首页 / 专利库 / 农用化学品和农药 / 杀菌剂 / 抗真菌多肽 / 白色念珠菌(C.Albicans)中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法

白色念珠菌(C.Albicans)中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法

阅读:54发布:2021-04-14

专利汇可以提供白色念珠菌(C.Albicans)中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及白色念珠菌(C.A1bicans)中的必需基因及用该基因在筛选抗 真菌 物质的应用。,下面是白色念珠菌(C.Albicans)中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法专利的具体信息内容。

1.具有在SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.10,SEQ ID NO.11或者SEQ ID NO.13 所示序列的多核苷酸,其同系物及其功能片段
2.如权利要求1所述的只有SEQ ID NO2.,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.9,SEQ ID NO.10或者SEQ ID NO.11所述序列的 多核苷酸,其同系物及其功能片段。
3.如权利要求1所述的多核苷酸,它是基因CaNL256,其同系 物及其功能片段。
4.如权利要求1所述的多核苷酸,它是基因CaBR102,其同系 物及其功能片段。
5.如权利要求1所述的多核苷酸,它是基因CaIR012,其同系 物及其功能片段。
6.如权利要求1所述的多核苷酸,它是基因CaMR212,其同系 物及其功能片段。
7.如权利要求1所述的多核苷酸,它是基因CaDR325,其同系 物及其功能片段。
8.如权利要求1所述的多核苷酸,它是基因CaOR110,其同系 物及其功能片段。
9.如权利要求1所述的多核苷酸,它是基因CaJL039,其同系 物及其功能片段。
10.如权利要求3到9中任一权利要求所述的基因,其中的功能 相似基因,在核苷酸平上,有至少50%的序列同一性,优选有至少 60%的序列同一性,最优选有至少70%的序列同一性。
11.如权利要求3到9中任一权利要求所述的基因,其中,功能 相似基因,在基酸水平上,与编码蛋白质要有至少40%的序列同一 性,优选有至少50%的序列同一性,更优选有至少60%的序列同一性, 最优选有至少70%的序列同一性。
12.如权利要求1到11中任一权利要求所述的多核苷酸编码的 蛋白质,其功能性多肽片段。
13.含有如权利要求3到9中任一权利要求所述的基因的质粒。
14.保藏在CNCM中编号为I-2065的质粒。
15.保藏在CNCM中编号为I-2063的质粒。
16.保藏在DSMZ中编号为DSM12977的质粒。
17.保藏在DSMZ中编号为DSM12976的质粒。
18.保藏在DSMZ中编号为DSM12978的质粒。
19.保藏在DSMZ中编号为DSM12979的质粒。
20.可用包括以下步骤的方法得到的多核苷酸,其同系物及其功 能片段:
(i)从酿酒酵母中挑选一个必需基因;
(ii)比较该基因序列与白色念珠菌基因组序列;
(iii)推断同源寡核苷酸区域;
(iv)PCR扩增这样得到的寡核苷酸;
(v)使用步骤(iv)的扩增引物检测感兴趣的完整基因。
21.如权利要求20所述的多核苷酸,其中步骤(v)包括使用步 骤(iv)的扩增引物作为探针,从白色念珠菌基因组文库中检测感兴 趣的完整基因的步骤。
22.如权利要求20所述的多核苷酸,其中步骤(v)包括使用步 骤(iv)的扩增引物作为探针,从白色念珠菌cDNA文库中检测感兴 趣的完整基因的步骤。
23.如权利要求20所述的多核苷酸,其中步骤(v)包括使用 PCR方法延伸扩增引物的3’和5’端的步骤。
24.一种抗如权利要求12所述的蛋白质或其功能多肽片段的抗 体。
25.一种筛选抗真菌物质的方法,其中真菌中的一种必需基因或 者其它真菌中的功能相似基因或者相应的编码蛋白质,被用作靶,其 中的必需基因如权利要求3到9中任一权利要求所述。
26.如权利要求25所述的方法,其中将以不同水平表达必需基 因或者功能类似真菌基因的真菌细胞,与被测试物质一起保温,并且 测定该物质的生长抑制效果。
27.如权利要求25所述的方法,其中将所说的靶基因或者相应 靶所编码的蛋白质,与被测试物质在体外接触,并且测定该物质对于 靶的作用。
28.如权利要求25到27中任一权利要求所述的方法,其中被筛 选物质部分或全部抑制必需基因的功能表达,或者部分或全部抑制所 编码蛋白质的功能活性。
29.如权利要求25到28中任一权利要求所述的方法,其中被筛 选物质部分或全部抑制二氢蝶酸合酶(DHPS)和/或7,8-二氢-6-羟 甲基蝶呤-焦磷酸激酶(HPPK)的活性。
30.如权利要求25到29中任一权利要求所述的方法,其中真菌 选自担子菌属(Basidiomycetes),子囊菌属(Ascomycetes)和丝 孢菌属(Hyphomycetes)。
31.如权利要求25到30中任一权利要求所述的方法,其中所说 的功能相似基因是念珠菌属的种(Candida Spp.)或者曲霉属的种 (Aspergillus Spp.)的必需基因。
32.如权利要求31所述的方法,其中所说的功能相似基因是白 色念珠菌(candida albicans)或者烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的必需基因。
33.如权利要求25到32中任一权利要求所述的方法,其中的功 能相似基因与相应必需基因,在核苷酸水平上,有至少50%的序列同 一性,优选有至少60%的序列同一性,最优选有至少70%的序列同一 性。
34.如权利要求25到33中任一权利要求所述的方法,其中的功 能相似基因编码的蛋白质与相应必需基因编码的蛋白质,在氨基酸水 平上,要有至少40%的序列同一性,优选有至少50%的序列同一性, 更优选有至少60%的序列同一性,最优选有至少70%的序列同一性。
35.一种诊断真菌感染的试剂盒,其中包括选自CaOR110, CaMR212,CaNL256,CaBR102,CaIR012,CaDR325和CaJL039,其功 能相似基因,其功能片段的基因,相应编码蛋白质或其功能多肽片 段,或者一种抗体,该抗体抗选自CaOR110,CaMR212,CaNL256, CaBR102,CaIR012,CaDR325和CaJL039或其功能相似基因编码的蛋 白质或其多肽片段。

说明书全文

发明涉及一种筛选抗真菌物质方法,其中真菌中,特别是白色 念珠菌(Candida A1bicans,C.Albicans)中的必需基因,以及其 它病原体真菌中的功能相似基因,或者相应的编码蛋白被用作靶。本 发明也涉及特定的白色念珠菌基因。

已知真菌感染的范围,从真菌侵蚀皮肤或者指甲到对内脏器官潜 在的真菌感染;这种感染和由其造成的疾病被称为真菌病。

抗真菌物质(抑真菌的或者杀真菌的)被用于治疗真菌病。然而, 直到现在,已知具有病理效果的这种物质相对很少,例如,两性霉素 B(Amphotericin B),制霉菌素(Nystatin),匹霉素(Pimaricin), 灰黄霉素(Griseofulvin),克霉唑,5-氟-胞嘧啶(5-fluoro- cytosine)和Batraphene。药物治疗真菌感染非常困难,特别是因 为宿主细胞和真菌都是真核细胞。因此,基于已知的抗真菌物质来用 药,经常造成不希望有的副作用,例如,两性霉素B具有肾毒性的作 用。所以,强烈地需求可用于制造药品的病理有效性物质,这样的药 品适用于预防治疗免疫抑制状态或者是治疗已存在的真菌感染。另 外,这种物质应当表现出特定的作用谱,以选择性的抑制真菌的生长 和繁殖而并不影响被治疗的宿主生物

本发明的目的是为了提供一种鉴别抗真菌物质的方法,尤其是用 于鉴别抗念球菌属(Candida)物质的方法。该方法的必要特征是把 真菌的必需基因作为筛选的靶。

因此本方法涉及一种筛选抗真菌物质的方法,其中该真菌的必需 基因,或者是其它病原体真菌的功能相似基因,或者是相应的编码蛋 白被用作靶,该必需基因选自CaOR110,CaMR212,CaNL256,CaBR102, CaIR012,CaDR325和CaJL039。

根据本发明这一方法的一种实施方案,将以不同平表达其必需 基因或者是功能相似真菌基因的真菌细胞与被测试物质一起保温,并 测定该物质的生长抑制效果。

根据另一种实施方案,将该靶基因或者是该靶基因编码的相应蛋 白,在体外与被测试物质接触并测定该物质对于靶的效果。

根据另一种实施方案,被筛选物质部分或者完全地抑制该必需基 因的功能表达或者其编码蛋白的功能活性。

根据一种实施方案,被筛选物质部分或者完全地抑制二氢蝶酸合 酶(dihydropteroate synthase)(DHPS)和/或7,8-二氢-6-羟甲基 蝶呤-焦磷酸激酶(HPPK)的活性。

根据另一种实施方案,真菌的种选自担子菌属 (Basidiomycetes),子囊菌属(Ascomycetes)和丝孢菌属 (Hyphomycetes)。

根据本发明这一方法的另一种实施方案,该功能相似基因是念珠 菌属的种(Candida Spp.),特别是白色念珠菌的必需基因,或者是 曲霉属的种(Aspergillus Spp.),特别是烟曲霉的必需基因。

根据另一方面,本发明涉及一种多核苷酸,其同系物和其功能片 断,该多核苷酸具有SEQ ID No.2,SEQ ID No.4,SEQ ID No.6,SEQ ID No.7,SEQ ID No.9,SEQ ID No.10,SEQ ID No.11或SEQ ID No.13 所示的序列,优选具有SEQ ID No.2,SEQ ID No.4,SEQ ID No.6, SEQ ID No.9,SEQ ID No.10或SEQ ID No.11所示的序列。

根据另一方面,本发明涉及一种基因或其功能相似基因或其功能 片段,该基因是CaOR110,CaMR212,CaNL256,CaBR102,CaIR012, CaDR325或者CaJL039,优选是CaOR110,CaMR212,CaNL256,CaBR102 或者CaIR012。

根据这一实施方案,功能相似基因或者同源的多核苷酸,在核苷 酸水平上,分别与CaOR110,CaMR212,CaNL256,CaBR102,CaIR012, CaDR325或者CaJL039,有至少50%优选为至少60%,最优选为至少 70%的序列同一性。其功能片断是一种多核苷酸片断,它保留了起始 产物(核苷酸或基因)的功能性。一个实例就是CaOR110的剪接变体 (它也与原始基因同源,具有大约90%的同一性)。

根据另一种实施方案,功能相似基因,在基酸水平上,分别与 CaOR110,CaMR212,CaNL256,CaBR102,CaIR012,CaDR325或者 CaJL039编码的蛋白质,有至少40%,优选至少50%,更优选至少60%, 最优选有至少70%的序列同一性。

就同源性和相似性而言,这些对基因的描述,加以必要的修正后 也适用于多核苷酸。

根据另一方面,本发明包括分别由CaOR110,CaMR212,CaNL256, CaBR102,CaIR012,CaDR325或CaJL039基因,或其功能相似基因编 码的蛋白质或其功能性的多肽片段。

根据另一方面,本发明提供了一种分别含有CaOR110,CaMR212, CaNL256,CaBR102,CaIR012,CaDR325或CaJL039基因,或其功能 相似基因,或其功能片断的质粒。

根据另一方面,本发明提供了一种在1998年8月13日保藏于 CNCM(巴斯德研究所,巴黎)的质粒(含有该质粒的细菌),其编号 为I-2065,I-2063和I-2064,分别对应CaNL256,CaBR102和 CaIR012基因。

根据另一方面,本发明提供了一种在1999年8月6日保藏于DSMZ (德国微生物和细胞培养物保藏中心)的质粒(含有该质粒的细菌), 其编号为DSM12977,DSM12976,DSM12978和DSM12979,分别对应 CaDR325,CaOR110,CaOR110剪接变体和CaMR212。

根据另一方面,本发明提供了一种试剂盒,该试剂盒可用于诊断 真菌感染,所述试剂盒中包括选自CaOR110,CaMR212,CaNL256, CaBR102,CaIR012,CaDR325和CaJL039的基因,其功能相似基因, 其功能片断,相应编码蛋白或者其功能性多肽片断。

根据另一方面,本发明提供了一种抗体,该抗体抗分别由CaOR110, CaMR212,CaNL256,CaBR102,CaIR012,CaDR325或者CaJL039基 因或其功能相似基因编码的蛋白质,或其多肽片断。

根据另一方面,本发明提供了一种多核苷酸,该多核苷酸可通过 包括以下步骤的方法获得:

(i)从酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中选择一种必 需基因;

(ii)比较该基因的序列与白色念珠菌的基因组序列;

(iii)推断寡核苷酸同源区域;

(iv)PCR扩增如此获得的寡核苷酸;

(v)用步骤(iv)的扩增引物探测感兴趣的完整基因:步骤(iv) 的扩增引物被用作探针,从白色念珠菌的基因组库或者cDNA文库中 探测感兴趣的完整基因;或者通过扩增引物3’-和5’-末端的延伸, 例如用一种PCR方法来获得完整的基因。

根据本发明,第一步是鉴定所说的必需基因,由这些基因出发, 可以鉴定其它病原体真菌中的必需基因。为了应用的目的,酿酒酵母 中的必需基因被首先鉴定,由这些基因出发,得到其它病原体真菌, 特别是念珠菌的必需基因。

于是,本发明公开了白色念珠菌中必需基因的鉴定,以及这些基 因在一种筛选抗真菌物质,特别是抗念珠菌物质的方法中的用途。

为了鉴定酿酒酵母中的必需基因,通过同源重组消除单个的基因 组基因。如果这样消除的DNA区断涉及必需基因,那么这样的缺失对 于以单倍体形式存在的酿酒酵母细胞是致命的。

一种方法可以用于产生相应的基因组缺失的酿酒酵母,并且可以 确定含有缺失的酿酒酵母细胞,该方法中所研究的酿酒酵母基因被标 记基因所取代。

例如,显性选择性标记(例如,卡那霉素抗性基因)或者营养缺 陷型标记可用作选择性标记。对于营养缺陷型标记,它可能使用编码 氨基酸或者核酸基合成的关键酶的基因。例如,下列酿酒酵母的基 因可被用作选择性标记:编码亮氨酸代谢途径的基因(例如,LEU2- 基因),编码组氨酸代谢途径的基因(例如,HIS3-基因),或编码 色氨酸代谢途径的基因(例如,TRP-1-基因),或者编码尿嘧啶核酸 碱基代谢途径的基因(例如,URA3-基因)。

酿酒酵母的营养缺陷型菌株可以使用。这些营养缺陷型菌株只能 在含有相应氨基酸或者核苷酸碱基的营养培养基上生长。例如,所有 含有营养缺陷型标记的实验室酿酒酵母菌株都可以使用。当使用双倍 体酿酒酵母菌株时,相应的标记基因必须被纯合突变。可以使用菌株 CEN.PK2或其同基因的衍生物。

没有合适营养缺陷型标记的菌株也可以使用,例如原养型酿酒酵 母菌株。因而可以使用显性选择性标记,例如象是卡那霉素抗性基因 这样的抗性基因。loxP-KanMX-loxP盒可方便地用于这一目的。

为了用同源重组替换酿酒酵母基因的整个DNA序列或其部分,使 用了DNA片断,其中,标记基因在5’-和3’-末端与所研究的酿酒酵 母基因的5’-和3’-末端同源序列侧接。

可以使用不同的方法来制备相应的DNA片断,这些DNA片断适用 于缺失任何特定的酿酒酵母基因。一种线性DNA片断被用于转化合适 的酿酒酵母菌株。这种片断通过同源重组被整合到酿酒酵母基因组 中。这种方法包括:

1.制备缺失盒的“传统方法”(Rothstein,R.J.(1993)酶学 方法,Vol.101,202-211)。

2.使用PCR技术的“传统方法”(“经过修改的传统方法”)。

3.SFH(short flanking homology)-PCR方法(Wach,A.等 (1994)酵母10:1793-1808;Gültner,U.等(1996)核酸研究 24:2519-2524)。

1.在制备酿酒酵母基因组缺失盒的“传统方法”中,待研究基 因或者已经存在于合适的载体中,或者被整合到这样的载体中。用这 种方法,任何pBR-,pUC-和pBluescript@-衍生物都可用于实例。 靶基因的一段重要部分被从载体中缺失,例如使用合适的限制性性酶 切位点,但是载体中要保存待研究基因的3’-和5’-末端区域。选出 的标记基因被整合到保留的区域之间。

2.在“经过修改的传统方法”中使用了PCR。这种方法可以扩 增所研究的酿酒酵母基因编码序列3’-末端和5’-末端区域。这种方 法可以选择性地扩增所研究基因的两个末端区域,因此,对每一个所 研究基因,必须进行两次PCR反应,一次扩增5’-末端区域,一次扩 增3’-末端区域。扩增末端DNA-片断的长度依赖于已存在的限制性酶 切位点。被扩增的所研究基因末端的通常长度是50到5000碱基对 (bp),优选长度是500到1000bp。

酿酒酵母的基因组DNA或者野生型基因可被用作PCR反应的模 板。构建引物对(有义引物和反义引物各一),要使它们对应与所研 究酿酒酵母基因的3’-末端和5’-末端序列。为了通过合适的限制性 酶切位点整合,尤其要选择合适的引物。

pBR-pUC-,pBluescript-衍生物都可用作载体。已经含有编 码选择性标记基因的载体是特别合适的。尤其是可以使用含有选择性 标记HIS3,LEU2,TRP1或URA3基因的载体。

通过PCR获得的所研究酿酒酵母基因的DNA区段,被整合到载体 中选择标记的两侧,于是随后,像在传统方法中那样,选择标记的两 端与所研究基因的同源DNA序列末端侧接。

3.酿酒酵母中的同源重组以一种非常有效非常精确的方式进 行,实际上,与选择性标记基因侧接的所研究酿酒酵母基因的同源 DNA序列的长度,可以比“修改的传统方法”中的短许多。与所研究 酿酒酵母基因同源的侧翼末端所需的长度只要大约20-60bp,优选为 30-45bp。SFH-PCR方法是非常优越的,因为可以避免使用费的克 隆步骤。

PCR反应在含有要用到的选择性标记基因的DNA模板上进行,构 建引物,使有义引物的DNA序列与选择性标记序列的5’-末端同源, 引物的5’-末端还要多出最好40个核苷酸,这些多出的核苷酸要与所 研究酿酒酵母基因的5’-末端序列相对应。反义引物以类似的方式构 建,即反义引物与选择性标记基因序列的3’-末端互补,其中,该引 物在其5’-末端还要多出一段最好也是40个核苷酸的区域,这段区域 要与所研究基因的3’-末端编码序列的互补链相对应。

含有营养缺陷型标记基因或者选择性标记基因的载体,可以用于 通过SFH-PCR方法扩增所研究的酿酒酵母基因。特别是质粒pUG6可 用作模板。这种质粒含有一个loxP-KanMX-loxP盒(Gültner,U.等 (1996)核酸研究24:2519-2524)。换句话说就是,卡那霉素抗性基因 侧接在loxP序列(loxP-KanMX-loxP盒)的两端。这种盒非常优越, 因为卡那霉素抗性基因可以通过将loxP-KanMX-loxP盒整合到所研 究酿酒基因中,而最终从酿酒酵母基因组中除去。噬菌体P1的Cre- 重组酶可用于这一目的。Cre-重组酶识别loxP序列并且通过同源重 组过程诱导位于两段loxP序列之间的DNA的消除。结果,只有一个 loxP序列保留下来,并且发生了所谓的标记再生,即酿酒酵母菌株 可以用loxP-KanMX-loxP盒进行再次转化。当为了得到致死表型, 而至少要缺失两个功能相似基因时,这一点便显得特别有利。

对于PCR方法来说,PCR反应引物在3’-末端优选有20个核苷酸 长的序列,这段序列与位于loxP-KanMX-loxP盒左侧或者右侧的序 列同源,而在5’-末端优选有40个核苷酸长的序列,这段序列与所研 究基因的末端同源。

使用这三种方法,可以得到含有编码选择标记基因的线性缺失 盒,该盒两端侧接有所研究基因的源序列。缺失盒被用于转化二倍体 酿酒酵母菌株。二倍体酿酒酵母菌株CEN.PK2(Scientific Research &Development Gmbh,Oberursel)可用作这一目的的实例。

[CEN.PK2 Mata/MATαura3-52/ura3-52 leu2-3,112/leu2- 3,112his3△1/his3△1 trp1-289/trp1-289 MAL2-8C/MAL2-8C SUC2/SUC2]

CEN.PK2菌株用已知方法准备并培养(Gietz,R.D.等(1992)核 酸研究8:1425;Gültner,U.等(1996)核酸研究24:2519-2524)。

根据已知方法,用合适DNA数量的线性缺失盒转化所用的酿酒酵 母菌株的细胞(例如,Sambrook等1989)。之后,用一种新的所谓 的选择培养基替换培养细胞的培养基,这种选择培养基不含有相应的 氨基酸(例如,组氨酸,亮氨酸或者色氨酸)或者核苷碱基(例如, 尿嘧啶),或者当使用含有卡那霉素抗性基因的缺失盒时,用含有遗 传霉素(G418)的培养基(例如,含有的遗传霉素的完全培养基 (YEPD))替换培养细胞的培养基。另一种选择是,把转化的细胞接 种到用相应培养基制备的琼脂平板上。从而,可以选择出在其中发生 了同源重组的转化细胞,因为只有那些细胞可以生长在这种经修饰的 条件下。

然而,在大多数情况下,在转化过程中,二倍体酿酒酵母菌株位 于一对染色体的基因的两个拷贝中,只有一个被DNA缺失盒取代,从 而产生了杂合子二倍体酿酒酵母突变株,其中所研究基因的一个拷贝 被选择性标记取代,而基因的另一个拷贝仍保留在基因组中。这就体 现了一种优越性,即因为存在必需基因的第二个拷贝,所以当万一缺 失了一个必需基因时,酿酒酵母突变体仍可以存活。

缺失盒DNA在预定染色体基因座(所研究基因的基因座)的适当 整合,可以通过Southern印迹分析(Southern,E.M.(1975)分 子生物学杂志98:503-517)或者使用特殊引物的诊断PCR分析 (Gültner,U.等(1996)核酸研究24:2519-2524)来检查。

单个二倍体细胞的遗传分离可以通过四分体分析进行监控。为 此,使用如氮贫乏的乙酸平板这样的已知方法,诱导二倍体细胞, 特别是杂合子突变株,进行减数分裂。(Sherman,F.等(1986)冷 泉港实验室出版社,冷泉港,纽约;Guthrie,C.和Fink,G.R.(1991) 酶学方法,Vol 194.Academic Press,San Diego,3-21;Ausubel, F.M.等(1987)分子生物学最新方法John Wiley和Sons,Inc., Chapter 13)。减数分裂造成只有四个子囊孢子的子囊(经过分离 的),在用酶解酶部分酶解子囊壁后,可以通过显微操作器(例如 SINGER)得到单个的子囊孢子(Ausubel等(1987))。当对一杂合 子二倍体突变株进行四分体分析时,该二倍体突变株一对染色体上的 一个必需基因已经经同源重组被取代,只有两个分离的子囊孢子,即 那些携带有必需基因的可以存活。其余两个分离的子囊孢子因为缺少 该必需基因而不能存活。

为了检查通过这种方法研究的基因是否真的必需,以及同源重组 是否导致一个必需基因的位置发生变化而与所研究基因的基因座相 邻,酿酒酵母杂合子二倍体突变株用含有该研究基因的着丝粒质粒进 行转化。

对转化体进行四分体分析。当得到四个而不是两个可存活分离子 时,包含在着丝粒质粒中的所研究基因,可以弥补那两个不能存活的 酿酒酵母单倍体细胞/突变株的缺陷,这就证明了所研究的酿酒酵母 基因是必需的。

优选用拷贝数比较少,例如每个细胞有一到两个拷贝的质粒作为 着丝粒质粒。例如质粒pRS313,pRS314,pRS315和pRS316 (Sijkorski,R.S.和Hieter,P.(1989)遗传学122:19-27)或者 可用于这一目的的类似质粒。所研究基因优选是连同其3’-末端和5’- 末端非编码区一起整合到所说的质粒中。

序列全部或者部分已知的各个酿酒酵母基因可以用上述方法进 行研究。完整的酿酒酵母基因组序列于1996年4月24日通过WWW(国 际互联网)对公众公开。

WWW上的酿酒酵母基因组DNA序列,可以通过不同的方式访问

MIPS(慕尼黑蛋白质序列信息中心)地址 http://speedy.mips.biochem.mpq.de/mips/yeast/

SGD(糖酵母基因组数据库,斯坦福)地址speedy.mips.biochem. mpq.de/mips/yeast /

YPD(酵母蛋白质数据库,冷泉港)地址speedy.mips.biochem. mpq.de/mips/yeast/

在欧洲(例如,在地址:ftp.mips.embnet.org),在美国(地 址:genome-ftp.stanford.edu),在日本(地址:ftp.nig.ac.jp), 完整的酿酒酵母DNA序列也可以通过FTP(file transfer protocol, 文件传输协议)访问。

用这种方法已经鉴定了7种酿酒酵母基因组必需基因:YDR325w, YJL039c,YOR110w,YNL256w,YBR102c,YIR012W和YMR212c。

然后酿酒酵母的必需基因被用来鉴定其它真菌相应的功能相似 基因。

其它真菌中的功能相似基因,是指与所鉴定的酿酒酵母必需基因 功能相似或相同的基因。其它真菌中的功能相似基因,可以但不是必 须与相应的酿酒酵母必需基因序列同源。其它真菌中的功能相似基 因,在核苷酸水平上,可以只表现出与相应的酿酒酵母必需基因中等 程度的序列同源性。中等程度的序列同源,在本发明中是指,在核苷 酸水平上要有至少50%的序列同一性,更优选有至少60%的序列同一 性,最优选有至少70%的序列同一性。

另外,其它真菌中的功能相似基因,可以但不是必须编码与相应 的酿酒酵母必需基因编码的蛋白质序列同源的蛋白质。其它真菌中的 功能相似蛋白质,可以只表现出与相应的酿酒酵母必需基因编码的蛋 白质中等程度的蛋白质序列同源性。

中等程度的蛋白质序列同源性,在本发明中是指,在氨基酸水平 上要有至少40%的序列同一性,优选有至少50%的序列同一性,更优 选有至少60%的序列同一性,最优选有至少70%的序列同一性。

序列同源基因可以通过已知方法分离,例如通过同源筛选 (Sambrook,J.等(1989)分子克隆,冷泉港实验室出版社,纽约), 或者通过使用来自相应真菌基因组文库和/或cDNA文库的特殊引物 的PCR技术。

根据一种实施方案,从cDNA文库中分离序列同源基因。为了找 出其它真菌中的功能相似基因,根据已知方法从所研究真菌中分离出 mRNA(Sambrook,等1989),根据已知方法合成cDNA(Sambrook,等 1989;或cDNA合成试剂盒,如STRATAGENE)。

制备的cDNA被定向整合到合适的表达载体中。

例如,考虑到表达载体的启动子,为了使随后的克隆可以适当的 定位,第一条cDNA链的合成可以在具有适当限制性酶切位点的引物 存在下进行。任何已知的限制性酶切位点可以用作限制性酶切位点。 关于引物,可以使用50个核苷酸长的引物,例如以下引物:

5′-GAGAGAGAGAGAGAGAGAGAACTAGTXXXXXXTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3′

序列(X)6表示适当的限制性酶切位点,例如XhoI的限制性酶 切位点。

合成完双链之后,双链cDNA的粘性末端被补平(钝端),然后 cDNA末端用合适的DNA连接序列连接。DNA连接序列应当包含一个限 制性酶切位点,该限制性酶切位点应当与在合成第一条cDNA链时使 用的引物中的限制性酶切位点不同。DNA连接序列可以包含例如互补 的9或13聚体寡核苷酸,其末端代表限制性酶切位点的粘性末端。 例如,这样的末端可以是EcoRI-位点:

5′XXXXXGGCACGAG 3′

3′XCCGTGCTC 5′

连接序列中的单链X表示限制性酶切位点的粘性末端。

然后,用限制性内切酶酶切具有相应连接序列的cDNA,该限制 性内切酶的识别位点被使用在合成第一条cDNA链时使用的引物中, 例如XhoI。根据这个实例,如此得到的cDNA具有3’-XhoI和5’-EcoRI 突出末端,所以可以被定向整合到经XhoI和EcoRI酶切的表达载体 中。

在其它载体中,大肠杆菌/酿酒酵母穿梭载体,即在大肠杆菌和 酿酒酵母都可以使用的载体,是合适的表达载体。这种载体可以在例 如大肠杆菌中扩增。那些在酿酒酵母中具有高拷贝数的载体和具有低 拷贝数的载体都可以用作表达载体。为了这一目的,例如,选自 pRS423-pRS426(pRS423,pRS424,pRS425,pRS426)和/或 pRS313-pRS316(pRS313,pRS314,pRS315,pRS316)(Sikorki,R.S. 和Hieter,P.(1989)遗传学122:19-27;Christianson T.W.等 (1992)基因110:119-122)的载体都是适合的。

表达载体应当含有合适的酿酒酵母启动子和终止子。万一这些载 体不含有这些元件,那么相应启动子和终止子的插入应使得随后仍可 能掺入所产生的cDNA。酿酒酵母基因MET25,PGK1,TPI1,TDH3,ADHI, URA3的启动子特别合适作启动子。可以使用未修饰形式的野生型基 因的启动子,也可以使用经过除去某些激活子序列和/或阻抑蛋白序 列方式而修饰过的启动子。例如,酿酒酵母基因MET25,PGK1,TPI1, TDH3,ADHI,URA3的终止子适合于作终止子。

