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一种皮石斛组培快速繁殖方法

阅读:469发布:2021-09-19

专利汇可以提供一种皮石斛组培快速繁殖方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种 铁 皮石斛组培快速繁殖方法,包括以下步骤:蒴果 种子 的准备、种子的诱导萌发与分化、 幼苗 的增殖、壮苗生根和移栽。本发明主要是采用种子的诱导培养、幼苗增殖培养、壮苗生根培养的三步壮苗法来替代铁皮石斛组培传统四步增殖法,种苗可以有效缩短两至三个月生产周期,从而降低了生产中各环节的时间、人 力 、耗料成本;在每个扩繁环节中的约前两周的时间内,均采用纯暗培养的方法来培养,能有效提升生长速度,采用三代增殖法,使得母株中的基因得到更好复制,保证了苗品种的纯正性;改良了培养基的配方,通过增加 钾 肥和 硅 肥,使得特别在壮苗阶段,瓶苗生长的粗壮度、整齐度得到提高,增强种苗成活率,提升种苗的市场竞争力。,下面是一种皮石斛组培快速繁殖方法专利的具体信息内容。

1.一种皮石斛组培快速繁殖方法,其特征在于:依次包括以下步骤:1)、取材:选用生长健壮的铁皮石斛上结90天以上的未开裂的成熟蒴果,将其采用无菌洗液洗净、沥干后备用;
2)、种子的诱导萌发与分化:将步骤1)所得的蒴果经消毒后,切除其首尾两端各0  .3~
0 .7cm后纵向剖开,取出种子,将种子均匀接种到种子萌发分化培养基上,在组培室内进行培养;
设置培养条件为:诱导初期10~15天,进行暗培养,温度设置为24~26℃,湿度60~
70%;后期43~47天,进行光照与暗培养交替培养,温度设置为24~26℃,湿度60~70%,光照时间为8h/d,光照强度为1000-1200lux,16小时暗培养;培养结束获得原球茎;
3)、幼苗的增殖:将将步骤2)所获得的原球茎,选取长势旺盛、均匀的原球茎,进行一次扩繁,系数设置为95~105倍,均匀转接于幼苗增殖培养基进行增殖培养;
设置培养条件为:增殖初期10~15天,进行暗培养,温度设置为24~26℃,湿度60~
70%;后期45~75天,进行光照与暗培养交替培养,温度设置为24~26℃,湿度60~70%,光照时间为10h/d,光照强度为2000-2500lux,14小时暗培养;培养结束获得丛生苗;
4)、壮苗生根:将步骤3)增殖培养获得的丛生苗,选取长势旺盛、均匀、长至2~3cm,将丛生苗从基部进行分割进行第二次扩繁,系数设置为7-~10倍,均匀转移到壮苗生根培养基上进行壮苗生根培养;
设置培养条件为:壮苗初期13~15天,进行暗培养,温度设置为24~26℃,湿度60~
70%;后期65~75天,进行光照与暗培养交替培养,温度设置为24~26℃,光照时间为12h/d,光照强度为2800-3000lux,12小时暗培养;培养结束获得壮苗生根;
5)、移栽:待壮苗生根培养获得的小苗长至4~5cm高、且长出长度大于等于2cm的根至少3条 时,获得可出瓶种植种苗将,再通过半个月至一个月的室外炼苗,让组培苗在瓶里适应自然环境后,瓶种植种苗从组培瓶中取出,采用清洗除根部携带培养基,即可获得健壮、成活率高的种植种苗。
2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛组培快速繁殖方法,其特征在于:所述步骤2)中的种子萌发分化培养基为:MS+NAA0.25~0.35mg/L+蔗糖25~35g/L+琼脂5~10g/L+土豆15~20g/L,pH为6.3。
3.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛组培快速繁殖方法,其特征在于:所述步骤3)中的幼苗增殖培养基为:MS+NAA0.45~0.5mg/L+蔗糖25~35g/L+琼脂5~10g/L,pH为6.4~
6.5。
4.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛组培快速繁殖方法,其特征在于:所述步骤4)中的壮苗生根培养基为:MS+NAA0.35mg/L+蔗糖25~35g/L+琼 脂5~10g/L+香蕉110~120g/L,pH为6.3~6.5。
5.根据权利要求2-4任一所述的一种铁皮石斛组培快速繁殖方法,其特征在于:所述MS培养基中还添加肥0.35~0.45g/L、肥0.15~0.25g/L。

