一种以神秘果果核为原料的提取物及其在制备具有降血糖作
用的药物或保健品中的应用
技术领域
背景技术
[0002] 神秘果，其拉丁学名为SynsepalumdulcificumDaniell，是典型热带常绿木，原产 地在西非、加纳、刚果一带。神秘果果核为神秘果果实的核，本发明
发明人前期 的中国
专利201510687421.0公开了神秘果果核提取物具有降血糖作用。中国专 利201510687421.0公开的神秘果果核提取物是通过将神秘果果核先用超临 界二
氧化
碳萃取，然后再用
硅胶柱层析进行富集得到。
[0003] 为了开发更多的降血糖成分，本发明尝试着将神秘果果核粉用
微生物进行
发酵，然后将经微生物发酵后的有效成分再进行研究，开发出新的具有降血糖作用的有效部位。
发明内容
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种以神秘果果核为原料的提取物的制备方法；由本发明所述的制备方法制备得到的以神秘果果核为原料的提取物具有优异的降血糖作用。
[0005] 本发明所要解决的上述技术问题，通过如下方案予以实现：
[0006] 一种以神秘果果核为原料的提取物的制备方法，其包含如下步骤：
[0007] (1)取神秘果果核、益智仁以及高良姜混合后进行
粉碎，得中药粉末；
[0008] (2)在中药粉末中加入
水、
豆粕粉以及无机盐混合后得中药发酵培养基；
[0009] (3)在中药发酵培养基中加入枯草芽孢杆菌菌粉和唾液乳杆菌菌粉，在 30～40℃下发酵培养60～80h；
[0010] (4)发酵结束后过滤，取发酵液浓缩干燥得以神秘果果核为原料的发酵产物，即所述的以神秘果果核为原料的提取物。
[0011] 所述的益智仁以及高良姜均为常规的中药材。
[0012] 优选地，步骤(1)中神秘果果核、益智仁以及高良姜的重量用量比为 2～4:1～2:1～2。
[0013] 最优选地，步骤(1)中神秘果果核、益智仁以及高良姜的重量用量比为3:1:1。
[0014] 优选地，步骤(2)中的中药粉末、水、豆粕粉以及无机盐的重量百分比为：中药粉末30％、水59.5％、豆粕粉10％、无机盐0.5％；所述的无机盐包含
硝酸钠0.2％、
磷酸二氢
钾0.2％、
硫酸镁0.1％。
[0015] 所述枯草芽孢杆菌菌粉和唾液乳杆菌菌粉的加入量分别占中药发酵培养基重量的10％和5％。
[0016] 优选地，步骤(3)中在37℃下发酵培养72h。
[0017] 优选地，步骤(4)得到的以神秘果果核为原料的发酵产物进一步通过如下方法进行有效成分的富集；
[0018] 将以神秘果果核为原料的发酵产物溶于水中，然后用乙酸乙酯进行萃取得萃取物；接着将萃取物上硅胶柱，用氯仿：甲醇组成的洗脱
溶剂进行洗脱即得所述的以神秘果果核为原料的提取物。
[0019] 萃取过程中水的用量为以神秘果果核为原料的发酵产物的用量比为10mL： 1g(即10倍量)；乙酸乙酯的萃取次数为3次，每次用量与水的用量相等。
[0020] 优选地，所述的用氯仿：甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱的具体条件为：先用体积比为95～97：5～3的氯仿：甲醇进行洗脱除杂；然后再用90～92：10～8的氯仿：甲醇进行洗脱，收集90～92：10～8的氯仿：甲醇洗脱部位浓缩干燥得以神秘果果核为原料的提取物。
[0021] 进一步优选地，所述的用氯仿：甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱的具体条件为：先用体积比为96：4的氯仿：甲醇进行洗脱除杂；然后再用91：9的氯仿：甲醇进行洗脱，收集91：9的氯仿：甲醇洗脱部位浓缩干燥得以神秘果果核为原料的提取物。
