재조합 바실루스 세포 및 살진균제를 포함하는 조성물 {COMPOSITIONS COMPRISING RECOMBINANT BACILLUS CELLS AND A FUNGICIDE}

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2014년 9월 17일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/051,915를 우선권 주장하며, 상기 가출원의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조

서열 목록의 공식 사본은 2015년 9월 14일에 생성되고 152 킬로바이트의 크기를 갖는 파일명 "BCS149058WO_ST25.txt"의 ASCII-포맷화 서열 목록으로서 EFS-웹을 통해 전자적으로 제출되며, 본 명세서와 함께 출원된다. 이러한 ASCII-포맷화 문서에 담긴 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

발명의 분야

본 발명은 (i) (x) 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (y) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스( Bacillus ) 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 (ii) 식물 성장 및/또는 건강을 개선시키는 능력 및/또는 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대한 활성을 나타내는 본원에 개시된 특정한 살진균제로부터 선택된 적어도 1종의 살진균제를 상승작용적 유효량으로 포함하는 조성물에 관한 것이다. 추가로, 본 발명은 이러한 조성물의 용도, 뿐만 아니라 식물 성장을 증진시키고/거나, 식물 건강을 촉진하고/거나, 식물 및 식물 부분의 전체 손상을 감소시키는 방법에 관한 것이다.

작물 보호에서, 식물의 건강 및/또는 성장을 개선시키는 적용에 대한 필요성이 계속 존재한다. 보다 건강한 식물은 일반적으로 식물 또는 그의 산물의 보다 높은 수확량 및/또는 보다 우수한 품질을 가져온다.

식물 건강을 촉진하기 위해, 무기 및 유기 물질 둘 다를 기재로 하는 비료가 전세계적으로 사용된다. 비료는 단일 물질 또는 조성물일 수 있고, 영양소를 식물에 제공하기 위해 사용된다. 비료의 적용에서 주요 돌파구는 약 1840년에 유스투스 폰 리비히(Justus von Liebig)에 의한 질소-기재 비료의 개발이었다. 그러나, 비료는 미네랄의 고갈 및 염과 중금속의 농축을 포함한, 토양 산성화 및 토양 내 영양 균형의 탈안정화를 유도할 수 있다. 추가로, 과도한 비료 사용은 토양 동물상의 변경을 유도할 수 있을 뿐만 아니라 지표수 및 지하수를 오염시킬 수 있다. 추가로, 건강에 해로운 물질, 예컨대 니트레이트가 식물 및 과실에 농축될 수 있다.

추가로, 살곤충제 및 살진균제가 해충을 방제하기 위해 전세계적으로 사용된다. 합성 살곤충제 또는 살진균제는 종종 비-특이적이고, 따라서 다른 자연 발생 유익 유기체를 포함한, 표적 유기체 이외의 다른 유기체에 대해서도 작용할 수 있다. 그들은 그의 화학적 성질 때문에 또한 독성일 수 있고 비-생분해성일 수 있다. 전세계 소비자는 특히 식품에서 화학물질의 잔류물과 연관된 잠재적인 환경 및 건강 문제를 점점 의식하고 있다. 이는 화학 (즉, 합성) 살충제의 사용 또는 적어도 그의 양을 감소시키도록 하는 소비자 압박을 증가시켰다. 따라서, 효과적인 해충 방제를 여전히 가능하게 하면서 먹이 사슬 요건을 관리하기 위한 필요성이 존재한다.

합성 살곤충제 또는 살진균제의 사용과 함께 발생하는 추가의 문제는 살곤충제 또는 살진균제의 반복적 및 독점적 적용이 종종 저항성 동물 해충 또는 미생물의 선택으로 이어진다는 점이다. 통상적으로, 이러한 균주는 또한 동일한 작용 방식을 갖는 다른 활성 성분에 대해 교차-저항성이다. 그러면 상기 활성 화합물을 사용한 병원체의 효과적인 방제는 더 이상 가능하지 않다. 그러나, 새로운 작용 메카니즘을 갖는 활성 성분을 개발하는 것은 어렵고 고비용이다.

식물 건강-증진제 및/또는 식물 보호제로서 작용하는 생물학적 방제제 (BCA)의 사용이 비료 및 합성 살충제에 대한 대안이다. 일부 경우에, BCA의 유효성은 특히 중증 감염 압박의 경우에는 통상적인 살곤충제 및 살진균제와 동일한 수준에서 나타나지 않는다. 결과적으로, 일부 상황에서, 생물학적 방제제, 그의 돌연변이체 및 그에 의해 생산된 대사물은 특히 낮은 적용률에서 전적으로 만족스럽지 않다. 따라서, 상기 언급된 요건을 충족시키도록 노력하기 위해, 합성 살진균제 및 살곤충제와 함께 사용되는 생물학적 방제제를 포함한, 새로운 식물 건강-증진 및/또는 식물 보호 조성물을 개발하기 위한 필요성이 일관되게 존재한다.

이를 고려하여, 특히 본 발명의 목적은 식물 성장을 개선시키고/거나 식물 건강을 증진시키는 증진된 능력을 갖거나 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대해 증진된 활성을 나타내는 조성물을 제공하는 것이었다.

따라서, 이들 목적은 하기에 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 조성물에 의해 달성되는 것으로 밝혀졌다. a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소; 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소; 및 식물을 병원체 또는 해충으로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제를 적용함으로써, (i) 식물 성장, 식물 수확량 및/또는 식물 건강, 및/또는 (ii) 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대한 활성을 바람직하게는 초상가적 방식으로 증진시킬 수 있다.

본원에서 표적화 서열, 포자외막 단백질, 포자외막 단백질 단편, 융합 단백질 및 이러한 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막 생산 바실루스 세포에 대한 언급은 독립적 실시양태인 것으로 간주되어서는 안된다. 대신에, 본 출원 전반에 걸쳐, 표적화 서열, 포자외막 단백질, 포자외막 단백질 단편, 융합 단백질 및 이러한 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막 생산 바실루스 세포에 대한 언급은 단지 본원에 기재된 특정한 살진균제 중 1종 이상과의 조합 (및 바람직하게는 상승작용적 조합)으로만 개시 및 청구된 것으로 간주되어야 한다. 추가로, "본원에 개시된 특정한 살진균제"에 대한 언급은 하기 식별번호 <0221>-<0223> (영문 공보 단락 [000185]-[000187])에 기재된 살진균제를 포괄하는 것으로 의도된다.

