一种用于体外诊断试剂的复合稳定剂及试剂盒
阅读：3发布：2020-08-29
专利汇可以提供一种用于体外诊断试剂的复合稳定剂及试剂盒专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于 生物 技术领域，具体涉及一种用于体外诊断 试剂 的复合稳定剂及 试剂盒 ，所述复合稳定剂包含封闭剂、 表面活性剂 、小分子有机还原剂、核酸成分稳定剂、生物活性物质保护剂和生物 防腐剂 。本发明技术方案提供的复合稳定剂能普遍应用于各种体外诊断试剂，其对试剂的稳定效果更好，有效地延长了试剂的有效期。，下面是一种用于体外诊断试剂的复合稳定剂及试剂盒专利的具体信息内容。
1.一种用于体外诊断试剂的复合稳定剂，其由封闭剂、表面活性剂、小分子有机还原剂、核酸成分稳定剂、生物活性物质保护剂和生物防腐剂组成；所述封闭剂的含量为7～18%（m/v），所述表面活性剂的含量为11～52%（v/v），所述小分子有机还原剂的含量为0.03～
0.8%（m/v），所述核酸成分稳定剂的含量为0.76～3%（m/v），所述生物活性物质保护剂的含量为10～20%（m/v），所述生物防腐剂的含量为0.5～1%（v/v），余量为超纯水；所述封闭剂为牛血清白蛋白和酪蛋白；所述表面活性剂为吐温20和丙二醇；所述有机小分子还原剂为二硫苏糖醇，所述生物活性物质保护剂为海藻糖，所述核酸成分稳定剂为硼酸钠，所述生物防腐剂为ProClin950。
2.根据权利要求1所述的用于体外诊断试剂的复合稳定剂，其特征在于：所述封闭剂为牛血清白蛋白和酪蛋白，所述牛血清白蛋白的含量为10%（m/v），所述酪蛋白的含量为1%（m/v）。
3.根据权利要求1所述的用于体外诊断试剂的复合稳定剂，其特征在于：所述表面活性剂为吐温20和丙二醇，所述吐温20的含量为2%（v/v），所述丙二醇的含量为50%（v/v）。
4.根据权利要求1所述的用于体外诊断试剂的复合稳定剂，其特征在于：所述有机小分子还原剂为二硫苏糖醇，其含量为0.03%（m/v）。
5.根据权利要求1所述的用于体外诊断试剂的复合稳定剂，其特征在于：所述核酸成分稳定剂为硼酸钠，其含量为0.76%（m/v）。
6.根据权利要求1所述的用于体外诊断试剂的复合稳定剂，其特征在于：所述生物活性物质保护剂为海藻糖，其含量为20%（m/v）。
7.根据权利要求1所述的用于体外诊断试剂的复合稳定剂，其特征在于：所述生物防腐剂为ProClin950，其含量为1%（v/v）。
8.一种试剂盒，其包含权利要求1～7中任意一项所述的用于体外诊断试剂的复合稳定剂。
一种用于体外诊断试剂的复合稳定剂及试剂盒
技术领域
背景技术
[0002] 体外诊断试剂是可单独使用或与仪器、器具、设备或系统组合使用，对人体样本在体外进行检查，用于对样本中的某种成分进行检测或测量的体外诊断检验程序的化学、生物学或免疫学等物质。体外诊断试剂系统包括检测试剂、试剂用品、校准物(品)、质量控制物(品)等诸多组成部分。体外诊断试剂已广泛应用于医学科研和临床检验，是常规医疗过程中不可或缺的重要环节。质量稳定可靠的体外诊断试剂能够提供准确的临床检验数据，在疾病的预防和控制以及疾病的及时诊治方面发挥了重要作用。
[0003] 体外诊断试剂的品种和种类繁多，从临床专业分类可分为血液学、生物化学、免疫学、微生物学、细胞组织学及分子生物学等；从性状上可分为液体、干粉、冻干培养基、检测条等；以方法学分类有酶免、放免、免疫组化、免疫细胞化学、荧光和化学发光等；从检测性能上可分为定性、半定量、定量；从检测方法上可分为化学显色法试剂、免疫比浊法试剂、酶法试剂、ELISA法试剂、胶体金法试剂、培养基类试剂、流式分析仪配套用试剂、化学发光免疫测定试剂和聚合酶链式反应(PCR)试剂等。
[0004] 对于众多品种或种类的体外诊断试剂，其生产工艺差异很大，对产品的质量要求也各有侧重；同时，由于试剂的生产模式以及研发生产人员的技术能力不同，很容易导致各厂家的试剂产品质量参差不齐。其中，非常重要的质量问题就是产品的稳定性。