说明书全文

一种皮石斛组培快速繁殖方法

技术领域

[0001] 本发明涉及中药材栽培技术领域,具体是一种铁皮石斛组培快速繁殖方法。

背景技术

[0002] 铁皮石斛是一种传统的珍稀名贵中药材,因具有抗肿瘤、抗衰老、抗声带疲劳、扩张血管和增强人体免疫等作用,被称为“救命仙草”,名列“中华九大仙草”之首。随着铁皮石斛保健价值不断被开发,药材市场对铁皮石斛的需求量也逐渐上升,但由于长期过度采摘,中国的野生资源已经枯竭,而用传统的无性繁殖方式繁殖系数低,无法满足大面积栽培种苗需要,目前组培苗已经成为当前铁皮石斛种植的主要种苗来源。当前对铁皮石斛组培快繁技术研究较多,但大多数存在培养基成分复杂、育苗周期较长、耗费人工多、组培苗成本高等问题,严重制约了铁皮石斛的产业化发展。综上,需要对现有技术进行改进。

发明内容

[0003] 本发明要解决的技术问题是针对上述现有技术的不足,提供一种铁皮石斛组培快速繁殖方法,采用本发明的方法相比现有技术可以较短育苗周期及成本获得铁皮石斛组培种苗。
[0004] 为实现上述目的,本发明提供铁皮石斛组培快速繁殖方法技术方案为:一种铁皮石斛组培快速繁殖方法,依次包括以下步骤:1)、取材:选用生长健壮的铁皮石斛上结的未开裂的成熟蒴果,将其采用无菌洗液洗净、沥干后备用;
2)、种子的诱导萌发与分化:将步骤1)所得的蒴果经消毒后,切除其首尾两端各0 .3~
0 .7cm后纵向剖开,取出种子,将种子均匀接种到种子萌发分化培养基上,在组培室内进行培养;
设置培养条件为:诱导初期13~15天,进行暗培养,温度设置为24~26℃,湿度60~
70%;后期43~47天,进行光照与暗培养交替培养,温度设置为24~26℃,湿度60~70%,光照时间为8h/d,光照强度为1000-1200lux,16小时暗培养;培养结束获得原球茎;
3)、幼苗的增殖:将将步骤2)所获得的原球茎,选取长势旺盛、均匀的原球茎,进行一次扩繁,系数设置为95~105倍,均匀转接于幼苗增殖培养基进行增殖培养;
设置培养条件为:增殖初期13~15天,进行暗培养,温度设置为24~26℃,湿度60~
70%;后期45~75天,进行光照与暗培养交替培养,温度设置为24~26℃,湿度60~70%,光照时间为10h/d,光照强度为2000-2500lux,14小时暗培养;培养结束获得丛生苗;
4)、壮苗生根:将步骤3)增殖培养获得的丛生苗,选取长势旺盛、均匀、长至增殖瓶封顶高(即2~3cm),将丛生苗从基部进行分割进行第二次扩繁,系数设置为7-~9倍,均匀转移到壮苗生根培养基上进行壮苗生根培养;
设置培养条件为:壮苗初期13~15天,进行暗培养,温度设置为24~26℃,湿度60~
70%;后期65~75天,进行光照与暗培养交替培养,温度设置为24~26℃,光照时间为12h/d,光照强度为2800-3000lux,12小时暗培养;培养结束获得壮苗生根;