根据另一种实施方案,从基因组文库中分离序列同源基因。可以 根据已知方法制备真菌基因组DNA文库(例如象在分子生物学最新方 法,John Wiley和Sons,Inc中所描述的)。例如,可以通过已知 的裂解酵母细胞和分离基因组DNA的方法制备真菌基因组DNA(例如 Bio101,Inc的商品试剂盒)。基因组DNA可以用限制性酶,例如 Sau3AI,进行部分酶解,酶解片段用琼脂糖凝胶电泳进行大小选择。 例如,5-10kb大小的DNA片段可以用经典方法纯化(例如使用Bio101 的Gene Clean试剂盒),并插入象是YEP24这样的经限制性酶切而 具有匹配末端(例如,针对经Sau3AI酶切的基因组DNA的BamHI) 的大肠杆菌/酿酒酵母穿梭载体(例如Sanglard D.,Kuchler K., Ischer F.,Pagani J-L.,Monod M.和Bille J.,抗微生物药剂和 化学疗法,(1995)Vol.39 No11,P2378-2386所描述的)。

为了从所研究真菌中发现与酿酒酵母必需基因功能相似的基 因,一个酿酒酵母必需基因被置于可调节启动子的控制下,或者作为 整合基因(1)或者作为染色体外基因(2)。

1.为了把可调节启动子整合到酿酒酵母基因组中,可以用可调 节启动子替换选定的必需基因的天然启动子,例如可以用PCR进行同 源重组(Güldener,U.等(1996)。用PCR进行同源重组可以在例如 二倍体酿酒酵母菌株CEN.PK2中进行。是否成功地整合到染色体组 中,可以通过在单倍体细胞中随后进行的四分体分析进行检测。

使用四分体分析可以得到四个存活的子囊孢子,在其中的两个单 倍体分离子中,选定必需基因在天然启动子的控制之下,而在其余两 个分离子中,必需基因在可调节启动子的控制之下。

最后提到的单倍体分离子被出现在重组载体中的cDNA或者基因 组DNA转化。

2.使用染色体外变体,选定酿酒酵母必需基因首先被插入合适 的表达载体中,例如大肠杆菌/酿酒酵母穿梭载体。为此,可以通过 PCR,由酿酒酵母基因组DNA的起始密码子ATG开始直到并包括终止 密码子来扩增必需基因。用于此目的的引物,可以用以下方式构建, 使得它们包含适当限制酶的识别位点,并有利于随后插入后表达载体 中可调节启动子的控制之下。

含有在可调节启动子控制之下的酿酒酵母必需基因质粒拷贝的 重组表达载体,随后被用于相应突变等位基因的反式互补。相应突变 等位基因可从杂合子二倍体突变株中选出,这些杂合子二倍体突变株 是通过同源重组而部分或全部缺失以上所列举并描述的真菌必需基 因所得到的。

含有选定酿酒酵母必需基因的表达载体,被转化到相应的杂合子 二倍体突变株中,该突变株携带有选择标记基因,而不携带选定的酿 酒酵母必需基因。转化体通过所用表达载体中的营养缺陷型标记选择 分离。经转化的杂合子二倍体突变株随后进行四分体分析。可以得到 四个存活的分离子。通过反向追踪突变等位基因和表达载体的相应标 记,转化的野生型分离子可以与不含有必需基因基因组拷贝的分离子 区分开。不含有选定必需基因基因组拷贝的分离子,被指定为反式互 补单倍体突变株。它们随后被合适载体中的其它真菌的cDNA文库或 者基因组DNA文库转化。

诱导型启动子或阻抑型启动子可以用作可调节启动子。这些启动 子可以由天然和/或人工排列的启动子序列组成。

例如,GAL1基因的启动子和相应的启动子衍生物,比如缺失不 同UAS(上游激活序列)元件的启动子(GALS,GALL;Mumberg,J. 等(1994)核酸研究22:5767-5768),可以用作可调节启动子。糖 元异生基因的启动子,例如FBP1,PCK1,ICL1或者它们的部分,比 如它们的激活序列(UAS1和/或UAS2)或者阻抑序列(URS,上游阻 抑序列)(Niederacher等(1992),Curr.Genet.22:636-670;Proft 等(1995)Mol.Gen.Gent.246:367-373;Schller等(1992)EMBO J;11:107-114;Guarente等(1984)细胞36:503-511),也可以 用作可调节启动子。

以这种方式修饰的酿酒酵母突变株,可以在可调节启动子被激活 的生长环境中培养,使得酿酒酵母必需基因得以表达。接着,用含有 所研究真菌cDNA或者基因组DNA的典型数量的文库转化酿酒酵母细 胞。转化子将表达额外的蛋白质,这些蛋白质的编码序列存在于重组 载体中。

本方法希望,为了抑制控制着选定必需基因的可调节启动子,生 长条件可以进行修改。特别是,可以通过更换生长培养基来改变生长 条件。例如,当使用GAL1启动子或其衍生物时,可以用含葡萄糖的 培养基(抑制状态)替换含半乳糖的培养基(诱导状态)。

对于其重组载体中不含有所研究真菌的功能相似基因组DNA或 cDNA的酿酒酵母细胞,这种经过修改的条件是致命的。相反的,其 重组载体表达所研究真菌的功能相似编码序列的酿酒酵母细胞可以 存活,因为在这些细胞中,功能相似基因编码的蛋白质弥补了致命的 代谢缺陷。

本方法希望,使用已知的方法(Strathern,J.N.和Higgins,D.R. (1991).Plasmids are recovered from yeast into Escherichia coli shuttle vectors in:Guthrie,C.and Fink,G.R.酶学方法, Volume 194.酵母遗传学和分子生物学指南.Academic Press,San Diego,319-929)从存活的转化子中分离重组载体(质粒),使用象 是DNA测序(Singer等(1997),Proc.Natl.Acad.Sci.USA 74:5463-5467)这样的DNA分析方法来分析cDNA和基因组DNA。

这样,酿酒酵母必需基因就可以用于鉴定其它病原体真菌中的功 能相似基因和/或序列同源基因,特别是鉴定人类、动物、植物的病 原体真菌中的功能相似必需基因和/或序列同源必需基因。为此,可 以使用例如藻状菌纲或者真菌纲的真菌,特别是担子菌 (basidiomycetes)亚纲,子囊菌(ascomycetes)亚纲,尤其是 mehiascomycetales(酵母)和plectascales(霉菌)和 gymnascales(皮肤和毛发真菌),或者hyphomycetes纲的真菌,特 别是conidiosporales亚纲(皮肤真菌)和thallosporales亚纲(芽 殖或出芽真菌),尤其是毛霉菌属(mucor),根霉属(rhizopus), 球孢子菌属(coccidioides),副球孢子菌属(paracoccidioides) 巴西芽生菌(blastomyces brasiliensis),内孢霉属(endomyces) (芽生菌属),曲霉属(aspergillus),青霉属(penicilium),毛 癣菌属(trichophyton(ctenomyces)),帚霉属(表皮癣菌属),小 孢子菌属(microsporon),毛孢子菌属(piedraia),单孢枝霉属 (hormodendron),瓶霉属(phialophora),孢子丝菌属 (sporotrichon),隐球酵母属(cryptococcus),念珠菌属 (candida),地霉属(geotrichum)和丝孢酵母属(trichosporon)。

特别感兴趣的是使用以下真菌,念珠菌属的种(Candida Spp.), 特别是白色念珠菌(Candida Albicans),Candida glabrata,曲霉 属的种(Aspergillus Spp.),特别是烟曲霉(Aspergillus fumigatus),粗球孢菌(Coccidioides immitis),新型隐球酵母 (Cryptococcus neoformans),荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum),皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis), Paracoccidioides brasiliens和Sporotrix schenckii。

从根据上述方法鉴定的酿酒酵母基因开始,申请人使用以下方法 从白色念珠菌中克隆出了相应必需基因,即CaOR110,CaMR212, CaNL256,CaBR102,CaIR012,CaDR325或者CaJL039。

首先,为了扩增白色念珠菌的相应片段,从酿酒酵母基因序列或 者白色念珠菌同源序列中选择寡核苷酸。克隆之后,所得片段(序列 长度大约为几百bp)被用作探针筛选白色念珠菌(基因组)DNA文库。 筛选可以包括下面几步:把克隆涂布到平皿上,用交联有DNA的滤纸 覆盖,与滤纸杂交,检测出阳性克隆。对选出的克隆进行测序。

本方法希望,用真菌必需基因鉴定可以部分或者全部抑制这些必 需基因的功能表达和/或编码蛋白的功能活性的物质。可以用这种方 式鉴定这些物质,这些物质可以抑制真菌生长,并可用作抗真菌剂, 例如用于制备药物。

本发明特别包括一种筛选这种抑制物质的方法,其中选自 CaOR110,CaMR212,CaNL256,CaBR102,CaIR012,CaDR325或者 CaJL039的白色念珠菌必需基因或者其它病原体真菌的功能相似基 因,或者相应编码蛋白质被用作靶。

其它病原体真菌的功能相似基因,是指与已鉴定的白色念珠菌必 需基因功能相似或一致的基因。其它病原体真菌的功能相似基因,可 以但不必与相应的白色念珠菌必需基因序列同源。其它病原体真菌的 功能相似基因,在核酸水平上,可以只表现出与相应的白色念珠菌必 需基因中等程度的序列同源性。中等程度的序列同源性,在本发明中 是指,在核苷酸水平上要有至少50%的序列同一性,优选有至少60% 的序列同一性,最优选有至少70%的序列同一性。

另外,其它病原体真菌中的功能相似基因,可以但不是必须编码 与白色念珠菌必需基因编码的蛋白质序列同源的蛋白质。其它真菌中 的功能相似蛋白质,可以只表现出与白色念珠菌必需基因编码的蛋白 质中等程度的蛋白质序列同源性。

中等程度的蛋白质序列同源性,在本发明中是指,在氨基酸水平 上要有至少40%的序列同一性,优选有至少50%的序列同一性,更优 选有至少60%的序列同一性,最优选有至少70%的序列同一性。

本方法的一个特征是,使用真菌必需基因或者相应的编码蛋白质 作为靶来筛选物质。本方法希望,白色念珠菌必需基因,以及其它病 原体真菌的功能相似基因和/或序列同源基因,或者相应的编码蛋白 质,可以用作靶。

根据本发明筛选方法的一种实施方案,要提供含有用作靶的必需 基因的真菌细胞,并将其与被测物质一同保温。用这种方法来测定这 种物质对于必需靶基因的生长抑制效果。

使用以不同程度表达必需靶基因的真菌细胞,将这些细胞与被测 物质一同保温,测定这种物质的生长抑制效果。

本方法包括,使用两种或两种以上的真菌细胞,或其衍生菌株, 衍生菌株的不同在于,它们表达必需靶基因的程度不同。

例如,对于二种、三种、四种、五种、十种或者更多的真菌细胞 或者相应的真菌菌株,可以比较分析被测物质在测定浓度下对它们的 生长抑制效果。抗真菌物质可以通过这种表达程度系列与细胞毒性物 质或者非活性物质区分开。

本方法的一种特殊实施方案,包括使用单倍体真菌细胞/菌株进 行筛选,特别是单倍体酿酒酵母细胞/菌株。

本方法希望,选作靶的必需基因要整合到合适的表达载体中。

例如,大肠杆菌/酿酒酵母穿梭载体是一种合适的表达载体。尤 其是可以使用在每个细胞中拷贝数不同的载体。所以,可以使用在经 转化的酿酒酵母细胞中有高拷贝数的载体,也可以使用低拷贝数的载 体。一种实施方案,包括使用允许把靶基因整合到酿酒酵母基因组中 去的表达载体。

例如,载体pRS423,pRS424,pRS425,pRS426,pRS313,pRS314, pRS315,pRS316,pRS303,pRS304,pRS305,pRS306(Sijkorski 和Hieter,1989;Christianson等1992)适合作为表达载体。

pRS423-pRS426系列载体具有高拷贝数,大约50-100拷贝/细 胞。相反的,pRS313-pRS316系列载体具有低拷贝数(1-2拷贝/细 胞)。当使用这两个系列的表达载体时,靶基因以染色体外拷贝形式 出现。使用pRS303-pRS306系列载体,可以把靶基因整合到基因组 中。使用这三种不同类型的表达载体,可以逐步表达所研究的功能相 似必需基因。

本方法包括,通过使用例如单细胞中拷贝数不同的表达载体,来 比较测定物质对于真菌细胞/菌株的生长抑制效果。

这种细胞可以以不同程度表达必需的靶基因,并且可以对所说的 物质发生逐步的反应。

本方法也包括,通过在表达载体上的所选酿酒酵母特殊启动子和 终止子之间插入靶基因,可以在不同真菌细胞中得到目的基因不同强 度的表达。(可调控的过量表达)以不同强度组成型表达的酿酒酵母 启动子是合适的。这种启动子的实例有,酿酒酵母基因MET25,PGK1, TPI1,TDH3,ADHI,URA3,TRP1的天然启动子,以及它们的相应衍 生物,例如没有特殊激活序列和/或阻抑序列的启动子衍生物。

可调节启动子也适合用于靶基因的逐渐过量表达。GAL1基因的 天然启动子和/或其相应衍生物,例如已经缺失了不同UAS元件的启 动子(GALS,GALL;Mumberg等(1994)核酸研究22:5767-5768), 以及糖元异生基因的启动子,例如启动子FBP1,PCK1,ICL1或其部 分,比如它们的激活(UAS1或UAS2)序列或者阻抑(URS)序列,可 以用于相应的非激活和/或非阻抑试验启动子(Schüller等(1992) EMBO J;11:107-114;)Guarente等(1984)细胞36:503-511; Niederacher等(1992)Curr.Genet.22:363-370;Proft等(1995) Mol.Gen.Gent.246:367-373;)。

例如酿酒酵母基因MET25,PGK1,TPI1,TDH3,ADHI,URA3的 终止子序列,可以用作表达载体的终止子。

本方法包括,通过灵巧地使用所选类型的表达载体和/或制备合 适的表达载体,并最终使用不同强度或者受不同调控的启动子,可以 构建一系列表达载体,这些表达载体都含有相同的靶基因,但是它们 表达靶基因的程度不同。

本方法包括,在酿酒酵母单倍体野生型细胞中表达载体的转化。 这样得到的酿酒酵母细胞/菌株,在含有不同浓度被测物质的液体培 养基中进行培养,比较分析这种物质对于以不同程度表达靶基因的细 胞/菌株的生长行为的效果。本方法也包括,将经各种不含有靶基因 的表达载体转化的酿酒酵母单倍体细胞/菌株,用作对照。

本方法包括,使用可调节启动子,特别是GAL1启动子及其衍生 物(GALS和GALL)在不同的培养基中进行所说物质的筛选,因为各 种培养基的选择在很大程度上影响表达的程度。因此,GAL1启动子 的表达程度以下述方式减少:2%半乳糖>1%半乳糖+1%葡萄糖>2%甘油 >2%葡萄糖。

该物质抑制酿酒酵母野生型细胞生长的作用,可以通过其它真菌 的功能相似基因的过量表达得以部分或者全部的弥补。

根据一种实施方案,筛选抗真菌物质的方法在体外进行,将必需 基因或者功能相似基因,或者相应编码蛋白质,与被测试物质接触, 并且测定该物质对靶的效果。可以使用任何用于确定两个分子相互作 用的体外试验,例如杂交试验或者功能试验(例如,Bergmeyer H.U., 酶分析法,VCH Publishers中所述的酶促试验)。如果使用编码蛋 白质作为靶进行筛选,相应必需基因通过本领域已知的任何合适的技 术,例如使用一套含有合适限制性酶切位点的引物的PCR扩增,(最 新分子生物学方法,John Wiley和Sons,Inc),被插入到表达系 统中,例如大肠杆菌,杆状病毒或者酵母,然后用本领域已知的方法 完全或部分地纯化表达蛋白质。任何合适的纯化表达蛋白质的纯化方 法都可以使用,例如亲和层析。如果靶蛋白功能已知,那么可以进行 功能试验测定抗真菌物质对蛋白质功能的效果。如果靶蛋白功能未 知,可以测定与靶蛋白相互作用的物质,例如结合到编码蛋白质上的 物质。在这种情况下,可以进行诸如保护蛋白质不被合适的酶酶解这 样的试验。

根据一种具体的实施方案,筛选抗真菌物质的方法相当于一种酶 促分析,其中要测定二氢蝶酸合酶(DHPS)和/或7,8-二氢-6-羟甲 基蝶呤-焦磷酸激酶(HPPK)的活性;酶促分析可以象在“Bergmeyer H.U.,酶分析法,VCH Publishers”中公开的那样。

二氢蝶酸合酶(DHPS)催化6-羟甲基-7,8-二氢蝶呤焦磷酸与对 -氨基苯甲酸缩合,形成7,8-二氢蝶酸,这与从6-羟甲基-7,8-二氢 蝶呤产生7,8-二氢叶酸的三步途径的第二步一致。7,8-二氢-6-羟甲 基蝶呤-焦磷酸激酶(HPPK)催化焦磷酸结合到6-羟甲基-7,8-二氢蝶 呤上,形成6-羟甲基-7,8-二氢蝶呤焦磷酸,这与产生7,8-二氢叶酸 的三步途径的第一步一致。所有的生物体都需要还原叶酸辅因子,以 合成各种代谢物。大多数微生物必须从头合成叶酸,因为它们缺少高 等脊椎动物细胞的活性转运系统,这种活性转运系统使得这些高等生 物可以使用食物中的叶酸。所以,与叶酸生物合成相关的酶也就成为 各种抗微生物药剂的靶。因此,这种酶活性对于微生物是必需的,而 人体中并不存在。

本方法也包括鉴定与来自人类、动物或者植物的白色念珠菌的必 需基因功能相似和/或序列同源的基因。在本方法中,相应的人类、 动物或者植物的基因,可以选择性地用作靶基因,以检测抗真菌物质 对于这些靶基因是否有作用。

本方法的一个特殊优点是,以这种方式,可以鉴定出有效抑制真 菌生长的物质,也可以确定这些物质对来自人类、动物或者植物的白 色念珠菌必需基因相应的功能相似基因和/或序列同源基因的影响。

本方法也包括,例如通过检验已确定的真菌必需基因或其部分与 数据库中提供的人类、动物或者植物基因序列的同源性。来检验人 类、动物或者植物中与相应真菌必需基因功能相似的基因和/或序列 同源基因存在的可能性,用这种方法,根据目的,可以在早期就从已 鉴定真菌必需基因中筛选出特定基因,例如与人类基因没有功能相似 和/或序列同源的基因。

因此,本方法提供了多种选择性鉴定具有抗真菌效果而对人体无 害的物质的可能性。

例如,可能鉴定出一些物质,这些物质可以用于制备治疗真菌病 药剂或者制备在免疫抑制状态下进行预防的药剂。

例如,这些物质可以用于生产用于治疗真菌感染的药剂,真菌感 染常在诸如滋病或者糖尿病等疾病发生期间发生。也可以鉴定可用 于生产杀真菌剂的物质,特别是对人类和动物无害的杀真菌剂。

另外,本方法提供了鉴定抗真菌物质的可能性,这些抗真菌物质 可以选择性地只抑制特殊真菌的生长。

本筛选方法具有特殊的优点,因为通过这种方法可以充分识别基 因是否是必需的,而不需要与必需基因功能有关或者与其编码蛋白的 功能有关的多余信息。另外,其它真菌的许多这种基因的DNA序列尚 未获得,其中的与酿酒酵母必需基因功能相似基因的鉴定便具有特殊 的优越性。

根据另一方面,本发明提供了一种抗体,该抗体抗分别由CaOR110, CaMR212,CaNL256,CaBR102,CaIR012,CaDR325或者CaJL039基 因或其功能相似基因编码的蛋白质,或其多肽片断。术语“抗体”包 括单克隆抗体和多克隆抗体。所说的抗体可以通过本领域已知的方法 制备,例如公开在“抗体,实验室手册”,Ed.Harbow和David Lane. 冷泉实验室,1988中的那些方法。

根据另一方面,本发明提供了一种诊断真菌感染的试剂盒,该试 剂盒包括一种基因,该基因选自CaOR110,CaMR212,CaNL256, CaBR102,CaIR012,CaDR325和CaJL039,其功能相似基因,其功能 片段,包括相应的编码蛋白质,其功能多肽片段或者包括抗体或,该 抗体抗由CaOR110,CaMR212,CaNL256,CaBR102,CaIR012,CaDR325 或者CaJL039,或其功能相似基因编码的蛋白质或其多肽片段。这种 试剂盒可以用任何本领域已知的合适方法制备。

实施例

实施例1:CaNL256

Stanford国际互联网站点(http://candida.stanford.edu)提 供了白色念珠菌基因组的初级序列。其中一个序列与酿酒酵母基因 YNL256同源。为了扩增白色念珠菌相应片段,从这个序列中选出了 两个寡核苷酸(5’-ATTCATCCCATCAGTGCAGAAAG-3’和5’- ATTGACCAATAGCTCTAATTAATG-3’)。克隆之后,我们得到了一段与预 期序列(SEQ ID NO:1)相近的399bp的序列。推导出的蛋白质与YNL256 的蛋白质进行比较,证明有53%的相似性,43%的同一性(图1)。白 色念珠菌的这段399bp的序列,被用作探针筛选白色念珠菌基因组文 库.白色念珠菌基因组文库是通过用Sau3AI部分酶解白色念珠菌基 因组DNA,然后在BamHI位点克隆到YEP24载体中得到的。然后,文 库的克隆以每平皿2000个克隆的浓度进行涂布。每个平皿用硝酸纤 维素滤膜覆盖,然后进行以下连续处理:NaOH,0.5M,5分钟;Tris, 1M,pH7.7,5分钟;Tris,0.5M,pH7.7,NaCl,1.25M,5分钟。 滤膜干燥之后,在80℃放置2小时。预杂交和杂交在以下缓冲液中 进行:40%甲酰胺,5xSSC,20mM Tris pH7.7 1xDenhardt 0.1%SDS。 探针使用Amersham UK的RediPrim试剂盒和dCTP进行32P标记。杂 交在42℃进行17个小时以上。然后,用1xSSC,0.1%SDS在室温清 洗滤膜三次,每次5分钟,接着在60℃清洗滤膜二次,每次30分钟, 放射自显影过夜。所得斑点对应的菌落,用低密度重新涂布的方法再 分离,然后再次杂交。这样得到了三个克隆(从40,000个克隆中得 到),这三个克隆用ABI377仪器进行测序。序列用ABI软件编辑, 接着用GCG软件包分析。结果这三个克隆中的一个,含有与所用探针 相对应的全部编码序列;这个基因称作CaNL256,其序列描述在SEQ ID NO:2中。CaNL256与酿酒酵母基因YNL256有52%的核苷酸一致。编 码区在N末端更短。事实上,当翻译成氨基酸时,白色念珠菌中的 CTG密码子翻译为丝氨酸(CaNL256中有3个CTG密码子)。推导出 的蛋白质与酿酒酵母YNL256有40%的氨基酸同一性,与 Pneomocystis courinii的FAS(叶酸合酶)有41%的氨基酸同一性。 用Blast软件查询数据库,表明CaNL256蛋白质的两个部分分别与下 列蛋白质有同源性:细菌流感嗜血杆菌,出血性葡萄球菌,脑膜炎奈 瑟氏球菌,炎链球菌,枯草芽孢杆菌,丙丁醇梭状芽孢杆菌,大肠 杆菌,麻疯分枝杆菌的二氢蝶酸合酶(EC 2.5.1.15)(DHPS)(P值 小于e-28),以及枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,流感嗜血杆菌,肺炎链 球菌的7,8-二氢-6-羟甲基蝶呤-焦磷酸激酶(EC 2.7.6.3)(HPPK)(P 值小于e-20)。DHPS与HPPK的单位特征也可以在CaNL256中发现。

实例2:CaBR102

Stanford国际互联网站点(http://candida.stanford.edu)提 供了白色念珠菌基因组的初级序列。其中一个序列与酿酒酵母基因 YBR102同源。为了扩增白色念珠菌相应片段,从这个序列中选出了 两个寡核苷酸(5’-AGTATTCAATTGGGTATTCC-3’和5’- CCGGCATCATCAGTAACTCC-3’)。克隆之后,我们得到了一段647bp的 序列(SEQ ID NO:3)。推导出的蛋白质与YNL102的蛋白质进行比 较,证明有35%相似,26%一致(图2)。这一片段用Pfu聚合酶 (Stratagene)扩增。PCR产物经纯化(High Pure PCR Product Purification Kit,Boehringer Mannheim)后,用作筛选白色念珠 菌基因组DNA文库的探针。白色念珠菌基因组DNA文库是通过用 SauIIIA部分酶解白色念珠菌基因组DNA,然后在BamHI位点克隆到 YEP-24TRP1载体中得到的。然后,文库的40,000个克隆以每平皿 2000个克隆的浓度进行涂布。每个平皿用硝酸纤维素滤膜(Membrane Hybond N+,Amersham)覆盖,然后进行以下连续处理:1.5M NaCl/ 0.5M NaOH,5分钟;1.5M NaCl/0.5M Tris-HCl pH7.2/1mM EDTA, 3分钟,2次;DNA交联到滤膜上(Amersham Life Science,ultra violet crosslinker)。探针(100ng)使用RediPrim试剂盒和dCrP (Amersham Life Science)进行32P标记。杂交在以下缓冲液中42 ℃进行16个小时:30%甲酰胺,5xSSC,5%Denhart’s溶液,1%SDS, 100μg/ml鲑精浓度为DNA,浓度为106cpm/ml的探针。用2xSSC /0.1%SDS在室温清洗滤膜三次,每次5分钟,接着用1xSSC/0.1% SDS在60℃清洗滤膜三次,每次20分钟。然后把滤膜暴露在X射线 胶片下过夜。阳性克隆所对应的菌落,用相同的方法进行第二次筛选 分离。最终得到了两个阳性克隆,这两个克隆用ABI 377仪器进行测 序。序列用ABI软件编辑,接着用GCG软件包分析。这两个克隆的核 苷酸序列是一致的,含有与所用探针相对应的全部编码序列,这个基 因称作Ca BR102,其序列描述在SEQ ID NO:4中。考虑到在白色念 珠菌中,CTG密码子被翻译为丝氨酸(CaNL256中有3个CTG密码子) 这一事实,这一核苷酸序列的翻译经过了检验。推导出的蛋白质与酿 酒酵母基因YBR102有24%的同一性。

实例3:CaIR012

使用BI0101的Yeast Cell Lysis prep Kit和Genome DNA Kit, 分离了白色念珠菌菌株Caf2-1的染色体DNA。使用寡核苷酸引物 CaYIR012-5’(5’-GACGTCGTAGACGATACTCAAGAAG-3’)和CaYIR012-3’ (5’-CTGCAGTAAACCCTCCAGATATAACAG-3’),PowerScript DNA聚合 酶(PAN System GmbH),通过热启动(hot start)技术扩增出了 一段343bp的白色念珠菌基因组DNA片段(SEQ ID NO:5)。根据制 造商说明,用琼脂糖凝胶纯化PCR产物,并用荧光素(Gene image random prime labeling module,Amersham Life Science)进行标 记。使用制造商推荐的Qiagen柱,从大肠杆菌中分离出质粒DNA。 根据制造商说明(Stratagene Ltd.),进行白色念珠菌λZAPII cDNA 文库筛选。从15000pfu/平板的LB平板(150mm)上拿起尼龙滤 膜(Schleicher&Schuell),在1.5M NaCl,0.5M NaOH中变性5分 钟,在1.5M NaCl,0.5M Tris-HCl pH8.0中中和3分钟,在0.2M Tris-HCl pH7.5,2xSSC中清洗3分钟,DNA交联到滤膜上 (Stratagene UV crosslinker)。滤膜在60℃预杂交4小时,用荧 光素标记的DNA探针在60℃杂交过夜。用抗-荧光素AP缀合物 (FluorImager的信号放大组件,Amersham LIFE SCIENCE)进行检 测,20小时后用Fluorimager分析(Storm 860,Molecular Dynamics)。挑选出阳性噬斑,并培养在0.5ml SM缓冲液(100mM NaCl, 8mM MgSO4,50mM Tris-HCl pH7.5,0,01%明胶)中。挑选的克隆 被稀释,用宿主细胞XLl-Blue滴定,并用相同的方法进行第二次筛 选纯化。最终,根据Stratagene方案,用ExAssist Helper Phage系 统挑选含有感兴趣DNA插入的pBluescript SK(-)噬粒。从总共 75000个筛选噬斑中,鉴定出3个阳性克隆。分离出pBluescript SK (-)噬粒DNA,用T3和T7引物进行测序,用常规合成的寡核苷酸 引物扩增序列。用Gene Data软件包(Gene Data AG,Basel Switzerland)分析核苷酸序列。用Blast程序(Gish,Warren和 David J.States(1993).通过数据库相似性检索鉴定蛋白质编码区。 Nat.Genet.3:266-72.)对Swissprot数据库进行相似性检索。结 果这三个克隆中的一个,含有与所用探针相对应的全部编码序列;这 个基因称作CaIR1012,其序列描述在SEQ ID NO:6中。

实例4:CaJL039

CaJL039序列描述在SEQ ID NO:7中。

基于公开的Stanford白色念珠菌序列数据库发布的基因片段数 据,克隆出CaJL039基因。

(a)鉴定一段表现出与酿酒酵母基因YJL039c有同源性的片 段,其序列在SEQ ID NO 8中给出。

通过使用在实施例3中公布的方法,用寡核苷酸引物对 (Ca039s:TAG CTC AAC CTA CCA CCA ATC/Ca039r:ATC ACA AGA CTG TCA ATG TAA AT),扩增了一段短的PCR片段,用于筛选白色念珠 菌cDNAλZAP II文库(Alistair Brown,Aberdeen惠赠)。

得到了三个阳性克隆的3’编码区域(#21t7,11t3,21t3)。

(b)使用引物步行法3’-和5’-延伸内部片段

使用Yep24载体作构架的Sanglard白色念珠菌基因组DNA文库 进一步扩增3’-和5’-编码序列。通过使用下列载体特异性的寡核苷 酸引物和CaJL039片段特异的寡核苷酸引物,进行扩增:

cggaattcctatcgactacgcgatcatgg:YEp24for (载体特异)

gcgaattccgatataggcgccagcaac:YEp24ba (载体特异)

caattgctttgactcgggtgttattaagt:Ca039-51(CaJL039: 5′钓取)

tcttggcacaacttgataagaatctgt:Ca039-52(`)

taggtgtacgcgaaagccaagtagaac:Ca039-53(`)

ttgttaatcgtacacctaaggtgttgac:Ca039-31(CaJL039: 3`钓取)

ttgcagattgatgctagcaatgtatttg:Ca039-32(`)

