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一种龙葵离体快速繁殖方法

阅读:4发布:2021-09-19

专利汇可以提供一种龙葵离体快速繁殖方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且一种龙葵离体快速繁殖方法,属于 植物 组织培养领域,本 发明 以龙葵 种子 为试验材料建立无菌系,选取无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,以MS为基本培养基,添加 植物生长调节剂 6-BA、NAA或IAA诱导愈伤组织,再经分化培养、生根培养及炼苗移栽等过程在短时间内成功获得大量再生植株,建立龙葵组织培养快速繁殖技术体系,推动其规模化发展。本发明的优点是:本发明以龙葵种子为试验材料,通过愈伤组织诱导培养、分化培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了龙葵离体再生植株,建立龙葵组织培养快速繁殖技术体系,为龙葵有效成分的提取提供遗传性能稳定且具有较高整齐度的无菌 幼苗 。,下面是一种龙葵离体快速繁殖方法专利的具体信息内容。

1.一种龙葵离体快速繁殖方法,其特征在于:所述方法包括以下步骤:
步骤一:无菌系的建立:选择果实饱满的龙葵种子作为外植体,首先使用无菌浸泡龙葵种子24 h,期间更换3次无菌水,然后在无菌条件下先用体积分数为75%的酒精浸泡30 s,用无菌水清洗4次,再用体积分数为10%的NaClO溶液浸泡龙葵种子10 min,最后再用无菌水清洗4次,将龙葵种子接种于MS培养基上,置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照16 h,在培~
温度20℃,空气相对湿度为70% 80%的条件下对龙葵种子进行培养,至株高为5 cm时进行~
愈伤组织培养;
步骤二:愈伤组织诱导:将步骤一获得的无菌苗的子叶和下胚轴作为外植体,进行脱分化培养,其中,子叶直接切取,下胚轴切取1 cm长度,将子叶的背面朝下、下胚轴切口向下接种到诱导培养基进行愈伤组织诱导培养,接种后置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照10 ~
h,在培养温度20℃,空气相对湿度为70% 80%的条件下培养15天;
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步骤三:分化培养:将步骤二获得的愈伤组织取出切成边长大小为0.5 cm的小接种至分化培养基进行分化培养,接种后置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照16 h,在培养温~
度20℃,空气相对湿度为70% 80%的条件下培养20天,得到试管苗;
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步骤四:生根培养:从基部切取步骤三分化培养获得的试管苗接种至生根培养基中进行诱导生根,接种后置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照10 h,在培养温度20℃,空气相~
对湿度为70% 80%的条件下培养21天,得到瓶苗;
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步骤五:炼苗移栽:将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗,瓶苗移至常温下4 5天后,打开封口膜2 3天,然后用清水洗净根部残留的培养基,移栽到已消毒的含有~ ~
细沙的基质中,移栽前用体积分数为5‰的高锰酸溶液对基质喷淋消毒,然后再用清水冲淋3 5遍,移栽时需将基质压实,并进行单株移植,早晚喷雾,保证生长环境潮湿。
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2.根据权利要求1所述的一种龙葵离体快速繁殖方法,其特征在于:步骤二中,所述的诱导培养基为:MS+0.5 mg/L6-BA+2.0 mg/L IAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉或MS+0.5 mg/L6-BA+1.0 mg/L IAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉,pH值均为5.8。
3.根据权利要求1所述的一种龙葵离体快速繁殖方法,其特征在于:步骤三中,所述的分化培养基为:MS+2.0 mg/L6-BA+0.1 mg/LNAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉,pH值为5.8。
4.根据权利要求1所述的一种龙葵离体快速繁殖方法,其特征在于:步骤四中,所述的生根培养基为:1/2MS+0.05mg/LNAA+15 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉或1/2MS+0.05mg/L IAA+15 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉,pH值为5.8。

说明书全文

一种龙葵离体快速繁殖方法

技术领域

[0001] 本发明属于植物组织培养技术领域,具体涉及一种龙葵离体快速繁殖方法。

背景技术

[0002] 龙葵(Solanum nigrum L.)属于茄科茄属,其浆果和叶子均可食用,一年生草本植物。据《本草纲目》记载,龙葵全草入药,可治痈疽肿毒和跌打损伤,也能清热解毒和利尿降压。但叶子含有大量生物,须经煮熟后方可解毒,几乎在全国都有分布。龙葵果成熟时为紫黑色,味甜稍酸,富含维生素和基酸,含量为番茄的数倍,也含少量的澳洲茄碱、澳洲茄边碱和维生素C等,可杀菌消炎,对气管炎、前列腺炎、急性肾炎等有一定的疗效。龙葵果未成熟时有较大毒性,成熟后毒性很小,加热也可分解掉大部分毒性物质。龙葵幼苗可作为野菜食用,龙葵果实更因其丰富的氨基酸和维生素成为一种潜在的果资源。另外,从龙葵中还可提取出食用色素,其开发利用越来越受到人们的关注。
[0003] 龙葵在22-30℃下生长茂盛,在15-20℃下适宜开花并且结实率高。龙葵对土壤要求不是十分严格,适宜的土壤pH值为5.5-6.5,若土壤具有较强的保肥、保水力、且有机质含量丰富,则龙葵在此环境下生长良好。若土壤通气不良且缺乏有机质,则龙葵在此环境下植株长势相对弱小,其根系生长不健全,不能作为商品的加工材料。而且龙葵在高温高湿的夏秋季生长困难,在冬春季植株发育缓慢,其嫩梢容易纤维老化,商品性差,严重阻碍了其大规模生产的需要。目前,龙葵一般采用野生龙葵植株的种子播种,常受季节条件的限制,不能大规模地培植生产。因此,通过植物组织培养技术获得无菌植株并建立一套完整的优质种苗繁育体系已经成为当务之急。

