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一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基

阅读：59发布：2021-12-02

专利汇可以提供一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，包括以下组成成分：氨基酸、维生素、无机盐类、辅助成分和蛋白质类，所述氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、盐酸精氨酸、二盐酸胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、一水盐酸组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、盐酸赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸二钠盐二水合物、缬氨酸、羟脯氨酸、鸟氨酸、牛磺酸；所述蛋白质包括人转铁蛋白、重组胰岛素；本发明制备的培养基在用于VERO细胞培养时，不依赖动物血清的使用，且没有引用动物源蛋白，极大地降低了生产成本，并充分保证产品质量稳定，可实现长时间培养和传代而不增加细胞凋亡比例。，下面是一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，其特征在于，包括以下组成成分：氨基酸、维生素、无机盐类、辅助成分和蛋白质类，所述氨基酸包括甘氨酸
15-20mg/L、丙氨酸2-5mg/L、盐酸精氨酸150-300mg/L、一水天门冬酰胺20-60mg/L、天门冬氨酸5-10mg/L、一水盐酸半胱氨酸15-20mg/L、二盐酸胱氨酸25-75mg/L、谷氨酸 5-10mg/L、谷氨酰胺100-200mg/L、一水盐酸组氨酸20-40mg/L、异亮氨酸25-75mg/L、亮氨酸25-75mg/L、盐酸赖氨酸60-95mg/L、甲硫氨酸 50-75mg/L、苯丙氨酸20-40mg/L、脯氨酸15-20mg/L、丝氨酸150-180mg/L、苏氨酸40-60mg/L、色氨酸5-10mg/L、酪氨酸二钠盐二水合物200-300mg/L、缬氨酸25-60mg/L、羟脯氨酸10-15mg/L、鸟氨酸40-60mg/L、牛磺酸50-75mg/L；所述蛋白质包括人转铁蛋白10-15mg/L、重组胰岛素 5-10mg/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸 2000-4000mg/L、KERRY超滤植物蛋白胨 100-500mg/L、安琪酵母粉 100-500mg/L。
2.根据权利要求1所述的用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，其特征在于，所述维生素包括抗坏血酸 40-60mg/L、抗坏血酸膦酸酯钠 1-5mg/L、生物素
0.1-0.5mg/L、氯化胆碱 5-10mg/L、D-泛酸钙 5-10mg/L、叶酸 1-5mg/L、烟酸1-5mg/L、盐酸吡哆醛1-5mg/L、核黄素0.1-0.5mg/L、B12维生素1-5mg/L、i-肌醇10-15mg/L、维生素K3
0.05-0.2mg/L。
3.根据权利要求1所述的用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，其特征在于，所述无机盐类包括无水氯化钙150-200mg/L、无水硫酸镁 50-100mg/L、氯化钾
200-400mg/L、碳酸氢钠1000-3000mg/L、氯化钠5000-6000mg/L、一水磷酸二氢钠130-
150mg/L、无水磷酸氢二钠50-80mg/L、五水硫酸铜0.001-0.003mg/L、七水合硫酸亚铁0.5-
1mg/L、无水氯化镁50-60mg/L、七水合硫酸锌0.1-0.6mg/L。