使用引物步行技术,可以扩增全部5’-序列(克隆14b-1-1和克 隆17b-3-4)。

缺失的3’-序列可从GTC PathoGenome Release 5.0,重叠群#2830 中获得。

已经鉴定了一种相互作用的蛋白质(C82,酵母RNA聚合酶III 的组分)。

实例5:CaOR110

5.1.CaOR110

CaOR110序列描述在SEQ ID NO:9中。

基于公开的Stanford白色念珠菌序列数据库发布的基因片段数 据,克隆出CaOR110。

(a)Sc0R110同源的一个小片段被用于杂交试验,来鉴定白色 念珠菌cDNAλZAP II文库(来自Alistair Brown)中的CaOR110 克隆。白色念珠菌CaOR110序列与所用杂交片段的序列对比在图3 中给出。同源片段序列在SEQ ID NO.17中给出。

(b)内部片段的3’-和5’-延伸

使用Yep24载体作构架的Sanglard白色念珠菌基因组DNA文库 (来自RMV)扩增3’-和5’-编码和非编码序列。通过使用下列载体特 异性的寡核苷酸(直接针对插入物)和CaOR110片段特异性的寡核苷 酸(直接针对载体侧翼序列)进行扩增:

cggaattcctatcgactacgcgatcatgg:YEP24for

gcgaattccgatataggcgccagcaac:YEP24ba

cgggatccggtaaccaattggatctataaccgtg:110-ba-150

gcggatcctggtgcccttggtggtgaatg:CaYOR110A

gcggatccctcacaatatgacgattgaaact:CaYOR110B

ggcgtcgactcaggcgccagttttacgtacttcaaattcatc:CaYOR110C

tgtgaattcttgacacagggtga:CaYOR110D

caaaccttcagcacaactcca:CaYOR110E

通过测序检验了最终装配的序列,其中也包括3’-和5’-非编码序 列的序列。编码区域被亚克隆到p414RSGALL载体中。

图谱在图4中描述。

酵母同源的ORF(YOR110w),被描述为在TFIIIC聚合酶复合物 中与TFC1相互作用的转录因子亚单位TFC7(Manaud等,1998,分子 细胞生物学18;3191-3200)。

5.2.CaOR110剪接变体

鉴定了CaOR110另外的剪接变体。从白色念珠菌cDNA文库中获 得该CaOR110剪接变体的克隆。

序列描述在SEQ ID NO.10中。

该剪接变体在CaOR110原始序列的第907位处使用“gtacgt”供 体位点。受体位点在第1047位。图谱公布在图5中。

原始CaOR110与剪接变体的序列对比在图6中给出。

实例6:CaMR212

CaMR212序列描述在SEQ ID NO.11中。

(a)基于公开的Stanford白色念珠菌序列数据库发布的基因片 段数据,克隆出CaMR212基因。

表现出与酿酒酵母基因YMR212c有同源性(Blast检索)的片段, 其序列在SEQ ID 12中给出。

基于这些数据,设计以下寡核苷酸用于从白色念珠菌基因组DNA 中扩增该片段(490 bp的片段)。

寡核苷酸:

CaYMR212for:5′-cacctgtgaacaacccaccatc-3′

CaYMR212back:5′-gaatatcctttttaactcaagag-3′

(b)3’-和5’-延伸该CaMR212内部片段

为此,使用了来自Dominique Sanglard的白色念珠菌基因组DNA 文库(来自RMV)。该文库Yep24构架被用于PCR扩增3’-和5’-编码 和非编码序列。通过使用以下对CaMR212的490bp片段具有特异性 的寡核苷酸(直接针对载体侧翼序列)和对载体具有特异性的寡核苷 酸(直接针对插入物),进行扩增。

寡核苷酸:

YEP24for(载体特异):

5′-cggaattcctatcgactacgcgatcatgg

YEP24ba(载体特异):

5′-gcgaattccgatataggcgccagcaac

引物Yep24for和CaMR212for给出了一段编码CaMR212的5’-UTR 和5’编码区的500bp的片段。

使用Yep24 for和CaMR212back扩增出一段1400bp的CaMR212 片段。利用这段1400bp片段序列,设计了以下对这一片段具有特异 性的新引物:

寡核苷酸:

Ca212-1:5′-gctttcccagcaggataacattg

Ca212-2:5′-tgagttataatgcagctgttgg

Ca212-3:5′-catctcgtgtgaacatgattgg

引物Yep24for和Ca212-3给出了一段编码3’-编码区和3’-UTS 区的1600bp的片段。

用这三个PCR片段装配出了2900bp的序列(包括3’-和5’-编码 区序列和非编码区序列)。通过使用以下新引物,从基因组DNA中扩 增出编码序列,并将其克隆到p413GALL载体中。

扩增编码区的寡核苷酸:

Ca212for: 5′-agtttcttcaacttccagatccaag

Ca212back:5′-gtatatttgcaactgtctctctctc

酵母同系物YMR212c在细胞壁功能中起作用,因为它的敲除可以 在1M山梨糖醇中得到挽救。另外,GAL启动子调节下的YMR212c, 表现出对刚果红(Congo Red)和Calcofluor White增强的敏感性。 YMR212c是一种膜内在蛋白质,位于质膜上(经YMR212-GFP融合蛋 白质的显微分析和生化分析证明)。

实例7:CaDR325

CaDR325序列描述在SEQ ID 13中。

基于公开的Stanford白色念珠菌序列数据库发布的基因片段数 据,克隆出CaDR325基因。

(a)表现出与酿酒酵母基因YDR325有同源性的三个片段得到了 鉴定,其序列公开在SEQ ID 14,15,16中。

基于这些数据,设计以下寡核苷酸,用于确认数据库序列,并从 基因组DNA中扩增一段大约2200bp的CaDR325内部片段。

cgagcatctacttgttcaaccac:hybCaYDR325ba Oligo

gaatctctggctcgctc:  325-juls Oligo

gaccgagatacacgagaat:325-julr Oligo

ggttaaatgatcgtgatgaat:Ca325r Oligo

caacctcactgacaaatactt:Ca325s Oligo

最后亚克隆的2200bp的内部片段,通过联合使用hybCaYDR325ba +325-julr寡核苷酸进行扩增。

(c)3’-和5’-延伸该CaMR212内部片段

使用Yep24载体作构架的Sanglard白色念珠菌基因组DNA文库 (来自RMV),扩增3’-和5’-编码和非编码序列。通过使用下列载体 特异性的寡核苷酸(直接针对插入物)和CaDR325 2200bp片段特 异性的寡核苷酸(直接针对载体侧翼序列),进行扩增:

cggaattcctatcgactacgcgatcatgg:YEP24for (载体特异)

gcgaattccgatataggcgccagcaac:  YEP24ba (载体特异)

acgcttccaatgtattattctcg:    Oligo 1-10-A back

ggatgccaatttccctga:         Oligo 1-10-B for

catccagaagatataacggct:      Oligo 1-10-C for

tgcataatctactcagcgaca:      Oligo 1-l0-D back

gtggttgaacaagtagatgctcg:    Ollgo 1-l0-E for

gcgcttgaaaccactagtgaattg:   Ca325Klon_2_Fo

caattcactagtggtttcaagcgc:   Ca325Klon_3_Ba

通过测序检验了最终装配的4700bp的序列,其中也包括3’-和 5’-非编码序列的序列。编码区被亚克隆到p413RSGALL载体中。

图谱在图7中描述。

序列表的130区,确定了序列数目。

序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID01 <140> <141> <160>1 <170>PatentIn Ver.2.1 <210>1 <211>399 <212>DNA <213>人工序列 <220> <223>人工序列描述:探针 <400>1 attcatccca tcagtgcaga aagtttgcat agccatttac aacaattaat aaatgataaa 60 cctcaagaga cagtacaaga atcgtctgat ttattacaat ttatcccagt ctctagatta 120 cctgtcaaag ataatatttt gaaatttgat caaattaatc ataaatctcc tactttgatt 180 atgggtatat tgaatatgac tcctgattca tttagtgatg gtgggaaaca ttttggaaaa 240 gaactagata atattgtgaa gcaggcagag aaattagtca gtgagggtgc tacgattatt 300 gacattggag gagtttccac acgaccagga agtgttgaac ccactgagga agaagaattg 360 gaacgtgtga ttccattaat tagagctatt cgtcaatca                        399 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID02 <140> <141> <160>2 <170>PatentIn Ver.2.1 <210>1 <211>2367 <212>DNA <213>白色念珠菌 <220> <221>CDS <222>(1)..(2364) <220> <221>基因 <222>(1)..(2364) <223>基因CaNL256 <400>1 atg ttg aaa aac gat acc gtt ttc act aaa gat att tct tgt acg gcg   48 Met Leu Lys Asn Asp Thr Val Phe Thr Lys Asp Ile Ser Cys Thr Ala   1               5                  10                  15 ata act ggt aaa gat gcc tgg aat cgg cca aca cca caa cca atc act   96 Ile Thr Gly Lys Asp Ala Trp Asn Arg Pro Thr Pro Gln Pro Ile Thr

         20                  25                  30 ata tca tta tct ttc aat act gat ttc cat aag gca tcg gaa ttg gat   144 Ile Ser Leu Ser Phe Asn Thr Asp Phe His Lys Ala Ser Glu Leu Asp

     35                  40                  45 aat ttg aaa tac tca att aat tat gct gtt att acc aga aat gta act   192 Asn Leu Lys Tyr Ser Ile Asn Tyr Ala Val Ile Thr Arg Asn Val Thr

 50                  55                  60 gaa ttt atg aaa tca aat gag cat tta aat ttc aag tca tta gga aat   240 Glu Phe Met Lys Ser Asn Glu His Leu Asn Phe Lys Ser Leu Gly Asn  65                  70                  75                  80 att gct caa gca att agt gat att gga tta gat caa tct aga ggt ggt   288 Ile Ala Gln Ala Ile Ser Asp Ile Gly Leu Asp Gln Ser Arg Gly Gly

             85                  90                  95 gga tct att gtg gat gtg acg ata aaa agt ttg aaa tca gaa ata aga   336 Gly Ser Ile Val Asp Val Thr Ile Lys Ser Leu Lys Ser Glu Ile Arg

         100                 105                110 gct gaa agt gtc gaa tat aaa att aat aga aac act ttg ggt caa ccc   384 Ala Glu Ser Val Glu Tyr Lys Ile Asn Arg Asn Thr Leu Gly Gln Pro

     115                120                 125 gtt cca tta gat att ttc caa gtt aat aaa ttg aga tta ttg acg att   432 Val Pro Leu Asp Ile Phe Gln Val Asn Lys Leu Arg Leu Leu Thr Ile

130                 135                 140 att gga gtt ttc aca ttt gaa aga tta caa aaa caa ata gtt gat gtt   480 Ile Gly Val Phe Thr Phe Glu Arg Leu Gln Lys Gln Ile Val Asp Val 145                 150                 155                 160 gat ttg caa ttt aaa att gaa cct aat tcc aat tta tat ttc cat caa   528 Asp Leu Gln Phe Lys Ile Glu Pro Asn Ser Asn Leu Tyr Phe His Gln

            165                 170                 175 ata att gct gat att gtt tca tac gtg gaa tca tct aat ttc aaa act   576 Ile Ile Ala Asp Ile Val Ser Tyr Val Glu Ser Ser Asn Phe Lys Thr

        180                 185                 190 gta gaa gca ttg gtg tct aag att ggt caa ttg aca ttt cag aaa tat   624 Va1 Glu Ala Leu Val Ser Lys Ile Gly Gln Leu Thr Phe Gln Lys Tyr

    195                 200                 205 gac gga gta gct gaa gtt gtt gct act gtc act aaa ccg aat gca ttt   672 Asp Gly Val Ala Glu Val Val Ala Thr Val Thr Lys Pro Asn Ala Phe

210                 215                 220 agt cat gtt gaa ggt gtt gga gta tca tct acc atg gtc aaa gac aat   720 Ser His Val Glu Gly Val Gly Val Ser Ser Thr Met Val Lys Asp Asn 225                 230                 235                 240 ttc aaa gat atg gaa cca gtt aaa ttt gaa aac aca att gct caa act   768 Phe Lys Asp Met Glu Pro Val Lys Phe Glu Asn Thr Ile Ala Gln Thr

            245                 250                 255 aat aga gca ttc aat tta cct gtt gaa aat gag aaa act gag gat tat   816 Asn Arg Ala Phe Asn Leu Pro Val Glu Asn Glu Lys Thr Glu Asp Tyr

        260                 265                 270 acc ggg tac cac act gca ttt att gcc ttt gga tcc aat act gga aat   864 Thr Gly Tyr His Thr Ala Phe Ile Ala Phe Gly Ser Asn Thr Gly Asn

    275                        280                       285 caa gta gaa aat att acc aat tca ttc gaa ttg ttg caa aaa tat gga   912 Gln Val Glu Asn Ile Thr Asn Ser Phe Glu Leu Leu Gln Lys Tyr Gly

290                 295                 300 atc acc ata gaa gca act tca tca ttg tac att tct aaa cca atg tat   960 Ile Thr Ile Glu Ala Thr Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Lys Pro Met Tyr 305                 310                 315                 320 tac ttg gat caa cca gat ttt ttc aat gga gta att aaa gtg aat ttc   1008 Tyr Leu Asp Gln Pro Asp Phe Phe Asn Gly Val Ile Lys Val Asn Phe

            325                 330                 335 caa aac att tca cct ttc cag ttg ttg aaa att cta aaa gat att gaa   1056 Gln Asn Ile Ser Pro Phe Gln Leu Leu Lys Ile Leu Lys Asp Ile Glu

        340                 345                 350 tat aaa cat tta gaa agg aaa aaa gac ttt gat aat ggg ccc aga tca   1104 Tyr Lys His Leu Glu Arg Lys Lys Asp Phe Asp Asn Gly Pro Arg Ser

    355                 360                 365 ata gat ttg gat att ata cta tat gac gat tta caa tta aat acc gag   1152 Ile Asp Leu Asp Ile Ile Leu Tyr Asp Asp Leu Gln Leu Asn Thr Glu

370                 375                 380 aat cta att att cca cat aaa tca atg tta gaa aga aca ttt gta tta   1200 Asn Leu Ile Ile Pro His Lys ser Met Leu Glu Arg Thr Phe Val Leu 385                 390                        395          400 caa cca tta tgt gaa gta ttg ccc cct gat tat att cat ccc atc agt   1248 Gln Pro Leu Cys Glu Val Leu Pro Pro Asp Tyr Ile His Pro Ile Ser

            405                 410                 415 gca gaa agt ttg cat agc cat tta caa caa tta ata aat gat aaa cct   1296 Ala Glu Ser Leu His Ser His Leu Gln Gln Leu Ile Asn Asp Lys Pro

        420                 425                 430 caa gag aca gta caa gaa tcg tct gat tta tta caa ttt arc cca gtc   1344 Gln Glu Thr Val Gln Glu Ser Ser Asp Leu Leu Gln Phe Ile Pro Val

    435                 440                 445 tct aga ttg cct gtc aaa gat aat att ttg aaa ttt gat caa att aat   1392 Ser Arg Leu Pro Val Lys Asp Asn Ile Leu Lys Phe Asp Gln Ile Asn

450                 455                 460 cat aaa tct cct act ttg att atg ggt ata ttg aat atg act cct gat   1440 His Lys Ser Pro Thr Leu Ile Met Gly Ile Leu Asn Met Thr Pro Asp 465                 470                 475                 480 tca ttt agt gat ggt ggg aaa cat ttt gga aaa gaa cta gat aat act   1488 Ser Phe Ser Asp Gly Gly Lys His Phe Gly Lys Glu Leu Asp Asn Thr

            485                 490                 495 gtg aag cag gca gag aaa tta gtc agt gag ggt gct acg att att gac   1536 Val Lys Gln Ala Glu Lys Leu Val Ser Glu Gly Ala Thr Ile Ile Asp

        500                 505                     510 att gga gga gtt tcc aca cgc cca gga agt gtt gaa ccc act gag gaa   1584 Ile Gly Gly Val Ser Thr Arg Pro Gly Ser Val Glu Pro Thr Glu Glu

    515                 520                 525 gaa gaa ttg gaa cgt gtg att cca tta att aaa gct att cgt caa tca   1632 Glu Glu Leu Glu Arg Val Ile Pro Leu Ile Lys Ala Ile Arg Gln Ser

530                 535                 540 ctg aac cct gat tta ctg aag gtg ttg att tcg gtt gat act tat cgt   1680 Leu Asn Pro Asp Leu Leu Lys Val Leu Ile Ser Val Asp Thr Tyr Arg 545                 550                 555                 560 agg aac gtt gct gaa caa agt tta ctt gtg ggt gct gac ata atc aac   1728 Arg Asn Val Ala Glu Gln Ser Leu Leu Val Gly Ala Asp Ile Ile Asn

            565                 570                 575 gat atc tca atg ggc aaa tat gat gaa aaa ata ttt gat gtg gtt gct   1776 Asp Ile Ser Met Gly Lys Tyr Asp Glu Lys Ile Phe Asp Val Val Ala

        580                 585                 590 aaa tac gga tgt cct tat atc atg aat cat act cga gga tca cct aaa   1824 Lys Tyr Gly Cys Pro Tyr Ile Met Asn His Thr Arg Gly Ser Pro Lys

    595                 600                 605 acc atg tct aaa ttg acc aat tat gaa tca aat aca aat gat gat att   1872 Thr Met Ser Lys Leu Thr Asn Tyr Glu Ser Asn Thr Asn Asp Asp Ile

610                 615                 620 atc gaa tat ata att gat cct aaa tta gga cat caa gaa ttg gat ttg   1920 Ile Glu Tyr Ile Ile Asp Pro Lys Leu Gly His Gln Glu Leu Asp Leu 625                 630                 635                 640 tca cct gaa atc aag aat tta ctc aat gga atc agt cgt gaa ttg agt   1968 Ser Pro Glu Ile Lys Asn Leu Leu Asn Gly Ile Ser Arg Glu Leu Ser

            645                 650                 655 tta caa atg ttt aaa gcc atg gct aaa gga gtg aaa aaa tgg caa att   2016 Leu Gln Met Phe Lys Ala Met Ala Lys Gly Val Lys Lys Trp Gln Ile

        660                 665                 670 att ttg gat cct ggt att gga ttt gct aaa aat ttg aat caa aat tta   2064 Ile Leu Asp Pro Gly Ile Gly Phe Ala Lys Asn Leu Asn Gln Asn Leu

    675                 680                 685 gca gtt att cgt aat gcc tcg ttt ttt aaa aaa tat tct att caa att   2112 Ala Val Ile Arg Asn Ala Ser Phe Phe Lys Lys Tyr Ser Ile Gln Ile

690                 695                 700 aat gaa cgt gtt gat gat gtg aca atc aaa cat aaa tat tta agt ttt   2160 Asn Glu Arg Val Asp Asp Val Thr Ile Lys His Lys Tyr Leu Ser Phe 705                 710                 715                 720 aat ggt gct tgt gtt ttg gtg ggg aca tca aga aag aag ttt ttg ggg   2208 Asn Gly Ala Cys Val Leu Val Gly Thr Ser Arg Lys Lys Phe Leu Gly

            725                 730                 735 aca tta act ggt aat gaa gtg cct ctg gat cga gta ttt ggc act ggt   2256 Thr Leu Thr Gly Asn Glu Val Pro Leu Asp Arg Val Phe Gly Thr Gly

        740                 745                 750 gca aca gtg tct gcg tgt att gaa caa aac act gat att gta aga gtt   2304 Ala Thr Val Ser Ala Cys Ile Glu Gln Asn Thr Asp Ile Val Arg Val

    755                 760                 765 cat gat gtt aaa gaa atg aaa gat gta gta tgt ata agt gat gca att   2352 His Asp Val Lys Glu Met Lys Asp Val Val Cys Ile Ser Asp Ala Ile

770                 775                 780 tat aaa aat gta taa                                               2367 Tyr Lys Asn Val 785 <210>2 <211>788 <212>PRT <213>白色念珠菌 <400>2 Met Leu Lys Asn Asp Thr Val Phe Thr Lys Asp Ile Ser Cys Thr Ala   1               5                  10                  15 Ile Thr Gly Lys Asp Ala Trp Asn Arg Pro Thr Pro Gln Pro Ile Thr

         20                  25                  30 Ile Ser Leu Ser Phe Asn Thr Asp Phe His Lys Ala Ser Glu Leu Asp

     35                  40                  45 Asn Leu Lys Tyr Ser Ile Asn Tyr Ala Val Ile Thr Arg Asn Val Thr

 50                  55                  60 Glu Phe Met Lys Ser Asn Glu His Leu Asn Phe Lys Ser Leu Gly Asn  65                  70                  75                  80 Ile Ala Gln Ala Ile Ser Asp Ile Gly Leu Asp Gln Ser Arg Gly Gly

             85                  90                  95 Gly Ser Ile Val Asp Val Thr Ile Lys Ser Leu Lys Ser Glu Ile Arg

        100                 105                 110 Ala Glu Ser Val Glu Tyr Lys Ile Asn Arg Asn Thr Leu Gly Gln Pro

    115                 120                 125 Val Pro Leu Asp Ile Phe Gln Val Asn Lys Leu Arg Leu Leu Thr Ile

130                 135                 140 Ile Gly Val Phe Thr Phe Glu Arg Leu Gln Lys Gln Ile Val Asp Val 145                 150                 155                 160 Asp Leu Gln Phe Lys Ile Glu Pro Asn Ser Asn Leu Tyr Phe His Gln

            165                 170                 175 Ile Ile Ala Asp Ile Val Ser Tyr Val Glu Ser Ser Asn Phe Lys Thr

        180                 185                 190 Val Glu Ala Leu Val Ser Lys Ile Gly Gln Leu Thr Phe Gln Lys Tyr

    195                 200                 205 Asp Gly Val Ala Glu Val Val Ala Thr Val Thr Lys Pro Asn Ala Phe

210                 215                 220 Ser His Val Glu Gly Val Gly Val Ser Ser Thr Met Val Lys Asp Asn 225                 230                 235                 240 Phe Lys Asp Met Glu Pro Val Lys Phe Glu Asn Thr Ile Ala Gln Thr

            245                 250                 255 Asn Arg Ala Phe Asn Leu Pro Val Glu Asn glu Lys Thr Glu Asp Tyr

        260                 265                 270 Thr Gly Tyr His Thr Ala Phe Ile Ala Phe Gly Ser Asn Thr Gly Asn

    275                 280                 285 Gln Val Glu Asn Ile Thr Asn Ser Phe Glu Leu Leu Gln Lys Tyr Gly

290                 295                 300 Ile Thr Ile Glu Ala Thr Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Lys Pro Met Tyr 305                 310                 315                 320 Tyr Leu Asp Gln Pro Asp Phe Phe Asn Gly Val Ile Lys Val Asn Phe

            325                 330                 335 Gln Asn Ile Ser Pro Phe Gln Leu Leu Lys Ile Leu Lys Asp Ile Glu

        340                 345                 350 Tyr Lys His Leu Glu Arg Lys Lys Asp Phe Asp Asn Gly Pro Arg Ser

    355                 360                 365 Ile Asp Leu Asp Ile Ile Leu Tyr Asp Asp Leu Gln Leu Asn Thr Glu

370                 375                 380 Asn Leu Ile Ile Pro His Lys Ser Met Leu Glu Arg Thr Phe Val Leu 385                 390                 395                 400 Gln Pro Leu Cys Glu Val Leu Pro Pro Asp Tyr Ile His Pro Ile Ser

            405                 410                 415 Ala Glu Ser Leu His Ser His Leu Gln Gln Leu Ile Asn Asp Lys Pro

        420                 425                 430 Gln Glu Thr Val Gln Glu Ser Ser Asp Leu Leu Gln Phe Ile Pro Val

    435                 440                 445 Ser Arg Leu Pro Val Lys Asp Asn Ile Leu Lys Phe Asp Gln Ile Asn

450                 455                 460 His Lys Ser Pro Thr Leu Ile Met Gly Ile Leu Asn Met Thr Pro Asp 465                 470                 475                 480 Ser Phe Ser Asp Gly Gly Lys His Phe Gly Lys Glu Leu Asp Asn Thr

            485                 490                 495 Val Lys Gln Ala Glu Lys Leu Val Ser Glu Gly Ala Thr Ile Ile Asp

        500                 505                 510 Ile Gly Gly Val Ser Thr Arg Pro Gly Ser Val Glu Pro Thr Glu Glu

    515                 520                 525 Glu Glu Leu Glu Arg Val Ile Pro Leu Ile Lys Ala Ile Arg Gln Ser

530                 535                 540 Leu Asn Pro Asp Leu Leu Lys Val Leu Ile Ser Val Asp Thr Tyr Arg 545                 550                 555                 560 Arg Asn Val Ala Glu Gln Ser Leu Leu Val Gly Ala Asp Ile Ile Asn

            565                 570                 575 Asp Ile Ser Met Gly Lys Tyr Asp Glu Lys Ile Phe Asp Val Val Ala

        580                 585                 590 Lys Tyr Gly Cys Pro Tyr Ile Met Asn His Thr Arg Gly Ser Pro Lys

    595                 600                 605 Thr Met Ser Lys Leu Thr Asn Tyr Glu Ser Asn Thr Asn Asp Asp Ile

610                 615                 620 Ile Glu Tyr Ile Ile Asp Pro Lys Leu Gly His Gln Glu Leu Asp Leu 625                 630                 635                 640 Ser Pro Glu Ile Lys Asn Leu Leu Asn Gly Ile Ser Arg Glu Leu Ser

            645                 650                 655 Leu Gln Met Phe Lys Ala Met Ala Lys Gly Val Lys Lys Trp Gln Ile

        660                 665                 670 Ile Leu Asp Pro Gly Ile Gly Phe Ala Lys Asn Leu Asn Gln Asn Leu

    675                 680                 685 Ala Val Ile Arg Asn Ala Ser Phe Phe Lys Lys Tyr Ser Ile Gln Ile

690                 695                 700 Asn Glu Arg Val Asp Asp Val Thr Ile Lys His Lys Tyr Leu Ser Phe 705                 710                 715                 720 Asn Gly Ala Cys Val Leu Val Gly Thr Ser Arg Lys Lys Phe Leu Gly

            725                 730                 735 Thr Leu Thr Gly Asn Glu Val Pro Leu Asp Arg Val Phe Gly Thr Gly

        740                 745                 750 Ala Thr Val Ser Ala Cys Ile Glu Gln Asn Thr Asp Ile Val Arg Val

    755                 760                 765 His Asp Val Lys Glu Met Lys Asp Val Val Cys Ile Ser Asp Ala Ile

770                 775                 780 Tyr Lys Asn Val 785 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID03 <140> <141> <160>1 <170>PatentIn Ver.2.1 <210>1 <211>647 <212>DNA <213>人工序列 <220> <223>人工序列描述:探针 <400>1 agtattcaat tgggtattcc cagtaataaa aagaaagatc gatcatcaat tatggtgctt 60 aaaaaaatgt gggattctca attacaatca ttatttaaac atgttgacgg tgcatcaaaa 120 tttgtgcaac cattacccaa tagacacatt gtcgcggaaa gtggacgatg gtttgaagtt 180 aatgtgggga attggaaacc aagttatcca actcatttat ttatatttaa tgatttaatt 240 ttaattgccg ttaaaaaatc atcatctagt agtcaggaac ctactacagg gggaagtaat 300 ggtggttcaa aatcgagatt acaagcggtt caatgttggc ccttaactca agtatcatta 360 caacaaatca aatcaccgaa aaaagatgac gataagatgt attttatcaa tcttaaatcc 420 aaatctttaa gttatgtata cctgacggat cgttatgatc attttgtgaa agttacggaa 480 gcatttaata aaggtagaaa tgaaatgatt caaagtgaaa gattattaga ttcaagactt 540 tcatctcctt caaataataa tggagattct aaagaagaga aacgacaatt acgggaatca 600 ttaagaaact caggcaatta taaagaagga gttactgatg atgccgg               647 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID04 <140> <141> <160>2 <170>PatentIn Ver.2.1 <210>1 <211>2373 <212>DNA <213>白色念珠菌 <220> <221>CDS <222>(1)..(2373) <220> <221>基因 <222>(1)..(2373) <223>基因CaBR102 <400>1 atg gat aat ctt gat ccc aat tct agt tta caa gta gag aaa tta cga   48 Met Asp Asn Leu Asp Pro Asn Ser Ser Leu Gln Val Glu Lys Leu Arg  1                5                  10                  15 aac agg aaa agc agg gct gta tgg cag aat aac aac act tct act cat   96 Asn Arg Lys Ser Arg Ala Val Trp Gln Asn Asn Asn Thr Ser Thr His

         20                  25                  30 aat aat cct tat gct aat tta agc act ggt gaa aaa agt agg agt cgc   144 Asn Asn Pro Tyr Ala Asn Leu Ser Thr Gly Glu Lys Ser Arg Ser Arg

     35                  40                  45 cat aac act ggt agt tct tat gtt tct cca tat ggc ggc ggt aat gga   192 His Asn Thr Gly Ser Ser Tyr Val Ser Pro Tyr Gly Gly Gly Asn Gly

 50                  55                  60 gag gag aat gct tat act ggg aat aac aac aaa tca aat act agt ggt   240 Glu Glu Asn Ala Tyr Thr Gly Asn Asn ASn Lys Ser Asn Thr Ser Gly  65                  70                  75                  80 aat tta tta caa gtt cct gga gca gga gga gga gga gat ttg aat tct    288 Asn Leu Leu Gln Val Pro Gly Ala Gly Gly Gly Gly Asp Leu Asn Ser

             85                  90                  95 aat aag aaa caa agt cga aga atg agt att cat gta tca gct cgt caa    336 Asn Lys Lys Gln Ser Arg Arg Met Ser Ile His Val Ser Ala Arg Gln

