所述渗透压调节剂的浓度为0.5～10.0w/v％，优选为1.0～4.0w/v％。

[0071] 所述渗透压调节剂的浓度小于0.5w/v％时，渗透压过低，可能会对黏膜产生副作用，所述渗透压调节剂的浓度超过10.0w/v％时，渗透压过高，导致药物的吸收力降低，并且可能会对人体产生副作用。

[0072] 最终，添加主要成分、稳定剂、缓冲剂、渗透压调节剂和碱性物质，在pH 10至pH 11下进行增溶，并添加适量的酸调节pH，以成为生物相容的范围pH 7至pH 8。

[0073] 在增溶时，当pH小于10时，瑞巴派特难以完全溶解，当pH超过11时，由于使用过多的碱性物质，会发生中和等问题，当最终产品的pH小于7时，由于显示弱酸性，会导致生物不相容，当最终产品的pH超过8时，会对黏膜诱发疼痛或使细胞受损。

[0074] 此时，可使用的碱性物质优选为NaOH和KOH，作为酸使用盐酸、柠檬酸、酒石酸和琥珀酸等药学上可接受的无机酸和有机酸，并且酸是浓度为1M的溶液，所使用的酸少于0.5％(v/v)。

[0075] 本发明中，缓冲剂和渗透压调节剂加在一起的浓度的特征在于，滴眼用水溶液的总渗透压为100～300mOsm，优选为130～250mOsm。

[0076] 通过上述方法制备，本发明人能够得到生物相容的水溶液状态的滴眼液组合物，该组合物对人体具有高稳定性，并且具有优异的储存稳定性。

[0077] 本发明的用于增溶和稳定化的制备方法大致由以下两个步骤构成：(a)在瑞巴派特或其药学上可接受的盐和稳定剂中添加碱并溶解在水中，获得pH为10～11的溶液；以及(b)添加缓冲剂和渗透压调节剂并溶解，并用酸调节pH至7～8。

[0078] 之后，可以适当添加用于灭菌的过滤等工艺。

[0079] 使用诱发干眼症的小鼠，将根据上述步骤制备的水溶液与用作干眼症治疗剂的代表性药物进行比较。

[0080] 本发明提供一种根据本发明进行增溶的用于治疗干眼症的滴眼剂。

[0081] 有益效果

[0082] 本发明中使施用瑞巴派特溶液制剂时产生的副作用最小化，并且在各种储存条件下也能在生物相容的pH范围内长期保持稳定而不会发生沉淀。

[0083] 此外，本发明能够容易且经济地制备用于治疗干眼症的有效的溶液制剂而无需额外的添加剂。附图说明

[0084] 图1是比较例3、比较例8和实施例10的根据储存条件的经过8周后观察性状的结果。

[0085] 图2是示出在干眼症模型小鼠中确认本发明和对照组的泪液生成量结果的图表。

[0086] 图3是示出本发明和对照组的角膜表面弯曲度的图，其中示出与正常组相比的干燥胁迫组的在立体显微镜中反射的光纤环的形状。

[0087] 图4是示出在干眼症模型小鼠中确认本发明和对照组的角膜表面弯曲度的结果的图表。

[0088] 图5是示出在干眼症模型小鼠中的本发明和阳性对照组的黏蛋白染色(Mucin staining)形状的图。

[0089] 图6是示出对干眼症模型小鼠中的本发明和阳性对照组的黏蛋白染色进行分析的图表。

具体实施方式

[0090] 以下，通过实施例和试验例对本发明进行更详细的说明。

[0091] 但是，下述实施例和试验例仅用于例示本发明，本发明的范围并不限定于此。

[0092] [比较例1至比较例8]稳定剂对瑞巴派特的增溶的影响

[0093] [表1]

[0094]

[0095]

[0096] *羟丙甲纤维素：羟丙基甲基纤维素

[0097] 1)在85ml的蒸馏水中添加对应于各个比较例的稳定剂并搅拌溶解，然后添加主要成分瑞巴派特并搅拌使其悬浮。

[0098] 2)在所述1)的溶液中在搅拌下滴加对应于各个比较例的作为增溶剂的1N NaOH溶液，调节pH至10～11，使主要成分全部溶解。

[0099] 3)在所述2)中获得的透明溶液中滴加作为pH调节剂的1N HCl溶液，调节pH至7～8的范围。此时，渗透压为70～90mOsmol/kg。

[0100] 4)在所述3)中获得的透明溶液中添加蒸馏水，使制备的总体积为100ml。

[0101] [试验例1]比较例1至比较例7的性状变化

[0102] 在制备的比较例1和比较例2的情况下，在制备过程中药物先增溶，然后在调节pH时主要成分和聚合物形成沉淀，因此无法增溶。

[0103] 另一方面，比较例3至比较例7的溶液是制成与瑞巴派特在水中的溶解度(约0.025mg/ml)相比显著增加600倍以上的溶液状态，表2中示出比较例3至比较例7的性状变化。

