一种露镜的离体快速繁殖培养方法
阅读：1034发布：2020-07-09
专利汇可以提供一种露镜的离体快速繁殖培养方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种露镜的离体快速繁殖培养方法，属于 植物 组织培养技术领域，本发明选择带有侧芽或顶芽的茎段作物外植体，将表面用酒精、升汞消毒处理得到无菌植株后，通过诱导、增殖、生根培养及炼苗移栽后，得到露镜的完整植株；本发明通过对露镜茎段进行组织培养获得了露镜 幼苗 ，该方法材料易得，消毒方便，成活率高，生产周期短，大大提高了露镜的繁殖系数和繁殖速度；其次，本发明首次实现对荨麻科冷 水 花属植物露镜进行离体快速繁殖培养，为露镜植物组织培养产业化、规模化生产体系奠定 基础 。，下面是一种露镜的离体快速繁殖培养方法专利的具体信息内容。
1.一种露镜的离体快速繁殖培养方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
（1）外植体的消毒处理：选取外植体用流动自来水冲洗表面，在超净工作台上用75%酒精侵泡30s，无菌水清洗3-4次，再用0.1%升汞，滴入2滴吐温消毒5-8min，期间不时振荡，无菌水冲洗4-5次，用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒受伤的部分；
（2）诱导培养：将通过步骤（1）得到的无菌外植体接种于诱导培养基MS+0.6-0.8mg/L6-BA+0.05-0.2mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，诱导培养14-21d 后，外植体基部长出丛生芽；
（3）增殖培养：将通过步骤（2）形成的丛生芽2-3个为一丛，接种到增殖培养基MS+0.4-
0.6mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.1-0.2mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为
5.8-6.0，增殖培养4-6周后，增殖3-4倍，丛生芽的株高长至1.5-2cm；
（4）生根培养：将通过步骤（3）得到的丛生苗分割成2-3株，接种到生根培养基MS+0.05-
0.1mg/L6-BA+0.5-1.0mg/LNAA+0.1-0.2mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-
6.0，生根培养4-6周后可出苗；
（5）炼苗与移栽：将通过步骤（4）得到的生根苗移到温室驯化5-7d，用镊子轻轻取出组培瓶苗，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡10 min，取出晾干水分，栽植于基质中，遮光75-85%，湿度60-80%，培养10-14d后，逐渐增加光照，降低湿度，得到露镜的完整植株。
2.根据权利要求1所述的一种露镜的离体快速繁殖培养方法，其特征在于：步骤（1）中，所述外植体为1cm带有侧芽或顶芽的露镜幼嫩茎。
3.根据权利要求1所述的一种露镜的离体快速繁殖培养方法，其特征在于：步骤（2）-（4）中，培养条件为温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-
60％。
4.根据权利要求1所述的一种露镜的离体快速繁殖培养方法，其特征在于：步骤（5）中，用镊子轻轻取出组培瓶苗后，用消毒的剪刀剪去生根苗根部。
5.根据权利要求1所述的一种露镜的离体快速繁殖培养方法，其特征在于：步骤（5）中，基质包括蛭石、腐殖土和珍珠岩，其比例为1:1:1。
一种露镜的离体快速繁殖培养方法
技术领域
背景技术
[0002] 露镜（Pilea serpyllacea 'Globosa'），荨麻科冷水花属，雌雄异株，雌花非常小，花冠3裂，紫红色；雄花稍大点3.5mm，花冠4裂，白色。绿色的枝干肉质而多数，细小的叶疏散排布在枝干上，一般会在枝顶会形成聚生。露镜主要的观赏点还是在它那奇特的叶子，椭球状的叶子上表皮为绿色的圆球面，下表面则是半球形的透明窗面，如同一滴滴晶莹剔透的露珠。强光照射下，茎干和叶表会变成漂亮的红紫色，有莹润的光泽。紫色的叶片上表皮和叶肉组织中的钟乳体，都能保护叶片免受强紫外线的伤害，而半透明的下表面则能帮助吸收一些地面反射的光线。原产于南美洲西部的高海拔地区（委内瑞拉，玻利维亚，哥伦比亚，厄瓜多尔，秘鲁），喜欢水分充足的腐殖质土壤，露镜养护比较困难，一方面，它喜欢湿度大的环境，甚至可以半水生；另一方面，它不耐高温湿热的天气，所以夏天要营造光照充足和通风良好的环境。