[0005] 在目前阶段由于知识的普及和技术的广泛传播，普通技术人员可以比较容易找到生产某种诊断试剂的技术原理和方法并制成产品。新配制的诊断试剂一般可以达到基本技术要求。但如何提高试剂的稳定性常常成为研发的难点。作为体外诊断试剂必须具备的重要技术指标，稳定性是确保试剂产品在使用过程中安全有效的重要指标。稳定性研究需根据试剂产品的理化性质，设计合理的稳定剂成分和含量，以确保试剂产品的主要质量指标随时间的变化持续保持稳定，进而提高试剂产品的有效期。因此，体外诊断试剂产品中稳定剂的选择和添加是一门非常复杂的学问。
[0006] 中国专利申请(公开号：CN104946616A，名称：一种用于体外诊断试剂的通用固体稳定剂及其使用方法)公开了一种用于体外诊断试剂的通用固体稳定剂。其由水溶液冻干后得到，所述的原料水溶液包含牛血清白蛋白、EDTA钠盐或EDTA钾盐、蔗糖或甘氨酸或甘露糖、吐温20或吐温40或吐温80或聚乙烯吡咯烷酮、环糊精和PEG2000或PEG6000或PEG8000。该发明提供的稳定剂应该对增加体外诊断试剂的稳定性起到了很好的作用，但是还有其它一些能够提高稳定性的物质，该发明并未涉及。并且，所述稳定剂为冻干粉，其在使用时需要配制，使用并不方便。中国专利(公开号：CN104195221A，名称：一种用于葡萄糖测定试剂的复合稳定剂)公开了一种用于葡萄糖测定试剂的复合稳定剂，其稳定了葡萄糖测定试剂检测结果的准确性。但是该发明提供的稳定剂应用范围比较窄，只是改善了葡萄糖测定试剂的稳定性。针对现有技术中存在的问题，有必要开发新的稳定剂来进一步丰富体外诊断试剂的稳定性手段。
发明内容
[0008] 本发明的另一个目的是提供一种包括上述用于体外诊断试剂的复合稳定剂的试剂盒。
[0009] 为了实现上述目的，本发明提供了一种用于体外诊断试剂的复合稳定剂，其包含封闭剂、表面活性剂、小分子有机还原剂、核酸成分稳定剂、生物活性物质保护剂和生物防腐剂；所述封闭剂的含量为1～55％(m/v)，所述表面活性剂的含量为10.5～65％(v/v)，所述有机小分子还原剂的含量为0.02～1％(m/v)，所述核酸成分稳定剂的含量为0.3～4％(m/v)，所述生物活性物质保护剂的含量为10～50％(m/v)，所述生物防腐剂的含量为0.5～5％(v/v)，余量为超纯水。
[0010] 在本发明提供的复合稳定剂中，所述封闭剂优选为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶和脱脂奶粉中的一种或多种。更优选地，所述封闭剂为牛血清白蛋白或/和酪蛋白，并且该封闭剂的含量可以为7～18％(m/v)。最优选地，所述封闭剂为牛血清白蛋白和酪蛋白，其中，所述牛血清白蛋白的含量可以为10％(m/v)，并且所述酪蛋白的含量可以为1％(m/v)。
[0011] 在本发明提供的复合稳定剂中，所述表面活性剂用于降低所述复合稳定剂的表面张力。优选地，所述表面活性剂为吐温20、吐温60、吐温80、丙二醇、丙三醇和聚乙二醇PEG中的一种或多种，其中聚乙二醇PEG包括但不限于PEG2000、PEG6000、PEG8000等。更优选地，所述表面活性剂为吐温20、吐温60、吐温80和丙二醇中的一种或多种。进一步优选地，所述表面活性剂为吐温20或/和丙二醇，并且该表面活性剂的含量为11～52％(v/v)。最优选地，所述表面活性剂为吐温20和丙二醇，其中，所述吐温20的含量可以为2％(v/v)，并且所述丙二醇的含量可以为50％(v/v)。
[0012] 在本发明提供的复合稳定剂中，所述小分子有机还原剂用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。优选地，所述有机小分子还原剂包括但不限于硫醇类还原剂。更优选地，所述有机小分子还原剂为二硫苏糖醇、巯基乙酸和2-巯基乙醇(即β-巯基乙醇)中的一种或多种，并且该有机小分子还原剂的含量为0.03～0.8％(m/v)。最优选地，所述有机小分子还原剂为二硫苏糖醇，并且其含量可以为0.03％(m/v)。
