发明的领域

本发明有涉及皂角苷配基、相关的化合物及其衍生物的治疗方法和用途。

皂角苷配基，相关的化合物及其衍生物的用途是在治疗非认知的神经变性，非 认知的神经肌肉变性、运动感觉神经变性，或受体功能障碍或丢失方面。在另外方 面，本发明涉及在这样的治疗中使用的组合物。

发明的背景

认知功能障碍是痴呆状况和综合征的特征，如阿耳茨海默疾病(AD)，阿耳茨海 默型老年性疾呆，Lewy body疾呆和血管性疾呆。轻度认知功能障碍也是一些非痴呆 状况和综合症的特征，如轻微的认知损伤(MCI)，年龄相关的记忆损伤(AAMI)，孤 独癖和神经损伤。

非认知的神经变性(即，不存在认知功能障碍的神经变性)，非认知的神经肌肉变 性(即，不存在认知功能障碍的神经肌肉变性)和运动感觉神经变性是以下状况和综合 症的特征：诸如帕金森氏病，肌肉营养不良包括面肩肱的肌肉营养不良(FSH)，裘馨 氏(Duchenne)肌肉营养不良，贝克氏(Beck)肌肉营养不良和布鲁士氏(Bruce)肌肉营养 不良，富克司(Fuchs)营养不良，肌强直病的营养不良，角膜营养不良，反身交感神 经性营养不良综合症(RSDSA)，神经血管营养不良，重症肌无力，兰伯特伊顿(Lamlert eaton)病，亨丁顿(Huntington)氏病，肌萎缩性侧索硬化(ALS)和多发性硬化。

受体功能障碍或丢失——特别是烟酸和/或蝇蕈碱乙酰胆碱受体和/或多巴胺受体 和/或肾上腺受体的功能障碍或丢失——是某些或所有的以上状况和综合症的特征。 不存在认知的神经和神经肌肉损伤的受体功能障碍或丧失也是以下状况和综合症的 特征：如姿势性的低血压，慢性疲劳综合症，哮喘，易感心脏衰竭和斑状变性。

以上状况和综合症在整个的社会中是重大的和日益增长的问题，因为生命期望 值的增加和对外来疾病的控制，人口统计的分布图正在大大延伸到更多的老年人口。 迫切需要能够治疗、或有助于控制或预防这些的病症的药物。

DE-A-4303214(其公开的内容结合在此引为参考)提出皂角苷和皂角苷配基在治 疗病毒疾病方面的用途，但是没有资料使在该领域的熟练人员可以选择具体的化合 物类型用来对付具体病毒疾病。

WO-A-99/16786(其公开的内容结合在此引为参考)提出某些皂角苷和皂角苷配基 在治疗疾呆症方面的用途。

WO-A-99/48482，WO-A-99/48507，WO-A-01/23406，WO-A-01,23407，WO- A-01/23408(其公开的内容结合在此引为参考)涉及某些皂角苷、皂角苷配基及衍生物 在治疗认知功能障碍和同类状况方面的用途。

中国专利申请书NO.CN-A-1096031(其公开的内容结合在此引为参考)提出螺甾 烷皂角苷配基，萨洒皂角苷配基在β-肾上腺素能的和M-胆碱能的受体的双向调节作 用中的生物活性。但未指出具体的药物活性。可是，在“Synthesis and applications of Isotopically Labelled Compounds”，1998，第315-320页Yi等描述了萨洒皂角苷配基 在治疗老年性痴呆症方面的用途。

存在着许多所谓的“谱系”病症，其中自身出现各种各样的症状组合，各式各 样的相对严重性。每一个症状的严重性和症状的特殊组合将随个体到个体之间和依 照病症进展的阶段而改变。例如，在帕金森氏病、重症肌无力、兰伯特伊顿病、姿 势性的低血压和慢性疲劳综合症情况下，认知功能障碍不是原发的症状，虽然它可 以表现为许多可能的继发症状之一。而且，这些状况不是病毒病或疾呆症。许多这 些病症是所谓的“谱系”病症，因此，在很多情况下，对认知功能障碍(例如痴呆症) 的治疗是不必要的。

本发明是建立在我们发现的基础上的，就是某些皂角苷配基及其衍生物，包括 皂角苷，具有对非认知的神经变性，非认知的神经肌肉变性，运动感觉的神经变性 以及对不存在认知、神经和神经肌肉损伤的受体功能障碍的令人惊奇的改善疾病的 活性，因此可积极地阻止和逆转状况。这一发现使得认知功能障碍不是原发症状的 某些非病毒、谱系或非谱系病症的治疗有了改进的可能。

发明的简要说明

按照本发明的一方面，提供在人类和非人动物患有或对其敏感的(i)非认知的神 经变性，(ii)非认知的神经肌肉变性，(iii)运动感觉的神经变性，(iv)不存在认知、神 经和神经肌肉损伤的受体功能障碍的治疗或预防上，或在组合物(例如，药物，食品， 食品添加剂和饮料)的制备中，活性剂(在此处所规定的)的用途。

术语“活性剂”指的是有以下通式I、II、III的化合物，皂角苷配基衍生物，如 以下定义的通过参照至少带有一个限定的X基取代基，如以下限定的这样化合物的 糖取代的衍生物，所有它们的立体异构体和外消旋混合物，所有它们药学上可接受 的前体药和盐类，和所有的混合物和它们的组合。

通式I：

在通式(I)中：

-R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10，R13，R18，R19，R21，R22，R23，R24， R26，R27，R28，R29，R30，R31，R32彼此独立，是H，OH，＝O，卤原子，(Me-S-)，(Me-SO-)， (Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基或无，或者是OR，其中R＝烷基或酰基；

-R9，R11，R12，R14， R15，R16，R17，R25，R33可以是H，OH，卤原子，(Me-S-)， (Me-SO-)，(Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH2-，烷基或无基团，或者是OR，其中 R＝烷基或酰基；

表示任选的双键，

其中除了以上的基团外

-R33或R14＝烷基；

通式II：

在通式(II)中：

R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10，R13，R18，R19，R20，R21，R22，R23，R24，R26， R27，R28，R29，R30，R31，R32，R34彼此独立，是H，OH，＝O，卤原子，(Me-S-)，(Me-SO-)， (Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基，OR，其中R＝烷基或酰基，或无；

-R9，R11，R12，R14，R15，R16，R17，R25，R33，R35可以是H，OH，卤原子，(Me-S-)， (Me-SO-)，(Me-SO2)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基，OR，其中R＝烷基或酰基， 或无；

表示任选的双键，

其中除了以上的基团

-R33或R14＝烷基；

通式(III)：

在通式(III)中：

-R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10，R13，R14，R18，R20，R21，R22，R23， R24，R26，R27，R28，R29，R30，R31，R32，R33，R34，R35，R36，R37彼此独立是H，OH， ＝O，卤原子，(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基，OR其中R＝烷基或酰基，或无；

-R9，R11，R12，R15，R16，R17，R25各可以是H，OH，卤原子，(Me-S-)，(Me-SO-)， (Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基，OR其中R＝烷基或酰基，或无；

表示任选的双键，

其中除了以上的基团外，

-R33或R14＝烷基，和

R25的立体化学是β取向的；

皂角苷配基衍生物，具体是指但并非仅指螺甾烷皂角配基衍生物，至少带有一 个X基取代基，其中X选自：

-卤原子，

-(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)，

-N3-，NH2-，MeSO2NH-，和

-烷基；和

上述任一化合物的衍生物形式，其中在3-位的碳原子(即与在R3连接的碳，或 以上定义的没有结构式的皂角苷配基衍生物中相应的位置)或在式II和III的情况下， 3-位碳原子，26-位(即与R34连接的碳)或在3-位和26-位上的各个碳原子，带有O-糖 部分，其中糖基是单，双，或三糖。

皂角苷配基活性剂的带糖衍生物一般在本领域被称为是皂角苷。该术语在此处 所用的“碳水化合物”特别包括这样的糖基。

在本发明所用的活性剂优选的是非雌激素甾族的皂角苷配基，皂角苷，和在以 上定义的范围内的其衍生物，包括所有生理上认可的前体药和其盐类。

活性剂可以是天然存在的或非天然存在的。非天然存在的活性剂可以适当地通 过修饰天然存在化合物的侧基和/或侧原子，如以下说明的和本领域知晓的。

本发明也提供为治疗人类和非人动物的相应方法，和使用在上述治疗方法中包 含该活性剂的组合物。

本发明的活性剂如有要求的话可以，与一种或更多种的另外的活性剂共同给药， 例如，一种或更多种的活性剂选自，但不限于，胆碱酯酶抑制剂，多巴胺激动剂(如 L-多巴)，COMT抑制剂，MAO-B抑制剂，抗胆碱能剂，乙酰胆碱激动剂，5-羟色胺 激动剂，AMPA受体激动剂，GABA受体激动剂，NMDA受体激动剂，β-肾上腺素 受体激动剂，地高辛，多巴酚丁胺，抗炎剂，神经营养因子，斯特订，腺苷A2a受 体拮抗剂，醛糖还原酶抑制剂，免疫调节剂，大麻类激动剂，干扰素B或三环抗抑 郁剂。

活性剂可以在治疗上或预防上应用于患有或对其状况和疾病敏感的人类和非人 动物，其状况和疾病是以非认知的神经变性，非认知的神经肌肉变性，运动感觉神 经变性，或受体功能障碍或丧失为特征的。这样的状况和疾病的例子提供如下。

因此本发明还提供在人类和非人动物患有或对其敏感的一种或更多的上述状况 和疾病的治疗或预防上，或在组合物(例如，药物组合物，食品，食品添加剂和饮料) 的制备中，活性剂(如在此定义的)的用途。

