γC细胞因子活性的稳定调节剂
阅读：423发布：2020-05-15
专利汇可以提供γC细胞因子活性的稳定调节剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本文中公开了用以抑制γc-细胞因子的活性的基于共有γc-亚基结合位点的稳定的肽拮抗剂。此类肽拮抗剂能够抑制多个γc-细胞因子家族成员的活性。γc-家族细胞因子与重要的人类 疾病 如白血病、自身免疫疾病、胶原疾病、糖尿病、 皮肤 病、退行性神经元疾病和移 植物 抗宿主病(GvHD)相关。因此，γc-细胞因子活性的 抑制剂 是有价值的 治疗 性和美容性制剂以及研究工具。，下面是γC细胞因子活性的稳定调节剂专利的具体信息内容。
1.包含至少两个白介素(IL)蛋白γc盒D-螺旋区的氨基酸序列的复合肽，其中所述复合肽包含氨基酸序列D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)，其中X表示任何氨基酸，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接。
2.如权利要求1所述的复合肽，其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸被连接以通过闭环复分解反应形成至少一个肽内烃连接子元件，其中所述闭环复分解反应通过Grubb’s催化剂催化。
3.如权利要求1所述的复合肽，其中所述复合肽中的氨基酸选自：天然的氨基酸、非天然的氨基酸、(D)立体化学构型氨基酸、(L)立体化学构型氨基酸、(R)立体化学构型氨基酸和(S)立体化学构型氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸选自：R-烯丙基丙氨酸(CAS:288617-76-5；R3Ala)、S-烯丙基丙氨酸(CAS:288617-71-0；S3Ala)、D-烯丙基甘氨酸(CAS:170642-28-1；D3Gly)、L-烯丙基甘氨酸(CAS:146549-21-5；L3Gly)、R-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-77-6；R5Ala)、S-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-73-2；S5Ala)、R-戊烯基甘氨酸(CAS:1093645-21-6；R5Gly)、S-戊烯基甘氨酸(CAS:856412-22-1；S5Gly)、R-丁烯基丙氨酸(CAS:1311933-82-0；R4Ala)、S-丁烯基丙氨酸(CAS:288617-72-1；S4Ala)、R-丁烯基甘氨酸(CAS:865352-21-2；R4Gly)、S-丁烯基甘氨酸(CAS:851909-08-5；S4Gly)、R-己烯基丙氨酸(CAS:288617-78-7；R6Ala)、S-己烯基丙氨酸(CAS:288617-74-3；S6Ala)、R-己烯基甘氨酸(CAS:1208226-88-3；R6Gly)、S-己烯基甘氨酸(CAS:1251904-51-4；S6Gly)、R-庚烯基丙氨酸(CAS:1311933-84-2；R7Ala)、S-庚烯基丙氨酸(CAS:1311933-83-1；S7Ala)、R-庚烯基甘氨酸(CAS:1262886-63-4；R7Gly)、S-庚烯基甘氨酸(CAS:1058705-57-9；S7Gly)、双取代的双丙烯基甘氨酸(CAS:1311992-97-8；双3Gly)、双取代的双戊烯基甘氨酸(CAS:
1068435-19-7；双5Gly)、双取代的双丁烯基甘氨酸(双4Gly)、双取代的双己烯基甘氨酸(双
6Gly)、双取代的双庚烯基甘氨酸(双7Gly)、R-辛烯基丙氨酸(CAS:945212-26-0；R8Ala)、S-辛烯基丙氨酸(CAS:288617-75-4；S8Ala)、R-辛烯基甘氨酸(CAS:1191429-20-5；R8Gly)和S-辛烯基甘氨酸(CAS:1262886-64-5；S8Gly)。
4.如权利要求1所述的复合肽，其中通过至少一个肽内烃连接的至少两个α-烯基取代的氨基酸通过n-2个氨基酸隔开，其中n表示所述肽内连接所包含的氨基酸的数量。
5.如权利要求1所述的复合肽，其中当通过至少一个肽内烃连接的至少两个α-烯基取代的氨基酸通过3个氨基酸隔开时，所述至少一个肽内烃连接子元件跨所述复合肽的单α-螺旋转角。
6.如权利要求5所述的复合肽，其中当所述复合肽包含一个或多个非连续的单α-螺旋转角时，与所述复合肽的单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于所述复合肽的氨基酸位置i和i+4，其中i是所述单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，且i+4是所述单α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i和i+4包含α-烯基取代的氨基酸。
7.如权利要求6所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R-烯丙基丙氨酸(CAS:288617-76-5；R3Ala)、S-烯丙基丙氨酸(CAS:288617-71-0；S3Ala)、D-烯丙基甘氨酸(CAS:170642-28-1；D3Gly)和L-烯丙基甘氨酸(CAS:146549-21-5；L3Gly)，并且位置i+
4处的α-烯基取代的氨基酸选自R-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-77-6；R5Ala)、S-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-73-2；S5Ala)、R-戊烯基甘氨酸(CAS:1093645-21-6；R5Gly)和S-戊烯基甘氨酸(CAS:856412-22-1；S5Gly)时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式1表示。
8.如权利要求6所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly，并且位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式2表示。
9.如权利要求6所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R-丁烯基丙氨酸(CAS:1311933-82-0；R4Ala)、S-丁烯基丙氨酸(CAS:288617-72-1；S4Ala)、R-丁烯基甘氨酸(CAS:865352-21-2；R4Gly)和S-丁烯基甘氨酸(CAS:851909-08-5；S4Gly)，并且位置i+
4处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式3表示。
10.如权利要求6所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly，并且位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式4表示。
11.如权利要求6所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly，并且位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸选自R-己烯基丙氨酸(CAS:
288617-78-7；R6Ala)、S-己烯基丙氨酸(CAS:288617-74-3；S6Ala)、R-己烯基甘氨酸(CAS:
1208226-88-3；R6Gly)和S-己烯基甘氨酸(CAS:1251904-51-4；S6Gly)时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式5表示。
12.如权利要求6所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly和S6Gly，并且位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式6表示。
13.如权利要求6所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly，并且位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸选自R-庚烯基丙氨酸(CAS:
1311933-84-2；R7Ala)、S-庚烯基丙氨酸(CAS:1311933-83-1；S7Ala)、R-庚烯基甘氨酸(CAS:1262886-63-4；R7Gly)和S-庚烯基甘氨酸(CAS:1058705-57-9；S7Gly)时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式7表示。
14.如权利要求6所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly，并且位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式8表示。
15.如权利要求5所述的复合肽，其中当所述复合肽包含两个或更多个连续的单α-螺旋转角时，与所述复合肽的第一个单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于所述复合肽的氨基酸位置i和i+4，其中i是所述第一个单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+4是所述第一个单α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且与所述复合肽的第二个单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于所述复合肽的氨基酸位置i+4和i+8，其中i+4是所述第二个单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+8是所述第二个单α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i、i+4和i+8包含α-烯基取代的氨基酸。
16.如权利要求15所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双取代的双丙烯基甘氨酸(CAS:
1311992-97-8；双3Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式9表示。
17.如权利要求15所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双取代的双戊烯基甘氨酸(CAS:
1068435-19-7；双5Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式10表示。
18.如权利要求15所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双取代的双丁烯基甘氨酸(双
4Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式11表示。
19.如权利要求15所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双5Gly，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式12表示。
20.如权利要求15所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly和S6Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双4Gly，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly或S6Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式13表示。
21.如权利要求15所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双取代的双己烯基甘氨酸(双
6Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式14表示。
22.如权利要求15所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双3Gly，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式15表示。
23.如权利要求15所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双取代的双庚烯基甘氨酸(双
7Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式16表示。
24.如权利要求1所述的复合肽，其中当通过至少一个肽内烃连接的至少两个α-烯基取代的氨基酸通过6个残基隔开时，所述至少一个肽内烃连接子元件跨所述复合肽的双α-螺旋转角。
25.如权利要求24所述的复合肽，其中当所述复合肽包含一个或多个非连续的双α-螺旋转角时，与所述复合肽的双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于所述复合肽的氨基酸位置i和i+7，其中i是所述双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+7是所述双α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i和i+7包含α-烯基取代的氨基酸。
26.如权利要求25所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly，并且位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸选自R-辛烯基丙氨酸(CAS:
945212-26-0；R8Ala)、S-辛烯基丙氨酸(CAS:288617-75-4；S8Ala)、R-辛烯基甘氨酸(CAS:
1191429-20-5；R8Gly)和S-辛烯基甘氨酸(CAS:1262886-64-5；S8Gly)时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式17表示。
27.如权利要求25所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R8Ala、S8Ala、R8Gly和S8Gly，并且位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式18表示。
28.如权利要求25所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly和S6Gly，并且位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式19表示。
29.如权利要求25所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly，并且位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly和S6Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式20表示。
30.如权利要求24所述的复合肽，其中当所述复合肽包含两个或更多个连续的双α-螺旋转角时，与所述复合肽的第一个双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于所述复合肽的氨基酸位置i和i+7，其中i是所述第一个双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+7是所述第一个双α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且与所述复合肽的第二个双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于所述复合肽的氨基酸位置i+7和i+14，其中i+7是所述第二个双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+14是所述第二个双α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i、i+7和i+14包含α-烯基取代的氨基酸。
31.如权利要求30所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R8Ala、S8Ala、R8Gly和S8Gly，位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸是双5Gly，并且位置i+14处的α-烯基取代的氨基酸选自R8Ala、S8Ala、R8Gly和S8Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式21表示。
32.如权利要求30所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly，位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸是双6Gly，并且位置i+14处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式22表示。
33.如权利要求30所述的复合肽，其中当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly和S6Gly，位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸是双7Gly，并且位置i+14处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly和S6Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式23表示。
34.如权利要求1-33中任一项所述的复合肽，其中所述复合肽的衍生物包含与所述复合肽共享约50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
35.如权利要求1-34中任一项所述的复合肽，其中所述复合肽抑制选自IL-2、IL-4、IL-
7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性。
36.如权利要求1-35中任一项所述的复合肽，还包含信号肽。
37.如权利要求1-36中任一项所述的复合肽，还包含在所述复合肽的N端、C端或侧链残基处缀合的一个或多个另外的部分。
38.如权利要求37所述的复合肽，其中所述一个或多个另外的部分选自：牛血清白蛋白(BSA)、白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)、IgG的Fc区、起支架作用的生物蛋白、针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体、金属离子和聚乙二醇(PEG)。
39.如权利要求1-38中任一项所述的复合肽，其中所述复合肽包含至少两个白介素(IL)蛋白γc盒D-螺旋区的氨基酸序列，其中所述复合肽包含氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)，并且其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接。
40.如权利要求1-38中任一项所述的复合肽，其中所述复合肽包含至少两个白介素(IL)蛋白γc盒D-螺旋区的氨基酸序列，其中所述复合肽包含氨基酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)，并且其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接。
41.如权利要求1-38中任一项所述的复合肽，其中所述复合肽抑制IL-15、IL-21或它们的组合的细胞生长促进活性。
42.如权利要求1-38中任一项所述的复合肽，其中所述复合肽抑制IL-15的STAT5信号转导活性。
43.如权利要求1-38中任一项所述的复合肽，其中所述复合肽抑制IL-21的STAT3信号转导活性。
44.如权利要求1-38中任一项所述的复合肽，其中相比无肽内烃连接子元件的未修饰的复合肽，具有至少一个肽内烃连接子元件的复合肽的胃稳定性增加。
45.药物组合物，其包含：
治疗有效量的复合肽或其衍生物；和
药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合；
其中所述复合肽选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3。
46.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-
4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性。
47.预防或治疗γc-细胞因子介导的疾病的方法，所述方法包括：
向有需要的对象给予包含以下的药物组合物，从而预防或治疗γc-细胞因子介导的疾病：
治疗有效量的复合肽或其衍生物；和
药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合；
其中所述复合肽选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接，
其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，
其中所述其衍生物包含与所述复合肽共享约50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
48.如权利要求47所述的方法，其中所述γc-细胞因子介导的疾病选自：CD4白血病、CD8白血病、LGL白血病、系统性红斑狼疮、干燥综合征、韦格纳肉芽肿、乳糜泻、桥本甲状腺炎、类风湿性关节炎、糖尿病、牛皮癣、多发性硬化、葡萄膜炎、眼部炎症、移植物抗宿主病(GvHD)、炎性肠病(IBD，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病)、系统性红斑狼疮和斑秃。
49.预防或治疗HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病的方法，所述方法包括：
向有需要的对象给予包含以下的药物组合物，从而预防或治疗HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病：
治疗有效量的复合肽或其衍生物；和
药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合；
其中所述复合肽选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接，
其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，
其中所述其衍生物包含与所述复合肽共享约50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
50.如权利要求49所述的方法，其中所述HAM/TSP相关的疾病选自：成人T细胞白血病(ATL)、HTLV相关的脊髓病/热带痉挛性下肢轻瘫(HAM/TSP)和与HTLV相关的其他非肿瘤炎性疾病，如葡萄膜炎(HU)、关节病、肺病、皮炎、外分泌腺病和肌炎。
51.预防或治疗炎性呼吸性疾病的方法，所述方法包括：
向有需要的对象给予包含以下的药物组合物，从而预防或治疗炎性呼吸性疾病：
治疗有效量的复合肽或其衍生物；和
药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合；
其中所述复合肽选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接，
其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，
其中所述其衍生物包含与所述复合肽共享约50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
52.如权利要求51所述的方法，其中所述炎性呼吸性疾病选自：哮喘、窦炎、枯草热、支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、过敏性鼻炎、急性和慢性耳炎、以及肺纤维化。
53.预防或治疗美容性病况的方法，所述方法包括：
向有需要的对象给予包含以下的药物组合物，从而预防或治疗美容性病况：
治疗有效量的复合肽或其衍生物；和
药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合；
其中所述复合肽选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接，
其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，
其中所述其衍生物包含与所述复合肽共享约50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述美容性病况选自：痤疮、脱发、晒伤、指甲保养和出现衰老。
55.用于预防或治疗患者中的病况的试剂盒，其中所述病况是γc-细胞因子介导的疾病、HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病、炎性呼吸性疾病、美容性病况，或它们的组合，所述试剂盒包含药物组合物，其中所述药物组合物包含：
治疗有效量的复合肽或其衍生物；和
药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合；
其中所述复合肽选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接，
其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，并且
其中所述其衍生物包含与所述复合肽共享约50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
56.如权利要求55所述的试剂盒，其中所述病况是以下中的一种或多种：CD4白血病、CD8白血病、LGL白血病、系统性红斑狼疮、干燥综合征、韦格纳肉芽肿、乳糜泻、桥本甲状腺炎、类风湿性关节炎、糖尿病、牛皮癣、多发性硬化、葡萄膜炎、眼部炎症、移植物抗宿主病(GvHD)、炎性肠病(IBD，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病)、系统性红斑狼疮、斑秃、成人T细胞白血病(ATL)、HTLV相关的脊髓病/热带痉挛性下肢轻瘫(HAM/TSP)，以及与HTLV相关的其它非肿瘤炎性疾病，如葡萄膜炎(HU)、关节病、肺病、皮炎、外分泌腺病、肌炎、哮喘、窦炎、枯草热、支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、过敏性鼻炎、急性和慢性耳炎、以及肺纤维化、痤疮、脱发、晒伤、指甲保养或出现老化。
57.如权利要求1-44中任一项所述的复合肽，其中所述肽内烃连接子中存在的一个或多个碳-碳双键被用于添加一个或多个另外的化学官能团的一种或多种有机化学反应。
58.如权利要求57所述的复合肽，其中所述一种或多种有机化学反应包括烯烃反应。
59.如权利要求58所述的复合肽，其中所述烯烃反应选自：硼氢化反应、羟汞化、水合、氯化、溴化、添加HF、HBr、HCl或HI、二羟化、环氧化、氢化和环丙烷化。
60.如权利要求59所述的复合肽，其中能够在烯烃反应之后添加一个或多个另外的化学官能团，其中所述一个或多个另外的化学官能团包含共价添加的一个或多个化学基团取代基，其中所述共价添加的一个或多个化学基团取代基包含与环氧和羟基基团的亲核反应。
61.如权利要求60所述的复合肽，其中所述一个或多个另外的化学官能团选自：生物素、放射性同位素、治疗剂、雷帕霉素、长春花碱、紫杉醇、非蛋白荧光化学基团、FITC、酰肼、罗丹明、马来酰亚胺、蛋白荧光基团、GFP、YFP和mCherry。
γC细胞因子活性的稳定调节剂
[0001] 优先权和相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2017年4月7日递交的第62/483,210号美国临时申请的权益，其在此通过引用整体并入本文中。
[0004] 本申请与作为ASCII文本文件的电子序列表一起经EFS-Web递交。电子序列表提供为于2018年3月30日生成并最后保存的标题为BION010WOSEQLIST.txt的文件，其大小为60,
939字节。电子序列表中的信息根据35U.S.C.§1.52(e)通过引用整体并入本文中。
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背景技术
技术领域
[0005] 一些实施方案涉及γc-家族细胞因子(一组主要由上皮细胞、基质细胞和免疫细胞产生并控制多样化的淋巴细胞系列的正常和病理性活化的哺乳动物细胞因子)的肽拮抗
剂。一些实施方案还涉及将此类肽用于某些人类疾病的治疗的治疗性用途。本实施方案还
涉及此类肽的药妆性(cosmeceutical)用途。公开了所述肽的目标疾病、药妆性用途，以及给药、制造和商业化的方法的描述。
剂。一些实施方案还涉及将此类肽用于某些人类疾病的治疗的治疗性用途。本实施方案还
涉及此类肽的药妆性(cosmeceutical)用途。公开了所述肽的目标疾病、药妆性用途，以及给药、制造和商业化的方法的描述。
[0006] 相关领域的描述
[0007] 细胞因子是一组多样化的可溶性因子，其介导各种细胞功能，如生长、功能分化以及程序性细胞死亡(凋亡细胞死亡)的促进或预防。与激素不同，细胞因子不是由特化的腺体组织产生的，而是可以由多种细胞类型如上皮细胞、基质细胞或免疫细胞产生。
[0008] γc-家族细胞因子是一组哺乳动物细胞因子，其主要由上皮细胞、基质细胞和免疫细胞产生，并控制多样化的淋巴细胞系列的正常和病理性活化。这些细胞因子对于胸腺
中T细胞的早期发育以及它们在外周系统中的稳态是严格必需的。
中T细胞的早期发育以及它们在外周系统中的稳态是严格必需的。
[0009] 发明概述
[0010] 在一些实施方案中，提供了复合肽，其包含至少两个白介素(IL)蛋白γc盒D-螺旋区的氨基酸序列，其中所述复合肽包含氨基酸序列D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q
(SEQ ID NO:2)，其中X表示任何氨基酸，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接。
(SEQ ID NO:2)，其中X表示任何氨基酸，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接。
[0011] 在复合肽的一些实施方案中，至少两个α-烯基取代的氨基酸被连接以通过闭环复分解反应形成至少一个肽内烃连接子元件，其中所述闭环复分解反应通过Grubb’s催化剂
催化。
催化。
[0012] 在一些实施方案中，复合肽中的氨基酸选自：天然的氨基酸、非天然的氨基酸、(D)立体化学构型氨基酸、(L)立体化学构型氨基酸、(R)立体化学构型氨基酸和(S)立体化学构型氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸选自：R-烯丙基丙氨酸(CAS:288617-76-5；R3Ala)、S-烯丙基丙氨酸(CAS:288617-71-0；S3Ala)、D-烯丙基甘氨酸(CAS:
170642-28-1；D3Gly)、L-烯丙基甘氨酸(CAS:146549-21-5；L3Gly)、R-戊烯基丙氨酸(CAS:
288617-77-6；R5Ala)、S-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-73-2；S5Ala)、R-戊烯基甘氨酸(CAS:
1093645-21-6；R5Gly)、S-戊烯基甘氨酸(CAS:856412-22-1；S5Gly)、R-丁烯基丙氨酸(CAS:
1311933-82-0；R4Ala)、S-丁烯基丙氨酸(CAS:288617-72-1；S4Ala)、R-丁烯基甘氨酸(CAS:
865352-21-2；R4Gly)、S-丁烯基甘氨酸(CAS:851909-08-5；S4Gly)、R-己烯基丙氨酸(CAS:
288617-78-7；R6Ala)、S-己烯基丙氨酸(CAS:288617-74-3；S6Ala)、R-己烯基甘氨酸(CAS:
1208226-88-3；R6Gly)、S-己烯基甘氨酸(CAS:1251904-51-4；S6Gly)、R-庚烯基丙氨酸
(CAS:1311933-84-2；R7Ala)、S-庚烯基丙氨酸(CAS:1311933-83-1；S7Ala)、R-庚烯基甘氨酸(CAS:1262886-63-4；R7Gly)、S-庚烯基甘氨酸(CAS:1058705-57-9；S7Gly)、双取代的双丙烯基甘氨酸(CAS:1311992-97-8；双3Gly)、双取代的双戊烯基甘氨酸(CAS:1068435-19-
7；双5Gly)、双取代的双丁烯基甘氨酸(双4Gly)、双取代的双己烯基甘氨酸(双6Gly)、双取代的双庚烯基甘氨酸(双7Gly)、R-辛烯基丙氨酸(CAS:945212-26-0；R8Ala)、S-辛烯基丙氨酸(CAS:288617-75-4；S8Ala)、R-辛烯基甘氨酸(CAS:1191429-20-5；R8Gly)和S-辛烯基甘氨酸(CAS:1262886-64-5；S8Gly)。
170642-28-1；D3Gly)、L-烯丙基甘氨酸(CAS:146549-21-5；L3Gly)、R-戊烯基丙氨酸(CAS:
288617-77-6；R5Ala)、S-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-73-2；S5Ala)、R-戊烯基甘氨酸(CAS:
1093645-21-6；R5Gly)、S-戊烯基甘氨酸(CAS:856412-22-1；S5Gly)、R-丁烯基丙氨酸(CAS:
1311933-82-0；R4Ala)、S-丁烯基丙氨酸(CAS:288617-72-1；S4Ala)、R-丁烯基甘氨酸(CAS:
865352-21-2；R4Gly)、S-丁烯基甘氨酸(CAS:851909-08-5；S4Gly)、R-己烯基丙氨酸(CAS:
288617-78-7；R6Ala)、S-己烯基丙氨酸(CAS:288617-74-3；S6Ala)、R-己烯基甘氨酸(CAS:
1208226-88-3；R6Gly)、S-己烯基甘氨酸(CAS:1251904-51-4；S6Gly)、R-庚烯基丙氨酸
