技术领域
[0001] 本
发明涉及
生物技术领域,具体是一种菌酶协同酵解生产全脂高能低棉酚优质棉仁的方法。
背景技术
[0002] 我国棉花产量众多,目前棉籽年产量为720万t,约占世界年产量的24%。这些棉籽榨油后可得棉粕324万t,折合纯
蛋白质14万t。我国每年有4000万吨油料制油后产出的饼粕,脱酚后棉仁蛋白含量达50%以上,高于一级
豆粕44%的蛋白含量,大豆粕大都饲用,而富含棉籽蛋白质的棉粕只有少量饲用,其中75%-80%的棉粕依然沿着传统使用习惯用以肥田。
[0003] 棉仁蛋白是从棉籽粕中提取出的一种
植物蛋白。棉籽粕是棉籽榨油后的副产物。棉籽中充满色素腺体,其内含有一种高活性的多酚类化合物–棉酚或称棉毒素,人和
单胃动物食用后胃膜组织易受破坏,引起消化功能紊乱。作为棉籽榨油后的副产物,未经处理的棉籽粕中不可避免的含有棉酚。这些含有棉酚的棉籽粕只能做低级
饲料或
肥料,其用途受到了严重的限制。
发明内容
[0004] 本发明的目的在于提供一种可快速、有效地清除棉仁中棉酚的菌酶协同酵解生产全脂高能低棉酚优质棉仁的方法,生产得到的全脂高能低棉酚优质棉仁中游离棉酚含量极低,营养物质丰富,可用作动物蛋白饲料。
[0005] 本发明针对背景技术中提到的问题,采取的技术方案为:一种菌酶协同酵解生产全脂高能低棉酚优质棉仁的方法,菌酶协同酵解过程中采用的菌种为酿酒
酵母和枯草芽孢杆菌。
酿酒酵母保藏号为CCTCC NO: M 2017590,分类命名为酿酒酵母Yn(Saccharomyces cerevisiae Yn)。枯草芽孢杆菌保藏号为CCTCC NO: M 2017591,分类命名为枯草芽孢杆菌B1(Bacillus subtilis B1)。上述两株菌株均于2017-10-19保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。上述保藏中心位于中国武汉的武汉大学。
[0006] 一种菌酶协同酵解生产全脂高能低棉酚优质棉仁的方法包括以下步骤:1)
热处理:将棉仁经过脱壳、压饼处理后,加
水35 55%,在105 135℃下热处理20~ ~ ~
30min,于40 70℃烘干处理,
粉碎;
~
2)菌酶协调酵解:在放凉后的棉仁中接种0.1 0.7%枯草芽孢杆菌
种子液和1.0 2.0%酿~ ~
酒酵母种子液,并加入
碱性蛋白酶40 60 u/g,混合均匀后放置于25 40℃下24 48h,期间翻~ ~ ~
料1 4次,
发酵结束后置于40 70℃烘干处理,得到全脂高能低棉酚优质棉仁。采用物理、化~ ~
学和生物联合脱毒处理,有效清除棉仁中的棉酚,使得棉仁中游离棉酚的含量由6000mg/Kg以上降低到300mg/Kg以下。同时,在菌酶协调酵解棉仁的过程中,不仅能产生大量
益生菌、寡肽、
氨基酸、维生素和UGF等营养物质,还能自身代谢产生多种香气物质并产生多种酶类促进
香味物质产生,得到的棉仁具有高营养价值和独特的芳香
风味。
[0007] 枯草芽孢杆菌种子液的制备步骤为将保藏号为CCTCC NO: M 2017591的枯草芽孢杆菌接种于斜面培养基进行活化,再用接种环取斜面上菌种环接于液体培养基一中,在25~35℃、100 300 r/min摇床培养12 24h,得到枯草芽孢杆菌种子液。酿酒酵母种子液的制备~ ~
步骤为:将保藏号为CCTCC NO: M 2017590的酿酒酵母接种于斜面培养基进行活化,再用接种环取斜面上菌种环接于液体培养基二中,在25 35℃、100 300r/min摇床培养20 40h,得~ ~ ~
到酿酒酵母种子液。上述枯草芽孢杆菌和酿酒酵母协同作用,分解棉仁中的
抗营养因子作为营养物质供自身的生长,从而达到脱毒的效果。
[0008] 液体培养基一成分及其重量份为胰蛋白胨0.8 1.5份、酵母提取物0.3 0.8份、氯~ ~化钠0.8 1.5份、(R)-乳酸乙酯0.001 0.002份、(S)-乳酸乙酯0.007 0.009份和水100 150~ ~ ~ ~