本发明的详细说明

活性剂的实施例

特别提到活性剂的以下分类：

1.上面通式I的化合物，式中：

-R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10，R13，R18，R19，R20，R21，R22，R23， R24，R26，R27，R28，R29，R30，R31，R32彼此独立，是H，OH，＝O，卤原子，(Me-S-)， (Me-SO-)，(Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基或无，或OR，其中R＝烷基或 酰基；

-R9，R11，R12，R14，R15，R16，R17，R25，R33各可以是H，OH，卤原子，(Me-S-)， (Me-SO-)，(Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基或无或OR其中R＝烷基或酰基；

表示任选的双键，

其中除了以上的基团外

-R33或R14＝烷基，

和R25的立体化学是β取向的；

2.上面通式I的化合物，式中：

-R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10，R13，R18，R19，R20，R21，R22，R23， R24，R26，R27，R28，R29，R30，R31，R32，彼此独立是H，OH，＝O，卤原子，(Me-S-)， (Me-SO-)，(Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基或无或OR其中R＝烷基或酰基；

-R9，R12，R15，R16，R17＝H，

-R11，R14，R25，R33各可以是H，OH，卤原子，(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)， N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基，或无或OR其中R＝烷基或酰基；

表示任选的双键

其中除了以上的基团外

-R33或R14＝烷基，

和R25的立体化学是β取向的；

3.上面通式I的化合物，式中：

-R1＝R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝R10＝R11＝R9＝R12＝R13＝R15＝R16＝R17＝R18＝R19＝R20＝R21＝ R22＝R23＝R24＝R25＝R26＝R27＝R28＝R29＝R30＝R31＝R32＝R33＝H，

或R33或R14＝CH3，

表示单键，

-在C25上的甲基可以是R或S构型中的任一个

-R25的立体化学是β-取向的，和

其中除了以上的基团外

R3或R23中至少一个是X基，可能保留的取代基是H，OH，＝O，和OR，其中 R＝烷基或酰基的取代基或无，

和X选自：

-卤原子，

-(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)，和

-N3-，NH2-，MeSO2NH-

-烷基；

4.上面通式I的化合物，式中：

-R1＝R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝R10＝R11＝R9＝R12＝R13＝R15＝R16＝R17＝R18＝R19＝R20＝R21＝ R22＝R23＝R24＝R25＝R26＝R27＝R28＝R29＝R30＝R31＝R32＝H，

-R14＝R33＝CH3，

表示单键，

-R25的立体化学是β取向的，和

其中除了以上的基团外

R3或R23中至少一个是X基，可保留的取代基是H，OH，＝O，和OR其中R＝ 烷基或酰基的取代基或无，

和X选自：

-卤原子，

-(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)和

-N3-，NH2-，MeSO2NH-

-烷基；

5.上面通式II的化合物，式中：

-R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10，R13，R18，R19，R20，R21，R22，R23， R24，R26，R27，R28，R29，R30，R31，R32，R34彼此独立，是H，OH，＝O，卤原子，(Me-S-)， (Me-SO-)，(Me-SO2-)，N3-， NH2-，MeSO2NH-，烷基，OR，其中R＝烷基或酰基， 或无；

-R9，R11，R12，R14，R15，R16，R17，R25，R33，R35各可以是H，OH，卤原子， (Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基，OR，其中R＝烷基 或酰基，或无；

表示任选的双键，

其中除了以上的基团

-R33或R14＝烷基，

和R25的立体化学是β取向的；

6.上面通式II的化合物及其碳水化合物衍生物，式中：

-R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10，R13，R18，R19，R20，R21，R22，R23， R24，R26，R27，R28，R29，R30，R31，R32彼此独立，是H，OH，＝O，卤原子，(Me-S-)， (Me-SO-)，(Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基，OR，其中R＝烷基或酰基， 或无；

-R9，R12，R15，R16，R17＝H，

-R34＝H，OH，＝O，和OR，其中R＝烷基，或酰基或者碳水化合物，

-R11，R14，R25，R33，R35各可以是H，OH，卤原子，(Me-S-)，(Me-SO-)， (Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基，OR，其中R＝烷基或酰基，或者无；

表示任选的双键，

其中除了以上的基团外

-R33或R14＝烷基

和R25的立体化学是β-取向的；

7.上面通式II的化合物和其碳水化合物衍生物，式中：

-R1＝R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝R10＝R11＝R9＝R12＝R13＝R15＝R16＝R17＝R18＝R19＝R20＝R21＝ R22＝R23＝R24＝R25＝R26＝R27＝R28＝R30＝R31＝R32＝R33＝H，

-R14＝CH3，

-R34＝OH或OR，其中R＝烷基，酰基或碳水化合物，和

R35＝H或是无

表示任选的双键，和

-在C25上的甲基可以是R或S构型中的任一个，

R25的立体化学是β取向的，

其中除了以上的基团外，

R3或R23中至少一个是X基，可能保留的取代基是H，OH，＝O，和OR，其中 R＝烷基或酰基或无，

X选自：

-卤原子，

-(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)，和

-N3-，NH2-，MeSO2NH-，

-烷基；

8.上面通式II的化合物及其碳水化合物衍生物，式中：

-R1＝R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝R10＝R11＝R9＝R12＝R13＝R15＝R16＝R17＝R18＝R19＝R20＝R21＝ R22＝R23＝R24＝R25＝R26＝R27＝R28＝R30＝R31＝R32＝H，

-R14＝R33＝CH3，

-R34＝-OH或OR，其中R＝烷基，酰基或碳水化合物，

R35＝H或是无

表示任选的双键，和

R25的立体化学是β取向的，

其中除了以上的基团外

R3或R23中至少一个是X基，可能保留的取代基是H，OH，＝O，和OR，其中 R＝烷基或酰基或无，

X选自：

-卤原子，

-(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)，和

-N3-，NH2-，Me-SO2NH-，

-烷基；

9.上面通式III的化合物，式中：

-R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10，R13，R14，R18，R19，R20，R21，R22， R23，R24，R26，R27，R28，R29，R30，R31，R32，R34，R35，R36，R37彼此独立，是H， OH，＝O，卤原子，(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基， OR，其中R＝烷基或酰基，或无；

-R9，R11，R12，R15，R16，R17，R25各可以是H，OH，卤原子，(Me-S-)，(Me-SO-)， (Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基，OR，其中R＝烷基或酰基，或无；

表示任选的双键，

其中除了以上的基团外

-R33或R14＝烷基，和

R25的立体化学是β取向的；

10.上面通式III的化合物，式中：

-R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10，R13，R14，R18，R19，R20，R21，R22， R23，R24，R26，R27，R28，R29，R30，R31，R32，R33，R35，R36，R37彼此独立，是H， OH，＝O，卤原子，(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-，烷基， OR，其中R＝烷基或酰基，或无；

-R9，R12，R15，R16，R17＝H，

-R34＝H，OH，＝O，卤原子，(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)，N3-，NH2-，MeSO2NH-， 烷基，OR其中R＝烷基或酰基，或无；

-R11，R25各可以是H，OH，卤原子，(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)，N3-，NH2-， MeSO2NH-，烷基，OR，其中R＝烷基或酰基，或无；

表示任选的双键，

其中除了以上的基因外

或R33或R14＝烷基，和

R25的立体化学是β取向的；

11.上面通式III的化合物和其碳水化合物衍生物，式中：

-R1＝R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝R10＝R11＝R9＝R12＝R15＝R16＝R17＝R18＝R19＝R20＝R21＝R22＝ R23＝R24＝R25＝R26＝R27＝R28＝R29＝R30＝R31＝R32＝R33＝H，

-R14＝CH3，

-R34＝-OH或-OR，其中R＝烷基，酰基或碳水化合物，

R35＝H或是无，

R37＝H，-OH或＝O

R36＝H或-OH

表示单键，

-在C25上的甲基可以是R或S构型中的任何一个，

R25的立体化学是β取向的，

其中除了以上的基团外

R3或R23中至少一个是X基，可能保留的取代基是H，OH，＝O，和OR，其中 R＝烷基或酰基或无，

X选自：

-卤原子，

-(Me-S-)，(Me-SO-)，(MeSO2)，和

-N3-，NH2-，MeSO2NH-

-烷基；

12.上面通式III的化合物和其碳水化合物衍生物，式中：

-R1＝R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝R10＝R11＝R9＝R12＝R13＝R15＝R16＝R17＝R18＝R19＝R20＝R21＝ R22＝R23＝R24＝R25＝R26＝R27＝R28＝R29＝R30＝R31＝R32＝R19＝R20＝H，

-R14＝R33＝CH3，

-R34＝-OH或-OR，其中R＝烷基，酰基或碳水化合物，

R35＝H或是无，

R37＝H，-OH或＝O，

R36＝H或-OH，

表示单键，和

-在C25上的甲基可以是R或S构型中的任一个，

R25的立体化学是β取向的；

其中除了以上的基团外

R3或R23中至少一个是X基，可能保留的以代基是H，OH，＝O，和OR，其中 R＝烷基或酰基或无，

X选自：

-卤原子，

-(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)，和

-N3-，NH2-，MeSO2NH-

-烷基；

13.取代的皂角苷配基，具体是但并非唯一是甾族的螺甾烷皂角苷配基，其中皂 角苷配基的至少一个OH-基被X基取代，X基选自：

-卤原子

-(Me-S-)，(Me-SO-)，(Me-SO2-)，和

-N3-，NH2-，MeSO2NH-

-烷基；

14.以上限定的皂角苷配基，具体是但并非唯一是甾族的螺甾烷皂角苷配基， 其中，X定义中的卤原子是氟原子；

15.取代的皂角苷配基，选自：

(3β-氟-5β，20α，22α，25R-螺甾烷)，(3，3-二氟-5β，20α，22α，25R-螺甾烷)，(3α-甲基 磺酰基氨基-5β，20α，22α，25R-螺甾烷)，(3α-叠氮基-5β，20α，22α，25R-螺甾烷)，(3α-氨 基-5β，20α，22α，25R-螺甾烷)，和它们的立体异构体和外消旋混合物，它们药学上可接 受的前药和盐类。