(CAS:1311933-84-2；R7Ala)、S-庚烯基丙氨酸(CAS:1311933-83-1；S7Ala)、R-庚烯基甘氨酸(CAS:1262886-63-4；R7Gly)、S-庚烯基甘氨酸(CAS:1058705-57-9；S7Gly)、双取代的双丙烯基甘氨酸(CAS:1311992-97-8；双3Gly)、双取代的双戊烯基甘氨酸(CAS:1068435-19-
7；双5Gly)、双取代的双丁烯基甘氨酸(双4Gly)、双取代的双己烯基甘氨酸(双6Gly)、双取代的双庚烯基甘氨酸(双7Gly)、R-辛烯基丙氨酸(CAS:945212-26-0；R8Ala)、S-辛烯基丙氨酸(CAS:288617-75-4；S8Ala)、R-辛烯基甘氨酸(CAS:1191429-20-5；R8Gly)和S-辛烯基甘氨酸(CAS:1262886-64-5；S8Gly)。
[0013] 在复合肽的一些实施方案中，通过至少一个肽内烃连接的至少两个α-烯基取代的氨基酸通过n-2个氨基酸隔开，其中n表示肽内连接所包含的氨基酸的数量。
[0014] 在复合肽的一些实施方案中，当通过至少一个肽内烃连接的至少两个α-烯基取代的氨基酸通过3个氨基酸隔开时，至少一个肽内烃连接子元件跨复合肽的单α-螺旋转角。
[0015] 在复合肽的一些实施方案中，当复合肽包含一个或多个非连续的单α-螺旋转角时，与复合肽的单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+4，其中i是单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，且i+4是单α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i和i+4包含α-烯基取代的氨基酸。
[0016] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R-烯丙基丙氨酸(CAS:288617-76-5；R3Ala)、S-烯丙基丙氨酸(CAS:288617-71-0；S3Ala)、D-烯丙基甘氨酸(CAS:170642-28-1；D3Gly)和L-烯丙基甘氨酸(CAS:146549-21-5；L3Gly)，并且位置i+
4处的α-烯基取代的氨基酸选自R-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-77-6；R5Ala)、S-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-73-2；S5Ala)、R-戊烯基甘氨酸(CAS:1093645-21-6；R5Gly)和S-戊烯基甘氨酸(CAS:856412-22-1；S5Gly)时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式1表
示。
4处的α-烯基取代的氨基酸选自R-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-77-6；R5Ala)、S-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-73-2；S5Ala)、R-戊烯基甘氨酸(CAS:1093645-21-6；R5Gly)和S-戊烯基甘氨酸(CAS:856412-22-1；S5Gly)时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式1表
示。
[0017] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly，并且位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式2表示。
[0018] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R-丁烯基丙氨酸(CAS:1311933-82-0；R4Ala)、S-丁烯基丙氨酸(CAS:288617-72-1；S4Ala)、R-丁烯基甘氨酸(CAS:865352-21-2；R4Gly)和S-丁烯基甘氨酸(CAS:851909-08-5；S4Gly)，并且位置i+
4处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式3表示。
4处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式3表示。
[0019] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly，并且位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式4表示。
[0020] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly，并且位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸选自R-己烯基丙氨酸(CAS:
288617-78-7；R6Ala)、S-己烯基丙氨酸(CAS:288617-74-3；S6Ala)、R-己烯基甘氨酸(CAS:
1208226-88-3；R6Gly)和S-己烯基甘氨酸(CAS:1251904-51-4；S6Gly)时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式5表示。
288617-78-7；R6Ala)、S-己烯基丙氨酸(CAS:288617-74-3；S6Ala)、R-己烯基甘氨酸(CAS:
1208226-88-3；R6Gly)和S-己烯基甘氨酸(CAS:1251904-51-4；S6Gly)时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式5表示。
[0021] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly和S6Gly，并且位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式6表示。
[0022] 在复合肽的一些实施方案中，位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly，并且位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸选自R-庚烯基丙氨酸(CAS:1311933-84-2；R7Ala)、S-庚烯基丙氨酸(CAS:1311933-83-1；S7Ala)、R-庚烯基甘氨酸(CAS:
1262886-63-4；R7Gly)和S-庚烯基甘氨酸(CAS:1058705-57-9；S7Gly)时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式7表示。
1262886-63-4；R7Gly)和S-庚烯基甘氨酸(CAS:1058705-57-9；S7Gly)时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式7表示。
[0023] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly，并且位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式8表示。
[0024] 在复合肽的一些实施方案中，当复合肽包含两个或更多个连续的单α-螺旋转角时，与复合肽的第一个单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+
4，其中i是第一个单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+4是第一个单α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且与复合肽的第二个单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i+4和i+8，其中i+4是第二个单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+8是第二个单α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i、i+4和i+8包含α-烯基取代的氨基酸。
4，其中i是第一个单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+4是第一个单α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且与复合肽的第二个单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i+4和i+8，其中i+4是第二个单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+8是第二个单α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i、i+4和i+8包含α-烯基取代的氨基酸。
[0025] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双取代的双丙烯基甘氨酸(CAS:
1311992-97-8；双3Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式9表示。
1311992-97-8；双3Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式9表示。
[0026] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双取代的双戊烯基甘氨酸(CAS:
1068435-19-7；双5Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式10表示。
1068435-19-7；双5Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式10表示。
[0027] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双取代的双丁烯基甘氨酸(双
4Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式11表示。
4Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式11表示。
[0028] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双5Gly，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式12表示。
[0029] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly和S6Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双4Gly，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly或S6Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式13表示。
[0030] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双取代的双己烯基甘氨酸(双
6Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式14表示。
6Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R4Ala、S4Ala、R4Gly和S4Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式14表示。
[0031] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双3Gly，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式15表示。
[0032] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly，位置i+4处的α-烯基取代的氨基酸是双取代的双庚烯基甘氨酸(双
7Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式16表示。
7Gly)，并且位置i+8处的α-烯基取代的氨基酸选自R3Ala、S3Ala、D3Gly和L3Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式16表示。
[0033] 在复合肽的一些实施方案中，当通过至少一个肽内烃连接的至少两个α-烯基取代的氨基酸通过6个残基隔开时，至少一个肽内烃连接子元件跨复合肽的双α-螺旋转角。
[0034] 在复合肽的一些实施方案中，当复合肽包含一个或多个非连续的双α-螺旋转角时，与复合肽的双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+7，其中i是双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+7是双α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i和i+7包含α-烯基取代的氨基酸。
[0035] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly，并且位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸选自R-辛烯基丙氨酸(CAS:
945212-26-0；R8Ala)、S-辛烯基丙氨酸(CAS:288617-75-4；S8Ala)、R-辛烯基甘氨酸(CAS:
1191429-20-5；R8Gly)和S-辛烯基甘氨酸(CAS:1262886-64-5；S8Gly)时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式17表示。
945212-26-0；R8Ala)、S-辛烯基丙氨酸(CAS:288617-75-4；S8Ala)、R-辛烯基甘氨酸(CAS:
1191429-20-5；R8Gly)和S-辛烯基甘氨酸(CAS:1262886-64-5；S8Gly)时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式17表示。
[0036] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R8Ala、S8Ala、R8Gly和S8Gly，并且位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸选自R5Ala、S5Ala、R5Gly和S5Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式18表示。
[0037] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly和S6Gly，并且位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式19表示。
[0038] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly，并且位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly和S6Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式20表示。
[0039] 在复合肽的一些实施方案中，当复合肽包含两个或更多个连续的双α-螺旋转角时，与复合肽的第一个双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+
7，其中i是第一个双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+7是第一个双α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且与复合肽的第二个双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i+7和i+14，其中i+7是第二个双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+14是第二个双α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i、i+7和i+14包含α-烯基取代的氨基酸。
7，其中i是第一个双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+7是第一个双α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且与复合肽的第二个双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i+7和i+14，其中i+7是第二个双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+14是第二个双α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i、i+7和i+14包含α-烯基取代的氨基酸。
[0040] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R8Ala、S8Ala、R8Gly和S8Gly，位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸是双5Gly，并且位置i+14处的α-烯基取代的氨基酸选自R8Ala、S8Ala、R8Gly和S8Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式21表示。
[0041] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly，位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸是双6Gly，并且位置i+14处的α-烯基取代的氨基酸选自R7Ala、S7Ala、R7Gly和S7Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式22表示。
[0042] 在复合肽的一些实施方案中，当位置i处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly和S6Gly，位置i+7处的α-烯基取代的氨基酸是双7Gly，并且位置i+14处的α-烯基取代的氨基酸选自R6Ala、S6Ala、R6Gly和S6Gly时，通过闭环复分解反应形成的烃连接子元件通过式23表示。
[0043] 在一些实施方案中，复合肽的衍生物包含与复合肽共享约50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
[0044] 在一些实施方案中，复合肽抑制选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性。
[0045] 在一些实施方案中，复合肽还包含信号肽。在一些实施方案中，复合肽还包含复合肽的N端、C端或侧链残基(side residue)处缀合的一个或多个另外的部分。在一些实施方案中，复合肽还包含选自以下的一个或多个另外的部分：牛血清白蛋白(BSA)、白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)、IgG的Fc区、起支架作用的生物蛋白、针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体、金属离子和聚乙二醇(PEG)。
[0046] 在一些实施方案中，复合肽包含至少两个白介素(IL)蛋白γc盒D-螺旋区的氨基酸序列，其中复合肽包含氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID
NO:1)，并且其中复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接。
NO:1)，并且其中复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接。
[0047] 在一些实施方案中，复合肽包含至少两个白介素(IL)蛋白γc盒D-螺旋区的氨基酸序列，其中复合肽包含氨基酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ
ID NO:3)，并且其中复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接。
ID NO:3)，并且其中复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接。
[0048] 在一些实施方案中，复合肽复合肽抑制IL-15、IL-21或它们的组合的细胞生长促进活性。在一些实施方案中，复合肽抑制IL-15的STAT5信号转导活性。在一些实施方案中，复合肽抑制IL-21的STAT3信号转导活性。
[0049] 在一些实施方案中，提供了药物组合物，其包含治疗有效量的复合肽或其衍生物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合。在药物组合物的一些实施方案中，复合肽选自SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:3。在药物组合物的一些实施方案
中，复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性。
中，复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性。
[0050] 在一些实施方案中，提供了预防或治疗γc-细胞因子介导的疾病的方法。在一些实施方案中，方法包括向有需要的对象给予包含治疗有效量的复合肽或其衍生物以及药学
上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合的药物组合物，从而预防或治疗所述γc-细胞因子介导的疾病，其中所述复合肽选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接，其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、
IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，其中其衍生物包含与复合肽共享约50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合的药物组合物，从而预防或治疗所述γc-细胞因子介导的疾病，其中所述复合肽选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接，其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、
IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，其中其衍生物包含与复合肽共享约50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
[0051] 在一些实施方案中，γc-细胞因子介导的疾病选自CD4白血病、CD8白血病、LGL白血病、系统性红斑狼疮、干燥综合征、韦格纳肉芽肿、乳糜泻、桥本甲状腺炎、类风湿性关节炎、糖尿病、牛皮癣、多发性硬化、葡萄膜炎、眼部炎症、移植物抗宿主病(GvHD)、炎性肠病(IBD，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病)、系统性红斑狼疮和斑秃。
[0052] 在一些实施方案中，提供了预防或治疗HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病的方法。在一些实施方案中，方法包括向有需要的对象给予药物组合物，从而预防或治疗HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病，所述药物组合物包含治疗有效量的复合肽或其衍生物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合，其中所述复合肽选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接，其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，其中其衍生物包含与复合肽共享约50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
[0053] 在一些实施方案中，HAM/TSP相关的疾病选自成人T细胞白血病(ATL)、HTLV相关的脊髓病/热带痉挛性下肢轻瘫(HAM/TSP)和与HTLV相关的其他的非肿瘤炎性疾病，如葡萄膜
炎(HU)、关节病、肺病、皮炎、外分泌腺病和肌炎。
炎(HU)、关节病、肺病、皮炎、外分泌腺病和肌炎。
[0054] 在一些实施方案中，提供了预防或治疗炎性呼吸性疾病的方法。在一些实施方案中，方法包括向有需要的对象给予药物组合物，从而预防或治疗炎性呼吸性疾病，所述药物组合物包含治疗有效量的复合肽或其衍生物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合，其中所述复合肽选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接，其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-
9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，其中其衍生物包含与复合肽共享约
50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，其中其衍生物包含与复合肽共享约
50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
[0056] 在一些实施方案中，提供了预防或治疗美容性病况的方法。在一些实施方案中，方法包括向有需要的对象给予药物组合物，从而预防或治疗美容性病况，所述药物组合物包含治疗有效量的复合肽或其衍生物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合，其中所述复合肽选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中所述至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接，其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，其中其衍生物包含与复合肽共享约50％至约
99％的同一性的氨基酸序列。
99％的同一性的氨基酸序列。
[0057] 在一些实施方案中，美容性病况选自痤疮、脱发、晒伤、指甲保养(nail maintenance)和出现老化。
[0058] 在一些实施方案中，提供了用于预防或治疗患者中的病况的试剂盒。在试剂盒的一些实施方案中，病况是γc-细胞因子介导的疾病、HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛
性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病、炎性呼吸性疾病、美容性病况，或它们的组合。在一些实施方案中，试剂盒包含药物组合物，其中所述药物组合物包含治疗有效量的复合肽或其衍生物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合，其中所述复合肽选自SEQ ID NO:
1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接，其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，并且其中其衍生物包含与复合肽共享约50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病、炎性呼吸性疾病、美容性病况，或它们的组合。在一些实施方案中，试剂盒包含药物组合物，其中所述药物组合物包含治疗有效量的复合肽或其衍生物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合，其中所述复合肽选自SEQ ID NO:
1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3，其中所述复合肽包含至少两个α-烯基取代的氨基酸，并且其中至少两个α-烯基取代的氨基酸经至少一个肽内烃连接子元件连接，其中所述复合肽或其衍生物调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性，并且其中其衍生物包含与复合肽共享约50％至约99％的同一性的氨基酸序列。
[0059] 在试剂盒的一些实施方案中，病况是以下中的一种或多种：CD4白血病、CD8白血病、LGL白血病、系统性红斑狼疮、干燥综合征、韦格纳肉芽肿、乳糜泻、桥本甲状腺炎、类风湿性关节炎、糖尿病、牛皮癣、多发性硬化、葡萄膜炎、眼部炎症、移植物抗宿主病(GvHD)、炎性肠病(IBD，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病)、系统性红斑狼疮、斑秃、成人T细胞白血病
(ATL)、HTLV相关的脊髓病/热带痉挛性下肢轻瘫(HAM/TSP)和与HTLV相关的其他的非肿瘤
炎性疾病，如葡萄膜炎(HU)、关节病、肺病、皮炎、外分泌腺病、肌炎、哮喘、窦炎、枯草热、支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、过敏性鼻炎、急性和慢性耳炎、以及肺纤维化、痤疮、脱发、晒伤、指甲保养或出现老化。
(ATL)、HTLV相关的脊髓病/热带痉挛性下肢轻瘫(HAM/TSP)和与HTLV相关的其他的非肿瘤
炎性疾病，如葡萄膜炎(HU)、关节病、肺病、皮炎、外分泌腺病、肌炎、哮喘、窦炎、枯草热、支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、过敏性鼻炎、急性和慢性耳炎、以及肺纤维化、痤疮、脱发、晒伤、指甲保养或出现老化。
[0060] 在复合肽的一些实施方案中，肽内烃连接子中存在的一个或多个碳-碳双键被用于添加一个或多个另外的化学官能团的一种或多种有机化学反应。在复合肽的一些实施方
案中，一种或多种有机化学反应包括烯烃反应。在复合肽的一些实施方案中，烯烃反应选自硼氢化反应、羟汞化、水合、氯化、溴化、添加HF、HBr、HCl或HI、二羟化、环氧化、氢化和环丙烷化。在复合肽的一些实施方案中，可以在烯烃反应之后添加一个或多个另外的化学官能
团，其中所述一个或多个另外的化学官能团包含共价添加的一个或多个化学基团取代基，
其中所述共价添加的一个或多个化学基团取代基包含与环氧和羟基基团的亲核反应。在复
合肽的一些实施方案中，一个或多个另外的化学官能团选自生物素、放射性同位素、治疗
剂、雷帕霉素、长春花碱、紫杉醇、非蛋白荧光化学基团、FITC、酰肼、罗丹明、马来酰亚胺、蛋白荧光基团、GFP、YFP和mCherry。
案中，一种或多种有机化学反应包括烯烃反应。在复合肽的一些实施方案中，烯烃反应选自硼氢化反应、羟汞化、水合、氯化、溴化、添加HF、HBr、HCl或HI、二羟化、环氧化、氢化和环丙烷化。在复合肽的一些实施方案中，可以在烯烃反应之后添加一个或多个另外的化学官能
团，其中所述一个或多个另外的化学官能团包含共价添加的一个或多个化学基团取代基，
其中所述共价添加的一个或多个化学基团取代基包含与环氧和羟基基团的亲核反应。在复
合肽的一些实施方案中，一个或多个另外的化学官能团选自生物素、放射性同位素、治疗
剂、雷帕霉素、长春花碱、紫杉醇、非蛋白荧光化学基团、FITC、酰肼、罗丹明、马来酰亚胺、蛋白荧光基团、GFP、YFP和mCherry。
[0062] 图1A显示了人γc-细胞因子家族成员的D螺旋区的比对。
[0063] 图1B示出了在γc-细胞因子的D螺旋区周围产生共有序列的γc盒(SEQ ID NO:10)和IL-2/IL-15盒(SEQ ID NO:11)基序。
[0064] 图2示出了氨基酸的生化特性的图示。
[0065] 图3A显示了PT-18增殖测定中BNZ-γ对IL-15和IL-9活性的抑制。
[0066] 图3B显示了在IL-2或IL-15和0、0.1、1或10μM的BNZ-γ存在下培养的CTLL-2细胞的增殖测定。
[0067] 图3C显示了NK92增殖测定中SEQ ID NO:3对IL-15和IL-21活性的抑制。
[0068] 图3D显示了在IL-2、IL-15或IL-21和μM剂量反应的SEQ ID NO:3存在下培养的NK92细胞的增殖测定。
[0070] 图4B显示了SEQ ID NO:3对CTLL-2细胞中STAT5的IL-15介导的磷酸化，而非STAT5的IL-2介导的磷酸化的抑制，以及SEQ ID NO:3对NK92细胞中STAT3的IL-21介导的磷酸化
的抑制。
的抑制。
[0071] 图5A显示了利用HAM/TSP外周血的离体T-细胞增殖测定。通过添加BNZ-γ而抑制T-细胞增殖。
[0072] 图5B显示了在向培养物中添加BNZ-γ后，利用HAM/TSP外周血的离体T-细胞增殖测定中的CD4+CD25+细胞群减少。
[0073] 图5C显示了在向培养物添加BNZ-γ后，利用HAM/TSP外周血的离体T-细胞增殖测定中的CD4+Ki67细胞群减少。
[0074] 图5D显示了在向培养物中添加BNZ-γ后，利用HAM/TSP外周血的离体T-细胞增殖测定中通过Guava染色的活细胞的百分比未受影响。
[0075] 图6显示了SEQ ID NO:3的序列与不同的人γc-细胞因子家族成员的D螺旋区的比对。阴影区代表与其在SEQ ID NO:3的序列中对应的氨基酸相同的人γc-细胞因子家族成
员的氨基酸序列。
员的氨基酸序列。
[0076] 图7显示了SEQ ID NO:3的一系列定制肽衍生物相比NK92增殖测定中未修饰的SEQ ID NO:3对IL-15活性的相对抑制，所述定制肽衍生物包含跨每种定制肽衍生物的α-螺旋二级结构中的单螺旋转角(氨基酸位置i和i+4)或两个螺旋转角(氨基酸位置i和i+7)的肽内
烃连接子元件。
烃连接子元件。
