专利汇可以提供一种用于制作细菌扫描电镜观察片的粘片剂及其制备方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且一种用于制作细菌扫描电镜观察片的粘片剂及其制备方法,所述粘片剂的成分为每100ml中含鸡蛋清3‑5 mL和糯米粉乳液5‑7 mL,余量为蒸馏 水 ;制备方法为,分别取3~5 mL鸡蛋清和5‑7 mL糯米粉乳液放于烧杯,用无菌水定容至100 mL,混匀,再用0.22µm规格的一次性针头 过滤器 过滤,滤液即为粘片剂;采用所述粘片剂制作扫描电镜细菌超微形态观察片的方法,包括收集菌体、固定、粘片、脱水、置换、 临界点 干燥、粘台和离子溅射的步骤;本 发明 解决了细菌扫描电镜观察实验中的脱片和混杂现象,针对细菌扫描电镜观察实验提供了一种行之有效的粘片剂及其制备方法和制片方法。,下面是一种用于制作细菌扫描电镜观察片的粘片剂及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种用于制作细菌扫描电镜观察片的粘片剂,其特征在于:其成分为,每100ml中含糯米粉乳液5-7 mL和鸡蛋清3-5 mL,余量为蒸馏水;
所述糯米粉乳液的制备:称取糯米粉5 g,130 ℃烘干1 h后,研钵充分研碎,放入50 mL离心管中,加40 mL蒸馏水,涡旋振荡器震荡20 min后,静置30 min,上清液即为糯米粉乳液。
2.如权利要求1所述粘片剂的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
分别取3-5 mL鸡蛋清和5-7 mL糯米粉乳液放于烧杯,用无菌水定容至100 mL,混匀,再用0.22 µm规格的一次性针头过滤器过滤,滤液即为粘片剂,于4 ℃保存,备用。
3.采用权利要求1所述粘片剂制作扫描电镜细菌超微形态观察片的方法,其特征在于:
包括以下步骤:
(1)收集菌体:将细菌材料经液体摇床培养24 -26h,获取旺盛生长的菌液;取培养好的菌液2 ml,移入10 ml无菌离心管,离心,弃上清,留沉淀菌体;在沉淀加入5 ml pH7.0、0.02 mol/L磷酸缓冲液悬浮漂洗5 min,离心,再用5 ml无菌水漂洗5 min,离心得菌体沉淀;
(2)固定:向菌体沉淀中加入1.5 ml 质量浓度2为.5%戊二醛水溶液,轻柔吹吸悬浮菌体,4 ℃固定6-12 h,离心,弃上清,留沉淀,加入2mL粘片剂悬浮菌体;
(3)粘片:将1片切割成5-7mm方块的载玻片小片投入步骤(2)的粘片剂菌体悬浮液中,轻轻晃动,使载玻片在菌悬液中翻转1-2次,之后静置5min,用镊子捞出载玻片小片,垂直放置,自然晾干;
(4)脱水:将步骤(3)中粘有菌体的载玻片小片依次用梯度叔丁醇,即从低体积浓度梯度叔丁醇到高体积浓度梯度叔丁醇,进行脱水,每个梯度10-15 min;
(5)置换:向步骤(4)中加入1.5ml乙酸异戊酯置换出菌体中所含的叔丁醇,连续进行两次,每次20-30 min;
(6)临界点干燥:将步骤(5)载玻片小片放入临界点干燥仪舱室中进行干燥2-2.5 h;
(7)粘台:将干燥后的载玻片小片直接粘于电镜样品台双面胶上;
(8)离子溅射:对粘有菌体材料的载玻片小片进行喷金镀膜后,即得到扫描电镜细菌超微形态观察片,置于扫描电镜中进行观察,拍照。
4.如权利要求3所述制作扫描电镜细菌超微形态观察片的方法,其特征在于:步骤(1)和步骤(2)中所述离心,为6000-10000 r/min离心5 min。
5.如权利要求3所述制作扫描电镜细菌超微形态观察片的方法,其特征在于:步骤(3)中所述自然晾干的时间为2min以内。
6.如权利要求3所述制作扫描电镜细菌超微形态观察片的方法,其特征在于:步骤(4)所述梯度叔丁醇的体积分数分别为30%、50%、70%、85%、95%、100%,其中体积分数为100 %叔丁醇进行脱水2次。
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