16.取代的皂角苷配基，其中，然后被如上面定义的至少一个X基取代的母体 皂角苷配基是选自：萨洒皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基，葜配基，表葜配基，和 anzurogenin-D；

17.通式Ia的化合物：

式中R基团选自氢；烷基羰基；烷氧基羰基；烷基氨基甲酰基；或芳基羰基；或磺 基(HO3S)；膦酰基((HO)2P(O)-)；或单-，双-或三-糖；其中任何烷基可任选地被芳基， 氨基，单-或双-烷基氨基，羧酸残基(-COOH)，或它们的任何组合取代；

18.如1至17项所定义的上述化合物的衍生物形式，其中3-位碳原子，或在结 构式II和III的情况下，3-位碳原子，26-位碳原子或在3-位和26-位的每一个碳原子 带有O-糖部分，其中糖基是单-，双-或三-糖，例如，有5或6碳原子的单醛糖或酮 糖，优选地以环化的呋喃糖或吡喃糖形式，作为α或β端基异构体和有D或L光学的 异构现象，或者任何它们的二或三寡糖组合；糖残基的酰化形式也包括在术语“糖” 之内；合适糖的例子包括葡萄糖，甘露糖，果糖，半乳糖，麦芽糖，纤维二糖，蔗 糖，鼠李糖，木糖，阿拉伯糖，岩藻糖，异鼠李糖，芹菜糖，乳糖，半乳糖-葡萄糖， 葡萄糖-阿拉伯糖，岩藻糖-葡萄糖，鼠李糖-葡萄糖，葡萄糖-葡萄糖-葡萄糖，葡萄糖 -鼠李糖，甘露糖-葡萄糖，葡萄糖-(鼠李糖)-葡萄糖，葡萄糖-(鼠李糖)-鼠李糖，葡萄 糖-(葡萄糖)-葡萄糖，半乳糖-(鼠李糖)-半乳糖和它们的酰化(如乙酰化的)衍生物。

在以上化合物定义中：

当存在烷基的任选的氨基，单烷基-氨基和二烷基-氨基取代基时，优选地是在烷 基的α位上的单取代基。

当存在烷基的任选的-COOH取代基时，它可以是在烷基的未端或任何其他部 位。

“烷基”意指脂肪族烃基，它可以是直链或支链，链长约1至20个碳原子。优 选的烷基有1至约12个链碳原子。支键意指一个或更多的低级烷基如甲基，乙基或 丙基连接到烷基直链上。“低级烷基”意指链长约1至4个碳原子可以是直链或支链。 实施例烷基包括甲基，乙基，正-丙基，异-丙基，正-丁基，叔-丁基，仲-丁基，正- 戊基，3-戊基。

“芳基”意指任何包括芳环或稠环系统的基团，优选地包含最多12个碳原子。 实施例芳基是苯基。芳基可以任选地是单或多取代的，例如取代基独立选自卤素(如 氯或溴)，烷基，环烷基，羟基，烷氧基，氨基，硝基，酰氨基，羧基和烷氧基羰基。

“羧酸残基”意指-COOH基团。

“酰基”意指H-CO-或烷基-CO-基团，其中烷基定义如上。优选的酰基包含低 级烷基。酰基的例子包括甲酰基，乙酰基，丙酰基(propanoyl)，2-甲基丙酰基，丁酰 基和棕榈酰基；

“任选取代的”意指所述的基团可以被一个或多个取代基取代，它们可以是相 同的或不同的，优选的一个或多个取代基各自相对于被取代的母体基团是小尺寸的(如 小于最大的分子尺寸的约20％)；合适的取代基包括卤素(如氯或溴)，烷基，环烷基， 烷氧基，氨基，酰氨基，芳基，芳酰氨基，羧基，烷氧基羰基，芳烷氧基羰基，杂 芳烷氧基羰基，和任选取代的氨甲酰基，优选地服从上述提出的尺寸限制；

“药学上可接受的”意指在正确的医学和兽医学判断范围内，它适合用于与人 类和较低等动物细胞接触没有过分的毒性，刺激，变态反应和其他类似反应，和有 相称的合理利益/风险比率。“药学上可接受的前药”意指那些化合物的前药在正确的 医学和兽医学判断范围内，适合用于与人类和较低动物的组织接触没有过分的毒性， 刺激，变态反应，和其他类似反应，和有相称的合理利益/风险比率，和对预计的用 途有效，以及化合物可能的两性离子形式。术语“前药”意指化合物能迅速地在体 内转化产生以上结构式的母体化合物，例如通过血液中的水解作用。功能团可以通 过代谢裂解迅速转化，在体内形成带有羧基一类反应基团。由于化合物的可代谢裂 解基团很容易在体内裂解，因此，带有这样基团的化合物作为前药。以下提供了前 药的详尽的讨论：“前药的设计”，H.Bundgarrd，ed，Elsevier，1985；“药物设计和发展 教科书”，Krogsgaard-Larsen and H，Burnd gaard，ed.，Chapter 5；“前药的设计和应用” P113-191；“高等药物传送综述”，H.Bundgard，8，P.1-38，1992；Journal of Pharmaceutical Sciencls 77，P.285，1988；Chem，Pharm.Bull N.Nalzeya et al，32，P.692，1984；“前药 作为新的传送系统”，T.Higuch；和V.Stella，Vol 14，AC.S Sympsium Series，和“在 药物设计中的生物可逆载体”，Edward B.Boche，ed.，American Pharmacental Association and Pergamon 1987，在此作为参考引入。

“药学上可接受的盐”意指本发明化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐， 和碱加成盐。这些盐类能够在化合物最后的分离和纯化期间就地制备。特别是，酸 加成盐能够通过纯化的化合物以其游离碱形式分别与适当的有机或无机酸反应并分 离出这样生成的盐。例如，参见S.M.Berge，et al.，“药物盐类”，J.Pharm，Sci.，66： P.1-19(1977)在此处作为参照引入。碱加成盐也能够通过纯化的化合物以其酸形式分 别与适当的有机或无机碱反应并分离出这样生成的盐。碱加成盐包括药学上可接受 的金属和胺盐。合适的酸加成盐的例子是与酸生成的盐，酸选自盐酸，硫酸，磷酸 和硝酸。合适的碱加成盐的例子是与碱生成的盐，碱选自氢氧化钠，氢氧化钾和氢 氧化铵。活性剂特别优选的类别是通式Ia的化合物。在一些结构式Ia的化合物中， C25甲基是S构型的；本发明的这些化合物是萨洒皂角苷配基和表萨洒皂角苷配基 或它的衍生物。在另一些结构式Ia的化合物中，C25甲基是R构型的；本发明的这 些化合物是葜配基和表葜配基或它的衍生物。

在以上结构式Ia中，OR例如可以选自以下基团(除非由附带条件排除外)：羟基， Cathylate(乙氧基羰氧基)，醋酸酯，琥珀酸酯，肉桂酸酯，阿魏酸酯，丙酸酯，丁酸 酯，戊酸酯，异戊酸酯，己酸酯，异己酸酯，二乙基醋酸酯，辛酸酯，癸酸酯，月 桂酸酯，肉豆蔻酸酯，棕榈酸酯，硬脂酸酯，苯甲酸酯，苯基醋酸酯，苯基丙酸酯， 肉桂酸酯，对-硝基苯甲酸基，3，5-二硝基苯甲酸基，对-氯苯甲酸基，2，4-二氯苯甲酸 基，对-溴苯甲酸基，间-溴苯甲酸基，对-甲氧基苯甲酸基，邻苯二甲酰，甘氨酸酯， 丙氨酸酯，缬氨酸酯，苯丙氨酸酯，异亮氨酸，甲硫氨酸酯，精氨酸酯，天冬酰胺 酸酯，天冬氨酸酯，半胱氨酸酯，谷氨酸酯，组氨酸酯，赖氨酸酯，脯氨酸酯，丝 氨酸酯，苏氨酸酯，色氨酸酯，酪氨酸酯，延胡索酸酯或马来酸酯。