4.根据权利要求1所述的用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，其特征在于，所述辅助成分包括D-葡萄糖1000-3000mg/L、酚红5-10mg/L、腐胺二盐酸
0.005-0.01mg/L、丙酮酸钠 90-120mg/L、还原型谷胱甘肽1-5mg/L、偏钒酸铵0.0001-
0.0005mg/L、二氯化锰 0.00001-0.00005mg/L、亚硒酸钠0.005-0.01mg/L、腺嘌呤0.01-
0.5mg/L、乳酸钠0.01-0.5mg/L、血清素1-10mg/L、果糖100-200mg/L、寡肽-1 0.005-
0.01mg/L、人寡肽-1 0.005-0.01mg/L、血小板衍生生长因子-bb 0.005-0.01mg/L、尿素15-
20mg/L、胸腺嘧啶核苷0.1-0.5mg/L。
5.根据权利要求1所述的用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，其特征在于，包括以下组成成分：甘氨酸18.75mg/L、丙氨酸4.45mg/L、盐酸精氨酸247.5mg/L、一水天门冬酰胺57.5mg/L、天门冬氨酸6.65mg/L 、一水盐酸半胱氨酸17.56mg/L、二盐酸胱氨酸46.29mg/L、谷氨酸7.35mg/L、谷氨酰胺 190mg/L、一水盐酸组氨酸31.48mg/L、异亮氨酸54.47mg/L、亮氨酸59.05mg/L、盐酸赖氨酸 91.25mg/L、甲硫氨酸67.24mg/L、苯丙氨酸
35.48mg/L、脯氨酸17.25mg/L、丝氨酸 176.25mg/L 、苏氨酸53.45mg/L、色氨酸 9.02mg/L、酪氨酸二钠盐二水合物275.79mg/L、缬氨酸 52.85mg/L、羟脯氨酸13.1mg/L、鸟氨酸
50.58mg/L、牛磺酸62.5mg/L、抗坏血酸50mg/L、抗坏血酸膦酸酯钠2.5mg/L、生物素0.5mg/L、氯化胆碱8.98mg/L、D-泛酸钙6.24mg/L、叶酸2.65mg/L、烟酸2.02mg/L、盐酸吡哆醛
2.013mg/L、核黄素 0.219mg/L、B12维生素2.17mg/L 、i-肌醇 12.6mg/L、维生素K3 0.1mg/L、无水氯化钙170mg/L、无水硫酸镁97.67mg/L、氯化钾311.8mg/L、碳酸氢钠1200mg/L、氯化钠5800mg/L、一水磷酸二氢钠140mg/L、无水磷酸氢二钠71.02mg/L、五水硫酸铜 0.0023mg/L、七水合硫酸亚铁0.917mg/L、无水氯化镁53.64mg/L、七水合硫酸锌0.532mg/L、D-葡萄糖
1000mg/L、酚红8.1mg/L、腐胺二盐酸0.0081mg/L、丙酮酸钠110mg/L、还原型谷胱甘肽4mg/L、偏钒酸铵0.0003mg/L 、二氯化锰 0.00005mg/L、亚硒酸钠0.01mg/L、腺嘌呤0.365mg/L、乳酸钠0.2mg/L、血清素5.5mg/L、果糖196.87mg/L、寡肽-1 0.01mg/L、人寡肽-1 0.01mg/L、血小板衍生生长因子-bb 0.01mg/L、尿素17mg/L、胸腺嘧啶核苷0.365mg/L、人转铁蛋白
15mg/L、重组胰岛素 10mg/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸 3574.5mg/L、KERRY超滤植物蛋白胨
300mg/L、安琪酵母粉 150mg/L。
6.根据权利要求1所述的用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，其特征在于，所述人转铁蛋白为饱和铁人转铁蛋白。
7.根据权利要求1所述的用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，其特征在于，所述重组胰岛素为全链重组胰岛素。