发明内容

[0004] 本发明的目的是为了解决现有的龙葵植株播种受季节条件的限制,提供一种龙葵离体快速繁殖方法。
[0005] 为实现上述目的,本发明采取的技术方案如下:一种龙葵离体快速繁殖方法,所述方法包括以下步骤:
步骤一:无菌系的建立:选择果实饱满的龙葵种子作为外植体,首先使用无菌水浸泡龙葵种子24 h,期间更换3次无菌水,然后在无菌条件下先用体积分数为75%的酒精浸泡30 s,用无菌水清洗4次,再用体积分数为10%的NaClO(次氯酸钠)溶液浸泡龙葵种子10 min,最后再用无菌水清洗4次,将龙葵种子接种于MS培养基上,置于1000 lx 2000 lx光照强度下光~
照16 h,在培养温度20℃,空气相对湿度为70% 80%的条件下对龙葵种子进行培养,至株高~
为5 cm时进行愈伤组织培养;
步骤二:愈伤组织诱导:将步骤一获得的无菌苗的子叶和下胚轴作为外植体,进行脱分化培养,其中,子叶直接切取,下胚轴切取1 cm,将子叶的背面朝下、下胚轴切口向下接种到诱导培养基进行愈伤组织诱导培养,接种后置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照10 h,在~
培养温度20℃,空气相对湿度为70% 80%的条件下培养15天;
~
步骤三:分化培养:将步骤二获得的愈伤组织取出切成边长大小为0.5 cm的小接种至分化培养基进行分化培养,接种后置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照16 h,在培养温~
度20℃,空气相对湿度为70% 80%的条件下培养20天,得到试管苗;
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步骤四:生根培养:从基部切取步骤三分化培养获得的试管苗接种至生根培养基中进行诱导生根,接种后置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照10 h,在培养温度20℃,空气相~
对湿度为70% 80%的条件下培养21天,得到瓶苗;
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步骤五:炼苗移栽:将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗,瓶苗移至常温下4 5天后,打开封口膜2 3天,然后用清水洗净根部残留的培养基,移栽到已消毒的含有~ ~
细沙的基质中,移栽前用体积分数为5‰高锰酸溶液对基质喷淋消毒,然后再用清水冲淋
3 5遍,移栽时需将基质压实,并进行单株移植,早晚喷雾,保证生长环境潮湿。
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[0006] 本发明相对于现有技术的有益效果是:本发明以龙葵种子为试验材料,通过愈伤组织诱导培养、分化培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了龙葵离体再生植株,建立龙葵组织培养快速繁殖技术体系,为龙葵有效成分的提取提供遗传性能稳定且具有较高整齐度的无菌幼苗