        100                 105                 110 cat gga aga tca ttt tca caa act ggt cca att gat atg gca aat tta    384 His Gly Arg Ser Phe Ser Gln Thr Gly Pro Ile Asp Met Ala Asn Leu

    115                 120                 125 ccg gca tta cct aaa ata ggt ggt gtt act act agt ggt gtt ggc ggt    432 Pro Ala Leu Pro Lys Ile Gly Gly Val Thr Thr Ser Gly Val Gly Gly

130                 135                 140 gct ggt ggt gat gtt atg aca agg act ggg gga ttg acg ata gaa caa    480 Ala Gly Gly Asp Val Met Thr Arg Thr Gly Gly Leu Thr Ile Glu Gln 145                 150                 155                 160 aaa ata ttc aaa gaa tta agt caa gga tca gca gct gaa gtt gat gat    528 Lys Ile Phe Lys Glu Leu Ser Gln Gly Ser Ala Ala Glu Val Asp Asp

            165                 170                 175 tat tac aag aca tta ttg aaa cag aaa aat tta atc act cgt gac att    576 Tyr Tyr Lys Thr Leu Leu Lys Gln Lys Asn Leu Ile Thr Arg Asp Ile

        180                 185                 190 aag gat aat att aat cag aat caa aaa aat att tta caa tta aca aaa    624 Lys Asp Asn Ile Asn Gln Asn Gln Lys Asn Ile Leu Gln Leu Thr Lys

    195                 200                 205 gac ttg aaa gag acc caa gaa gaa ttg att gaa ttg aga gga acc act    672 Asp Leu Lys Glu Thr Gln Glu Glu Leu Ile Glu Leu Arg Gly Thr Thr

210                 215                 220 aaa gaa tta tat gaa gtt tta ggt tat ttc aaa gaa tca gct caa cgt    720 Lys Glu Leu Tyr Glu Val Leu Gly Tyr Phe Lys Glu Ser Ala Gln Arg 225                 230                 235                 240 aga tta gaa ttg gaa ttt gaa cca gaa aca caa aaa gaa ctt cat ctg    768 Arg Leu Glu Leu Glu Phe Glu Pro Glu Thr Gln Lys Glu Leu His Leu

            245                 250                 255 cct caa aaa agt aat caa ttg ggt att cct agt aat aaa aag aaa gat    816 Pro Gln Lys Ser Asn Gln Leu Gly Ile Pro Ser Asn Lys Lys Lys Asp

        260                 265                 270 cga tca tca att atg gtg ctt aaa aaa atg tgg gat tct caa tta caa    864 Arg Ser Ser Ile Met Val Leu Lys Lys Met Trp Asp Ser Gln Leu Gln

    275                 280                 285 tca tta ttt aaa cat gtt gac ggt gca tca aaa ttt gtc caa cca tta    912 Ser Leu Phe Lys His Val Asp Gly Ala Ser Lys Phe Val Gln Pro Leu

290                 295                 300 ccc aat aga cac att gtc gcg gaa agt gga cga tgg ttt gaa gtt aat    960 Pro Asn Arg His Ile Val Ala Glu Ser Gly Arg Trp Phe Glu Val Asn 305                 310                 315                 320 gtg ggg aat tgg aaa cca agt tat cca act cat tta ttt ata ttt aat    1008 Val Gly Asn Trp Lys Pro Ser Tyr Pro Thr His Leu Phe Ile Phe Asn

            325                 330                 335 gat tta att tta att act gtt aaa aaa tca tca tct agt agt cag gaa    1056 Asp Leu Ile Leu Ile Thr Val Lys Lys Ser Ser Ser Ser Ser Gln Glu

        340                 345                 350 cct act aca ggg gga agt aat ggt ggt tca aaa tcg aga tta caa gcg    1104 Pro Thr Thr Gly Gly Ser Asn Gly Gly Ser Lys Ser Arg Leu Gln Ala

    355                 360                 365 gtt caa tgt tgg ccc tta act caa gta tca tta caa caa atc aaa tca    1152 Val Gln Cys Trp Pro Leu Thr Gln Val Ser Leu Gln Gln Ile Lys Ser

370                 375                 380 ccg aaa aaa gat gac gat aag atg tat ttt atc aat ctt aaa tcc aaa    1200 Pro Lys Lys Asp Asp Asp Lys Met Tyr Phe Ile Asn Leu Lys Ser Lys 385                 390                 395                 400 tct tta agt tat gta tac ctg acg gat cgt tat gat cat ttt gtg aaa    1248 Ser Leu Ser Tyr Val Tyr Leu Thr Asp Arg Tyr Asp His Phe Val Lys

            405                 410                 415 gtt acg gaa gca ttt aat aaa ggt aga aat gaa atg att caa agt gaa    1296 Val Thr Glu Ala Phe Asn Lys Gly Arg Asn Glu Met Ile Gln Ser Glu

        420                 425                 430 aga tta tta gat tca aga ctt tca tct cct tca aat aat aat gga gat    1344 Arg Leu Leu Asp Ser Arg Leu Ser Ser Pro Ser Asn Asn Asn Gly Asp

    435                 440                 445 tct aaa gaa gag aaa cga caa tta cgg gaa tca tta aga aac tca ggc    1392 Ser Lys Glu Glu Lys Arg Gln Leu Arg Glu Ser Leu Arg Asn Ser Gly

450                 455                 460 aat tat aaa gaa gga gtt act gat gat gcc ggt gga gct gca act ggt   1440 Asn Tyr Lys Glu Gly Val Thr Asp Asp Ala Gly Gly Ala Ala Thr Gly 465                 470                 475                 480 ggt ggt agg aaa agt gcc ggt act cct aat aga aat agt act gat tac   1488 Gly Gly Arg Lys Ser Ala Gly Thr Pro Asn Arg Asn Ser Thr Asp Tyr

            485                 490                 495 gtt tta cat gat ata tct gct cga gta cat tca cgt aat cga tca caa   1536 Val Leu His Asp Ile Ser Ala Arg Val His Ser Arg Asn Arg Ser Gln

        500                 505                 510 gat tta ggg aat aat ttc aaa tta gct aat aat ggg aaa tca caa ttt   1584 Asp Leu Gly Asn Asn Phe Lys Leu Ala Asn Asn Gly Lys Ser Gln Phe

    515                 520                 525 ttc aat gaa atc aaa act tta gaa gat cga tta gat gat gtt gac gtt   1632 Phe Asn Glu Ile Lys Thr Leu Glu Asp Arg Leu Asp Asp Val Asp Val

530                 535                 540 gaa ata tcg cat aat caa tat gct gaa gcc gtg gaa tta ata tca ata   1680 Glu Ile Ser His Asn Gln Tyr Ala Glu Ala Val Glu Leu Ile Ser Ile 545                 550                 555                 560 att gaa tct aaa tta cgt aat att gaa aat gca tta act aat caa cgt   1728 Ile Glu Ser Lys Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Leu Thr Asn Gln Arg

            565                 570                 575 aat gga ggt aaa aat gtc aat att gct gat gaa tta tta ctt tta gat   1776 Asn Gly Gly Lys Asn Val Asn Ile Ala Asp Glu Leu Leu Leu Leu Asp

        580                 585                 590 gta tca aaa ttg aaa att aaa aat cgg aaa gaa aat gta tct aat gga   1824 Val Ser Lys Leu Lys Ile Lys Asn Arg Lys Glu Asn Val Ser Asn Gly

    595                 600                 605 tta ata ttt gat tta caa cat aat ata gct aaa ctt aaa caa gat gat   1872 Leu Ile Phe Asp Leu Gln His Asn Ile Ala Lys Leu Lys Gln Asp Asp

610                 615                 620 att gat aat att ttg acg tta ttt gat aat tta gag caa tta gat cga   1920 Ile Asp Asn Ile Leu Thr Leu Phe Asp Asn Leu Glu Gln Leu Asp Arg 625                 630                 635                 640 ggg gtt caa gga tat ttg gat tca atg tca gct tat tta tca act aca   1968 Gly Val Gln Gly Tyr Leu Asp Ser Met Ser Ala Tyr Leu Ser Thr Thr

            645                 650                 655 gta tca aaa tta att gtt ggt tta caa gga tca acg aaa atc gat gtt   2016 Val Ser Lys Leu Ile Val Gly Leu Gln Gly Ser Thr Lys Ile Asp Val

        660                 665                 670 gtt aat tat ctt tcc aat tta atg gtt att aat gta tcg att gtg aaa   2064 Val Asn Tyr Leu Ser Asn Leu Met Val Ile Asn Val Ser Ile Val Lys

    675                 680                 685 cgt aca att caa act tat gaa caa ata att gct cca att tta aaa cgt   2112 Arg Thr Ile Gln Thr Tyr Glu Gln Ile Ile Ala Pro Ile Leu Lys Arg

690                 695                 700 cat ggt gat gtt gat tca agt gga ttg att aat tgg tgt att gat gaa   2160 His Gly Asp Val Asp Ser Ser Gly Leu Ile Asn Trp Cys Ile Asp Glu 705                 710                 715                 720 ttt act aaa ctt tgt aaa caa att aaa aaa cat ttg tat gga aca ttg   2208 Phe Thr Lys Leu Cys Lys Gln Ile Lys Lys His Leu Tyr Gly Thr Leu

            725                 730                 735 ttg ata tct tct ggg att aat atg gaa act gat gaa cca att tat aaa   2256 Leu Ile Ser Ser Gly Ile Asn Met Glu Thr Asp Glu Pro Ile Tyr Lys

        740                 745                 750 gtt aaa gaa aga aaa tta tat gat aat ttc ttg aag att atg caa cca   2304 Val Lys Glu Arg Lys Leu Tyr Asp Asn Phe Leu Lys Ile Met Gln Pro

    755                 760                 765 caa ttg gaa gaa tta aaa ctg gtg gga tta aat gtt gat tat ata ttt   2352 Gln Leu Glu Glu Leu Lys Leu Val Gly Leu Asn Val Asp Tyr Ile Phe

770                 775                 780 gag tct ata tta aat ctt gaa                                       2373 Glu Ser Ile Leu Asn Leu Glu 785                 790 <210>2 <211>791 <212>PRT <213>白色念珠菌 <400>2 Met Asp Asn Leu Asp Pro Asn Ser Ser Leu Gln Val Glu Lys Leu Arg   1               5                  10                  15 Asn Arg Lys Ser Arg Ala Val Trp Gln Asn Asn Asn Thr Ser Thr His

         20                  25                  30 Asn Asn Pro Tyr Ala Asn Leu Ser Thr Gly Glu Lys Ser Arg Ser Arg

     35                  40                  45 His Asn Thr Gly Ser Ser Tyr Val Ser Pro Tyr Gly Gly Gly Asn Gly

 50                  55                  60 Glu Glu Asn Ala Tyr Thr Gly Asn Asn Asn Lys Ser Asn Thr Ser Gly  65                  70                  75                  80 Asn Leu Leu Gln Val Pro Gly Ala Gly Gly Gly Gly Asp Leu Asn Ser

             85                  90                  95 Asn Lys Lys Gln Ser Arg Arg Met Ser Ile His Val Ser Ala Arg Gln

        100                 105                 110 His Gly Arg Ser Phe Ser Gln Thr Gly Pro Ile Asp Met Ala Asn Leu

    115                 120                 125 Pro Ala Leu Pro Lys Ile Gly Gly Val Thr Thr Ser Gly Val Gly Gly

130                 135                 140 Ala Gly Gly Asp Val Met Thr Arg Thr Gly Gly Leu Thr Ile Glu Gln 145                 150                 155                 160 Lys Ile Phe Lys Glu Leu Ser Gln Gly Ser Ala Ala Glu Val Asp Asp

            165                 170                 175 Tyr Tyr Lys Thr Leu Leu Lys Gln Lys Asn Leu Ile Thr Arg Asp Ile

        180                 185                 190 Lys Asp Asn Ile Asn Gln Asn Gln Lys Asn Ile Leu Gln Leu Thr Lys

    195                 200                 205 Asp Leu Lys Glu Thr Gln Glu Glu Leu Ile Glu Leu Arg Gly Thr Thr

210                 215                 220 Lys Glu Leu Tyr Glu Val Leu Gly Tyr Phe Lys Glu Ser Ala Gln Arg 225                 230                 235                 240 Arg Leu Glu Leu Glu Phe Glu Pro Glu Thr Gln Lys Glu Leu His Leu

            245                 250                 255 Pro Gln Lys Ser Asn Gln Leu Gly Ile Pro Ser Asn Lys Lys Lys Asp

        260                 265                 270 Arg Ser Ser Ile Met Val Leu Lys Lys Met Trp Asp Ser Gln Leu Gln

    275                 280                 285 Ser Leu Phe Lys His Val Asp Gly Ala Ser Lys Phe Val Gln Pro Leu

290                 295                 300 Pro Asn Arg His Ile Val Ala Glu Ser Gly Arg Trp Phe Glu Val Asn 305                 310                 315                 320 Val Gly Asn Trp Lys Pro Ser Tyr Pro Thr His Leu Phe Ile Phe Asn

            325                 330                 335 Asp Leu Ile Leu Ile Thr Val Lys Lys Ser Ser Ser Ser Ser Gln Glu

        340                 345                 350 Pro Thr Thr Gly Gly Ser Asn Gly Gly Ser Lys Ser Arg Leu Gln Ala

    355                 360                 365 Val Gln Cys Trp Pro Leu Thr Gln Val Ser Leu Gln Gln Ile Lys Ser

370                 375                 380 Pro Lys Lys Asp Asp Asp Lys Met Tyr Phe Ile Asn Leu Lys Ser Lys 385                 390                 395                 400 Ser Leu Ser Tyr Val Tyr Leu Thr Asp Arg Tyr Asp His Phe Val Lys

            405                 410                 415 Val Thr Glu Ala Phe Asn Lys Gly Arg Asn Glu Met Ile Gln Ser Glu

        420                 425                 430 Arg Leu Leu Asp Ser Arg Leu Ser Ser Pro Ser Asn Asn Asn Gly Asp

    435                 440                 445 Ser Lys Glu Glu Lys Arg Gln Leu Arg Glu Ser Leu Arg Asn Ser Gly

450                 455                 460 Asn Tyr Lys Glu Gly Val Thr Asp Asp Ala Gly Gly Ala Ala Thr Gly 465                 470                 475                 480 Gly Gly Arg Lys Ser Ala Gly Thr Pro Asn Arg Asn Ser Thr Asp Tyr

            485                 490                 495 Val Leu His Asp Ile Ser Ala Arg Val His Ser Arg Asn Arg Ser Gln

        500                 505                 510 Asp Leu Gly Asn Asn Phe Lys Leu Ala Asn Asn Gly Lys Ser Gln Phe

    515                 520                 525 Phe Asn Glu Ile Lys Thr Leu Glu Asp Arg Leu Asp Asp Val Asp Val

530                 535                 540 Glu Ile Ser His Asn Gln Tyr Ala Glu Ala Val Glu Leu Ile Ser Ile 545                 550                 555                     560 Ile Glu Ser Lys Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Leu Thr Asn Gln Arg

            565                 570                 575 Asn Gly Gly Lys Asn Val Asn Ile Ala Asp Glu Leu Leu Leu Leu Asp

        580                 585                 590 Val Ser Lys Leu Lys Ile Lys Asn Arg Lys Glu Asn Val Ser Asn Gly

    595                 600                 605 Leu Ile Phe Asp Leu Gln His Asn Ile Ala Lys Leu Lys Gln Asp Asp

610                 615                 620 Ile Asp Asn Ile Leu Thr Leu Phe Asp Asn Leu Glu Gln Leu Asp Arg 625                 630                 635                 640 Gly Val Gln Gly Tyr Leu Asp Ser Met Ser Ala Tyr Leu Ser Thr Thr

            645                 650                 655 Val Ser Lys Leu Ile Val Gly Leu Gln Gly Ser Thr Lys Ile Asp Val

        660                 665                 670 Val Asn Tyr Leu Ser Asn Leu Met Val Ile Asn Val Ser Ile Val Lys

    675                 680                 685 Arg Thr Ile Gln Thr Tyr Glu Gln Ile Ile Ala Pro Ile Leu Lys Arg

690                 695                 700 His Gly Asp Val Asp Ser Ser Gly Leu Ile Asn Trp Cys Ile Asp Glu 705                 710                 715                 720 Phe Thr Lys Leu Cys Lys Gln Ile Lys Lys His Leu Tyr Gly Thr Leu

            725                 730                 735 Leu Ile Ser Ser Gly Ile Asn Met Glu Thr Asp Glu Pro Ile Tyr Lys

        740                 745                 750 Val Lys Glu Arg Lys Leu Tyr Asp Asn Phe Leu Lys Ile Met Gln Pro

    755                 760                 765 Gln Leu Glu Glu Leu Lys Leu Val Gly Leu Asn Val Asp Tyr Ile Phe

770                 775                 780 Glu Ser Ile Leu Asn Leu Glu 785                 790 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID05 <140> <141> <160>1 <170>PatentIn Ver.2.1 <210>1 <211>343 <212>DNA <213>人工序列 <220> <223>人工序列描述:探针 <400>1 ctgcagtaaa ccctccagat ataacagact ctttatgtcc agtgatttcg ccaacaaatc 60 ttggtggttg ggtgtgtgtg gtccataagt atgccgtgtt gtcaccaccc ccagtcaata 120 ccattggcaa tttaggatgt gaaaaaatag taaatatact atcggtatgt ttatcaaaat 180 aagtccatga attgttggac atgtcaattt ctaaagtctc atgctcatca tctaattcca 240 tctcctcatc ttcttcatcg ggtggcgctt gatcatcatc tgcaacttcc tcagccactt 300 cattaacatt gatatattct tcttgagtat cgtctacgac gtc                   343 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID06 <140> <141> <160>2 <170>patentIn Ver.2.1 <210>1 <211>1248 <212>DNA <213>白色念珠菌 <220> <221>CDS <222>(1)..(1245) <220> <222>基因 <222>(1)..(1245) <223>基因CaIR012 <400>1 atg tca cac caa caa gaa gac gtc gta gac gat act caa gaa gaa tat   48 Met Ser His Gln Gln Glu Asp Val Val Asp Asp Thr Gln Glu Glu Tyr   1               5                  10                  15 atc aat gtt aat gaa gtg gct gag gaa gtt gca gat gat gat caa gcg   96 Ile Asn Val Asn Glu Val Ala Glu Glu Val Ala Asp Asp Asp Gln Ala

         20                  25                  30 cca ccc gat gaa gaa gat gag gag atg gaa tta gat gat gag cat gag   144 Pro Pro Asp Glu Glu Asp Glu Glu Met Glu Leu Asp Asp Glu His Glu

     35                  40                  45 act tta gaa att gac atg tcc aac aat tca tgg act tat ttt gat aaa   192 Thr Leu Glu Ile Asp Met Ser Asn Asn Ser Trp Thr Tyr Phe Asp Lys

 50                  55                  60 cat acc gat agt ata ttt act att ttt tca cat cct aaa ttg cca atg   240 His Thr Asp Ser Ile Phe Thr Ile Phe Ser His Pro Lys Leu Pro Met  65                  70                  75                  80 gta ttg act ggg ggt ggt gac aac acg gca tac tta tgg acc aca cac   288 Val Leu Thr Gly Gly Gly Asp Asn Thr Ala Tyr Leu Trp Thr Thr His

             85                  90                  95 acc caa cca cca aga ttt gtc ggc gaa atc act gga cat aaa gag tct   336 Thr Gln Pro Pro Arg Phe Val Gly Glu Ile Thr Gly His Lys Glu Ser

        100                 105                 110 gtt ata tct gga ggg ttt act gca gac ggc aag ttt gtt gtt act gca   384 Val Ile Ser Gly Gly Phe Thr Ala Asp Gly Lys Phe Val Val Thr Ala

    115                 120                 125 gac atg aat gga tta att caa gtt ttc aaa gcc aca aaa gga ggt gaa   432 Asp Met Asn Gly Leu Ile Gln Val Phe Lys Ala Thr Lys Gly Gly Glu

130                 135                 140 cag tgg gtg aaa ttt ggt gaa ttg gac gaa gtt gaa gaa gtg ttg ttt   480 Gln Trp Val Lys Phe Gly Glu Leu Asp Glu Val Glu Glu Val Leu Phe 145                 150                 155                 160 gtt act gtg cat cca aca tta cca ttc ttt gcc ttt ggt gct acc gat   528 Val Thr Val His Pro Thr Leu Pro Phe Phe Ala Phe Gly Ala Thr Asp

            165                 170                 175 gga tct ata tgg gtc tac caa ata gac gaa tcc agt aaa ctg cta gtg   576 Gly Ser Ile Trp Val Tyr Gln Ile Asp Glu Ser Ser Lys Leu Leu Val

        180                 185                 190 caa att atg tct ggg ttc tca cac aca tta gaa tgt aat ggt gct gta   624 Gln Ile Met Ser Gly Phe Ser His Thr Leu Glu Cys Asn Gly Ala Val

    195                 200                 205 ttt ata caa gga aaa gat gaa aat gat ttg aca ttg gtc tct ata agt   672 Phe Ile Gln Gly Lys Asp Glu Asn Asp Leu Thr Leu Val Ser Ile Ser

210                 215                 220 gaa gat ggt act gtg gtg aac tgg aac tgt ttt aca gga caa gtg aat   720 Glu Asp Gly Thr Val Val Asn Trp Asn Cys Phe Thr Gly Gln Val Asn 225                 230                 235                 240 tat aaa ttg caa cct cat gat gac ttt aaa gga gtt gaa agt ccg tgg   768 Tyr Lys Leu Gln Pro His Asp Asp Phe Lys Gly Val Glu Ser Pro Trp

            245                 250                 255 gtc acg gtc aaa gta cat ggt aat ctt gtg gcc att ggt ggc aga gat   816 Val Thr Val Lys Val His Gly Asn Leu Val Ala Ile Gly Gly Arg Asp

        260                 265                 270 ggc cag cta tca att gtg aac aat gac act ggt aaa atc gtt cat act    864 Gly Gln Leu Ser Ile Val Asn Asn Asp Thr Gly Lys Ile Val His Thr

    275                 280                 285 ctt aaa aca ttg gat aat gtc gac gac att gca Gaa ctc tca att gag    912 Leu Lys Thr Leu Asp Asn Val Asp Asp Ile Ala Glu Leu Ser Ile Glu

290                 295                 300 gca ttg agt tgg tgt gaa agc aaa aat att aac ctc ttg gca gtg ggt    960 Ala Leu Ser Trp Cys Glu Ser Lys Asn Ile Asn Leu Leu Ala Val Gly 305                 310                 315                 320 ttg gtt tct ggt gac gtt tta tta ttt gat act cag caa tgg aga ttg    1008 Leu Val Ser Gly Asp Val Leu Leu Phe Asp Thr Gln Gln Trp Arg Leu

            325                 330                 335 aga aag aac ttg aaa gtt gac gat gcc atc acc aaa tta caa ttt gtt    1056 Arg Lys Asn Leu Lys Val Asp Asp Ala Ile Thr Lys Leu Gln Phe Val

        340                 345                 350 ggc gaa acc ccc att ttg gtg gga agt agt atg gat ggt aaa att tac    1104 Gly Glu Thr Pro Ile Leu Val Gly Ser Ser Met Asp Gly Lys Ile Tyr

    355                 360                 365 aaa tgg gac gct aga act ggt gaa gag ttg ttt gct ggt gtg gga cac    1152 Lys Trp Asp AlaArg Thr Gly Glu Glu Leu Phe Ala Gly Val Gly His

370                375                 380 aac atg gga gta ttg gac ttt gct att tta gat gga ggt aaa aag ttg    1200 Asn Met Gly Val Leu Asp Phe Ala Ile Leu Asp Gly Gly Lys Lys Leu 385                 390                 395                 400 gtt act gct ggt gat gaa ggt gtt tca ttg gtc ttt gta cat gaa tag    1248 Val Thr Ala Gly Asp Glu Gly Val Ser Leu Val Phe Val His Glu

            405                 410                 415 <210>2 <211>4l5 <212>PRT <213>白色念珠菌 <400>2 Met Ser His Gln Gln Glu Asp Val Val Asp Asp Thr Gln Glu Glu Tyr   1               5                  10                  15 Ile Asn Val Asn Glu Val Ala Glu Glu Val Ala Asp Asp Asp Gln Ala

         20                  25                  30 Pro Pro Asp Glu Glu Asp Glu Glu Met Glu Leu Asp Asp Glu His Glu

     35                  40                  45 Thr Leu Glu Ile Asp Met Ser Asn Asn Ser Trp Thr Tyr Phe Asp Lys

 50                  55                  60 His Thr Asp Ser Ile Phe Thr Ile Phe Ser His Pro Lys Leu Pro Met  65                  70                  75                  80 Val Leu Thr Gly Gly Gly Asp ASn Thr Ala Tyr Leu Trp Thr Thr His

            85                   90                  95 Thr Gln Pro Pro Arg Phe Val Gly Glu Ile Thr Gly His Lys Glu Ser

        100                 105                 110 Val Ile Ser Gly Gly Phe Thr Ala Asp Gly Lys Phe Val Val Thr Ala

    115                 120                 125 Asp Met Asn Gly Leu Ile Gln Val Phe Lys Ala Thr Lys Gly Gly Glu

130                 135                 140 Gln Trp Val Lys Phe Gly Glu Leu Asp Glu Val Glu Glu Val Leu Phe 145                 150                 155                 160 Val Thr Val His Pro Thr Leu Pro Phe Phe Ala Phe Gly Ala Thr Asp

            165                 170                 175 Gly Ser Ile Trp Val Tyr Gln Ile Asp Glu Ser Ser Lys Leu Leu Val

        180                 185                 190 Gln Ile Met Ser Gly Phe Ser His Thr Leu Glu Cys Asn Gly Ala Val

    195                 200                 205 Phe Ile Gln Gly Lys Asp Glu Asn Asp Leu Thr Leu Val Ser Ile Ser

210                 215                 220 Glu Asp Gly Thr Val Val Asn Trp Asn Cys Phe Thr Gly Gln Val Asn 225                 230                 235                 240 Tyr Lys Leu Gln Pro His Asp Asp Phe Lys Gly Val Glu Ser Pro Trp

            245                 250                 255 Val Thr Val Lys Val His Gly Asn Leu Val Ala Ile Gly Gly Arg Asp

        260                 265                 270 Gly Gln Leu Ser Ile Val Asn Asn Asp Thr Gly Lys Ile Val His Thr

    275                 280                 285 Leu Lys Thr Leu Asp Asn Val Asp Asp Ile Ala Glu Leu Ser Ile Glu

290                 295                 300 Ala Leu Ser Trp Cys Glu Ser Lys Asn Ile Asn Leu Leu Ala Val Gly 305                 310                 315                 320 Leu Val Ser Gly Asp Val Leu Leu Phe Asp Thr Gln Gln Trp Arg Leu

            325                 330                 335 Arg Lys Asn Leu Lys Val Asp Asp Ala Ile Thr Lys Leu Gln Phe Val

        340                 345                 350 Gly Glu Thr Pro Ile Leu Val Gly Ser Ser Met Asp Gly Lys Ile Tyr

    355                 360                 365 Lys Trp Asp Ala Arg Thr Gly Glu Glu Leu Phe Ala Gly Val Gly His

370                 375                 380 Asn Met Gly Val Leu Asp Phe Ala Ile Leu Asp Gly Gly Lys Lys Leu 385                 390                 395                 400 Val Thr Ala Gly Asp Glu Gly Val Ser Leu Val Phe Val His Glu

            405                 410                 415 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID07 <140> <141> <160>2 <170>PatentIn Ver.2.1 <210>1 <211>5544 <212>DNA <213>白色念珠菌 <220> <221>CDS <222>(1)..(5541) <220> <221>基因 <222>(1)..(5541) <223>基因CaJLO39 <400>1 atg agt ggc ata ttt aat tgg tcg ctg gat gtg ttt gcc gat att tat   48 Met Ser Gly Ile Phe Asn Trp Ser Leu Asp Val Phe Ala Asp Ile Tyr   1               5                  10                  15 aac acc ctc aag ttt gag tcc aat ata gat ttg gat aca atc gac ttc   96 Asn Thr Leu Lys Phe Glu Ser Asn Ile Asp Leu Asp Thr Ile Asp Phe

         20                  25                  30 acc agc atc aag aat gat ctt gca aat gtt ttg att aca cca gtc cct   144 Thr Ser Ile Lys Asn Asp Leu Ala Asn Val Leu Ile Thr Pro Val Pro

     35                  40                  45 ctg gat caa tca cgt agc aaa ctt gga gac gca tca aaa cca gtg gcg   192 Leu Asp Gln Ser Arg Ser Lys Leu Gly Asp Ala Ser Lys Pro Val Ala

 50                  55                  60 ttg ccc agt gga gat gag gtg aaa ttg aat caa gca tca att gaa att   240 Leu Pro Ser Gly Asp Glu Val Lys Leu Asn Gln Ala Ser Ile Glu Ile  65                  70                  75                  80 act gga gtt tta tca aat gaa ttg gat tta gat gaa cta aat aca gca   288 Thr Gly Val Leu Ser Asn Glu Leu Asp Leu Asp Glu Leu Asn Thr Ala

             85                  90                  95 gag ttg tta tat aac gca agt gac ttg agc tac aag aag gga acg tcc   336 Glu Leu Leu Tyr Asn Ala Ser Asp Leu Ser Tyr Lys Lys Gly Thr Ser

        100                 105                 110 att ggc gat agt gct cga ttg gct tat tat tta aga gct cat tat ata   384 Ile Gly Asp Ser Ala Arg Leu Ala Tyr Tyr Leu Arg Ala His Tyr Ile

    115                 120                 125 cta aac att gtt gga tac tta gtt tcg cat aaa cgt tta gat atc atc   432 Leu Asn Ile Val Gly Tyr Leu Val Ser His Lys Arg Leu Asp Ile Ile