[0003] 目前，露镜养护在日本较多，在国内养的人是屈指可数。露镜繁殖一般采用扦插方式，繁殖速度较慢；种子繁殖不易，雌雄异株，花非常小，授粉困难。露镜的叶片观赏性独特，小巧玲珑，深受广大爱好者喜爱，又苦于市场稀缺，因此，具有潜在的市场前景及经济价值。
发明内容
[0004] 为了克服背景技术中存在的问题，本发明提供了一种露镜的离体快速繁殖培养方法，建立良好的露镜组培再生体系，与传统繁殖方式相比，不受季节、材料、环境的限制，人工控制植物所需要的环境，全年均可生产，解决了露镜繁殖方式单一、速度慢、市场稀缺等问题，为露镜种苗产业化、市场化提供技术支持。
[0005] 为实现上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：所述的露镜的离体快速繁殖培养方法，具体包括以下步骤：
（1）外植体的消毒处理：选取外植体用流动自来水冲洗表面，在超净工作台上用75%酒精侵泡30s，无菌水清洗3-4次，再用0.1%升汞，滴入2滴吐温消毒5-8min，期间不时振荡，无菌水冲洗4-5次，用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒受伤的部分；
（2）诱导培养：将通过步骤（1）得到的无菌外植体接种于诱导培养基MS+0.6-0.8mg/L6-BA+0.05-0.2mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，诱导培养14-21d 后，外植体基部长出丛生芽；
（3）增殖培养：将通过步骤（2）形成的丛生芽2-3个为一丛，接种到增殖培养基MS+0.4-
0.6mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.1-0.2mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为
5.8-6.0，增殖培养4-6周后，增殖3-4倍，丛生芽的株高长至1.5-2cm；
（4）生根培养：将通过步骤（3）得到的丛生苗分割成2-3株，接种到生根培养基MS+0.05-
0.1mg/L6-BA+0.5-1.0mg/LNAA+0.1-0.2mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-
6.0，生根培养4-6周后可出苗；
（5）炼苗与移栽：将通过步骤（4）得到的生根苗移到温室驯化5-7d，用镊子轻轻取出组培瓶苗，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡10 min，取出晾干水分，栽植于基质中，遮光75-85%，湿度60-80%，培养10-14d后，逐渐增加光照，降低湿度，得到露镜的完整植株。
（1）外植体的消毒处理：选取外植体用流动自来水冲洗表面，在超净工作台上用75%酒精侵泡30s，无菌水清洗3-4次，再用0.1%升汞，滴入2滴吐温消毒5-8min，期间不时振荡，无菌水冲洗4-5次，用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒受伤的部分；
（2）诱导培养：将通过步骤（1）得到的无菌外植体接种于诱导培养基MS+0.6-0.8mg/L6-BA+0.05-0.2mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，诱导培养14-21d 后，外植体基部长出丛生芽；
（3）增殖培养：将通过步骤（2）形成的丛生芽2-3个为一丛，接种到增殖培养基MS+0.4-
0.6mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.1-0.2mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为
5.8-6.0，增殖培养4-6周后，增殖3-4倍，丛生芽的株高长至1.5-2cm；
（4）生根培养：将通过步骤（3）得到的丛生苗分割成2-3株，接种到生根培养基MS+0.05-
0.1mg/L6-BA+0.5-1.0mg/LNAA+0.1-0.2mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-
6.0，生根培养4-6周后可出苗；
（5）炼苗与移栽：将通过步骤（4）得到的生根苗移到温室驯化5-7d，用镊子轻轻取出组培瓶苗，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡10 min，取出晾干水分，栽植于基质中，遮光75-85%，湿度60-80%，培养10-14d后，逐渐增加光照，降低湿度，得到露镜的完整植株。
[0006] 进一步的，步骤（1）中，所述外植体为1cm带有侧芽或顶芽的露镜幼嫩茎。