具体实施方式

[0007] 下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步的说明,但并不局限于此,凡是对本发明技术方案进行修正或等同替换,而不脱离本发明技术方案的精神范围,均应涵盖在本发明的保护范围之中。
[0008] 本发明以龙葵种子为试验材料建立无菌系,选取无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,以MS为基本培养基,添加植物生长调节剂6-BA、NAA或IAA,先诱导愈伤组织,再经分化培养、生根培养及炼苗移栽等过程在短时间内成功获得大量再生植株,建立龙葵组织培养快速繁殖技术体系,推动其规模化发展。
[0009] 具体实施方式一:本实施方式记载的是一种龙葵离体快速繁殖方法,所述方法包括以下步骤:步骤一:无菌系的建立:选择果实饱满的龙葵种子作为外植体,首先使用无菌水浸泡龙葵种子24 h,期间更换3次无菌水,然后在无菌条件下先用体积分数为75%的酒精浸泡30 s,用无菌水清洗4次,再用体积分数为10%的NaClO溶液浸泡龙葵种子10 min,作用是消毒,最后再用无菌水清洗4次,将龙葵种子接种于MS培养基上,置于1000 lx 2000 lx光照强度下~
光照16 h,在培养温度20℃,空气相对湿度为70% 80%的条件下对龙葵种子进行培养,至株~
高为5 cm时进行愈伤组织培养;
步骤二:愈伤组织诱导:将步骤一获得的无菌苗的子叶和下胚轴作为外植体,进行脱分化培养,其中,子叶直接切取,下胚轴切取1 cm长度,将子叶的背面朝下、下胚轴切口向下接种到诱导培养基进行愈伤组织诱导培养,接种后置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照10 ~
h,在培养温度20℃,空气相对湿度为70% 80%的条件下进行培养,15天后统计诱导情况;
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步骤三:分化培养:将步骤二获得的愈伤组织取出切成边长大小为0.5 cm的小块接种至分化培养基进行分化培养,接种后置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照16 h,培养温度~
20℃,空气相对湿度为70% 80%的条件下进行培养,20天后,得到试管苗,统计分化情况;
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步骤四:生根培养:从基部切取步骤三分化培养获得的健壮试管苗接种至生根培养基中进行诱导生根,接种后置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照10 h,在培养温度20℃,空~
气相对湿度为70% 80%的条件下进行培养,21天后,得到瓶苗,统计生根情况;
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步骤五:炼苗移栽:将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗,瓶苗移至常温下4 5天后,打开封口膜2 3天,然后用清水洗净根部残留的培养基,移栽到已消毒的含有~ ~
细沙的基质中,移栽前用体积分数为5‰的高锰酸钾溶液对基质喷淋消毒,然后再用清水冲淋3 5遍,移栽时需将基质压实,并进行单株移植,早晚喷雾,保证生长环境潮湿,移栽7天后~
统计成活率。
[0010] 具体实施方式二:具体实施方式一所述的一种龙葵离体快速繁殖方法,步骤二中,所述的诱导培养基为:MS+0.5 mg/L6-BA+2.0 mg/L IAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉或MS+0.5 mg/L6-BA+1.0 mg/L IAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉,pH值均为5.8。
[0011] 具体实施方式三:具体实施方式一所述的一种龙葵离体快速繁殖方法,步骤三中,所述的分化培养基为:MS+2.0 mg/L6-BA+0.1 mg/LNAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉,pH值为5.8。
[0012] 具体实施方式四:具体实施方式一所述的一种龙葵离体快速繁殖方法,步骤四中,所述的生根培养基为:1/2MS+0.05mg/LNAA+15 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉或1/2MS+0.05mg/L IAA+15 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉,pH值为5.8。
[0013] 实施例1(1)无菌系的建立:选择果实饱满的种子为外植体,无菌水浸泡24 h,期间更换3次无菌水,然后在无菌条件下先用体积分数为75%的酒精浸泡30 s,用无菌水漂洗4次,再用体积分数为10%的NaClO溶液消毒种子10 min,最后以无菌水漂洗种子4次,将消毒完成的种子接种于MS培养基上,置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照16 h,在培养温度20℃,空气相对湿~
度为70% 80%的条件下对种子进行培养,统计其萌发率。
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[0014] (2)愈伤组织诱导:将步骤(1)获得的无菌苗选取其子叶和下胚轴作为外植体进行脱分化培养,其中,子叶直接切取,下胚轴切取1 cm长度,将子叶的背面朝下、下胚轴切口向下接种到诱导培养基进行愈伤组织诱导培养,接种后置于1000 lx 2000 lx光照强度下光~照10 h,在培养温度20℃,空气相对湿度为70% 80%的条件下进行培养,15天后诱导率为~
85%。所述的诱导培养基为:MS+0.5 mg/L6-BA+2.0 mg/L IAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉(适合子叶)或MS+0.5 mg/L6-BA+1.0 mg/L IAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉(适合下胚轴),pH值为5.8。
[0015] (3)分化培养:将步骤(2)获得的愈伤组织取出切成边长大小约0.5 cm的小块接种至分化培养基进行分化培养,接种后置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照16 h,在培养温~度20℃,空气相对湿度为70% 80%的条件下进行培养,20天后子叶不定芽的分化率达89.2%,~
胚轴不定芽分化率达67.3%;子叶不定芽平均数为8个,胚轴不定芽平均数为3个。所述的分化培养基为:MS+2.0 mg/L6-BA+0.1 mg/LNAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉,pH值为5.8。
[0016] (4)生根培养:从基部切取步骤(3)分化培养获得的健壮试管苗接种至生根培养基中进行诱导生根,接种后置于1000 lx 2000 lx光照强度下光照10 h,在培养温度20℃,空~气相对湿度为70% 80%的条件下进行培养,20天后生根率为90%以上。所述的生根培养基为:
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1/2MS+0.05 mg/LNAA+15 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉或1/2MS+0.05 mg/LIAA+15 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉,pH值为5.8。
[0017] (5)炼苗移栽:将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗,瓶苗移至常温下4 5天后,打开封口膜2 3天,然后用清水洗净根部残留的培养基,移栽到已消毒的含有~ ~细沙的基质中,移栽前用体积分数为5‰的高猛酸钾溶液对基质喷淋消毒,然后再用清水冲淋3 5遍,移栽时需将基质压实,并进行单株移植,早晚喷雾,保证生长环境潮湿,移栽10天~
后成活率可达95%。
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