130                 135                 140 act aac aac aac caa gtg ttg ttt gac aat att ttg aaa agt ttc agc   480 Thr Asn Asn Asn Gln Val Leu Phe Asp Asn Ile Leu Lys Ser Phe Ser 145                 150                 155                 160 aag att tat act ttg agt ggt aaa tta aat gac atg att gac aag caa   528 Lys Ile Tyr Thr Leu Ser Gly Lys Leu Asn Asp Met Ile Asp Lys Gln

            165                 170                 175 aaa gtt acc ggc gac atc aac aat ctt gca ttt atc aat tgt atc aat   576 Lys Val Thr Gly Asp Ile Asn Asn Leu Ala Phe Ile Asn Cys Ile Asn

        180                 185                 190 tat tcc aga agt cag ttg ttt aat gca cac gag tta ttg gga caa gtt   624 Tyr Ser Arg Ser Gln Leu Phe Asn Ala His Glu Leu Leu Gly Gln Val

    195                 200                 205 gta ttt gga tta gcg gat aat tat tat gag agt tat ggc aca cta aac   672 Val Phe Gly Leu Ala Asp Asn Tyr Tyr Glu Ser Tyr Gly Thr Leu Asn

210                 215                 220 aac tat aat tcc tta gtg gag ttt ata ctg aaa aat atc agc gat gaa   720 Asn Tyr Asn Ser Leu Val Glu Phe Ile Leu Lys Asn Ile Ser Asp Glu 225                 230                 235                 240 gat gtt ttt gtt atc cat ttt tta cca tcc act tta caa ttg ttc aag   768 Asp Val Phe Val Ile His Phe Leu Pro Ser Thr Leu Gln Leu Phe Lys

            245                 250                 255 aaa tta ctt caa cta ggt gag gaa tct tta gtc gat cag ttt tac aag   816 Lys Leu Leu Gln Leu Gly Glu Glu Ser Leu Val Asp Gln Phe Tyr Lys

        260                 265                 270 act ata acc tct tcc ata cta aaa gat tat gaa gcc aac aat ttt tcc    864 Thr Ile Thr Ser Ser Ile Leu Lys Asp Tyr Glu Ala Asn Asn Phe Ser

    275                 280                 285 aaa agt gaa gat att gac ttg tca aaa tca aaa ttg tct ggc ttt gaa    912 Lys Ser Glu Asp Ile Asp Leu Ser Lys Ser Lys Leu Ser Gly Phe Glu

290                 295                 300 ata gtc aca agc ttt att ttt cta act gag ttt att cca tgg tgc aag    960 Ile Val Thr Ser Phe Ile Phe Leu Thr Glu Phe Ile Pro Trp Cys Lys 305                 310                 315                 320 cag ctg tca agt aga acc gcg aaa tac gat ttc aaa gat gat ata tta    1008 Gln Leu Ser Ser Arg Thr Ala Lys Tyr Asp Phe Lys Asp Asp Ile Leu

            325                 330                 335 aag tat atg gaa ttc ttg ata agt tat gga gtt atg gaa cga tta tta    1056 Lys Tyr Met Glu Phe Leu Ile Set Tyr Gly Val Met Glu Arg Leu Leu

        340                 345                 350 tca tac tgt tct gaa acc agc aat gca aaa act cag caa gtg tac gac    1104 Ser Tyr Cys Ser Glu Thr Ser Asn Ala Lys Thr Gln Gln Val Tyr Asp

    355                 360                 365 tgg tca aac atg tac gat ttc aga gca ttg ctt caa aag aat ttc cca    1152 Trp Ser Asn Met Tyr Asp Phe Arg Ala Leu Leu Gln Lys Asn Phe Pro

370                 375                 380 cga ctt aca cca gca aaa ttt cat tat cct ggc aat caa gaa ttg ttg    1200 Arg Leu Thr Pro Ala Lys Phe His Tyr Pro Gly Asn Gln Glu Leu Leu 385                 390                 395                 400 aat gca gtt aga ccg gga tat gaa aat ata tcc aaa ttg att gac att    1248 Asn Ala Val Arg Pro Gly Tyr Glu Asn Ile Ser Lys Leu Ile Asp Ile

            405                 410                 415 tcc ttt ttg acg tta gat cca tcg ctt aat gag acg ttg gtt tca cct    1296 Ser Phe Leu Thr Leu Asp Pro Ser Leu Asn Glu Thr Leu Val Ser Pro

        420                 425                 430 ttt ttc cag agc ttt ttc agt gtg ttt ata tct aat gcc gca gtt gtt    1344 Phe Phe Gln Ser Phe Phe Ser Val Phe Ile Ser Asn Ala Ala Val Val

    435                 440                 445 atg acc tct tta agg gac tca gag gaa gat ttt gtt tta tcg tcg ttg    1392 Met Thr Ser Leu Arg Asp Ser Glu Glu Asp Phe Val Leu Ser Ser Leu

450                 455                 460 aat gaa agt gac gaa gag gaa gaa gaa gaa gaa agc gac agc gac gaa   1440 Asn Glu Ser Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Ser Asp Ser Asp Glu 465                 470                 475                 480 gat tct tcg acc cca aaa aac aaa gaa aaa tca gct ggg tta gac ctt   1488 Asp Ser Ser Thr Pro Lys Asn Lys Glu Lys Ser Ala Gly Leu Asp Leu

            485                 490                 495 gac aag att gcc cag cgt gct gaa tta gaa agg ttc tac ttg gct ttc   1536 Asp Lys Ile Ala Gln Arg Ala Glu Leu Glu Arg Phe Tyr Leu Ala Phe

        500                 505                 510 gcg tac acc tac aac aat cga cct gaa ttg tgt gcg tta ttt tgg ggg   1584 Ala Tyr Thr Tyr Asn Asn Arg Pro Glu Leu Cys Ala Leu Phe Trp Gly

    515                 520                 525 aac gag cag gta act cat gac att ata gga ttt att tcc tgg gga ctt   1632 Asn Glu Gln Val Thr His Asp Ile Ile Gly Phe Ile Ser Trp Gly Leu

530                 535                 540 gct aat aat acg tct ccg ttg atc act gca aca ttc tgc tta cta tta   1680 Ala Asn Asn Thr Ser Pro Leu Ile Thr Ala Thr Phe Cys Leu Leu Leu 545                 550                 555                 560 ggg tcg ttg gca tct gct ggt gca gag gca act tca agg ata tgg gag   1728 Gly Ser Leu Ala Ser Ala Gly Ala Glu Ala Thr Ser Arg Ile Trp Glu

            565                 570                 575 att ctt gta cac aac aat aac aac gca agt acg aga aaa aat gat ttt   1776 Ile Leu Val His Asn Asn Asn Asn Ala Ser Thr Arg Lys Asn Asp phe

        580                 585                 590 tca aag gta tcc gtt gac tcc ctt tat gat tcg ttg aaa tat tac att   1824 Ser Lys Val Ser Val Asp Ser Leu Tyr Asp Ser Leu Lys Tyr Tyr Ile

    595                 600                 605 gac tct tta aat gaa agc ttt gaa caa gat tta aat gcc caa ttg atg   1872 Asp Ser Leu Asn Glu Ser Phe Glu Gln Asp Leu Asn Ala Gln Leu Met

610                 615                 620 ttg aat cag aag aaa caa gat ttt ctc ttc agc acc aca aca agc aaa   1920 Leu Asn Gln Lys Lys Gln Asp Phe Leu Phe Ser Thr Thr Thr Ser Lys 625                 630                 635                 640 cag gac ctt gat gat tct ggc gag aat aga att gtt ata gag ttg gcc   1968 Gln Asp Leu Asp Asp ser Gly Glu Asn Arg Ile Val Ile Glu Leu Ala

            645                 650                 655 gag gat tca ctt gtc ctc att tca ggg ttt att caa tta ctt tct gca   2016 Glu Asp Ser Leu Val Leu Ile Ser Gly Phe Ile Gln Leu Leu Ser Ala

        660                 665                 670 att gtg aag aat ttg aac act aag aat gaa aga agc aaa gaa atc aaa   2064 Ile Val Lys Asn Leu Asn Thr Lys Asn Glu Arg Ser Lys Glu Ile Lys

    675                 680                 685 tcc gtg gta tac act agattc tca cca atc att aaa ggg ttt tta aaa    2112 Ser Val Val Tyr Thr Arg Phe Ser Pro Ile Ile Lys Gly Phe Leu Lys

690                 695                 700 ttc gat aat ttg atc aat ggt agc agg ttc ctt caa gtt gat gct agc   2160 Phe Asp Asn Leu Ile Asn Gly Ser Arg Phe Leu Gln Val Asp Ala Ser 705                 710                 715                 720 att caa agc aca aac aac ccc aaa ttt att gat ttg cca aat gtt ttc   2208 Ile Gln Ser Thr Asn Asn Pro Lys Phe Ile Asp Leu Pro Asn Val Phe

            725                 730                 735 gtc agt gat gac tcg aga att ata ttg acg aac ctc att cta acc ttt   2256 Val Ser Asp Asp Ser Arg Ile Ile Leu Thr Asn Leu Ile Leu Thr Phe

        740                 745                 750 tta ggc gat ttt gtt acc aac gat agt gat ccg tat att aga tat gag   2304 Leu Gly Asp Phe Val Thr Asn Asp Ser Asp Pro Tyr Ile Arg Tyr Glu

    755                 760                 765 att tgg cgt tta gtc gat cga tgg atg tac cag ggg ttg cat agt ttg   2352 Ile Trp Arg Leu Val Asp Arg Trp Met Tyr Gln Gly Leu His Ser Leu

770                 775                 780 cca gaa gac aag aaa gat gat gct ttt aga cat att aag aga aag tat   2400 Pro Glu Asp Lys Lys Asp Asp Ala Phe Arg His Ile Lys Arg Lys Tyr 785                 790                 795                 800 aac agt aag aaa aat gtt ccc atc aat caa gca ttt tca aca aac cta   2448 Asn Ser Lys Lys Asn Val Pro Ile Asn Gln Ala Phe Ser Thr Asn Leu

            805                 810                 815 act cat ctt agt caa att ggg aat ttc act gtc ttg gtg aaa aaa ttg   2496 Thr His Leu Ser Gln Ile Gly Asn Phe Thr Val Leu Val Lys Lys Leu

        820                 825                 830 tta acc cca tat gca gat agt aat gaa gca ttc acc aag tac tcg ttg   2544 Leu Thr Pro Tyr Ala Asp Ser Asn Glu Ala Phe Thr Lys Tyr Ser Leu

    835                 840                 845 ttg tat cct tgt gac tta gga tta ggg tat aga ttc aac aac caa ctt   2592 Leu Tyr Pro Cys Asp Leu Gly Leu Gly Tyr Arg Phe Asn Asn Gln Leu

850                 855                 860 gga att tgg cca tac att gaa ttt tta atg caa aat gtg ttt gca aat   2640 Gly Ile Trp Pro Tyr Ile Glu Phe Leu Met Gln Asn Val Phe Ala Asn 865                 870                 875                 880 tct ggt act att gct aat aaa cga gat agg gtc aac ttg caa ctt aat   2688 Ser Gly Thr Ile Ala Asn Lys Arg Asp Arg Val Asn Leu Gln Leu Asn

            885                 890                 895 ttg cta gaa tta ttt agc aat gca tta cag gga gtt gac tgg aag ttt   2736 Leu Leu Glu Leu Phe Ser Asn Ala Leu Gln Gly Val Asp Trp Lys Phe

        900                 905                 910    ctt att gat gtg gca ccg aaa att att cgt gac ttg aaa aat ttt aat   2784 Leu Ile Asp Val Ala Pro Lys Ile Ile Arg Asp Leu Lys Asn Phe Asn

    915                 920                 925 ggg ata ttt gac tcg ctt att cct ggt gtt caa ttg gac ttt gaa gtg   2832 Gly Ile Phe Asp Ser Leu Ile Pro Gly Val Gln Leu Asp Phe Glu Val

930                 935                 940 ttt gtc aaa ttg cat cat tca gtt gct gtg att aac tat cta ttt gaa   2880 Phe Val Lys Leu His His Ser Val Ala Val Ile Asn Tyr Leu Phe Glu 945                 950                 955                 960 aac agg aca ttt tct gcc ttg ttt aag ctt gtt aat att gga gtt gat   2928 Asn Arg Thr Phe Ser Ala Leu Phe Lys Leu Val Asn Ile Gly Val Asp

            965                 970                 975 tct gtg aat gaa tca ggt gaa tcg gcg gaa ttg gtg tca cat gcc ctt   2976 Ser Val Asn Glu Ser Gly Glu Ser Ala Glu Leu Val Ser His Ala Leu

        980                 985                 990 ggg ttg att aat tct ttg ttg aga gtt caa aat tct ttt ata aac aag   3024 Gly Leu Ile Asn Ser Leu Leu Arg Val Gln Asn Ser Phe Ile Asn Lys

    995                1000                1005 ttg tta cca ata ttg cga aac aaa gat acg cag caa caa tta cat cgt   3072 Leu Leu Pro Ile Leu Arg Asn Lys Asp Thr Gln Gln Gln Leu His Arg    1010                1015                1020 ggg aca gcc att ggg att ggt act tct atg agt ctt gcg tta gca acc   3120 Gly Thr Ala Ile Gly Ile Gly Thr Ser Met Ser Leu Ala Leu Ala Thr 1025               1030                1035                1040 cct aga acc ata ttt gat tgt ata tac tat cca aag aat ttg gga aca   3168 Pro Arg Thr Ile Phe Asp Cys Ile Tyr Tyr Pro Lys Asn Leu Gly Thr

           1045                1050                1055 cat ggt gtt gct gat ttt tac gaa gtg ata ttg ttc cac tta tct gca   3216 His Gly Val Ala Asp Phe Tyr Glu Val Ile Leu Phe His Leu Ser Ala

       1060                1065                1070 gtt gtc caa ttt gcc ctt tat gtc agt tgt gaa aat act att tcc aac   3264 Val Val Gln Phe Ala Leu Tyr Val Ser Cys Glu Asn Thr Ile Ser Asn

   1075                1080                1085 aaa gca att tcc ata ttg aaa gga gta agc caa tcc aag ttt ttt gtt   3312 Lys Ala Ile Ser Ile Leu Lys Gly Val Ser Gln Ser Lys Phe Phe Val    1090                1095                1100 acc aga gtt tca agc tct gct gat ccc tta ctc aac aac gat aga ttg   3360 Thr Arg Val Ser Ser Ser Ala Asp Pro Leu Leu Asn Asn Asp Arg Leu 1105               1110                1115                1120 att acc aca ttt gaa aac atc gac gag tca ata aaa atc aag ttt gct   3408 Ile Thr Thr Phe Glu Asn Ile Asp Glu Ser Ile Lys Ile Lys Phe Ala

           1125                1130                1135 ttc att gac aag ttt gaa gaa ctc gag gac tct ttg aat atg aaa tat   3456 Phe Ile Asp Lys Phe Glu Glu Leu Glu Asp Ser Leu Asn Met Lys Tyr

       1140                1145                1150 gag ata ttg gat ttt gtt ttg ggc aat ctc aat caa ttt gat ggc aaa   3504 Glu Ile Leu Asp Phe Val Leu Gly Asn Leu Asn Gln Phe Asp Gly Lys

   1155                1160                1165 gtg gct act act gcc cac ttt ttg ttg gga tac aaa gtg aaa ggc gat   3552 Val Ala Thr Thr Ala His Phe Leu Leu Gly Tyr Lys Val Lys Gly Asp    1170                1175                1180 aca tta gac ttg gta cag aca aac gat caa aac aca tta cta aaa tct   3600 Thr Leu Asp Leu Val Gln Thr Asn Asp Gln Asn Thr Leu Leu Lys Ser 1185               1190                1195                1200 ttc tta aat aca ttg agc att agt ctt gat ttg att tct gaa att gat   3648 Phe Leu Asn Thr Leu Ser Ile Ser Leu Asp Leu Ile Ser Glu Ile Asp

           1205                1210                1215 tac aat aat ggt aat aac cat att att gat gtt ggt cca gcc aag ctt   3696 Tyr Asn Asn Gly Asn Asn His Ile Ile Asp Val Gly Pro Ala Lys Leu

       1220                1225                1230 tcg tcg ttg att tta cag att ctt atc aag ttg tgc caa gat cca att    3744 Ser Ser Leu Ile Leu Gln Ile Leu Ile Lys Leu Cys Gln Asp Pro Ile

   1235                1240                1245 tcg tcg tca ata aca ttg aat caa tta cgt gaa tat gaa gaa ttg ttt    3792 Ser Ser Ser Ile Thr Leu Asn Gln Leu Arg Glu Tyr Glu Glu Leu Phe    1250                1255                1260 gaa aaa ttg gtt aac tgt caa cct aaa ctt gat ttg aat acc gtt tgg    3840 Glu Lys Leu Val Asn Cys Gln Pro Lys Leu Asp Leu Asn Thr Val Trp 1265               1270                1275                1280 tgt ggt aac cag ttt gat ggg gat ttg cag att gat gct agc aat gta    3888 Cys Gly Asn Gln Phe Asp Gly Asp Leu Gln Ile Asp Ala Ser Asn Val

           1285                1290                1295 ttt gtt gac aac caa gca agc acc cag gct ttc ttt tcc ttt att aac    3936 Phe Val Asp Asn Gln Ala Ser TLr Gln Ala Phe Phe Ser Phe Ile Asn

       1300                1305                1310 cag aga aac tta att ttg cag tat ttg tca ttg gaa ttc cat agt gtc    3984 Gln Arg Asn Leu Ile Leu Gln Tyr Leu Ser Leu Glu Phe His Ser Val

   1315                1320                1325 aaa tca aga act aag cgg gag tat tat tct aaa gtg ttg acc aac gac    4032 Lys Ser Arg TLr Lys Arg Glu Tyr Tyr Ser Lys Val Leu TLr Asn Asp    1330                1335                1340 aag gaa ttt gtt aat cgt aca cct aag gtg ttg aca ttt tta aac att    4080 Lys Glu Phe Val Asn Arg TLr Pro Lys Val Leu Thr Phe Leu Asn Ile 1345               1350                1355                1360 cta aat tat tca ttc aag aac ttt gaa gtg cag aaa tac gaa tgg ctt    4128 Leu Asn Tyr Ser Phe Lys Asn Phe Glu Val Gln Lys Tyr Glu Trp Leu

           1365                1370                1375 gac caa aaa ttt aac gtg tcg ttg tta ttg gca gaa gta aac gct caa    4176 Asp Gln Lys Phe Asn Val Ser Leu Leu Leu Ala Glu Val Asn Ala Gln

       1380                1385                1390 aag aat ggt aca tta gat ttt tct gtt tta aca aag gtt ttc cgt ctt    4224 Lys Asn Gly Thr Leu Asp Phe Ser Val Leu TLr Lys Val Phe Arg Leu

   1395                1400                1405 ttg tgc caa acg tca aac tta ata aca ccc gag tca aag caa ttg ttt    4272 Leu Cys Gln Thr Ser Asn Leu Ile Thr Pro Glu Ser Lys Gln Leu Phe    1410                1415                1420 gcc gaa gaa att atg gtt gaa gga agt aag att tct gac ttt gtc aca    4320 Ala Glu Glu Ile Met Val Glu Gly Set Lys Ile Ser Asp Phe Val Thr 1425               1430                1435                1440 aag tac ctg gtg tcg acc gac ttg aag gat gtg cag ttg aaa tgc tta    4368 Lys Tyr Leu Val Ser Thr Asp Leu Lys Asp Val Gln Leu Lys Cys Leu

           1445                1450                1455 cat tca tgg tgt caa ttg ata gag att ttg gtt act gac agt gga atc    4416 His Ser Trp Cys Gln Leu Ile Glu Ile Leu Val Thr Asp Ser Gly Ile

       1460                1465                1470 aat tcg ctg aat ttc atc ttg gaa gtg ttg caa gtt att att ccc aaa    4464 Asn Ser Leu Asn Phe Ile Leu Glu Val Leu Gln Val Ile Ile Pro Lys

   1475                1480                1485 atc aat gac tat ttt gat gtg gac ata ctg ttt tct gaa gaa atg gtt    4512 Ile Asn Asp Tyr Phe Asp Val Asp Ile Leu Phe Ser Glu Glu Met Val    1490                1495                1500 tca tta tgt gtt tta ttg ttt gat ctt tat gat cag ctg act ctt gcg    4560 Ser Leu Cys Val Leu Leu Phe Asp Leu Tyr Asp Gln Leu Thr Leu Ala 1505               1510                1515                1520 gac aga aaa ggt gaa gat ttt gca ctt gga att gag aga ttg atc ccc    4608 Asp Arg Lys Gly Glu Asp Phe Ala Leu Gly Ile Glu Arg Leu Ile Pro

           1525                1530                1535  tta ttt cag act tgt att gca ggt att ctt aat tct aac tca aca ccc    4656 Leu Phe Gln Thr Cys Ile Ala Gly Ile Leu Asn Ser Asn Ser Thr Pro

       1540                1545                1550 agc tta cgc tca gac ttg tat gta gtt ggc aac aag ttt ttg tta aaa    4704 Ser Leu Arg Ser Asp Leu Tyr Val Val Gly Asn Lys Phe Leu Leu Lys

   1555                1560                1565 tgt ttt gag aga gag tcg ttt ttg aaa caa gtg atg cat atc atc aag    4752 Cys Phe Glu Arg Glu Ser Phe Leu Lys Gln Val Met His Ile Ile Lys    1570                1575                1580 tcg gta gat aaa aag ttt ttc cag gtg att tgt aat gac gct atc tac    4800 Ser Val Asp Lys Lys Phe Phe Gln Val Ile Cys Asn Asp Ala Ile Tyr 1585               1590                1595                1600 tca gag ggt cca tct aga atc act tct act tta ttc ctc gag tca tta    4848 Ser Glu Gly Pro Ser Arg Ile Thr Ser Thr Leu Phe Leu Glu Ser Leu

           1605                1610                1615 gtt cac tta ggg act ttg gtc aag gtt gat ttt att ttg aat gcg ttg    4896 Val His Leu Gly Thr Leu Val Lys Val Asp Phe Ile Leu Asn Ala Leu

       1620                1625                1630 atc aaa aat aac gca ttg ctg ttg cta gtc agg tca gtt aag cgg act    4944 Ile Lys Asn Asn Ala Leu Leu Leu Leu Val Arg Ser Val Lys Arg Thr

   1635                1640                1645 gat gcc atg atc aaa ttg tgc cag gaa aaa aat rca gga gtg act tta    4992 Asp Ala Met Ile Lys Leu Cys Gln Glu Lys Asn Ser Gly Val Thr Leu    1650                1655                1660 gat cat ttc ata ttt gac ttg atg gca ttc aaa gca acg cta tat ttt    5040 Asp His Phe Ile Phe Asp Leu Met Ala Phe Lys Ala Thr Leu Tyr Phe 1665               1670                1675                1680   ttt gtt aga gtg gcc aaa tcg aaa aac ggg gca ttg cag ttg att caa    5088 Phe Val Arg Val Ala Lys Ser Lys Asn Gly Ala Leu Gln Leu Ile Gln

           1685                1690                1695 aat gaa ttg ttt tca att ttg cat cag tcg aag ttt ttg cag att gat    5136 Asn Glu Leu Phe Ser Ile Leu His Gln Ser Lys Phe Leu Gln Ile Asp

       1700                1705                1710 cca gat att ggt tta agt tta cga att gaa gaa gtt caa gat cac aag    5184 Pro Asp Ile Gly Leu Ser Leu Arg Ile Glu Glu Val Gln Asp His Lys

   1715                1720                1725 act gtc aat gta aat git ttg cta gat act cca ctt tcg ata act gac    5232 Thr Val Asn Val Asn Val Leu Leu Asp Thr Pro Leu Ser Ile Thr Asp    1730                1735                1740 ttg gtg gat cca tac aag ttg cga agt gaa aac act ata tca tat ttt    5280 Leu Val Asp Pro Tyr Lys Leu Arg Ser Glu Asn Thr Ile Ser Tyr Phe 1745               1750                1755                1760 gag ttc ctt gta cca ata ttt cag cta ctt aca aca gtg tta ttg tca    5328 Glu Phe Leu Val Pro Ile Phe Gln Leu Leu Thr Thr Val Leu Leu Ser

           1765                1770                1775 atg gga cca aat tat caa cct gca att att caa act aga gaa ctt atg    5376 Met Gly Pro Asn Tyr Gln Pro Ala Ile Ile Gln Thr Arg Glu Leu Met

       1780                1785                1790 aag agt gta aat cga ttg gtg gta ggt gtt atg aaa aga gat ttc ttg    5424 Lys Ser Val Asn Arg Leu Val Val Gly Val Met Lys Arg Asp Phe Leu

   1795                1800                1805 gta gag acc aaa caa att ggt caa ggg ttg tac aag gaa gag agt cac   5472 Val Glu Thr Lys Gln Ile Gly Gln Gly Leu Tyr Lys Glu Glu Ser His    1810                1815                1820 gag ttg gta tcg ttg aaa gaa ttg gtg aag ttg ttt att ttg att gat   5520 Glu Leu Val Ser Leu Lys Glu Leu Val Lys Leu Phe Ile Leu Ile Asp 1825               1830                1835                1840 tca tta gct cat tat agt gtg tag                                   5544 Ser Leu Ala His Tyr Ser Val

           1845 <210>2 <211>1847 <212>PRT <213>白色念珠菌 <400>2 Met Ser Gly Ile Phe Asn Trp Ser Leu Asp Val Phe Ala Asp Ile Tyr   1               5                  10                  15 Asn Thr Leu Lys Phe Glu Ser Asn Ile Asp Leu Asp Thr Ile Asp Phe

         20                  25                  30 Thr Ser Ile Lys Asn Asp Leu Ala Asn Val Leu Ile Thr Pro Val Pro

     35                  40                  45 Leu Asp Gln Ser Arg Ser Lys Leu Gly Asp Ala Ser Lys Pro Val Ala

 50                  55                  60 Leu Pro Ser Gly Asp Glu Val Lys Leu Asn Gln Ala Ser Ile Glu Ile  65                  70                  75                  80 Thr Gly Val Leu Ser Asn Glu Leu Asp Leu Asp Glu Leu Asn Thr Ala

             85                  90                  95 Glu Leu Leu Tyr Asn Ala Ser Asp Leu Ser Tyr Lys Lys Gly Thr Ser

        100                 105                 110 Ile Gly Asp Ser Ala Arg Leu Ala Tyr Tyr Leu Arg Ala His Tyr Ile

    115                 120                 125 Leu Asn Ile Val Gly Tyr Leu Val Ser His Lys Arg Leu Asp Ile Ile

130                 135                 140 Thr Asn Asn Asn Gln Val Leu Phe Asp Asn Ile Leu Lys Ser Phe Ser 145                 150                 155                 160 Lys Ile Tyr Thr Leu Ser Gly Lys Leu Asn Asp Met Ile Asp Lys Gln

            165                 170                 175 Lys Val Thr Gly Asp Ile Asn Asn Leu Ala Phe Ile Asn Cys Ile Asn

        180                 185                 190 Tyr Ser Arg Ser Gln Leu Phe Asn Ala His Glu Leu Leu Gly Gln Val

    195                 200                 205 Val Phe Gly Leu Ala Asp Asn Tyr Tyr Glu Ser Tyr Gly Thr Leu Asn

210                 215                 220 Asn Tyr Asn Ser Leu Val Glu Phe Ile Leu Lys Asn Ile Ser Asp Glu 225                 230                 235                 240 Asp Val Phe Val Ile His Phe Leu Pro Ser Thr Leu Gln Leu Phe Lys

            245                 250                 255 Lys Leu Leu Gln Leu Gly Glu Glu Ser Leu Val Asp Gln Phe Tyr Lys

        260                 265                 270 Thr Ile Thr Ser Ser Ile Leu Lys Asp Tyr Glu Ala Asn Asn Phe Ser

    275                 280                 285 Lys Ser Glu Asp Ile Asp Leu Ser Lys Ser Lys Leu Ser Gly Phe Glu

    290             295                 300 Ile Val Thr Ser Phe Ile Phe Leu Thr Glu Phe Ile Pro Trp Cys Lys 305                 310                 315                 320 Gln Leu Ser Ser Arg Thr Ala Lys Tyr Asp Phe Lys Asp Asp Ile Leu

            325                 330                 335 Lys Tyr Met Glu Phe Leu Ile Ser Tyr Gly Val Met Glu Arg Leu Leu

        340                 345                 350 Ser Tyr Cys Ser Glu Thr Ser Asn Ala Lys Thr Gln Gln Val Tyr Asp

    355                 360                 365 Trp Ser Asn Met Tyr Asp Phe Arg Ala Leu Leu Gln Lys Asn Phe Pro

370                 375                 380 Arg Leu Thr Pro Ala Lys Phe His Tyr Pro Gly Asn Gln Glu Leu Leu 385                 390                 395                 400 Asn Ala Val Arg Pro Gly Tyr Glu Asn Ile Ser Lys Leu Ile Asp Ile

            405                 410                 415 Ser Phe Leu Thr Leu Asp Pro Ser Leu Asn Glu Thr Leu Val Ser Pro

        420                 425                 430 Phe Phe Gln Ser Phe Phe Ser Val Phe Ile Ser Asn Ala Ala Val Val

    435                 440                 445 Met Thr Ser Leu Arg Asp Ser Glu Glu Asp Phe Val Leu Ser Ser Leu

450                 455                 460 Asn Glu Ser Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Ser Asp Ser Asp Glu 465                 470                 475                 480 Asp Ser Ser Thr Pro Lys Asn Lys GIu Lys Ser Ala Gly Leu Asp Leu

            485                 490                495 Asp Lys Ile Ala Gln Arg Ala Glu Leu Glu Arg Phe Tyr Leu Ala Phe

        500                 505                 510 Ala Tyr Thr Tyr Asn Asn Arg Pro Glu Leu Cys Ala Leu Phe Trp Gly

    515                 520                 525 Asn Glu Gln Val Thr His Asp Ile Ile Gly Phe Ile Ser Trp Gly Leu