通式Ia的化合物及其药学上可接受的盐类中特别优选的是以下的化合物：

萨洒皂角苷配基，

萨洒皂角苷配基Cathylate，

萨洒皂角苷配基醋酸酯，

萨洒皂角苷配基琥珀酸酯和其药学上可接受的盐，

萨洒皂角苷配基甘氨酸酯和其药学上可接受的盐，

萨洒皂角苷配基丙氨酸酯和其药学上可接受的盐，

萨洒皂角苷配基缬氨酸酯和其药学上可接受的盐，

萨洒皂角苷配基苯丙氨酸酯和其药学上可接受的盐，

萨洒皂角苷配基异亮氨酸酯和其药学上可接受的盐，

萨洒皂角苷配基甲硫酸酯和其药学上可接受的盐，

表萨洒皂角苷配基，

表萨洒皂角苷配基Cathylate，

表萨洒皂角苷配基醋酸酯，

表萨洒皂角苷配基琥珀酸酯和其药学上可接受的盐，

表萨洒皂角苷配基甘氨酸酯和其药学上可接受的盐，

表萨洒皂角苷配基丙氨酸酯和其药学上可接受的盐，

表萨洒皂角苷配基缬氨酸酯和其药学上可接受的盐，

表萨洒皂角苷配基苯丙氨酸酯和其药学上可接受的盐，

表萨洒皂角苷配基异亮氨酸酯和其药学上可接受的盐，

表萨洒皂角苷配基甲硫氨酸酯和其药学上可接受的盐，

菝葜配基，

菝葜配基Cathylate，

菝葜配基醋酸酯，

菝葜配基琥珀酸酯和其药学上可接受的盐，

菝葜配基甘氨酸酯和其药学上可接受的盐，

菝葜配基丙氨酸酯和其药学上可接受的盐，

菝葜配基缬氨酸酯和其药学上可接受的盐，

菝葜配基苯丙氨酸酯和其药学上可接受的盐，

菝葜配基异亮氨酸酯和其药学上可接受的盐，

菝葜配基甲硫氨酸酯和其药学上可接受的盐，

表菝葜配基，

表菝葜配基Cathylate，

表菝葜配基醋酸酯，

表菝葜配基琥珀酸酯和其药学上可接受的盐，

表菝葜配基甘氨酸酯和其药学上可接受的盐，

表菝葜配基丙氨酸酯和其药学上可接受的盐，

表菝葜配基缬氨酸酯和其药学上可接受的盐，

表菝葜配基苯丙氨酸酯和其药学上可接受的盐，

表菝葜配基异亮氨酸酯和其药学上可接受的盐，

表菝葜配基甲硫氨酸酯和其药学上可接受的盐，

通式Ia的皂角苷(R＝糖)化合物中特别优选的是以下的化合物：萨洒皂角苷配基， 表萨洒皂角苷配基，菝葜配基和表菝葜配基，其中在所有情况下3-位碳原子带有O- 糖部分此处糖基选自葡萄糖、甘露糖、果糖、半乳糖、麦芽糖、纤维二糖、蔗糖， 鼠李糖，木糖，阿拉伯糖，岩藻糖，异鼠李糖，芹菜糖，乳糖，半乳糖-葡萄糖，葡 萄糖-阿拉伯糖，岩藻糖-葡萄糖，鼠李糖-葡萄糖，葡萄糖-葡萄糖-葡萄糖，葡萄糖- 鼠李糖，甘露糖-葡萄糖，葡萄糖-(鼠李糖)-葡萄糖，葡萄糖(鼠李糖)-鼠李糖，葡萄糖 -(葡萄糖)-葡萄糖，半乳糖-(鼠李糖)-半乳糖和它们酰化的(如乙酰化的)衍生物。

合适的活性剂另外的例子包括16，22-环氧粪甾烷-3β-醇，菝葜精酮，粪甾醇和其 药学上可接受的前药和盐类。

组合物和用途

本发明这样实现了并提供了治疗或预防有此需要的人类或非人动物的非认知神 经变性，非认知神经肌肉变性，运动感觉神经变性或不存在认知、神经或神经与肌 肉损伤时受体功能障碍或丧失(特别是但不排除有关于上述提到的疾病状态)的方法， 其中包括对上述的人类或非人动物给予有效剂量的活性剂(如此处所规定的)或其药学 上可接受的盐。

活性剂可以以包含活性剂和任何适当的附加成分的组合物的形式给予。例如组 合物可以是药物组合物(药物)，食品，食品添加剂或饮料。这样的组合物可以包括规 定的化合物，和/或它们药学上可接受的盐类。

按照本发明的另一方面，将对人类或非人动物提供具有对抗，和用于治疗，非 认知神经变性，非认知神经肌肉变性，运动感觉神经变性或不存在认知、神经或神 经肌肉损伤的受体功能障碍或丧失的活性的组合物，其中包括活性剂的有效剂量的 化合物。

在本发明的范围内术语“药物组合物”意指包括活性剂和附加的药学上可接受 的载体，稀释剂，辅助剂，赋形剂，或载色剂，如防腐剂，填充剂，崩解剂，湿润 剂，乳化剂，悬浮剂，调味剂，香味剂，抗菌剂，抗真菌剂，润滑剂和分散剂的组 合物，取决于给药方式的性质和剂量形式。

此处所用的术语“食品”，“食品添加剂”和“饮料”有这些术语的正常意义， 并不限于药物制剂。

活性剂的剂量根据所要治疗或预防的症状的严重性在广范围内变化。选择合适 的剂量是在本技术一般熟练人员的能力之内，没有过分的负担。活性剂的剂量，例 如可以大于约0.1mg/kg，优选每天一次给药，优选地例如大于约0.3mg/kg。更典型 的是剂量在约1和25mg/kg之间，如优选每天一次给药在约1和10mg/kg之间。对 于人类使用，剂量合适地可在每天约70和700mg/kg之间。

“药学上可接受的剂型”意指本发明的化合物或组合物的剂型，包括，例如， 片剂，糖衣锭(dragees)，粉剂，酏剂，糖浆，液体制剂，包括悬浮剂，喷雾剂，吸入 剂，片剂，锭剂，乳剂，溶剂，颗粒剂，胶囊和栓剂，以及为注射用的液体制剂， 包括脂质体制剂。工艺和配方一般可在Remington，Pharmacential Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，PA，最新版上找到。

一般说来，此处所说的存在一组特定的化合物其范围包括存在该化合物的2个 或多个这种化合物的混合物。

本发明为患有或易感以下疾病的人或非人动物提供治疗方法：(i)非认知的神经 变性，(ii)非认知的神经肌肉变性，(iii)运动感觉神经变性，(iv)不存在认知、神经和 神经肌肉损伤的受体功能障碍或丧失，帕金森氏病，脑尖后的帕金森氏症候群，抑 郁症，精神分裂症，肌肉营养不良包括筋膜肩胛与肱骨的肌肉营养不良(FSH)，裘馨 氏肌肉营养不良，贝克氏肌肉营养不良和布鲁士肌肉营养不良，富克氏营养不良， 肌强直病的营养不良，角膜营养不良，反射交感神经性营养不良综合征(RSDSA)， 神经与血管营养不良，重症肌无力，兰伯特伊顿氏病，亨丁顿氏病，运动神经元疾 病包括肌萎缩性侧索硬化(ALS)，多发性硬化，位置性低血压，外伤的神经变性，如 以下的发作或以下的意外事故(例如，外伤性的头部损伤或脊髓损伤)，巴顿氏(Batten’s) 病，Cockayne氏综合征，Dwon氏综合症，皮质基底神经节变性，多发性系统萎缩， 脑萎缩，下橄榄体桥脑小脑萎缩，牙齿椎……(dentatorubral)萎缩，Pallidoluysian萎 缩，脊髓与延髓萎缩，视神经萎缩，硬化的全脑炎(SSPE)，注意缺陷病症，病毒脑 炎后，脊髓灰质炎后综合征，华氏综合征，Joubert氏综合征，Guillain-Barre氏综合 征，脑回发育不全，Moyamoya氏病，神经元游走病症，孤独癖综合征，多谷氨酰胺 病，Niemann-Pick氏病，进行性的多病灶白脑病，假肿瘤脑，Refsum氏病，Zellweger 氏综合征，核上的麻痹，Friedreich氏运动失调，脊髓与小脑的运动失调2型，Rhett 氏综合征，Shy-Drager氏综合征，神经病包括遗传性的神经病，糖尿病的神经病和 丝状分裂的神经病，Prion-ased神经变性，包括Creutzfeldt-Jakol氏病(CJD)，变体CJD， 新变体的CJD，牛海绵状的脑病(BSE)，GSS，FFI，Kuru(慢性有族遗传性神经变性 疾病)和Alper氏综合症，Jerseph氏病，急性播散的脑脊髓炎，珠网膜炎，中枢神经 系统的血管损害，肢端神经元功能丧失，Charcot-Marie-Tooth病，对心力衰竭，哮喘， 和斑状的变性的敏感性。

因此，本发明包括治疗或预防在人类或非人动物患有或对其敏感的以上疾病和 状况的方法，它包括对上述的人类或非人动物给予此处所规定的活性剂的有效剂量， 以及用于上述的治疗或预防的组合物制备中活性剂的用途。

在帕金森氏病，脑炎后帕金森氏症候群，位置性的低血压，孤独癖综合征，慢 性疲劳综合征，重症肌无力，和兰伯特伊顿氏病的情况下，以及在与本发明所揭示 的，或者明显从治疗得到的或者在先前上面确认的技术上所揭示的有关疾病状态的 任何其他状况，本发明可以服从附带条件即或者认知功能障碍症状缺乏，或者要治 疗的受试者所表现的任何认知功能障碍症状是次要的或附属于非认知的神经变性， 非认知的神经肌肉变性，运动感觉神经变性或不存在认知，神经和神经肌肉损伤的 受体功能障碍或丧失的症状。

制备本发明使用的化合物

菝葜配基，表菝葜配基和萨洒皂角苷配基是商业上可得到的材料。供应商包括， 例如，Sigma Aldrich，Research Plus Inc.和Steraloids Inc.对这些材料的制备方法也可在 文献中找到(如表萨洒皂角苷的制备是在JACS P5225(1959)得到)。表萨洒皂角苷配基 可以通过使用金属氢化物还原剂还原萨洒皂角苷配基酮(sarasapogenone)来制备。萨 洒皂角苷配基酮可以使用Lajisetal，steroids，1993，58，387-389的方法制备。

同样，作为起始材料，未取代的皂角苷和皂角苷配基可以天然存在于各种植物 物种，值得注意的植物有菝葜(smilax)属，天门冬(asparagns)，Anemarrhens，丝兰 (Yucca)，龙舌兰属(agave)。根据本发明此处使用菝葜配基或萨洒皂角苷配基，它可 以来自植物菝葜属，天门冬，Anemarrhena，丝兰或龙舌兰属，以植物提取液，或干 粉的植物材料形式存在。

制备活性剂的方法对本领域一般熟练人员是众所周知的。例如，实施例显示在 WO-A-02/079221(其中实施例5至16描述制备萨洒皂角苷配基Cathylate表萨洒皂角 苷配基cathylate，表萨洒皂角苷配基琥珀酸酯，表菝葜配基cathylate，表萨洒皂角苷 配基甘氨酸酯盐酸盐，萨洒皂角苷配基甘氨酸酯盐酸盐，表菝葜配基甘氨酸酯盐酸 盐，表菝葜配基L-丙氨酸酯盐酸盐，表菝葜配基L-缬氨酸酯盐酸盐，表菝葜配基L- 异亮氨酸酯盐酸盐，表菝葜配基L-苯丙氨酸酯盐酸盐和表菝葜配基L-甲硫氨酸酯盐 酸盐)。结构式Ia的化合物，带R＝H的化合物以外的化合物可以使用常规的技术从 R＝H的化合物制备。