본 발명은 a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소; 및 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소; 또는 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제를 상승작용적 유효량으로 포함하는 조성물에 관한 것이다.

일부 실시양태에서, 표적화 서열은 서열식별번호(SEQ ID NO): 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열; 서열식별번호: 1의 아미노산 1-35를 포함하는 표적화 서열; 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35를 포함하는 표적화 서열; 서열식별번호: 1의 아미노산 22-31을 포함하는 표적화 서열; 서열식별번호: 1의 아미노산 22-33을 포함하는 표적화 서열; 서열식별번호: 1의 아미노산 20-31을 포함하는 표적화 서열; 서열식별번호: 1을 포함하는 표적화 서열; 또는 서열식별번호: 2와 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 포자외막 단백질을 포함한다.

일부 실시양태에서, 포자외막-생산 바실루스 세포는 바실루스 세레우스( Bacillus cereus ) 패밀리 구성원의 세포이다. 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원은 바실루스 안트라시스( Bacillus anthracis ), 바실루스 세레우스( Bacillus cereus ), 바실루스 투린기엔시스( Bacillus thuringiensis ), 바실루스 미코이데스( Bacillus mycoides ), 바실루스 슈도미코이데스( Bacillus pseudomycoides ), 바실루스 사마니이( Bacillus samanii ), 바실루스 가에모켄시스( Bacillus gaemokensis ), 바실루스 웨이헨스테펜시스( Bacillus weihenstephensis ), 바실루스 토요이엔시스( Bacillus toyoiensis ) 및 그의 조합 중 어느 하나일 수 있다. 추가 실시양태에서, 재조합 바실루스 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.

특정 측면에서, 융합 단백질은 아세토인 리덕타제, 인돌-3-아세트아미드 히드롤라제, 트립토판 모노옥시게나제, 아세토락테이트 신테타제, α-아세토락테이트 데카르복실라제, 피루베이트 데카르복실라제, 디아세틸 리덕타제, 부탄디올 데히드로게나제, 아미노트랜스퍼라제, 트립토판 데카르복실라제, 아민 옥시다제, 인돌-3-피루베이트 데카르복실라제, 인돌-3-아세트알데히드 데히드로게나제, 트립토판 측쇄 옥시다제, 니트릴 히드롤라제, 니트릴라제, 펩티다제, 프로테아제, 아데노신 포스페이트 이소펜테닐트랜스퍼라제, 포스파타제, 아데노신 키나제, 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제, CYP735A, 5'리보뉴클레오티드 포스포히드롤라제, 아데노신 뉴클레오시다제, 제아틴 시스-트랜스 이소머라제, 제아틴 O-글루코실트랜스퍼라제, β-글루코시다제, 시스 -히드록실라제, CK 시스-히드록실라제, CK N-글루코실트랜스퍼라제, 2,5-리보뉴클레오티드 포스포히드롤라제, 아데노신 뉴클레오시다제, 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제, 제아틴 리덕타제, 히드록실아민 리덕타제, 2-옥소글루타레이트 디옥시게나제, 지베렐산 2B/3B 히드롤라제, 지베렐린 3-옥시다제, 지베렐린 20-옥시다제, 키토사나제, 키티나제, β-1,3-글루카나제, β-1,4-글루카나제, β-1,6-글루카나제, 아미노시클로프로판-1-카르복실산 데아미나제 및 nod 인자를 생산하는데 수반되는 효소로 이루어진 군으로부터 선택된, 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소를 포함한다.

다른 측면에서, 융합 단백질은 셀룰라제, 리파제, 리그닌 옥시다제, 프로테아제, 글리코시드 히드롤라제, 포스파타제, 니트로게나제, 뉴클레아제, 아미다제, 니트레이트 리덕타제, 니트라이트 리덕타제, 아밀라제, 암모니아 옥시다제, 리그니나제, 글루코시다제, 포스포리파제, 피타제, 펙티나제, 글루카나제, 술파타제, 우레아제, 크실라나제 및 시데로포어로 이루어진 군으로부터 선택된, 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소를 포함한다.

또 다른 측면에서, 융합 단백질은 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드를 포함하고, 단백질 또는 펩티드는 항박테리아 활성, 항진균 활성, 또는 항박테리아 및 항진균 활성 둘 다를 갖는다. 이러한 단백질은 박테리오신, 리소자임, 리소자임 펩티드, 시데로포어, 비-리보솜 활성 펩티드, 콘알부민, 알부민, 락토페린, 락토페린 펩티드, TasA 또는 스트렙타비딘을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 적어도 1종의 살진균제는 비테르타놀, 빅사펜, 브로무코나졸, 카르벤다짐, 카르프로파미드, 디클로플루아니드, 페나미돈, 펜헥사미드, 펜틴 아세테이트, 펜틴 히드록시드, 플루오피콜리드, 플루오피람, 플루옥사스트로빈, 플루퀸코나졸, 포세틸, 이프로디온, 이프로발리카르브, 이소티아닐, 메토미노스트로빈, 오푸레이스, 펜시쿠론, 펜플루펜, 프로클로라즈, 프로파모카르브, 프로피네브, 프로티오코나졸, 피리메타닐, 스피록사민, 테부코나졸, 톨릴플루아니드, 트리아디메폰, 트리아디메놀, 트리아족시드, 트리플록시스트로빈, N-[5-클로로-2-(트리플루오로메틸)벤질]-N-시클로프로필-3-(디플루오로메틸)-5-플루오로-1-메틸-1H-피라졸-4-카르복스아미드 및 2,6-디메틸-1H,5H-[1,4]디티이노[2,3-c:5,6-c']디피롤-1,3,5,7(2H,6H)-테트론으로 이루어진 군� ��로부터 선택된다.

다른 실시양태에서, 적어도 1종의 살진균제는 카르벤다짐, 플루퀸코나졸, 이소티아닐, 펜시쿠론, 펜플루펜, 프로티오코나졸, 테부코나졸 및 트리플록시스트로빈으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소 및 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소, 또는 식물을 병원체로부터 보호하는 또는 적어도 1종의 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 카르벤다짐, 플루퀸코나졸, 이소티아닐, 펜시쿠론, 펜플루펜, 프로티오코나졸, 플루오피람, 테부코나졸 및 트리플록시스트로빈으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 살진균제를 상승작용적 유효량으로 포함한다.