说明书全文

一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培

养基

技术领域

[0001] 本发明涉及培养基领域，具体是一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基。

背景技术

[0002] VERO细胞无血清培养生产疫苗已成为当前的主流趋势，符合VERO细胞的贴壁特性和提高细胞密度，无血清化学限定培养基的设计和优化是VERO细胞无血清培养技术的关键。

[0003] 但是目前商业化的无血清培养基多数通用性较低，应用不广泛，不具有普遍性且制作成本较高，不利于商业化开发和应用；同时VERO细胞在无血清培养基中生长数量较少，且后期持续性差，连续传代时细胞容易凋亡，基于此，我们提出一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，以解决上述背景技术中提出的问题。

[0005] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

[0006] 一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，包括以下组成成分：氨基酸、维生素、无机盐类、辅助成分和蛋白质类，所述氨基酸包括甘氨酸15-20mg/L、丙氨酸2-5mg/L、盐酸精氨酸150-300mg/L、一水天门冬酰胺20-60mg/L、天门冬氨酸5-10mg/L、一水盐酸半胱氨酸15-20mg/L、二盐酸胱氨酸25-75mg/L、谷氨酸5-10mg/L、谷氨酰胺100-200mg/L、一水盐酸组氨酸20-40mg/L、异亮氨酸25-75mg/L、亮氨酸25-75mg/L、盐酸赖氨酸
60-95mg/L、甲硫氨酸50-75mg/L、苯丙氨酸20-40mg/L、脯氨酸15-20mg/L、丝氨酸150-
180mg/L、苏氨酸40-60mg/L、色氨酸5-10mg/L、酪氨酸二钠盐二水合物200-300mg/L、缬氨酸
25-60mg/L、羟脯氨酸10-15mg/L、鸟氨酸40-60mg/L、牛磺酸50-75mg/L；所述蛋白质包括人转铁蛋白10-15mg/L、重组胰岛素5-10mg/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)2000-4000mg/L、KERRY超滤植物蛋白胨(kerry4601N)100-500mg/L、安琪酵母粉(安琪ultra)100-500mg/L。

[0007] 作为本发明进一步的方案：所述维生素包括抗坏血酸40-60mg/L、抗坏血酸膦酸酯钠1-5mg/L、生物素0.1-0.5mg/L、氯化胆碱5-10mg/L、D-泛酸钙5-10mg/L、叶酸1-5mg/L、烟酸1-5mg/L、盐酸吡哆醛1-5mg/L、核黄素0.1-0.5mg/L、B12维生素1-5mg/L、i-肌醇10-15mg/L、维生素K3 0.05-0.2mg/L。

[0008] 作为本发明再进一步的方案：所述无机盐类包括无水氯化钙150-200mg/L、无水硫酸镁50-100mg/L、氯化钾200-400mg/L、碳酸氢钠1000-3000mg/L、氯化钠5000-6000mg/L、一水磷酸二氢钠130-150mg/L、无水磷酸氢二钠50-80mg/L、五水硫酸铜0.001-0.003mg/L、七水合硫酸亚铁0.5-1mg/L、无水氯化镁50-60mg/L、七水合硫酸锌0.1-0.6mg/L。

[0009] 作为本发明再进一步的方案：所述辅助成分包括D-葡萄糖1000-3000mg/L、酚红5-10mg/L、腐胺二盐酸0.005-0.01mg/L、丙酮酸钠90-120mg/L、还原型谷胱甘肽1-5mg/L、偏钒酸铵0.0001-0.0005mg/L、二氯化锰0.00001-0.00005mg/L、亚硒酸钠0.005-0.01mg/L、腺嘌呤0.01-0.5mg/L、乳酸钠0.01-0.5mg/L、血清素1-10mg/L、果糖100-200mg/L、寡肽-1(BGF)
0.005-0.01mg/L、人寡肽-1(EGF)0.005-0.01mg/L、血小板衍生生长因子-bb(PDGF-BB)
0.005-0.01mg/L、尿素15-20mg/L、胸腺嘧啶核苷

[0010] 0.1-0.5mg/L。

[0011] 作为本发明再进一步的方案：包括以下组成成分：甘氨酸18.75mg/L、丙氨酸4.45mg/L、盐酸精氨酸247.5mg/L、一水天门冬酰胺57.5mg/L、天门冬氨酸6.65mg/L、一水盐酸半胱氨酸17.56mg/L、二盐酸胱氨酸46.29mg/L、谷氨酸7.35mg/L、谷氨酰胺190mg/L、一水盐酸组氨酸31.48mg/L、异亮氨酸54.47mg/L、亮氨酸59.05mg/L、盐酸赖氨酸91.25mg/L、甲硫氨酸67.24mg/L、苯丙氨酸35.48mg/L、脯氨酸17.25mg/L、丝氨酸176.25mg/L、苏氨酸
53.45mg/L、色氨酸9.02mg/L、酪氨酸二钠盐二水合物275.79mg/L、缬氨酸52.85mg/L、羟脯氨酸13.1mg/L、鸟氨酸50.58mg/L、牛磺酸62.5mg/L、抗坏血酸50mg/L、抗坏血酸膦酸酯钠
2.5mg/L、生物素0.5mg/L、氯化胆碱8.98mg/L、D-泛酸钙6.24mg/L、叶酸2.65mg/L、烟酸
2.02mg/L、盐酸吡哆醛2.013mg/L、核黄素0.219mg/L、B12维生素2.17mg/L、i-肌醇12.6mg/L、维生素K3 0.1mg/L、无水氯化钙170mg/L、无水硫酸镁97.67mg/L、氯化钾311.8mg/L、碳酸氢钠1200mg/L、氯化钠5800mg/L、一水磷酸二氢钠140mg/L、无水磷酸氢二钠71.02mg/L、五水硫酸铜0.0023mg/L、七水合硫酸亚铁0.917mg/L、无水氯化镁53.64mg/L、七水合硫酸锌
0.532mg/L、D-葡萄糖1000mg/L、酚红8.1mg/L、腐胺二盐酸0.0081mg/L、丙酮酸钠110mg/L、还原型谷胱甘肽4mg/L、偏钒酸铵0.0003mg/L、二氯化锰0.00005mg/L、亚硒酸钠0.01mg/L、腺嘌呤0.365mg/L、乳酸钠0.2mg/L、血清素5.5mg/L、果糖196.87mg/L、寡肽-1(BGF)0.01mg/L、人寡肽-1(EGF)0.01mg/L、血小板衍生生长因子-bb(PDGF-BB)0.01mg/L、尿素17mg/L[0012] 、胸腺嘧啶核苷0.365mg/L、人转铁蛋白15mg/L、重组胰岛素10mg/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)3574.5mg/L、kerry 4601N 300mg/L、安琪ultra 150mg/L。