优选的反应是亲核取代反应，其中在3-位上有OH的化合物与结构式L-R的化 合物反应，式中R选自烷基羰基；烷氧基羰基；烷基氨基甲酰基，或芳基羰基；或 此处任何烷基是任选地被芳基，氨基，单烷基-氨基，二烷基-氨基，羧酸残基(-COOH)， 或任何它的组合取代的：和L是在适合于亲核取代的条件下的离去基团。

化合物L-R例如可以是羧酸，或如果合适的话，是酸酐，或酰基卤化物(如酰基 氯化物)。例如当R是cathylate(乙氧基羰基)部分时，化合物L-R可相适配的是氯甲 酸乙酯。

反应是适合于在碱如吡啶中，任选在酸如盐酸存在下进行。

对亲核取代反应的反应详情是众所周知的。例如，参见RC Larock in Comprehensive Organic Transformations，VCH Pulishers，1989。

二氢萨洒皂角苷配可以使用按Marker和Rohrman(1939)，在Sterols LIII上描述 的方法来制备；萨洒皂角苷配基的侧链结构，J.Am.Chem.Soc.61，PP846-851。16，22- 环氧粪甾烷-3β-醇可以使用按Scheer et al.菝葜配基和萨洒皂角苷配基C25的异构化； J/Am.Chem.Soc.77，PP641-646上描述的方法来制造。

在此处所描述的反应中，当这样的基团是最终产物中所要求的时，可能有必要 保护反应性官能团，例如，羟基，羧基或氨基，以避免它们不必要的参与反应。根 据标准的实施可以使用常规的保护基因。例如，参见TW Green和PGM Wuts，in “Protective Groups in Organic Chemistry”，John Wiley&Sons，1991；JFW McOmic in “Protective Groups in Organic Chemistry”，Plenum Press，1973.在结构式L-R其中R 是氨基取代的化合物为保护氨基取代基，优先地使用烷氧基羰基保护基，借此，氨 基官能基在合成步骤中作为烷氧基羰基氨基(优选的是叔-丁氧基羰基氨基)存在的， 直至在无水的溶剂中酸性条件下去保护。

这样制备的化合物可以通过常规的方法从反应混合物中回收。例如，化合物可 以通过蒸馏溶剂从反应混合物中回收，或者如有必要在溶剂从反应混合物蒸馏出之 后，将残留物倒入水中，接着用与水互溶的溶剂提取和从提取物中蒸馏出溶剂。另 外，如有需要，产品可以通过各种众所周知的技术进一步纯化，如重结晶，再沉淀， 或各种色层技术，特别是柱层析或制备性的薄层层析。

对活性基础的讨论

构成本发明基础的治疗应用是由于若干在以下实施例中详细记录的新的观察结 果产生的。要理解本发明的基本原理，摘录观察结果并说明他们怎样预测在本发明 以上规定的范围内的活性剂的权利要求的治疗活性会是有用的。

菝葜配基，表菝葜配基，萨洒皂角苷配基和表萨洒皂角苷配基在体外表达这样 的受体的细胞中可恢复蝇蕈碱的乙酰胆碱受体和肾上腺素受体的丢失。这些结果表 明这些化合物对正常细胞受体丢失的恢复(实施例1)。

萨洒皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基Cattylate，表萨洒皂角苷配基，表菝葜配 基和菝葜配基在体外大鼠皮质神经元中防止化学诱导的神经变性。这些结果表明这 些化合物是神经保护剂防止体外神经变性和神经损伤(实施例2)。

萨洒皂角苷配基，菝葜配基，16，22-环氧粪甾烷-3β-醇，菝葜酰基酮，菝葜配基 甘氨酸酯盐酸盐和粪甾醇在体外大鼠皮质神经元中逆转化学诱导的神经变性。这些 结果表明化合物体外逆转感觉神经变性和神经损伤(实施例3)。

菝葜配基逆转了神经元化学诱发的凋亡，表明这种化合物在体外是抗凋亡剂和 神经保护剂(实施例4)。

菝葜配基和萨洒皂角苷配基在体外大鼠皮质神经元中增加轴突的生长(轴突的数 量和轴突的分支)，表明它们在体外神经营养的作用(实施例5)。

菝葜配基和萨酒皂角苷配基在体外中脑的多巴胺能神经元中防止和逆转神经毒 素诱发的神经变性(神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶鎓(MPP+))。这些结果表明这些化合 物在体外防止和逆传神经变性和神经损伤(实施例6和7)。

萨洒皂角苷配基和菝葜配基在体外大鼠脊髓运动神经元中逆转化学诱发的神经 变性。这些结果表明化合物在体外逆转了运动神经元的神经变性和神经损伤(实施例 8)。

萨洒皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基Cathylate和菝葜配基在体内老年大鼠的认 知能力试验中减少错误应答的数目，这与用试验化合物治疗后老年大鼠脑中蝇蕈碱 的乙酰胆碱受体密度的增加相关。这些结果表明化合物在体内逆转神经损伤(实施例 9)。

菝葜配基和萨洒皂角配基在老年动物中逆转了蝇蕈碱的乙酰胆碱和多巴胺受体 的下降和大脑衍生的神经营养因子(BDNF)的下降。这些结果表明化合物在体内逆转 了运动感觉神经变性和神经损伤并且是神经营养剂(实施例9)。

表萨洒皂角苷配基Cathylate，萨洒皂角苷配基Cathylate，表萨洒皂角苷配基和 表菝葜配基在体内减少了暴露于神经毒剂(鹅膏蕈氨酸和淀粉样蛋白)的年轻大鼠的认 知能力试验中的错误应答的数目和增加大脑中蝇蕈碱的乙酰胆碱受体密度。这些结 果表明化合物在体内逆转了神经损伤(实施例10)。

菝葜配基和萨洒皂角苷配基在小鼠淀粉营养的脊髓侧索硬化(ALS)和夏柯-马利- 托斯氏病模型中改善了存活和运动感觉神经变性和神经损伤(实施例11)。

总之，已发现这些化合物减慢或逆转了某些方面的神经元变性。这些包括逆转 细胞体中的不利变化，神经元延伸(轴突)的萎缩，神经营养因子如神经营养素 (neurotrophins)(例如BDNF，NGF，NT3，NT4/5)的减少，TGF-β超家族神经营养因 子(如GDNF)和神经因子(如CNTF，LIF)的减少，和神经元的毒性或死亡(凋亡)。这 些化合物是有力的神经保护剂，轴突生长物的刺激剂，和神经毒性的预防剂。还发 现这些化合物减慢或逆转胆碱能和多巴胺能功能的下降，例如，蝇蕈碱的乙酰胆碱 和多巴胺受体密度的下降。而且，我们发现神经保护和受体丢失作用的逆转是主动 的调节作用，其中过去的恶化朝着正常状态或具有对抗持续恶化保护作用的年轻状 态逆转。另外，我们还发现化合物凋亡作用的逆转看来是在细胞生命的非新生域中 受到调节的并似乎不可能引发新生物形成。

以上的资料，汇总在一起表明对在这申请书中已列的疾病状态的活性。而且， 以的资料表明看来不存在严重的或威胁生命的副作用如癌症。该活性剂是典型的非 雌激素的。

以上确认先前的技术显示出对以上观察结果延伸预测的合理基础和对本发明中 术语“活性剂”所包括的相关化学结构和衍生物的治疗活性的充分预测。

在本领域和药理学中都众所周知的是在甾类分子上的适当位置，特别是在3-和/ 或26-位上的糖，酯和其他基团能够很容易在体内通过水解作用被断裂，同样的作用 预期在分子的其他碳原子上也能观察到。而且，在本领域和药理学中众所周知的是 这里所用的在词语“活性剂”的限度内的盐，游离酸和游离碱在体内根据活性剂存 在的体液pH彼此之间很容易转化。再有，众所周知的是侧链基团取代基，在形式上 有很大的范围，能够以复杂的碳骨架存在，对结构的药理活性没有实质性的不利影 响，特别是当侧链基团与分子整个大小相比较是较小时。

因为所有的这些理由，在本申请书中作出的有益的药理活性的权利要求看出是 合理的并且由这里收集和提供的试验资料建立在充分可靠的预测基础上。

不愿受理论的束缚，相信活性剂的生理作用是增加神经营养因子的合成，或释 放的能力，或者减少神经营养因子降解速率的能力，例如大脑衍生的神经营养因子 和/或神经生长因子或它们的受体。这些对生长因子的作用可能是由于化合物对细胞 溶质的或核的受体的作用，或者化合物与启动子区域结合其结果直接对生长因子 mRNA产生的速率起作用，或者是由于增加另一种物质因子产生的结果。

另外，这些化合物看来还调节受体。例如，发现这些化合物中一些能阻止或逆 转大脑中蝇蕈碱的乙酰胆碱或多巴胺受体的丢失。相信这些化合物是通过修正在受 体数量或功能或周转上的缺失起作用。

附图的简要说明

为了用非限制的实施例进一步说明本发明，现在参阅附图和以下的实施例。

在附图：

图1表示表菝葜配基醋酸酯在CHO-β2/m3共转染的细胞株上5天时对m3和β2 肾上腺素受体的作用；

图2表示萨洒皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基Cathylate和菝葜配基在大鼠原发 皮质神经元中对谷氨酸盐诱发的神经变性的作用；

图3表示萨洒皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基Cathylate和菝葜对老年大鼠的学 习能力和记忆的作用；