[0077] 图8A显示了于模拟的肠液中，在60分钟内，未修饰的SEQ ID NO:3相比包含一个烃连接子元件(SEQ ID NO:39)的SEQ ID NO:3的代表性的定制肽衍生物，和包含两个烃连接
子元件和(D)立体化学构型的某些氨基酸位置(SEQ ID NO:57)的SEQ ID NO:3的其他的代
表性的定制肽衍生物的时程蛋白酶稳定性测量。
子元件和(D)立体化学构型的某些氨基酸位置(SEQ ID NO:57)的SEQ ID NO:3的其他的代
表性的定制肽衍生物的时程蛋白酶稳定性测量。
[0078] 图8B显示了于模拟的肠液中，在120分钟内，包含一个烃连接子元件(SEQ ID NO:39)的SEQ ID NO:3的代表性的定制肽衍生物相比包含两个烃连接子元件(SEQ ID NO:83)
的SEQ ID NO:3的代表性的定制肽衍生物的时程蛋白酶稳定性测量。
的SEQ ID NO:3的代表性的定制肽衍生物的时程蛋白酶稳定性测量。
[0079] 图9显示了人NK92细胞系中SEQ ID NO:83(10μM)对干扰素γ(IFNg)的IL-15和IL-21诱导的基因转录的抑制，而非IFNg基因转录的非γc-细胞因子IL-12诱导的抑制。
[0080] 发明详述
[0081] 综述
[0082] 到目前为止已经鉴定了多于100种细胞因子，并且认为它们是通过基因复制的方式从原始基因库开发而来(参见Bazan,J.F.1990,Immunol.Today 11:350-354)。为了支持
这种观点，一组细胞因子在其多亚基受体系统中共享组分是较常见的。T细胞中记载最多的共享细胞因子亚基是常见的γ亚基(γc亚基)。
这种观点，一组细胞因子在其多亚基受体系统中共享组分是较常见的。T细胞中记载最多的共享细胞因子亚基是常见的γ亚基(γc亚基)。
[0083] γc亚基为6种已知的细胞因子(白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、白介素7(IL-7)、白介素9(IL-9)、白介素15(IL-15)和白介素21(IL-21)，统称为“γc-细胞因子”或“γc家族细胞因子”)所共享，并且在转导所有这些细胞因子的细胞激活信号中起着不可或缺的作用。另外，对于每种γc-细胞因子，存在一个或两个私有的细胞因子特异性的受体亚基，其在与γc亚基复合时，产生完全功能化的受体。(参见Rochman et al.,2009,Nat Rev
Immunol.9:480-90)。
Immunol.9:480-90)。
[0084] γc家族细胞因子是一组哺乳动物细胞因子，其主要由上皮细胞、基质细胞和免疫细胞产生，并控制一组多样化的淋巴细胞的正常和病理性活化。这些细胞因子对于胸腺中T细胞的早期发育以及它们在外周系统中的稳态是严格必需的。例如，在不存在γc亚基的情况下，小鼠中的T、B和NK细胞不发育。(参见Sugamura et al.,1996,Annu.Rev.Immunol.14:
179-205)。
179-205)。
[0085] γc-细胞因子在构成免疫系统的淋巴细胞尤其是T、B和NK细胞的发育中起着重要作用。此外，γc-细胞因子涉及多种人类疾病。因此，抑制γc-细胞因子活性的因素将为阐明淋巴细胞亚群的发育机制和治疗免疫病症以及γc-细胞因子介导的疾病提供有用的工
具。
具。
[0086] 已知小鼠中编码γc-亚基的基因的种系耗竭或人类中γc-亚基的突变通过破坏NK、T和B细胞的正常外表或功能而引起严重联合免疫缺陷(SCID)。在证明了来自这些小鼠
和人类患者的淋巴细胞缺乏对γc-细胞因子的反应的研究中，指出了γc-亚基在γc-细胞
因子IL-2、4、7、9、15、21的信号转导中的重要性(在Sugamura et al.,
1995Adv.Immunol.59:225277中有综述)。这表明γc-亚基和γc-细胞因子之间相互作用的
破坏将有效地阻断通过γc-细胞因子家族成员的细胞内信号转导事件。因此，预期根据本
实施方案的拮抗肽将有效地阻断患有由γc-细胞因子家族成员的错误调节介导的疾病的
人体中的病原性变化。
和人类患者的淋巴细胞缺乏对γc-细胞因子的反应的研究中，指出了γc-亚基在γc-细胞
因子IL-2、4、7、9、15、21的信号转导中的重要性(在Sugamura et al.,
1995Adv.Immunol.59:225277中有综述)。这表明γc-亚基和γc-细胞因子之间相互作用的
破坏将有效地阻断通过γc-细胞因子家族成员的细胞内信号转导事件。因此，预期根据本
实施方案的拮抗肽将有效地阻断患有由γc-细胞因子家族成员的错误调节介导的疾病的
人体中的病原性变化。
[0087] 作为用于调节单个γc-细胞因子的活性的抗体介导方法的替代方案，申请人设计了在本文中被称为“Simul-Block”的新的低分子量化合物，其抑制多种γc-细胞因子的活性。这些包括化学物质和肽的低分子量化合物的免疫原性低于抗体。这些特性将Simul-
Block区分为用于在临床干预中介导γc-细胞因子活性的更有效的策略。
Block区分为用于在临床干预中介导γc-细胞因子活性的更有效的策略。
[0088] 与γc-细胞因子相关的病理学
[0089] 最近的研究表明，γc-细胞因子的表达失调和功能障碍可能导致多种人类免疫性和造血性疾病。
[0090] IL-2
[0091] 尽管IL-2在历史上被认为是原型T细胞生长因子，但缺乏IL-2表达的敲除小鼠的产生揭示了IL-2对于体内常规T细胞的生长或发育不是至关重要的。然而，IL-2的过表达导致T细胞亚群——调节性T细胞(T-regs)的优先扩增。(参见Antony et al.,2006,
J.Immunol.176:5255-66)。T-regs抑制其他细胞的免疫应答，从而起到维持外周耐受的作
用(在Sakaguchi et al.,2008,Cell 133:775-87中有综述)。外周耐受的崩溃被认为会引
起人体中的自身免疫疾病。
J.Immunol.176:5255-66)。T-regs抑制其他细胞的免疫应答，从而起到维持外周耐受的作
用(在Sakaguchi et al.,2008,Cell 133:775-87中有综述)。外周耐受的崩溃被认为会引
起人体中的自身免疫疾病。
[0092] 因此，认为T-regs的免疫抑制功能可以防止自身免疫疾病的发展(参见Sakaguchi et al.,2008,Cell 133:775-87)。T-regs也与癌症有关，其中实体瘤和血液系统恶性肿瘤
与T-regs数量增加相关(参见De Rezende et al.,2010,Arch.Immunol.Ther.Exp.58:179-
190)。
与T-regs数量增加相关(参见De Rezende et al.,2010,Arch.Immunol.Ther.Exp.58:179-
190)。
[0093] IL-4
[0094] IL-4是参与T辅助细胞分化为Th2(T辅助2型)亚群的一种非冗余的细胞因子，后者促进未成熟的B细胞分化为产IgE的血浆细胞。过敏性哮喘中IgE水平升高。因此，IL-4涉及过敏性哮喘的发展。靶向IL-4的抗体可用于治疗或甚至防止过敏性哮喘的发作。(参见Le
Buanec et al.,2007,Vaccine 25:7206-16)。
Buanec et al.,2007,Vaccine 25:7206-16)。
[0095] IL-7
[0096] IL-7对于B细胞发育和胸腺中T细胞的早期发育是必需的。在小鼠中，IL-7的异常表达引起T细胞相关的白血病。(参见Fisher et al.,1993,Leukemia 2:S66-68)。然而，在人类中，IL-7的错误调节似乎不会引起T细胞相关的白血病。在人类中，IL-7单独或与其他的γc-细胞因子家族成员IL-15的组合的上调与大颗粒淋巴细胞(LGL)白血病有关。
[0097] IL-9
[0098] 相比其他的γc-细胞因子家族成员，IL-9的相当多的作用仍然未被定征。耗尽IL-9基因的小鼠看起来是正常的，并且在淋巴和造血区室中不缺乏任何细胞亚群。然而，最近的研究揭示了IL-9在Th17(白介素17诱导的T辅助细胞)细胞生成中的体内作用(参见
Littman et al.,2010,Cell 140(6):845-58；和Nowak et al.,2009,J.Exp.Med.206:
1653-60)。
Littman et al.,2010,Cell 140(6):845-58；和Nowak et al.,2009,J.Exp.Med.206:
1653-60)。
[0099] IL-15
[0100] IL-15至关重要地参与NK细胞、NK-T细胞、上皮内淋巴细胞(IELs)的一些亚类群、γδ-T细胞和记忆表型CD8T细胞的发育(参见Waldmann,2007,J.Clin.Immunol.27:1-18；和Tagaya et al.,1996,EMBO J.15:4928-39)。小鼠中IL-15的过表达导致NK-T细胞和CD8细
胞类型T细胞白血病的发展(参见Fehniger et al.,2001,J.Exp.Med.193:219-31；Sato et al.2011Blood 117:4032-40)。这些实验诱导的白血病看起来与人类中的LGL(大颗粒淋巴
细胞)白血病相似，因为在这两种情况下白血病细胞都表达CD8抗原。
胞类型T细胞白血病的发展(参见Fehniger et al.,2001,J.Exp.Med.193:219-31；Sato et al.2011Blood 117:4032-40)。这些实验诱导的白血病看起来与人类中的LGL(大颗粒淋巴
细胞)白血病相似，因为在这两种情况下白血病细胞都表达CD8抗原。
[0101] 还怀疑IL-15介导的自分泌机制可能参与CD4T淋巴细胞的白血病转化。(参见Azimi et al.,1998,Proc.Natl.Acad.Sci.95:2452-7；Azimi et al.,1999,
J.Immunol.163:4064-72；Azimi et al.,2000,AIDS Res.Hum.Retroviruses 16:1717-22；
和Azimi et al.,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.98:14559-64)。例如，在人类中引起成人T细
胞白血病的CD4热带HTLV-I通过产生IL-15和IL-15Rα而诱导病毒转化的T细胞的自分泌生
长(Azimi et al.,1998,Proc.Natl.Acad.Sci.95:2452-7)。
J.Immunol.163:4064-72；Azimi et al.,2000,AIDS Res.Hum.Retroviruses 16:1717-22；
和Azimi et al.,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.98:14559-64)。例如，在人类中引起成人T细
胞白血病的CD4热带HTLV-I通过产生IL-15和IL-15Rα而诱导病毒转化的T细胞的自分泌生
长(Azimi et al.,1998,Proc.Natl.Acad.Sci.95:2452-7)。
[0102] 除白血病转化外，最近的研究表明IL-15在乳糜泻(CD)(一种自身免疫疾病)的病理发展中起作用。已知IL-15通过诱导细胞溶解酶(即粒酶和穿孔素)以及干扰素-γ的表达
来刺激NK、CD8和肠上皮内淋巴细胞(IEL)分化为淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞。乳糜泻
(从本文中表示为CD)是一种免疫介导的肠病，其由表达特定HLA DQ等位基因的个体中食用
的含谷蛋白的食物引发。
来刺激NK、CD8和肠上皮内淋巴细胞(IEL)分化为淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞。乳糜泻
(从本文中表示为CD)是一种免疫介导的肠病，其由表达特定HLA DQ等位基因的个体中食用
的含谷蛋白的食物引发。
[0103] 该疾病的患病率在西方人群中为1％。目前治疗CD的唯一方法是彻底消除患者饮食中的麸质。CD的病理学主要是由肠粘膜的广泛损伤引起的，后者是由已经渗入肠固有层
的活化的CD8 T细胞引起。这些CD8 T细胞似乎通过涉及IL-15的机制被激活。最近的一篇出版物在小鼠中证实了肠细胞异位过表达IL-15导致肠病的发展，这与CD患者的病变非常相
似。IL-15活性的中和显著减少了病理变化。因此，阻断IL-15激活CD8 T细胞的干预似乎提供了管理CD的常规无麸质饮食的替代策略。
的活化的CD8 T细胞引起。这些CD8 T细胞似乎通过涉及IL-15的机制被激活。最近的一篇出版物在小鼠中证实了肠细胞异位过表达IL-15导致肠病的发展，这与CD患者的病变非常相
似。IL-15活性的中和显著减少了病理变化。因此，阻断IL-15激活CD8 T细胞的干预似乎提供了管理CD的常规无麸质饮食的替代策略。
[0104] IL-21
[0105] IL-21是γc-家族中最近发现的成员。与其他的家族成员不同，IL-21似乎没有强效的生长促进作用。相反，IL-21被认为作为分化引子的功能多于其作为控制细胞增殖的因子的功能(参见Tagaya,2010,J.Leuk.Biol.87:13-15)。
[0106] 治疗γc-细胞因子介导的病症的当前策略
[0107] 由于γc-细胞因子被认为与许多人类疾病有关，因此提出了通过抑制γc-细胞因子家族活性来治疗涉及γc-细胞因子的疾病的数种方法。这些方法包括使用细胞因子特异
性单克隆抗体来中和靶向的细胞因子的体内活性；使用靶向私有的细胞因子特异性的受体
亚基(除共享的γc亚基之外的亚基)的单克隆抗体来选择性地抑制细胞因子活性；以及使
用阻止下游细胞内细胞因子信号转导通路的化学抑制剂。
性单克隆抗体来中和靶向的细胞因子的体内活性；使用靶向私有的细胞因子特异性的受体
亚基(除共享的γc亚基之外的亚基)的单克隆抗体来选择性地抑制细胞因子活性；以及使
用阻止下游细胞内细胞因子信号转导通路的化学抑制剂。
[0108] 虽然细胞因子特异性的抗体通常是设计治疗剂的首选，但共享受体组分的细胞因子显示重叠的功能(参见Paul,W.E.,1989,Cell 57:521-24)，并且多于一种细胞因子可以
协作引起疾病(参见本文中所述的实施例)。因此，涉及中和单类细胞因子的方法可能无法
有效治疗涉及细胞因子的人类疾病。
协作引起疾病(参见本文中所述的实施例)。因此，涉及中和单类细胞因子的方法可能无法
有效治疗涉及细胞因子的人类疾病。
[0109] 还提出了设计经识别共享的受体组分的抗体而抑制多种细胞因子功能的治疗剂的策略。然而，细胞因子受体系统的多亚基性质以及针对单类细胞因子的功能性受体可以
呈现不同的配置这一事实，使得该方法变得困难。
呈现不同的配置这一事实，使得该方法变得困难。
[0110] 例如，功能性IL-15受体可以是IL-15Rβ/γc或IL-15Rα/β/γc。(参见Dubois et al.,2002,Immunity 17:537-47)。针对IL-15Rβ受体(TMβ1)的抗体是IL-15功能的有效的抑制剂，但仅当受体复合物中不存在IL-15Rα分子时如此。(参见Tanaka et al.,1991,J.Immunol.147:2222–28)。因此，无论是针对共享的还是私有的亚基产生的单克隆抗受体抗体的有效性，都可以依赖于环境，并且在体内是不可预测的。
[0111] 虽然在临床上使用针对生物活性因子或与疾病的发病机制相关的受体的单克隆抗体是已确立的实践，但很少有成功结果的证据。此外，建立临床上适合的单克隆抗体治疗是一个漫长而艰难的过程，其中成功产生中和抗体很大程度上是运气问题。例如，由于γc亚基在γc家族细胞因子介导信号转导中的至关重要性，已经进行了许多尝试来产生针对
γc亚基的多克隆和单克隆抗体，并且存在许多识别小鼠和人类中的γc亚基的商业抗体。
然而，奇怪的是，这些抗γc亚基抗体都不能阻断γc-细胞因子的功能。
γc亚基的多克隆和单克隆抗体，并且存在许多识别小鼠和人类中的γc亚基的商业抗体。
然而，奇怪的是，这些抗γc亚基抗体都不能阻断γc-细胞因子的功能。
[0112] 治疗性应用单克隆抗体的另一个问题是单克隆抗体通常是通过用人蛋白免疫啮齿动物而产生的，因此产生的抗体是外来蛋白，并因此具有高度免疫原性。为了解决该问
题，单克隆抗体的氨基酸序列被分子修饰，使得抗体分子被识别为人免疫球蛋白(称为人缘化的过程)，但是该过程需要时间和费用。
题，单克隆抗体的氨基酸序列被分子修饰，使得抗体分子被识别为人免疫球蛋白(称为人缘化的过程)，但是该过程需要时间和费用。
[0113] 靶向JAK3，其为用于抑制多种γc-细胞因子的现存的替代性实例
[0114] γc-亚基和γc-细胞因子之间的相互作用引起称为Janus激酶3(Jak3)的细胞内蛋白酪氨酸激酶的活化。继而，Jak3磷酸化多种信号转导分子，包括STAT5和PI3激酶。γc-亚基和Jak3的相互作用是非常特异性的。事实上，没有其他的受体分子募集Jak3用于信号
转导。(参见O’Shea,2004,Ann.Rheum.Dis.63:(suppl.II):ii67-7)。因此，可以通过阻断Jak3激酶的活性来实现通过γc-亚基抑制细胞因子信号转导。因此，靶向Jak3的激酶活性
的多种化学抑制剂已被引入市场。(参见Pesu et al.,2008,Immunol.Rev.223:132-142)。
一个此类实例是CP690,550。
转导。(参见O’Shea,2004,Ann.Rheum.Dis.63:(suppl.II):ii67-7)。因此，可以通过阻断Jak3激酶的活性来实现通过γc-亚基抑制细胞因子信号转导。因此，靶向Jak3的激酶活性
的多种化学抑制剂已被引入市场。(参见Pesu et al.,2008,Immunol.Rev.223:132-142)。
一个此类实例是CP690,550。
[0115] 这些蛋白激酶抑制剂的主要缺点是缺乏对Jak3激酶的特异性。这些药物拦截ATP(腺苷三磷酸)分子与Jak3激酶的结合(其为许多蛋白激酶的常见生化反应)，并因此倾向于
阻断与Jak3激酶(其作用对于各种组织中正常细胞的健康是严格必需的)无关的多种细胞
内蛋白激酶的作用。因此，需要通过γc-亚基的更特异性的信号转导抑制剂。
阻断与Jak3激酶(其作用对于各种组织中正常细胞的健康是严格必需的)无关的多种细胞
内蛋白激酶的作用。因此，需要通过γc-亚基的更特异性的信号转导抑制剂。
[0116] 因此，非常要用于治疗涉及γc-细胞因子的疾病的替代性策略。
[0117] γc盒的发现
[0118] γc-细胞因子的C端(D螺旋)包含用于与多单元细胞因子受体的常见的γc-亚基相互作用的建议的位点(Bernard et al.,2004J.Biol.Chem.279:24313-21)。对在小鼠和
人类中鉴定的所有γc-细胞因子的氨基酸的生化特性的比较揭示出在γc-细胞因子家族
的成员中，其D螺旋中的许多位置处的氨基酸的化学性质，例如疏水性、亲水性、碱性/酸性是保守的(如果并非相同的话)。
人类中鉴定的所有γc-细胞因子的氨基酸的生化特性的比较揭示出在γc-细胞因子家族
的成员中，其D螺旋中的许多位置处的氨基酸的化学性质，例如疏水性、亲水性、碱性/酸性是保守的(如果并非相同的话)。
[0119] 相反，与γc-细胞因子IL-4相关但不与γc-亚基结合的IL-13的序列，其在D螺旋区未显示与γc-细胞因子的显著的同源性，表明D螺旋区中的序列同源性与γc-亚基的结
合相关。如图1A所示，人类中γc-细胞因子家族成员的D螺旋区的氨基酸序列的比对揭示了在这些细胞因子中的中等序列同源性的基序，其在本文中称为“γc盒”。
合相关。如图1A所示，人类中γc-细胞因子家族成员的D螺旋区的氨基酸序列的比对揭示了在这些细胞因子中的中等序列同源性的基序，其在本文中称为“γc盒”。
[0120] γc盒(SEQ ID NO:10)包含19个氨基酸，其中在19个位置中，位置4、5和13是完全保守的，分别为苯丙氨酸、亮氨酸和谷氨酰胺。在γc盒的位置6、7和11处观察到更少的保守性，其中氨基酸是共享理化性质的两个或三个相关氨基酸中的一个：位置6可被极性氨基酸谷氨酸酯、天冬酰胺或谷氨酰胺占据；非极性氨基酸丝氨酸或精氨酸可占据位置7；并且位置11可被非极性脂肪族氨基酸亮氨酸或异亮氨酸中的一种占据。位置9和16可被非极性氨
基酸异亮氨酸或极性氨基酸赖氨酸占据。参见图1B。在γc-细胞因子的亚家族中，在位置9和16处观察到γc盒的氨基酸组合物中的一些差异。物种间γc-细胞因子的比较表明在IL-
2/15亚家族中，在位置9和16处常存在异亮氨酸，而其他的γc-家族成员在这些位置中常具有赖氨酸。不希望受到特定理论的限制，异亮氨酸和赖氨酸是生化不同的，并因而可能赋予IL-2/15亚家族和其他的γc-细胞因子之间的特定构象差异。
基酸异亮氨酸或极性氨基酸赖氨酸占据。参见图1B。在γc-细胞因子的亚家族中，在位置9和16处观察到γc盒的氨基酸组合物中的一些差异。物种间γc-细胞因子的比较表明在IL-
2/15亚家族中，在位置9和16处常存在异亮氨酸，而其他的γc-家族成员在这些位置中常具有赖氨酸。不希望受到特定理论的限制，异亮氨酸和赖氨酸是生化不同的，并因而可能赋予IL-2/15亚家族和其他的γc-细胞因子之间的特定构象差异。
[0121] γc-细胞因子之间的γc盒基序的保守性得到以下发现的支持：位于D螺旋区的谷氨酰胺(Gln,Q)残基对于γc-细胞因子与γc-亚基的结合是至关重要的(Bernard et al.,
2004J.Biol.Chem.279:24313-21)。
2004J.Biol.Chem.279:24313-21)。
[0122] γc-细胞因子活性的肽抑制剂
[0123] 可以通过破坏γc-细胞因子和γc-亚基之间的相互作用，例如通过引入可以与γc-亚基相互作用而不刺激通过多亚基细胞因子受体的信号转导的竞争性抑制剂来阻断γ
c-家族细胞因子的活性。不受特定理论的束缚，参与γc-家族细胞因子与γc-亚基的结合
的保守的γc盒基序呈现核心的基础氨基酸序列，其可用于设计γc-细胞因子信号转导的
肽抑制剂。
c-家族细胞因子的活性。不受特定理论的束缚，参与γc-家族细胞因子与γc-亚基的结合
的保守的γc盒基序呈现核心的基础氨基酸序列，其可用于设计γc-细胞因子信号转导的
肽抑制剂。
[0124] 本文中提供了用以调节γc-细胞因子信号转导的稳定的复合肽和组合物、其试剂盒和/或系统。在涉及根据本实施方案提供的“定制肽衍生物”时，术语“复合肽”、“寡肽”、“多肽”、“肽”和“蛋白”可互换使用，并且可用于指示任何长度的一系列氨基酸残基。本实施方案的肽可以是线性的或环形的。本实施方案的肽可以包括天然的氨基酸、非天然的氨基
酸、(D)立体化学构型的氨基酸、(L)立体化学构型的氨基酸、(R)立体化学构型的氨基酸、(S)立体化学构型的氨基酸，或它们的组合。
酸、(D)立体化学构型的氨基酸、(L)立体化学构型的氨基酸、(R)立体化学构型的氨基酸、(S)立体化学构型的氨基酸，或它们的组合。
[0125] 核心γc盒氨基酸序列包含：D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)(其中X表示任何氨基酸)。本文中描述的至少一些实施方案涉及核心γc盒氨基酸序列的
定制肽衍生物，其能够抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。定制肽衍生物包括任何此类
肽，其部分氨基酸序列显示与核心γc盒氨基酸序列的约50％、50％-60％、60％-70％、
70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％的同一性。定制肽衍生物还包括任何此类肽，其中该肽衍生物的部分的氨基酸序列包含与核心γc盒的氨基酸具有相似理化
性质的氨基酸。例如，具有相似理化性质的氨基酸将包括苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和组氨酸，其为芳香族氨基酸。图2显示了可以取代包含核心γc盒的氨基酸的具有相似理化性质
的氨基酸的图示。核心γc盒的肽衍生物可以为11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、
23、24、25-30、30-35、35-40、40-45、45-50或多于50个氨基酸的长度。在一些实施方案中，定制肽衍生物可以缀合至现有生物蛋白/肽的N端、C端和/或侧链残基。
定制肽衍生物，其能够抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。定制肽衍生物包括任何此类
肽，其部分氨基酸序列显示与核心γc盒氨基酸序列的约50％、50％-60％、60％-70％、
70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％的同一性。定制肽衍生物还包括任何此类肽，其中该肽衍生物的部分的氨基酸序列包含与核心γc盒的氨基酸具有相似理化
性质的氨基酸。例如，具有相似理化性质的氨基酸将包括苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和组氨酸，其为芳香族氨基酸。图2显示了可以取代包含核心γc盒的氨基酸的具有相似理化性质
的氨基酸的图示。核心γc盒的肽衍生物可以为11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、
23、24、25-30、30-35、35-40、40-45、45-50或多于50个氨基酸的长度。在一些实施方案中，定制肽衍生物可以缀合至现有生物蛋白/肽的N端、C端和/或侧链残基。
[0126] 本文中描述的一些实施方案涉及促进核心γc盒的定制肽衍生物的形成和/或稳定其一个或多个螺旋二级结构。在一些实施方案中，通过掺入一个或多个肽内烃连接子元
件(在文献中常常称为“订书钉(staples)”)来增强和/或稳定核心γc盒的定制肽衍生物的螺旋二级结构。
件(在文献中常常称为“订书钉(staples)”)来增强和/或稳定核心γc盒的定制肽衍生物的螺旋二级结构。
[0127] 如本文中所用，术语“订书钉”、“烃”、“烃连接子元件”、“烃连接子链”、“连接子元件”、“连接子链”或“连接子”是指包含至少1至约20个碳原子的任何含碳的化合物链(直的或有分支的)。含碳的化合物链可以具有一个或多个在链内共价接合的化学基团取代基。含碳的化合物链可以具有一个或多个Z或E几何构象，或者Z和E几何构象的组合的碳-碳双键。含碳的化合物链还可以具有一个或多个碳-碳三键。在一些实施方案中，含碳的化合物链可以具有一个或多个Z或E几何构象，或者Z和E几何构象的组合的碳-碳双键，并且可另外具有一个或多个碳-碳三键。含碳的化合物链还可根据卤素原子所允许的化学价共价掺入卤素
原子取代(氟、氯、溴和/或碘中的一种或多种)。含碳的化合物链可根据杂原子所允许的化学价共价掺入杂原子取代(氧、氮和/或硫中的一种或多种)。含碳的化合物链可共价掺入
(不受限制)一个或多个有或无取代基的碳芳香族环系统(非限制性实例包括苯基、萘基、蒽基等)、一个或多个有或无取代基的杂芳基环系统(非限制性实例包括呋喃、噻吩、吡咯、吡啶、吡喃、恶嗪、噻嗪、嘧啶、哒嗪、吡嗪、硫酮(thiine)、吡唑、咪唑、三唑、吲哚、喹诺酮、异恶唑、恶唑、异噻唑、噻唑等)、一个或多个有或无取代基的非芳香族碳环系统(非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等)，以及一个或多个有或无取代基的杂环基环系统(非限制性实例包括环氧乙烷、乙烯亚胺、环硫乙烷、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢吡喃、四氢噻喃、二恶烷、吡咯烷、哌啶，哌嗪、吗啉等)。合适的取代基(不受限制)包括以下中的一种或多种：烷基、烷芳基、芳基、芳烷基、烷氧基、硫代烷氧基、芳氧基、卤代烷基、卤代、氧代、硝基、羟基、巯基、羧基、烷基羰基、烷氧羰基、链烷磺酰基、氨基、酰氨基、叠氮基、氰基、PEG、亲和标记、靶向部分、脂肪酸来源的酰基、生物素、放射性同位素、治疗剂(非限制性实例包括雷帕霉素、长春花碱、紫杉醇等)、非蛋白荧光化学基团(非限制性实例包括FITC、酰肼、罗丹明、马来酰亚胺等)，以及蛋白荧光基团(非限制性实例包括GFP、YFP、mCherry等)。
原子取代(氟、氯、溴和/或碘中的一种或多种)。含碳的化合物链可根据杂原子所允许的化学价共价掺入杂原子取代(氧、氮和/或硫中的一种或多种)。含碳的化合物链可共价掺入
(不受限制)一个或多个有或无取代基的碳芳香族环系统(非限制性实例包括苯基、萘基、蒽基等)、一个或多个有或无取代基的杂芳基环系统(非限制性实例包括呋喃、噻吩、吡咯、吡啶、吡喃、恶嗪、噻嗪、嘧啶、哒嗪、吡嗪、硫酮(thiine)、吡唑、咪唑、三唑、吲哚、喹诺酮、异恶唑、恶唑、异噻唑、噻唑等)、一个或多个有或无取代基的非芳香族碳环系统(非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等)，以及一个或多个有或无取代基的杂环基环系统(非限制性实例包括环氧乙烷、乙烯亚胺、环硫乙烷、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢吡喃、四氢噻喃、二恶烷、吡咯烷、哌啶，哌嗪、吗啉等)。合适的取代基(不受限制)包括以下中的一种或多种：烷基、烷芳基、芳基、芳烷基、烷氧基、硫代烷氧基、芳氧基、卤代烷基、卤代、氧代、硝基、羟基、巯基、羧基、烷基羰基、烷氧羰基、链烷磺酰基、氨基、酰氨基、叠氮基、氰基、PEG、亲和标记、靶向部分、脂肪酸来源的酰基、生物素、放射性同位素、治疗剂(非限制性实例包括雷帕霉素、长春花碱、紫杉醇等)、非蛋白荧光化学基团(非限制性实例包括FITC、酰肼、罗丹明、马来酰亚胺等)，以及蛋白荧光基团(非限制性实例包括GFP、YFP、mCherry等)。
[0128] 在一些实施方案中，一个或多个连接子元件可以连接本公开的任何两个或更多个单独的定制肽衍生物。在一些实施方案中，当一个或多个连接子元件连接任何两个或更多
个单独的定制肽衍生物时，连接子元件被称为肽间连接子元件。
个单独的定制肽衍生物时，连接子元件被称为肽间连接子元件。
[0129] 在一些实施方案中，核心γc盒定制肽衍生物包含两个或更多个α-烯基取代的氨基酸。在一些实施方案中，两个或更多个α-烯基取代的氨基酸经在α-烯基取代的氨基酸处掺入的一个或多个肽内烃连接子元件连接。在一些实施方案中，α-烯基取代的氨基酸被用于催化通过肽合成期间的闭环复分解反应形成肽内烃连接子元件。肽内连接子元件连接本
公开的定制肽衍生物的相同序列上的单独的氨基酸。在一些实施方案中，本公开的肽是线
性的或环形的。在一些实施方案中，一种或多种肽具有肽间和肽内烃连接子的组合。本领域普通技术人员将理解线性和环形肽的任何组合以及任何组合和数量的肽间和肽内烃连接
子都是可能的。例如，环形肽可以具有连接环形肽内的两个取代的氨基酸(例如，α-烯基取代的氨基酸)的一个或多个肽内连接子。环形肽可另外经一个或多个肽间连接子与包含一
个或多个取代的氨基酸(例如，α-烯基取代的氨基酸)的其他的肽连接。
公开的定制肽衍生物的相同序列上的单独的氨基酸。在一些实施方案中，本公开的肽是线
性的或环形的。在一些实施方案中，一种或多种肽具有肽间和肽内烃连接子的组合。本领域普通技术人员将理解线性和环形肽的任何组合以及任何组合和数量的肽间和肽内烃连接
子都是可能的。例如，环形肽可以具有连接环形肽内的两个取代的氨基酸(例如，α-烯基取代的氨基酸)的一个或多个肽内连接子。环形肽可另外经一个或多个肽间连接子与包含一
个或多个取代的氨基酸(例如，α-烯基取代的氨基酸)的其他的肽连接。
[0130] α-烯基取代的氨基酸的非限制性实例包括R-烯丙基丙氨酸(CAS:288617-76-5；R3Ala)、S-烯丙基丙氨酸(CAS:288617-71-0；S3Ala)、D-烯丙基甘氨酸(CAS:170642-28-1；
D3Gly)、L-烯丙基甘氨酸(CAS:146549-21-5；L3Gly)、R-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-77-6；
R5Ala)、S-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-73-2；S5Ala)、R-戊烯基甘氨酸(CAS:1093645-21-6；
R5Gly)、S-戊烯基甘氨酸(CAS:856412-22-1；S5Gly)、R-丁烯基丙氨酸(CAS:1311933-82-0；
R4Ala)、S-丁烯基丙氨酸(CAS:288617-72-1；S4Ala)、R-丁烯基甘氨酸(CAS:865352-21-2；
R4Gly)、S-丁烯基甘氨酸(CAS:851909-08-5；S4Gly)、R-己烯基丙氨酸(CAS:288617-78-7；
R6Ala)、S-己烯基丙氨酸(CAS:288617-74-3；S6Ala)、R-己烯基甘氨酸(CAS:1208226-88-3；
R6Gly)、S-己烯基甘氨酸(CAS:1251904-51-4；S6Gly)、R-庚烯基丙氨酸(CAS:1311933-84-
2；R7Ala)、S-庚烯基丙氨酸(CAS:1311933-83-1；S7Ala)、R-庚烯基甘氨酸(CAS:1262886-
63-4；R7Gly)、S-庚烯基甘氨酸(CAS:1058705-57-9；S7Gly)、双取代的双丙烯基甘氨酸
(CAS:1311992-97-8；双3Gly)、双取代的双戊烯基甘氨酸(CAS:1068435-19-7；双5Gly)、双取代的双丁烯基甘氨酸(双4Gly)、双取代的双己烯基甘氨酸(双6Gly)、双取代的双庚烯基
甘氨酸(双7Gly)、R-辛烯基丙氨酸(CAS:945212-26-0；R8Ala)、S-辛烯基丙氨酸(CAS:
288617-75-4；S8Ala)、R-辛烯基甘氨酸(CAS:1191429-20-5；R8Gly)和S-辛烯基甘氨酸
(CAS:1262886-64-5；S8Gly)(参见表1)。还包括其他的氨基酸取代，并且其属于本公开的范围内。
D3Gly)、L-烯丙基甘氨酸(CAS:146549-21-5；L3Gly)、R-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-77-6；
R5Ala)、S-戊烯基丙氨酸(CAS:288617-73-2；S5Ala)、R-戊烯基甘氨酸(CAS:1093645-21-6；
R5Gly)、S-戊烯基甘氨酸(CAS:856412-22-1；S5Gly)、R-丁烯基丙氨酸(CAS:1311933-82-0；
R4Ala)、S-丁烯基丙氨酸(CAS:288617-72-1；S4Ala)、R-丁烯基甘氨酸(CAS:865352-21-2；
R4Gly)、S-丁烯基甘氨酸(CAS:851909-08-5；S4Gly)、R-己烯基丙氨酸(CAS:288617-78-7；
R6Ala)、S-己烯基丙氨酸(CAS:288617-74-3；S6Ala)、R-己烯基甘氨酸(CAS:1208226-88-3；
R6Gly)、S-己烯基甘氨酸(CAS:1251904-51-4；S6Gly)、R-庚烯基丙氨酸(CAS:1311933-84-
2；R7Ala)、S-庚烯基丙氨酸(CAS:1311933-83-1；S7Ala)、R-庚烯基甘氨酸(CAS:1262886-
63-4；R7Gly)、S-庚烯基甘氨酸(CAS:1058705-57-9；S7Gly)、双取代的双丙烯基甘氨酸
(CAS:1311992-97-8；双3Gly)、双取代的双戊烯基甘氨酸(CAS:1068435-19-7；双5Gly)、双取代的双丁烯基甘氨酸(双4Gly)、双取代的双己烯基甘氨酸(双6Gly)、双取代的双庚烯基
甘氨酸(双7Gly)、R-辛烯基丙氨酸(CAS:945212-26-0；R8Ala)、S-辛烯基丙氨酸(CAS:
288617-75-4；S8Ala)、R-辛烯基甘氨酸(CAS:1191429-20-5；R8Gly)和S-辛烯基甘氨酸
(CAS:1262886-64-5；S8Gly)(参见表1)。还包括其他的氨基酸取代，并且其属于本公开的范围内。
[0131] 本领域普通技术人员将理解在本文中公开的肽的实施方案中的任何位置处的任何氨基酸均可以是取代的氨基酸(例如，α-烯基取代的氨基酸)。在一些实施方案中，还包括允许形成一个或多个肽间和/或肽内连接(例如，经烃连接子元件)的氨基酸的其他的修饰。
[0132] 已显示肽内烃连接子元件能够通过减少肽对蛋白水解硝化的敏感性而增加肽的稳定性(在Walensky和Bird,2014,J.Med.Chem.57:6275-88中有综述，其在此通过引用整体
并入本文中)。因此，在一些实施方案中，肽内烃连接子元件减少肽对丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、苏氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、谷氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、天冬酰胺肽裂解酶或它们的组合的降解的敏感性。在一些实施方案中，肽内烃连接子元件通过稳定肽的生物
活性二级结构而提高来源于α-螺旋区的某些肽的生物活性。在一些实施方案中，生物活性对应于对细胞因子效应的抑制。
并入本文中)。因此，在一些实施方案中，肽内烃连接子元件减少肽对丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、苏氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、谷氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、天冬酰胺肽裂解酶或它们的组合的降解的敏感性。在一些实施方案中，肽内烃连接子元件通过稳定肽的生物
活性二级结构而提高来源于α-螺旋区的某些肽的生物活性。在一些实施方案中，生物活性对应于对细胞因子效应的抑制。
[0133] 基于对结合γc-亚基的细胞因子中的保守的γc盒基序的鉴定，申请人设计了新的19-mer的定制衍生肽，其为组合人IL-2和IL-15γc盒的部分氨基酸序列的人工复合肽。
19-mer肽，在本文中称为BNZ-γ，由以下氨基酸序列组成：I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)，其中通过加粗字符示出的氨基酸在IL-2和IL-15之间是保守的，并且画下划线的氨基酸代表这样的位置，即其中氨基酸的理化性质是保守的。
19-mer肽，在本文中称为BNZ-γ，由以下氨基酸序列组成：I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)，其中通过加粗字符示出的氨基酸在IL-2和IL-15之间是保守的，并且画下划线的氨基酸代表这样的位置，即其中氨基酸的理化性质是保守的。
[0134] 申请人发现19-mer BNZ-γ抑制IL-15和IL-9诱导的细胞增殖，而非IL-3或IL-4诱导的细胞增殖。参见图3A和实施例2。申请人还证明BNZ-γ抑制细胞内细胞因子信号转导分子STAT-5的IL-15介导的磷酸化。参见图4A和实施例5。这些结果证明保守的γc盒基序的定制肽衍生物能够抑制多种γc-细胞因子的活性。
[0135] 数个实施方案涉及19-mer BNZ-γ氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的定制衍生肽，其能够抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。19-
mer BNZ-γ氨基酸序列的定制肽衍生物包括任何这样的肽，其部分的氨基酸序列显示与氨
基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的约50％、50％-60％、
60％-70％、70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％的同一性。定制肽衍生物还包括任何这样的肽，其中该肽衍生物的部分的氨基酸序列包含具有与序列I-K-E-F-L-
Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的氨基酸相似的理化性质的氨基酸。在数个
实施方案中，定制衍生肽的氨基酸残基保留了与BNZ-γ的氨基酸残基相似的理化性质，但
显示对来自原始的19-mer肽的那些的6个γc-细胞因子家族成员的不同的生物抑制特异
性。BNZ-γ的肽衍生物可以为19、20、21、22、23、24、25-30、30-35、35-40、40-45、45-50或多于50个氨基酸的长度。在一些实施方案中，定制肽衍生物可缀合至现有的生物蛋白/肽的N
端、C端和/或侧链残基。其他的部分可以包括稳定复合肽或其他的部分的蛋白或肽，包括但不限于：牛血清白蛋白(BSA)、白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)、IgG的Fc区、起支架作用的生物蛋白、针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体、金属离子和聚乙二醇(PEG)。
mer BNZ-γ氨基酸序列的定制肽衍生物包括任何这样的肽，其部分的氨基酸序列显示与氨
基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的约50％、50％-60％、
60％-70％、70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％的同一性。定制肽衍生物还包括任何这样的肽，其中该肽衍生物的部分的氨基酸序列包含具有与序列I-K-E-F-L-
Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的氨基酸相似的理化性质的氨基酸。在数个
实施方案中，定制衍生肽的氨基酸残基保留了与BNZ-γ的氨基酸残基相似的理化性质，但
显示对来自原始的19-mer肽的那些的6个γc-细胞因子家族成员的不同的生物抑制特异
性。BNZ-γ的肽衍生物可以为19、20、21、22、23、24、25-30、30-35、35-40、40-45、45-50或多于50个氨基酸的长度。在一些实施方案中，定制肽衍生物可缀合至现有的生物蛋白/肽的N
端、C端和/或侧链残基。其他的部分可以包括稳定复合肽或其他的部分的蛋白或肽，包括但不限于：牛血清白蛋白(BSA)、白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)、IgG的Fc区、起支架作用的生物蛋白、针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体、金属离子和聚乙二醇(PEG)。
[0136] 在一些实施方案中，本文中公开的任何的定制肽衍生物均可包含一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)包含一个或多个肽内烃
连接子元件。在一些实施方案中，19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)包含一个或多个肽内烃连
接子元件，其连接SEQ ID NO:1上位置相距4个残基的两个单独的氨基酸。在一些实施方案
中，19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:1上位置相距7个残基的两个单独的氨基酸。在一些实施方案中，19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:
1)包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:1上位置相距4个残基和SEQ ID
NO:1上位置相距7个残基的两个单独的氨基酸。
连接子元件。在一些实施方案中，19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)包含一个或多个肽内烃连
接子元件，其连接SEQ ID NO:1上位置相距4个残基的两个单独的氨基酸。在一些实施方案
中，19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:1上位置相距7个残基的两个单独的氨基酸。在一些实施方案中，19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:
1)包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:1上位置相距4个残基和SEQ ID
NO:1上位置相距7个残基的两个单独的氨基酸。
[0137] 在一些实施方案中，当19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)是较长肽序列的一部分时，通过每个肽内烃连接的0个氨基酸或通过每个肽内烃连接子元件连接的一个或多个氨基酸
可以位于SEQ ID NO:1的第一个残基的N端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接
子元件连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:1的第一个残基的N端单个位置。在一些实
施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:
1的第一个残基的N端位置。
可以位于SEQ ID NO:1的第一个残基的N端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接
子元件连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:1的第一个残基的N端单个位置。在一些实
施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:
1的第一个残基的N端位置。
[0138] 在一些实施方案中，当19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)是较长的肽序列的一部分时，通过每个肽内烃连接的0个氨基酸或通过每个肽内烃连接子元件连接的一个或多个氨
基酸可以位于SEQ ID NO:1的最后的残基的C端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃
连接子元件连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:1的最后的残基的C端单个位置。在一
些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:1的最后的残基的C端位置。
基酸可以位于SEQ ID NO:1的最后的残基的C端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃
连接子元件连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:1的最后的残基的C端单个位置。在一
些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:1的最后的残基的C端位置。
[0139] 在一些实施方案中，当19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)是较长的肽序列的一部分时，通过每个肽内烃连接的0个氨基酸或通过每个肽内烃连接子元件连接的一个或多个氨
基酸可以位于SEQ ID NO:1的第一个残基的N端位置，以及位于最后的残基SEQ ID NO:1的C
端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:1的第一个残基的N端单个位置，以及位于SEQ ID NO:1的最后的残基的C端单个位
置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:1的第一个残基的N端位置，以及位于SEQ ID NO:1的最后的残基的C端位置。
基酸可以位于SEQ ID NO:1的第一个残基的N端位置，以及位于最后的残基SEQ ID NO:1的C
端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:1的第一个残基的N端单个位置，以及位于SEQ ID NO:1的最后的残基的C端单个位
置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:1的第一个残基的N端位置，以及位于SEQ ID NO:1的最后的残基的C端位置。
[0140] 在19-mer BNZ-γ(SEQ ID NO:1)的一些实施方案中，0个或1个或多个氨基酸通过位于与SEQ ID NO:1的一个或多个残基缀合的一个或多个另外的部分上的每个肽内烃连接
子元件而连接。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0个或1个氨基酸可
以位于与SEQ ID NO:1缀合的一个或多个另外的部分上。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于与SEQ ID NO:1缀合的一个或多个另外的部分上。
子元件而连接。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0个或1个氨基酸可
以位于与SEQ ID NO:1缀合的一个或多个另外的部分上。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于与SEQ ID NO:1缀合的一个或多个另外的部分上。
[0141] 在19-mer BNZ-γ的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1或2个氨基酸可以包括(D)以及(L)或(R)以及(S)立体化学构型的天然的或非天然的氨基酸。在
19-mer BNZ-γ的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、7、
8、9或10个氨基酸包含天然的氨基酸、非天然的氨基酸，或它们的组合。在19-mer BNZ-γ的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸包含(D)立体化学构型、(L)立体化学构型，或它们的组合。在19-mer BNZ-γ的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸包含(R)立体化学构型、(S)立体化学构型，或它们的组合。
19-mer BNZ-γ的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、7、
8、9或10个氨基酸包含天然的氨基酸、非天然的氨基酸，或它们的组合。在19-mer BNZ-γ的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸包含(D)立体化学构型、(L)立体化学构型，或它们的组合。在19-mer BNZ-γ的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸包含(R)立体化学构型、(S)立体化学构型，或它们的组合。
[0142] 在19-mer BNZ-γ的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1或2个氨基酸通过取代的侧链α碳或非取代的侧链α碳而连接。在19-mer BNZ-γ的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸通过取代的侧链α碳、非取代的侧链α碳或它们的组合而连接。包含D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)(其中X表示任何氨基酸)的γc盒氨基酸序列是在γc-细胞因子家族的
每个成员的D螺旋中识别的对于与每个多单元细胞因子受体的常见γc-亚基的相互作用具
有重要性的保守序列。
每个成员的D螺旋中识别的对于与每个多单元细胞因子受体的常见γc-亚基的相互作用具
有重要性的保守序列。
[0143] 在一些实施方案中，本文中公开的任何定制肽衍生物均可包含一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，SEQ ID NO:2的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元
件。在一些实施方案中，SEQ ID NO:2的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:2上位置相距4个残基的两个单独的氨基酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:2的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:2上位置相距7个残基的两个
单独的氨基酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:2的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:2上位置相距4个残基和SEQ ID NO:2上位置相距7个残基的两个单独
的氨基酸。
件。在一些实施方案中，SEQ ID NO:2的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:2上位置相距4个残基的两个单独的氨基酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:2的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:2上位置相距7个残基的两个
单独的氨基酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:2的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:2上位置相距4个残基和SEQ ID NO:2上位置相距7个残基的两个单独
的氨基酸。
[0144] 在一些实施方案中，当SEQ ID NO:2的复合肽是较长肽序列的一部分时，通过每个肽内烃连接的0个氨基酸或通过每个肽内烃连接子元件连接的一个或多个氨基酸可以位于
SEQ ID NO:2的第一个残基的N端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连
接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:2的第一个残基的N端单个位置。在一些实施方案
中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:2的第一个残基的N端位置。
SEQ ID NO:2的第一个残基的N端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连
接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:2的第一个残基的N端单个位置。在一些实施方案
中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:2的第一个残基的N端位置。
[0145] 在一些实施方案中，当SEQ ID NO:2的复合肽是较长肽序列的一部分时，通过每个肽内烃连接的0个氨基酸或通过每个肽内烃连接子元件连接的一个或多个氨基酸可以位于
SEQ ID NO:2的最后的残基的C端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连
接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:2的最后的残基的C端单个位置。在一些实施方案
中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:2的最后的残基的C端位置。
SEQ ID NO:2的最后的残基的C端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连
接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:2的最后的残基的C端单个位置。在一些实施方案
中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:2的最后的残基的C端位置。
[0146] 在一些实施方案中，当SEQ ID NO:2的复合肽是较长的肽序列的一部分时，通过每个肽内烃连接的0个氨基酸或通过每个肽内烃连接子元件连接的一个或多个氨基酸可以位
于SEQ ID NO:2的第一个残基的N端位置，以及位于最后的残基SEQ ID NO:2的C端位置。在
一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:2
的第一个残基的N端单个位置，以及位于SEQ ID NO:2的最后的残基的C端单个位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:2的第一个残基的N端位置，以及位于SEQ ID NO:2的最后的残基的C端位置。
于SEQ ID NO:2的第一个残基的N端位置，以及位于最后的残基SEQ ID NO:2的C端位置。在
一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:2
的第一个残基的N端单个位置，以及位于SEQ ID NO:2的最后的残基的C端单个位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:2的第一个残基的N端位置，以及位于SEQ ID NO:2的最后的残基的C端位置。
[0147] 在SEQ ID NO:2的复合肽的一些实施方案中，0个或一个或多个氨基酸通过位于与SEQ ID NO:2的一个或多个残基缀合的一个或多个另外的部分上的每个肽内烃连接子元件
而连接。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0或1个氨基酸可以位于与
SEQ ID NO:2缀合的一个或多个另外的部分上。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于与SEQ ID NO:2缀合的一个或多个另外的部分上。
而连接。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0或1个氨基酸可以位于与
SEQ ID NO:2缀合的一个或多个另外的部分上。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于与SEQ ID NO:2缀合的一个或多个另外的部分上。
[0148] 在SEQ ID NO:2的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1或2个氨基酸可以包括(D)以及(L)或(R)以及(S)立体化学构型的天然的或非天然的氨
基酸。在SEQ ID NO:2的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、
2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸包含天然的氨基酸、非天然的氨基酸，或它们的组合。在SEQ ID NO:2的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、
7、8、9或10个氨基酸包含(D)立体化学构型、(L)立体化学构型，或它们的组合。在SEQ ID NO:2的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、7、8、
9或10个氨基酸包含(R)立体化学构型、(S)立体化学构型，或它们的组合。
基酸。在SEQ ID NO:2的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、
2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸包含天然的氨基酸、非天然的氨基酸，或它们的组合。在SEQ ID NO:2的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、
7、8、9或10个氨基酸包含(D)立体化学构型、(L)立体化学构型，或它们的组合。在SEQ ID NO:2的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、7、8、
9或10个氨基酸包含(R)立体化学构型、(S)立体化学构型，或它们的组合。
[0149] 在SEQ ID NO:2的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1或2个氨基酸通过取代的侧链α碳或非取代的侧链α碳而连接。在SEQ ID NO:2的复合肽的一些实施方案中通过每个肽内烃连接子元件连接的，0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸通过取代的侧链α碳、非取代的侧链α碳或它们的组合而连接。
[0150] 数个实施方案涉及IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9或IL-7的γc盒基序的定制肽衍生物，其示出在图1A中。其他的实施方案涉及定制衍生肽，其为组合人IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9和IL-7γc盒基序中的两种或更多种的氨基酸序列的人工复合肽。数个实施方案涉及IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9或IL-7的γc盒基序的定制肽衍生物，其具有部分的显示与IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9或IL-7的γc盒基序的氨基酸序列的约50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％的同一性的氨基酸序列。IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9或IL-7的γc盒基序的定制肽衍生物还包括任何这样的肽，其中该肽衍生物的部分的氨基酸序列包含与IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9或IL-7的γc盒基序序列的氨基酸具有相似理化性质的氨基酸。
[0151] 数个实施方案涉及将抑制γc-细胞因子中的一种、所有或选择的成员的功能的定制肽衍生物。在一些实施方案中，定制肽衍生物选择性靶向单独的γc-细胞因子家族成员。
例如，定制肽衍生物能够选择性抑制IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15或IL-21的功能。在其他的实施方案中，定制肽衍生物能够抑制2种或更多种γc-细胞因子家族成员。
例如，定制肽衍生物能够选择性抑制IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15或IL-21的功能。在其他的实施方案中，定制肽衍生物能够抑制2种或更多种γc-细胞因子家族成员。
[0152] 例如，本实施方案的定制肽衍生物能够选择性抑制以下物质的功能：IL-2与IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21中的一种或多种的组合；IL-4与IL-7、IL-9、IL-15和IL-21中的一种或多种的组合；IL-7与IL-9、IL-15和IL-21中的一种或多种的组合；IL-9与IL-2、IL-4、IL-7、IL-15和IL-21中的一种或多种的组合；IL-15与IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-21中的一种或多种的组合；或者IL-21与IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15中的一种或多种的组合。在其他的实施方案中，定制肽衍生物能够全面地靶向所有γc-细胞因子家族成员。
[0153] 不希望受到特定理论的束缚，定制肽衍生物能够通过减少γc-细胞因子与γc-亚基的结合，例如，作为竞争性抑制剂而抑制γc-细胞因子中的所有或选择的成员的功能。这样的定制肽衍生物可用于不同的应用，包括作为临床药物。
[0154] 数个实施方案涉及这样的定制肽衍生物，其将调节(包括增强或减少)γc-细胞因子的选择的成员中的一种、两种或更多种的功能。在一些实施方案中，定制肽衍生物选择性靶向单独的γc-细胞因子家族成员。例如，定制肽衍生物可以选择性增强或抑制IL-2、IL-
4、IL-7、IL-9、IL-15或IL-21的功能。在其他的实施方案中，定制肽衍生物可以增强或抑制两类或更多类γc-细胞因子家族成员。在某些实施方案中，定制肽衍生物可以包含P-K-E-
F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)，其可以增强或抑制γc-细胞因子
中的一种、两种或更多种的活性。在某些实施方案中，定制肽衍生物可以包含P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)，其可以抑制至少IL-15和IL-21的活性。
4、IL-7、IL-9、IL-15或IL-21的功能。在其他的实施方案中，定制肽衍生物可以增强或抑制两类或更多类γc-细胞因子家族成员。在某些实施方案中，定制肽衍生物可以包含P-K-E-
F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)，其可以增强或抑制γc-细胞因子
中的一种、两种或更多种的活性。在某些实施方案中，定制肽衍生物可以包含P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)，其可以抑制至少IL-15和IL-21的活性。
[0155] 在一些实施方案中，本文中公开的保守的γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。在一些实施方案中，本文中公开的保守的
γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通过抑制由一种或多种γc-细胞因子诱导
的细胞增殖而抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。在一些实施方案中，本文中公开的保
守的γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通过抑制由一种或多种γc-细胞因子
介导的细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化而抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。在
一些实施方案中，本文中公开的保守的γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通
过抑制由一种或多种γc-细胞因子诱导的细胞增殖，以及通过抑制由一种或多种γc-细胞
因子介导的细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化而抑制一种或多种γc-细胞因子的活
性。在一些实施方案中，本文中公开的保守的γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通过一种或多种其他的机制而抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。
γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通过抑制由一种或多种γc-细胞因子诱导
的细胞增殖而抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。在一些实施方案中，本文中公开的保
守的γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通过抑制由一种或多种γc-细胞因子
介导的细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化而抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。在
一些实施方案中，本文中公开的保守的γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通
过抑制由一种或多种γc-细胞因子诱导的细胞增殖，以及通过抑制由一种或多种γc-细胞
因子介导的细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化而抑制一种或多种γc-细胞因子的活
性。在一些实施方案中，本文中公开的保守的γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通过一种或多种其他的机制而抑制一种或多种γc-细胞因子的活性。
[0156] 在一些实施方案中，本文中公开的肽序列中的一种或多种抑制由本文中公开的细胞因子(例如，IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21)中的一种或多种诱导的细胞类型中的一种或多种的增殖。在一些实施方案中，本文中公开的肽序列中的一种或多种抑制由本文
中公开的所有细胞因子诱导的细胞类型中的一种或多种的增殖。在一些实施方案中，本文
中公开的肽序列中的一种或多种抑制由本文中公开的一些但非所有细胞因子诱导的细胞
类型中的一种或多种的增殖。例如，21mer SEQ ID NO:3抑制IL-15和IL-21诱导的细胞增
殖，但非IL-2、IL-4或IL-9诱导的细胞增殖。参见图3C和实施例2。
中公开的所有细胞因子诱导的细胞类型中的一种或多种的增殖。在一些实施方案中，本文
中公开的肽序列中的一种或多种抑制由本文中公开的一些但非所有细胞因子诱导的细胞
类型中的一种或多种的增殖。例如，21mer SEQ ID NO:3抑制IL-15和IL-21诱导的细胞增
殖，但非IL-2、IL-4或IL-9诱导的细胞增殖。参见图3C和实施例2。
[0157] 在一些实施方案中，本文中公开的保守的γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够通过抑制由本文中公开的一种或多种γc-细胞因子(例如，IL-2、IL-4、IL-7、IL-