份。液体培养基二成分及其重量份为酵母膏0.8 1.5份、蛋白胨1.0 3.0份、
葡萄糖1.0 3.0~ ~ ~
份、10-羟基癸酸0.05 0.09份、蚯蚓粪提取液0.4 0.8份和水100 150份。上述培养基成分及~ ~ ~
其重量份设计科学,可充分提供酿酒酵母和枯草芽孢杆菌生长繁殖所需的营养物质和各种生长因子,使其快速进入衰退期,将棉仁中的棉酚分解利用,大幅降低棉仁中游离棉酚的含量。其中,(R)-乳酸乙酯和(S)-乳酸乙酯与酵母提取物协同作用,附着在枯草芽孢杆菌菌体表面,提高其摄取游离棉酚的速度;10-羟基癸酸与蚯蚓粪提取液协同作用,可大幅提高酿酒酵母体
内核糖体的活性,加快其对游离棉酚的
吸附利用。
[0009] 与
现有技术相比,本发明的优点在于:本发明采用物理、化学和生物联合脱毒处理,有效清除棉仁中的棉酚,使得棉仁中游离棉酚的含量由6000mg/Kg以上降低到30mg/Kg以下。本发明方法中棉仁不经过榨油处理,保持了棉仁原有的高油脂,减少了榨油过程中的
能量损失。制备得到的全脂高能低棉酚优质棉仁能有效抑制肠道中杂菌的生长与繁殖,抑制消化道
疾病的发生,增强有益菌的生长与繁殖,加快肠道的蠕动,促进动物生长;提高动物
机体免疫
力,减少
疫苗、抗生素等药物的使用量,在提高动物存活率的同时保证动物肉质绿色健康。
附图说明
[0010] 图1 3为棉仁原样中29项成分检测结果;~
图4 6为本发明酵解后棉仁中29项成分检测结果;
~
图7 9为对照组酵解后棉仁中29项成分检测结果;
~
图10 11为棉仁原样中粗
纤维和游离棉酚检测结果;
~
图12 13为本发明酵解后棉仁中粗纤维和游离棉酚检测结果;
~
图14 15为对照组酵解后棉仁中粗纤维和游离棉酚检测结果。
~
具体实施方式
[0011] 下面通过
实施例对本发明方案作进一步说明:实施例1:
一种菌酶协同酵解生产全脂高能低棉酚优质棉仁的方法包括以下步骤:
1)热处理:将棉仁经过脱壳、压饼处理后,加水40%,在120℃下热处理25min,于50℃烘干处理,粉碎;
2)菌酶协调酵解:在放凉后的棉仁中接种0.6%枯草芽孢杆菌种子液和1.5%酿酒酵母种子液,并加入碱性蛋白酶50 u/g,混合均匀后放置于30℃下24h,期间翻料2次,发酵结束后置于50℃烘干处理,得到全脂高能低棉酚优质棉仁。
[0012] 枯草芽孢杆菌种子液的制备步骤为将保藏号为CCTCC NO: M 2017591的枯草芽孢杆菌接种于斜面培养基进行活化,再用接种环取斜面上菌种环接于液体培养基一中,在30℃、180 r/min摇床培养12h,得到枯草芽孢杆菌种子液。酿酒酵母种子液的制备步骤为:将保藏号为CCTCC NO: M 2017590的酿酒酵母接种于斜面培养基进行活化,再用接种环取斜面上菌种环接于液体培养基二中,在30℃、180r/min摇床培养24h,得到酿酒酵母种子液。
[0013] 液体培养基一成分及其重量份为胰蛋白胨1.0份、酵母提取物0.5份、
氯化钠1.2份、(R)-乳酸乙酯0.001份、(S)-乳酸乙酯0.008份和水100份。液体培养基二成分及其重量份为酵母膏1.1份、蛋白胨2.0份、葡萄糖1.8份、10-羟基癸酸0.06份、蚯蚓粪提取液0.6份和水100份。
[0014] 实施例2:一种菌酶协同酵解生产全脂高能低棉酚优质棉仁的方法包括以下步骤:
1)热处理:将棉仁经过脱壳、压饼处理后,加水45%,在125℃下热处理22min,于45℃烘干处理,粉碎;
2)菌酶协调酵解:在放凉后的棉仁中接种0.7%枯草芽孢杆菌种子液和1.8%酿酒酵母种子液,并加入碱性蛋白酶60 u/g,混合均匀后放置于28℃下24h,期间翻料2次,发酵结束后置于50℃烘干处理,得到全脂高能低棉酚优质棉仁。