图4表示萨洒皂角苷配基，表萨酒皂角苷配基Cathylate和菝葜配基对蝇蕈碱的 受体数量的作用；

图5表示SOD-1小鼠在口服给药菝葜配基后存活分布图；和

图6表示pmn小鼠在口服给药洒皂角苷配基后的存活分布图。

附图和实施例的详细说明

实施例1

在体内受体丢失的恢复

研究了表菝葜配基Cathylate，萨洒皂角苷Cathylate，表萨洒皂角苷配基 Cathylate，表萨洒皂角苷配基琥珀酸酯，表菝葜配基醋酸醋酸酯和萨洒皂角苷配基在 CHO细胞中对蝇蕈碱的乙酰胆碱受体(m)的作用，或者在经m受体的载体转染的或 经β2和m3受体的载体共转染的CHO细胞中对β2和m3受体的作用。

结果在以下的表1和附图1中说明。经m受体的载体转染的CHO细胞培养期 间时，用表菝葜配基cathylate，萨洒皂角配基，表萨洒皂角苷配基cathylate，表萨洒 皂角苷配基琥珀酯和萨酒皂角苷配基治疗，每一个都阻止受体数量的下降。经β2和 m3受体的载体共转染的CHO细胞培养期间时，m3受体的密度不改变，而β2肾上 腺素受体的密度减少。用表菝葜配基醋酸酯培育没有明显改变m3受体的密度；但显 著地阻止β2肾上腺素受体的减少。

表1表菝葜配基Cathylate，萨洒皂角苷配基cathylate，表萨洒皂角苷配基 cathylate，表萨洒皂角苷配基琥珀酸酯和萨洒皂角配基对M乙酰胆碱受体密度恢复 的作用。   化合物     浓度[microm]     活性   表菝葜配基cathylate     10     ++   萨洒皂角苷配基cathylate     10     ++   表萨洒皂角苷配基cathylate     10     ++   表萨洒皂角苷配基琥珀酸酯     10     ++   萨洒皂角苷配基     10     ++

这样，实验表明表菝葜配基cathylate，萨洒皂角苷配基cathylate，表萨洒皂角 苷配基cathylate，表萨洒皂角苷配基琥珀酸酯，表菝葜配基醋酸酯和萨洒皂角苷配 基每一个都能够阻止随着时间受体数量的下降并且当给予受体水平受抑制的细胞 时，也有趋势将受体数量恢复至正常水平。

实施例2

萨酒皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基cathylate，表萨洒皂角苷配基，表菝葜配 基和菝葜配基在神经元中的神经保护作用

本研究的目标是检验萨洒皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基cathylate，表萨洒皂 角苷配基，表菝葜配基和菝葜配基对暴露给已知诱导神经变性的谷氨酸盐的大鼠原 代皮质神经元的存活作用。

大鼠皮质神经元培养10天；在第10天时培养基改变为无血清限定的培养基。 在第12天，暴露给谷氨酸盐之前24小时，洗涤培养物并且培养基用新鲜的培养基 包含阳性对照(β-雌甾二醇)，试验化合物(萨洒皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基 cathylate，表萨洒皂角苷配基，表菝葜配基和菝葜配基)或载体对照(DMSO，0.25％) 或薯蓣皂苷配基作为阴性对照来代替。

在第13天，培养物暴露给谷氨酸盐。在培育期之后，培养物用新鲜培养基洗涤 并放置于新鲜培养基中，添加有关的化合物或载体以评价在谷氨酸暴露后24小时它 们的保护作用。

神经元细胞的存活是在试验化合物处理或谷氨酸盐+试验化合物暴露后24小时 通过测定培养基中释放出的乳酸脱氢酶(LDH)活性来评价，使用Cytotox96孔非放射 活性试剂盒并通过测量在450nm处波长吸收度来定量。

大鼠原代皮质培养物对谷氨酸酯暴露后，在处理后24小时，皮质神经元有显著 的变性，通过乳酸脱氢酶释放到培养物培养基的增加表现出来。

在原代皮质培养物用化合物预处理24小时，在谷氨酸盐诱发的神经变性上也有 明显的减少(图2；表2)。

表2萨洒皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基cathylate，表萨洒皂角苷配基，表菝 葜配基和菝葜配基对阻止谷氨酸盐诱发的神经变性的作用     条件     平均值±s.e.m(％)     对照     100     +谷氨酸盐     66±3     +谷氨酸盐+萨洒皂角苷配基(30nm)     79±3     对照     100     +谷氨酸盐     65±3     +谷氨酸盐+表萨洒皂角苷配基cathylate(30nm)     74±3     对照     100     +谷氨酸盐     68±4     +谷氨酸盐+表萨洒皂角苷配基cathylate(30nm)     88±3     对照     +谷氨酸盐     71±2     +谷氨酸盐+表萨洒皂角苷配基cathylate(30nm)     79±2     对照     100     +谷氨酸盐     68±4     +谷氨酸盐+表萨洒皂角苷配基cathylate(30nm)     91±4     对照     100     +谷氨酸盐     68±4     +谷氨酸盐+表萨洒皂角苷配基cathylate(30nm)     72±4

萨洒皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基cathylate，表萨洒皂角苷配基，表菝葜配 基和菝葜配基在体外大鼠原代皮质神经元中对谷氨酸盐诱发的神经变性所有的都表 现出明显的神经保护作用。

实施例3

在神经元上用萨洒皂角配基，菝葜配基，16，22-环氧粪甾烷-3β-醇，菝葜配基酮， 菝葜配基甘氨酸酯盐酸盐和粪甾醇对神经变性的逆转。

如上所述，大鼠原代皮质培养物暴露给谷氨酸盐(100μm；10分钟)引起24小时 后测定的乳酸脱氢酶(LDH)活性的增加，表明3显著的神经变性。在谷氨酸盐暴露后 用17-β-雌甾二醇处理，与神经元暴露给谷氨酸盐相比较在LDH活性上产生明显的 下降，提示显著的神经保护作用。同样地，用萨洒皂角苷配基，菝葜配基，16，22-环 氧粪甾烷-3β-醇，菝葜配基酮，菝葜配基甘氨酸酯盐酸盐和粪甾醇处理，与神经元暴 露给谷氨酸盐相比较在LDH活性上产生明显的下降，提示显著的神经保护作用(表 3)。

         表3不同化合物对先前暴露给谷氨酸盐的皮质神经元的作用     条件     平均值±s.e.m％     对照     100±4     谷氨酸盐[100μm]     66±2     谷氨酸盐+17β雌甾二醇[3nm]     69±2     谷氨酸盐+17β-雌甾二醇[30nm]     75±5     对照     100±1     谷氨酸盐[100μm]     67±3     谷氨酸盐+萨洒皂角苷配基[3nm]     101±3     谷氨酸盐+萨洒皂角苷配基[30nm]     112±1     谷氨酸盐+菝葜配基[3nm]     109±6     谷氨酸盐+菝葜配基[30nm]     104±1     对照     100±8     谷氨酸盐[100μm]     40±1     谷氨酸盐+薯蓣皂苷配基[]30nm，阴性对照]     49±6     对照     100±5     谷氨酸盐[100μm]     64±4     谷氨酸盐+16，22-环氧粪甾烷-3β-醇[3nm]     114±7     谷氨酸盐+16，22-环氧粪甾烷-3β-醇[30nm]     119±4     谷氨酸盐+菝葜配基酮[3nm]     119±7     谷氨酸盐+菝葜配基酮[30nm]     119±4     对照     100±4     谷氨酸盐[100μm]     58±3     谷氨酸盐+菝葜配基甘氨酸酯盐酸盐[3nm]     117±4     谷氨酸盐+菝葜配基甘氨酸酯盐酸盐[30nm]     141±6     谷氨酸盐+粪甾醇[3nm]     126±5     谷氨酸盐+粪甾醇[30nm]     116±4

总之，在大鼠皮质神经元上，萨洒皂角苷配基，菝葜配基，16，22-环氧粪甾烷-3β- 醇，菝葜配基酮，菝葜配基甘氨酸酯盐酸和粪甾醇逆转由谷氨酸盐诱发的神经变性， 提示在神经变性的病症上的治疗潜力。

实施例4

菝葜配基在神经元中的抗凋亡作用

本研究的目的是在暴露给谷氨酸盐的大鼠原代皮质培养物中检验菝葜配基对半 胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性，凋亡的标记物的抗凋亡作用

皮质神经元的原代培养物

大鼠皮质神经元培养6天。在第6天加入谷氨酸盐(100microM，10分钟)。然后 洗涤培养物并且培养基用新鲜的包含菝葜配基或载体对照(DMSO，0.25％)的培养基 代替6小时。在6小时处理后，凋亡通过测定半胱氨酸蛋白酶-3的活性来评价。半 胱氨酸蛋白酶-3活性是通过由比色半胱氨酸蛋白酶-3底物，乙酰-Asp-Glu-Val-Asp对 -硝基酰苯胺裂解出对-硝基苯胺来检测。对-硝基苯胺在405nm处有高吸收度。半胱 氨酸蛋白酶-3的相对活性作为光密度来测定。另外，半胱氨酸蛋白酸-3相对活性被 标准化为样品的蛋白质浓度，它也作为光密度测定(Du，et al；J.Neurochem，69，1382- 1388，1997；Sawada.Et al，Fasel J.14，1202-1214，2000)。

菝葜配基在大鼠原代皮质神经元中逆转了谷氨酸盐诱发的半胱氨酸蛋白酶-3活 性的增加，表明了菝葜配基的抗凋亡作用(表4)。

    表4菝葜配基在皮质神经元上对谷氨酸盐诱发的

            半胱氨酸蛋白酶3活性的作用     条件     半胱氨酸蛋白酶活性     (对照的％)     对照     100     +谷氨酸盐     131     +谷氨酸盐+菝葜配基(300nm)     105

实施例5

神经退化病症是以神经元进行性的丢失和神经元过程(轴实)的降解为特征的。诱 发轴突生长的药剂可以促进神经元之间新连结的形成和改善神经退化状况的症状 (Katzman et al，Fasel J.5，278-286(1991)