9、IL-15和IL-21)介导的一种或多种细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化抑制一种或多
种γc-细胞因子的活性。在一些实施方案中，本文中公开的保守的γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够抑制由本文中公开的所有γc-细胞因子介导的一种或多种细胞内
细胞因子信号转导分子的磷酸化。在一些实施方案中，本文中公开的保守的γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够抑制由本文中公开的一些但非所有γc-细胞因子介导的
一种或多种细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化。例如，SEQ ID NO:3抑制IL-15介导的
细胞内细胞因子信号转导分子STAT-5的磷酸化，但非IL-2介导的STAT-5的磷酸化。
9、IL-15和IL-21)介导的一种或多种细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化抑制一种或多
种γc-细胞因子的活性。在一些实施方案中，本文中公开的保守的γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够抑制由本文中公开的所有γc-细胞因子介导的一种或多种细胞内
细胞因子信号转导分子的磷酸化。在一些实施方案中，本文中公开的保守的γc盒基序的定制肽衍生物中的一种或多种能够抑制由本文中公开的一些但非所有γc-细胞因子介导的
一种或多种细胞内细胞因子信号转导分子的磷酸化。例如，SEQ ID NO:3抑制IL-15介导的
细胞内细胞因子信号转导分子STAT-5的磷酸化，但非IL-2介导的STAT-5的磷酸化。
[0158] 同样，例如，SEQ ID NO:3抑制IL-21介导的细胞内细胞因子信号转导分子STAT-3的磷酸化。参见图4B和实施例5。
[0159] 在一些实施方案中，定制肽衍生物可包括任何这样的肽，其部分氨基酸序列显示与氨基酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的约50％、
50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％的同一性。
定制肽衍生物还包括任何这样的肽，其中该肽衍生物的部分的氨基酸序列包含与序列P-K-
E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的氨基酸具有相似的理化性质
的氨基酸。
50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％的同一性。
定制肽衍生物还包括任何这样的肽，其中该肽衍生物的部分的氨基酸序列包含与序列P-K-
E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的氨基酸具有相似的理化性质
的氨基酸。
[0160] 在几个实施方案中，定制衍生肽的氨基酸残基保留了与P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的氨基酸残基相似的理化性质，但显示对来自P-K-E-
F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的原始肽的那些的6个γc-细胞因
子家族成员(即IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15或IL-21)的不同的生物抑制特异性。序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽衍生物可以为19、20、21、
22、23、24、25-30、30-35、35-40、40-45、45-50或多于50个氨基酸的长度。
F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的原始肽的那些的6个γc-细胞因
子家族成员(即IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15或IL-21)的不同的生物抑制特异性。序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽衍生物可以为19、20、21、
22、23、24、25-30、30-35、35-40、40-45、45-50或多于50个氨基酸的长度。
[0161] 在一些实施方案中，定制肽衍生物可以缀合至现有的生物蛋白/肽的N端、C端和/或侧链残基。在一些实施方案中，SEQ ID NO:3的复合肽可以通过复合肽的N端、C端或侧链与其他的部分缀合。其他的部分可以包括稳定复合肽或其他的部分的蛋白或肽，包括但不
限于：牛血清白蛋白(BSA)、白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)、IgG的Fc区、起支架作用的生物蛋白、针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体、金属离子和聚乙二醇(PEG)。
限于：牛血清白蛋白(BSA)、白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)、IgG的Fc区、起支架作用的生物蛋白、针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体、金属离子和聚乙二醇(PEG)。
[0162] 在一些实施方案中，本文中公开的任何的定制肽衍生物均可包含一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，SEQ ID NO:3的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，SEQ ID NO:3的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:3上位置相距4个残基的两个单独的氨基酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:3的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:3上位置相距7个残基的两个
单独的氨基酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:3的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:3上位置相距4个残基和SEQ ID NO:3上位置相距7个残基的两个单独
的氨基酸。
单独的氨基酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO:3的复合肽包含一个或多个肽内烃连接子元件，其连接SEQ ID NO:3上位置相距4个残基和SEQ ID NO:3上位置相距7个残基的两个单独
的氨基酸。
[0163] 在一些实施方案中，当SEQ ID NO:3的复合肽是较长的肽序列的一部分时，通过每个肽内烃连接的0个氨基酸或通过每个肽内烃连接子元件连接的一个或多个氨基酸可以位
于SEQ ID NO:3的第一个残基的N端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件
连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:3的第一个残基的N端单个位置。在一些实施方案
中，通过每个肽内烃连接子元连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:3的第一个残基的N端位置。
于SEQ ID NO:3的第一个残基的N端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件
连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:3的第一个残基的N端单个位置。在一些实施方案
中，通过每个肽内烃连接子元连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:3的第一个残基的N端位置。
[0164] 在一些实施方案中，当SEQ ID NO:3的复合肽是较长的肽序列的一部分时，通过每个肽内烃连接的0个氨基酸或通过每个肽内烃连接子元件连接的一个或多个氨基酸可以位
于SEQ ID NO:3的最后的残基的C端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件
连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:3的最后的残基的C端单个位置。在一些实施方案
中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:3的最后的残基的C端位置。
于SEQ ID NO:3的最后的残基的C端位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件
连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:3的最后的残基的C端单个位置。在一些实施方案
中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:3的最后的残基的C端位置。
[0165] 在一些实施方案中，当SEQ ID NO:3的复合肽是较长的肽序列的一部分时，通过每个肽内烃连接的0个氨基酸或通过每个肽内烃连接子元件连接的一个或多个氨基酸可以位
于SEQ ID NO:3的第一个残基的N端位置，以及最后的残基SEQ ID NO:3的C端位置。在一些
实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:3的第
一个残基的N端单个位置，以及位于SEQ ID NO:3的最后的残基的C端单个位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:3的第一个残基的N端位置，以及位于SEQ ID NO:3的最后的残基的C端位置。
于SEQ ID NO:3的第一个残基的N端位置，以及最后的残基SEQ ID NO:3的C端位置。在一些
实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0或1个氨基酸可以位于SEQ ID NO:3的第
一个残基的N端单个位置，以及位于SEQ ID NO:3的最后的残基的C端单个位置。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于SEQ ID NO:3的第一个残基的N端位置，以及位于SEQ ID NO:3的最后的残基的C端位置。
[0166] 在SEQ ID NO:3的复合肽的一些实施方案中，0个或1个或多个氨基酸通过位于与SEQ ID NO:3的一个或多个残基缀合的一个或多个另外的部分上的每个肽内烃连接子元件
而连接。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0或1个氨基酸可以位于与
SEQ ID NO:3缀合的一个或多个另外的部分上。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于与SEQ ID NO:3缀合的一个或多个另外的部分上。
而连接。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0或1个氨基酸可以位于与
SEQ ID NO:3缀合的一个或多个另外的部分上。在一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4或5个氨基酸可以位于与SEQ ID NO:3缀合的一个或多个另外的部分上。
[0167] 在SEQ ID NO:3的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1或2个氨基酸可以包括(D)以及(L)或(R)以及(S)立体化学构型的天然的或非天然的氨
基酸。在SEQ ID NO:3的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、
2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸包含天然的氨基酸、非天然的氨基酸，或它们的组合。在SEQ ID NO:3的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、
7、8、9或10个氨基酸包含(D)立体化学构型、(L)立体化学构型，或它们的组合。在SEQ ID NO:3的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、7、8、
9或10个氨基酸包含(R)立体化学构型、(S)立体化学构型，或它们的组合。
基酸。在SEQ ID NO:3的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、
2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸包含天然的氨基酸、非天然的氨基酸，或它们的组合。在SEQ ID NO:3的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、
7、8、9或10个氨基酸包含(D)立体化学构型、(L)立体化学构型，或它们的组合。在SEQ ID NO:3的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、7、8、
9或10个氨基酸包含(R)立体化学构型、(S)立体化学构型，或它们的组合。
[0168] 在SEQ ID NO:3的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1或2个氨基酸通过取代的侧链α碳或非取代的侧链α碳而连接。在SEQ ID NO:3的复合肽的一些实施方案中，通过每个肽内烃连接子元件连接的0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸通过取代的侧链α碳、非取代的侧链α碳或它们的组合而连接。
[0169] 本实施方案的肽还可包含有或无多种侧链修饰和/或取代中的任何一种的一个或多个稀有氨基酸(如4个羟脯氨酸或羟赖氨酸)、有机酸或酰胺和/或常见氨基酸的衍生物，
如具有酯化的(例如，苄酯、甲酯或乙酯)或酰胺化的C端羧酸盐和/或具有N端氨基修饰(例
如，乙酰化或烷氧羰基氨基)的氨基酸。可以存在于本实施方案的定制肽衍生物中的侧链修饰、取代或它们的组合包括但不限于：α-甲基、α-烯基、烃化、甲基化、苄化、叔丁化、甲苯磺酰化、烷氧羰基氨基等。
如具有酯化的(例如，苄酯、甲酯或乙酯)或酰胺化的C端羧酸盐和/或具有N端氨基修饰(例
如，乙酰化或烷氧羰基氨基)的氨基酸。可以存在于本实施方案的定制肽衍生物中的侧链修饰、取代或它们的组合包括但不限于：α-甲基、α-烯基、烃化、甲基化、苄化、叔丁化、甲苯磺酰化、烷氧羰基氨基等。
[0170] 可存在的除常见氨基酸外的残基包括但不限于：青霉胺、四亚甲基半胱氨酸、五亚甲基半胱氨酸、巯基丙酸、五亚甲基-巯基丙酸、2-巯基苯、2-巯基苯胺、2-巯基脯氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸、氨基己二酸、氨基甲基苯甲酸和二氨基丙酸。
[0171] 可以通过本领域技术人员已知的各种方法制造和获得本实施方案的肽。例如，可以通过基因工程，基于编码本实施方案的肽的核苷酸序列制造肽，或通过肽固相合成等方
式化学合成肽，或者以其组合制造和获得。固相肽合成领域的技术人员可以容易地掺入(D)以及(L)或(R)以及(S)立体化学构型的天然的或非天然的氨基酸。对固相肽合成领域的技
术人员还显而易见的是利用(D)、(L)、(R)或(S)立体化学构型或它们的组合中的一种或多
种的α-取代的(如α-烯基)天然的或非天然的氨基酸，来制造和获得包含一个或多个本实施方案的肽内烃连接子元件的肽。在一些实施方案中，可以通过催化一个或多个闭环复分解
反应来产生连接α-取代的氨基酸(例如，α-烯基氨基酸)的肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，可以通过在肽合成期间，于结合有树脂的肽上，使用苯亚甲基双(三环己基-膦)-二氯钌(Grubb’s催化剂)催化闭环复分解反应来产生一个或多个肽内烃连接子元件。在一些
实施方案中，还包括在一个或多个已知的肽合成过程期间的其他的闭环合成反应和/或机
制。在一些实施方案中，可以通过在肽合成期间，于结合有树脂的肽上，使用苯亚甲基双(三环己基-膦)-二氯钌(Grubb’s催化剂)催化闭环复分解反应来产生一个或多个肽间烃连接
子元件。在一些实施方案中，还包括在一个或多个已知的肽合成过程期间的其他的闭环合
成反应和/或机制。
式化学合成肽，或者以其组合制造和获得。固相肽合成领域的技术人员可以容易地掺入(D)以及(L)或(R)以及(S)立体化学构型的天然的或非天然的氨基酸。对固相肽合成领域的技
术人员还显而易见的是利用(D)、(L)、(R)或(S)立体化学构型或它们的组合中的一种或多
种的α-取代的(如α-烯基)天然的或非天然的氨基酸，来制造和获得包含一个或多个本实施方案的肽内烃连接子元件的肽。在一些实施方案中，可以通过催化一个或多个闭环复分解
反应来产生连接α-取代的氨基酸(例如，α-烯基氨基酸)的肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，可以通过在肽合成期间，于结合有树脂的肽上，使用苯亚甲基双(三环己基-膦)-二氯钌(Grubb’s催化剂)催化闭环复分解反应来产生一个或多个肽内烃连接子元件。在一些
实施方案中，还包括在一个或多个已知的肽合成过程期间的其他的闭环合成反应和/或机
制。在一些实施方案中，可以通过在肽合成期间，于结合有树脂的肽上，使用苯亚甲基双(三环己基-膦)-二氯钌(Grubb’s催化剂)催化闭环复分解反应来产生一个或多个肽间烃连接
子元件。在一些实施方案中，还包括在一个或多个已知的肽合成过程期间的其他的闭环合
成反应和/或机制。
[0172] 在一些实施方案中，复合肽中的至少两个α-烯基取代的氨基酸通过至少一个肽内烃连接子元件而连接。在一些实施方案中，通过肽内烃连接子元件连接的至少两个α-烯基取代的氨基酸通过n-2个氨基酸隔开，其中n表示肽内连接所包含的氨基酸的数量。
[0173] 在一些实施方案中，在与复合肽的二级结构中的单α-螺旋转角相关的氨基酸位置处掺入一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，当复合肽包含一个或多个非连
续的单α-螺旋转角时，与复合肽的单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+4，其中i是单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+4是单α-螺旋转角最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i和i+4包含α-烯基取代的氨基酸，并且其中i和i+4的位置相距4个残基(隔开4个)。
续的单α-螺旋转角时，与复合肽的单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+4，其中i是单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+4是单α-螺旋转角最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i和i+4包含α-烯基取代的氨基酸，并且其中i和i+4的位置相距4个残基(隔开4个)。
[0174] 在一些实施方案中，固相肽合成领域的技术人员可以容易地合成这样的复合肽，其包含多于一个肽内烃连接子元件，使得复合肽包含多于一个单α-螺旋转角。在一些实施方案中，多于一个单α-螺旋转角是非连续的，即多于一个单α-螺旋转角不共享取代的氨基酸。例如，在一些实施方案中，复合肽可以包含式1、式2、式3、式4、式5、式6、式7和/或式8的一个或多个肽内烃连接子元件(参见表1)，其跨复合肽的多于一个非连续的单α-螺旋转角。
[0175] 不希望束缚于包含本实施方案的一个或多个肽内烃连接子元件的任何特定肽，包含一个连接位置相距4个残基的两个单独的氨基酸的肽内烃连接子元件或者一个α-螺旋转
角(位置i和位置i+4)的通用的肽实例，可以具有在使用Grubb’s催化剂催化闭环复分解反
应之前，于肽的固相合成期间，在肽仍然经树脂结合(resin-bound)在固相支持物上时，在每个位置i和i+4处掺入的S-戊烯基丙氨酸(S5Ala)。这将产生位置相距4个残基的包含以下
示出的肽内烃连接子元件(SEQ ID NO:78)的肽序列：
角(位置i和位置i+4)的通用的肽实例，可以具有在使用Grubb’s催化剂催化闭环复分解反
应之前，于肽的固相合成期间，在肽仍然经树脂结合(resin-bound)在固相支持物上时，在每个位置i和i+4处掺入的S-戊烯基丙氨酸(S5Ala)。这将产生位置相距4个残基的包含以下
示出的肽内烃连接子元件(SEQ ID NO:78)的肽序列：
[0176]
[0177] 在一些实施方案中，在与复合肽的二级结构中的双α-螺旋转角相关的氨基酸位置处掺入一个或多个肽内烃连接子元件。在一些实施方案中，当复合肽包含一个或多个非连
续的双α-螺旋转角时，与复合肽的双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+7，其中i是双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，且i+7是双α-螺旋转角最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i和i+7包含α-烯基取代的氨基酸，并且其中i和i+7的位置相距7个残基(隔开7个)。
续的双α-螺旋转角时，与复合肽的双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+7，其中i是双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，且i+7是双α-螺旋转角最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i和i+7包含α-烯基取代的氨基酸，并且其中i和i+7的位置相距7个残基(隔开7个)。
[0178] 不希望束缚于包含本实施方案的一个或多个肽内烃连接子元件的任何特定的肽，包含连接位置相距7个残基的两个单独的氨基酸的一个肽内烃连接子元件，或两个α-螺旋
转角(位置i和位置i+7)的通用的肽实例，可以具有在使用Grubb’s催化剂催化闭环复分解
反应之前，于肽的固相合成期间，在肽仍然经树脂结合在固相支持物上时，在位置i处掺入的R-辛烯基丙氨酸(R8Ala)和在位置i+7处掺入的S-戊烯基丙氨酸(S5Ala)。这将产生包含
以下示出的(SEQ ID NO:79)位置相距7个残基的肽内烃连接子元件的肽序列：
转角(位置i和位置i+7)的通用的肽实例，可以具有在使用Grubb’s催化剂催化闭环复分解
反应之前，于肽的固相合成期间，在肽仍然经树脂结合在固相支持物上时，在位置i处掺入的R-辛烯基丙氨酸(R8Ala)和在位置i+7处掺入的S-戊烯基丙氨酸(S5Ala)。这将产生包含
以下示出的(SEQ ID NO:79)位置相距7个残基的肽内烃连接子元件的肽序列：
[0179]
[0180] 本领域普通技术人员将理解SEQ ID NO:79中辛烯基丙氨酸(R8Ala)和S-戊烯基丙氨酸(S5Ala)的位置可以转换，使得在位置i处掺入S-戊烯基丙氨酸(S5Ala)，并且在位置i+
7处掺入R-辛烯基丙氨酸(R8Ala)(SEQ ID NO:80)。
7处掺入R-辛烯基丙氨酸(R8Ala)(SEQ ID NO:80)。
[0181] 不希望束缚于包含本实施方案的一个或多个肽内烃连接子元件的任何特定的肽，包含连接位置相距7个残基的两个单独的氨基酸的一个肽内烃连接子元件或两个α-螺旋转
角(位置i和位置i+7)的通用的肽实例，可以具有在使用Grubb’s催化剂催化闭环复分解反
应之前，在肽仍然经树脂结合在固相支持物上时，于肽的固相合成期间在位置i处掺入的S-辛烯基丙氨酸(S8Ala)和在位置i+7处掺入的R-戊烯基丙氨酸(R5Ala)。这将产生包含以下
示出的(SEQ ID NO:81)位置相距7个残基的肽内烃连接子元件的肽序列：
角(位置i和位置i+7)的通用的肽实例，可以具有在使用Grubb’s催化剂催化闭环复分解反
应之前，在肽仍然经树脂结合在固相支持物上时，于肽的固相合成期间在位置i处掺入的S-辛烯基丙氨酸(S8Ala)和在位置i+7处掺入的R-戊烯基丙氨酸(R5Ala)。这将产生包含以下
示出的(SEQ ID NO:81)位置相距7个残基的肽内烃连接子元件的肽序列：
[0182]
[0183] 本领域普通技术人员将理解SEQ ID NO:81中S-辛烯基丙氨酸(S8Ala)和R-戊烯基丙氨酸(R5Ala)的位置可以转换，使得在位置i处掺入R-戊烯基丙氨酸(R5Ala)，并且在位置i+7处掺入S-辛烯基丙氨酸(S8Ala)(SEQ ID NO:82)。
[0184] 在一些实施方案中，固相肽合成领域的技术人员可以容易地合成复合肽，其包含多于一个肽内烃连接子元件，使得复合肽包含多于一个双α-螺旋转角。在一些实施方案中，多于一个双α-螺旋转角是非连续的，即多于一个双α-螺旋转角不共享取代的氨基酸。例如，在一些实施方案中，复合肽可以包含跨复合肽的多于一个非连续的双α-螺旋转角的式17、式18、式19、和/或式20的一个或多个肽内烃连接子元件(参见表1)。
[0185] 固相肽合成领域的技术人员可以通过在使用Grubb’s催化剂催化闭环复分解反应之前，在肽仍然经树脂结合在固相载体上时，于固相肽合成期间在肽的成对的非重叠的氨
基酸位置处掺入α-烯基取代的氨基酸容易地合成包含多于一个本实施方案的肽内烃连接
子元件的肽，其中成对氨基酸中的每个α-烯基取代的氨基酸的位置相距单α-螺旋转角(隔开4个残基)或相距双α-螺旋转角(隔开7个残基)。在一些实施方案中，单个肽可包含跨单α-螺旋转角(隔开4个残基)的多于一个肽内烃连接子元件，可包含跨双α-螺旋转角(隔开7个
残基)的烃连接子元件，或者可包含单α-螺旋转角(隔开4个残基)和双α-螺旋转角(隔开7个残基)肽内烃连接子元件的组合。
基酸位置处掺入α-烯基取代的氨基酸容易地合成包含多于一个本实施方案的肽内烃连接
子元件的肽，其中成对氨基酸中的每个α-烯基取代的氨基酸的位置相距单α-螺旋转角(隔开4个残基)或相距双α-螺旋转角(隔开7个残基)。在一些实施方案中，单个肽可包含跨单α-螺旋转角(隔开4个残基)的多于一个肽内烃连接子元件，可包含跨双α-螺旋转角(隔开7个
残基)的烃连接子元件，或者可包含单α-螺旋转角(隔开4个残基)和双α-螺旋转角(隔开7个残基)肽内烃连接子元件的组合。
[0186] 在一些实施方案中，当复合肽包含两个或更多个连续的单α-螺旋转角时，与复合肽的第一个单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+4，其中i是
第一个单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+4是第一个单α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且与复合肽的第二单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i+4和i+8，其中i+4是第二单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+8是第二单α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，其中氨基酸位置i、i+4和i+8包含α-烯基取代的氨基酸。
第一个单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+4是第一个单α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且与复合肽的第二单α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i+4和i+8，其中i+4是第二单α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+8是第二单α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，其中氨基酸位置i、i+4和i+8包含α-烯基取代的氨基酸。
[0187] 在一些实施方案中，固相肽合成领域的技术人员可以容易地合成复合肽，其包含多于一个肽内烃连接子元件，使得复合肽包含多于一个单α-螺旋转角。在一些实施方案中，多于一个单α-螺旋转角是连续的，即多于一个单α-螺旋转角共享取代的氨基酸。因此，当两个单α-螺旋转角是连续的时，前一单α-螺旋转角的最后的位置是后一连续的单α-螺旋转角的第一个位置。在一些实施方案中，共享的取代的氨基酸是双取代的氨基酸(参见表1)。
[0188] 因此，在一些实施方案中，复合肽可包含跨复合肽的两个连续的单α-螺旋转角的式9、式10、式11、式12、式13、式14、式15和/或式16的一个或多个肽内烃连接子元件(参见表
1)。
1)。
[0189] 例如，在一些实施方案中，固相肽合成领域的技术人员可以容易地通过在使用Grubb’s催化剂催化闭环复分解反应之前，在肽仍然经树脂结合在固相载体上时，于固相肽合成期间，在与朝向肽的N端的位置相距单α-螺旋转角(隔开4个残基)的一个α-烯基取代的氨基酸和朝向肽的C端的位置相距单α-螺旋转角(隔开4个残基)的另一个α-烯基取代的氨
基酸等距的位置处掺入双取代的α-烯基甘氨酸氨基酸，来合成包含多于一个本实施方案的肽内烃连接子元件的肽。
基酸等距的位置处掺入双取代的α-烯基甘氨酸氨基酸，来合成包含多于一个本实施方案的肽内烃连接子元件的肽。
[0190] 在一些实施方案中，当复合肽包含两个或更多个连续的双α-螺旋转角时，与复合肽的第一个双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i和i+7，其中i是
第一个双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+7是第一个双α-螺旋转角最后的氨基酸位置，并且与复合肽的第二双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i+
7和i+14，其中i+7是第二双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+14是第二双α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i、i+7和i+14包含α-烯基取代的氨基酸。
第一个双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+7是第一个双α-螺旋转角最后的氨基酸位置，并且与复合肽的第二双α-螺旋转角相关的氨基酸位置对应于复合肽的氨基酸位置i+
7和i+14，其中i+7是第二双α-螺旋转角的第一个氨基酸位置，并且i+14是第二双α-螺旋转角的最后的氨基酸位置，并且其中氨基酸位置i、i+7和i+14包含α-烯基取代的氨基酸。
[0191] 在一些实施方案中，固相肽合成领域的技术人员可以容易地合成复合肽，其包含多于一个肽内烃连接子元件，使得复合肽包含多于一个双α-螺旋转角。在一些实施方案中，多于一个双α-螺旋转角是连续的，即多于一个双α-螺旋转角共享取代的氨基酸。因此，当两个双α-螺旋转角是连续的时，前一双α-螺旋转角的最后的位置是后一连续的双α-螺旋转角的第一个位置。在一些实施方案中，共享的取代的氨基酸是双取代的氨基酸(参见表1)。
[0192] 因此，在一些实施方案中，复合肽可包含跨复合肽的两个连续的双α-螺旋转角的式21、式22和/或式23的一个或多个肽内烃连接子元件(参见表1)。当两个双α-螺旋转角是连续的时，前一双α-螺旋转角的最后的位置是后一连续的双α-螺旋转角的第一个位置。
[0193] 例如，在一些实施方案中，固相肽合成领域的技术人员可以通过在使用Grubb’s催化剂催化闭环复分解反应之前，在肽仍然经树脂结合在固相支持物上时，于固相肽合成期间，在与朝向肽的N端的位置相距双α-螺旋转角(隔开7个残基)一个α-烯基取代的氨基酸和朝向肽的C端的位置相距双α-螺旋转角(隔开7个残基)的另一α-烯基取代的氨基酸等距的
位置处掺入双取代的α-烯基甘氨酸氨基酸，来容易地合成包含多于一个本实施方案的肽内烃连接子元件的肽。
位置处掺入双取代的α-烯基甘氨酸氨基酸，来容易地合成包含多于一个本实施方案的肽内烃连接子元件的肽。
[0194] 可以通过固相肽合成，利用可商购的Boc或Fmoc保护的α-烯基取代的天然的或非天然的(D)以及(L)或(R)以及(S)立体化学构型的氨基酸，制造包含本实施方案的一个或多
个肽内烃连接子元件的肽。可用于合成本实施方案的定制肽衍生物的Fmoc保护的α-烯基取代的氨基酸和在闭环复分解反应之后由此产生的烃连接子元件包括但不限于表1：
个肽内烃连接子元件的肽。可用于合成本实施方案的定制肽衍生物的Fmoc保护的α-烯基取代的氨基酸和在闭环复分解反应之后由此产生的烃连接子元件包括但不限于表1：
[0195] 表1
[0196]
[0197]
[0198]
[0199]
[0200]
[0201]
[0202] 在一些实施方案中，可通过一种或多种化学反应将肽内烃连接子进一步功能化。在一些实施方案中，肽内烃连接子(例如，表1中的式1-式23)中存在的一个或多个碳-碳双
键可用于用以添加一个或多个另外的化学官能团的有机化学反应。例如，烯烃反应可用于
包含本实施方案的一个或多个肽内烃连接子元件的定制肽衍生物。烯烃反应的非限制性实
例包括硼氢化反应、羟汞化、水合、氯化、溴化、添加HF、HBr、HCl或HI、二羟化、环氧化、氢化和环丙烷化。在一些实施方案中，可在烯烃反应之后获得肽内烃连接子元件的一个或多个
另外的化学官能团。非限制性实例包括共价添加一个或多个化学基团取代基，如与环氧和
羟基基团的亲核反应等。在一些实施方案中，烯烃反应可用于将生物素、放射性同位素、治疗剂(非限制性实例包括雷帕霉素、长春花碱、紫杉醇等)、非蛋白荧光化学基团(非限制性实例包括FITC、酰肼、罗丹明、马来酰亚胺等)，以及蛋白荧光基团(非限制性实例包括GFP、YFP、mCherry等)与本实施方案的一个或多个肽间和/或肽内烃连接子元件接合。
键可用于用以添加一个或多个另外的化学官能团的有机化学反应。例如，烯烃反应可用于
包含本实施方案的一个或多个肽内烃连接子元件的定制肽衍生物。烯烃反应的非限制性实
例包括硼氢化反应、羟汞化、水合、氯化、溴化、添加HF、HBr、HCl或HI、二羟化、环氧化、氢化和环丙烷化。在一些实施方案中，可在烯烃反应之后获得肽内烃连接子元件的一个或多个
另外的化学官能团。非限制性实例包括共价添加一个或多个化学基团取代基，如与环氧和