상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살진균제는 카르벤다짐이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.

상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살진균제는 플루퀸코나졸이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.

상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살진균제는 이소티아닐이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.

상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살진균제는 펜시쿠론이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.

상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살진균제는 펜플루펜이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.

상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살진균제는 프로티오코나졸이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.

상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살진균제는 플루오피람이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다.

상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살진균제는 트리플록시스트로빈이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.

상기 실시양태의 특정한 측면에서 (i) 적어도 1종의 살진균제는 테부코나졸이고; (ii) 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는, 바람직하게는 각각 서열식별번호: 107, 108 및 109에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제를 포함하고; (iv) 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스의 세포를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 세포는 바실루스 투린기엔시스 BT013A의 세포이다.

일부 측면에서, 조성물은 증량제, 용매, 자발성 촉진제, 담체, 유화제, 분산제, 결빙 보호제, 증점제 및 아주반트로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 보조제를 추가로 포함한다.

다른 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 임의의 조성물로 처리된 종자에 관한 것이다.

추가로, 본 발명은 살진균제 및/또는 살곤충제로서의 개시된 조성물의 용도에 관한 것이다. 특정 측면에서, 개시된 조성물은 식물 및 식물 부분의 전체 손상, 뿐만 아니라 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의해 유발된 수확된 과실 또는 채소에서의 손실을 감소시키기 위해 사용된다. 다른 측면에서, 개시된 조성물은 식물 성장을 증진시키고/거나 식물 건강을 촉진하기 위해 사용된다.

추가로, 본 발명은 a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소; 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소; 및 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대한 활성을 나타내는 본원에 개시된 특정한 살진균제로부터 선택된 적어도 1종의 살진균제를 상승작용적 유효량으로 식물, 식물 부분 및/또는 식물 생육지에 동시에 또는 순차적으로 적용하는 단계를 포함하는, 식물 성장을 증진시키고/거나 식물 건강을 촉진하기 위해 식물, 식물 부분, 예컨대 종자, 뿌리, 근경, 구경, 구근 또는 괴경, 및/또는 식물 또는 식물 부분이 성장하거나 근처에서 성장하는 생육지, 예컨대 토양을 처리하는 방법에 관한 것이다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소; 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소; 및 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대한 활성을 나타내는 본원에 개시된 특정한 살진균제로부터 선택된 적어도 1종의 살진균제를 상승작용적 유효량으로 식물, 식물 부분, 예컨대 종자, 뿌리, 근경, 구경, 구근 또는 괴경, 및/또는 식물 또는 식물 부분이 성장하거나 근처에서 성장하는 생육지, 예컨대 토양에 동시에 또는 순차적으로 적용하는 단계를 포함하는, 식물 및 식불 부분의 전체 손상, 뿐만 아니라 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의해 유발된 수확된 과실 또는 채소에서의 손실을 감소시키는 방법이다.

상기 단락에서, 용어 "포함하다" 또는 그의 임의의 파생어 (예를 들어, 포함하는, 포함한다)는 "로 이루어지고" 또는 그의 적용가능한 상응하는 파생어로 대체될 수 있다.

도 1은 바실루스 안트라시스 스턴(Sterne) 균주 BclA의 아미노-말단 부분의 아미노산 서열과 바실루스 세레우스 패밀리 구성원으로부터의 다양한 포자외막 단백질로부터의 상응하는 영역과의 정렬을 제시한다.

일반적으로 "살충"은 식물 해충의 사멸률을 증가시키거나 성장률을 억제하는 물질의 능력을 의미한다. 상기 용어는 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대한 활성을 나타내는 물질의 특성을 기재하기 위해 본원에 사용된다. 본 발명의 관점에서 용어 "해충"은 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체를 포함한다.

나타낸 NRRL 또는 ATCC 수탁 번호의 변이체는 또한 나타낸 NRRL 또는 ATCC 수탁 번호의 게놈에 대해 85% 초과, 보다 바람직하게는 90% 초과, 보다 바람직하게는 95% 초과의 서열 동일성인 게놈 서열을 갖는 균주로서 정의될 수 있다. 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 영역 (또는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 영역)이 또 다른 서열에 대해 특정 백분율 (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 "서열 동일성"을 갖는다는 것은, 정렬된 경우에 그 백분율의 염기 (또는 아미노산)가 2개의 서열의 비교시에 동일하다는 것을 의미한다. 이러한 정렬 및 퍼센트 상동성 또는 서열 동일성은 관련 기술분야에 공지된 소프트웨어 프로그램, 예를 들어 문헌 [Current Protocols in Molecular Biology (FM Ausubel et al., eds., 1987) Supplement 30, Section 7. 7. 18, Table 7. 7. 1]에 기재된 것을 사용하여 결정될 수 있다.

NRRL은 미국 61604 일리노이주 피오리아 노스 유니버시티 스트리트 1815 소재 미국 농무부, 농업 연구소, 국립 농업 이용 연구 센터의 주소를 갖는 아그리컬쳐럴 리서치 서비스 컬쳐 콜렉션(Agricultural Research Service Culture Collection)에 대한 약어이다.

ATCC는 미국 10110 버지니아주 마나사스 유니버시티 불러바드 10801 소재 ATCC 특허 기탁소의 주소를 갖는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)에 대한 약어이다.

본원에 기재되고 접두어가 NRRL 또는 ATCC인 수탁 번호를 갖는 모든 균주는 특허 절차의 목적상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약에 따라 상기 기재된 각각의 기탁 기관에 기탁된 바 있다.

"식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소"는 식물 성장을 자극하거나 식물 구조를 변경하는 화합물에 대한 생물학적 합성 경로 내 임의의 단계를 촉매하는 임의의 효소, 또는 식물 성장을 자극하거나 식물 구조를 변경하는 화합물의 불활성 또는 덜 활성인 유도체를 화합물의 활성 또는 보다 활성인 형태로 전환시키도록 촉매하는 임의의 효소를 포함한다. 이러한 화합물은, 예를 들어 소분자 식물 호르몬, 예컨대 옥신 및 시토키닌, 생물활성 펩티드, 및 근권에서 박테리아 또는 진균에 의해 합성된 작은 식물 성장 자극 분자 (예를 들어, 2,3-부탄디올)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

본원에 사용된 "식물 면역계 증진제 단백질 또는 펩티드"는 식물의 면역계에 대한 유익한 효과를 갖는 임의의 단백질 또는 펩티드를 포함한다.