在大鼠原代皮质神经元中暴露给17β-雌甾二醇(0.3，3，30PM)显著增加现存的轴 突长度(表5)。在大鼠原代皮质神经元中暴露给17β-雌甾二醇(3，30pM)显著增加表 现出轴突的神经元的百分数(表6)。在大鼠原发皮质神经元中暴露给菝葜配基和萨洒 皂角苷配基(0.3，3，30pm)显著增加现存的轴突长度和表现出轴突的神经元的百分数 (表5和6)。

总之，菝葜配基和萨洒皂角苷配基在体外有神经营养作用

表5.17β-雌甾二醇，菝葜配基和萨洒皂角配基对轴突长度的作用，

                  使用光学测微计测定     条件     平均值±s.e.m％     对照     100±4     17β-雌甾二醇(0.3pm)     154±5     17β-雌甾二醇(3pm)     163±4     17β-雌甾二醇(30pm)     183±5     菝葜配基(0.3pm)     159±5     菝葜配基(3pm)     190±8     菝葜配基(30pm)     204±6     萨洒皂角苷配基(0.3pm)     177±5     萨洒皂角苷配基(3pm)     197±5     萨洒皂角苷配基(30pm)     211±6

表6.17β-雌甾二醇，菝葜配基和萨洒皂角苷配基

       对表现出轴突的神经元数量的作用     条件     平均值±s.e.m％     对照     47±2     17β-雌甾二醇(0.3pm)     48±2     17β-雌甾二醇(3pm)     60±2     17β-雌甾二醇(30pm)     59±2     菝葜配基(0.3pm)     63±2     菝葜配基(3pm)     63±2     菝葜配基(30pm)     66±2     萨洒皂角苷配基(0.3pm)     55±2     萨洒皂角苷配基(3pm)     61±1     萨洒皂角苷配基(30pm)     62±2

实施例6

在体外帕金森氏病模型，在大鼠中脑多巴胺能神经元中菝葜配基和萨洒皂角苷 配基阻止由于暴露给神经毒素，1-甲基-4-苯基吡啶鎓(MPP+)所引起的神经变性。

由神经毒素MPP+，1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)的代谢物所引起的损 害模拟在神经退化病症如帕金森氏病所见到的黑纹状体的多巴胺能神经元的变性 (Mytinlineau et al，Science，225，529-531，1984)。由这种毒素诱发的最突出的生化变化 包括多巴胺的水平下降和在黑质致密部分和在尾核中的代谢产物(Burn et al，Proc.Natl Acad Sei U.S.A.，80，4546-4550，1983)和在黑纹状体的突触体制备时多巴胺摄取的减少 (Heikkila et al，J.Neurochem.，44，310-313，1985)。

用菝葜配基和萨洒皂角苷配基对多巴胺能神经元的预处理在暴露给多巴胺能特 异性的神经毒素MPP+(2μm)，与单独用MPP+比较，显著减少神经元的死亡。

神经胶质的细胞株衍生的神经营养因子(GDNF)和大脑衍生的神经营养因子 (BDNF)，它们都是涉及到神经元生长的分子，用作为阳性对照。用菝葜配基和萨洒 皂角苷配基的预处理，与单独暴露给MPP+的神经元相比较，在神经元的存活上产生 显著的增加，提示明显的神经保护作用(表7)。

    表7用BDNF和GDNF，菝葜配基和萨洒皂角苷配基的预处理

          对MPP+(2μm)暴露后的多巴胺能神经元的作用     条件 平均值±s.e.m％     对照     100±3     +MPP+(2μm)     55±3     +MPP+(2μm)+BDNF(1.85nm)&GDNF(0.17nm)     122±7     +MPP+(2μm)+菝葜配基(30nm)     98±4     +MPP+(2μm)+萨洒皂角苷配基(30nm)     89±3

在该体外帕金森氏病模型中，用菝葜配基和萨洒皂角配基预处理明显阻止暴露 给多巴胺能特异性神经毒素MPP+后的神经元变性，显示了神经保护作用。

实施例7

菝葜配基和萨洒皂角苷配基在体外帕金森氏病模型，大鼠中脑多巴胺能神经元 中也逆转了由于暴露给神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶鎓(MPP+)所引起的神经变性。

用菝葜配基和萨洒皂角苷配基对多巴胺能神经元处理在暴露给多巴胺能特异性 的神经毒素MPP+(2μm)后当与单独MPP+比较，显著减少神经元死亡。胶质神经细 胞株衍生的神经营养因子(GDNF)和大脑衍生的神经营养因子(BDNF)，它们都是涉及 到神经元长的分子，和17β-雌甾二醇都用作为阳性对照。用菝葜配基和萨洒皂角苷 配基处理，与单独暴露给MPP+的神经元相比较，在神经元的存活上产生显著的增加 (表8)。

        表8用BDNF和GDNF，菝葜配基，萨洒皂角苷配基和

  17β-雌甾二醇的处理对MPP+(2μ)暴露后多巴胺能神经元的作用     条件     平均值±s.e.m％     对照     100±6     +MPP+(2μm)     76±4     +MPP+(2μm)+BDNF(1.85nm)&GDNF(0.17nm)     98±5     +MPP+(2μm)+菝葜配基(0.03nm)     111±6     +MPP+(2μm)+萨洒皂角苷配基(0.03nm)     112±6     +MPP+(2μm)+17β-雌甾二醇(0.03nm)     105±5

暴露给MPP+不仅在多巴胺能数量上而且在轴突的百分数上引起显著的减少。 本研究表明菝葜配基和萨洒皂角苷配基体外显著增加神经元轴突的数量(表9)。这些 结果表明化合物逆转了运动神经变性。

   表9菝葜配基和萨洒皂角苷配基在多巴胺能神经

      对MPP+(2μm)暴露后对轴突百分数的作用     条件     平均值±s.e.m％     对照     41±4     +MPP+(2μm)     27±5     +MPP+(2μm)+菝葜配基(0.03nm)     41±4     +MPP+(2μm)+萨洒皂角苷配基     (0.03nm)     43±4

实施例8

萨洒皂角苷配基和菝葜配基在脊椎运动神经元中的神经保护作用

本研究的目标是检验萨洒皂角苷配基和菝葜配基对暴露给谷氨酸盐的大鼠原发 运动神经元存活的作用，已知谷氨酸盐在这种运动神经变性模型中诱发神经变性。 17β-雌甾二醇和BDNF用作为阳性对照。

脊椎运动神经元的原代培养物

大鼠运动神经元按照(Martion etal.Neuron，8，737-744，1992)描述的方法制备。在 第10天时，移去培养基和培养物在限定的培养基中暴露给谷氨酸盐(4microM)在 37℃，10分钟。在谷氨酸盐暴露后，培养物在37℃用Dulfecco修改的Eagle培养基 洗涤然后放置在包含试验化合物的新鲜培养基中。48小时后，脊椎运动神经元变性 的程度是通过测定乳酸脱氢酶(LDH)释放到以上培养物培养基中的数量来决定。

结果

谷氨酸盐暴露后，大鼠原代脊椎运动神经元在处理48小时后有显著的变性，通 过乳酸脱氢酶释放到培养物培养基中的增量显示出来。

在用萨洒皂角苷配基或菝葜配基处理的大鼠原代脊椎运动神经元经过48小时， 谷氨酸盐诱发的神经变性有显著下降。

表10萨洒皂角苷配基和菝葜配基在脊椎运动神经元上对谷氨酸盐诱发的神经变 性的作用     条件     平均值±s.e.m％     对照+DMSO[0.25％]     100±1     谷氨酸盐[4microM]+DMSO[0.25％]     94±1     谷氨酸盐+BDNF[3nM]     148±8     谷氨酸盐+17β-雌甾二醇[0.03nM]     102±2     谷氨酸盐+17β-雌甾二醇[3nM]     110±1     谷氨酸盐+17β-雌甾二醇[300nM]     116±6     谷氨酸盐+萨洒皂角苷配基[0.03nM]     123±2     谷氨酸盐+萨洒皂角苷配基[3nM]     137±1     谷氨酸盐+萨洒皂角苷配基[300nM]     136±6     谷氨酸盐+菝葜配基[0.03nM]     128±4     谷氨酸盐+菝葜配基[3nM]     154±1     谷氨酸盐+菝葜配基[300nM]     144±4

萨洒皂角苷配基和菝葜配基在这种运动神经变性体外模型中在大鼠脊椎运动神 经元中逆转了谷氨酸盐诱发的神经变性。

实施例9

在生命的第二个一半(人类年龄在40岁以后)大脑中的神经元密度下降(Selkoe，DJ， Sci，267，134-142，1992)。皮质功能上的改变可能是由于神经元数量，它们相互连结 的数量减少，神经营养素如大脑衍生的神经营养因子(BDNF；Bothwell，M，神经营养 素和神经营养素受体的功能相互作用，Annu，Rev，Neurosd.，18，223-253，1995)的减 少，乙酰胆碱受体(蝇蕈碱的和烟碱的)密度下降和/或在皮质区域它们偶联功能的下 降(Rinne etal，Brain Res.，336，19-25，1985；Selkoc，DJ.Sci.Am.267，134-142，1992)。而 且，在年龄增长期间，蝇蕈碱的乙酰胆碱受体结合在海马中(Narang，N，Mech，Hgeing Dev.，78，221-239，1995)和老年大鼠(Biegon etal，Neuroliol，Aging，10)和人类纹状体中 (Rinne etal，Brain Res.，336，19-25，1985)都显著减少。此外，在阿尔茨海默氏病中，胆 碱能活性下降是与淀粉样β斑块沉着有关(Von der Kammer etal，Biochem.Soc，Symp. 131-140，2001)。其他神经退化性的病症，如帕金森氏病，表现出多巴胺能活性的特 征性的下降(Drukarch etal，Expert，Opin.Investig Drug，10，1855-1868，2001)。