羟基基团的亲核反应等。在一些实施方案中，烯烃反应可用于将生物素、放射性同位素、治疗剂(非限制性实例包括雷帕霉素、长春花碱、紫杉醇等)、非蛋白荧光化学基团(非限制性实例包括FITC、酰肼、罗丹明、马来酰亚胺等)，以及蛋白荧光基团(非限制性实例包括GFP、YFP、mCherry等)与本实施方案的一个或多个肽间和/或肽内烃连接子元件接合。
[0203] 在一些实施方案中，提供了包含跨单α-螺旋转角(隔开4个)的肽内烃连接子元件的定制肽衍生物。在一些实施方案中，提供了包含跨双α-螺旋转角(隔开7个)的肽内烃连接子元件的定制肽衍生物。在一些实施方案中，包含利用α-烯基取代的氨基酸，通过闭环合成的一个或多个肽内烃连接子元件的定制肽衍生物可跨任何数量的氨基酸。在一些实施方案
中，包含利用α-烯基取代的氨基酸，通过闭环合成的一个或多个肽内烃连接子元件的定制肽衍生物跨2至约200个氨基酸。在一些实施方案中，包含利用α-烯基取代的氨基酸，通过闭环合成的一个或多个肽内烃连接子元件的定制肽衍生物跨2、5、10、15、20、25、30、35、40、
45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、
155、160、165、170、175、180、185、190、195或200个氨基酸，或通过任何两个上述值界定的范围内的数量。
中，包含利用α-烯基取代的氨基酸，通过闭环合成的一个或多个肽内烃连接子元件的定制肽衍生物跨2至约200个氨基酸。在一些实施方案中，包含利用α-烯基取代的氨基酸，通过闭环合成的一个或多个肽内烃连接子元件的定制肽衍生物跨2、5、10、15、20、25、30、35、40、
45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、
155、160、165、170、175、180、185、190、195或200个氨基酸，或通过任何两个上述值界定的范围内的数量。
[0204] 包含一个或多个肽内烃连接子元件的复合肽的非限制性实例提供在表2中。表2中的实例并不限定于本实施方案的定制肽衍生物中的可用于合成本实施方案的单α-螺旋转
角(隔开4个)的任何特定的α-烯基取代的氨基酸，和/或双α-螺旋转角(隔开7个)肽内烃连接子元件，和/或任何特定的氨基酸立体化学构型(例如，表2中以“d”表示的(D)立体化学构型)。
角(隔开4个)的任何特定的α-烯基取代的氨基酸，和/或双α-螺旋转角(隔开7个)肽内烃连接子元件，和/或任何特定的氨基酸立体化学构型(例如，表2中以“d”表示的(D)立体化学构型)。
[0205] 表2
[0206]
[0207]
[0208]
[0209]
[0210] *下标表示相应对的烃连接的α-烯基取代的氨基酸
[0211] 本领域技术人员可以基于本公开的保守的γc盒基序和如图2所述的氨基酸的生化特性的知识，合成具有或不具有一个或多个烃连接子元件的定制肽衍生物。一些实施方
案还涉及包含编码本发明的肽的核苷酸序列的多核苷酸。“核苷酸序列”、“多核苷酸”或“核酸”可互换使用，并且应理解为意指双链DNA、单链DNA或所述DNA的转录产物(例如，RNA分子)。可以将多核苷酸给予至细胞或对象，并由细胞或对象表达，而不是给予肽本身。数个实施方案还涉及包含编码本发明的肽的多核苷酸序列的遗传构建体。遗传构建体还可含有另
外的调控元件，如启动子和增强子，以及任选地可选择标记。
案还涉及包含编码本发明的肽的核苷酸序列的多核苷酸。“核苷酸序列”、“多核苷酸”或“核酸”可互换使用，并且应理解为意指双链DNA、单链DNA或所述DNA的转录产物(例如，RNA分子)。可以将多核苷酸给予至细胞或对象，并由细胞或对象表达，而不是给予肽本身。数个实施方案还涉及包含编码本发明的肽的多核苷酸序列的遗传构建体。遗传构建体还可含有另
外的调控元件，如启动子和增强子，以及任选地可选择标记。
[0212] 治疗γc-细胞因子介导的疾病的方法
[0213] 数个实施方案涉及γc-拮抗肽在治疗γc-细胞因子介导的疾病中的用途。根据本实施方案的定制肽衍生物的使用允许治疗剂设计(肽的定制设计)的灵活性，并且能够实现
更全面的结果，这是通过采用抗细胞因子或抗细胞因子受体抗体的常规策略无法实现的。
更全面的结果，这是通过采用抗细胞因子或抗细胞因子受体抗体的常规策略无法实现的。
[0214] 本文中描述了阻断γc-家族细胞因子的作用的新的方法。这样的操作可以产生治疗与γc-细胞因子的调节异常或功能异常相关的疾病的临床干预的有效方法。可通过破坏
γc-细胞因子与γc-亚基之间的相互作用进行治疗的疾病的实例包括：自身免疫疾病如系
统性红斑狼疮、干燥综合征、韦格纳肉芽肿、乳糜泻(CD)、桥本氏或自身免疫性甲状腺炎；胶原疾病，包括类风湿性关节炎、炎性肠病、糖尿病(例如，1型糖尿病)、皮肤的自身免疫疾病如牛皮癣；退行性神经元疾病如多发性硬化、葡萄膜炎或眼部炎症和交感性眼炎、移植物抗宿主病(GvHD)、重症肌无力、炎性肠病(IBD，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病)、系统性红斑狼疮以及斑秃。
γc-细胞因子与γc-亚基之间的相互作用进行治疗的疾病的实例包括：自身免疫疾病如系
统性红斑狼疮、干燥综合征、韦格纳肉芽肿、乳糜泻(CD)、桥本氏或自身免疫性甲状腺炎；胶原疾病，包括类风湿性关节炎、炎性肠病、糖尿病(例如，1型糖尿病)、皮肤的自身免疫疾病如牛皮癣；退行性神经元疾病如多发性硬化、葡萄膜炎或眼部炎症和交感性眼炎、移植物抗宿主病(GvHD)、重症肌无力、炎性肠病(IBD，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病)、系统性红斑狼疮以及斑秃。
[0215] 在一些实施方案中，本文中描述的γc-拮抗肽可用于治疗人T细胞嗜淋巴细胞I型和II型(HTLV-I和HTLV-II)相关的疾病，包括成人T细胞白血病(ATL)、HTLV相关的脊髓病/
热带痉挛性下肢轻瘫(HAM/TSP)，以及与HTLV相关的其他的非肿瘤炎性疾病，如葡萄膜炎
(HU)、关节病、肺病、皮炎、外分泌腺病和肌炎。在一些实施方案中，本文中描述的γc-拮抗肽可用于治疗其他的病毒疾病，如流感、AIDS、HBV和疱疹或寄生性疾病。
热带痉挛性下肢轻瘫(HAM/TSP)，以及与HTLV相关的其他的非肿瘤炎性疾病，如葡萄膜炎
(HU)、关节病、肺病、皮炎、外分泌腺病和肌炎。在一些实施方案中，本文中描述的γc-拮抗肽可用于治疗其他的病毒疾病，如流感、AIDS、HBV和疱疹或寄生性疾病。
[0216] 在数个实施方案中，可以在移植各种器官之前、期间和/或之后将γc-拮抗肽作为免疫抑制剂给药。
[0217] 在一些实施方案中，本文中描述的γc-拮抗肽可用于治疗免疫介导的疾病如哮喘和其他的炎性呼吸性疾病，诸如但不限于：窦炎、枯草热、支气管炎、慢性阻塞性肺病
(COPD)、过敏性鼻炎、急性和慢性耳炎、肺纤维化。在一些实施方案中，可给予γc-拮抗肽以治疗或预防由于暴露至过敏原、化学试剂或急性呼吸性疾病的其他的常见诱因而出现的过
敏反应。在一些实施方案中，可给予γc-拮抗肽以治疗或预防由病毒、细菌、化学试剂和生化试剂引起的炎症反应。
(COPD)、过敏性鼻炎、急性和慢性耳炎、肺纤维化。在一些实施方案中，可给予γc-拮抗肽以治疗或预防由于暴露至过敏原、化学试剂或急性呼吸性疾病的其他的常见诱因而出现的过
敏反应。在一些实施方案中，可给予γc-拮抗肽以治疗或预防由病毒、细菌、化学试剂和生化试剂引起的炎症反应。
[0218] 在数个实施方案中，可给予γc-拮抗肽以治疗一些类型的恶性肿瘤如LGL白血病、难治性乳糜泻中的上皮内淋巴瘤和白血病、NK白血病/淋巴瘤和NK-T白血病/淋巴瘤。
[0219] 在一些实施方案中，根据本文中描述的实施方案的定制肽衍生物可用于美容性目的，如治疗痤疮、脱发、晒伤和指甲保养，包括由于其抗炎性质的作为抗衰老组分的软膏。
[0220] 数个实施方案涉及将抑制γc-细胞因子的所有或选择的成员的功能的治疗性拮抗肽。在一些实施方案中，治疗性拮抗肽选择性抑制单个的γc-细胞因子家族成员(定制
肽)。在其他的实施方案中，治疗性拮抗肽可以全面抑制所有γc-细胞因子家族成员
(Simul-Block)。在一些实施方案中，治疗性拮抗肽选择性抑制γc-细胞因子的亚群。不希望受特定理论的束缚，肽拮抗剂可以通过减少γc-细胞因子与γc-亚基的结合，例如，作为竞争性抑制剂，而抑制γc-细胞因子的所有或选择的成员的功能。
肽)。在其他的实施方案中，治疗性拮抗肽可以全面抑制所有γc-细胞因子家族成员
(Simul-Block)。在一些实施方案中，治疗性拮抗肽选择性抑制γc-细胞因子的亚群。不希望受特定理论的束缚，肽拮抗剂可以通过减少γc-细胞因子与γc-亚基的结合，例如，作为竞争性抑制剂，而抑制γc-细胞因子的所有或选择的成员的功能。
[0221] 已表明γc-细胞因子家族的数个成员，IL-2、IL-7和IL-15，但非IL-4，参与了实验小鼠模型中的移植物抗宿主病(GvHD)(Miyagawa et al.,2008J.Immunol.181:1109-19)。一个实施方案涉及选择性抑制IL-2、IL-7和IL-15活性的治疗性拮抗肽用于治疗人类中的
GvHD，允许移植的组织或骨髓细胞存活的用途。其他的实施方案涉及选择性抑制IL-2和IL-
7、IL-2和IL-15或者IL-7和IL-15的组合的治疗性拮抗肽用于治疗GvHD的用途。其他的实施方案涉及选择性抑制IL-2、IL-7或IL-15的治疗性拮抗肽的组合的用途。
GvHD，允许移植的组织或骨髓细胞存活的用途。其他的实施方案涉及选择性抑制IL-2和IL-
7、IL-2和IL-15或者IL-7和IL-15的组合的治疗性拮抗肽用于治疗GvHD的用途。其他的实施方案涉及选择性抑制IL-2、IL-7或IL-15的治疗性拮抗肽的组合的用途。
[0222] 一些实施方案涉及选择性抑制IL-2功能以用于治疗自身免疫病症的治疗性拮抗肽的用途，其中已表明T-regs起作用。在一些实施方案中，T-regs的肽介导的抑制能够增强人类中的天然的抗癌免疫，提供新的抗癌治疗方式。
[0223] 数个实施方案涉及选择性抑制IL-4的治疗性拮抗肽用于治疗哮喘的用途。
[0224] 一些实施方案涉及单独的或与选择性抑制γc-细胞因子家族成员IL-15的治疗性拮抗肽组合的选择性抑制IL-7的治疗性拮抗肽作为LGL白血病的治疗剂的用途。在一些实
施方案中，选择性抑制IL-7和IL-15活性的治疗性拮抗肽可用于治疗LGL白血病。数个实施
方案涉及BNZ-γ用于治疗LGL白血病的用途。在一些实施方案中，单独的选择性抑制IL-15
的特定γc-拮抗肽或选择性抑制IL-15和IL-7的特定γc-拮抗肽被用作包括HTLV-I引起的
那些在内的CD4/CD8T淋巴细胞相关的白血病的治疗剂。
施方案中，选择性抑制IL-7和IL-15活性的治疗性拮抗肽可用于治疗LGL白血病。数个实施
方案涉及BNZ-γ用于治疗LGL白血病的用途。在一些实施方案中，单独的选择性抑制IL-15
的特定γc-拮抗肽或选择性抑制IL-15和IL-7的特定γc-拮抗肽被用作包括HTLV-I引起的
那些在内的CD4/CD8T淋巴细胞相关的白血病的治疗剂。
[0225] 数个实施方案涉及单独的或与其他的γc-细胞因子家族成员组合的选择性抑制IL-9的活性的γc-拮抗肽作为涉及Th17细胞的异常发展的人类疾病的治疗剂的用途。
[0226] 数个实施方案涉及选择性抑制IL-15活性的治疗性拮抗肽作为治疗CD的治疗剂的用途。一篇出版物建议除IL-15外，IL-21也可在CD发病机理中起作用。(参见Bodd et al.,
2010,Mucosal Immunol.3:594-601)。此外，最近的研究还确认了IL-2、IL-15和IL-21的协同效应极大地贡献于难治性CD的发病机理(Kooy-Winkelaar,et al.,2017Proc Natl Acad
Sci U S A 114:E980-9)。这表明通过常规抗细胞因子或细胞因子-受体抗体的CD的最佳治
疗将从识别属于IL-2系统、IL-15系统、IL-21系统或它们的组合的一种或多种组分的至少
两种抗体的组合受益。在一些实施方案中，选择性抑制IL-2、IL-15、IL-21或IL-2和IL-15的组合、IL-2和IL-21的组合和/或IL-15和IL-21的组合活性的定制衍生拮抗肽被用作治疗CD
的治疗剂。在一些实施方案中，选择性抑制IL-2和IL-15的组合、IL-2和IL-21的组合和/或IL-15和IL-21的组合的定制衍生拮抗肽的效应可以是累加的或协同性的。
2010,Mucosal Immunol.3:594-601)。此外，最近的研究还确认了IL-2、IL-15和IL-21的协同效应极大地贡献于难治性CD的发病机理(Kooy-Winkelaar,et al.,2017Proc Natl Acad
Sci U S A 114:E980-9)。这表明通过常规抗细胞因子或细胞因子-受体抗体的CD的最佳治
疗将从识别属于IL-2系统、IL-15系统、IL-21系统或它们的组合的一种或多种组分的至少
两种抗体的组合受益。在一些实施方案中，选择性抑制IL-2、IL-15、IL-21或IL-2和IL-15的组合、IL-2和IL-21的组合和/或IL-15和IL-21的组合活性的定制衍生拮抗肽被用作治疗CD
的治疗剂。在一些实施方案中，选择性抑制IL-2和IL-15的组合、IL-2和IL-21的组合和/或IL-15和IL-21的组合的定制衍生拮抗肽的效应可以是累加的或协同性的。
[0227] 当组合的效应等于组合中个体的效应之和(例如，两种或更多种肽的组合的效应等于单独的肽的效应的总和)时，观察到累加效应。当组合的效应大于组合中个体的效应之和(例如，两种或更多种肽的组合的效应大于单独的肽的效应的总和)时，观察到协同效应。
协同效应大于累加效应。在人类患者、非人类患者、非患者人类志愿者、体内模型、离体模型、体外模型等中均可发生累加效应、协同效应或二者。
协同效应大于累加效应。在人类患者、非人类患者、非患者人类志愿者、体内模型、离体模型、体外模型等中均可发生累加效应、协同效应或二者。
[0228] 在一些实施方案中，本文中公开的两种或更多种肽可组合使用。在一些实施方案中，本文中公开的两种或更多种肽在组合使用时产生累加效应。在一些实施方案中，本文中公开的两种或更多种肽在组合使用时产生协同效应。协同效应范围可以为从约>1倍至约
100倍。在一些实施方案中，协同效应为约2倍至约20倍。在一些实施方案中，协同效应为约
20倍至约100倍。在一些实施方案中，协同效应为从大于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、
50、60、70、80、90或100倍，或在上述值的任何两个所界定的范围内。
100倍。在一些实施方案中，协同效应为约2倍至约20倍。在一些实施方案中，协同效应为约
20倍至约100倍。在一些实施方案中，协同效应为从大于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、
50、60、70、80、90或100倍，或在上述值的任何两个所界定的范围内。
[0229] 除了具有治疗性用途，γc-拮抗肽在美容性产品中也有应用。数个实施方案涉及γc-拮抗肽在皮肤护理产品如抗衰老、抗炎、抗痤疮和其他的相关应用中的用途。一些实施方案涉及γc-拮抗肽作为抗脱发成分在头发产品中用于治疗由自身免疫病症引起的脱发
的用途。
的用途。
[0230] 另一实施方案涉及这样的化合物(非肽、非蛋白)的开发，其具有类似19-mer氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)，或21-mer氨基酸序列P-
K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的空间结构，并且可以纳入γ
c-亚基的囊中以在结构上阻碍γc-细胞因子与γc-亚基接近以便结合。一些实施方案涉及
结构上相似的化合物作为γc-细胞因子活性的抑制剂的用途。这样的进一步改善结构类似
现有的生物肽/蛋白的协同性化合物的开发的分子模拟策略描述于Orzaez et al.,
2009Chem.Med.Chem.4:146-160中。另外的实施方案涉及给予具有类似19-mer氨基酸序列
I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)或21-mer氨基酸序列P-K-E-F-
L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的3D结构的化合物(非肽、非蛋白)，
以治疗γc-细胞因子介导的疾病。
K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的空间结构，并且可以纳入γ
c-亚基的囊中以在结构上阻碍γc-细胞因子与γc-亚基接近以便结合。一些实施方案涉及
结构上相似的化合物作为γc-细胞因子活性的抑制剂的用途。这样的进一步改善结构类似
现有的生物肽/蛋白的协同性化合物的开发的分子模拟策略描述于Orzaez et al.,
2009Chem.Med.Chem.4:146-160中。另外的实施方案涉及给予具有类似19-mer氨基酸序列
I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)或21-mer氨基酸序列P-K-E-F-
L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的3D结构的化合物(非肽、非蛋白)，
以治疗γc-细胞因子介导的疾病。
[0231] 数个实施方案涉及给予氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽以治疗γc-细胞因子介导的疾病。其他的实施方案涉及给予氨基酸序
列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽衍生物以治疗γc-细胞
因子介导的疾病，其中衍生肽的氨基酸序列具有与氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-
Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽相似的理化性质，但具有不同的生物活性。另一实施方
案涉及在患者中给予与现有的生物蛋白/肽的N端和C端或侧链残基缀合的氨基酸序列I-K-
E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽，以治疗γc-细胞因子介导的疾
病。另一实施方案涉及给予包含一个或多个肽内烃连接子元件的氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-
R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽，以治疗γc-细胞因子介导的疾病。
列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽衍生物以治疗γc-细胞
因子介导的疾病，其中衍生肽的氨基酸序列具有与氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-
Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽相似的理化性质，但具有不同的生物活性。另一实施方
案涉及在患者中给予与现有的生物蛋白/肽的N端和C端或侧链残基缀合的氨基酸序列I-K-
E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽，以治疗γc-细胞因子介导的疾
病。另一实施方案涉及给予包含一个或多个肽内烃连接子元件的氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-
R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽，以治疗γc-细胞因子介导的疾病。
[0232] 数个实施方案涉及给予氨基酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽，以治疗γc-细胞因子介导的疾病。另一实施方案涉及给予氨基酸
序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽衍生物以治疗γ
c-细胞因子介导的疾病，其中氨基酸序列的衍生肽具有与氨基酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-
H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽相似的理化性质，但具有独特的生物活性。
另一实施方案涉及在患者中给予与现有的生物蛋白/肽的N端和C端或侧链残基缀合的氨基
酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽，以治疗γc-细
胞因子介导的疾病。另一实施方案涉及给予包含一个或多个肽内烃连接子元件的氨基酸序
列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽，以治疗γc-细胞因
子介导的疾病。
序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽衍生物以治疗γ
c-细胞因子介导的疾病，其中氨基酸序列的衍生肽具有与氨基酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-
H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽相似的理化性质，但具有独特的生物活性。
另一实施方案涉及在患者中给予与现有的生物蛋白/肽的N端和C端或侧链残基缀合的氨基
酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽，以治疗γc-细
胞因子介导的疾病。另一实施方案涉及给予包含一个或多个肽内烃连接子元件的氨基酸序
列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽，以治疗γc-细胞因
子介导的疾病。
[0233] 数个实施方案涉及在患者中作为免疫原给予针对包含氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的肽产生的多克隆和单克隆抗体，或针对包含
氨基酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽产生的多
克隆和单克隆抗体，以治疗γc-细胞因子介导的疾病。另一实施方案涉及在患者中作为免
疫原给予针对氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的衍
生肽产生的多克隆和单克隆抗体，或针对氨基酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-
H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的衍生肽产生的多克隆和单克隆抗体以治疗γc-细胞因子介导
的疾病，其中氨基酸序列的衍生肽与氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-
S(SEQ ID NO:1)的肽具有相似的理化性质，或者与氨基酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-
Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽具有相似的理化性质，但具有独特的生物活性。
氨基酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽产生的多
克隆和单克隆抗体，以治疗γc-细胞因子介导的疾病。另一实施方案涉及在患者中作为免
疫原给予针对氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-S(SEQ ID NO:1)的衍
生肽产生的多克隆和单克隆抗体，或针对氨基酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-Q-M-F-I-
H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的衍生肽产生的多克隆和单克隆抗体以治疗γc-细胞因子介导
的疾病，其中氨基酸序列的衍生肽与氨基酸序列I-K-E-F-L-Q-R-F-I-H-I-V-Q-S-I-I-N-T-
S(SEQ ID NO:1)的肽具有相似的理化性质，或者与氨基酸序列P-K-E-F-L-E-R-F-V-H-L-V-
Q-M-F-I-H-Q-S-L-S(SEQ ID NO:3)的肽具有相似的理化性质，但具有独特的生物活性。
[0234] γc-拮抗肽的给药
[0235] 本实施方案还包括γc-拮抗肽用于制造治疗疾病的药物的用途。本实施方案还包括药物组合物，其包括与药学上可接受的载体的组合的γc-拮抗肽。药物组合物可包括药
学上可接受的载体和无毒性的治疗有效量的γc-拮抗肽，或本实施方案的其他的组合物。
学上可接受的载体和无毒性的治疗有效量的γc-拮抗肽，或本实施方案的其他的组合物。
[0236] 本实施方案提供了使用于合适的稀释剂或载体中的包含有效量的γc-细胞因子的拮抗剂的药物组合物的方法。可以根据已知的用于制备可药用的组合物的方法配制本实
施方案的γc-拮抗剂。γc-拮抗剂可以作为单一活性物质或与其他的已知活性物质一起、
与可药用的稀释剂(例如，磷酸盐、乙酸盐、Tris HCl)、防腐剂(例如，硫柳汞、苄醇、对羟基苯甲酸酯类)、乳化化合物、增溶剂、佐剂和/或载体如牛血清白蛋白一起，在添加剂中组合。
施方案的γc-拮抗剂。γc-拮抗剂可以作为单一活性物质或与其他的已知活性物质一起、
与可药用的稀释剂(例如，磷酸盐、乙酸盐、Tris HCl)、防腐剂(例如，硫柳汞、苄醇、对羟基苯甲酸酯类)、乳化化合物、增溶剂、佐剂和/或载体如牛血清白蛋白一起，在添加剂中组合。
[0237] 在一些实施方案中，包括包含本文中公开的复合肽或其衍生物中的一种或多种的一种或多种组合物和试剂盒。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒被用于预防
和/或治疗一种或多种疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒被用于预防
和/或治疗γc-细胞因子介导的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒被用于预防和/或治疗HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病。在一
些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒被用于预防和/或治疗炎性呼吸性疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒被用于预防和/或治疗美容性病况。
和/或治疗一种或多种疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒被用于预防
和/或治疗γc-细胞因子介导的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒被用于预防和/或治疗HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病。在一
些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒被用于预防和/或治疗炎性呼吸性疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒被用于预防和/或治疗美容性病况。
[0238] 一些实施方案，经本文中提供的任何给药途径向有需要的对象给予包含一种或多种复合肽的一种或多种组合物和试剂盒。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒
包含一种或多种治疗有效量的复合肽或其衍生物，以调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-
15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒包含一种或多种治疗有效量的复合肽或其衍生物，以预防和/或治疗一种或多种疾病。
在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒包含另外包含一种或多种药学上可接受的
载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合的一种或多种复合肽。
包含一种或多种治疗有效量的复合肽或其衍生物，以调节选自IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-
15和IL-21的一种或多种γc-细胞因子的活性。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒包含一种或多种治疗有效量的复合肽或其衍生物，以预防和/或治疗一种或多种疾病。
在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒包含另外包含一种或多种药学上可接受的
载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合的一种或多种复合肽。
[0239] 在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的一种或多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治疗一种或多种疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的一种或多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治疗γc-细胞因子介导
的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的一种或多种复合肽被配制为
适合给予对象以预防和/或治疗HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相
关的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的一种或多种复合肽被配制
为适合给予对象以预防和/或治疗炎性呼吸性疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的一种或多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治疗美容性病况。
的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的一种或多种复合肽被配制为
适合给予对象以预防和/或治疗HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相
关的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的一种或多种复合肽被配制
为适合给予对象以预防和/或治疗炎性呼吸性疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的一种或多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治疗美容性病况。
[0240] 在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治疗一种或
多种疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治疗γc-细
胞因子介导的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:
1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治
疗HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或
多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治疗炎性呼吸性疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或
多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治疗美容性病况。
多种疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治疗γc-细
胞因子介导的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:
1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治
疗HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或
多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治疗炎性呼吸性疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或
多种复合肽被配制为适合给予对象以预防和/或治疗美容性病况。
[0241] 在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多种复合肽的一种或多种衍生物被配制为适合给予对象以预
防和/或治疗一种或多种疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自
SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多种复合肽的一种或多种衍生物被配
制为适合给予对象以预防和/或治疗γc-细胞因子介导的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多种复
合肽的一种或多种衍生物被配制为适合给予对象以预防和/或治疗HTLV-1相关的脊髓病
(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多种复合肽的一种或多
种衍生物被配制为适合给予对象以预防和/或治疗炎性呼吸性疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多
种复合肽的一种或多种衍生物被配制为适合给予对象以预防和/或治疗美容性病况。在一
些实施方案中，一种或多种复合肽的一种或多种衍生物包含与一种或多种复合肽共享约
50％至约99％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，一种或多种复合肽的一种或多
种衍生物包含这样的氨基酸序列，其与一种或多种复合肽共享50％、50％-60％、60％-
70％、70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％的同一性，或在由任何两个上述值界定的范围内。
