一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂及其制备方法和应用
专利汇可以提供一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂及其制备方法和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂及其制备方法和应用，本发明的菌剂是将粪肠球菌的 发酵 液经 喷雾干燥 制成发酵菌粉。本发明的防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂的制备方法，包括以下步骤将粪肠球菌依次经摇瓶培养、一级 种子 培养、二级种子培养和发酵培养后干燥，制得防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂。本发明的防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂的应用，是按配比将菌剂拌入 饲料 中，然后用该饲料投喂产生（ 治疗 ）或未产生（ 预防 ）白便池塘的凡纳滨对虾。本发明的粪肠球菌菌剂能显著抑制霍乱弧菌、迟缓爱德华菌、嗜 水 气单胞菌等病原菌的生长繁殖，具有广谱抑菌性，可以防治凡纳滨对虾白便病，防治效果达78%以上，效果显著。，下面是一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂及其制备方法和应用专利的具体信息内容。
1.一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂，其特征是：粪肠球菌（Enterococcus faecalis）的发酵菌粉。
2.根据权利要求1所述的一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂，其特征是：将粪肠球菌的发酵液经喷雾干燥制成发酵菌粉，即得所述的防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂。
3.一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂，其特征是：粪肠球菌的发酵菌液。
4.根据权利要求1-2任一所述的一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤将粪肠球菌依次经摇瓶培养、一级种子培养、二级种子培养和发酵培养后喷雾干燥，制得防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂；具体步骤为：
摇瓶培养：将经斜面活化的粪肠球菌菌株进行种子摇瓶培养，培养条件为：转速200-
230r/min，温度 32-37℃，培养 10-12 h；
一级种子培养：按10%的接种量将粪肠球菌活菌接种于一级种子培养基中，在30℃-37℃培养10-12h，制得一级种子培养液；
二级种子培养：按0.06%-0.2%的接种量将一级种子培养液接种于二级种子培养基中；
在30℃-38℃培养8-12h，制得二级种子培养液；
发酵培养:按3.75%-10%的接种量将二级种子培养液接种于粪肠球菌活菌发酵培养基中，至粪链球菌数量达到发酵水平时，结束发酵；
喷雾干燥：将上述发酵液经喷雾干燥制成发酵菌粉，制得防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂。
5.根据权利要求4所述的一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂的制备方法，其特征在于，所述摇瓶培养基为改良MRS培养基，按质量分数计，具体为：蛋白胨0.5-1.5%、酵母粉
0.5-1.0%、无水乙酸钠0.4-0.6%、磷酸氢二钾0.1-0.3%、柠檬酸二铵0.1-0.3%、硫酸镁0.04-
0.06%、硫酸锰0.01-0.03%、葡萄糖1-5%，其余为水，调节pH值为6.4-6.8。
6.根据权利要求4所述的一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂的制备方法，其特征在于，一级种子培养所用培养基按质量分数计，具体为:蛋白胨0.5-1.5%、酵母粉0.5-1.0%、无水乙酸钠0.4-0.6%、磷酸氢二钾0.1-0.3%、柠檬酸二铵0.1-0.3%、硫酸镁0.04-0.06%、硫酸锰0.01-0.03%、葡萄糖1-5%，其余为水，调节pH值为6.4-6.8；在116℃-121℃湿热灭菌20-
35min后使用。
7.根据权利要求4所述的一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂的制备方法，其特征在于，二级种子培养所用培养基按质量分数计，具体为:蛋白胨 0.1-0.5%、酵母浸膏 0.3-
0.6%、葡萄糖 0.5-1.5%、蔗糖 0.5-1.5%、K2HPO4 0.3-0.5% 、MnSO4·H2O 0. 01-0.03% 和 MgSO4·7H2O 0.04-0.06%，其余为水，pH值 6.6±0.2；在115℃-122℃湿热灭菌20-40min后使用。
8.根据权利要求4所述的一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂的制备方法，其特征在于，发酵所用培养基按质量分数计，具体为:蛋白胨 0.1-0.5%、酵母浸膏 0.3-0.6%、葡萄糖 0.5-1.5%、蔗糖 0.5-1.5%、K2HPO4 0.3-0.5% 、MnSO4·H2O 0. 01-0.03% 和 MgSO4·