[0013] 作为本发明再进一步的方案：所述人转铁蛋白为饱和铁人转铁蛋白。

[0014] 作为本发明再进一步的方案：所述重组胰岛素为全链重组胰岛素。

[0015] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：

[0016] 本发明制备的培养基在用于VERO细胞培养时，不依赖动物血清的使用，且没有引用动物源蛋白，极大地降低了生产成本，并充分保证产品质量稳定，可实现长时间培养和传代而不增加细胞凋亡比例。附图说明

[0017] 图1为培养基实验中VERO细胞在SFM无血清培养基中生长状态。

[0018] 图2为培养基实验中VERO SFM无血清培养基传代数据。

[0019] 图3为培养基实验中VERO SFM无血清培养基增殖倍数。

具体实施方式

[0020] 下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

[0021] 实施例1

[0022] 一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，包括以下组成成分：甘氨酸20mg/L、丙氨酸5mg/L、盐酸精氨酸300mg/L、一水天门冬酰胺60mg/L、天门冬氨酸10mg/L、一水盐酸半胱氨酸20mg/L、二盐酸胱氨酸75mg/L、谷氨酸10mg/L、谷氨酰胺200mg/L、一水盐酸组氨酸40mg/L、异亮氨酸75mg/L、亮氨酸75mg/L、盐酸赖氨酸95mg/L、甲硫氨酸
75mg/L、苯丙氨酸40mg/L、脯氨酸20mg/L、丝氨酸180mg/L、苏氨酸60mg/L、色氨酸10mg/L、酪氨酸二钠盐二水合物300mg/L、缬氨酸60mg/L、羟脯氨酸15mg/L、鸟氨酸60mg/L、牛磺酸
75mg/L、人转铁蛋白15mg/L、重组胰岛素10mg/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)4000mg/L、KERRY超滤植物蛋白胨(kerry4601N)500mg/L、安琪酵母粉(安琪ultra)500mg/L、抗坏血酸
60mg/L、抗坏血酸膦酸酯钠5mg/L、生物素0.5mg/L、氯化胆碱10mg/L、D-泛酸钙10mg/L、叶酸
5mg/L、烟酸5mg/L、盐酸吡哆醛5mg/L、核黄素0.5mg/L、B12维生素5mg/L、i-肌醇15mg/L、维生素K3 0.2mg/L、无水氯化钙200mg/L、无水硫酸镁100mg/L、氯化钾400mg/L、碳酸氢钠
3000mg/L、氯化钠6000mg/L、一水磷酸二氢钠150mg/L、无水磷酸氢二钠80mg/L、五水硫酸铜
0.003mg/L、七水合硫酸亚铁1mg/L、无水氯化镁60mg/L、七水合硫酸锌0.6mg/L、D-葡萄糖
3000mg/L、酚红10mg/L、腐胺二盐酸0.01mg/L、丙酮酸钠120mg/L、还原型谷胱甘肽5mg/L、偏钒酸铵0.0005mg/L、二氯化锰0.00005mg/L、亚硒酸钠0.01mg/L、腺嘌呤0.5mg/L、乳酸钠
0.5mg/L、血清素10mg/L、果糖200mg/L、寡肽-1(BGF)0.01mg/L、人寡肽-1(EGF)0.01mg/L、血小板衍生生长因子-bb(PDGF-BB)0.01mg/L、尿素20mg/L、胸腺嘧啶核苷0.5mg/L。