[0013] 在本发明提供的复合稳定剂中，所述核酸成分稳定剂用于稳定核酸类成分。优选地，所述核酸成分稳定剂采用硼酸盐，包括但不限于偏硼酸盐、原硼酸盐、多硼酸盐等。更优选地，所述核酸成分稳定剂为多硼酸盐，如四硼酸钠、四硼酸钾等，并且该核酸成分稳定剂的含量可以为0.76～3％(m/v)。最优选地，所述核酸成分稳定剂为四硼酸钠，并且其含量可以为0.76％(m/v)。
[0014] 在本发明提供的复合稳定剂中，所述生物活性物质保护剂对生物活性物质起到保护作用。优选地，所述生物活性物质保护剂采用非还原糖，包括但不限于海藻糖、蔗糖、淀粉和纤维素中的一种或多种，并且其含量可以为10～20％(m/v)。更优选地，所述生物活性物质保护剂为海藻糖，并且其含量可以为20％(m/v)。
[0015] 在本发明提供的复合稳定剂中，所述生物防腐剂优选为纳他霉素、聚赖氨酸、叠氮钠、硫柳汞、ProClin150、ProClin300和Proclin950中的一种或多种，其中ProClin系列防腐剂的活性成分主要是2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MCI)和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)。更优选地，所述生物防腐剂为ProClin150、ProClin300和ProClin950中的一种或多种，并且其含量可以为0.5～1％(v/v)。最优选地，所述生物防腐剂为ProClin950，并且其含量可以为1％(v/v)。
[0016] 本发明提供的复合稳定剂的制备方法是：
[0017] 1)按组分含量分别称取所述封闭剂、小分子有机还原剂、核酸成分稳定剂和生物活性物质保护剂，将上述各组分充分溶解、混合，得溶液1；
[0018] 2)按组分含量分别量取所述表面活性剂和生物防腐剂，并加入到溶液1中，混匀，得溶液2；
[0019] 3)将溶液2用超纯水进行定容，即制得所述复合稳定剂。
[0020] 另一方面，本发明还提供了一种包括上述用于体外诊断试剂的复合稳定剂的试剂盒。
[0021] 与现技术相比，本发明提供的复合稳定剂的有益效果在于：提供了更多种类能改善稳定性的物质，丰富了提高稳定性的手段；液体复合稳定剂使用更方便；所述复合稳定剂中各成分之间相互协同作用，从而可以长期储存；并且能普遍应用于各种体外诊断试剂，其对试剂的稳定效果更好，有效地延长了试剂的有效期。附图说明
[0022] 图1为实施例1制得的复合稳定剂用于肌酸激酶测定试剂检测结果c-t曲线图。
[0023] 图2为实施例1制得的复合稳定剂用于尿素测定试剂检测结果c-t曲线图。
[0024] 图3为实施例1制得的复合稳定剂用于丙氨酸氨基转移酶测定试剂检测结果c-t曲线图。
[0025] 图4为实施例2制得的复合稳定剂用于肌酸激酶测定试剂检测结果c-t曲线图。
[0026] 图5为实施例2制得的复合稳定剂用于尿素测定试剂检测结果c-t曲线图。
[0027] 图6为实施例2制得的复合稳定剂用于丙氨酸氨基转移酶测定试剂检测结果c-t曲线图。
[0028] 图7为实施例3制得的复合稳定剂用于肌酸激酶测定试剂检测结果c-t曲线图。
[0029] 图8为实施例3制得的复合稳定剂用于尿素测定试剂检测结果c-t曲线图。
[0030] 图9为实施例3制得的复合稳定剂用于丙氨酸氨基转移酶测定试剂检测结果c-t曲线图。
具体实施方式
[0031] 下面将结合具体实施例对本发明作进一步阐述，这些实施例仅作为对本发明的说明，而不是用于对本发明的保护范围进行限制。
[0032] 在本发明的以下实施例中涉及到的试剂有：
[0033] 牛血清白蛋白，纯度>98％，BR，由上海宝曼生物科技有限公司生产；
[0034] 酪蛋白，BR，由北京奥博星生物技术有限责任公司生产；
[0035] 海藻糖，纯度>98％，BR，由江苏宝莱生物科技有限公司生产；
[0036] 丙二醇，AR，由北京化工厂生产；
[0037] 吐温20，AR，由Sigma生产；
[0038] 二硫苏糖醇，AR，由Amresco生产；
[0039] 硼酸钠，AR，Sigma生产；
[0040] Proclin950，IVD，Sigma生产；
[0041] 肌酸激酶测定试剂、尿素测定试剂和丙氨酸氨基转移酶测定试剂，由本公司自行配制；