[0008] 进一步的，步骤（5）中，用镊子轻轻取出组培瓶苗后，用消毒的剪刀剪去生根苗根部。
[0009] 进一步的，步骤（5）中，基质包括蛭石、腐殖土和珍珠岩，其比例为1:1:1。
[0010] 本发明的有益效果：本发明通过建立露镜的组织培养快繁体系，生产不受地区、季节、气候限制，外植体消毒成活率可到65%以上，诱导率达到95%以上，繁殖系数达到3-4倍，生根率100％，移栽成活率90％以上，便于工厂化育苗，为露镜植物组织培养产业化、规模化生产体系奠定基础，为其他本属植物品种组培快繁体系提供理论基础。
具体实施方式
[0011] 为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面将对本发明的优选实施例进行详细的说明，以方便技术人员理解。
[0012] 实施例1（1）外植体的消毒处理：选取露镜幼嫩的小枝切成1cm左右带有侧芽或顶芽的茎段作为外植体，用流动自来水冲洗表面，在超净工作台上用75%酒精侵泡30s，无菌水清洗3-4次，再用0.1%升汞（质量比），滴入2滴吐温消毒5-8min，期间不时振荡，无菌水冲洗4-5次，用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒受伤的部分，接种到诱导培养基中。1周后统计成活苗数，污染率10.5%，成活率达到65%以上。
[0013] （2）诱导培养：将通过步骤（1）得到的无菌外植体接种于诱导培养基MS+0.6-0.8mg/L6-BA+0.05-0.2mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-60％的条件下进行诱导培养，培养
5-7d基部开始萌动膨大，培养14-21d 后，外植体基部长出丛生芽。3周后统计诱导率达到
95%以上。
5-7d基部开始萌动膨大，培养14-21d 后，外植体基部长出丛生芽。3周后统计诱导率达到
95%以上。
[0014] （3）增殖培养：将通过步骤（2）形成的丛生芽2-3个为一丛，接种到增殖培养基MS+0.4-0.6mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.1-0.2mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-60％的条件下进行增殖培养，培养4-6周后，增殖至3-4倍，丛生芽的株高长至1.5-2cm。
[0015] （4）生根培养：将通过步骤（3）得到的丛生苗分割成2-3株，接种到生根培养基MS+0.05-0.1mg/L6-BA+0.5-1.0mg/LNAA+0.1-0.2mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-60％的条件下进行生根培养，培养1-2周开始生根，培养4-6周后可出苗，生根率100%，根长1.5-2cm，株高3-4cm；
（5）炼苗与移栽：将通过步骤（4）得到的生根苗移到温室驯化5-7d，用镊子轻轻取出组培瓶苗，取出后用消毒的剪刀剪去根部，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡
10 min，取出晾干水分，栽植于基质（腐殖土：珍珠岩=1:1）中，遮光75-85%，湿度60-80%，培养10-14d后，逐渐增加光照，降低湿度，得到露镜的完整植株，正常温室培养。4周后统计，成活率达到90%以上。
（5）炼苗与移栽：将通过步骤（4）得到的生根苗移到温室驯化5-7d，用镊子轻轻取出组培瓶苗，取出后用消毒的剪刀剪去根部，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡
10 min，取出晾干水分，栽植于基质（腐殖土：珍珠岩=1:1）中，遮光75-85%，湿度60-80%，培养10-14d后，逐渐增加光照，降低湿度，得到露镜的完整植株，正常温室培养。4周后统计，成活率达到90%以上。
[0016] 实施例2（1）外植体的消毒处理：选取露镜幼嫩的小枝切成1cm左右带有侧芽或顶芽的茎段作为外植体，用流动自来水冲洗表面，在超净工作台上用75%酒精侵泡30s，无菌水清洗3-4次，再用5%体积比的次氯酸钠消毒8-10min，期间不时振荡，无菌水冲洗4-5次，用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒受伤的部分，接种到诱导培养基中。1周后统计成活苗数，污染率82.6%，成活率达到70.4%。
[0017] （2）诱导培养：将通过步骤（1）得到的无菌外植体接种于诱导培养基MS+0.6-0.8mg/L6-BA+0.05-0.2mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-60％的条件下进行诱导培养，培养