530                 535                 540 Ala Asn Asn Thr Ser Pro Leu Ile Thr Ala Thr Phe Cys Leu Leu Leu 545                 550                 555                 560 Gly Ser Leu Ala Ser Ala Gly Ala Glu Ala Thr Ser Arg Ile Trp Glu

            565                 570                 575 Ile Leu Val His Asn Asn Asn Asn Ala Ser Thr Arg Lys Asn Asp Phe

        580                 585                 590 Ser Lys Val Ser Val Asp Ser Leu Tyr Asp Ser Leu Lys Tyr Tyr Ile

    595                 600                 605 Asp Ser Leu Asn Glu Ser Phe Glu Gln Asp Leu Asn Ala Gln Leu Met

610                 615                 620 Leu Asn Gln Lys Lys Gln Asp Phe Leu Phe Ser Thr Thr Thr Ser Lys 625                 630                 635                 640 Gln Asp Leu Asp Asp Ser Gly Glu Asn Arg Ile Val Ile Glu Leu Ala

            645                 650                 655 Glu Asp Ser Leu Val Leu Ile Ser Gly Phe Ile Gln Leu Leu Ser Ala

        660                 665                 670 Ile Val Lys Asn Leu Asn Thr Lys Asn Glu Arg Ser Lys Glu Ile Lys

    675                 680                 685 Ser Val Val Tyr Thr Arg Phe Ser Pro Ile Ile Lys Gly Phe Leu Lys

690                 695                 700 Phe Asp Asn Leu Ile Asn Gly Ser Arg Phe Leu Gln Val Asp Ala Ser 705                 710                 715                 720 Ile Gln Ser Thr Asn Asn Pro Lys Phe Ile Asp Leu Pro Asn Val Phe

            725                 730                 735 Val Ser Asp Asp Ser Arg Ile Ile Leu Thr Asn Leu Ile Leu Thr Phe

        740                 745                 750 Leu Gly Asp Phe Val Thr Asn Asp Ser Asp Pro Tyr Ile Arg Tyr Glu

    755                 760                 765 Ile Trp Arg Leu Val Asp Arg Trp Met Tyr Gln Gly Leu His Ser Leu

770                 775                 780 Pro Glu Asp Lys Lys Asp Asp Ala Phe Arg His Ile Lys Arg Lys Tyr 785                 790                 795                 800 Asn Ser Lys Lys Asn Val Pro Ile Asn Gln Ala Phe Ser Thr Asn Leu

            805                 810                 815 Thr His Leu Ser Gln Ile Gly Asn Phe Thr Val Leu Val Lys Lys Leu

        820                 825                 830 Leu Thr Pro Tyr Ala Asp Ser Asn Glu Ala Phe Thr Lys Tyr Ser Leu

    835                 840                 845 Leu Tyr Pro Cys Asp Leu Gly Leu Gly Tyr Arg Phe Asn Asn Gln Leu

850                 855                 860 Gly Ile Trp Pro Tyr Ile Glu Phe Leu Met Gln Asn Val Phe Ala Asn 865                 870                 875                 880 Ser Gly Thr Ile Ala Asn Lys Arg Asp Arg Val Asn Leu Gln Leu Asn

            885                 890                 895 Leu Leu Glu Leu Phe Ser Asn Ala Leu Gln Gly Val Asp Trp Lys Phe

        900                 905                 910 Leu Ile Asp Val Ala Pro Lys Ile Ile Arg Asp Leu Lys Asn Phe Asn

    915                 920                 925 Gly Ile Phe Asp Ser Leu Ile Pro Gly Val Gln Leu Asp Phe Glu Val

930                 935                 940 Phe Val Lys Leu His His Ser Val Ala Val Ile Asn Tyr Leu Phe Glu 945                 950                 955                 960 Asn Arg Thr Phe Ser Ala Leu Phe Lys Leu Val Asn Ile Gly Val Asp

            965                 970                 975 Ser Val Asn Glu Ser Gly Glu Ser Ala Glu Leu Val Ser His Ala Leu

        980                 985                 990 Gly Leu Ile Asn Ser Leu Leu Arg Val Gln Asn Ser Phe Ile Asn Lys

    995                1000                1005   Leu Leu Pro Ile Leu Arg Asn Lys Asp Thr Gln Gln Gln Leu His Arg    1010                1015                1020 Gly Thr Ala Ile Gly Ile Gly Thr Ser Met Ser Leu Ala Leu Ala Thr 025                1030                1035                1040 Pro Arg Thr Ile Phe Asp Cys Ile Tyr Tyr Pro Lys Asn Leu Gly Thr

           1045                1050                1055 His Gly Val Ala Asp Phe Tyr Glu Val Ile Leu Phe His Leu Ser Ala

       1060                1065                1070 Val Val Gln Phe Ala Leu Tyr Val Ser Cys Glu Asn Thr Ile Ser Asn

   1075                1080                1085 Lys Ala Ile Ser Ile Leu Lys Gly Val Ser Gln Ser Lys Phe Phe Val    1090                1095                1100 Thr Arg Val Ser Ser Ser Ala Asp Pro Leu Leu Asn Asn Asp Arg Leu 105                1110                1115                1120 Ile Thr Thr Phe Glu Asn Ile Asp Glu Ser Ile Lys Ile Lys Phe Ala

           1125                1130                1135 Phe Ile Asp Lys Phe Glu Glu Leu Glu Asp Ser Leu Asn Met Lys Tyr

       1140                1145                1150 Glu Ile Leu Asp Phe Val Leu Gly Asn Leu Asn Gln Phe Asp Gly Lys

   1155                1160                1165 Val Ala Thr Thr Ala His Phe Leu Leu Gly Tyr Lys Val Lys Gly Asp    1170                1175                1180 Thr Leu Asp Leu Val Gln Thr Asn Asp Gln Asn Thr Leu Leu Lys Ser 185                1190                1195                1200 Phe Leu Ash Thr Leu Ser Ile Ser Leu Asp Leu Ile Ser Glu Ile Asp

           1205                1210                1215 Tyr Asn Asn Gly Asn Asn His Ile Ile Asp Val Gly Pro Ala Lys Leu

       1220                1225                1230 Ser Ser Leu Ile Leu Gln Ile Leu Ile Lys Leu Cys Gln Asp Pro Ile

   1235                1240                1245 Ser Ser Ser Ile Thr Leu Asn Gln Leu Arg Glu Tyr Glu Glu Leu Phe    1250                1255                1260 Glu Lys Leu Val Asn Cys Gln Pro Lys Leu Asp Leu Asn Thr Val Trp 265                1270                1275                1280 Cys Gly Asn Gln Phe Asp Gly Asp Leu Gln Ile Asp Ala Ser Asn Val

           1285                1290                1295 Phe Val Asp Asn Gln Ala Ser Thr Gln Ala Phe Phe Ser Phe Ile Asn

       1300                1305                1310 Gln Arg Asn Leu Ile Leu Gln Tyr Leu Ser Leu Glu Phe His Ser Val

   1315                1320                1325 Lys Ser Arg Thr Lys Arg Glu Tyr Tyr Ser Lys Val Leu Thr Asn Asp    1330                1335                1340 Lys Glu Phe Val Asn Arg Thr Pro Lys Val Leu Thr Phe Leu Asn Ile 345                1350                1355                1360 Leu Asn Tyr Ser Phe Lys Asn Phe Glu Val Gln Lys Tyr Glu Trp Leu

           1365                1370                1375 Asp Gln Lys Phe Asn Val Ser Leu Leu Leu Ala Glu Val Asn Ala Gln

       1380                1385                1390 Lys Asn Gly Thr Leu Asp Phe Ser Val Leu Thr Lys Val Phe Arg Leu

   1395                1400                1405 Leu Cys Gln Thr Ser Asn Leu Ile Thr Pro Glu Ser Lys Gln Leu Phe    1410                1415                1420 Ala Glu Glu Ile Met Val Glu Gly Ser Lys Ile Ser Asp Phe Val Thr 425                1430                1435                1440 Lys Tyr Leu Val Ser Thr Asp Leu Lys Asp Val Gln Leu Lys Cys Leu

           1445                1450                1455 His Ser Trp Cys Gln Leu Ile Glu Ile Leu Val Thr Asp Ser Gly Ile

       1460                1465                1470 Asn Ser Leu Asn Phe Ile Leu Glu Val Leu Gln Val Ile Ile Pro Lys

   1475                1480                1485 Ile Asn Asp Tyr Phe Asp Val Asp Ile Leu Phe Ser Glu Glu Met Val    1490                1495                1500 Ser Leu Cys Val Leu Leu Phe Asp Leu Tyr Asp Gln Leu Thr Leu Ala 505                1510                1515                1520 Asp Arg Lys Gly Glu Asp Phe Ala Leu Gly Ile Glu Arg Leu Ile Pro

           1525                1530                1535 Leu Phe Gln Thr Cys Ile Ala Gly Ile Leu Asn Ser Asn Ser Thr Pro

       1540                1545                1550 Ser Leu Arg Ser Asp Leu Tyr Val Val Gly Asn Lys Phe Leu Leu Lys

   1555                1560                1565 Cys Phe Glu Arg Glu Ser Phe Leu Lys Gln Val Met His Ile Ile Lys    1570                1575                1580 Ser Val Asp Lys Lys Phe Phe Gln Val Ile Cys Asn Asp Ala Ile Tyr 565                1590                1595                1600 Ser Glu Gly Pro Ser Arg Ile Thr Ser Thr Leu Phe Leu Glu Ser Leu

           1605                1610                1615 Val His Leu Gly Thr Leu Val Lys Val Asp Phe Ile Leu Asn Ala Leu

       1620                1625                1630  Ile Lys Asn Asn Ala Leu Leu Leu Leu Val Arg Ser Val Lys Arg Thr

   1635                1640                1645 Asp Ala Met Ile Lys Leu Cys Gln Glu Lys Asn Ser Gly Val Thr Leu    1650                1655                1660 Asp His Phe Ile Phe Asp Leu Met Ala Phe Lys Ala Thr Leu Tyr Phe 665                1670                1675                1680 Phe Val Arg Val Ala Lys Ser Lys Asn Gly Ala Leu Gln Leu Ile Gln

           1685                1690                1695 Asn Glu Leu Phe Ser Ile Leu His Gln Ser Lys Phe Leu Gln Ile Asp

       1700                1705                1710 Pro Asp Ile Gly Leu Ser Leu Arg Ile Glu Glu Val Gln Asp His Lys

   1715                1720                1725 Thr Val Asn Val Asn Val Leu Leu Asp Thr Pro Leu Ser Ile Thr Asp    1730                1735                1740 Leu Val Asp Pro Tyr Lya Leu Arg Ser Glu Asn Thr Ile Ser Tyr Phe 745                1750                1755                1760 Glu phe Leu Val Pro Ile Phe Gln Leu Leu Thr Thr Val Leu Leu Ser

           1765                1770                1775 Met Gly Pro Asn Tyr Gln Pro Ala Ile Ile Gln Thr Arg Glu Leu Met

       1780                1785                1790 Lys Ser Val Asn Arg Leu Val Val Gly Val Met Lys Arg Asp Phe Leu

   1795                1800                1805 Val Glu Thr Lys Gln Ile Gly Gln Gly Leu Tyr Lys Glu Glu Ser His    1810                1815                1820 Glu Leu Val Ser Leu Lys Glu Leu Val Lys Leu Phe Ile Leu Ile Asp 825                1830                1835                1840 Ser Leu Ala His Tyr Ser Val

           1845 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID08 <140> <141> <160>1 <170>PatentIn Ver.2.1 <2l0>1 <211>575 <212>DNA <213>人工序列 <220> <223>人工序列描述:Sc YJL039c的同源片段 <400>1 gtttggtgac tcaacctacc accaatcgat ttacactctt cataagttct ctagtttgaa 60 taattgcagg ttgataattt ggtcccattg acaataacac tgttgtaagt agctgaaata 120 ttggtacaag gaactcaaaa tatgatatag tgttttcact tcgcaacttg tatggatcca 180 ccaagtcagt tatcgaaagt ggagtatcta gcaaaacatt tacattgaca gtcttgtgat 240 cttgaacttc ttcaattcgt aaacttaaac caatatctgg atcaatctgc aaaaacttcg 300 actgatgcaa aattgaaaac aattcatttt ggaatcannn nnanaantna aaaaaaatat 360 atattntntt tttttttttt ttntttnttt tttattttat cttacannac accccaacac 420 aacacccaac ccnaaaacac ccaacacctc catcttgtcc cgcttttctc tcacattttt 480 tctctactac tatcacacaa tctataaaac atacaccccc tcaacccctc ctccccaaca 540 aacctacctc cctcaactcc tatttcctcc cttcc                            575 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID09 <140> <141> <160>2 <170>patentIn Ver.2.1 <210>1 <211>921 <212>DNA <213>白色念珠菌 <220> <221>CDS <222>(1)..(918) <220> <221>基因 <222>(1)..(918) <223>基因CaOR110 <400>1 atg acg att gaa act att tat atc gca aga cac ggt tat aga tcc aat   48 Met Thr Ile Glu Thr Ile Tyr Ile Ala Arg His Gly Tyr Arg Ser Asn   1               5                  10                  15 tgg tta cca cca cca cac cca cca aat cct act ggt att gac agt gac   96 Trp Leu Pro Pro Pro His Pro Pro Asn Pro Thr Gly Ile Asp Ser Asp

         20                  25                  30 ccg gct tta gca cca cat ggt gtt gaa caa gcc caa cag tta gct gcc   144 Pro Ala Leu Ala Pro His Gly Val Glu Gln Ala Gln Gln Leu Ala Ala

     35                  40                  45 tat ctt aca tca ttacct aca cat gaa aag cct gaa ttt att att gct    192 Tyr Leu Thr Ser Leu Pro Thr His Glu Lys Pro Glu Phe Ile Ile Ala

 50                  55                  60 tca cct ttt tat cgt tgt ata gaa acg tcg aga ccc att gcc gaa atg   240 Ser Pro Phe Tyr Arg Cys Ile Glu Thr Ser Arg Pro Ile Ala Glu Met  65                  70                  75                  80 ttg gac ttg aag att gct tta gaa aga gga gtt ggt gaa tgg ttt cgt    288 Leu Asp Leu Lys Ile Ala Leu Glu Arg Gly Val Gly Glu Trp Phe Arg

             85                  90                  95 aaa aat aga gat acc aaa cca gtt ccc ggt gat tac aca caa ttg aga    336 Lys Asn Arg Asp Thr Lys Pro Val Pro Gly Asp Tyr Thr Gln Leu Arg

        100                 105                 110 aca ttt ttc gat aaa tta ttg atc gat gaa gat act tgg cca aga gat    384 Thr Phe Phe Asp Lys Leu Leu Ile Asp Glu Asp Thr Trp Pro Arg Asp

    115                 120                 125 aac tta aat gtt ata cct aat att gaa gga gaa gat tat gat gaa atc    432 Asn Leu Asn Val Ile Pro Asn Ile Glu Gly Glu Asp Tyr Asp Glu Ile

130                 135                 140 tac gat cgt gcc aaa ttg ttt tgg aaa aag ttt att cct gaa ttt gaa    480 Tyr Asp Arg Ala Lys Leu Phe Trp Lys Lys Phe Ile Pro Glu Phe Glu 145                 150                 155                 160 aag aaa ttc ccc gaa att aaa aat gtg ttg ata gtt aca cat gca gca    528 Lys Lys Phe Pro Glu Ile Lys Asn Val Leu Ile Val Thr His Ala Ala

            165                 170                 175 acg aaa att gct tta gga tca gct tta tta cag tta aaa tca gtt act    576 Thr Lys Ile Ala Leu Gly Ser Ala Leu Leu Gln Leu Lys Ser Val Thr

        180                 185                 190 gat gtt ata gat gat aat caa act gtg tta cgt gct ggt gca tgt tea    624 Asp Val Ile Asp Asp Asn Gln Thr Val Leu Arg Ala Gly Ala Cys Ser

    195                 200                 205 tta tcc aaa ttt gtt aga gat ggc gaa gat aaa acc aat cat act att    672 Leu Ser Lys Phe Val Arg Asp Gly Glu Asp Lys Thr Asn His Thr Ile

210                 215                 220 caa tgg aaa att gtc atg aat ggt aat tgt gaa ttc ttg aca cag ggt    720 Gln Trp Lys Ile Val Met Asn Gly Asn Cys Glu Phe Leu Thr Gln Gly 225                 230                 235                 240 gaa gaa atg aac tgg gat ttc cgt cgt ggt gtt gaa gcc ggg tca get    768 Glu Glu Met Asn Trp Asp Phe Arg Arg Gly Val Glu Ala Gly Ser Ala

            245                 250                 255 gaa gat ata gcg caa aga aag gca gca gca gaa gca gaa gca aaa gca    816 Glu Asp Ile Ala Gln Arg Lys Ala Ala Ala Glu Ala Glu Ala Lys Ala

        260                 265                 270 ttg aag aaa aat gaa caa acc aaa tcc gat ggt ccc atc act gaa tct    864 Leu Lys Lys Asn Glu Gln Thr Lys Ser Asp Gly Pro Ile Thr Glu Ser

    275                 280                 285 gcc act ggg gca gaa ata gat ggg aat gaa gat gaa ttt gaa gta cgt    912 Ala Thr Gly Ala Glu Ile Asp Gly Asn Glu Asp Glu Phe Glu Val Arg

290                 295                 300 aaa act tga                                                        921 Lys Thr 305 <210>2 <211>306 <212>PRT <213>白色念珠菌 <400>2 Met Thr Ile Glu Thr Ile Tyr Ile Ala Arg His Gly Tyr Arg Ser Asn   1               5                  10                  15 Trp Leu Pro Pro Pro His Pro Pro Asn Pro Thr Gly Ile Asp Ser Asp

         20                  25                  30 Pro Ala Leu Ala Pro His Gly Val Glu Gln Ala Gln Gln Leu Ala Ala

     35                  40                  45 Tyr Leu Thr Ser Leu Pro Thr His Glu Lys Pro Glu Phe Ile Ile Ala

 50                  55                  60 Ser Pro Phe Tyr Arg Cys Ile Glu Thr Ser Arg Pro Ile Ala Glu Met  65                  70                  75                  80 Leu Asp Leu Lys Ile Ala Leu Glu Arg Gly Val Gly Glu Trp Phe Arg

             85                  90                  95 Lys Asn Arg Asp Thr Lys Pro Val Pro Gly Asp Tyr Thr Gln Leu Arg

        100                 105                 110 Thr Phe Phe Asp Lys Leu Leu Ile Asp Glu Asp Thr Trp Pro Arg Asp

    115                 120                 125 Asn Leu Asn Val Ile Pro Asn Ile Glu Gly Glu Asp Tyr Asp Glu Ile

130                 135                 140 Tyr Asp Arg Ala Lys Leu Phe Trp Lys Lys Phe Ile Pro Glu Phe Glu 145                 150                 155                 160 Lys Lys Phe Pro Glu Ile Lys Asn Val Leu Ile Val Thr His Ala Ala

            165                 170                 175 Thr Lys Ile Ala Leu Gly Ser Ala Leu Leu Gln Leu Lys Ser Val Thr

        180                 185                 190 Asp Val Ile Asp Asp Asn Gln Thr Val Leu Arg Ala Gly Ala Cys Ser

    195                 200                 205 Leu Ser Lys Phe Val Arg Asp Gly Glu Asp Lys Thr Asn His Thr Ile

210                 215                 220 Gln Trp Lys Ile Val Met Asn Gly Asn Cys Glu Phe Leu Thr Gln Gly 225                 230                 235                 240 Glu Glu Met Asn Trp Asp Phe Arg Arg Gly Val Glu Ala Gly Ser Ala

            245                 250                 255 Glu Asp Ile Ala Gln Arg Lys Ala Ala Ala Glu Ala Glu Ala Lys Ala

        260                 265                 270 Leu Lys Lys Asn Glu Gln Thr Lys Ser Asp Gly Pro Ile Thr Glu Ser

    275                 280                 285 Ala Thr Gly Ala Glu Ile Asp Gly Asn Glu Asp Glu Phe Glu Val Arg

290                 295                 300 Lys Thr 305 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID10 <140>  <141> <160>2 <170>patentIn Ver.2.1 <210>1 <211>1454 <212>DNA <213>人工序列 <220> <221>CDS <222>(1)..(1452) <223>基因CaOR110前切变体 <220> <223>人工序列描述:前切变体 <400>1 atg acg att gaa act att tat atc gca aga cac ggt tat aga tcc aat   48 Met Thr Ile Glu Thr Ile Tyr Ile Ala Arg His Gly Tyr Arg Ser Asn   1               5                  10                  15 tgg tta cca cca cca cac cca cca aat cct act ggt att gac agt gac   96 Trp Leu Pro Pro Pro His Pro Pro Asn Pro Thr Gly Ile Asp Ser Asp

         20                  25                  30 ccg gct tta gca cca cat ggt gtt gaa caa gcc caa cag tta gct gcc   144 Pro Ala Leu Ala Pro His Gly Val Glu Gln Ala Gln Gln Leu Ala Ala

     35                  40                  45 tat ctt aca tca tta cct aca cat gaa aag cct gaa ttt att att gct   192 Tyr Leu Thr Ser Leu Pro Thr His Glu Lys Pro Glu Phe Ile Ile Ala

 50                  55                  60 tca cct ttt tat cgt tgt ata gaa acg tcg aga ccc att gcc gaa atg   240 Ser Pro Phe Tyr Arg Cys Ile Glu Thr Ser Arg Pro Ile Ala Glu Met 65                   70                  75                  80 ttg gac ttg aag att gct tta gaa aga gga gtt ggt gaa tgg ttt cgt   288 Leu Asp Leu Lys Ile Ala Leu Glu Arg Gly Val Gly Glu Trp Phe Arg

             85                  90                  95 aaa aat aga gat acc aaa cca gtt ccc ggt gat tac aca caa ttg aga   336 Lys Asn Arg Asp Thr Lys Pro Val Pro Gly Asp Tyr Thr Gln Leu Arg

        100                 105                 110 aca ttt ttc gat aaa tta ttg atc gat gaa gat act tgg cca aga gat   384 Thr Phe Phe Asp Lys Leu Leu Ile Asp Glu Asp Thr Trp Pro Arg Asp

    115                 120                 125 aac tta aat gtt ata cct aat att gaa gga gaa gat tat gat gaa atc   432 Asn Leu Asn Val Ile Pro Asn Ile Glu Gly Glu Asp Tyr Asp Glu Ile

130                 135                 140 tac gat cgt gcc aaa ttg ttt tgg aaa aag ttt att cct gaa ttt gaa   480 Tyr Asp Arg Ala Lys Leu Phe Trp Lys Lys Phe Ile Pro Glu Phe Glu 145                 150                 155                 160 aag aaa ttc ccc gaa att aaa aat gtg ttg ara gtt aca cat gca gca   528 Lys Lys Phe Pro Glu Ile Lys Asn Val Leu Ile Val Thr His Ala Ala

            165                 170                 175 acg aaa att gct tta gga tca gct tta tta cag tta aaa tca gtt act   576 Thr Lys Ile Ala Leu Gly Ser Ala Leu Leu Gln Leu Lys Ser Val Thr

        180                 185                 190 gat gtt ata gat gat aat caa act gtg tta cgt gct ggt gca tgt tca   624 Asp Val Ile Asp Asp Asn Gln Thr Val Leu Arg Ala Gly Ala Cys Ser

    195                 200                 205 tta tcc aaa ttt gtt aga gat ggc gaa gat aaa acc aat cat act att   672 Leu Ser Lys Phe Val Arg Asp Gly Glu Asp Lys Thr Asn His Thr Ile

210                 215                 220 caa tgg aaa att gtc atg aat ggt aat tgt gaa ttc ttg aca cag ggt   720 Gln Trp Lys Ile Val Met Asn Gly Asn Cys Glu Phe Leu Thr Gln Gly 225                 230                 235                 240 gaa gaa atg aac tgg gat ttc cgt cgt ggt gtt gaa gcc ggg tca gct   768 Glu Glu Met Asn Trp Asp Phe Arg Arg Gly Val Glu Ala Gly Ser Ala

            245                 250                 255 gaa gat ata gcg caa aga aag gca gca gca gaa gca gaa gca aaa gca   816 Glu Asp Ile Ala Gln Arg Lys Ala Ala Ala Glu Ala Glu Ala Lys Ala

        260                 265                 270 ttg aag aaa aat gaa caa acc aaa tcc gat ggt ccc atc act gaa tct    864 Leu Lys Lys Asn Glu Gln Thr Lys Ser Asp Gly Pro Ile Thr Glu Ser

    275                 280                 285 gcc act ggg gca gaa ata gat ggg aat gaa gat gaa ttt gaa aca ttt    912 Ala Thr Gly Ala Glu Ile Asp Gly Asn Glu Asp Glu Phe Glu Thr Phe

290                 295                 300 tat gta acc atc gat ata cct tca att tcg aat aaa atc gac aat gaa    960 Tyr Val Thr Ile Asp Ile Pro Ser Ile Ser Asn Lys Ile Asp Asn Glu 305                 310                 315                 320 gaa gaa cca cca tca agg aca ggt caa gct cca aaa ttc aaa aac aat    1008 Glu Glu Pro Pro Ser Arg Thr Gly Gln Ala Pro Lys Phe Lys Asn Asn

            325                 330                 335 att atc aag cct tca gca caa ctc caa ttt act gat tta aaa gaa gat    1056 Ile Ile Lys Pro Ser Ala Gln Leu Gln Phe Thr Asp Leu Lys Glu Asp

        340                 345                 350 cat cca tta gta aaa ata tcg aac aat act ata tct gct caa ggc tcg    1104 His Pro Leu Val Lys Ile Ser Asn Asn Thr Ile Ser Ala Gln Gly Ser

    355                 360                 365 tcg tcg tcg tcg tta tca gcg tcg aaa aat gga ttt aat agt cat act    1152 Ser Ser Ser Ser Leu Ser Ala Ser Lys Asn Gly Phe Asn Ser His Thr

370                 375                 380 cac aat tca gga gtc att gat cca tca gca ctt ata gat ggg aaa att    1200 His Asn Ser Gly Val Ile Asp Pro Ser Ala Leu Ile Asp Gly Lys Ile 385                 390                 395                 400 tat cag act gat tgg aat caa tta caa ggt act gaa cta ata ttt gat    1248 Tyr Gln Thr Asp Trp Asn Gln Leu Gln Gly Thr Glu Leu Ile Phe Asp

            405                 410                 415 gaa aat ggt caa ttt ata ggc aag gtt aag gaa cat ttg act tgc aat    1296 Glu Asn Gly Gln Phe Ile Gly Lys Val Lys Glu His Leu Thr Cys Asn

        420                 425                 430 aat aac aca aaa ttc aca tta aaa aag gca gaa gaa gta gaa caa ctt    1344 Asn Asn Thr Lys Phe Thr Leu Lya Lys Ala Glu Glu Val Glu Gln Leu

    435                 440                 445 cgt tca gca gat gat tct atc atg gat ata gat caa gac tca caa gga    1392 Arg Ser Ala Asp Asp Ser Ile Met Asp Ile Asp Gln Asp Ser Gln Gly

    450             455                 460 caa caa cca gct aga agt cag ttc tta aaa aga gca att gtg gct gct   1440 Gln Gln Pro Ala Arg Ser Gln Phe Leu Lys Arg Ala Ile Val Ala Ala 465                 470                 475                 480 aga gcc aaa ggt aa                                                1454 Arg Ala Lys Gly <210>2 <211>484 <212>PRT <213>人工序列 <223>人工序列描述:前切变体 <400>2 Met Thr Ile Glu Thr Ile Tyr Ile Ala Arg His Gly Tyr Arg Ser Asn   1               5                  10                  15 Trp Leu Pro Pro Pro His Pro Pro Asn Pro Thr Gly Ile Asp Ser Asp

         20                  25                  30 Pro Ala Leu Ala Pro His Gly Val Glu Gln Ala Gln Gln Leu Ala Ala

     35                  40                  45 Tyr Leu Thr Ser Leu Pro Thr His Glu Lys Pro Glu Phe Ile Ile Ala

 50                  55                  60 Ser Pro Phe Tyr Arg Cys Ile Glu Thr Ser Arg Pro Ile Ala Glu Met  65                  70                  75                  80 Leu Asp Leu Lys Ile Ala Leu Glu Arg Gly Val Gly Glu Trp Phe Arg

             85                  90                  95 Lys Asn Arg Asp Thr Lys Pro Val Pro Gly Asp Tyr Thr Gln Leu Arg

        100                 105                 110 Thr Phe Phe Asp Lys Leu Leu Ile Asp Glu Asp Thr Trp Pro Arg Asp

    115                 120                 125 Asn Leu Asn Val Ile Pro Asn Ile Glu Gly Glu Asp Tyr Asp Glu Ile

130                 135                 140 Tyr Asp Arg Ala Lys Leu Phe Trp Lys Lys Phe Ile Pro Glu Phe Glu 145                 150                 155                 160 Lys Lys Phe Pro Glu Ile Lys Asn Val Leu Ile Val Thr His Ala Ala

            165                 170                 175 Thr Lys Ile Ala Leu Gly Ser Ala Leu Leu Gln Leu Lys Ser Val Thr

        180                 185                 190 Asp Val Ile Asp Asp Asn Gln Thr Val Leu Arg Ala Gly Ala Cys Ser

    195                 200                 205 Leu Ser Lys Phe Val Arg Asp Gly Glu Asp Lys Thr Asn His Thr Ile

210                 215                 220 Gln Trp Lys Ile Val Met Asn Gly Asn Cys Glu Phe Leu Thr Gln Gly 225                 230                 235                 240 Glu Glu Met Asn Trp Asp Phe Arg Arg Gly Val Glu Ala Gly Ser Ala

            245                 250                 255 Glu Asp Ile Ala Gln Arg Lys Ala Ala Ala Glu Ala Glu Ala Lys Ala

        260                 265                 270 Leu Lys Lys Asn Glu Gln Thr Lys Ser Asp Gly Pro Ile Thr Glu Ser

    275                 280                 285 Ala Thr Gly Ala Glu Ile Asp Gly Asn Glu Asp Glu Phe Glu Thr Phe