防和/或治疗一种或多种疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自
SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多种复合肽的一种或多种衍生物被配
制为适合给予对象以预防和/或治疗γc-细胞因子介导的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多种复
合肽的一种或多种衍生物被配制为适合给予对象以预防和/或治疗HTLV-1相关的脊髓病
(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)相关的疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多种复合肽的一种或多
种衍生物被配制为适合给予对象以预防和/或治疗炎性呼吸性疾病。在一些实施方案中，一种或多种组合物和试剂盒中的选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3的一种或多
种复合肽的一种或多种衍生物被配制为适合给予对象以预防和/或治疗美容性病况。在一
些实施方案中，一种或多种复合肽的一种或多种衍生物包含与一种或多种复合肽共享约
50％至约99％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，一种或多种复合肽的一种或多
种衍生物包含这样的氨基酸序列，其与一种或多种复合肽共享50％、50％-60％、60％-
70％、70％-80％、80％、90％、95％、97％、98％、99％或99.8％的同一性，或在由任何两个上述值界定的范围内。
[0242] 在一些实施方案中，一种或多种γc-细胞因子介导的疾病选自：CD4白血病、CD8白血病、LGL白血病、系统性红斑狼疮、干燥综合征、韦格纳肉芽肿、乳糜泻、桥本甲状腺炎、类风湿性关节炎、糖尿病、牛皮癣、多发性硬化、葡萄膜炎、眼部炎症和移植物抗宿主病(GvHD)。在一些实施方案中，一种或多种HAM/TSP相关的疾病选自：成人T细胞白血病(ATL)、HTLV相关的脊髓病/热带痉挛性下肢轻瘫(HAM/TSP)，以及与HTLV相关的其他的非肿瘤炎性
疾病，如葡萄膜炎(HU)、关节病、肺病、皮炎、外分泌腺病和肌炎。在一些实施方案中，一种或多种炎性呼吸性疾病选自：哮喘、窦炎、枯草热、支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、过敏性鼻炎、急性和慢性耳炎、以及肺纤维化。在一些实施方案中，一种或多种美容性疾病选自：痤疮、脱发、晒伤、指甲保养和出现衰老。
疾病，如葡萄膜炎(HU)、关节病、肺病、皮炎、外分泌腺病和肌炎。在一些实施方案中，一种或多种炎性呼吸性疾病选自：哮喘、窦炎、枯草热、支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、过敏性鼻炎、急性和慢性耳炎、以及肺纤维化。在一些实施方案中，一种或多种美容性疾病选自：痤疮、脱发、晒伤、指甲保养和出现衰老。
[0243] 合适的载体及其配方描述于Remington's Pharmaceutical Sciences,16th ed.1980Mack Publishing CO中。另外，这样的组合物可含有这样的γc-拮抗剂，其与聚乙二醇(PEG)、金属离子络合，或掺入聚合化合物如聚乙酸、聚乙醇酸、水凝胶等中，或掺入脂质体、微乳液、微胶粒、单层或多层囊泡、红细胞血影或球形体(spheroblasts)中。这样的组合物将影响γc-拮抗剂的物理状态、溶解度、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。γc-拮抗剂可以与针对细胞特异性抗原的抗体、受体、配体缀合，或者与组织特异性受体的配体偶联。
[0244] 可以根据以下因素适当地选择给予本实施方案的γc-拮抗剂的方法，如疾病的类型、对象的病况，和/或要靶向的位点。可以局部、经口、胃肠外、直肠或通过吸入给予γc-拮抗剂。术语“肠胃外”包括皮下注射、静脉内、肌肉内、腹膜内、脑池内注射或输注技术。这些组合物通常包括单独的或与有效量的任何其它活性物质组合的有效量的γc-拮抗剂。数种
非限制性给药途径是可能的，包括胃肠外、皮下、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、结肠内、颈管内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内(intrapericardiac)、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、病灶内、大丸剂、阴道、直肠、口腔、舌下、鼻内或透皮。
非限制性给药途径是可能的，包括胃肠外、皮下、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、结肠内、颈管内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内(intrapericardiac)、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、病灶内、大丸剂、阴道、直肠、口腔、舌下、鼻内或透皮。
[0245] 可以以任何剂量，经任何给药途径，和以任何给药频率，如本领域普通技术人员基于各种参数所确定的，给予本文中公开的一种或多种复合肽，其非限制性实例包括治疗的病况、病况的严重性、患者依从性、治疗效力、副作用等。
[0246] 可以根据诸如疾病类型、对象的病况和/或要靶向的位点的因素适当选择本实施方案的药物组合物中含有的肽的量、药物组合物的剂量形式、给药频率等。组合物中含有的这样的剂量和所需药物浓度可能受许多参数的影响而不同，包括预期用途、患者的体重和
年龄，以及给药途径。前期研究将首先使用动物研究进行，并且根据领域接受的实践进行缩放至人类给药。
年龄，以及给药途径。前期研究将首先使用动物研究进行，并且根据领域接受的实践进行缩放至人类给药。
[0247] 在一个实施方案中，将用编码至少一种γc-拮抗肽的多核苷酸遗传修饰的宿主细胞给予至对象，以治疗增殖病症和/或减少恶性细胞的生长。多核苷酸由宿主细胞表达，从而在对象中产生肽。优选地，宿主细胞是对象同种异体的或自体的。
[0248] 在另外的方面，γc-拮抗肽可以与其他的疗法组合使用，例如，抑制癌细胞增殖和生长的疗法。短语“组合疗法”包括给予γc-拮抗肽和另外的治疗剂，作为旨在通过这些治疗剂的共同作用提供有益效果的特定治疗方案的一部分。这些治疗剂的组合给药通常在确定的时间段内进行(通常数分钟、数小时、数天或数周，取决于所选择的组合)。
[0249] 组合疗法旨在包括以顺序方式给予这些治疗剂，即其中在不同的时间给予每种治疗剂，以及以基本上同时的方式给予这些治疗剂或至少两种治疗剂。给予实现，可以例如通过向对象给予具有固定比例的每种治疗剂的单一胶囊或者在多次的每种治疗剂的单一胶
囊中完成基本上同时的给药。可以通过合适的途径实现每种治疗剂的顺序或基本上同时的
给药，包括但不限于经口途径、静脉内途径、肌肉内途径和通过粘膜组织直接吸收。其中可以通过相同的途径或不同的途径给予治疗剂。给予治疗剂的顺序并不是非常关键的。
囊中完成基本上同时的给药。可以通过合适的途径实现每种治疗剂的顺序或基本上同时的
给药，包括但不限于经口途径、静脉内途径、肌肉内途径和通过粘膜组织直接吸收。其中可以通过相同的途径或不同的途径给予治疗剂。给予治疗剂的顺序并不是非常关键的。
[0250] 组合疗法还可以包括给予如上所述的治疗剂与其他的生物活性成分(诸如但不限于第二和不同的治疗剂)和非药物疗法(诸如但不限于手术或放射治疗)的进一步组合。其
中组合疗法还包括放射治疗，所述放射治疗可以在任何合适的时间进行，只要实现来自治
疗剂和放射治疗的组合的共同作用的有益效果即可。例如，在适当的情况下，当从治疗剂的给药中暂时移除放射治疗时，可能达到数天甚至数周，仍然可以获得有益效果。
中组合疗法还包括放射治疗，所述放射治疗可以在任何合适的时间进行，只要实现来自治
疗剂和放射治疗的组合的共同作用的有益效果即可。例如，在适当的情况下，当从治疗剂的给药中暂时移除放射治疗时，可能达到数天甚至数周，仍然可以获得有益效果。
[0252] 在某些实施方案中，γc-拮抗肽可以与选自以下的至少一种抗炎剂组合给药：类固醇、皮质类固醇和非类固醇抗炎药。
[0253] 还提供了用于进行本文中提供的任何方法的试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒可包括根据本文中体提供的任何实施方案的一种或多种γc-拮抗剂。在一些实施方案中，
试剂盒可包括说明书。说明书可以为书面或统计图表形式，或者可以在记录的介质上，包括录音带、音响CD、录像带、DVD、CD-ROM等。试剂盒可包含包装。
试剂盒可包括说明书。说明书可以为书面或统计图表形式，或者可以在记录的介质上，包括录音带、音响CD、录像带、DVD、CD-ROM等。试剂盒可包含包装。
[0254] 定义
[0255] 如本文所用，术语“患者”或“对象”是指本文中公开的复合肽的任何实施方案的接受者，并且包括动物界内的所有生物。在一些实施方案中，包括任何脊椎动物，包括但不限于人和其他的灵长类动物(例如，黑猩猩和其他的猿和猴类物种)、农场动物(例如，牛、羊、猪、山羊和马)、家养哺乳动物(例如，狗和猫)、实验室动物(例如，啮齿动物如小鼠、大鼠和豚鼠)，以及鸟类(例如，家养的、野生的和游戏的鸟类，如鸡、火鸡和其他的鹑鸡类、鸭、鹅等)。在优选的实施方案中，动物属于哺乳动物家族，如人、牛、羊、猪、猫、水牛、犬、山羊、马、驴、鹿和灵长类动物。最优选的动物是人。在一些实施方案中，患者是男性或女性。
[0256] 如本文所用，术语“治疗”或其任何变形(例如，治疗(treatment)、治疗(treating)等)是指诊断患有以下生物病况的患者的任何治疗，如CD4白血病、CD8白血病和LGL白血病、自身免疫疾病、系统性红斑狼疮、干燥综合征、韦格纳肉芽肿、乳糜泻、桥本甲状腺炎、胶原疾病、类风湿性关节炎、炎性肠病、糖尿病、牛皮癣、退行性神经元疾病、多发性硬化、葡萄膜炎、眼部炎症、移植物抗宿主病(GvHD)、重症肌无力、人T-细胞嗜淋巴细胞I型和II型(HTLV-I和HTLV-II)相关的疾病、成人T细胞白血病(ATL)、HTLV相关的脊髓病/热带痉挛性下肢轻瘫(HAM/TSP)、葡萄膜炎(HU)、关节病、肺病、皮炎、外分泌腺病、肌炎、流感、AIDS、HBV、疱疹、哮喘、窦炎、枯草热、支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、过敏性鼻炎、急性和慢性耳炎、肺纤维化、NK白血病/淋巴瘤和NK-T白血病/淋巴瘤。
[0257] 如本文所用的术语治疗包括：(i)预防或延迟有待显示与生物病况相关的症状的处于风险患者中与目标生物病况相关的症状的呈现；(ii)减轻与诊断患有生物病况的患者
中的目标生物病况相关的症状；(iii)预防、延迟或减轻与处于风险患者或诊断患有生物病况的患者中的目标生物病况相关的并发症、病况或疾病相关症状的呈现；(iv)减缓、延迟或中止生物病况的进展；和/或(v)预防、延缓、减缓、中止或减轻炎症的细胞事件；和/或(vi)预防、延缓、减缓、中止或减轻组织学异常和/或生物病况的其他的临床测量。
中的目标生物病况相关的症状；(iii)预防、延迟或减轻与处于风险患者或诊断患有生物病况的患者中的目标生物病况相关的并发症、病况或疾病相关症状的呈现；(iv)减缓、延迟或中止生物病况的进展；和/或(v)预防、延缓、减缓、中止或减轻炎症的细胞事件；和/或(vi)预防、延缓、减缓、中止或减轻组织学异常和/或生物病况的其他的临床测量。
[0258] 如本文所用的术语“症状”是指患者正患特定病况或疾病的常见迹象或指示。
[0259] 如本文所用的术语“有效量”是指引起所需生物反应所需的量。根据本实施方案，γc-拮抗剂的有效量是提供用于治疗生物病况的至少一种生物因素的可观察的效应所需的量。
[0260] “重组DNA技术”或“重组”是指使用用于从已经用克隆的或合成的DNA序列转化或转染以能够进行异源肽的生物合成的微生物(例如，细菌、酵母)，无脊椎动物(昆虫)、哺乳动物细胞或生物体(例如，转基因动物或植物)产生特定多肽的技术和方法。仅能用哺乳动物细胞表达系统实现天然的糖基化模式。原核表达系统缺乏向合成的蛋白添加糖基化的能
力。酵母和昆虫细胞提供了可能不同于天然模式的独特的糖基化模式。
力。酵母和昆虫细胞提供了可能不同于天然模式的独特的糖基化模式。
[0261] “核苷酸序列”是指这样的多核苷酸，其为单独的片段形式，或作为来源于DNA或RNA的较大DNA构建体的组分，所述DNA构建体被分离至少一次，为基本上纯的形式，不含污染性内源物质，并且其量或浓度使得能够通过标准分子生物学方法(如Current Protocols in Molecular Biology中概述的)进行鉴定、操作和回收其组分核苷酸序列。
[0262] “重组表达载体”是指包含含有以下组装体的转录单元的质粒：(1)具有基因表达调控作用的遗传元件，包括启动子和增强子，(2)编码根据本实施方案的多肽的结构或编码序列，以及(3)合适的转录和翻译起始序列，以及(如果需要的)终止序列。旨在用于酵母和哺乳动物系统的结构元件优选包括使得能够通过酵母或哺乳动物宿主细胞胞外分泌翻译
的多肽的信号序列。
的多肽的信号序列。
[0263] “重组微生物表达系统”是指已稳定整合重组转录单元至染色体DNA中或携带重组转录单元作为残留质粒的组分的合适的微生物，例如，细菌如大肠杆菌(E.coli)或酵母菌
如啤酒酵母(S.cerevisiae)的基本上同源的单一培养物。通常，构成重组微生物表达系统
的宿主细胞是单一祖先转化的细胞的后代。重组微生物表达系统将在诱导与待表达的结构
核苷酸序列连接的调控元件后表达异源多肽。
如啤酒酵母(S.cerevisiae)的基本上同源的单一培养物。通常，构成重组微生物表达系统
的宿主细胞是单一祖先转化的细胞的后代。重组微生物表达系统将在诱导与待表达的结构
核苷酸序列连接的调控元件后表达异源多肽。
[0264] 如本文所用，章节标题仅用于组织目的，而不应理解为以任何方式限制所描述的对象。本申请中引用的所有文献和类似材料，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、论文和因特网网页，均明确地通过引用整体并入本文中，用于任何目的。当并入的参考文献中术语的定义看起来不同于本教导中提供的定义时，本教导中提供的定义将控制。应当理解，在本教导中论述的温度、浓度、时间等之前存在暗示的“约”，使得轻微且非实质性的偏差属于本文的教导的范围内。
[0265] 尽管在某些实施方案和实例的背景下公开了本发明，但本领域技术人员将理解，本发明超出了具体公开的实施方案，达到本发明的其他可选实施方案和/或应用，以及其明显的修改和等同物。另外，虽然详细示出和描述了本发明的数种变型，但是基于本公开，属于本发明范围内的其它变型对于本领域技术人员将容易变得显而易见。
[0266] 还包括可以进行实施方案的特定特征和方面的各种组合或亚组合，且其仍然落入本发明的范围内。应当理解，所公开的实施方案的各种特征和方面可以彼此组合或取代，以形成所公开发明的不同模式或实施方案。因此，旨在本文所公开的本发明的范围不应受上
述特别公开的实施方案的限制。
述特别公开的实施方案的限制。
[0267] 然而，应该理解的是，该详细描述虽然表明了本发明的优选实施方案，但是其仅通过说明的方式给出，因为属于本发明的精神和范围内的各种变化和修改对于本领域技术人员将变得显而易见。
实施例
实施例
[0268] 为说明目的提供以下实施例，且不应理解为限制。
[0269] 实施例1-评估γc-拮抗肽的抑制活性的方法
[0270] 使用哺乳动物细胞测定以测定本实施方案制备的任何定制衍生肽抑制一种γc-细胞因子家族成员的作用的能力，以测量其对γc-细胞因子家族成员的增殖性反应。
[0271] 对于6种γc-细胞因子中的每种，用人IL-2Rβ基因转染指示剂细胞系：NK92(一种可通过美国模式培养物收集中心(American Type Culture Collection,ATCC)获得的人NK
细胞系NK92(产品目录号CRL-2407))、CTLL-2(一种可从ATCC获得的鼠CD8T细胞系)、以及
PT-18(一种鼠肥大细胞系)及其亚克隆PT-18β，以使得细胞响应IL-2和IL-15(Tagaya et
al.,1996,EMBO J.15:4928-39)，并将其用于定量测定γc-细胞因子的生长促进活性(参见
Current protocols in Immunology from Wiley and Sons作为方法学参照)。当通过比色
WST-1测定在一系列浓度下测量时，指示剂细胞显示半线性剂量依赖响应(对于试剂和方法
的详细描述，参见Clontech PT3946-1和相关的用户手册，通过引用并入本文中)。
细胞系NK92(产品目录号CRL-2407))、CTLL-2(一种可从ATCC获得的鼠CD8T细胞系)、以及
PT-18(一种鼠肥大细胞系)及其亚克隆PT-18β，以使得细胞响应IL-2和IL-15(Tagaya et
al.,1996,EMBO J.15:4928-39)，并将其用于定量测定γc-细胞因子的生长促进活性(参见
Current protocols in Immunology from Wiley and Sons作为方法学参照)。当通过比色
WST-1测定在一系列浓度下测量时，指示剂细胞显示半线性剂量依赖响应(对于试剂和方法
的详细描述，参见Clontech PT3946-1和相关的用户手册，通过引用并入本文中)。
[0272] 一旦确定了来自指示剂细胞系的产生50％-70％和95％最大响应的细胞因子的适当剂量，就加入各种浓度(范围从1pM到10μM)的纯化的或合成的定制衍生肽到包含细胞因
子和指示剂细胞的每个孔中。将450nm处吸光度的降低用作抑制细胞因子刺激的细胞增殖
的指标。
子和指示剂细胞的每个孔中。将450nm处吸光度的降低用作抑制细胞因子刺激的细胞增殖
的指标。
[0273] 实施例2-通过BNZ-γ和SEQ ID NO:3选择性抑制某些γc-细胞因子的生长促进活性
[0274] 使用如上所述的PT-18β细胞，测定了BNZ-γ肽特异性抑制选择的γc-细胞因子的生长促进活性的能力(图3A)。将IL-3(一种支持PT-18β细胞生长的非γc-细胞因子)用作阴性对照。简言之，在IL-3、IL-9、IL-15或IL-4(培养物中1nM的各种细胞因子)存在下，用通过HEK293T细胞制造的BNZ-γ肽的两种不同的稀释物(用BNZ-γ表达构建体转染的HEK293T细
胞的原始上清液的1:20或1:50稀释)或在无BNZ-γ肽下孵育PT-18β细胞。
胞的原始上清液的1:20或1:50稀释)或在无BNZ-γ肽下孵育PT-18β细胞。
[0275] 在BNZ-γ肽孵育后2天测定细胞的生长响应，并使用WST-1测定测定细胞因子。IL-3(一种非γc-细胞因子)的生长促进活性未被BNZ-γ抑制。相反，IL-15和IL-9的活性被
BNZ-γ肽显著(p<0.01，学生T检验)降低。通过IL-4(另一种γc-细胞因子)刺激的细胞增
殖，未受添加的BNZ-γ肽影响。IL-3、IL-9、IL-15和IL-4的结果示出在图3A处。
BNZ-γ肽显著(p<0.01，学生T检验)降低。通过IL-4(另一种γc-细胞因子)刺激的细胞增
殖，未受添加的BNZ-γ肽影响。IL-3、IL-9、IL-15和IL-4的结果示出在图3A处。
[0276] 在相似的测定中，使用了鼠细胞系CTTL2。在该测定中，利用于RPMI10％胎牛血清中的0.5nM的重组IL-2培养细胞。为了建立增殖测定，洗涤细胞3次去除细胞因子。以96孔板的每孔1x 10(5)个细胞的密度接种细胞，终浓度为50pM的IL-2或IL-15。向每个孔中添加不同浓度的BNZ-γ肽(0.1、1和10ug/ml)。将细胞培养20小时，并在最后的4小时，向板中加入
3H-胸苷。使用板读数仪收获细胞。数据示出在图3B中。
3H-胸苷。使用板读数仪收获细胞。数据示出在图3B中。
[0277] 将人NK细胞系NK92用于SEQ ID NO:3针对IL-2、IL-15和IL-21的剂量反应。用于RPMI 10％胎牛血清中的0.5nM的重组IL-2培养细胞。为了建立增殖测定，将细胞洗涤3次去除细胞因子，并于随后以96孔板的每孔2.5x 10(4)个细胞的密度进行接种，细胞因子浓度
对应于70％的NK92细胞增殖水平。以0-10μM的IL-2、0-0.1μM的IL-15和0-0.1μM的IL-21的终浓度向每个孔中加入可商购的SEQ ID NO:3(>99％纯度)。在引入SEQ ID NO:3后2天测定
细胞的生长反应，并使用WST-1测定测定细胞因子。通过γc-细胞因子IL-2刺激的细胞增殖未受添加多达10μM的SEQ ID NO:3影响。相反，IL-15和IL-21的活性受到SEQ ID NO:3的强力抑制。数据示出在图3D中。
对应于70％的NK92细胞增殖水平。以0-10μM的IL-2、0-0.1μM的IL-15和0-0.1μM的IL-21的终浓度向每个孔中加入可商购的SEQ ID NO:3(>99％纯度)。在引入SEQ ID NO:3后2天测定
细胞的生长反应，并使用WST-1测定测定细胞因子。通过γc-细胞因子IL-2刺激的细胞增殖未受添加多达10μM的SEQ ID NO:3影响。相反，IL-15和IL-21的活性受到SEQ ID NO:3的强力抑制。数据示出在图3D中。
[0278] 实施例3-通过测定作为细胞增殖的标记物的3H-胸苷掺入测量抑制γc-细胞因子活性的方法
[0279] 通过3H-胸苷掺入测定以测量通过拮抗剂定制衍生肽抑制指示剂细胞群的γc-细胞因子诱导的增殖。简言之，在细胞因子存在下，将放射标记的胸苷(1microCi)给予至经历增殖的20-50,000个细胞。通过使用常规的捕获仪器(例如，来自Perkin-Elmer的
Filtermate Universal Harvester)将细胞结合的放射活性捕获于玻璃纤维过滤器，然后
使用b-计数器(例如，1450Trilux微孔板闪烁计数器)测量放射活性，来测量细胞掺入的放
射活性。
Filtermate Universal Harvester)将细胞结合的放射活性捕获于玻璃纤维过滤器，然后
使用b-计数器(例如，1450Trilux微孔板闪烁计数器)测量放射活性，来测量细胞掺入的放
射活性。
[0280] 实施例4-通过测定作为细胞增殖的标记物的细胞追踪染料的掺入以测量抑制γc-细胞因子活性的方法
[0281] 在存在所选择的γc-细胞因子的情况下，或在存在所选择的γc-细胞因子和所选择的定制衍生肽的情况下，孵育指示剂细胞。然后使用细胞追踪染料，例如来自Invitrogen的CMFDA、C2925体外标记细胞群，并使用流式细胞仪(例如，Beckton-Dickinson
FACScalibur)监测每次细胞分裂时的细胞绿色荧光的衰减。通常，响应γc-细胞因子刺激，在绿色荧光通道上将出现对应于细胞已经历的分裂的数量的7～10个不同的峰。根据抑制
的程度，利用选择的γc-细胞因子和拮抗剂定制衍生肽孵育细胞将峰的数量减少至仅1-3
个。
FACScalibur)监测每次细胞分裂时的细胞绿色荧光的衰减。通常，响应γc-细胞因子刺激，在绿色荧光通道上将出现对应于细胞已经历的分裂的数量的7～10个不同的峰。根据抑制
的程度，利用选择的γc-细胞因子和拮抗剂定制衍生肽孵育细胞将峰的数量减少至仅1-3
个。
[0282] 实施例5-通过定制肽衍生物拮抗剂抑制细胞内信号转导
[0283] 除了刺激细胞增殖，γc-细胞因子与其受体的结合造成不同的细胞内事件(Rochman et al.2009Nat.Rev.Immunol.9:480-90，Pesu et al.2005Immunol.Rev.203:
127-142)。在细胞因子与其受体结合后不久，称为Jak3(Janus激酶3)的酪氨酸激酶在质膜
处被募集至受体。该激酶使多种蛋白的酪氨酸残基磷酸化，包括γc-亚基、STAT5(转录5的信号转导剂和活化剂)和PI3(磷脂酰肌醇3)激酶的亚基。在这些中，STAT5的磷酸化在许多
研究中表明与γc-细胞因子起始的细胞增殖相关。(Hennighausen和Robinson,2008Genes
Dev.22:711-21中有综述)。根据这些发表的数据，检查了BNZ-γ肽是否抑制通过IL-15刺激的PT-18β细胞中STAT5分子的酪氨酸磷酸化(结果示于图4A)。
127-142)。在细胞因子与其受体结合后不久，称为Jak3(Janus激酶3)的酪氨酸激酶在质膜
处被募集至受体。该激酶使多种蛋白的酪氨酸残基磷酸化，包括γc-亚基、STAT5(转录5的信号转导剂和活化剂)和PI3(磷脂酰肌醇3)激酶的亚基。在这些中，STAT5的磷酸化在许多
研究中表明与γc-细胞因子起始的细胞增殖相关。(Hennighausen和Robinson,2008Genes
Dev.22:711-21中有综述)。根据这些发表的数据，检查了BNZ-γ肽是否抑制通过IL-15刺激的PT-18β细胞中STAT5分子的酪氨酸磷酸化(结果示于图4A)。
[0284] 在BNZ-γ肽存在或缺失下，通过IL-15刺激PT-18β细胞。根据如Tagaya et al.1996EMBO J.15:4928-39中所述的常规方法，从细胞中提取细胞质蛋白。使用标准的
SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)分辨所提取的细胞质蛋白，并通过抗磷-
STAT5抗体(Cell Signaling Technology，目录号9354，Danvers MA)，使用免疫印迹确认磷酸化状态(参见图4A，上图)。确认每个泳道代表相似的总蛋白装载，然后将膜剥夺，并用抗STAT5抗体(Cell Signaling Technology，目录号9358)重新探测(参见图4A，下图)。
SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)分辨所提取的细胞质蛋白，并通过抗磷-
STAT5抗体(Cell Signaling Technology，目录号9354，Danvers MA)，使用免疫印迹确认磷酸化状态(参见图4A，上图)。确认每个泳道代表相似的总蛋白装载，然后将膜剥夺，并用抗STAT5抗体(Cell Signaling Technology，目录号9358)重新探测(参见图4A，下图)。
[0285] 这些结果证明了STAT5(信号转导的标志物)的酪氨酸磷酸化由PT-18β细胞中的IL-15诱导，且STAT5的酪氨酸磷酸化通过BNZ-γ肽显著降低。
[0286] 类似于STAT5经Jak3的IL-15诱导的酪氨酸磷酸化，本领域熟知经IL-21受体结合介导的Jak-STAT信号转导优选诱导Jak介导的STAT3的酪氨酸磷酸化(Habib et al.2003J
Allergy Clin Immunol.112:1033-45)。根据这些发表的数据，检查了SEQ ID NO:3通过
CTLL-2细胞中的IL-2或IL-15抑制STAT5分子的酪氨酸磷酸化的能力以及SEQ ID NO:3通过
NK92细胞中的IL-21抑制STAT3分子的酪氨酸磷酸化的能力(结果示于图4B)。
Allergy Clin Immunol.112:1033-45)。根据这些发表的数据，检查了SEQ ID NO:3通过
CTLL-2细胞中的IL-2或IL-15抑制STAT5分子的酪氨酸磷酸化的能力以及SEQ ID NO:3通过
NK92细胞中的IL-21抑制STAT3分子的酪氨酸磷酸化的能力(结果示于图4B)。
[0287] 在SEQ ID NO:3存在或缺失下，通过IL-2或IL-15刺激CTLL-2细胞。在作为阳性对照的抗IL-2抗体(R&D Systems，目录号MAB202，Minneapolis，MN)或抗IL-15抗体(R&D
Systems，目录号MAB247，Minneapolis，MN)存在的情况下，还通过IL-2或IL-15刺激CTLL-2细胞。在SEQ ID NO:3存在或缺失下，通过IL-21刺激NK92细胞。在作为阳性对照的抗IL-21抗体(Mabtech，目录号3540-1-250，Cincinnati，OH)存在的情况下，还通过IL-21刺激NK92细胞。根据Tagaya et al.1996EMBO J.15:4928-39中描述的常规方法，从细胞提取细胞质
蛋白。使用标准的SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)分辨所提取的细胞质蛋
白，并通过抗磷-STAT5抗体(Cell Signaling Technology，目录号9354，Danvers MA)或抗磷-STAT3抗体(Cell Signaling Technology，目录号9145，Danvers MA)，使用免疫印迹确认磷酸化状态(参见图4B，上图)。确认每个泳道代表相似的总蛋白荷载，然后将膜剥夺，并用抗STAT5抗体(Cell Signaling Technology，目录号9358)或抗STAT3抗体(Cell
Signaling Technology，目录号9139)重新探测(参见图4B，下图)。
Systems，目录号MAB247，Minneapolis，MN)存在的情况下，还通过IL-2或IL-15刺激CTLL-2细胞。在SEQ ID NO:3存在或缺失下，通过IL-21刺激NK92细胞。在作为阳性对照的抗IL-21抗体(Mabtech，目录号3540-1-250，Cincinnati，OH)存在的情况下，还通过IL-21刺激NK92细胞。根据Tagaya et al.1996EMBO J.15:4928-39中描述的常规方法，从细胞提取细胞质
蛋白。使用标准的SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)分辨所提取的细胞质蛋
白，并通过抗磷-STAT5抗体(Cell Signaling Technology，目录号9354，Danvers MA)或抗磷-STAT3抗体(Cell Signaling Technology，目录号9145，Danvers MA)，使用免疫印迹确认磷酸化状态(参见图4B，上图)。确认每个泳道代表相似的总蛋白荷载，然后将膜剥夺，并用抗STAT5抗体(Cell Signaling Technology，目录号9358)或抗STAT3抗体(Cell
Signaling Technology，目录号9139)重新探测(参见图4B，下图)。
[0288] 实施例6-BNZ-γ衍生拮抗性肽的合理设计
[0289] 根据核心序列D/E-F-L-E/Q/N-S/R-X-I/K-X-L/I-X-Q(SEQ ID NO:2)(其中X表示任何氨基酸)，通过利用具有如图2中指定的相同理化性质的氨基酸取代确定的核心序列的
氨基酸而制备衍生肽。
氨基酸而制备衍生肽。
[0290] 可选地，可以基于不同的γc-细胞因子家族成员的D螺旋区的序列比对，制备定制肽或其衍生肽。例如，如图6所示，可以将γc-细胞因子家族(SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:9)成员中保守的一条或多条序列组合而形成诸如SEQ ID NO:3的肽。
[0291] 实施例7-确定拮抗性定制衍生肽的抑制特异性的方法
[0292] 通过测定定制衍生肽抑制细胞因子响应性细胞系对6种γc-细胞因子中的各种的增殖响应的能力，而确定拮抗性定制衍生肽的γc-细胞因子抑制特异性。例如，将小鼠细胞系CTLL-2用于确定候选肽是否抑制IL-2和IL-15的功能。将PT-18(β)细胞用于确定候选肽
是否抑制IL-4和IL-9的功能。将PT-18(7α)细胞用于确定候选肽是否抑制IL-7的功能，并将PT-18(21α)细胞用于确定候选肽是否抑制IL-21的功能。PT-18(β)表示通过基因转染外源性表达人IL-2Rβ的PT-18细胞的亚克隆(参见Tagaya et al.1996)，PT-18(7α)表示通过基因转染表达人IL-7Rα的亚克隆，并且PT-18(21Rα)细胞表达人IL-21Rα。
是否抑制IL-4和IL-9的功能。将PT-18(7α)细胞用于确定候选肽是否抑制IL-7的功能，并将PT-18(21α)细胞用于确定候选肽是否抑制IL-21的功能。PT-18(β)表示通过基因转染外源性表达人IL-2Rβ的PT-18细胞的亚克隆(参见Tagaya et al.1996)，PT-18(7α)表示通过基因转染表达人IL-7Rα的亚克隆，并且PT-18(21Rα)细胞表达人IL-21Rα。
[0293] 另一替代选择是使用响应一系列细胞因子的其他的细胞系。人NK细胞系NK92中的该细胞系的一个实例可通过ATCC商购获得(目录号CRL-2407)。该细胞系是IL-2依赖性细胞
系，其响应其他的细胞因子，包括IL-9、IL-7、IL-15、IL-12、IL-18、IL-21(Gong et
al.1994Leukemia 8:652-658,,Kingemann et al.,1996,Biol Blood Marrow Transplant
2:68；75,Hodge DL et al.,2002J.Immunol.168:9090-8)。
系，其响应其他的细胞因子，包括IL-9、IL-7、IL-15、IL-12、IL-18、IL-21(Gong et
al.1994Leukemia 8:652-658,,Kingemann et al.,1996,Biol Blood Marrow Transplant
2:68；75,Hodge DL et al.,2002J.Immunol.168:9090-8)。
[0294] 将人NK细胞系NK92用于确定SEQ ID NO:3的γc-细胞因子抑制特异性。在该测定中，用于RPMI 10％胎牛血清中的0.5nM的重组IL-2培养细胞。为了建立抑制特异性测定，将细胞洗涤3次去除细胞因子。将细胞以96孔板的每孔2.5x 10(4)个细胞的密度接种，其中细胞因子浓度对应于70％的NK92细胞增殖水平。以2.5μM的终浓度将可商购的SEQ ID NO:3
(以70％纯度水平)加入各个孔中。在引入SEQ ID NO:3后2天测定细胞的生长响应，并使用
WST-1测定测定细胞因子。通过γc-细胞因子IL-2、IL-4和IL-9刺激的细胞增殖未受添加
SEQ ID NO:3影响。相反，IL-15和IL-21的活性被SEQ ID NO:3显著减少。IL-2、IL-4、IL-9、IL-15和IL-21的结果示出在图3C中。
(以70％纯度水平)加入各个孔中。在引入SEQ ID NO:3后2天测定细胞的生长响应，并使用
WST-1测定测定细胞因子。通过γc-细胞因子IL-2、IL-4和IL-9刺激的细胞增殖未受添加
SEQ ID NO:3影响。相反，IL-15和IL-21的活性被SEQ ID NO:3显著减少。IL-2、IL-4、IL-9、IL-15和IL-21的结果示出在图3C中。
[0295] 实施例8-含有肽内烃连接子元件的定制肽衍生物的抑制活性增加
[0296] 将人NK细胞系NK92用于确定含有肽内烃连接子元件的定制肽衍生物的增加的抑制活性。用于RPMI 10％胎牛血清中的0.5nM的重组IL-2培养细胞。为了建立增殖测定，将细胞洗涤3次去除细胞因子。以96孔板的每孔2.5x 10(4)个细胞的密度接种细胞，其中最终的IL-15浓度为0.25ng/mL。以等浓度将可商购的未修饰的SEQ ID NO:3和含有肽内烃连接子
元件的SEQ ID NO:3的定制肽衍生物加入各个孔中。在引入肽后2天测定细胞的生长响应，
并使用WST-1测定测定细胞因子。相比未修饰的SEQ ID NO:3，含有肽内烃连接子元件的SEQ ID NO:3的多种定制肽衍生物显示增加的抑制活性。结果示出在图7中。