5)、移栽:待壮苗生根培养获得的小苗长至4~5cm高、且长出长度大于等于2cm的根至少3条根时,获得可出瓶种植种苗,进行为期半个月的室外炼苗,将可出瓶种植种苗从组培瓶中取出,采用清洗除根部携带培养基,即可获得种植种苗。
[0005] 相较于现有技术中的铁皮石斛组培增殖方法,本发明设置将种苗的增殖由步骤二至四的三步壮苗法来实现,并设置在铁皮石斛每个扩繁环节的前约两周时间均采用纯暗培养法来培养,其中的暗培养法为发明人通过长期的多组瓶苗培养对比数据获得,发明人通过比较发现扩繁环节前期,暗培养的瓶苗并不影响种苗生长,通过前期暗培养与后期光照、暗培养交替培养的组合培养,生长速度相较于现有技术中纯光照、暗培养交替培养的对比瓶苗更快,而瓶苗的生长成齐率和叶片色泽也比光照、暗培养交替培养的对比瓶苗更优良,发明人发现在初期暗培养状态下,种苗可根据生长习性自由向上生长,再结合后期光照、暗培养交替培养增长瓶苗的生长,整体成齐会更佳,另外相较于现有技术的光照、暗培养交替培养,本发明的各个步骤后期的光照、暗培养交替培养中的光照时间均明显较少,从而在缩短生长周期时间的前提下又大幅减少了用电光照的电量消耗,降低了生产成本。
[0006] 作为本发明铁皮石斛的组培快速繁殖方法的进一步的方案:所述步骤2)中的种子萌发分化培养基为:MS+NAA0.25~0.35mg/L+蔗糖25~35g/L+琼 脂5~10g/L+土豆15~20g/L,pH为6.3。
[0007] 作为本发明铁皮石斛的组培快速繁殖方法的进一步的方案:所述步骤3)中的幼苗增殖培养基为:MS+NAA0.45~0.5mg/L+蔗糖25~35g/L+琼 脂5~10g/L,pH为6.4~6.5。
[0008] 作为本发明铁皮石斛的组培快速繁殖方法的进一步的方案:所述步骤4)中的壮苗生根培养基为:MS+NAA0.35mg/L+蔗糖25~35g/L+琼 脂5~10g/L+香蕉110~120g/L,pH为6.1~6.3。
[0009] 作为本发明铁皮石斛的组培快速繁殖方法的进一步的方案:所述MS培养基中还添加肥0.35~0.45g/L、肥0.15~0.25g/L。
[0010] 与现有技术相比,本发明的有益效果是:本发明主要是采用种子的诱导培养、幼苗增殖培养、壮苗生根增殖培养的三步壮苗法来实现铁皮石斛的组培增殖,相比于现有技术中的四代乃至五代增殖生产方法,其具有如下优点:1)、种苗可以有效缩短两至三个月生产周期,从而降低了生产中各环节的时间、人力、耗料成本;
2)、在每个扩繁环节中的约前两周的时间内,均采用纯暗培养的方法来培养,能有效提升生长速度,并且瓶苗的生长成齐率和叶片色泽更佳,在保证优良的前提下大幅降低了用电量,进一步缩减了生产成本;
3)、采用三代增殖法,根据遗传学理论,使得母株中的基因得到更好复制,减少了多代变异概率,保证了苗品种的纯正性,同时也增加了种苗的存活率;
4)、改良了培养基的配方,通过增加钾肥和硅肥,使得特别在壮苗阶段,瓶苗生长的粗壮度、整齐度得到提高,提升种苗的市场竞争力。