5-7d基部开始萌动膨大，培养14-21d 后，外植体基部长出丛生芽。3周后统计诱导率达到
95%。
5-7d基部开始萌动膨大，培养14-21d 后，外植体基部长出丛生芽。3周后统计诱导率达到
95%。
[0018] （3）增殖培养：将通过步骤（2）形成的丛生芽2-3个为一丛，接种到增殖培养基MS+0.4-0.6mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.05-0.1mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度2000～3000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-60％的条件下进行增殖培养，培养4-6周后，增殖至2-3倍，丛生芽的株高长至3-5.5cm。
[0019] （4）生根培养：将通过步骤（3）得到的丛生苗分割成2-3株，接种到生根培养基MS+0.05-0.1mg/L6-BA+0.5-1.0mg/LNAA+0.05-0.1mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-60％的条件下进行生根培养，培养1-2周开始生根，培养4-6周后可出苗，生根率100%，根长1.5-2cm，株高4-5cm；
（5）炼苗与移栽：将通过步骤（4）得到的生根苗移到温室驯化5-7d，用镊子轻轻取出组培瓶苗，取出后用消毒的剪刀剪去根部，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡
10 min，取出晾干水分，栽植于基质（蛭石：腐殖土：珍珠岩=1:1:1）中，遮光75-85%，湿度60-
80%，培养20d后，逐渐增加光照，降低湿度，得到露镜的完整植株，正常温室培养。4周后统计，成活率达到95%以上。
（5）炼苗与移栽：将通过步骤（4）得到的生根苗移到温室驯化5-7d，用镊子轻轻取出组培瓶苗，取出后用消毒的剪刀剪去根部，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡
10 min，取出晾干水分，栽植于基质（蛭石：腐殖土：珍珠岩=1:1:1）中，遮光75-85%，湿度60-
80%，培养20d后，逐渐增加光照，降低湿度，得到露镜的完整植株，正常温室培养。4周后统计，成活率达到95%以上。
[0020] 实施例3（1）外植体的消毒处理：选取露镜幼嫩的小枝切成1cm左右带有侧芽或顶芽的茎段作为外植体，用流动自来水冲洗表面，在超净工作台上用75%酒精侵泡30s，无菌水清洗3-4次，再用0.1%升汞（质量比），滴入2滴吐温消毒5-8min，期间不时振荡，无菌水冲洗4-5次，用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒受伤的部分，接种到诱导培养基中。1周后统计成活苗数，污染率10.5%，成活率达到65%以上。
[0021] （2）诱导培养：将通过步骤（1）得到的无菌外植体接种于诱导培养基MS+0.6-0.8mg/L6-BA+0.05-0.2mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度2000～3000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-60％的条件下进行诱导培养，培养
5-7d基部开始萌动膨大，培养14-21d 后，外植体基部长出丛生芽。3周后统计诱导率达到
95%以上。
5-7d基部开始萌动膨大，培养14-21d 后，外植体基部长出丛生芽。3周后统计诱导率达到
95%以上。
[0022] （3）增殖培养：将通过步骤（2）形成的丛生芽2-3个为一丛，接种到增殖培养基MS+0.4-0.6mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.1-0.2mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度2000～3000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-60％的条件下进行增殖培养，培养5-6周后，增殖至2倍，丛生芽的株高长至2-4cm。