元件的SEQ ID NO:3的定制肽衍生物加入各个孔中。在引入肽后2天测定细胞的生长响应，
并使用WST-1测定测定细胞因子。相比未修饰的SEQ ID NO:3，含有肽内烃连接子元件的SEQ ID NO:3的多种定制肽衍生物显示增加的抑制活性。结果示出在图7中。
[0297] 实施例9-模拟的肠液中含有肽内烃连接子元件的定制肽衍生物的时程蛋白酶稳定性测量
[0298] 为了评估包含本实施方案的一种或多种肽内烃连接子元件的定制肽衍生物的胃稳定性，在模拟的肠液中，于60分钟内进行了未修饰的SEQ ID NO:3相比含有一个烃连接子元件(SEQ ID NO:39)的SEQ ID NO:3的代表性的定制肽衍生物，以及含有两个烃连接子元
件和(D)立体化学构型的某些氨基酸位置(SEQ ID NO:57)的SEQ ID NO:3的另一代表性的
定制肽衍生物的时程蛋白酶稳定性测量。所有肽均为商业合成和购买。根据USP说明书
(Test Solutions,United States Pharmacopeia 36)制备模拟的肠液。将50μL的10mg/mL
肽与450μL预热的(37℃)模拟肠液混合，并在60分钟的时段内，于规定的时间间隔去除小份的反应混合物，并用0.1M HCl终止。通过反相HPLC在Phenomenex Aeris肽柱子(4.6x
250mm)上测量肽稳定性，设置为：3.6μm粒径，非多孔；5.0μL注射，0.5mL/min；流动相A：具有
0.1％TFA的25％乙腈；流动相B：具有0.1％TFA的100％乙腈。多步骤缓冲梯度在26分钟内从
100％A进行至100％B。时间点0分钟设定为100％未消化的肽，并对在后来的时间点的数据
作图，并经平滑曲线向外连接至60分钟的终点(图8A)。结果显示相比未修饰的肽，模拟的肠液中存在的具有一个或多个烃连接子元件和(D)立体化学构型的某些氨基酸位置的未消化
的肽的百分比极大地增加。数据示出在图8A中。
件和(D)立体化学构型的某些氨基酸位置(SEQ ID NO:57)的SEQ ID NO:3的另一代表性的
定制肽衍生物的时程蛋白酶稳定性测量。所有肽均为商业合成和购买。根据USP说明书
(Test Solutions,United States Pharmacopeia 36)制备模拟的肠液。将50μL的10mg/mL
肽与450μL预热的(37℃)模拟肠液混合，并在60分钟的时段内，于规定的时间间隔去除小份的反应混合物，并用0.1M HCl终止。通过反相HPLC在Phenomenex Aeris肽柱子(4.6x
250mm)上测量肽稳定性，设置为：3.6μm粒径，非多孔；5.0μL注射，0.5mL/min；流动相A：具有
0.1％TFA的25％乙腈；流动相B：具有0.1％TFA的100％乙腈。多步骤缓冲梯度在26分钟内从
100％A进行至100％B。时间点0分钟设定为100％未消化的肽，并对在后来的时间点的数据
作图，并经平滑曲线向外连接至60分钟的终点(图8A)。结果显示相比未修饰的肽，模拟的肠液中存在的具有一个或多个烃连接子元件和(D)立体化学构型的某些氨基酸位置的未消化
的肽的百分比极大地增加。数据示出在图8A中。
[0299] 实施例10-γc-拮抗肽的制备
[0300] 通过手动或自动化过程化学合成定制衍生γc-拮抗肽。
[0301] 手动合成：采用经典的液相合成，其包括一个氨基酸的羧基或C端与另一个氨基酸的氨基或N端偶联。可选地，使用固相肽合成(SPPS)。
[0302] 自动化合成：许多商业公司以一定费用提供自动化肽合成。这些公司使用各种商业肽合成仪，包括由Applied Biosystems(ABI)提供的合成仪。通过自动化肽合成仪合成定制衍生γc-拮抗肽。
[0303] 实施例11-使用重组技术生物制备定制衍生γc-拮抗肽
[0304] 作为前肽生物合成定制衍生γc-拮抗肽，其由合适的标签肽、信号肽或来源于已知的增强或稳定BNZ-γ肽或包含SEQ ID NO:3的序列的肽的结构的人类蛋白的肽或者其衍
生物组成，并且改善其生物活性。如果需要，应当设计肽的N端之前的合适的酶切割序列，以从最终的蛋白去除标签或任何的肽部分。
生物组成，并且改善其生物活性。如果需要，应当设计肽的N端之前的合适的酶切割序列，以从最终的蛋白去除标签或任何的肽部分。
[0305] 将编码在3’端具有终止密码子的定制衍生肽的核苷酸序列插入商业载体中，所述载体具有来源于大肠杆菌的硫氧还蛋白的标签部分和被合适的蛋白水解酶(例如，肠激酶)
识别和消化的介于标签部分和编码定制衍生肽和终止密码子的核苷酸序列之间的特殊肽
序列。合适的载体的一个实例是可从Invitrogen,CA获得的pThioHis质粒。可以使用其他的表达载体。
识别和消化的介于标签部分和编码定制衍生肽和终止密码子的核苷酸序列之间的特殊肽
序列。合适的载体的一个实例是可从Invitrogen,CA获得的pThioHis质粒。可以使用其他的表达载体。
[0306] 实施例12-将定制肽和衍生物与载体蛋白缀合用于免疫目的和产生针对定制肽的抗体
[0307] 将BNZ-γ和其他的定制衍生肽如包含SEQ ID NO:3的序列的肽或其衍生物用于免疫动物，以获得多克隆和单克隆抗体。通过常规方法，使用戊二醛或间马来酰亚胺苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯将肽与合适的载体蛋白(例如，牛血清白蛋白、钥孔戚血蓝素(KLH)等)的N端或C端缀合。然后将缀合的肽连同合适的佐剂用于免疫动物如兔、啮齿动物或驴。使用常规方法检查产生的抗体的特异性。如果产生的抗体与免疫原性肽反应，则接着根据实施
例1-3中所述的细胞增殖测定测试其抑制单独的γc-细胞因子活性的能力。由于衍生肽的
复合性质，可能产生同时识别两种不同的细胞因子的单一抗体，这是因为这些肽的复合性
质。
例1-3中所述的细胞增殖测定测试其抑制单独的γc-细胞因子活性的能力。由于衍生肽的
复合性质，可能产生同时识别两种不同的细胞因子的单一抗体，这是因为这些肽的复合性
质。
[0308] 实施例13-定制衍生γc-拮抗肽的大规模生产方法
[0309] 通过使用如其它的无细胞系统大规模生产重组蛋白。(参见Takai et al.,2010Curr.Pharm.Biotechnol.11(3):272-8)。简言之，将编码γc-拮抗肽和标签的cDNA亚
克隆到合适的载体中(参见Takai et al.,2010Curr.Pharm.Biotechnol.11(3):272-8)，对
其进行体外转录，随后立即进行体外翻译以产生标记的肽。然后使用识别标记的表位的固
定的抗体纯化前多肽，通过蛋白水解酶处理，并使用常规的18％Tricine-SDS-PAGE
(Invitrogen)和常规的考马斯染色测试洗脱物(其主要含有目标定制衍生肽)的纯度。如果
不满足所需的肽纯度(>98％)，则对混合物进行常规的HPLC(高性能液相色谱)以进一步纯
化。
克隆到合适的载体中(参见Takai et al.,2010Curr.Pharm.Biotechnol.11(3):272-8)，对
其进行体外转录，随后立即进行体外翻译以产生标记的肽。然后使用识别标记的表位的固
定的抗体纯化前多肽，通过蛋白水解酶处理，并使用常规的18％Tricine-SDS-PAGE
(Invitrogen)和常规的考马斯染色测试洗脱物(其主要含有目标定制衍生肽)的纯度。如果
不满足所需的肽纯度(>98％)，则对混合物进行常规的HPLC(高性能液相色谱)以进一步纯
化。
[0310] 实施例14-使用定制衍生γc-拮抗肽阻断HAM/TSP中的细胞因子功能
[0311] HTLV-1相关的脊髓病(HAM)/热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)是在感染人T-嗜淋巴细胞病毒类型I(HTLV-I)的一些人群中见到的一种慢进展性脊髓病。脊髓中淋巴细胞的侵润与
针对HTLV-I的免疫反应相关，并引起某些细胞因子的释放。这些细胞因子中的一些也可破
坏神经。
针对HTLV-I的免疫反应相关，并引起某些细胞因子的释放。这些细胞因子中的一些也可破
坏神经。
[0312] 患有HAM/TSP的患者显示与在自身免疫疾病中观察到的相似的升高的免疫系统状态(Oh et al.2008Neurol Clin.26:781-785)。该升高的状态通过在无外源添加的细胞因
子下，在约一周的离体培养中，HAM/TSP患者的T细胞经历自发增殖的能力而得到证明。HAM/TSP患者中T细胞的自发增殖至少部分归因于IL-2、IL-9和IL-15的自分泌/旁分泌环路。已
表明添加阻断针对IL-2或IL-15受体的抗体能够抑制HAM/TSP离体培养系统中的自发T细胞
增殖。
子下，在约一周的离体培养中，HAM/TSP患者的T细胞经历自发增殖的能力而得到证明。HAM/TSP患者中T细胞的自发增殖至少部分归因于IL-2、IL-9和IL-15的自分泌/旁分泌环路。已
表明添加阻断针对IL-2或IL-15受体的抗体能够抑制HAM/TSP离体培养系统中的自发T细胞
增殖。
[0313] 这些观察连同来源于离体研究的其他的数据为在临床中采用两种单克隆抗体(抗IL-2受体α或抗Tac和抗IL-15受体β链)来治疗HAM/TSP提供了基本原理(Azimi et
al.2001Proc.Natl.Acad.Sci.98:14559-64.,Azimi et al.,1999J.Immunol 163:4064-
72)。根据本文中描述的实施方案的抗细胞因子受体拮抗剂不仅作为治疗HAM/TSP的治疗性
免疫调节剂具有价值，而且通过根据本实施方案的抗细胞因子受体拮抗剂调节HAM/TSP中
的免疫反应可用于根据本实施方案的抗细胞因子受体拮抗剂在其他的自身免疫疾病的治
疗中的用途的概念验证。
al.2001Proc.Natl.Acad.Sci.98:14559-64.,Azimi et al.,1999J.Immunol 163:4064-
72)。根据本文中描述的实施方案的抗细胞因子受体拮抗剂不仅作为治疗HAM/TSP的治疗性
免疫调节剂具有价值，而且通过根据本实施方案的抗细胞因子受体拮抗剂调节HAM/TSP中
的免疫反应可用于根据本实施方案的抗细胞因子受体拮抗剂在其他的自身免疫疾病的治
疗中的用途的概念验证。
[0314] 为了证明根据本文所述的实施方案的定制衍生γc-拮抗肽的功效，我们使用HAM/TSP离体培养系统测试了BNZ-γ肽在自发性T细胞增殖测定中阻断对HTLV-I的免疫应答的
能力。对有或没有添加BNZ-γ的HAM/TSP患者血液样本进行增殖测定。这些测定评估了BNZ-γ阻断离体HAM/TSP患者血液培养物中存在的诸如IL-2和IL-15的细胞因子的功能，以及阻
止这些样品中的自发性T细胞繁殖的能力。
能力。对有或没有添加BNZ-γ的HAM/TSP患者血液样本进行增殖测定。这些测定评估了BNZ-γ阻断离体HAM/TSP患者血液培养物中存在的诸如IL-2和IL-15的细胞因子的功能，以及阻
止这些样品中的自发性T细胞繁殖的能力。
[0315] 在离体自发性T细胞增殖测定中，在RPMI-10％FCS中，以96孔板的每孔1x 10(6)个细胞的密度培养来自HAM/TSP患者的PBMC。将逐渐增加浓度的BNZ-γ肽添加到每个孔中。作为对照，以类似方式使用无关肽。将细胞在37℃的CO2孵育器中孵育3、4和6天。将1uCi量的
3H-胸苷添加到细胞中。在额外孵育6小时后，收获细胞，测量其增殖速率。代表性的HAM/TSP患者的数据示出在图5A至图5D中。如图5A至图5D所示，BNZ-γ肽在约1ug/ml的浓度下抑制
HAM/TSP培养物中T细胞的自发增殖。
3H-胸苷添加到细胞中。在额外孵育6小时后，收获细胞，测量其增殖速率。代表性的HAM/TSP患者的数据示出在图5A至图5D中。如图5A至图5D所示，BNZ-γ肽在约1ug/ml的浓度下抑制
HAM/TSP培养物中T细胞的自发增殖。
[0316] 在该测定中另外测量了其他的免疫标志物。使用病毒蛋白四聚体测量了离体培养过程中病毒特异性CD8细胞的百分比。在流式细胞术测定中监测了CD4+CD25+细胞群(T-细
胞活化的标志物)以及Ki67染色(T-细胞增殖的标志物)。
胞活化的标志物)以及Ki67染色(T-细胞增殖的标志物)。
[0317] 其他形式的缀合的BNZ-γ肽衍生物或包含SEQ ID NO:3的序列的定制肽及其衍生物均可用于相似的未来的测定。它们包括在化学合成后可与肽缀合的白蛋白、BSA、PEG。其他生物形式的定制肽如BNZ-γ肽缀合物或包含SEQ ID NO:3的序列的定制肽及其衍生物均
可包括与定制肽融合的已知蛋白实体的区域(包括但不限于人IgG的Fc区)。
可包括与定制肽融合的已知蛋白实体的区域(包括但不限于人IgG的Fc区)。
[0318] 实施例15-通过给予定制衍生γc-拮抗肽治疗人类患者中成人T细胞白血病(ATL)的方法
[0319] 鉴定了患有成人T细胞白血病的人类患者。将如医师所确定的有效剂量的定制衍生γc-拮抗肽，例如，BNZ-γ、包含SEQ ID NO:3的序列的定制肽或其衍生物按医师所确定的一段时间向患者给药。如果患者开始缓解，则治疗确定为有效。
[0320] 实施例16-通过给予定制衍生γc-拮抗肽治疗人类患者中的HAM/TSP的方法
[0321] 鉴定了患有HAM/TSP的人类患者。将如医师所确定的有效剂量的定制衍生γc-拮抗肽，例如，BNZ-γ、包含SEQ ID NO:3的序列的定制肽或其衍生物按医师所确定的一段时间向患者给药。如果患者的症状改善或者如果疾病的进展已停止或减缓，则治疗确定为有
效。
效。
[0322] 实施例17-使用定制衍生γc-拮抗肽阻断细胞因子功能
[0323] 鉴定了需要减少至少IL-15和IL-21的功能的患病状态的人类患者。将如医师所确定的有效剂量的定制衍生γc-拮抗肽，例如，包含SEQ ID NO:3的序列的复合肽或其衍生物按医师所确定的一段时间向患者给药。如果患者的症状改善或者如果疾病的进展已停止或
减缓，则治疗确定为有效。
减缓，则治疗确定为有效。
[0324] 实施例18-通过给予定制衍生γc-拮抗肽治疗人类患者中的乳糜泻的方法
[0325] 在乳糜泻中，IL-15在肠固有层和上皮中慢性上调，并且与粘膜损伤的严重程度直接相关(Jabri et al.2000Gastroenterology 118:867-879.,Maiuri et
al.2000Gastroenterology 119:996-1006.,Mention et al.2003Gastroenterology 125:
730-45.；Di Sabatino et al.2006Gut 55:469-77)，并且IL-21的产生和功能在疾病进展
中起积极作用(De Nitto et al.2009World J Gastroenterol 15:4609-14)。还已经显示
了IL-15与CD粘膜环境中观察到的IL-21表达的增加直接相关并对其正向调节(Sarra et
al.2013Mucosal Immunol 6:244-55)。最近的研究还确定了IL-2、IL-15和IL-21的协同效
应在难治性CD的发病机理中有很大贡献(Kooy-Winkelaar,et al.,2017Proc Natl Acad
Sci U S A 114:E980-9)。
al.2000Gastroenterology 119:996-1006.,Mention et al.2003Gastroenterology 125:
730-45.；Di Sabatino et al.2006Gut 55:469-77)，并且IL-21的产生和功能在疾病进展
中起积极作用(De Nitto et al.2009World J Gastroenterol 15:4609-14)。还已经显示
了IL-15与CD粘膜环境中观察到的IL-21表达的增加直接相关并对其正向调节(Sarra et
al.2013Mucosal Immunol 6:244-55)。最近的研究还确定了IL-2、IL-15和IL-21的协同效
应在难治性CD的发病机理中有很大贡献(Kooy-Winkelaar,et al.,2017Proc Natl Acad
Sci U S A 114:E980-9)。
[0326] 鉴定了患乳糜泻的人类患者。将如医师所确定的有效剂量的定制衍生γc-拮抗肽，例如，BNZ-γ、包含SEQ ID NO:3的序列的定制肽，或其衍生物按医师所确定的一段时间向患者给药。如果患者的症状改善，或者如果疾病的进展已停止或减缓，则治疗确定为有
效。
效。
[0327] 实施例19-通过给予定制衍生γc-拮抗肽治疗人类患者中的类风湿性关节炎的方法
[0328] 在类风湿性关节炎(RA)中，患者的滑液和类风湿结节中IL-15表达升高，RA环境中CD4+和CD8+T细胞的跨内皮迁移增加，并且血清IL-15水平与疾病进展呈正相关
(Oppenheimer-Marks et al.1998J Clin Invest 101:1261-72.,Harada et
al.1999Arthritis Rheum 42:1508-16.,Gonzalez-Alvaro et al.2003Clin Exp
Rheumatol 21:639-42.,Hessian et al.2003Arthritis Rheum 48:334-8.,Ruckert et
al.2009Immunology 126:63-73)。在RA中，IL-21正向影响促炎性细胞因子TNF-α和IL-6的表达，以及成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)的侵袭和迁移。FLS通过在患者中的侵袭性增殖和
侵袭而在RA发病机理中起关键作用(Xing et al.2016Clin Exp Immunol 184:147-58.,
Xing et al.2016Scand J Immunol 83:64-71)。
(Oppenheimer-Marks et al.1998J Clin Invest 101:1261-72.,Harada et
al.1999Arthritis Rheum 42:1508-16.,Gonzalez-Alvaro et al.2003Clin Exp
Rheumatol 21:639-42.,Hessian et al.2003Arthritis Rheum 48:334-8.,Ruckert et
al.2009Immunology 126:63-73)。在RA中，IL-21正向影响促炎性细胞因子TNF-α和IL-6的表达，以及成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)的侵袭和迁移。FLS通过在患者中的侵袭性增殖和
侵袭而在RA发病机理中起关键作用(Xing et al.2016Clin Exp Immunol 184:147-58.,
Xing et al.2016Scand J Immunol 83:64-71)。
[0329] 鉴定了患类风湿性关节炎的人类患者。将如医师所确定的有效剂量的定制衍生γc-拮抗肽，例如，BNZ-γ、包含SEQ ID NO:3的序列的定制肽或其衍生物按医师所确定的一段时间向患者给药。如果患者的症状改善，或者如果疾病的进展已停止或减缓，则治疗确定为有效。
[0330] 实施例19-通过给予定制衍生γc-拮抗肽治疗人类患者中的多发性硬化的方法
[0331] 在多发性硬化(MS)中，患者的血清和脑脊液中的IL-15表达升高(Kivisakk et al.1998Clin Exp Immunol 111:193-7.,Pashenkov et al.1999Scand J Immunol 50:
302-8.,Vaknin-Dembinsky et al.2008J Neuroimmunol 195:135-9)。MS患者的脑病灶还
包含具有升高的IL-15水平的星形胶质细胞和B细胞(Saikali et al.2010J Immunol 185:
5693-703.,Schneider et al.2011J Immunol 187:4119-28)。在MS中，IL-21产生对于疾病进展起着积极作用，且其在急性和慢性MS病灶的CD4+细胞中的表达强烈升高(Tzartos et
al.2011Am J Pathol 178:794-802.,Ghalamfarsa et al.2016J Immunotoxicol 13:274-
85)。
302-8.,Vaknin-Dembinsky et al.2008J Neuroimmunol 195:135-9)。MS患者的脑病灶还
包含具有升高的IL-15水平的星形胶质细胞和B细胞(Saikali et al.2010J Immunol 185:
5693-703.,Schneider et al.2011J Immunol 187:4119-28)。在MS中，IL-21产生对于疾病进展起着积极作用，且其在急性和慢性MS病灶的CD4+细胞中的表达强烈升高(Tzartos et
al.2011Am J Pathol 178:794-802.,Ghalamfarsa et al.2016J Immunotoxicol 13:274-
85)。
[0332] 鉴定了患多发性硬化的人类患者。将如医师所确定的有效剂量的定制衍生γc-拮抗肽，例如，包含SEQ ID NO:3的序列的复合肽或其衍生物按医师所确定的一段时间向患者给药。如果患者的症状改善，或者如果疾病的进展已停止或减缓，则治疗确定为有效。
[0333] 实施例20-通过给予定制衍生γc-拮抗肽治疗人类患者中的1型糖尿病的方法
[0334] 在1型糖尿病(T1D)中，患者血清中的IL-15表达升高(Kuczynski et al.2005Diabetes Res Clin Pract 69:231-6)。在非肥胖糖尿病小鼠模型中，在胰岛炎起
始时，通过抑制IL-15信号转导T1D可被完全阻止(Bobbala et al.2012Diabetologia 55:
3010-3020)。在T1D患者中还观察到人胰岛IL-15表达(Chen et al.2013Proc Natl Acad
Sci U S A110:13534-9)。此外，高IL-21产生与T1D疾病进展相关(Ferreira et
al.2015Diabetologia 58:781-90)。
始时，通过抑制IL-15信号转导T1D可被完全阻止(Bobbala et al.2012Diabetologia 55:
3010-3020)。在T1D患者中还观察到人胰岛IL-15表达(Chen et al.2013Proc Natl Acad
Sci U S A110:13534-9)。此外，高IL-21产生与T1D疾病进展相关(Ferreira et
al.2015Diabetologia 58:781-90)。
[0335] 鉴定了患有1型糖尿病的人类患者。将如医师所确定的有效量的定制衍生γc-拮抗肽，例如，包含SEQ ID NO:3的序列的复合肽或其衍生物按医师所确定的一段时间向患者给药。如果患者的症状改善，或者如果疾病的进展已停止或减缓，则治疗确定为有效。
[0336] 实施例21-通过给予定制衍生γc-拮抗肽治疗人类患者中的牛皮癣的方法
[0337] 牛皮癣患者中皮肤病灶中的IL-15表达升高(Waldmann 2013J Investig Dermatol Symp Proc 16:S28-30)。IL-21产生和功能对于牛皮癣疾病进展起积极作用
(Caruso et al.2009Cell Cycle 8:3629-30.,Botti et al.2012Curr Pharm Biotechnol
13:1861-7)，并且患者血清中的γc-细胞因子的表达升高，并且与疾病严重性相关(He et al.2012Br J Dermatol 167:191-3)。
(Caruso et al.2009Cell Cycle 8:3629-30.,Botti et al.2012Curr Pharm Biotechnol
13:1861-7)，并且患者血清中的γc-细胞因子的表达升高，并且与疾病严重性相关(He et al.2012Br J Dermatol 167:191-3)。
[0338] 鉴定了患牛皮癣的人类患者。将如医师所确定的有效剂量的定制衍生γc-拮抗肽，例如，包含SEQ ID NO:3的序列的复合肽或其衍生物按医师所确定的一段时间向患者给药。如果患者的症状改善，或者如果疾病的进展已停止或减缓，则治疗确定为有效。
[0339] 实施例22-通过给予定制衍生γc-拮抗肽治疗人类患者中的炎性肠病的方法
[0340] 在炎性肠病(IBD，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病)中，在粘膜发炎中观察到IL-15水平增加(Liu et al.2000J Immunol 164:3608-15.,Vainer et al.2000Cytokine 12:
1531-6)。IBD患者还经历了肠中IL-21水平的增加(Monteleone et
al.2005Gastroenterology 128:687-94)，其与增加的肠粘膜炎症正相关(De Nitto et
al.2010World J Gastroenterol 16:3638-41)。
1531-6)。IBD患者还经历了肠中IL-21水平的增加(Monteleone et
al.2005Gastroenterology 128:687-94)，其与增加的肠粘膜炎症正相关(De Nitto et
al.2010World J Gastroenterol 16:3638-41)。
[0341] 鉴定了患有炎性肠病的人类患者。将如医师所确定的有效剂量的定制衍生γc-拮抗肽，例如，包含SEQ ID NO:3的序列的复合肽或其衍生物按医师所确定的一段时间向患者给药。如果患者的症状改善，或者如果疾病的进展已停止或减缓，则治疗确定为有效。
[0342] 实施例23-通过给予定制衍生γc-拮抗肽治疗人类患者中的系统性红斑狼疮的方法
[0343] 在系统性红斑狼疮(SLE)中，患者血清中的IL-15表达升高(Aringer et al.2001Rheumatology(Oxford)40:876-81)。IL-15信号转导的功能障碍与SLE发病机理正
相关(Baranda et al.2005Rheumatology(Oxford)44:1507-13)。在SLE中，患者血清中的
IL-21表达升高(Nakou et al.2013Clin Exp Rheumatol 31:172-9)。IL-21中的遗传多态
性也与SLE正相关(Sawalha et al.2008Ann Rheum Dis 67:458-61)。SLE中的IL-21产生与
在SLE发病机理中观察到的T细胞和B细胞改变正相关(Terrier et al.2012J Rheumatol
39:1819-28)，并且IL-21信号转导对于BXSB-Yaa鼠疾病模型中的SLE病原进展至关重要
(Bubier et al.2009Proc Natl Acad Sci U S A 106:1518-23)。
相关(Baranda et al.2005Rheumatology(Oxford)44:1507-13)。在SLE中，患者血清中的
IL-21表达升高(Nakou et al.2013Clin Exp Rheumatol 31:172-9)。IL-21中的遗传多态
性也与SLE正相关(Sawalha et al.2008Ann Rheum Dis 67:458-61)。SLE中的IL-21产生与
在SLE发病机理中观察到的T细胞和B细胞改变正相关(Terrier et al.2012J Rheumatol
39:1819-28)，并且IL-21信号转导对于BXSB-Yaa鼠疾病模型中的SLE病原进展至关重要
(Bubier et al.2009Proc Natl Acad Sci U S A 106:1518-23)。
[0344] 鉴定了患有系统性红斑狼疮的人类患者。将如医师所确定的有效剂量的定制衍生γc-拮抗肽，例如，包含SEQ ID NO:3的序列的复合肽或其衍生物按医师所确定的一段时间向患者给药。如果患者的症状改善，或者如果疾病的进展已停止或减缓，则治疗确定为有
效。
效。
[0345] 实施例24-通过给予定制衍生γc-拮抗肽治疗人类患者中的斑秃疾病的方法
[0346] 在斑秃疾病(AAD)中，患者的病灶性头皮活检中的IL-15表达升高(Fuentes-Duculan et al.2016Exp Dermatol 4:282-6.,Waldmann 2013J Investig Dermatol Symp
Proc 16:S28-30)，并且在AAD小鼠模型中，靶向γc-细胞因子IL-2和IL-15的抗体中的每种显示抑制活性，但没有阻断性抗体能够单独逆转建立的AAD(Xing et al.2014Nat Med 9:
1043-9)。在AAD中，相对于健康对照，患者血清中的IL-21表达升高(Atwa et al.2016Int J Dermatol 55:666-72)。基因组范围的关联研究也将IL-2和IL-21与AAD正关联(Jagielska
et al.2012J Invest Dermatol 132:2192-7,Petukhova et al.2010Nature 466:113-7)。
Proc 16:S28-30)，并且在AAD小鼠模型中，靶向γc-细胞因子IL-2和IL-15的抗体中的每种显示抑制活性，但没有阻断性抗体能够单独逆转建立的AAD(Xing et al.2014Nat Med 9:
1043-9)。在AAD中，相对于健康对照，患者血清中的IL-21表达升高(Atwa et al.2016Int J Dermatol 55:666-72)。基因组范围的关联研究也将IL-2和IL-21与AAD正关联(Jagielska
et al.2012J Invest Dermatol 132:2192-7,Petukhova et al.2010Nature 466:113-7)。
[0347] 鉴定了患有斑秃疾病的人类患者。将如医师所确定的有效剂量的定制衍生γc-拮抗肽，例如，BNZ-γ、包含SEQ ID NO:3的序列的定制肽或其衍生物按医师所确定的一段时间向患者给药。如果患者的症状改善，或者如果疾病的进展已停止或减缓，则治疗确定为有效。
[0348] 实施例25-模拟的肠液中含有肽内烃连接子元件的定制肽衍生物的时程蛋白酶稳定性测量
[0349] 为了评估含有本实施方案的一个或多个肽内烃连接子元件的定制肽衍生物的胃稳定性，在模拟的肠液中，于60分钟内进行了未修饰的SEQ ID NO:3相比含有一个烃连接子元件(SEQ ID NO:39)的SEQ ID NO:3的代表性的定制肽衍生物，以及含有两个烃连接子元
件和某些(D)立体化学构型的氨基酸位置(SEQ ID NO:57)的SEQ ID NO:3的另一代表性的
定制肽衍生物的时程蛋白酶稳定性测量。在模拟的肠液中，于120分钟内进行另外的时程蛋白酶稳定性实验，以比较SEQ ID NO:3的两种代表性的定制肽衍生物，其中第一种含有一个烃连接子元件(SEQ ID NO:39)，且第二种含有两个烃连接子元件(SEQ ID NO:83)。所有肽
均为商业合成和购买。根据USP说明书(Test Solutions,United States Pharmacopeia
36)制备模拟的肠液。将50μL的10mg/mL肽与450μL的预热的(37℃)模拟的肠液混合，并在60分钟的时段内，于规定的时间间隔去除小份的反应混合物，并用0.1M的HCl终止。通过反相HPLC，在Phenomenex Aeris肽柱子(4.6x 250mm)上测量肽稳定性，设定为：3.6μm粒径，非多孔的；5.0μL注射，0.5mL/min；流动相A：具有0.1％TFA的25％乙腈；流动相B：具有0.1％TFA的100％乙腈。多步骤缓冲梯度在26分钟内从100％A进行至100％B。时间点0分钟设定为
100％未消化的肽，并且对后来的时间点处的数据作图，并经平滑曲线向外连接至60分钟
(图8A)或120分钟(图8B)的终点。结果显示模拟的肠液中存在的未消化的具有一个或多个
烃连接子元件和(D)立体化学构型的某些氨基酸位置的肽的百分比极大地增加。数据示出
在图8A和图8B中。
件和某些(D)立体化学构型的氨基酸位置(SEQ ID NO:57)的SEQ ID NO:3的另一代表性的
定制肽衍生物的时程蛋白酶稳定性测量。在模拟的肠液中，于120分钟内进行另外的时程蛋白酶稳定性实验，以比较SEQ ID NO:3的两种代表性的定制肽衍生物，其中第一种含有一个烃连接子元件(SEQ ID NO:39)，且第二种含有两个烃连接子元件(SEQ ID NO:83)。所有肽
均为商业合成和购买。根据USP说明书(Test Solutions,United States Pharmacopeia
36)制备模拟的肠液。将50μL的10mg/mL肽与450μL的预热的(37℃)模拟的肠液混合，并在60分钟的时段内，于规定的时间间隔去除小份的反应混合物，并用0.1M的HCl终止。通过反相HPLC，在Phenomenex Aeris肽柱子(4.6x 250mm)上测量肽稳定性，设定为：3.6μm粒径，非多孔的；5.0μL注射，0.5mL/min；流动相A：具有0.1％TFA的25％乙腈；流动相B：具有0.1％TFA的100％乙腈。多步骤缓冲梯度在26分钟内从100％A进行至100％B。时间点0分钟设定为
100％未消化的肽，并且对后来的时间点处的数据作图，并经平滑曲线向外连接至60分钟
(图8A)或120分钟(图8B)的终点。结果显示模拟的肠液中存在的未消化的具有一个或多个
烃连接子元件和(D)立体化学构型的某些氨基酸位置的肽的百分比极大地增加。数据示出
在图8A和图8B中。
[0350] 实施例26-通过代表性的定制肽衍生物抑制细胞因子诱导的基因转录
[0351] 细胞因子干扰素γ(IFNγ)代表了多种人免疫炎性疾病状态中的有用的炎症标志物。IFNγ基因的转录可通过IL-15、IL-21、非γc-细胞因子IL-12和其他的选择的细胞因子而诱导。因此，阻断细胞因子诱导的IFNγ转染的能力代表了测定定制肽衍生物的生物活性的另一有用的方法。
[0352] 通过PBS洗涤使NK92细胞进入静止状态，并在不存在细胞因子的情况下培养48小时。用10μM的SEQ ID NO:83将细胞处理10分钟，然后用1ng/mL的人IL-15、IL-21或IL-12刺激2小时。还包括作为对照病况的仅细胞因子处理组，以及另一处理组，其中NK92细胞未经肽处理，且未受细胞因子刺激。在与肽和细胞因子一起孵育后，收获细胞，分离RNA以用于产生cDNA，并用作qPCR分析的模板以定量IFNγ转录物。SEQ ID NO:83显示出对IFNγ基因转
录的IL-15和IL-21诱导的抑制，但是没有阻断IFNγ基因转录的非γc-细胞因子IL-12诱
导。数据示于图9。
录的IL-15和IL-21诱导的抑制，但是没有阻断IFNγ基因转录的非γc-细胞因子IL-12诱
导。数据示于图9。
[0353] 参考文献
[0354] 本公开中引用的所有参考文献均通过引用整体并入本文中。
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spastic paraparesis？2000AIDS Res.Hum.Retroviruses 16:1717-22.
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interleukin 15gene transcription through an NF-kappaB
site.1998Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95:2452-7.
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