具体实施方式

[0011] 下面将结合本发明实施例中具体方法,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
[0012] 选取同一批生长健壮的铁皮石斛上结的未开裂的成熟蒴果设置成四组待培养种子进行组培苗培养,其中采用本发明方法的实施例两个,对比例两个。
[0013] 实施例1:一种铁皮石斛组培快速繁殖方法,包括如下步骤:
1)、取材:选用该批生长健壮的铁皮石斛上结的120天未开裂的成熟蒴果,将其采用无菌洗液洗净、沥干后备用;
2)、种子的诱导萌发与分化:将步骤1)所得的蒴果经消毒后,切除其首尾两端各0 .3~
0  .7cm后纵向剖开,取出种子,将种子均匀接种到设置的实施例1种子萌发分化培养基上,在组培室内进行培养;
实施例1组培室设置的培养条件为:在诱导初期的14天,进行暗培养,温度设置为25℃,湿度60%;后期时间进行光照与暗培养交替培养,温度设置为25℃,湿度60%,光照时间为
8h/d,光照强度为1000lux,16小时暗培养;在经过总共60天培养获得原球茎;
其中的萌发分化培养基按MS+NAA0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼5g/L+土豆15g/L配制,pH设置为6.3。
[0014] 3)、幼苗的增殖:将将步骤2)所获得的原球茎,选取长势旺盛、均匀的原球茎,进行一次扩繁,系数设置为100倍,通过专用的原球茎转移勺将原球茎种苗勺取,并转接于幼苗增殖瓶内,均匀洒于瓶内幼苗增殖培养基进行增殖培养;其中设置培养条件为:增殖初期的14天,进行暗培养,温度设置为25℃,湿度60%;后期进行光照与暗培养交替培养,温度设置为25℃,湿度60%,光照时间为10h/d,光照强度为
2000lux,14小时暗培养;后期耗时45至65天培养结束获得丛生苗;
其中的幼苗增殖培养基按:MS+NAA0.5mg/L+蔗糖35g/L+琼脂5g/L的配方配制,pH设置为6.5。
[0015] 4)、壮苗生根:将步骤3)增殖培养获得的丛生苗,选取长势旺盛、均匀、长至2~3cm,将丛生苗从基部进行分割进行第二次扩繁,系数设置为8倍,均匀转移到设有壮苗生根培养基的壮苗生根增殖瓶中上进行壮苗生根培养;
其中设置的培养条件为:壮苗初期的14天,进行暗培养,温度设置为25℃,湿度60%;后期时间进行光照与暗培养交替培养,温度设置为25℃,光照时间为12h/d,光照强度为
2800lux,12小时暗培养;后期耗时65天培养获得壮苗生根;
其中的壮苗生根培养基按:MS+NAA0.35mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L+香蕉120g/L的配方配制,pH设置为6.3
5)、移栽:根据步骤3)壮苗生根培养获得的小苗基本均长至4~5cm高、大部分长出长度大于等于2cm的根三条以上,获得可出瓶种植种苗,将可出瓶种植种苗从组培瓶中取出,采用清水洗除根部携带培养基,即可获得种植种苗。
[0016] 其中实施例1基本用时在198天时间完成获取的种植种苗成苗率达到93%,剩余种苗再进行数日培养后也符合要求,总共成苗率为99%,并且整体种苗叶片色泽光鲜靓丽,竖直挺拔,生长弯曲现象不明显。
[0017] 实施例2:一种铁皮石斛组培快速繁殖方法,包括如下步骤:
1)、取材:选用生长健壮的铁皮石斛上结的120天未开裂的成熟蒴果,将其采用无菌洗液洗净、沥干后备用;
2)、种子的诱导萌发与分化:将步骤1)所得的蒴果经消毒后,切除其首尾两端各0 .3~
0  .7cm后纵向剖开,取出种子,将种子均匀接种到实施例2的种子萌发分化培养基上,在组培室内进行培养;
其中实施例2组培室设置的培养条件为:诱导初期设置15天时间,进行暗培养,温度设置为24℃,湿度70%;后期则进行光照与暗培养交替培养,温度设置为25℃,湿度70%,光照时间为8h/d,光照强度为1200lux,16小时暗培养;耗时44天培养结束获得原球茎;