본원에 사용된 용어 "식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드"는 단백질 또는 펩티드에 노출된 식물에서 식물 성장을 증가시키는 임의의 단백질 또는 펩티드를 포함한다.

용어 "식물 성장을 촉진하는" 및 "식물 성장을 자극하는"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 식물로부터 단백질 수확량을 증가시키거나 식물의 곡실 수확량을 증가시키기 위해 식물의 높이, 중량, 잎 크기, 뿌리 크기 또는 줄기 크기 중 적어도 하나를 증진 또는 증가시키는 능력을 지칭한다.

본원에 사용된 "식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드"는 식물을 병원체에 의한 감염에 덜 감수성인 단백질 또는 펩티드에 노출되도록 하는 임의의 단백질 또는 펩티드를 포함한다.

본원에 사용된 "식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드"는 식물을 스트레스에 보다 저항성이 있는 단백질 또는 펩티드에 노출되도록 하는 임의의 단백질 또는 펩티드를 포함한다.

용어 "식물 결합 단백질 또는 펩티드"는 식물의 임의의 부분 (예를 들어, 식물의 뿌리 또는 지상부, 예컨대 잎, 줄기, 꽃 또는 과실) 또는 식물 물질에 특이적으로 또는 비-특이적으로 결합할 수 있는 임의의 펩티드 또는 단백질을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "표적화 서열"은 바실루스 세레우스 패밀리 구성원의 포자외막에 보다 긴 폴리펩티드 또는 단백질의 국재화를 유발하는 폴리펩티드 서열을 지칭한다.

융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포

융합 단백질은 바실루스 세레우스 패밀리 구성원의 포자외막에 융합 단백질을 표적화하는 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편 및: (a) 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; (b) 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드; (c) 식물의 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드; (d) 식물 결합 단백질 또는 펩티드; 또는 (e) 식물 면역계 증진제 단백질 또는 펩티드를 함유한다. 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 박테리아에서 발현되는 경우에, 이들 융합 단백질은 포자의 포자외막 층에 표적화되고, 단백질 또는 펩티드가 포자의 외부에 디스플레이되도록 물리적으로 배향된다.

이러한 바실루스 포자외막 디스플레이 (BEMD) 시스템은 펩티드, 효소 및 다른 단백질을 식물 (예를 들어, 식물 잎, 과실, 꽃, 줄기, 또는 뿌리)에 또는 식물 성장 배지, 예컨대 토양에 전달하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 방식으로 토양 또는 또 다른 식물 성장 배지에 전달된 펩티드, 효소 및 단백질은 연장된 기간 동안 토양에서 활성을 지속하고 나타낸다. 본원에 기재된 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포를 토양 또는 식물의 근권 내로 도입하는 것은 많은 상이한 토양 조건에서 식물 성장의 유익한 증진으로 이어진다. 이들 효소를 생성하기 위한 BEMD의 사용은 그들이 식물 수명의 최초 개월에 걸쳐 식물 및 근권에 대한 그의 유익한 결과를 계속 발휘하게 한다.

표적화 서열, 포자외막 단백질 및 포자외막 단백질 단편

참조의 용이성을 위해, 본원에 언급된 펩티드 및 단백질 서열에 대한 서열식별번호가 하기 표 1에 열거되어 있다.

표 1. 펩티드 및 단백질 서열

AA = 아미노산

* 비. 안트라시스 스턴 균주 BclA는 비. 투린기엔시스 BclA와 100% 서열 동일성을 갖는다. 따라서, 서열식별번호: 1, 2 및 59는 또한 각각 비. 투린기엔시스 BclA의 아미노산 1-41, 전장 비. 투린기엔시스 BclA 및 비. 투린기엔시스 BclA의 아미노산 1-196을 나타낸다. 마찬가지로, 서열식별번호: 60은 또한 메티오닌 잔기 플러스 비. 투린기엔시스 BclA의 아미노산 20-35를 나타낸다.

** 비. 미코이데스 가설 단백질 TIGR03720은 비. 미코이데스 가설 단백질 WP003189234와 100% 서열 동일성을 갖는다. 따라서, 서열식별번호: 57 및 58은 또한 각각 비. 미코이데스 가설 단백질 WP003189234의 아미노산 1-136 및 전장 비. 미코이데스 가설 단백질 WP003189234를 나타낸다.

바실루스는 막대형 박테리아의 속이다. 박테리아의 바실루스 세레우스 패밀리는 바실루스 안트라시스, 바실루스 세레우스, 바실루스 투린기엔시스, 바실루스 미코이데스, 바실루스 슈도미코이데스, 바실루스 사마니이, 바실루스 가에모켄시스, 바실루스 토요이엔시스 및 바실루스 웨이헨스테펜시스 종을 포함한다. 스트레스성 환경 조건 하에, 바실루스 세레우스 패밀리 박테리아는 포자형성을 겪고, 연장된 기간 동안 휴면에 머무를 수 있는 타원형 내생포자를 형성한다. 내생포자의 최외각 층은 포자외막으로 공지되어 있고, 헤어-유사 돌기의 외부 털에 의해 둘러싸여 있는 기저 층을 포함한다. 헤어-유사 털 상의 필라멘트는 콜라겐-유사 당단백질 BclA에 의해 우세하게 형성되고, 반면에 기저 층은 수많은 상이한 단백질로 구성된다. 또 다른 콜라겐-관련 단백질인 BclB가 또한 포자외막에 존재하고, 바실루스 세레우스 패밀리 구성원의 내생포자에 노출된다.

표면 털의 주요 구성성분인 BclA는 포자외막에 부착되며, 이때 그의 아미노-말단 (N-말단)은 기저 층에 위치하고 그의 카르복시-말단 (C-말단)은 포자로부터 외부로 연장되는 것으로 제시된 바 있다.