[0023] 其中，人转铁蛋白为饱和铁人转铁蛋白；重组胰岛素为全链重组胰岛素。

[0024] 实施例2

[0025] 一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，包括以下组成成分：甘氨酸15mg/L、丙氨酸2mg/L、盐酸精氨酸150mg/L、一水天门冬酰胺20mg/L、天门冬氨酸5mg/L、一水盐酸半胱氨酸15mg/L、二盐酸胱氨酸25mg/L、谷氨酸5mg/L、谷氨酰胺100mg/L、一水盐酸组氨酸20mg/L、异亮氨酸25mg/L、亮氨酸25mg/L、盐酸赖氨酸60mg/L、甲硫氨酸
50mg/L、苯丙氨酸20mg/L、脯氨酸15mg/L、丝氨酸150mg/L、苏氨酸40mg/L、色氨酸5mg/L、酪氨酸二钠盐二水合物200mg/L、缬氨酸25mg/L、羟脯氨酸10mg/L、鸟氨酸40mg/L、牛磺酸
50mg/L、人转铁蛋白10mg/L、重组胰岛素5mg/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)2000mg/L、KERRY超滤植物蛋白胨(kerry4601N)100mg/L、安琪酵母粉(安琪ultra)100mg/L、抗坏血酸
40mg/L、抗坏血酸膦酸酯钠1mg/L、生物素0.1mg/L、氯化胆碱5mg/L、D-泛酸钙5mg/L、叶酸
1mg/L、烟酸1mg/L、盐酸吡哆醛1mg/L、核黄素0.1mg/L、B12维生素1mg/L、i-肌醇10mg/L、维生素K3 0.05mg/L、无水氯化钙150mg/L、无水硫酸镁50mg/L、氯化钾200mg/L、碳酸氢钠
1000mg/L、氯化钠5000mg/L、一水磷酸二氢钠130mg/L、无水磷酸氢二钠50mg/L、五水硫酸铜
0.001mg/L、七水合硫酸亚铁0.5mg/L、无水氯化镁50mg/L、七水合硫酸锌0.1mg/L、D-葡萄糖
1000mg/L、酚红5mg/L、腐胺二盐酸0.005mg/L、丙酮酸钠90mg/L、还原型谷胱甘肽1mg/L、偏钒酸铵0.0001mg/L、二氯化锰0.00001mg/L、亚硒酸钠0.005mg/L、腺嘌呤0.01mg/L、乳酸钠
0.01mg/L、血清素1mg/L、果糖100mg/L、寡肽-1(BGF)0.005mg/L、人寡肽-1(EGF)0.005mg/L、血小板衍生生长因子-bb(PDGF-BB)0.005mg/L、尿素15mg/L、胸腺嘧啶核苷0.1mg/L。