[0104] [表2]

[0105]比较例性状评价(在25℃下储存)
比较例1 在制备时药物沉淀，因此无法制备
比较例2 在制备时析出聚合物，因此无法制备
比较例3 在储存过程中，经过16天时形成沉淀
比较例4 在储存过程中，经过14天时形成沉淀
比较例5 在储存过程中，经过13天时形成沉淀
比较例6 在储存过程中，经过7天时形成沉淀
比较例7 在储存过程中，经过9天时形成沉淀

[0106] 如表2所示，可知纤维素衍生物是最优异的稳定剂。

[0107] [比较例8至比较例11和实施例1至实施例8]通过增溶瑞巴派特制备1.5％的滴眼液

[0108] [表3]

[0109]

[0110]

[0111] 1)在85ml的蒸馏水中添加对应于各个实施例的稳定剂并搅拌溶解，然后添加对应于各个比较例和实施例的主要成分瑞巴派特并搅拌使其悬浮。

[0112] 2)在所述1)的溶液中在搅拌下滴加作为增溶剂的1N NaOH溶液，调节pH至10～11，使主要成分全部溶解。

[0113] 3)在所述2)的溶液中添加对应于各个比较例和实施例的缓冲剂并搅拌使其全部溶解。

[0114] 4)在所述3)的溶液中添加对应于各个比较例和实施例的渗透压调节剂并搅拌，调节至280～300mOsmol/kg，使其与体液等渗。

[0115] 5)在所述4)中获得的透明溶液中滴加对应于各个比较例和实施例的作为pH调节剂的1N HCl溶液，调节pH至7～8。

[0116] 6)在所述5)中获得的透明溶液中添加蒸馏水，使总体积为100ml，获得透明溶液。

[0117] 7)将所述4)中获得的透明溶液用孔径为0.2μm的针式过滤器进行过滤，制成无菌性。

[0118] 如上制备的比较例8至比较例11和实施例1至实施例8的溶液在制备时可以制成澄清透明的水溶液状态，并且可以通过使用缓冲剂和渗透压调节剂调节至可用作滴眼液的pH和渗透压的范围，因此制成稳定的溶液状态。

[0119] [试验例2]比较例8至比较例11和实施例1至实施例8的性状、pH和含量的变化[0120] 表4中示出比较例8至比较例11和实施例1至实施例8的pH变化和含量变化。

[0121] 进行性状评价的实施例的水溶液在25℃下储存4周(试验时间)时，均没有确认到明显的pH变化。

[0122] 此外，实施例1至实施例8在5周内没有明显的含量变化，并且保持稳定的状态而没有发生沉淀。

[0123] [表4]

[0124]

[0125] 如表4所示，可知通过作为缓冲剂使用氨基己酸，并且作为渗透压调节剂使用非离子型化合物，能够保持长期的稳定性。

[0126] [实施例9至实施例18]通过增溶瑞巴派特制备1.5％的滴眼液

[0127] [表5]

[0128]

[0129]