BclA 및 BclB의 N-말단 영역으로부터의 특정 서열은 바실루스 세레우스 내생포자의 포자외막에 펩티드 또는 단백질을 표적화하기 위해 사용될 수 있었다는 것이 이전에 발견되었다 (미국 특허 공개 번호 2010/0233124 및 2011/0281316, 및 문헌 [Thompson, et al., "Targeting of the BclA and BclB Proteins to the Bacillus anthracis Spore Surface," Molecular Microbiology, 70(2):421-34 (2008)] 참조, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로 포함됨). 또한, 바실루스 안트라시스의 BetA/BAS3290 단백질은 포자외막에 국재화되었다는 것이 밝혀졌다.

특히, 바실루스 안트라시스 스턴 균주로부터의 BclA의 아미노산 20-35는 포자외막에의 표적화에 충분한 것으로 밝혀진 바 있다. BclA의 아미노산 1-41 (서열식별번호: 1)과, 관련 서열을 갖는 여러 다른 바실루스 세레우스 패밀리 포자외막 단백질 및 바실루스 세레우스 패밀리 단백질의 상응하는 N-말단 영역과의 서열 정렬이 도 1에 제시되어 있다. 도 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 모든 단백질 사이에서, BclA의 아미노산 20-41에 상응하는 영역에 높은-상동성의 영역이 존재한다. 그러나, 이들 서열에서, BclA의 아미노산 36-41에 상응하는 아미노산은 2차 구조를 함유하고, 포자외막에의 융합 단백질 국재화를 위해 필요하지 않다. BclA의 보존된 표적화 서열 영역 (서열식별번호: 1의 아미노산 20-35)은 도 1에서 볼드체로 제시되어 있고, 포자외막에의 국재화를 위해 필요한 최소 표적화 서열에 상응한다. 표적화 서열 내 BclA의 아미노산 25-35에 걸친 보다 고도로 보존된 영역은 도 1에서 서열에 밑줄표시되어 있고, 포자외막의 표면 상에서 기재된 단백질을 지시 및 조립하는 ExsFA/BxpB/ExsFB 및 상동체에 대한 인식 서열이다. 도 1에서 서열식별번호: 3, 5 및 7의 아미노산 서열은 각각 바실루스 안트라시스 스턴 균주 BetA/BAS3290의 아미노산 1-33, 메티오닌에 이어서 바실루스 안트라시스 스턴 균주 BAS4623의 아미노산 2-43, 및 바실루스 안트라시스 스턴 균주 BclB의 아미노산 1-34이다. (BAS4623에 대해, 천연 단백질에서 위치 1에 존재하는 발린을 메티오닌으로 대체하는 것은 보다 우수한 발현을 유발한 것으로 밝혀졌다.) 도 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 각각의 이들 서열은 BclA의 아미노산 20-35에 상응하는 보존된 영역 (서열식별번호: 1; 볼드체로 제시됨) 및 BclA의 아미노산 20-35에 상응하는 보다 고도로 보존된 영역 (밑줄표시됨)을 함유한다.

바실루스 세레우스 패밀리 구성원으로부터의 추가의 단백질은 또한 보존된 표적화 영역을 함유한다. 특히, 도 1에서, 서열식별번호: 9는 바실루스 안트라시스 스턴 균주 BAS1882의 아미노산 1-30이고, 서열식별번호: 11은 바실루스 웨이헨스테펜시스 KBAB4 2280 유전자 산물의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 13은 바실루스 웨이헨스테펜시스 KBAB4 3572 유전자 산물의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 15는 바실루스 세레우스 VD200 포자외막 리더 펩티드의 아미노산 1-49이고, 서열식별번호: 17은 바실루스 세레우스 VD166 포자외막 리더 펩티드의 아미노산 1-33이고, 서열식별번호: 19는 바실루스 세레우스 VD200 가설 단백질 IKG_04663의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 21은 바실루스 웨이헨스테펜시스 KBAB4 YVTN β-프로펠러 단백질의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 23은 바실루스 웨이헨스테펜시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2363의 아미노산 1-30이고, 서열식별번호: 25는 바� �루스 웨이헨스테펜시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2131의 아미노산 1-30이고, 서열식별번호: 27은 바실루스 웨이헨스테펜시스 KBAB4 삼중 나선 반복부 함유 콜라겐의 아미노산 1-36이고, 서열식별번호: 29는 바실루스 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyco0001_21660의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 31은 바실루스 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_22540의 아미노산 1-30이고, 서열식별번호: 33은 바실루스 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_21510의 아미노산 1-21이고, 서열식별번호: 35는 바실루스 투린기엔시스 35646 콜라겐 삼중 나선 반복부 단백질의 아미노산 1-22이고, 서열식별번호: 43은 바실루스 세레우스 가설 단백질 WP_69652의 아미노산 1-35이고, 서열식별번호: 45는 바실루스 세레우스 포자외막 리더 WP016117717의 아미노산 1-41이고, 서열식별번호: 47은 바실루스 세레� �스 포자외막 펩티드 WP002105192의 아미노산 1-49이고, 서열식별번호: 49는 바실루스 세레우스 가설 단백질 WP87353의 아미노산 1-38이고, 서열식별번호: 51은 바실루스 세레우스 포자외막 펩티드 02112369의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 53은 바실루스 세레우스 포자외막 단백질 WP016099770의 아미노산 1-39이고, 서열식별번호: 55는 바실루스 투린기엔시스 가설 단백질 YP006612525의 아미노산 1-36이고, 서열식별번호: 57은 바실루스 미코이데스 가설 단백질 TIGR03720의 아미노산 1-136이다. 도 1에 제시된 바와 같이, 이들 단백질의 각각의 N-말단 영역은 BclA (서열식별번호: 1)의 아미노산 20-35로 보존된 영역 및 BclA의 아미노산 25-35에 상응하는 보다 고도로 보존된 영역을 함유한다.