[0026] 其中，人转铁蛋白为饱和铁人转铁蛋白；重组胰岛素为全链重组胰岛素。

[0027] 实施例3

[0028] 一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，包括以下组成成分：甘氨酸18.75mg/L、丙氨酸4.45mg/L、盐酸精氨酸247.5mg/L、一水天门冬酰胺57.5mg/L、天门冬氨酸6.65mg/L、一水盐酸半胱氨酸17.56mg/L、二盐酸胱氨酸46.29mg/L、谷氨酸7.35mg/L、谷氨酰胺190mg/L、一水盐酸组氨酸31.48mg/L、异亮氨酸54.47mg/L、亮氨酸
59.05mg/L、盐酸赖氨酸91.25mg/L、甲硫氨酸67.24mg/L、苯丙氨酸35.48mg/L、脯氨酸
17.25mg/L、丝氨酸176.25mg/L、苏氨酸53.45mg/L、色氨酸9.02mg/L、酪氨酸二钠盐二水合物275.79mg/L、缬氨酸52.85mg/L、羟脯氨酸13.1mg/L、鸟氨酸50.58mg/L、牛磺酸62.5mg/L、抗坏血酸50mg/L、抗坏血酸膦酸酯钠2.5mg/L、生物素0.5mg/L、氯化胆碱8.98mg/L、D-泛酸钙6.24mg/L、叶酸2.65mg/L、烟酸2.02mg/L、盐酸吡哆醛2.013mg/L、核黄素0.219mg/L、B12维生素2.17mg/L、i-肌醇12.6mg/L、维生素K3 0.1mg/L、无水氯化钙170mg/L、无水硫酸镁
97.67mg/L、氯化钾311.8mg/L、碳酸氢钠1200mg/L、氯化钠5800mg/L、一水磷酸二氢钠
140mg/L、无水磷酸氢二钠71.02mg/L、五水硫酸铜0.0023mg/L、七水合硫酸亚铁0.917mg/L、无水氯化镁53.64mg/L、七水合硫酸锌0.532mg/L、D-葡萄糖1000mg/L、酚红8.1mg/L、腐胺二盐酸0.0081mg/L、丙酮酸钠110mg/L、还原型谷胱甘肽4mg/L、偏钒酸铵0.0003mg/L、二氯化锰0.00005mg/L、亚硒酸钠0.01mg/L、腺嘌呤0.365mg/L、乳酸钠0.2mg/L、血清素5.5mg/L、果糖196.87mg/L、寡肽-1(BGF)0.01mg/L、人寡肽-1(EGF)0.01mg/L、血小板衍生生长因子-bb(PDGF-BB)0.01mg/L、尿素17mg/L、胸腺嘧啶核苷0.365mg/L、人转铁蛋白15mg/L、重组胰岛素10mg/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)3574.5mg/L、kerry 4601N 300mg/L、安琪ultra
150mg/L。

[0029] 其中，人转铁蛋白为饱和铁人转铁蛋白；重组胰岛素为全链重组胰岛素。

[0030] 实施例4

[0031] 一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，包括以下组成成分：甘氨酸15mg/L、丙氨酸2mg/L、盐酸精氨酸150mg/L、一水天门冬酰胺20mg/L、天门冬氨酸5mg/L、一水盐酸半胱氨酸15mg/L、二盐酸胱氨酸25mg/L、谷氨酸5mg/L、谷氨酰胺100mg/L、一水盐酸组氨酸20mg/L、异亮氨酸25mg/L、亮氨酸25mg/L、盐酸赖氨酸60mg/L、甲硫氨酸
50mg/L、苯丙氨酸20mg/L、脯氨酸15mg/L、丝氨酸150mg/L、苏氨酸40mg/L、色氨酸5mg/L、酪氨酸二钠盐二水合物200mg/L、缬氨酸25mg/L、羟脯氨酸10mg/L、鸟氨酸40mg/L、牛磺酸
50mg/L、抗坏血酸50mg/L、抗坏血酸膦酸酯钠2.5mg/L、生物素0.5mg/L、氯化胆碱8.98mg/L、D-泛酸钙6.24mg/L、叶酸2.65mg/L、烟酸2.02mg/L、盐酸吡哆醛2.013mg/L、核黄素0.219mg/L、B12维生素2.17mg/L、i-肌醇12.6mg/L、维生素K3 0.1mg/L、无水氯化钙170mg/L、无水硫酸镁97.67mg/L、氯化钾311.8mg/L、碳酸氢钠1200mg/L、氯化钠5800mg/L、一水磷酸二氢钠
140mg/L、无水磷酸氢二钠71.02mg/L、五水硫酸铜0.0023mg/L、七水合硫酸亚铁0.917mg/L、无水氯化镁53.64mg/L、七水合硫酸锌0.532mg/L、D-葡萄糖1000mg/L、酚红8.1mg/L、腐胺二盐酸0.0081mg/L、丙酮酸钠110mg/L、还原型谷胱甘肽4mg/L、偏钒酸铵0.0003mg/L、二氯化锰0.00005mg/L、亚硒酸钠0.01mg/L、腺嘌呤0.365mg/L、乳酸钠0.2mg/L、血清素5.5mg/L、果糖196.87mg/L、寡肽-1(BGF)0.01mg/L、人寡肽-1(EGF)0.01mg/L、血小板衍生生长因子-bb(PDGF-BB)0.01mg/L、尿素17mg/L、胸腺嘧啶核苷0.365mg/L、人转铁蛋白15mg/L、重组胰岛素10mg/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)3574.5mg/L、kerry 4601N 300mg/L、安琪ultra
150mg/L。