[0130] 1)在85ml的蒸馏水中添加对应于各个实施例的稳定剂并搅拌溶解，然后添加主要成分瑞巴派特并搅拌使其悬浮。

[0131] 2)在所述1)的溶液中在搅拌下滴加作为增溶剂的1N NaOH溶液，调节pH至10～11，使主要成分全部溶解。

[0132] 3)在所述2)的溶液中添加对应于各个实施例的缓冲剂并搅拌使其全部溶解。

[0133] 4)在所述3)的溶液中添加对应于各个实施例的渗透压调节剂并搅拌，调节至可用作滴眼剂的范围的低渗的220～240mOsmol/kg。

[0134] 5)在所述4)中获得的透明溶液中滴加对应于各个实施例的作为pH调节剂的1N HCl溶液，调节pH至7～8。

[0135] 6)在所述5)中获得的透明溶液中添加蒸馏水，使总体积为100ml，获得透明溶液。

[0136] 7)将所述4)中获得的透明溶液用孔径为0.2μm的针式过滤器进行过滤，制成无菌性。

[0137] 如上制备的实施例9至实施例18的溶液在制备时可以制成澄清透明的水溶液状态。

[0138] 实施例9至实施例18的性状评价如下进行：通过在4℃、25℃、40℃下储存和交叉储存试验记录溶液首次发生沉淀的时间。

[0139] 交叉储存试验如下进行：以每天2次的方式在上午和下午在4℃/常温下交替储存，并观察和记录了沉淀物的形成。

[0140] 其结果，确认了在上述所有储存条件下最少14周以上保持稳定的溶液状态而没有发生沉淀。

[0141] [试验例3]实施例9至实施例18的pH变化和含量变化

[0142] 表6中示出实施例9至实施例18在4℃、25℃、40℃下储存和交叉储存时的pH变化和观察性状的结果以及在25℃和40℃下储存过程中的水溶液的含量变化。

[0143] 实施例9至实施例18在12周内在所有储存条件下没有明显的pH变化和含量变化，并且在15周内在所有储存条件下具有稳定的理化性质。

[0144] [表6]

[0145]

[0146] 如表6所示，作为缓冲剂混合使用硼酸和氨基己酸也显示出相同的效果，并且保持了长期的稳定性。

[0147] [实施例19至实施例22]通过增溶瑞巴派特制备1.5％的滴眼液

[0148] [表7]

[0149]

[0150]

[0151] 1)在85ml的蒸馏水中添加稳定剂并搅拌溶解，然后添加主要成分瑞巴派特并搅拌使其悬浮。

[0152] 2)在所述1)的溶液中在搅拌下滴加作为增溶剂的1N NaOH溶液，调节pH至10～11，使主要成分全部溶解。

[0153] 3)在所述2)的溶液中添加对应于各个实施例的缓冲剂并搅拌使其全部溶解。

[0154] 4)在所述3)的溶液中添加对应于各个实施例的渗透压调节剂并搅拌，调节至低渗的170～190mOsmol/kg。

[0155] 5)在所述4)中获得的透明溶液中滴加对应于各个实施例的作为pH调节剂的1N HCl溶液，调节pH至7～8。

[0156] 6)在所述5)中获得的透明溶液中添加蒸馏水，使总体积为100ml，获得透明溶液。

[0157] 7)将所述4)中获得的透明溶液用孔径为0.2μm的针式过滤器进行过滤，制成无菌性。

[0158] 如上制备的实施例19至实施例22的溶液在制备时可以制成澄清透明的水溶液状态。

[0159] 实施例19至实施例22的性状评价如下进行：通过在4℃、25℃、40℃下储存和交叉储存试验记录溶液首次发生沉淀的时间。

[0160] 其结果，确认了在上述所有储存条件下最少15周以上保持稳定的溶液状态而没有发生沉淀。

[0161] [试验例4]实施例19至实施例22的pH变化和含量变化

[0162] 表8中示出实施例19至实施例22在4℃、25℃、40℃下储存和交叉储存时的pH变化和观察性状的结果以及在25℃和40℃下储存过程中的水溶液的含量变化。

[0163] 实施例19至实施例22在4周内在所有储存条件下没有明显的pH变化和含量变化，并且最少在8周内在所有储存条件下具有稳定的理化性质。

[0164] [表8]

[0165]

[0166] 根据以上的试验结果，本发明的组合物在最少15周以上的储存期间也具有稳定的理化性质，而比较例无法保持溶液状态4周以上，图1示出观察性状的结果。

[0167] [试验例5]在干眼症模型中的1％和1.5％的瑞巴派特水溶液的效果[0168] 对诱发干眼症的小鼠施用根据实施例2的方法制备的1％和1.5％的瑞巴派特水溶液和阳性对照组并确认功效，其中1％的瑞巴派特水溶液是每天施用6次，1.5％的瑞巴派特水溶液是每天施用4次。

[0169] 从杰克逊实验室(Jackson Laboratory)购买6～8周龄的NOD.B10-H2b小鼠(mouse)后进行饲育，以12周龄以上的小鼠为对象进行10天的干燥胁迫。

[0170] 干燥胁迫如下进行：以每天4次(上午8点、下午11点、2点、5点)的频率将0.5mg/0.2ml的氢溴酸东莨菪碱(scopolamine hydrobromide)皮下注射到大腿部位，并将饲育环境保持在40％以下的湿度。