아미노산 20-35를 포함하는 BclA의 임의의 부분은 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 추가로, 전장 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편은 포자외막에 융합 단백질을 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 전장 BclA 또는 아미노산 20-35를 포함하는 BclA의 단편은 포자외막에 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 전장 BclA (서열식별번호: 2) 또는 카르복시-말단이 결여된 BclA의 중간크기 단편, 예컨대 서열식별번호: 59 (BclA의 아미노산 1-196)는 포자외막에 융합 단백질을 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 중간크기 단편, 예컨대 서열식별번호: 59의 단편은 전장 BclA보다 더 적은 2차 구조를 갖고, 표적화 서열로서 사용하기에 적합한 것으로 밝혀진 바 있다. 표적화 서열은 또한 아미노산 20-35를 포함하는 BclA의 훨씬 더 짧은 부분, 예컨대 서열식별번호: 1 (BclA의 아미노산 1-41), 서열식별번호: 1의 아미노산 1-35, 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35 또는 서열식별번호: 60 (메티오닌 잔기에 연결된 BclA의 아미노산 20-35)을 포함할 수 있다. 아미노산 20-35의 단지 일부만을 포함하는 BclA의 훨씬 더 짧은 단편도 또한 포자외막에 융합 단백질을 표적화하는 능력을 나타낸다. 예를 들어, 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 22-31, 서열식별번호: 1의 아미노산 22-33 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 20-31을 포함할 수 있다.

대안적으로, BclA의 아미노산 20-35에 상응하는 아미노산을 포함하는 BetA/BAS3290, BAS4623, BclB, BAS1882, KBAB4 2280 유전자 산물, KBAB4 3572 유전자 산물, 비. 세레우스 VD200 포자외막 리더 펩티드, 비. 세레우스 VD166 포자외막 리더 펩티드, 비. 세레우스 VD200 가설 단백질 IKG_04663, 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 YVTN β-프로펠러 단백질, 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2363, 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2131, 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 삼중 나선 반복부 함유 콜라겐, 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyco0001_21660, 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_22540, 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_21510, 비. 투린기엔시스 35646 콜라겐 삼중 나선 반복부 단백질, 비. 세레우스 가설 단백질 WP_69652, 비. 세레우스 포자외막 리더 WP016117717, 비. 세레우스 포자외막 펩티드 WP002105192, 비. 세레우스 가설 단백질 WP87353, 비. 세레우스 포자외막 펩티드 02112369, 비. 세레우스 포자외막 단백질 WP016099770, 비. 투린기엔시스 가설 단백질 YP006612525, 또는 비. 미코이데스 가설 단백질 TIGR03720의 임의의 부분은 표적화 서열로서의 역할을 할 수 있다. 도 1에서 볼 수 있는 바와 같이, BetA/BAS3290의 아미노산 12-27, BAS4623의 아미노산 23-38, BclB의 아미노산 13-28, BAS1882의 아미노산 9-24, KBAB4 2280 유전자 산물의 아미노산 18-33, KBAB4 3572 유전자 산물의 아미노산 18-33, 비. 세레우스 VD200 포자외막 리더 펩티드의 아미노산 28-43, 비. 세레우스 VD166 포자외막 리더 펩티드의 아미노산 12-27, 비. 세레우스 VD200 가설 단백질 IKG_04663의 아미노산 18-33, 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 YVTN β-프로펠러 단백질의 아미노산 18-33, 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2363의 아미노산 9-24, 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2131의 아미노산 9-24, 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 삼중 나선 반복부 함유 콜라겐의 아미노산 15-30, 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyco0001_21660의 아미노산 18-33, 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_22540의 아미노산 9-24, 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_21510의 아미노산 1-15, 비. 투린기엔시스 35646 콜라겐 삼중 나선 반복부 단백질의 아미노산 1-16, 비. 세레우스 가설 단백질 WP_69652의 아미노산 14-29, 비. 세레우스 포자외막 리더 WP016117717의 아미노산 20-35, 비. 세레우스 포자외막 펩티드 WP002105192의 아미노산 28-43, 비. 세레우스 가설 단백질 WP87353의 아미노산 17-32, 비. 세레우스 포자외막 펩티드 02112369의 아미노산 18-33, 비. 세레우스 포자외막 단백질 WP016099770의 아미노산 18-33, 비. 투린기엔시스 가설 단백질 YP006612525의 아미노산 15-30, 및 비. 미코이데스 가설 단백질 TIGR03720의 아미노산 115-130은 BclA의 아미노산 20-35에 상응한다. 따라서, 상기 열거된 상응하는 아미노산을 포함하는 이들 단백질의 임의의 부분은 표적화 서열로서의 역할을 할 수 있다.

추가로, BclA의 아미노산 20-35 또는 임의의 상기 열거된 상응하는 아미노산을 포함하는 임의의 아미노산 서열은 표적화 서열로서의 역할을 할 수 있다.

따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 1-35, 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35, 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 60, 서열식별번호: 1의 아미노산 22-31, 서열식별번호: 1의 아미노산 22-33 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 20-31을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 1-35, 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35, 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 60으로 이루어진다. 대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 22-31, 서열식별번호: 1의 아미노산 22-33 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 20-31로 이루어질 수 있다. 대안적으로, 포자외막 단백질은 전장 BclA (서열식별번호: 2)를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질 단편은 카르복시-말단이 결여된 BclA의 중간크기 단편, 예컨대 서열식별번호: 59 (BclA의 아미노산 1-196)를 포함할 수 있다. 대안적으로, 포자외막 단백질 단편은 서열식별번호: 59로 이루어질 수 있다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 3의 아미노산 1-27, 서열식별번호: 3의 아미노산 12-27 또는 서열식별번호: 3을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 BetA/BAS3290 (서열식별번호: 4)을 포함할 수 있다. 또한, 메티오닌 잔기에 연결된 BetA/BAS3290의 아미노산 12-27이 표적화 서열로서 사용될 수 있는 것으로 밝혀진 바 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 61을 포함할 수 있다. 표적화 서열은 또한 서열식별번호: 3의 아미노산 14-23, 서열식별번호: 3의 아미노산 14-25 또는 서열식별번호: 3의 아미노산 12-23을 포함할 수 있다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 5의 아미노산 1-38, 서열식별번호: 5의 아미노산 23-38 또는 서열식별번호: 5를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 BAS4623 (서열식별번호: 6)을 포함할 수 있다.