其中的萌发分化培养基按MS+NAA0.25mg/L+蔗25g/L+琼脂10g/L+土豆20g/L配制,pH设置为6.3。
[0018] 3)、幼苗的增殖:将将步骤2)所获得的原球茎,选取长势旺盛、均匀的原球茎,进行一次扩繁,系数设置为95倍,均匀转接于幼苗增殖培养基进行增殖培养;其中设置的培养条件为:增殖初期设置为15天,进行暗培养,温度设置为25℃,湿度
70%;后期时间设置为53天,进行光照与暗培养交替培养,温度设置为25℃,湿度70%,光照时间为10h/d,光照强度为2500lux,14小时暗培养;培养结束获得丛生苗;
其中的幼苗增殖培养基按:MS+NAA0.45mg/L+蔗糖35g/L+琼脂10g/L的配方配制,pH设置为6.4。
[0019] 4)、壮苗生根:将步骤3)增殖培养获得的丛生苗,选取长势旺盛、均匀、长至2~3cm,将丛生苗从基部进行分割进行第二次扩繁,系数设置为8倍,均匀转移到壮苗生根培养基上进行壮苗生根培养;
其中设置的培养条件为:壮苗初期15天,进行暗培养,温度设置为25℃,湿度70%;后期设置62天,进行光照与暗培养交替培养,温度设置为24~26℃,光照时间为12h/d,光照强度为3000lux,12小时暗培养;培养结束获得壮苗生根;
其中的壮苗生根培养基按:MS+NAA0.35mg/L+蔗糖35g/L+琼脂10g/L+香蕉120g/L的配方配制,pH设置为6.3 。
[0020] 5)、移栽:根据步骤3)壮苗生根培养获得的小苗基本均长至4~5cm高、大部分长出长度大于等于2cm的根至少2条时,获得可出瓶种植种苗,将可出瓶种植种苗从组培瓶中取出,采用清水洗除根部携带培养基,即可获得种植种苗。
[0021] 其中的MS培养基中还添加钾肥0.3g/L、硅肥0.2g/L。
[0022] 其中实施例2基本用时在204天时间完成获取的种植种苗成苗率达到94%,剩余种苗再进行数日培养后也符合要求,总共成苗率为99%,且整体种苗叶片色泽光鲜靓丽,竖直挺拔,生长弯曲现象不明显,并且所得的单苗重量普遍超过实施例1中的种苗。
[0023] 对比例1:与实施例1相比,在步骤2)至步骤4)中的设置培养条件中前期的时间均不采用暗处理,直接全程采用光照与暗培养交替培养的方式进行培养,其他与实施例1相同。
[0024] 在步骤2)总共用时66天得到原球茎,在步骤3)总共用时78天,在步骤4)总共用时90天,合计总用时234天完成84%种苗的成苗,后续完成94%的成苗,并且对比例1中的种苗弯曲现象存在较为明显,叶片色泽较为暗淡,成苗效果不佳。
[0025] 对比例2:与实施例2相比,在步骤2)至步骤4)中的设置培养条件中前期的时间均不采用暗处理,直接全程采用光照与暗培养交替培养的方式进行培养,其他与实施例2相同。
[0026] 在步骤2)总共用时67天得到原球茎,在步骤3)总共用时82天,在步骤4)总共用时92天,合计总用时241天完成85%种苗的成苗,后续完成95%的成苗,并且对比例2中的种苗弯曲现象存在较为明显,叶片色泽较为暗淡,成苗效果不佳,相对对比例1的种苗质量有所提升。
[0027] 从以上结果可以看出,本发明通过采用在各个增殖培养步骤的前期进行暗培养接近两周时间的方式,能有效缩短铁皮石斛种苗的生长时间,并且整体的成苗率更高,种植苗的品相更好,更具市场价值,另外在培养基中添加钾肥和硅肥也能有效提升壮苗成长质量。
[0028] 本发明公开的铁皮石斛组培快速繁殖的方法,所培育的组培苗健壮,移栽成活率高,质量稳定,有利于促进铁皮石斛生产规模的扩大,具有广阔的市场前景。本发明公开的铁皮石斛组培快速繁殖的方法,采用组培技术进行繁殖,增殖效率非常高,能够实现铁皮石斛的大规模生产,操作简单,易于推广。
[0029] 此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
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