[0022] 最优选地，所述的用氯仿：甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱的具体条件为：先用3～5倍柱体积的体积比为96：4的氯仿：甲醇进行洗脱除杂；然后再用4～6 倍柱体积的91：9的氯仿：甲醇进行洗脱，收集91：9的氯仿：甲醇洗脱部位浓缩干燥得以神秘果果核为原料的提取物。
[0023] 本发明还提供一种由上述制备方法制备得到的以神秘果果核为原料的提取物。
[0024] 本发明还提供一种上述以神秘果果核为原料的提取物在制备具有降血糖作用的药物或保健品中的应用。
[0025] 有益效果：本发明首次将神秘果果核、益智仁以及高良姜粉末用枯草芽孢杆菌菌粉和唾液乳杆菌菌粉进行发酵，得到发酵产物；对于该发酵产物，发明人进行了一系列的药理研究，研究表明，该发酵产物具有降血糖作用；在该发酵产物的
基础上，为了得到具有更好降血糖作用的有效部位，发明人进一步采用多种分离手段进行研究，研究表明将上述发酵产物先经萃取，然后再在本发明所述的硅胶柱层析条件下得到的有效部位具有十分显著的降血糖作用。
具体实施方式
[0026] 以下结合具体
实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
[0027] 实施例1
[0028] (1)取重量比为3:1:1的神秘果果核、益智仁以及高良姜混合后进行粉碎，得中药粉末；
[0029] (2)在中药粉末中加入水、豆粕粉以及无机盐混合后得中药发酵培养基；中药发酵培养基各成分的重量百分比为：中药粉末30％、水59.5％、豆粕粉10％、硝酸钠0.2％、磷酸二氢钾0.2％、
硫酸镁0.1％；
[0030] (3)在中药发酵培养基中加入10％的枯草芽孢杆菌菌粉(有效活菌数≥200 亿cfu/g)和5％的唾液乳杆菌菌粉(有效活菌数≥100亿cfu/g)，在37℃下发酵培养72h；
[0031] (4)发酵结束后过滤，取发酵液浓缩干燥得以神秘果果核为原料的发酵产物。
[0032] 实施例2
[0033] (1)取重量比为3:1:1的神秘果果核、益智仁以及高良姜混合后进行粉碎，得中药粉末；
[0034] (2)在中药粉末中加入水、豆粕粉以及无机盐混合后得中药发酵培养基；中药发酵培养基各成分的重量百分比为：中药粉末30％、水59.5％、豆粕粉10％、硝酸钠0.2％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁0.1％；
[0035] (3)在中药发酵培养基中加入10％的枯草芽孢杆菌菌粉(有效活菌数≥200 亿cfu/g)和5％的唾液乳杆菌菌粉(有效活菌数≥100亿cfu/g)，在37℃下发酵培养72h；
[0036] (4)发酵结束后过滤，取发酵液浓缩干燥得以神秘果果核为原料的发酵产物；
[0037] (5)将以神秘果果核为原料的发酵产物溶于10倍量的水中，然后加入与水等量的乙酸乙酯进行萃取，重复萃取3次，合并萃取液浓缩干燥后得萃取物；接着将萃取物上硅胶柱(硅胶柱中选用200～300目的硅胶；硅胶的用量为萃取物重量的30倍)，先用4倍柱体积的体积比为96：4的氯仿：甲醇进行洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的91：9的氯仿：甲醇进行洗脱，收集91：9的氯仿：甲醇洗脱部位浓缩干燥得以神秘果果核为原料的提取物。
[0038] 对比例1
[0039] (1)取神秘果果核进行粉碎，得中药粉末；
[0040] (2)在中药粉末中加入水、豆粕粉以及无机盐混合后得中药发酵培养基；中药发酵培养基各成分的重量百分比为：中药粉末30％、水59.5％、豆粕粉10％、硝酸钠0.2％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁0.1％；
[0041] (3)在中药发酵培养基中加入10％的枯草芽孢杆菌菌粉(有效活菌数≥200 亿cfu/g)和5％的唾液乳杆菌菌粉(有效活菌数≥100亿cfu/g)，在37℃下发酵培养72h；