290                 295                 300 Tyr Val Thr Ile Asp Ile Pro Ser Ile Ser Asn Lys Ile Asp Asn Glu 305                 310                 315                 320 Glu Glu Pro Pro Ser Arg Thr Gly Gln Ala Pro Lys Phe Lys Asn Asn

            325                 330                 335 Ile Ile Lys Pro Ser Ala Gln Leu Gln Phe Thr Asp Leu Lys Glu Asp

        340                 345                 350 His Pro Leu Val Lys Ile Ser Asn Asn Thr Ile Ser Ala Gln Gly Ser

    355                 360                 365 Ser Ser Ser Ser Leu Ser Ala Ser Lys Asn Gly Phe Asn Ser His Thr

370                 375                 380 His Asn Ser Gly Val Ile Asp Pro Ser Ala Leu Ile Asp Gly Lys Ile 385                 390                 395                 400 Tyr Gln Thr Asp Trp Asn Gln Leu Gln Gly Thr Glu Leu Ile Phe Asp

            405                 410                 415 Glu Asn Gly Gln Phe Ile Gly Lys Val Lys Glu His Leu Thr Cys Asn

        420                 425                 430 Asn Asn Thr Lys Phe Thr Leu Lys Lys Ala Glu Glu Val Glu Gln Leu

    435                 440                 445 Arg Ser Ala Asp Asp Sar Ile Met Asp Ile Asp Gln Asp Ser Gln Gly

450                 455                 460 Gln Gln Pro Ala Arg Ser Gln Phe Leu Lys Arg Ala Ile Val Ala Ala 465                 470                 475                 480 Arg Ala Lys Gly 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID11 <140> <141> <160>2 <170>PatentIn Ver.2.1 <210>1 <211>2877 <212>DNA <213>白色念珠菌 <220> <221>CDS <222>(1)..(2874) <220> <221>基因 <222>(1)..(2874) <223>基因caMR212 <400>1 atg aat ttg ttt caa cat aaa cat caa aaa tta ata tta caa tgt tat   48 Met Asn Leu Phe Gln His Lye His Gln Lys Leu Ile Leu Gln Cys Tyr   1               5                  10                  15 cct gct ggg aaa gca gtg gac aaa aaa ccc aac tcg tcc gag tta agt   96 Pro Ala Gly Lys Ala Val Asp Lys Lys Pro Asn Ser Ser Glu Leu Ser

         20                  25                  30 tat tta tta tac tat gca tcc act cgt aga gtc aaa tta gaa aag gtg   144 Tyr Leu Leu Tyr Tyr Ala Ser Thr Arg Arg Val Lys Leu Glu Lys Val

     35                  40                  45 att aat ttt ttg aaa gat aaa act cat cat gat gtt ggt aga aac cgt   192 Ile Asn Phe Leu Lys Asp Lys Thr His His Asp Val Gly Arg Asn Arg

 50                  55                  60 act ggt aat tta caa gtc aca tta gcc att att cag gaa tta atc aaa   240 Thr Gly Asn Leu Gln Val Thr Leu Ala Ile Ile Gln Glu Leu Ile Lys  65                  70                  75                  80 aaa tgt agt gaa aac ttg aat gtt ttt gcc ttt caa gtg tgc tat atc    288 Lys Cys Ser Glu Asn Leu Asn Val Phe Ala Phe Gln Val Cys Tyr Ile

             85                  90                  95 ttg caa ctg att gcc aac act aag gat ctt gcc ttg tgt aaa aat gtt    336 Leu Gln Leu Ile Ala Asn Thr Lys Asp Leu Ala Leu Cys Lys Asn Val

        100                 105                 110 gtc aaa aca ttt ggt gtt ttg tgt gaa aac ttg gat ggt ggg ttg ttc    384 Val Lys Thr Phe Gly Val Leu Cys Glu Asn Leu Asp Gly Gly Leu Phe

    115                 120                 125 aca ggt gat aag gag ttt ata aag att ttc act gaa gtt ttc caa aca    432 Thr Gly Asp Lys Glu Phe Ile Lys Ile Phe Thr Glu Val Phe Gln Thr

130                 135                 140 tta gtt tcc ttt ggt aag gac aga tcg ggt gtt act cag tat gat tgg    480 Leu Val Ser Phe Gly Lys Asp Arg Ser Gly Val Thr Gln Tyr Asp Trp 145                 150                 155                 160 cag atg att tct tta atg gct ata aat gat ata tcc agt tgt ttg agt    528 Gln Met Ile Ser Leu Met Ala Ile Asn Asp Ile Ser Ser Cys Leu Ser

            165                 170                 175 tat aat gca gct gtt ggt aaa aag ttt att gct ttg tcg att cct gtt    576 Tyr Asn Ala Ala Val Gly Lys Lys Phe Ile Ala Leu Ser Ile Pro Val

        180                 185                 190 tta ctt cag ttt att att gca aac aac cca caa agc agc ata ttg caa    624 Leu Leu Gln Phe Ile Ile Ala Asn Asn Pro Gln Ser Ser Ile Leu Gln

    195                 200                 205 aga ttg aaa tcg aat ctc cac gtt gaa gat gat ggg aag agg ttg tca    672 Arg Leu Lys Ser Asn Leu His Val Glu Asp Asp Gly Lys Arg Leu Ser

210                 215                 220 cgt gct cat ctg caa aaa tcc cat agc aaa att gcc caa caa att gat    720 Arg Ala His Leu Gln Lys Ser His Ser Lys Ile Ala Gln Gln Ile Asp 225                 230                 235                 240 gat gat ttc acc aat gat tct tta acc ttg aca gat atc act gaa aag    768 Asp Asp Phe Thr Asn Asp Ser Leu Thr Leu Thr Asp Ile Thr Glu Lys

           245                  250                 255 gca ttt tcg tcg atg aaa tct ttt ttc aat acc aat gct gcc agt caa   816 Ala Phe Ser Ser Met Lys Ser Phe Phe Asn Thr Asn Als Ala Ser Gln

        260                 265                 270 atc tct gaa gtg aca aga gct gtt gtc caa cac sat att ctc sat gga   864 Ile Ser Glu Val Thr Arg Ala Val Val Gln His Asn Ile Leu Asn Gly

    275                 280                 285 acc gat ttg gag tgg gga gtc tca ttc ttg gaa tta tgt att act tgg   912 Thr Asp Leu Glu Trp Gly Val Ser Phe Leu Glu Leu Cys Ile Thr Trp

290                 295                 300 att cca gtt caa tta cgt ttt gtc agt ttg tcc acc ttg ttg gcc act   960 Ile Pro Val Gln Leu Arg Phe Val Ser Leu Ser Thr Leu Leu Ala Thr 305                 310                 315                 320 tta ggt aga att aat att gaa ggt aac acc aaa tcc aat tac aac atg   1008 Leu Gly Arg Ile Asn Ile Glu Gly Asn Thr Lys Ser Asn Tyr Asn Met

            325                 330                 335 caa ttc cag tat gct cgt tac ttg tta gga tta ctt tca tct cgt gtg   1056 Gln Phe Gln Tyr Ala Arg Tyr Leu Leu Gly Leu Leu Ser Ser Arg Val

        340                 345                 350 aac atg att ggg tta tca gtt tca gat att att caa cag ttg tta tcg   1104 Asn Met Ile Gly Leu Ser Val Ser Asp Ile Ile Gln Gln Leu Leu Ser

    355                 360                 365 ttg caa gct gat ttg att ttg aag gca agt gat ttg gac aaa agt gaa   1152 Leu Gln Ala Asp Leu Ile Leu Lys Ala Ser Asp Leu Asp Lys Ser Glu

370                 375                 380 att tca att tta aca gac att tat tct gac tgt att tgt agt ttg act   1200 Ile Ser Ile Leu Thr Asp Ile Tyr Ser Asp Cys Ile Cys Ser Leu Thr 385                 390                 395                 400 aca cat ata tat tac ttt gat caa gtc ccg gac tcg att caa gaa atc   1248 Thr His Ile Tyr Tyr Phe Asp Gln Val Pro Asp Ser Ile Gln Glu Ile

            405                 410                 415 tta atc sag att gat tac att tta gas agc agt ttt gtg gaa gat aat   1296 Leu Ile Lys Ile Asp Tyr Ile Leu Glu Ser Ser Phe Val Glu Asp Asn

        420                 425                 430 aac att acg tcc act gga gaa caa att caa gat ttg att atc caa ttg   1344 Asn Ile Thr Ser Thr Gly Glu Gln Ile Gln Asp Leu Ile Ile Gln Leu

    435                 440                 445 ttg gat aac att tcg aag att ttt tta att ttg aag aat aaa tca agc   1392 Leu Asp Asn Ile Ser Lys Ile Phe Leu Ile Leu Lys Asn Lys Ser Ser

450                 455                 460 tca att aat cgt aac cat gtg aat ttg gaa cat tgg gat atc agt tta   1440 Ser Ile Asn Arg Asn His Val Asn Leu Glu His Trp Asp Ile Ser Leu 465                 470                 475                 480 gga tta ttg gct cca caa ggc gac cat gat gat aac aga aaa atg att   1488 Gly Leu Leu Ala Pro Gln Gly Asp His Asp Asp Asn Arg Lys Met Ile

            485                 490                 495 att tct acg aca caa ctt atc aat atc caa gcc agg tac ttg aaa gtg   1536 Ile Ser Thr Thr Gln Leu Ile Asn Ile Gln Ala Arg Tyr Leu Lys Val

        500                 505                 510 ttt gat gag ttt ttg aat aat gaa ttg gcg gtt ggc aat tct aaa aag   1584 Phe Asp Glu Phe Leu Asn Asn Glu Leu Ala Val Gly Asn Ser Lys Lys

    515                 520                 525 agc tat gat ctt ctt agc aaa cag tct cgt ttg gat cct gga agt aca   1632 Ser Tyr Asp Leu Leu Ser Lys Gln Ser Arg Leu Asp Pro Gly Ser Thr

530                 535                 540 gct gtt gaa gga gtg aac aag tct gac gat ctg gac aat ggt aag gac   1680 Ala Val Glu Gly Val Asn Lys Ser Asp Asp Leu Asp Asn Gly Lys Asp 545                 550                 555                 560 ttt aaa aaa cct gatgcc aat caa tac att acc aat caa caa aac ttc    1728 Phe Lys Lys Pro Asp Ala Asn Gln Tyr Ile Thr Asn Gln Gln Asn Phe

            565                 570                 575 ata tcc cat ttc ctt atg tat atc gac aaa ttt ttc gaa aat tac gat   1776 Ile Ser His Phe Leu Met Tyr Ile Asp Lys Phe Phe Glu Asn Tyr Asp

        580                 585                 590 tcc ccc aac aca caa tca gtg tta ctt ttg gtt act gtt tta aaa gat   1824 Ser Pro Asn Thr Gln Ser Val Leu Leu Leu Val Thr Val Leu Lys Asp

    595                 600                 605 atg atg aac att tta gga ttg aat ttc ttg agt aat ttt att cca ttt   1872 Met Met Asn Ile Leu Gly Leu Asn Phe Leu Ser Asn Phe Ile Pro Phe

610                 615                 620 ttc cac cat tgg gtt atg aaa gta aac aga gcc agt aat ttc act caa   1920 Phe His His Trp Val Met Lys Val Asn Arg Ala Ser Asn Phe Thr Gln 625                 630                 635                 640 aga cag aaa ttc aaa gat act ttt gct cat att att tta tat tac atg   1968 Arg Gln Lys Phe Lys Asp Thr Phe Ala His Ile Ile Leu Tyr Tyr Met

            645                 650                 655 ttg aaa gat ttg gat gag caa tat agt cat gat tta caa aat tat tgc    2016 Leu Lys Asp Leu Asp Glu Gln Tyr Ser His Asp Leu Gln Asn Tyr Cys

        660                 665                 670 aaa agc tct aaa tta ttc aaa caa ata ttg gat gct gtt gaa tat aga    2064 Lys Ser Ser Lys Leu Phe Lys Gln Ile Leu Asp Ala Val Glu Tyr Arg

    675                 680                 685 aaa atg caa aag ttt tgg gtc cat ggc att gac cct tca cca tct gat    2112 Lys Met Gln Lys Phe Trp Val His Gly Ile Asp Pro Ser Pro Ser Asp

690                 695                 700 ttg gaa aac act aaa ggc gac cgt acg ata ccc aca gat gcc aat ggt    2160 Leu Glu Asn Thr Lys Gly Asp Arg Thr Ile Pro Thr Asp Ala Asn Gly 705                 710                 715                 720 aat tat att gct att aga atc aaa cct gaa aat att gag gaa ttt gcc    2208 Asn Tyr Ile Ala Ile Arg Ile Lys Pro Glu Asn Ile Glu Glu Phe Ala

            725                 730                 735 tgt ggt aac aac ttt ttg att gta tgg tta cat ccc caa aaa caa tta    2256 Cys Gly Asn Asn Phe Leu Ile Val Trp Leu His Pro Gln Lys Gln Leu

        740                 745                 750 ctc act gaa att gaa aaa tca caa gtc agt act cat atg agc aca ttc    2304 Leu Thr Glu Ile Glu Lys Ser Gln Val Ser Thr His Met Ser Thr Phe

    755                 760                 765 aat aat gat tct aga aac aca aat atg aca gtg ata atg gat caa gga    2352 Asn Asn Asp Ser Arg Asn Thr Asn Met Thr Val Ile Met Asp Gln Gly

770                 775                 780 tca ctg gca cta agt gga ggt gca gac cat gga ggt cac ttt gtt ccg    2400 Ser Leu Ala Leu Ser Gly Gly Ala Asp His Gly Gly His Phe Val Pro 785                 790                 795                 800 cca cct gaa ttt gtt aac cac acc ggt ttg tct tct gaa tct gcg tca    2448 Pro Pro Glu Phe Val Asn His Thr Gly Leu Ser Ser Glu Ser Ala Ser

            805                 810                 815 tca aac tca gag aaa ggt ttg tat act ggt tta gga ttg ggt act gct    2496 Ser Asn Ser Glu Lys Gly Leu Tyr Thr Gly Leu Gly Leu Gly Thr Ala

        820                 825                 830 ggt gat att act atg att cat tct gaa ata tta caa tac agt caa cat    2544 Gly Asp Ile Thr Met Ile His Ser Glu Ile Leu Gln Tyr Ser Gln His

    835                 840                 845 ttc caa gaa aga ggt tta cct cat ggt aat ggg ttt gct act att tta   2592 Phe Gln Glu Arg Gly Leu Pro His Gly Asn Gly Phe Ala Thr Ile Leu

850                 855                 860 cga act gtc gat agt gtt aac agt act aat gat ggg tta att tat act   2640 Arg Thr Val Asp Ser Val Asn Ser Thr Asn Asp Gly Leu Ile Tyr Thr 865                 870                 875                 880 tat gat agt aaa tat ttg cag tca cca aga gta agt gat ttg aaa gat   2688 Tyr Asp Ser Lys Tyr Leu Gln Ser Pro Arg Val Ser Asp Leu Lys Asp

            885                 890                 895 gcc atg tca aca cat agg ggt ata agg tta tct aaa cca aat ttt ggt   2736 Ala Met Ser Thr His Arg Gly Ile Arg Leu Ser Lys Pro Asn Phe Gly

        900                 905                 910 ggt gcc aat gga act gct aat atg acg gat tct gct tct aca tcc aat   2784 Gly Ala Asn Gly Thr Ala Asn Met Thr Asp Ser Ala Ser Thr Ser Asn

    915                 920                 925 gga tct gtg ttg aat aaa aat atg caa act aca gat gtt gat tca att   2832 Gly Ser Val Leu Asn Lys Asn Met Gln Thr Thr Asp Val Asp Ser Ile

930                 935                 940 tta agt ggt ctt gaa agt gaa gac gaa gct gcg ttt gtt gtt taa       2877 Leu Ser Gly Leu Glu Ser Glu Asp Glu Ala Ala Phe Val Val 945                 950                 955 <210>2 <211>958 <212>PRT <213>白色念珠菌 <400>2 Met Asn Leu Phe Gln His Lys His Gln Lys Leu Ile Leu Gln Cys Tyr   1               5                  10                  15 Pro Ala Gly Lys Ala Val Asp Lys Lys Pro Asn Ser Ser Glu Leu Ser

         20                  25                  30 Tyr Leu Leu Tyr Tyr Ala Ser Thr Arg Arg Val Lys Leu alu Lys Val

     35                  40                  45 Ile Asn Phe Leu Lys Asp Lys Thr His His Asp Val Gly Arg Asn Arg

  50                 55                  60 Thr Gly Asn Leu Gln Val Thr Leu Ala Ile Ile Gln Glu Leu Ile Lys  65                  70                  75                  80 Lys Cys Ser Glu Asn Leu Asn Val Phe Ala Phe Gln Val Cys Tyr Ile

             85                  90                  95 Leu Gln Leu Ile Ala Asn Thr Lys Asp Leu Ala Leu Cys Lys Asn Val

        100                 105                 110 Val Lys Thr Phe Gly Val Leu Cys Glu Asn Leu Asp Gly Gly Leu Phe

    115                 120                 125 Thr Gly Asp Lys Glu Phe Ile Lys Ile Phe Thr Glu Val Phe Gln Thr

130                 135                 140 Leu Val Ser Phe Gly Lys Asp Arg Ser Gly Val Thr Gln Tyr Asp Trp 145                 150                 155                 160 Gln Met Ile Ser Leu Met Ala Ile Asn Asp Ile Ser Ser Cys Leu Ser

            165                 170                 175 Tyr Asn Ala Ala Val Gly Lys Lys Phe Ile Ala Leu Ser Ile Pro Val

       180                  185                 190 Leu Leu Gln Phe Ile Ile Ala Asn Asn Pro Gln Ser Ser Ile Leu Gln

    195                 200                 205 Arg Leu Lys Ser Asn Leu His Val Glu Asp Asp Gly Lys Arg Leu Ser

210                 215                 220 Arg Ala His Leu Gln Lys Ser His Ser Lys Ile Ala Gln Gln Ile Asp 225                 230                 235                 240 Asp Asp Phe Thr Asn Asp Ser Leu Thr Leu Thr Asp Ile Thr Glu Lys

            245                 250                 255 Ala Phe Ser Ser Met Lys Ser Phe Phe Asn Thr Asn Ala Ala Ser Gln

        260                 265                 270 Ile Ser Glu Val Thr Arg Ala Val Val Gln His Asn Ile Leu Asn Gly

    275                 280                 285 Thr Asp Leu Glu Trp Gly Val Ser Phe Leu Glu Leu Cys Ile Thr Trp

290                 295                 300 Ile Pro Val Gln LeuArg Phe Val Ser Leu Ser Thr Leu Leu Ala Thr 305                 310                 315                 320 Leu Gly Arg Ile Asn Ile Glu Gly Asn Thr Lys Ser Asn Tyr Asn Met

            325                 330                 335 Gln Phe Gln Tyr Ala Arg Tyr Leu Leu Gly Leu Leu Ser Ser Arg Val

        340                 345                 350 Asn Met Ile Gly Leu Ser Val Ser Asp Ile Ile Gln Gln Leu Leu Ser

    355                 360                 365 Leu Gln Ala Asp Leu Ile Leu Lys Ala Ser Asp Leu Asp Lys Ser Glu

370                 375                 380 Ile Ser Ile Leu Thr Asp Ile Tyr Ser Asp Cys Ile Cys Ser Leu Thr 385                 390                 395                 400 Thr His Ile Tyr Tyr Phe Asp Gln Val Pro Asp Ser Ile Gln Glu Ile

            405                 410                 415 Leu Ile Lys Ile Asp Tyr Ile Leu Glu Ser Ser Phe Val Glu Asp Asn

        420                 425                 430 Asn Ile Thr Ser Thr Gly Glu Gln Ile Gln Asp Leu Ile Ile Gln Leu

    435                 440                  445 Leu Asp Asn Ile Ser Lys Ile Phe Leu Ile Leu Lys Asn Lys Ser Ser

450                 455                 460 Ser Ile Asn Arg Asn His Val Asn Leu Glu His Trp Asp Ile Ser Leu 465                 470                 475                 480 Gly Leu Leu Ala Pro Gln Gly Asp His Asp Asp Asn Arg Lys Met Ile

            485                 490                 495 Ile Ser Thr Thr Gln Leu Ile Asn Ile Gln Ala Arg Tyr Leu Lys Val

        500                 505                 510 Phe Asp Glu Phe Leu Asn Asn Glu Leu Ala Val Gly Asn Ser Lys Lys

    515                 520                 525 Ser Tyr Asp Leu Leu Ser Lys Gln Ser Arg Leu Asp Pro Gly Ser Thr

530                 535                 540 Ala Val Glu Gly Val Asn Lys Ser Asp Asp Leu Asp Asn Gly Lys Asp 545                 550                 555                 560 Phe Lys Lys Pro Asp Ala Asn Gln Tyr Ile Thr Asn Gln Gln Asn Phe

            565                 570                 575 Ile Ser His Phe Leu Met Tyr Ile Asp Lys Phe Phe Glu Asn Tyr Asp

        580                 585                 590 Ser Pro Asn Thr Gln Ser Val Leu Leu Leu Val Thr Val Leu Lys Asp

    595                 600                 605 Met Met Asn Ile Leu Gly Leu Asn Phe Leu Ser Asn Phe Ile Pro Phe

610                 615                 620 Phe His His Trp Val Met Lys Val Asn Arg Ala Ser Asn Phe Thr Gln 625                 630                 635                 640 Arg Gln Lys Phe Lys Asp Thr Phe Ala His Ile Ile Leu Tyr Tyr Met

            645                 650                 655 Leu Lys Asp Leu Asp Glu Gln Tyr Ser His Asp Leu Gln Asn Tyr Cys

        660                 665                 670 Lys Ser Ser Lys Leu Phe Lys Gln Ile Leu Asp Ala Val Glu Tyr Arg

    675                 680                 685 Lys Met Gln Lys Phe Trp Val His Gly Ile Asp Pro Ser Pro Ser Asp

690                 695                 700 Leu Glu Asn Thr Lys Gly Asp Arg Thr Ile Pro Thr Asp Ala Asn Gly 705                 710                 715                 720 Asn Tyr Ile Ala Ile Arg Ile Lys Pro Glu Asn Ile Glu Glu Phe Ala

            725                 730                 735 Cys Gly Asn Asn Phe Leu Ile Val Trp Leu His Pro Gln Lys Gln Leu

        740                 745                 750 Leu Thr Glu Ile Glu Lys Ser Gln Val Ser Thr His Met Ser Thr Phe

    755                 760                 765 Asn Asn Asp Ser Arg Asn Thr Asn Met Thr Val Ile Met Asp Gln Gly

770                 775                 780 Ser Leu Ala Leu Ser Gly Gly Ala Asp His Gly Gly His Phe Val Pro 785                 790                795                  800 Pro Pro Glu Phe Val Asn His Thr Gly Leu Ser Ser Glu Ser Ala Ser

            805                 810                 815 Ser Asn Ser Glu Lys Gly Leu Tyr Thr Gly Leu Gly Leu Gly Thr Ala

        820                 825                 830 Gly Asp Ile Thr Met Ile His Ser Glu Ile Leu Gln Tyr Ser Gln His

    835                 840                 845 Phe Gln Glu Arg Gly Leu Pro His Gly Asn Gly Phe Ala Thr Ile Leu

850                 855                 860 Arg Thr Val Asp Ser Val Asn Ser Thr Asn Asp Gly Leu Ile Tyr Thr 865                 870                 875                 880 Tyr Asp Ser Lys Tyr Leu Gln Ser Pro Arg Val Ser Asp Leu Lys Asp

            885                 890                 895 Ala Met Ser Thr His Arg Gly Ile Arg Leu Ser Lys Pro Asn Phe Gly

        900                 905                 910 Gly Ala Asn Gly Thr Ala Asn Met Thr Asp Ser Ala Ser Thr Ser Asn

    915                 920                 925 Gly Ser Val Leu Asn Lys Asn Met Gln Thr Thr Asp Val Asp Ser Ile

930                 935                 940 Leu Ser Gly Leu Glu Ser Glu Asp Glu Ala Ala Phe Val Val 945                 950                 955 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQIDl2 <140> <141> <160>1 <170>patentIn Ver.2.1 <210>1 <211>594 <212>DNA <213>人工序列 <220> <223>人工序列描述:Sc YMR212c的同源片段 <400>1 atcacctgtg aacaacccac catccaagtt ttcacacaaa acaccaaatg ttttgacaac 60 atttttacac aaggcaagat ccttagtgtt ggcaatcagt tgcaagatat agcacacttg 120 aaaggcaaaa acattcaagt tttcactaca ttttttgatt aattcctgaa taatggctaa 180 tgtgacttgt aaattaccag tacggtttct accaacatca tgatgagttt tatctttcaa 240 aaaattaatc accttttcta atttgactct acgagtggat gcatagtata ataaataact 300 taactcggac gagttgggtt ttttgtccac tgctttccca gcaggataac attgtaatat 360 taacttttga tgtttatgtt gaaacaaatt cattcttgga tctggaagtt gaagaaacta 420 ttgaatcaaa acaggattta attaaccaat agaaaagaag taactcttga gttaaaaagg 480 atattcttga tgaaaaaaag gagaaaaaag gggaaagaag actctgaaaa tgaattaaag 540 aaacaagaaa aaagtgatca aatgattgaa taaatgaaag taggtaaaaa atga       594 序列表

<110>Hoechst Marion Roussel

<120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法

<130>SEQID13

<140>

<141>

<160>2

<170>patentIn Ver.2.1

<210>1

<211>3771

<212>DNA

<213>白色念珠菌

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(3771)

<220>

<221>基因

<222>(1)..(3771)

<223>基因CaDR325

<400>1 atg gat ata cca cca aaa cca act ctt aag gca att aag aaa ttt aga   48 Met Asp Ile Pro Pro Lys Pro Thr Leu Lys Ala Ile Lys Lys Phe Arg   1               5                  10                  15 act ttg gat gaa ata aaa tat gcc atg aaa cat gtt ttc caa gat gct   96 Thr Leu Asp Glu Ile Lys Tyr Ala Met Lys His Val Phe Gln Asp Ala

         20                  25                  30 caa tta ggt tta gca gga cat aga aaa tta gtg gta att ttg aaa aat   144 Gln Leu Gly Leu Ala Gly His Arg Lys Leu Val Val Ile Leu Lys Asn

     35                  40                  45 gta ttt aaa aaa gcc att gaa tta aat caa att aat ttc ttt gcc atg   192 Val Phe Lys Lys Ala Ile Glu Leu Asn Gln Ile Asn Phe Phe Ala Met

 50                  55                  60 tgt ttt act aaa ttg tta tct aaa gta tta cct ttg aaa aga gga gtt   240 Cys Phe Thr Lys Leu Leu Ser Lys Val Leu Pro Leu Lys Arg Gly Val  65                  70                  75                  80 ttg gca ggt gat aga ata gtc aaa ttt tgt tat ctg ttt gtt aat ggt    288 Leu Ala Gly Asp Arg Ile Val Lys Phe Cys Tyr Leu Phe Val Asn Gly

             85                  90                  95 ctt gta aaa gat gcc aat gaa gaa aaa cgt tcc aaa gaa gaa gaa aaa    336 Leu Val Lys Asp Ala Asn Glu Glu Lys Arg Ser Lys Glu Glu Glu Lys

        100                 105                 110 gaa gaa aaa gac aaa gac gaa gac aaa gat acg aat gaa agt gat aaa    384 Glu Glu Lys Asp Lys Asp Glu Asp Lys Asp Thr Asn Glu Ser Asp Lys

    115                 120                 125 aat gaa gaa gat cag gaa gat caa gaa gga gaa gga gat caa gaa act    432 Asn Glu Glu Asp Gln Glu Asp Gln Glu Gly Glu Gly Asp Gln Glu Thr

130                 135                 140 cca att tcg gaa ttc ata tca tat ttg ata aaa tat tta ttg agt ggg    480 Pro Ile Ser Glu Phe Ile Ser Tyr Leu Ile Lys Tyr Leu Leu Ser Gly 145                 150                 155                 160 ata gag gct aaa gat aaa ctg gtt cgt tat cgt gtt gta caa aca tta    528 Ile Glu Ala Lys Asp Lys Leu Val Arg Tyr Arg Val Val Gln Thr Leu

            165                 170                 175 gca tac ttg gtt gaa ttc ttg acc gag ata cac gag aat aat aca ttg    576 Ala Tyr Leu Val Glu Phe Leu Thr Glu Ile His Glu Asn Asn Thr Leu

        180                 185                 190 gaa gcg tta tat act tta tta agt aat agg cra caa gat aaa gag ctg    624 Glu Ala Leu Tyr Thr Leu Leu Ser Asn Arg Leu Gln Asp Lys Glu Leu

    195                 200                 205 tcg ata cgt att caa gct gtt gtg gca tta tca cat ttt caa tta ttt    672 Ser Ile Arg Ile Gln Ala Val Val Ala Leu Ser His Phe Gln Leu Phe

210                 215                 220 gaa ttt agt att gaa ggt gat act gga gaa ttt gag gat gaa tta ata    720 Glu Phe Ser Ile Glu Gly Asp Thr Gly Glu Phe Glu Asp Glu Leu Ile 225                 230                 235                 240 tca agt aac caa att cag aat aaa ttg ata aat tcc att caa aat gat    768 Ser Ser Asn Gln Ile Gln Asn Lys Leu Ile Asn Ser Ile Gln Asn Asp

            245                 250                 255 gat agt cca gaa gtc aga cgt gca gca tta atg aat ttg gtt aaa aca    816 Asp Ser Pro Glu Val Arg Arg Ala Ala Leu Met Asn Leu Val Lys Thr

        260                 265                 270 caa gat aca ata ccg att tta ctt gaa cga gcc aga gat tcc aat tct    864 Gln Asp Thr Ile Pro Ile Leu Leu Glu Arg Ala Arg Asp Ser Asn Ser