7H2O 0.04-0.06%，其余为水，pH值 6.6±0.2；在115℃-122℃湿热灭菌20-40min后使用。
9.根据权利要求3所述的一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂的制备方法，其特征在于，所述粪肠球菌CICC 20419，购买于中国工业微生物菌种保藏管理中心。
10.根据权利要求1-2任一所述的一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂的应用，其特征在于，按每吨饲料使用5kg-10kg防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂的配比，用饲料投喂未发生白便池塘的凡纳滨对虾。
一种防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂及其制备方法和应用
技术领域
背景技术
发明内容
37℃培养10-12h，制得一级种子培养液；
二级种子培养：按0.06%-0.2%的接种量将一级种子培养液接种于二级种子培养基中；
在30℃-38℃培养8-12h，制得二级种子培养液；
发酵培养:按3.75%-10%的接种量将二级种子培养液接种于粪肠球菌活菌发酵培养基中，至粪肠球菌数量达到发酵水平时，结束发酵；
喷雾干燥：将上述发酵液经喷雾干燥制成发酵菌粉，制得防治凡纳滨对虾白便综合征的菌剂。
发酵所用培养基按质量分数计，具体为:蛋白胨 0.1-0.5%、酵母浸膏 0.3-0.6%、葡萄糖 0.5-1.5%、蔗糖 0.5-1.5%、K2HPO4 0.3-0.5% 、MnSO4·H2O 0.01-0.03% 和 MgSO4·7H2O
0.04-0.06%，其余为水，pH值 6.6±0.2；在115℃-122℃湿热灭菌20-40min后使用。
具体实施方式
100mL一级种子接种于二级种子培养基中；在30℃培养12 h；二级种子培养所用培养基按质量分数计:蛋白胨 0.2%、酵母浸膏 0.5%、葡萄糖 1.0%、蔗糖 1.0%、K2HPO4 0.4% 、MnSO4·H2O 0.02% 和MgSO4·7H2O 0.05%，其余为水，调节pH值 6.8；
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发酵培养：在5m或30m扩发酵罐中装有或4000L或20m 粪肠球菌活菌发酵培养基，115℃湿热灭菌40min，将150L或200L二级种子接种于粪肠球菌活菌发酵培养基中，控制罐压
0.07MPa，在30℃培养36h；发酵所用培养基按质量分数计:蛋白胨 0.2%、酵母浸膏 0.5%、葡萄糖 1.0%、蔗糖 1.0%、K2HPO4 0.4% 、MnSO4·H2O 0.02% 和 MgSO4·7H2O 0.05%，其余为水；pH值 6.8；
至粪肠球菌数量达到发酵水平时，结束发酵；
将上述发酵液经喷雾干燥制成发酵菌粉；也可以直接将发酵液直接用于对虾饲料中拌服，同样具有防治凡纳滨对虾白便的效果，但是基于运输和使用的方便，一般采用菌粉的形式。
300mL一级种子接种于二级种子培养基中；在38℃培养8h；二级种子培养所用培养基按质量分数计:蛋白胨 0.5%、酵母浸膏 0.6%、葡萄糖 1.5%、蔗糖 1.5%、K2HPO4 0.6% 、MnSO4·H2O
0.03% 和MgSO4·7H2O 0.06%，其余为水，pH值 6.6；
发酵培养：在5m3或30m3扩发酵罐中装有或4000L或20m3粪肠球菌活菌发酵培养基，122℃湿热灭菌20min，将150L或200L二级种子接种于粪肠球菌活菌发酵培养基中，控制罐压
0.02MPa，在38℃培养24h；发酵所用培养基按质量分数计:蛋白胨 0.5%、酵母浸膏 0.6%、葡萄糖 1.5%、蔗糖 1.5%、K2HPO4 0.6% 、MnSO4·H2O 0.03% 和MgSO4·7H2O 0.06%，其余为水；
pH值6.6；
至粪肠球菌数量达到发酵水平时，结束发酵；
将上述发酵液经喷雾干燥制成发酵菌粉；
粪肠球菌菌粉有效活菌数不少于1.0×1010cfu/g；
尾气处理:采用化学氧化、等离子照射或紫外照射去味、脱氨氮或脱硫化氢处理后排放。
200mL一级种子接种于二级种子培养基中；在36℃培养10h；二级种子培养所用培养基按质量分数计:蛋白胨 0.1%、酵母浸膏 0.3%、葡萄糖 0.5%、蔗糖 0.5%、K2HPO4 0.3% 、MnSO4·H2O 0. 01% 和 MgSO4·7H2O 0.06%，调节pH值 6.6；
发酵培养：在5m3或30m3扩发酵罐中装有或4000L或20m3粪肠球菌活菌发酵培养基，118℃湿热灭菌30min，将150L或200L二级种子接种于粪肠球菌活菌发酵培养基中，控制罐压
0.05MPa，在34℃培养30h；发酵所用培养基按质量分数计:蛋白胨 0.1%、酵母浸膏 0.3%、葡萄糖 0.5%、蔗糖 0.5%、K2HPO4 0.3% 、MnSO4·H2O 0. 01% 和 MgSO4·7H2O 0.06%，调节剂pH值 6.6；
至粪肠球菌数量达到发酵水平时，结束发酵；
将上述发酵液经喷雾干燥制成发酵菌粉；
粪肠球菌菌粉有效活菌数不少于1.0×1010cfu/g。
（1）试验时间和地点：
2018 年 8 月 6 日在试验在天津市西青区王村渔场的2个露天池塘中进行,2个池塘面积分别为60亩（1#）、30亩（2#）。
进行,3个池塘面积分别为40亩（3）、30亩（4）、50亩（5）。
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