[0023] （4）生根培养：将通过步骤（3）得到的丛生苗分割成2-3株，接种到生根培养基MS+0.05-0.1mg/L6-BA+0.5-1.0mg/LNAA+0.1-0.2mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度2000～3000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-60％的条件下进行生根培养，培养1-2周开始生根，培养4-6周后可出苗，生根率100%，根长2-3cm，株高4-5cm；
（5）炼苗与移栽：将通过步骤（4）得到的生根苗移到温室驯化5-7d，用镊子轻轻取出组培瓶苗，取出后用洁净水洗净植株表面培养基后，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡10 min，取出晾干水分，栽植于基质（腐殖土：珍珠岩=1:1）中，遮光75-85%，湿度
60-80%，培养10-14d后，逐渐增加光照，降低湿度，得到露镜的完整植株，正常温室培养。4周后统计，成活率达到70%以上。
（5）炼苗与移栽：将通过步骤（4）得到的生根苗移到温室驯化5-7d，用镊子轻轻取出组培瓶苗，取出后用洁净水洗净植株表面培养基后，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡10 min，取出晾干水分，栽植于基质（腐殖土：珍珠岩=1:1）中，遮光75-85%，湿度
60-80%，培养10-14d后，逐渐增加光照，降低湿度，得到露镜的完整植株，正常温室培养。4周后统计，成活率达到70%以上。
[0024] 实施例4（1）外植体的消毒处理：选取露镜幼嫩的小枝切成1cm左右带有侧芽或顶芽的茎段作为外植体，用流动自来水冲洗表面，在超净工作台上用75%酒精侵泡30s，无菌水清洗3-4次，再用0.1%升汞（质量比），滴入2滴吐温消毒5-8min，期间不时振荡，无菌水冲洗4-5次，用无菌滤纸吸干水分，切去切口消毒受伤的部分，接种到诱导培养基中。1周后统计成活苗数，污染率10.5%，成活率达到65%以上。
[0025] （2）诱导培养：将通过步骤（1）得到的无菌外植体接种于诱导培养基MS+0.6-0.8mg/L6-BA+0.05-0.2mg/LNAA+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-60％的条件下进行诱导培养，培养
5-7d基部开始萌动膨大，培养14-21d 后，外植体基部长出丛生芽。3周后统计诱导率达到
95%以上。
5-7d基部开始萌动膨大，培养14-21d 后，外植体基部长出丛生芽。3周后统计诱导率达到
95%以上。
[0026] （3）增殖培养：将通过步骤（2）形成的丛生芽2-3个为一丛，接种到增殖培养基MS+0.4-0.6mg/L6-BA+0.01-0.1mg/LNAA+0.1-0.2mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-60％的条件下进行增殖培养，培养4-6周后，增殖至3-4倍，丛生芽的株高长至1.5-2cm。
[0027] （4）生根培养：将通过步骤（3）得到的丛生苗分割成2-3株，接种到生根培养基MS+0.05-0.1mg/L6-BA+0.5-1.0mg/LNAA+0.1-0.2mg/L多效唑+20-30g/L糖+7g/L琼脂中，pH值为5.8-6.0，在温度20±2℃、光照强度3000～5000lx、光照12h/d，相对湿度 50％-60％的条件下进行生根培养，培养1-2周开始生根，培养4-6周后可出苗，生根率100%，根长1.5-2cm，株高3-4cm；
（5）炼苗与移栽：将通过步骤（4）得到的生根苗移到温室驯化5-7d，用镊子轻轻取出组培瓶苗，取出后用消毒的剪刀剪去根部，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡
10 min，取出晾干水分，栽植于基质（蛭石：腐殖土：珍珠岩=1:1:1）中，遮光75-85%，湿度60-
80%，培养20d后，逐渐增加光照，降低湿度，得到露镜的完整植株，正常温室培养。4周后统计，成活率达到95%以上。
（5）炼苗与移栽：将通过步骤（4）得到的生根苗移到温室驯化5-7d，用镊子轻轻取出组培瓶苗，取出后用消毒的剪刀剪去根部，用50%多菌灵可湿性粉剂800倍～1000倍全株浸泡
10 min，取出晾干水分，栽植于基质（蛭石：腐殖土：珍珠岩=1:1:1）中，遮光75-85%，湿度60-
80%，培养20d后，逐渐增加光照，降低湿度，得到露镜的完整植株，正常温室培养。4周后统计，成活率达到95%以上。
[0028] 最后说明的是，以上优选实施例仅用于说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。
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