대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 7의 아미노산 1-28, 서열식별번호: 7의 아미노산 13-28 또는 서열식별번호: 7을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 BclB (서열식별번호: 8)를 포함할 수 있다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 9의 아미노산 1-24, 서열식별번호: 9의 아미노산 9-24 또는 서열식별번호: 9를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 BAS1882 (서열식별번호: 10)를 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 BAS1882의 아미노산 9-24는 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 69를 포함할 수 있다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 11의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 11의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 11을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 2280 유전자 산물 (서열식별번호: 12)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 2280 유전자 산물의 아미노산 18-33은 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 62를 포함할 수 있다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 13의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 13의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 13을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 3572 유전자 산물 (서열식별번호: 14)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 3572 유전자 산물의 아미노산 18-33은 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 63을 포함할 수 있다.

대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 15의 아미노산 1-43, 서열식별번호: 15의 아미노산 28-43 또는 서열식별번호: 15를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 VD200 포자외막 리더 펩티드 (서열식별번호: 16)를 포함할 수 있다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 17의 아미노산 1-27, 서열식별번호: 17의 아미노산 12-27 또는 서열식별번호: 17을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 VD166 포자외막 리더 펩티드 (서열식별번호: 18)를 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 세레우스 VD166 포자외막 리더 펩티드의 아미노산 12-27은 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 64를 포함할 수 있다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 19의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 19의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 19를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 VD200 가설 단백질 IKG_04663 (서열식별번호: 20)을 포함할 수 있다.

대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 21의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 21의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 21을 포함하거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 YVTN β-프로펠러 단백질 (서열식별번호: 22)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 YVTN β-프로펠러 단백질의 아미노산 18-33은 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 65를 포함할 수 있다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 23의 아미노산 1-24, 서열식별번호: 23의 아미노산 9-24 또는 서열식별번호: 23을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2363 (서열식별번호: 24)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2363의 아미노산 9-24는 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 66을 포함할 수 있다.

표적화 서열은 서열식별번호: 25의 아미노산 1-24, 서열식별번호: 25의 아미노산 9-24 또는 서열식별번호: 25를 포함하거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2131 (서열식별번호: 26)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 가설 단백질 bcerkbab4_2131의 아미노산 9-24는 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 67을 포함할 수 있다.

대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 27의 아미노산 1-30, 서열식별번호: 27의 아미노산 15-30 또는 서열식별번호: 27을 포함하거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 웨이헨스테펜시스 KBAB4 삼중 나선 반복부 함유 콜라겐 (서열식별번호: 28)을 포함할 수 있다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 29의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 29의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 29를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyco0001_21660 (서열식별번호: 30)을 포함할 수 있다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 31의 아미노산 1-24, 서열식별번호: 31의 아미노산 9-24 또는 서열식별번호: 31을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_22540 (서열식별번호: 32)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_22540의 아미노산 9-24는 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 68을 포함할 수 있다.

대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 33의 아미노산 1-15, 서열식별번호: 33을 포함하거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 미코이데스 2048 가설 단백질 bmyc0001_21510 (서열식별번호: 34)을 포함한다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 35의 아미노산 1-16, 서열식별번호: 35을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 투린기엔시스 35646 콜라겐 삼중 나선 반복부 단백질 (서열식별번호: 36)을 포함할 수 있다.

표적화 서열은 서열식별번호: 43의 아미노산 1-29, 서열식별번호: 43의 아미노산 14-29 또는 서열식별번호: 43을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 가설 단백질 WP_69652 (서열식별번호: 44)를 포함할 수 있다.

대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 45의 아미노산 1-35, 서열식별번호: 45의 아미노산 20-35 또는 서열식별번호: 45를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 포자외막 리더 WP016117717 (서열식별번호: 46)을 포함할 수 있다. 메티오닌 잔기에 연결된 비. 세레우스 포자외막 리더 WP016117717의 아미노산 20-35는 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다. 따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 70을 포함할 수 있다.

표적화 서열은 서열식별번호: 47의 아미노산 1-43, 서열식별번호: 47의 아미노산 28-43 또는 서열식별번호: 47을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 포자외막 펩티드 WP002105192 (서열식별번호: 48)를 포함할 수 있다.

표적화 서열은 서열식별번호: 49의 아미노산 1-32, 서열식별번호: 49의 아미노산 17-32 또는 서열식별번호: 49를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 가설 단백질 WP87353 (서열식별번호: 50)을 포함할 수 있다.

대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 51의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 51의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 51을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 포자외막 펩티드 02112369 (서열식별번호: 52)를 포함할 수 있다.

표적화 서열은 서열식별번호: 53의 아미노산 1-33, 서열식별번호: 53의 아미노산 18-33 또는 서열식별번호: 53을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 세레우스 포자외막 단백질 WP016099770 (서열식별번호: 54)을 포함할 수 있다.

대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 55의 아미노산 1-30, 서열식별번호: 55의 아미노산 15-30 또는 서열식별번호: 55를 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 투린기엔시스 가설 단백질 YP006612525 (서열식별번호: 56)를 포함할 수 있다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 57의 아미노산 1-130, 서열식별번호: 57의 아미노산 115-130 또는 서열식별번호: 57을 포함할 수 있거나, 또는 포자외막 단백질은 전장 비. 미코이데스 가설 단백질 TIGR03720 (서열식별번호: 58)을 포함할 수 있다.

추가로, BclA의 아미노산 20-35가 보존되고 아미노산 25-35가 보다 보존되지만, 이러한 영역에서 단백질을 포자외막에 표적화하는 표적화 서열의 능력에 영향을 미치지 않으면서 어느 정도의 변이가 일어날 수 있다는 것이 도 1에서의 서열 정렬로부터 용이하게 관찰될 수 있다. 도 1은 BclA의 아미노산 20-35에 대한 각각의 서열의 각각의 상응하는 아미노산의 퍼센트 동일성 ("20-35% 동일성") 및 BclA의 아미노산 25-35에 대한 각각의 서열의 각각의 상응하는 아미노산의 퍼센트 동일성 ("25-35% 동일성")을 열거한다. 따라서, 예를 들어, BclA의 아미노산 20-35와 비교하여, BetA/BAS3290의 상응하는 아미노산은 약 81.3% 동일하고, BAS4623의 상응하는 아미노산은 약 50.0% 동일하고, BclB의 상응하는 아미노산은 약 43.8% 동일하고, BAS1882의 상응하는 아미노산은 약 62.5% 동일하고, KBAB4 2280 유전자 산물의 상응하는 아미노산은 약 81.3% 동일하고, KBAB4 3572 유전자 산물의 상응하는 아미노산은 약 81.3% 동일하다. 나머지 서열에 대한 이러한 영역에 걸친 서열 동일성은 도 1에 열거되어 있다.