[0015] 枯草芽孢杆菌种子液的制备步骤为将保藏号为CCTCC NO: M 2017591的枯草芽孢杆菌接种于斜面培养基进行活化,再用接种环取斜面上菌种环接于液体培养基一中,在28℃、180 r/min摇床培养12h,得到枯草芽孢杆菌种子液。酿酒酵母种子液的制备步骤为:将保藏号为CCTCC NO: M 2017590的酿酒酵母接种于斜面培养基进行活化,再用接种环取斜面上菌种环接于液体培养基二中,在28℃、180r/min摇床培养24h,得到酿酒酵母种子液。
[0016] 液体培养基一成分及其重量份为胰蛋白胨1.3份、酵母提取物0.4份、氯化钠1.0份、(R)-乳酸乙酯0.002份、(S)-乳酸乙酯0.008份和水100份。液体培养基二成分及其重量份为酵母膏1.1份、蛋白胨2.0份、葡萄糖1.5份、10-羟基癸酸0.06份、蚯蚓粪提取液0.6份和水100份。
[0017] 实施例3:取1000kg棉仁,测定其
粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、游离棉酚和氨基酸等成分的含量,将其随机均分为两份,一份作为试验组,按照以下步骤处理:
1)热处理:将棉仁经过脱壳、压饼处理后,加水43%,在130℃下热处理20min,于45℃烘干处理,粉碎;
2)菌酶协调酵解:在放凉后的棉仁中接种0.8%枯草芽孢杆菌种子液和1.5%酿酒酵母种子液,并加入碱性蛋白酶60 u/g,混合均匀后放置于28℃下24h,期间翻料2次,发酵结束后置于50℃烘干处理,得到全脂高能低棉酚优质棉仁。其中,枯草芽孢杆菌种子液的制备步骤为将保藏号为CCTCC NO: M 2017591的枯草芽孢杆菌接种于斜面培养基进行活化,再用接种环取斜面上菌种环接于液体培养基一中,在28℃、180 r/min摇床培养12h,得到枯草芽孢杆菌种子液。酿酒酵母种子液的制备步骤为:将保藏号为CCTCC NO: M 2017590的酿酒酵母接种于斜面培养基进行活化,再用接种环取斜面上菌种环接于液体培养基二中,在28℃、
180r/min摇床培养24h,得到酿酒酵母种子液。液体培养基一成分及其重量份为胰蛋白胨
1.2份、酵母提取物0.4份、氯化钠1.0份、(R)-乳酸乙酯0.001份、(S)-乳酸乙酯0.008份和水
150份。液体培养基二成分及其重量份为酵母膏1.1份、蛋白胨2.0份、葡萄糖1.5份、10-羟基癸酸0.06份、蚯蚓粪提取液0.7份和水150份。测定上述方法得到的全脂高能低棉酚优质棉仁粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、游离棉酚和氨基酸等成分的含量。
[0018] 另一份棉仁按照“刘长林. 无毒高蛋白质棉仁粉的研究[J]. 北京工业大学学报, 1996, 22(2):119-122. ”中的方法处理测定其粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、游离棉酚和氨基酸等成分的含量。测定结果如图1 15所示,本发明方法制备的全脂高能低棉酚优质棉仁中~
粗蛋白含量为61.5%,粗脂肪含量为27.5%,小肽含量为85.2 mg/g,粗纤维含量为3.6%,游离棉酚含量为24.5mg/kg;对照组制备的发酵后棉仁中粗蛋白含量为41.8%,粗脂肪含量为
27.4%,小肽含量为67.4mg/g,粗纤维含量为4.9%,游离棉酚含量为1660mg/kg,由此可见,本发明方法制备的全脂高能低棉酚优质棉仁品质远优于对照组,具有较高的经济价值。
[0019] 本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知,在此不进行赘述。
[0020] 以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明,应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例,并不用于限制本发明,凡在本发明的原则范围内所做的任何
修改、补充或类似方式替代等,均应包含在本发明的保护范围之内。