萨洒皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基Cathylate或菝葜配基对老年大鼠(Sprague- Dawley大鼠20个月龄)的口服给药2或3个月逆转了学习和记忆能力上的损伤，蝇 蕈碱乙酰胆碱和多巴胺受体的下降和神经营养素BDNF的下降，这些都是老年进程 特征性的改变。

老年的Spragne-Dawley大鼠分成不同组，一个对照组和用萨洒皂角苷配基，表 萨洒皂角苷配基Calhylate或菝葜配基(18mg kg-1天-1 n＝10)治疗的组，给药2-3个月。 未治疗年轻大鼠的对照组(n＝4)也包括在本研究中。药物的每日剂量是与最小量的食 物混合和每天早晨分别给药于每一个大鼠。

Y-迷宫装置用于学习和记忆试验。在Y-迷宫每一个分路的底极上有铜棒排列， 每当需要时，用可调节的电压，将电流施加在铜棒上。每一个分路是45cm长和在其 未端有一个15W灯，当需要时，开灯。在给药三个月后，每一个大鼠连续训练7天 如下。对每一个训练期间，大鼠放入Y-迷宫的一个分路，休息2分钟后，电流施加 在铜棒上和点亮顺时针方向分路的灯以表明非刺激区域。如果大鼠走进那个分路， 记录一次正确的应答，否则，记录一次错误的应答。这种刺激一应答试验每天重复20 次，每两次连续试验之间停顿5秒。在第7天20次试验后正确的应答数字用来表达 学习能力，(数字越大学习能力越好)。然后让大鼠休息30天和步骤再重复一次。在 30天休息期间之后20次试验的正确应答数字用来表示记忆能力。

测定大脑中蝇蕈碱的乙酰胆碱受体密度。制备组织如下：在断头术后迅速取出 大脑，在干冰中冷冻和转移至冷冻箱。将脑匀浆，小颗粒最后悬浮在缓冲液中。

双位竞争性配位体结合检定法用于测定蝇蕈碱的乙酰胆碱受体密度。

结果显示在附图的图3和4。Y-迷宫实验揭示学习能力和记忆在老年大鼠都受 到损害。萨洒皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基cathylate和菝葜配基在老年大鼠给药 后恢复学习和记忆能力。蝇蕈碱的乙酰胆碱受体密度在老年大鼠上明显下降。萨洒 皂角苷配基，表萨洒皂角苷配基cathylate和菝葜配基显著地恢复蝇蕈碱的乙酰胆碱 受体密度。

年轻大鼠与老年大鼠相比较(129.2±36.8；153.8±40.5fmol/mg蛋白，分别为D1和 D2)显示出明显更高的多巴胺(D)1和2受体密度(分别为157.5±33.2；200.6±50.9fmol/mg 蛋白)。相比之下，菝葜配基和萨洒皂角苷配基对老年大鼠治疗3个月恢复D1和D2 受体密度(分别为菝葜配基177±10.9；217±45.7fmol/mg蛋白；萨洒皂角苷配基 172.0±44.0；206.460.5)。

年轻大鼠与老年大鼠(1.205±0.219ng/g组织)相比较显示出明显更高的BDNF水 平(1.647±0.277ng/g组织)。相比之下，菝葜配基和萨洒皂角苷配基对老年大鼠治疗3 个月部分地恢复BDNF水平(分别为1.342±0.07；1.410±0.232ng/g组织)。

这样，化合物逆转了发生在老年大鼠上的神经损伤，BDNF水平下降，和蝇蕈 碱的乙酰胆碱和多巴胺受体密度下降。

实施例10

阿尔茨海默氏疾病模型作为神经变性的模型

阿尔茨海默氏病的体内模型用于神经变性模型。在这模型中神经毒药剂(淀粉样 蛋白β和鹅膏蕈氨酸)注射到大鼠的大脑中。这导致神经元丢失，受体丢失和认知损 伤。以前的研究表明在大鼠大脑的核脉管组织(Vasalis)局部注射淀粉样蛋白β引起胆 碱能功能低下和行为的损伤直至外科手术后2个月(Giovannell；etal.，1995： Neuroscience 66，781-792)。另外，淀粉样蛋白β与小量鹅膏蕈氨酸共同注射到大鼠海 马中协同产生具有胶质神细胞浸润的神经元丢失，不仅邻近部位而且远离注射部分 也如此(Morimoto etal.，1998：Newroscience 84，479-487)。

我们研究使用Morimoto的方法(Morimoto et al.，1998：Neyroscience 84，479-487) 带有一些修改(单侧代替双侧注射)。三月龄的Spragne Dawley大鼠随机地分成不同 组。注射淀粉样蛋白β1-40和鹅膏蕈氨酸(均来自Sigma)是借助于定向性的仪器完成 的(Stoetting Co.)和坐标是AP＝-0.5mm(右至内侧线)，L＝-2.8(从前囱向后)，H＝- 7.0mm(腹面至硬膜)。每只大鼠的剂量是淀粉样蛋白β1-40(4μg)和鹅膏蕈氨酸(1μg)溶 于1μl生理盐水。注射在20分钟内完成和针头在10分钟后取出。然后皮肤缝合。

8组是：

手术对照用正常生理盐水注射(对照)

模型(对照用淀粉样蛋白β+鹅膏蕈氨酸)

模型+表萨洒皂角苷配基Cathylate(18mg/kg/day)*

模型+萨洒皂角苷配基Cathylate(18mg/kg/day)*

模型+表洒皂角苷配基乙基琥珀酸酯(18mg/kg/day)

(比较)

模型+表萨洒皂角苷配基Cathylate(18mg/kg/day)*

模型+萨洒皂角苷配基Cathylate(18mg/kg/day)*

模型+薯蓣皂苷配基(即阴性对照，18mg/kg/day)

*化合物是按照本发明的

表萨洒皂角苷配基Cathylate，萨洒皂角苷配基Cathylate，表萨洒皂角苷配基乙 基琥珀酸酯(比较化合物)，表萨洒皂角苷配基，表菝葜配基和薯蓣皂苷配基(所有的 都是18mg/kg/day剂量)作为在CM-Na(0.5％)中稳定的悬浮液通过胃管每天一次给药。 对照和模型组每天一次给予同样体积的CM-Na(0.5％)。在手术开始前20天，药物和 载体给予2个月时期。

评价蝇蕈碱的乙酰胆碱受体密度。大脑样品匀浆，离心，和在27000Xg下离心 的小颗粒再匀浆和用作测定。3H-QNB的浓度选择在饱和范围。在培育和分离之后， 结合的部分用液体闪烁计数器测定。

逐步通过试验：学习和记忆。试验化合物对学习和记忆的作用使用逐步-通过试 验来评价。一个60×15×15cm箱子分成2个相同大小的房间，一个暗间带有铜棒电极， 当需要使用时，通电流(40Vac)，而另一个亮间但不通电。在两个房间之间为大鼠通 过有一个开口(洞)。对每个大鼠连续2天进行实验。第一天是训练；这时大鼠在箱内 先适应3分钟，然后放在亮间，它的背向着洞，和暗间的铜棒充电5分钟。第二天 是试验，这时记录在5分钟内穿越的数字。记忆的改善是通过穿越数字的减少来报 告的。

在神经变性模型脑中的蝇蕈碱的乙酰胆碱受体密度是显著地低于对照。表萨洒 皂角苷配基Cathylate，萨洒皂角苷配基Cathylate，表萨洒皂角苷配基和表菝葜配基 在脑蝇蕈碱的乙酰胆碱受体密度上产生明显的上升，而鹅膏蕈氨酸和表萨洒皂角苷 配基乙基琥珀酸酯没有明显改变蝇蕈碱的乙酰胆碱受体密度。这样，实验表明本发 明的化合物对使受体数量正常化起作用，即当给药于受体水平压抑的动物时，它们 倾向于恢复受体数量至正常水平。

在5分钟内错误应答数字(错误数)在神经变性模型组是明显高于对照组，表明记 忆的损伤(见表11)。表菝葜配基，表萨洒皂角苷配基Cathylate表萨洒皂角苷配基和 萨洒皂角苷配基cathylate每一个都显著减少错误应答数量，而鹅膏蕈氨酸和表萨洒 皂角苷配基乙基琥珀酸酯在减少错误应答数量上都无效。

                              表11   组别     M受体密度     Fmol/mg蛋白 学习和记忆逐步通过试     验错误数   对照(n＝10)     859±101     0.60±70   模型(n＝10)     713±48     4.00±2.40   +表萨洒皂角苷配基   cathylate(n＝10)     877±89*     1.36±0.92*   +萨洒皂角苷配基   cathylate(n＝11)     916±158*     1.36±1.03*   +表萨洒皂角苷配基乙   基琥珀酸酯(n＝11)     774±79     3.73±1.35   +表萨洒皂角苷配基   (n＝10)     869±104*     1.50±1.18*   +表菝葜配基(n＝11)     877±90*     1.73±0.91*   +鹅膏蕈氨酸(阴性对照   n＝8)     770±68     3.75±1.49

统计分析使用未配对的Student试验。*表示P＜0.05

实施例11

肌萎缩性侧索硬化(ALS)是一种进行性致命的神经退化的病症，它引起运动神经 元变性，骨骼萎缩，瘫痪和死亡。这种疾病的原因是复杂的：在Cu/Zn超氧化物歧 化酶(SOD-1)基因上的突变是引起某些形式的人类ALS的原因。这种疾病的动物模 型包括过度表达SOD-1基因的SOD-1转基因小鼠和进行性运动神经病(pmn，Charcot- Marie-Tooth模型)小鼠。菝葜配基和萨洒皂角苷配基增加生命期和改善超氧化物歧化 酶(SOD)小鼠(图5)和pmn小鼠(图6)的行为缺陷，肌萎缩性侧索硬化(ALS)和 Charcot-Marie-Tooth病的两种模型。

上述的内容没有限制地说明本发明。变化和修改对在本技术一般熟悉的人们将 是很容易明的，都确定在本专利申请书和随后所有的专利的范围内。