    275                 280                 285 att aat aga aga ttg gtt tat tct aaa ata gct cgt gaa tta ata act    912 Ile Asn Arg Arg Leu Val Tyr Ser Lys Ile Ala Arg Glu Leu Ile Thr

290                 295                 300 gat ttg gat gat ctt gaa ttt gaa gat agg gaa ttt tta tta aaa tgg    960 Asp Leu Asp Asp Leu Glu Phe Glu Asp Arg Glu Phe Leu Leu Lys Trp 305                 310                 315                 320 ggg tta aat gat cgt gat gaa act gtt aaa gca gcc gcc act aaa atg    1008 Gly Leu Asn Asp Arg Asp Glu Thr Val Lys Ala Ala Ala Thr Lys Met

            325                 330                 335 ctt acc att tat tgg tat caa tct gtc aat gaa gat tta tta gaa tta    1056 Leu Thr Ile Tyr Trp Tyr Gln Ser Val Asn Glu Asp Leu Leu Glu Leu

        340                 345                 350 att gat caa tta aat gtc aag agt gct ata gct gaa cag gcc ata tta    1104 Ile Asp Gln Leu Asn Val Lys Ser Ala Ile Ala Glu Gln Ala Ile Leu

    355                 360                 365 gca ttt ttt aaa aat aaa cca gaa gtt ctt gaa act att aaa att gat    1152 Ala Phe Phe Lys Asn Lys Pro Glu Val Leu Glu Thr Ile Lys Ile Asp

370                 375                 380 gaa tca tat tgg aaa aat cta act aca gaa aag gca ttc ttg atg agg    1200 Glu Ser Tyr Trp Lys Asn Leu Thr Thr Glu Lys Ala Phe Leu Met Arg 385                 390                 395                 400 acg ttt tat caa tat tgt aat gag aat caa tta cat gct tta atg gat    1248 Thr Phe Tyr Gln Tyr Cys Asn Glu Asn Gln Leu His Ala Leu Met Asp

            405                 410                 415 gcc aat ttc cct gaa tta ctt gat ttg tca ata aca tta gaa aag tat    1296 Ala Asn Phe Pro Glu Leu Leu Asp Leu Ser Ile Thr Leu Glu Lys Tyr

        420                 425                 430 ttg tca gtg agg ttg aaa act ata aat gaa aat gaa aat tta gtt aag    1344 Leu Ser Val Arg Leu Lys Tht Ile Asn Glu Asn Glu Asn Leu Val Lys

    435                 440                 445 aca tgg gaa act tat aat gcc aag att gac gaa tta gat gat caa ata    1392 Thr Trp Glu Thr Tyr Asn Ala Lys Ile Asp Glu Leu Asp Asp Gln Ile

450                 455                 460 ttt agt ctt gaa aac cag att tcc aga ata aat act gat gcc gat aat   1440 Phe Ser Leu Glu Asn Gln Ile Ser Arg Ile Asn Thr Asp Ala Asp Asn 465                 470                 475                 480 ttc cgt aaa agt tta tct aac att gaa gaa gat att att gaa atc aat   1488 Phe Arg Lys Ser Leu Ser Asn Ile Glu Glu Asp Ile Ile Glu Ile Asn

            485                 490                     495 att gct aag gat ttg ttc aaa aag aga att aaa caa ttg aaa aac aac   1536 Ile Ala Lys Asp Leu Phe Lys Lys Arg Ile Lys Gln Leu Lys Asn Asn

        500                 505                     510 agt ggg aat cta gaa gat ttg att act gaa gaa aat caa gag att gct   1584 Ser Gly Asn Leu Glu Asp Leu Ile Thr Glu Glu Asn Gln Glu Ile Ala

    515                 520                 525 gat caa atc aag gat ttc ctg atg gaa gat ttg caa caa caa ttg gaa   1632 Asp Gln Ile Lys Asp Phe Leu Met Glu Asp Leu Gln Gln Gln Leu Glu

530                 535                 540 gat atc aat aaa aat ctt gat gaa att gaa cat cat cca gaa gat ata   1680 Asp Ile Asn Lys Asn Leu Asp Glu Ile Glu His His Pro Glu Asp Ile 545                 550                 555                 560 acg gct aaa tta gaa gaa ctt caa aca aaa tat gat tct tgt att agg   1728 Thr Ala Lys Leu Glu Glu Leu Gln Thr Lys Tyr Asp Ser Cys Ile Arg

            565                 570                 575 gcg ctt gaa acc act agt gaa ttg aaa att cag act gtt caa atc ttt   1776 Ala Leu Glu Thr Thr Ser Glu Leu Lys Ile Gln Thr Val Gln Ile Phe

        580                 585                 590 gaa caa gaa cat gaa aat gat tgt atc ccc ttt gta gat gct ttg aaa   1824 Glu Gln Glu His Glu Asn Asp Cys Ile Pro Phe Val Asp Ala Leu Lys

    595                 600                 605 gaa tta gaa ttc att att aat caa tta tta tta att gtt aaa gat ttt   1872 Glu Leu Glu Phe Ile Ile Asn Gln Leu Leu Leu Ile Val Lys Asp Phe

610                 615                 620 gat tat gga gat gaa atg gca aga aga aaa ttg tta cat ata ata aga   1920 Asp Tyr Gly Asp Glu Met Ala Arg Arg Lye Leu Leu His Ile Ile Arg 625                 630                 635                 640 atg aca tta act gaa gat aaa tta cct gat gcg tta ata tca gtg gca   1968 Met Thr Leu Thr Glu Asp Lys Leu Pro Asp Ala Leu Ile Ser Val Ala

            645                 650                 655 ctt aga gta tta cga gca ctt tct ata aat gaa aaa gat ttt gtt tcc   2016 Leu Arg Val Leu Arg Ala Leu Ser Ile Asn Glu Lys Asp Phe Val Ser

        660                 665                 670 atg gcg gta gaa ata att act gat att cgt gat tct cga gat gat gaa   2064 Met Ala Val Glu Ile Ile Thr Asp Ile Arg Asp Ser Arg Asp Asp Glu

    675                 680                 685 gag ttc cat tct gct gcc gct aca ttt gat gat gat gat gat gat att   2112 Glu Phe His Ser Ala Ala Ala Thr Phe Asp Asp Asp Asp Asp Asp Ile

690                 695                 700 ttg gga aat ggt gat gat gaa tct caa caa tca tca tca ctc agt gca   2160 Leu Gly Asn Gly Asp Asp Glu Ser Gln Gln Ser Ser Ser Leu Ser Ala 705                 710                 715                 720 gta aca aag aag cga aga att gaa cca gat atg cca cca gat gat att   2208 Val Thr Lys Lys Arg Arg Ile Glu Pro Asp Met Pro Pro Asp Asp Ile

            725                 730                 735 gtg tta aga tgt ctt acc atg aca caa tat gta ttg gaa gta att act   2256 Val Leu Arg Cys Leu Thr Met Thr Gln Tyr Val Leu Glu Val Ile Thr

        740                 745                 750 cat agt ttg gat gat cat ctt tca ttg agt tct att tac agt ggt att   2304 His Ser Leu Asp Asp His Leu Ser Leu Ser Ser Ile Tyr Ser Gly Ile

    755                 760                 765 gtc aat tat gct att cag aat gaa tcg aaa aag aaa tta tat ctt gct   2352 Val Asn Tyr Ala Ile Gln Asn Glu Ser Lys Lys Lys Leu Tyr Leu Ala

770                 775                 780 ggg tta act tgt tta gga ctt tat tct tta att gat tcc aaa att gcc   2400 Gly Leu Thr Cys Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Ile Asp Ser Lys Ile Ala 785                 790                 795                 800 aga att gca act aca aca tta tta ctg gca atg aga agt aat ggt gaa   2448 Arg Ile Ala Thr Thr Thr Leu Leu Leu Ala Met Arg Ser Asn Gly Glu

            805                 810                 815 gaa gtg aaa gag att gga atg aaa gct att gtg gat ata ttg gca att   2496 Glu Val Lys Glu Ile Gly Met Lys Ala Ile Val Asp Ile Leu Ala Ile

         820                825                 830 tat ggt atg agt att ctt gat aaa tca tct aaa tac aaa tat tca aga   2544 Tyr Gly Met Ser Ile Leu Asp Lys Ser Ser Lys Tyr Lys Tyr Ser Arg

    835                 840                 845 atg ttt ttc aaa gtt tta aat tca ttt gat gca cca aaa tta caa tgc   2592 Met Phe Phe Lys Val Leu Asn Ser Phe Asp Ala Pro Lys Leu Gln Cys

850                 855                 860 att gtc gct gaa gga tta tgc aaa ttg ttt tta gcc gat att ttg tac   2640 Ile Val Ala Glu Gly Leu Cys Lys Leu Phe Leu Ala Asp Ile Leu Tyr 865                 870                 875                 880 aag act gac aaa cgg agt tta ttt gga aat gct att caa ggt ggt ggt   2688 Lys TLr Asp Lys Arg Set Leu Phe Gly Asn Ala Ile Gln Gly Gly Gly

            885                 890                 895 ggt ggt ggt ggt ggt aat gat gat cca act acc acc aat gac gat gaa   2736 Gly Gly Gly Gly Gly Asn Asp Asp Pro TLr Thr TLr Asn Asp Asp Glu

        900                 905                 910 act gaa gaa gaa aca gat cga gag cat gaa aag cat tta ttt gaa gcg   2784 TLr Glu Glu Glu TLr Asp Arg Glu His Glu Lys His Leu Phe Glu Ala

    915                 920                 925 att gta ctt att tat ttc aac ccc aac acc aaa tca aat caa gaa tta   2832 Ile Val Leu Ile Tyr Phe Asn Pro Asn Thr Lys Ser Asn Gln Glu Leu

930                 935                 940 caa caa att ttg tca ttt tgt att cca gtt tat gcc ttt tct cat ata   2880 Gln Gln Ile Leu Ser Phe Cys Ile Pro Val Tyr Ala Phe Ser His Ile 945                 950                 955                 960 aat cat caa atc aat tta gct gca gtt agt ggt gat gtt att tat cga   2928 Asn His Gln Ile Asn Leu Ala Ala Val Ser Gly Asp Val Ile Tyr Arg

            965                 970                 975 ctt ttc act gaa aca gaa aca gaa tta tca cca agt gtt ata atc cct   2976 Leu Phe TLr Glu Thr Glu TLr Glu Leu Ser Pro Ser Val Ile Ile Pro

        980                 985                 990 caa tta ata tca tgg tgt gat cct cga aat tta gtt aaa tta tcg aat   3024 Gln Leu Ile Ser Trp Cys Asp Pro Arg Asn Leu Val Lys Leu Ser Asn

    995                 1000                1005 gag gaa ata aat caa gca aca tca cat tta tgg caa tgt gtt tat tta   3072 Glu Glu Ile Asn Gln Ala TLr Ser His Leu Trp Gln Cys Val Tyr Leu

1010                1015                1020 tta caa gtg gtt gaa caa gta gat gct cgt aat gtt aaa aga tgc atc   3120 Leu Gln Val Val Glu Gln Val Asp Ala Arg Asn Val Lys Arg Cys Ile 1025                1030                1035                1040 att aac aat ttg aat aaa ttt cat ata acg gaa gaa tta gag tca aat    3168 Ile Asn Asn Leu Asn Lys Phe His Ile Thr Glu Glu Leu Glu Ser Asn

            1045                1050                1055 caa tta caa gct tta att aaa gct ctt gat gct aca gtt gaa tta ttt   3216 Gln Leu Gln Ala Leu Ile Lys Ala Leu Asp Ala Thr Val Glu Leu Phe

        1060                1065                1070 act aat aat gaa gat aac cct aat ttt atc ttg gat aaa cca aca aag   3264 Thr Asn Asn Glu Asp Asn Pro Asn Phe Ile Leu Asp Lys Pro Thr Lys

    1075                1080                1085 aag aat ttt gat act ttt att gaa tca ata aag aat aaa ttg gaa att   3312 Lys Asn Phe Asp Thr Phe Ile Glu Ser Ile Lys Asn Lys Leu Glu Ile    1090                1095                1100 gct caa aaa aga gaa gaa aat gaa ctg att aaa agt ggt aca aat tca   3360 Ala Gln Lys Arg Glu Glu Asn Glu Leu Ile Lys Ser Gly Thr Asn Ser 1105               1110                1115                1120 ata tta cat gaa tta gat gat tta gat att gga act gga gag agt agt   3408 Ile Leu His Glu Leu Asp Asp Leu Asp Ile Gly Thr Gly Glu Ser Ser

           1125                1130                1135 caa ata tct ata aaa tca gaa aca aaa aga aga gat ctg gat cga tct   3456 Gln Ile Ser Ile Lys Ser Glu Thr Lys Arg Arg Asp Leu Asp Arg Ser

       1140                1145                1150 ctg caa gtt agt aaa act acg tca cca gaa act tca gaa aat gaa gat   3504 Leu Gln Val Ser Lys Thr Thr Ser Pro Glu Thr Ser Glu Asn Glu Asp

   1155                1160                1165 gaa gag gat gat aat gag gag gag gaa caa gag aag aag aaa agt ttt   3552 Glu Glu Asp Asp Asn Glu Glu Glu Glu Gln Glu Lys Lys Lys Set Phe    1170                1175                1180 act gat gga aaa aat aaa ctt gaa cta aag gca gat aag cca atc aca   3600 Thr Asp Gly Lys Asn Lys Leu Glu Leu Lys Ala Asp Lys Pro Ile Thr 1185               1190                1195                1200 ttt aaa gct gaa gac aag agg gaa ggg tca gtt gaa aca gat cat ggt   3648 Phe Lys Ala Glu Asp Lys Arg Glu Gly Ser Val Glu Thr Asp His Gly

          1205                 1210                1215 caa gaa caa gtt cta gtt gaa tca aag aaa gtc att gat agt aat gtt   3696 Gln Glu Gln Val Leu Val Glu Ser Lys Lys Val Ile Asp Ser Asn Val

       1220                1225                1230 gaa gat tct tta gaa gat ata gat aag ttt tta gaa gaa gca gat gat    3744 Glu Asp Ser Leu Glu Asp Ile Asp Lys Phe Leu Glu Glu Ala Asp Asp

   1235                1240                1245 gtt gat tat ggt gat att tca atg gat                                3771 Val Asp Tyr Gly Asp Ile Ser Met Asp    1250                1255 <210>2 <211>1257 <212>PRT <213>白色念珠菌 <400>2 Met Asp Ile Pro Pro Lys Pro Thr Leu Lys Ala Ile Lys Lys Phe Arg   1               5                  10                  15 Thr Leu Asp Glu Ile Lys Tyr Ala Met Lys His Val Phe Gln Asp Ala

         20                  25                  30 Gln Leu Gly Leu Ala Gly His Arg Lys Leu Val Val Ile Leu Lys Asn

     35                  40                  45 Val Phe Lys Lys Ala Ile Glu Leu Asn Gln Ile Asn Phe Phe Ala Met

 50                  55                  60 Cys Phe Thr Lys Leu Leu Ser Lys Val Leu Pro Leu Lys Arg Gly Val  65                  70                  75                  80 Leu Ala Gly Asp Arg Ile Val Lys Phe Cys Tyr Leu Phe Va1 Asn Gly

             85                  90                  95 Leu Val Lys Asp Ala Asn Glu Glu Lys Arg Ser Lys Glu Glu Glu Lys

        100                 105                 110 Glu Glu Lys Asp Lys Asp Glu Asp Lys Asp Thr Asn Glu Ser Asp Lys

    115                 120                 125 Asn Glu Glu Asp Gln Glu Asp Gln Glu Gly Glu Gly Asp Gln Glu Thr

130                 135                 140 Pro Ile Ser Glu Phe Ile Ser Tyr Leu Ile Lys Tyr Leu Leu Ser Gly 145                 150                 155                 160 Ile Glu Ala Lys Asp Lys Leu Val Arg Tyr Arg Val Val Gln Thr Leu

            165                 170                 175 Ala Tyr Leu Val Glu Phe Leu Thr Glu Ile His Glu Asn Asn Thr Leu

        180                 185             190 Glu Ala Leu Tyr Thr Leu Leu Ser Asn Arg Leu Gln Asp Lys Glu Leu

    195                 200                 205 Ser Ile Arg Ile Gln Ala Val Val Ala Leu Ser His Phe Gln Leu Phe

210                 215                 220 Glu Phe Ser Ile Glu Gly Asp Thr Gly Glu Phe Glu Asp Glu Leu Ile 225                 230                 235                 240 Ser Ser Asn Gln Ile Gln Asn Lys Leu Ile Asn Ser Ile Gln Asn Asp

            245                 250                 255   Asp Ser Pro Glu Val Arg Arg Ala Ala Leu Met Asn Leu Val Lys Thr

        260                 265                 270 Gln Asp Thr Ile Pro Ile Leu Leu Glu Arg Ala Arg Asp Ser Asn Ser

    275                 280                 285 Ile Asn Arg Arg Leu Val Tyr Ser Lys Ile Ala Arg Glu Leu Ile Thr

290                 295                 300 Asp Leu Asp Asp Leu Glu Phe Glu Asp Arg Glu Phe Leu Leu Lys Trp 305                 310                 315                 320 Gly Leu Asn Asp Arg Asp Glu Thr Val Lys Ala Ala Ala Thr Lys Met

            325                 330                 335 Leu Thr Ile Tyr Trp Tyr Gln Ser Val Asn Glu Asp Leu Leu Glu Leu

        340                 345                 350 Ile Asp Gln Leu Asn Val Lys Ser Ala Ile Ala Glu Gln Ala Ile Leu

    355                 360                 365 Ala Phe Phe Lys Asn Lys Pro Glu Val Leu Glu Thr Ile Lys Ile Asp

370                 375                 380 Glu Ser Tyr Trp Lys Asn Leu Thr Thr Glu Lys Ala Phe Leu Met Arg 385                 390                 395                 400 Thr Phe Tyr Gln Tyr Cys Asn Glu Asn Gln Leu His Ala Leu Met Asp

            405                 410                 415 Ala Asn Phe Pro Glu Leu Leu Asp Leu Ser Ile Thr Leu Glu Lys Tyr

        420                 425                 430 Leu Ser Val Arg Leu Lys Thr Ile Asn Glu Asn Glu Asn Leu Val Lys

    435                 440                 445 Thr Trp Glu Thr Tyr Asn Ala Lys Ile Asp Glu Leu Asp Asp Gln Ile

450                 455                 460 Phe Ser Leu Glu Asn Gln Ile Ser Arg Ile Asn Thr Asp Ala Asp Asn 465                 470                 475                 480 Phe Arg Lys Ser Leu Ser Asn Ile Glu Glu Asp Ile Ile Glu Ile Asn

            485                 490                 495 Ile Ala Lys Asp Leu Phe Lys Lys Arg Ile Lys Gln Leu Lys Asn Asn

        500                 505                 510 Ser Gly Asn Leu Glu Asp Leu Ile Thr Glu Glu Asn Gln Glu Ile Ala

    515                 520                 525 Asp Gln Ile Lys Asp Phe Leu Met Glu Asp Leu Gln Gln Gln Leu Glu

530                 535                 540 Asp Ile Asn Lys Asn Leu Asp Glu Ile Glu His His Pro Glu Asp Ile 545                 550                 555                 560 Thr Ala Lys Leu Glu Glu Leu Gln Thr Lys Tyr Asp Ser Cys Ile Arg

            565                 570                 575 Ala Leu Glu Thr Thr Ser Glu Leu Lys Ile Gln Thr Val Gln Ile Phe

        580                 585                 590 Glu Gln Glu His Glu Asn Asp Cys Ile Pro Phe Val Asp Ala Leu Lys

    595                 600                 605 Glu Leu Glu Phe Ile Ile Asn Gln Leu Leu Leu Ile Val Lys Asp Phe

610                 615                 620 Asp Tyr Gly Asp Glu Met Ala Arg Arg Lys Leu Leu His Ile Ile Arg 625                 630                 635                 640 Met Thr Leu Thr Glu Asp Lys Leu Pro Asp Ala Leu Ile Ser Val Ala

            645                 650                 655 Leu Arg Val Leu Arg Ala Leu Ser Ile Asn Glu Lys Asp Phe Val Ser

        660                 665                 670 Met Ala Val Glu Ile Ile Thr Asp Ile Arg Asp Ser Arg Asp Asp Glu

    675                 680                 685 Glu Phe His Ser Ala Ala Ala Thr Phe Asp Asp Asp Asp Asp Asp Ile

690                 695                 700      Leu Gly Asn Gly Asp Asp Glu Ser Gln Gln Ser Ser Ser Leu Ser Ala 705                 710                 715                 720 Val Thr Lys Lys Arg Arg Ile Glu Pro Asp Met Pro Pro Asp Asp Ile

            725                 730             735 Val Leu Arg Cys Leu Thr Met Thr Gln Tyr Val Leu Glu Val Ile Thr

        740                 745                 750 His Ser Leu Asp Asp His Leu Ser Leu Ser Ser Ile Tyr Ser Gly Ile

    755                 760                 765  Val Asn Tyr Ala Ile Gln Asn Glu Ser Lys Lys Lys Leu Tyr Leu Ala

770                 775                 780 Gly Leu Thr Cys Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Ile Asp Ser Lys Ile Ala 785                 790                 795                 800 Arg Ile Ala Thr Thr Thr Leu Leu Leu Ala Met Arg Ser Asn Gly Glu

            805                 810                 815 Glu Val Lys Glu Ile Gly Met Lys Ala Ile Val Asp Ile Leu Ala Ile

        820                 825                 830 Tyr Gly Met Ser Ile Leu Asp Lys Ser Ser Lys Tyr Lys Tyr Ser Arg

    835                 840                 845 Met Phe Phe Lys Val Leu Asn Ser Phe Asp Ala Pro Lys Leu Gln Cys

850                 855                 860 Ile Val Ala Glu Gly Leu Cys Lys Leu Phe Leu Ala Asp Ile Leu Tyr 865                 870                 875                 880 Lys Thr Asp Lys Arg Ser Leu Phe Gly Asn Ala Ile Gln Gly Gly Gly

            885                 890                 895 Gly Gly Gly Gly Gly Asn Asp Asp Pro Thr Thr Thr Asn Asp Asp Glu

        900                 905                 910 Thr Glu Glu Glu Thr Asp Arg Glu His Glu Lya His Leu Phe Glu Ala

    915                 920                 925 Ile Val Leu Ile Tyr Phe Asn Pro Asn Thr Lys Ser Asn Gln Glu Leu

930                 935                 940 Gln Gln Ile Leu Ser Phe Cys Ile Pro Val Tyr Ala Phe Ser His Ile 945                 950                 955                 960 Asn His Gln Ile Asn Leu Ala Ala Val Ser Gly Asp Val Ile Tyr Arg

            965                 970                 975 Leu Phe Thr Glu Thr Glu Thr Glu Leu Ser Pro Ser Val Ile Ile Pro

        980                 985                 990 Gln Leu Ile Ser Trp Cys Asp Pro Arg Asn Leu Val Lys Leu Ser Asn

    995                1000                1005 Glu Glu Ile Asn Gln Ala Thr Ser His Leu Trp Gln Cys Val Tyr Leu    1010               1015                 1020 Leu Gln Val Val Glu Gln Val Asp Ala Arg Asn Val Lys Arg Cys Ile 025                1030                1035                1040 Ile Asn Asn Leu Asn Lys Phe His Ile Thr Glu Glu Leu Glu Ser Asn

           1045                1050                1055 Gln Leu Gln Ala Leu Ile Lys Ala Leu Asp Ala Thr Val Glu Leu Phe

       1060                1065                1070 Thr Asn Asn Glu Asp Asn Pro Asn Phe Ile Leu Asp Lys Pro Thr Lys

   1075                1080                1085 Lys Asn Phe Asp Thr Phe Ile Glu Ser Ile Lys Asn Lys Leu Glu Ile    1090                1095                1100 Ala Gln Lys Arg Glu Glu Asn Glu Leu Ile Lys Ser Gly Thr Asn Ser 105                1110                1115                1120 Ile Leu His Glu Leu Asp Asp Leu Asp Ile Gly Thr Gly Glu Ser Ser

           1125                1130                1135 Gln Ile Ser Ile Lys Ser Glu Thr Lys Arg Arg Asp Leu Asp Arg Ser

       1140                1145                1150 Leu Gln Val Ser Lys Thr Thr Ser Pro Glu Thr Ser Glu Asn Glu Asp

   1155                1160                1165 Glu Glu Asp Asp Asn Glu Glu Glu Glu Gln Glu Lys Lys Lys Ser Phe    1170                1175                1180 Thr Asp Gly Lys Asn Lys Leu Glu Leu Lys Ala Asp Lys Pro Ile Thr 185                1190                1195                1200 Phe Lys Ala Glu Asp Lys Arg Glu Gly Ser Val Glu Thr Asp His Gly

           12                  1210                1215 Gln Glu Gln Val Leu Val Glu Ser Lys Lys Val Ile Asp Ser Asn Val

       1220                1225                1230 Glu Asp Ser Leu Glu Asp Ile Asp Lys Phe Leu Glu Glu Ala Asp Asp

   1235                1240                1245 Val Asp Tyr Gly Asp Ile Ser Met Asp    1250                1255 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQIDl4 <140> <141> <160>1 <170>PatentIn Ver.2.1 <210>1 <211>603 <212>DNA <213>人工序列 <220> <223>人工序列描述:Sc YDR325的同源片段 <400>1 ctgtttgtta atggtcttgt aaaagatgcc aatgaagaaa aacgttccaa agaagaagaa 60 aaagaagaga aagacaaaga caaagacaaa gatacgaatg aaagtgataa aaatgaagaa 120 gatcaggaag atcaagaagg agaaggagat caagaaactc caatttcgga attcatatca 180 tatttgataa aatatttatt gagtgggata gaggctaaag ataaactggt tcgttatcgt 240 gttgtacaaa cattagcata cttggttgaa ttcttgaccg agatacacga gaataataca 300 ttggaagcgt tatatacttt attaagtaat aggctacaag ataaagagct gtcgatacgt 360 attcaagctg ttgtggcatt atcacatttt caattatttg aatttagtat tgaaggtgat 420 actggagaat ttgaggatga attaatatca agtaaccaaa ttcagaataa attgataaat 480 tccattcaaa atgatgatag tccagaagtc agacgtgcag cattaatgaa tttggttaaa 540 acacaagata caataccgat tttacttgag cgagccagag attccaattc tattaataga 600 aga                                                               603 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID15 <140> <141> <160>1 <170>PatentIn Ver.2.1 <210>1 <211>581 <212>DNA <213>人工序列 <220> <223>人工序列描述:Sc YDR325的同源片段 <400>1 ggggttaaat gatcgtgatg aatctgttaa agcagccgcc tttaaaatgc taaccattta 60 ttggtatcaa tctgtcaatg aagatttatt agaattaatt gatcaattaa atgtcagaag 120 tgctatagct gaacaggcca tattagcatt ttttaaaaat aaaccagaag ttcttgcaac 180 tattaaaatt gatgaatcat attggaaaaa tctaactaca gaaaaggcat tcttgatgag 240 gacgttttat caatattgta atgagaatca attacatgct ttaatggatg ccaatttccc 300 tgaattactt gatttgtcaa taacattaga aaagtatttg tcagtgaggt tgaaaacaat 360 aaatgaaaat gaaaatttaa ttaagacatg ggaaacttat aatgccaaga ttgacgaatt 420 agatgatcaa atatttagtc ttgaaaacca gatttccaga ataaatactg atgccgataa 480 tttccgtaaa agtttatcta acattgaaga agatattatt gaaatcaata ttgctaagga 540 tttgttcaaa aagagaatta aacaattgaa aaactgagca c                     581 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID16 <140> <141> <160>1 <170>PatentIn Ver.2.1 <210>1 <211>662 <212>DNA <213>人工序列 <220> <223>人工序列描述:Sc YDR325的同源片段 <400>1 tggtgactca attcatttga tgcaccaaaa ttacaatgca ttgtcgctga gtagattatg 60 caaattgttt ttagccgata ttttgtacaa gactgacaaa cggatttatt tggaaatgct 120 attcaaggtg gtggtggtgg tgatgatcca actaccacca atgacgatga aactgaagaa 180 gaaacagatc gagagcatga aaagcattta tttgaagcga ttgtacttat ttatttcaac 240 cccaacacca aatcaaatca agaattacaa caaattttgt cattttgtat tccagtttat 300 gccttttctc atataaatca tcaaatcaat ttagctgcag ttagtggtga tgttatttat 360 cgacttttca ctgaaacaga aacagaatta tcaccaagtg ttataatccc tcaattaata 420 tcatggtgtg atcctcgaaa tttagttaaa ttatcgaatg aggaaataaa tcaagcaaca 480 tcacatttat ggcaatgtgt ttatttatta caagtggttg aacaagtaga tgctcgtaat 540 gttaaaagat gcatcattaa caatttgaat aaatttcata taacggaaga attagaatca 600 aatcaattac aagctttaat taaagctctt gatgctacag ttgaattatt tactaataat 660 ga                                                                662 序列表 <110>Hoechst Marion Roussel <120>白色念珠菌中的必需基因及用该基因筛选抗真菌物质的方法 <130>SEQID17 <140> <141> <160>1 <170>PatentIn Ver.2.1 <210>1 <211>231 <212>DNA <213>人工序列 <220> <223>人工序列描述:Sc YOR110的同源片段 <400>1 atatgtgttg atagttacac atgcagcaac gaaaattgct ttaggatcag ctttattaca 60 gttaaaatca gttactgatg ttatagatga taatcaaact gtgttacgtg ctggtgcatg 120 ttcattatcc aaatttgtta gagatggcga agataaaacc aatcatacta ttcaatggaa 180 aattgtcatg aatggtaatt gtgaattctt gacacagggt gaagaaatga a          231

高效检索全球专利

专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台,是提供专利分析,专利查询,专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。

我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据,免费查、免费专利分析。

申请试用

分析报告

专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析,涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度,系统通过AI智能系统对图表进行解读,只需1分钟,一键生成行业专利分析报告。

申请试用

QQ群二维码
意见反馈