[0042] 质控品，由英国朗道实验诊断有限公司生产。
[0043] 实施例1
[0044] 本实施例制备的用于体外诊断试剂的复合稳定剂，其组成为：
[0045]
[0046] 所述复合稳定剂的制备方法是：
[0047] 1)按组分含量分别称取牛血清白蛋白5g、酪蛋白2g、二硫苏糖醇0.8g、硼酸钠3g和海藻糖10g，将上述各组分在30mL的超纯水中充分溶解、混合，得溶液1；
[0048] 2)按组分含量分别量取所述丙二醇20mL、吐温20 2mL和ProClin950 1mL，并加入到溶液1中，混匀，得溶液2；
[0049] 3)将溶液2用超纯水进行定容至100mL，即制得所述复合稳定剂。
[0050] 实施例2
[0051] 本实施例制备的用于体外诊断试剂的复合稳定剂，其组成为：
[0052]
[0053]
[0054] 制备方法同实施例1。
[0055] 实施例3
[0056] 本实施例制备的用于体外诊断试剂的复合稳定剂，其组成为：
[0057]
[0058] 制备方法同实施例1。
[0059] 实验例1
[0060] 分别将实施例1制得的体外诊断试剂的复合稳定剂加入到肌酸激酶测定试剂、尿素测定试剂和丙氨酸氨基转移酶测定试剂中的R1与R2试剂中。所述复合稳定剂按10％(v/v)的量加入各体外诊断试剂中。同时取未加入复合稳定剂的各体外诊断试剂用水稀释10％(v/v)作为对照。
[0061] 所述各体外诊断试剂的质控品为：
[0062] 肌酸激酶测定试剂：朗道质控血清水平2，肌酸激酶靶值213U/L；朗道质控血清水平3，肌酸激酶靶值588U/L；
[0063] 尿素测定试剂：朗道质控血清水平2，尿素靶值7.16mmol/L；朗道质控血清水平3，尿素靶值21.10mmol/L；
[0064] 丙氨酸氨基转移酶测定试剂：朗道质控血清水平2，丙氨酸氨基转移酶靶值36U/L；朗道质控血清水平3，丙氨酸氨基转移酶靶值136U/L。
[0065] 37℃、7天加速稳定性试验：
[0066] 1)取4℃储存的体外诊断试剂对生化分析仪进行校准，并分别检测相应质控品，所得检测值为第0天的检测值；
[0067] 2)将1)中体外诊断试剂分为两组，一组加入复合稳定剂，另一组不加复合稳定剂，并同时放入37℃恒温箱中；
[0068] 3)从放入37℃恒温箱后1天开始，每天在生化分析仪上分别测定质控品，直到第7天，结果如下表1-3所示：
[0069] 表1.肌酸激酶测定试剂检测结果(单位：U/L)
[0070]
[0071] 表2.尿素测定试剂检测结果(单位：mmol/L)
[0072]
[0073] 表3.丙氨酸氨基转移酶测定试剂检测结果(单位：U/L)
[0074]
[0075] 实验例2
[0076] 在本实验例中，除加入的复合稳定剂为实施例2制得的之外，其余操作与实验例1中的一致，37℃、7天加速稳定性试验结果如下表4-6所示：
[0077] 表4.肌酸激酶测定试剂检测结果(单位：U/L)
[0078]
[0079] 表5.尿素测定试剂检测结果(单位：mmol/L)
[0080]
[0081] 表6.丙氨酸氨基转移酶测定试剂检测结果(单位：U/L)
[0082]
[0083]
[0084] 实验例3
[0085] 在本实验例中，除加入的复合稳定剂为实施例3制得的之外，其余操作与实验例1中的一致，37℃、7天加速稳定性试验结果如下表7-9所示：
[0086] 表7.肌酸激酶测定试剂检测结果(单位：U/L)
[0087]
[0088] 表8.尿素测定试剂检测结果(单位：mmol/L)
[0089]
[0090] 表9.丙氨酸氨基转移酶测定试剂检测结果(单位：U/L)
[0091]
[0092] 由实验例1至3中的试验结果可知，未加复合稳定剂的试剂随着37℃孵育时间的推移，试剂的活性明显下降，而加入了实施例1、2或3中制得的复合稳定剂后的试剂随着37℃孵育时间的推移，其试剂活性下降很缓慢，尤其是在实验例2中，37℃、7天加速试验后，加入实施例2制得的复合稳定剂的各体外诊断试剂的活性仍在90％以上。
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