[0032] 其中，人转铁蛋白为饱和铁人转铁蛋白；重组胰岛素为全链重组胰岛素。

[0033] 实施例5

[0034] 一种用于VERO无血清细胞培养及相应病毒生产的无血清培养基，包括以下组成成分：甘氨酸18.75mg/L、丙氨酸4.45mg/L、盐酸精氨酸247.5mg/L、一水天门冬酰胺57.5mg/L、天门冬氨酸6.65mg/L、一水盐酸半胱氨酸17.56mg/L、二盐酸胱氨酸46.29mg/L、谷氨酸7.35mg/L、谷氨酰胺190mg/L、一水盐酸组氨酸31.48mg/L、异亮氨酸54.47mg/L、亮氨酸
59.05mg/L、盐酸赖氨酸91.25mg/L、甲硫氨酸67.24mg/L、苯丙氨酸35.48mg/L、脯氨酸
17.25mg/L、丝氨酸176.25mg/L、苏氨酸53.45mg/L、色氨酸9.02mg/L、酪氨酸二钠盐二水合物275.79mg/L、缬氨酸52.85mg/L、羟脯氨酸13.1mg/L、鸟氨酸50.58mg/L、牛磺酸62.5mg/L、抗坏血酸50mg/L、抗坏血酸膦酸酯钠2.5mg/L、生物素0.5mg/L、氯化胆碱8.98mg/L、D-泛酸钙6.24mg/L、叶酸2.65mg/L、烟酸2.02mg/L、盐酸吡哆醛2.013mg/L、核黄素0.219mg/L、B12维生素2.17mg/L、i-肌醇12.6mg/L、维生素K3 0.1mg/L、无水氯化钙200mg/L、无水硫酸镁
100mg/L、氯化钾400mg/L、碳酸氢钠3000mg/L、氯化钠6000mg/L、一水磷酸二氢钠150mg/L、无水磷酸氢二钠80mg/L、五水硫酸铜0.003mg/L、七水合硫酸亚铁1mg/L、无水氯化镁60mg/L、七水合硫酸锌0.6mg/L、D-葡萄糖3000mg/L、酚红10mg/L、腐胺二盐酸0.01mg/L、丙酮酸钠
120mg/L、还原型谷胱甘肽5mg/L、偏钒酸铵0.0005mg/L、二氯化锰0.00005mg/L、亚硒酸钠
0.01mg/L、腺嘌呤0.5mg/L、乳酸钠0.5mg/L、血清素10mg/L、果糖200mg/L、寡肽-1(BGF)
0.01mg/L、人寡肽-1(EGF)0.01mg/L、血小板衍生生长因子-bb(PDGF-BB)0.01mg/L、尿素
20mg/L、胸腺嘧啶核苷0.5mg/L、人转铁蛋白10mg/L、重组胰岛素5mg/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)2000mg/L、KERRY超滤植物蛋白胨(kerry4601N)100mg/L、安琪酵母粉(安琪ultra)100mg/L。

[0035] 其中，人转铁蛋白为饱和铁人转铁蛋白；重组胰岛素为全链重组胰岛素。

[0036] 培养基实验

[0037]实验细胞株 VERO无血清细胞
培养瓶 T25瓶
接种密度 1.0*105cells/瓶
培养条件 37℃，5％CO2加湿培养
生长天数 3天

[0038] 本发明制备的培养基在用于VERO细胞培养时，不依赖动物血清的使用，且没有引用动物源蛋白，极大地降低了生产成本，并充分保证产品质量稳定，可实现长时间培养和传代而不增加细胞凋亡比例。

[0039] 上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。

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