[0042] (4)发酵结束后过滤，取发酵液浓缩干燥得以神秘果果核为原料的发酵产物。
[0043] 对比例1与实施例1的区别在于，仅仅以神秘果果核粉末进行发酵；而实施例1则是以神秘果果核、益智仁以及高良姜的混合粉末进行发酵。
[0044] 对比例2
[0045] 对比例2与实施例2的步骤(1)～(4)相同，不同之处在于步骤(5)中的中硅胶柱的洗脱条件不同，对比例2的洗脱条件为：先用4倍柱体积的体积比为 99：1的氯仿：甲醇进行洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的95：5的氯仿：甲醇进行洗脱，收集95：5的氯仿：甲醇洗脱部位浓缩干燥得以神秘果果核为原料的提取物。
[0046] 对比例3
[0047] 对比例3与实施例2的步骤(1)～(4)相同，不同之处在于步骤(5)中的中硅胶柱的洗脱条件不同，对比例2的洗脱条件为：先用4倍柱体积的体积比为 90：10的氯仿：甲醇进行洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的85：15的氯仿：甲醇进行洗脱，收集85：15的氯仿：甲醇洗脱部位浓缩干燥得以神秘果果核为原料的提取物。
[0048] 实验例：降血糖试验
[0049] 将84只雄性SD大鼠(4周龄清洁级，体重150～180g，由广东省医学实验动物中心提供)随机分为正常对照组12只和糖尿病模型组72只，正常组给予基础
饲料，模型组给予高脂饲料(猪油18％，
蔗糖20％，蛋黄3％，基础饲料59％)。喂养4周后，禁食12h，用0.1mmol/L枸橼酸钠缓冲液(pH＝4.2)将STZ(链脲佐菌素)配成2重量％的溶液，按35mg/kg
腹腔注射，一周后测大鼠2h
葡萄糖耐受量 (禁食12h，灌胃给予2g/kg的葡萄糖，测灌胃后2h的血糖)，血糖值大于 11.1mmol/L的大鼠确定为DM大鼠。稳定一周后将成模的DM大鼠72只随机分为6 组(模型组和实验组1～5)。模型组不用任何药物，实验组用药剂量为5mg/kg，每组各12只。每天灌胃
给药1次，连续6周。每周末称量体重1次，根据体重调整给药剂量。于实验结束前1天，大鼠禁食12h，取血测空腹血糖(FBG)值。试验结果见表1。
[0050] 各实验组的用药情况如下：实验组1(用实施例1制备得到的发酵产物)、实验组2(用实施例2制备得到的提取物)、实验组3(用对比例1制备得到的发酵产物)、实验组4(用对比例2制备得到的提取物)、实验组5(用对比例3制备得到的提取物)。
[0051] 表1.降血糖试验结果
[0052]
[0053]
[0054] 由表1中的空腹血糖(FBG)值可以看出，实施例1制备得到的发酵产物的空腹血糖值较模型组相比明显降低，实施例2制备得到的以神秘果果核为原料的提取物其空腹血糖值进一步大幅降低。这说明本发明将神秘果果核、益智仁以及高良姜粉末用枯草芽孢杆菌菌粉和唾液乳杆菌菌粉进行发酵得到的发酵产物具有一定的降血糖作用。进一步地，将所述的发酵产物在本发明所的硅胶柱层析条件下得到的提取物其降血糖效果更加明显。
[0055] 由表1中的空腹血糖值可以看出，对比例1制备得到的发酵产物其空腹血糖值高于实施例1制备得到的发酵产物；这说明将神秘果果核、益智仁以及高良姜粉末混合后发酵得到的发酵产物其降血糖能
力要高于单独用神秘果果核粉发酵得到的发酵产物。
[0056] 由表1中的空腹血糖值可以看出，对比例2和3制备得到的提取物其空腹血糖值要远远高于实施例1制备得到的发酵产物；这说明在发酵产物的基础上，如何才能富集到具有优异降血糖效果的有效部位，这和硅胶柱层析的洗脱条件密切相关，发酵产物在不同的洗脱条件下得到的有效部位其降血糖作用差别是巨大的，发酵产物只有在本发明所述的硅胶柱洗脱条件下得到的提取物，才具有显著的降血糖作用。