[0171] 经过10天后，测定泪液生成量和角膜表面的弯曲度，仅以患有干眼症的小鼠模型为对象进行之后的试验。

[0172] 与正常组(0.215±0.028μl)相比，在干燥胁迫组(0.034±0.016μl)中泪液生成量显著减少(参考图2)。

[0173] 去除干燥胁迫后，在溶媒组(vehicle)(0.124±0.021μl)、环孢菌素A(cyclosporine A)(0.143±0.044μl)处理组、瑞巴派特(rebamipide)1.5％(4次；0.21±0.036μl)处理组、Mucosta(0.244±0.033μl)处理组、地夸磷索(diquafosol)(0.249±
0.027μl)处理组和瑞巴派特1.0％(6次；0.251±0.051μl)处理组中，在第10天泪液生成量分别增加3.7倍、4.2倍、6.2倍、7.2倍、7.4倍和7.5倍。

[0174] 与环孢菌素A处理组相比，在瑞巴派特1.0％(6次)处理组和瑞巴派特1.5％(4次)处理组中观察到泪液生成量显著增加，并且泪液生成量增加到与Mucosta处理组和地夸磷索处理组相似的水平。

[0175] 此外，在瑞巴派特1.0％(6次)处理组和瑞巴派特1.5％(4次)处理组中观察到泪液生成量没有显示出显著的差异。

[0176] 对于角膜表面的弯曲度，与正常组相比，在干燥胁迫组中观察到在立体显微镜中反射的光纤环的形状严重变形(参考图3)。

[0177] 干燥胁迫之后，在作为试验组的瑞巴派特1.0％(6次)处理组和瑞巴派特1.5％(4次)处理组以及作为对照药物组的Mucosta处理组中观察到在第10天光纤环的变形得到改善。

[0178] 对于角膜表面的弯曲度分数，与正常组(0.083±0.204分)相比，在干燥胁迫组(3.667±0.408分)中角膜表面的弯曲度增加(参考图4)。

[0179] 去除干燥胁迫后，在滴眼的第10天，在环孢菌素A(3.417±0.376分)处理组、溶媒组(3.25±0.274分)、地夸磷索(3.25±0.274分)处理组、瑞巴派特1.5％(4次；1.833±0.683分)处理组、Mucosta(1.667±0.516分)处理组和瑞巴派特1.0％(6次；1.5±0.775分)处理组中角膜表面的弯曲度分别改善6.8％、11.4％、11.4％、50％、54.5％和59.1％。

[0180] 此外，与环孢菌素A处理组和地夸磷索处理组相比，在瑞巴派特1.0％(6次)处理组和瑞巴派特1.5％(4次)处理组中观察到角膜表面的弯曲度得到改善，并且改善到与Mucosta处理组相似的水平。

[0181] 在瑞巴派特1.0％(6次)处理组和瑞巴派特1.5％(4次)处理组之间没有观察到显著的差异。

[0182] 在制作干眼症模型后，为了观察根据药物处理的小鼠结膜的黏蛋白分布，进行了黏蛋白染色(参考图5)。

[0183] 与正常组(17.429±2.726细胞(cells)/0.1mm2)相比，在干燥胁迫组(6.19±1.155细胞/0.1mm2)中观察到结膜的黏蛋白分布减少(图12)。

[0184] 与干燥胁迫组相比，在溶媒组(7.524±1.155细胞)/0.1mm2)、地夸磷索(8.571±0.99细胞/0.1mm2)处理组、环孢菌素A(18.952±1.35细胞/0.1mm2)处理组、Mucosta(19.905
2 2
±2.163细胞/0.1mm)处理组、瑞巴派特1.0％(6次；21.714±1.784细胞/0.1mm)处理组和瑞巴派特1.5％(4次；22.095±1.722细胞/0.1mm2)处理组中观察到结膜的黏蛋白分布分别增加1.2倍、1.4倍、3.1倍、3.2倍、3.5倍和3.6倍(参考图6)。

[0185] 此外，与地夸磷索处理组相比，在瑞巴派特1.0％(6次)处理组和瑞巴派特1.5％(4次)处理组中结膜的黏蛋白分布增加，并且增加到与Mucosta处理组和环孢菌素A处理组相似的水平。

[0186] 但是，在瑞巴派特1.0％(6次)处理组和瑞巴派特1.5％(4次)处理组之间没有显示出显著的差异。

[0187] 如上所述，本发明的水溶液制剂是有用的发明，与现有的滴眼液相比，本发明的水溶液制剂显示出提高的药效，并且可以提供易于制备且具有优异的稳定性的滴眼液。

[0188] 上述的详细描述仅用于例示本发明，其目的在于对本发明进行说明，而不是用于限定含义或限制权利要求书中记载的本发明的范围。因此，本技术领域的技术人员可以理解可进行各种变形和等同的其它实施例。因此，本发明的真正的技术保护范围是由权利要求书的技术思想所决定。

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