BclA의 아미노산 25-35에 관하여, BetA/BAS3290의 상응하는 아미노산은 약 90.9% 동일하고, BAS4623의 상응하는 아미노산은 약 72.7% 동일하고, BclB의 상응하는 아미노산은 약 54.5% 동일하고, BAS1882의 상응하는 아미노산은 약 72.7% 동일하고, KBAB4 2280 유전자 산물의 상응하는 아미노산은 약 90.9% 동일하고, KBAB4 3572 유전자 산물의 상응하는 아미노산은 약 81.8% 동일하다. 나머지 서열에 대한 이러한 영역에 걸친 서열 동일성은 도 1에 열거되어 있다.

따라서, 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 43% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 54%인 아미노산 서열로 이루어진다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 50% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 63%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 50% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 63%인 아미노산 서열로 이루어진다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 50% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 72%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 50% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 72%인 아미노산 서열로 이루어진다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 56% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 63%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 56% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 63%인 아미노산 서열로 이루어진다.

대안적으로, 표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 62% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 72%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 표적화 서열은 또한 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 62% 동일성을 가지며 여기서 서열식별번호: 1의 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 72%인 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.

표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 68% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 81%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 68% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 81%인 아미노산 서열로 이루어진다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 75% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 72%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 75% 동일성을 가지며 여기서 서열식별번호: 1의 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 72%인 아미노산 서열로 이루어진다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 75% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 81%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 75% 동일성을 가지며 여기서 서열식별번호: 1의 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 81%인 아미노산 서열로 이루어진다.

표적화 서열은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 81% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 81%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 81% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 81%인 아미노산 서열로 이루어진다.

표적화 서열은 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 81% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 표적화 서열은 16개의 아미노산으로 이루어지고 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35와 적어도 약 81% 동일성을 가지며 여기서 아미노산 25-35와의 동일성이 적어도 약 90%인 아미노산 서열로 이루어진다.

표적화 서열이 BclA의 아미노산 20-35, BetA/BAS3290, BAS4263, BclB, BAS1882, KBAB4 2280 유전자 산물 또는 KBAB 3572 유전자 산물의 상응하는 아미노산을 포함하거나, 또는 BclA의 아미노산 20-35 및 25-35에 대해 임의의 상기 제시된 서열 동일성을 포함하는 서열이 존재하는 한, 통상의 기술자는 상기 서열의 변이체가 또한 표적화 서열로서 사용될 수 있다는 것을 인식할 것이다.

BclA의 아미노산 25-35에 대해 상동성을 갖는 영역이 결여된 특정 바실루스 세레우스 패밀리 포자외막 단백질도 또한 바실루스 세레우스 패밀리 구성원의 포자외막에 펩티드 또는 단백질을 표적화하기 위해 사용될 수 있다는 것이 추가로 발견되었다. 특히, 융합 단백질은 서열식별번호: 71 (비. 미코이데스 InhA)을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 72 (비. 안트라시스 스턴 BAS1141 (ExsY))를 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 73 (비. 안트라시스 스턴 BAS1144 (BxpB/ExsFA))을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 74 (비. 안트라시스 스턴 BAS1145 (CotY))를 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 75 (비. 안트라시스 스턴 BAS1140)를 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 76 (비. 안트라시스 H9401 ExsFB)을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 77 (비. 투린기엔시스 HD74 InhA1)을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 78 (비. 세레우스 ATCC 10876 ExsJ)을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 79 (비. 세레우스 ExsH)를 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 80 (비. 안트라시스 에임스 YjcA)을 � ��함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 81 (비. 안트라시스 YjcB)을 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 82 (비. 안트라시스 스턴 BclC)를 포함하는 포자외막 단백질, 서열식별번호: 83 (바실루스 투린기엔시스 혈청형 변이주 콘쿠키안 균주 97-27 산 포스파타제)을 포함하는 포자외막 단백질, 또는 서열식별번호: 84 (비. 투린기엔시스 HD74 InhA2)를 포함하는 포자외막 단백질을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 융합 단백질에 서열식별번호: 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 또는 84를 포함하는 포자외막 단백질을 포함시키는 것은 비. 세레우스 패밀리 구성원의 포자외막에의 표적화를 유발할 것이다.

더욱이, 상기 기재된 임의의 전장 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편과 높은 정도의 서열 동일성을 갖는 포자외막 단백질이 또한 바실루스 세레우스 패밀리 구성원의 포자외막에 펩티드 또는 단백질을 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 융합 단백질은 서열식별번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 59, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 및 84 중 어느 하나와 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 포자외막 단백질을 포함할 수 있다. 대안적으로, 융합 단백질은 서열식별번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 59, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 및 84 중 어느 하나와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일성을 갖는 포자외막 단백질을 포함할 수 있다.

대안적으로, 융합 단백질은 서열식별번호: 59와 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어진 포자외막 단백질 단편을 포함할 수 있다. 대안적으로, 융합 단백질은 서열식별번호: 59와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어진 포자외막 단백질 단편을 포함할 수 있다.

본원에 기재된 임의의 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편에서, 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편은 그의 카르복시 말단에 아미노산 서열 GXT를 포함할 수 있으며, 여기서 X는 임의의 아미노산이다.

본원에 기재된 임의의 표적화 서열, 포자외막 단백질 및 포자외막 단백질 단편에서, 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편은 서열식별번호: 1의 아미노산 20에 상응하는 표적화 서열의 위치에 알라닌 잔기를 포함할 수 있다.

융합 단백질

융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편, 및 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는 펩티드 호르몬, 비-호르몬 펩티드, 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소, 또는 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소를 포함할 수 있다. 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편은 상기 기재된 임의의 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편일 수 있다.

융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편, 및 식물을 병원체로부터 보호하는 적어도 1종의 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편은 상기 기재된 임의의 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편일 수 있다.

융합 단백질은 관련 기술분야에 공지된 표준 클로닝 및 분자 생물학 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 단백질 또는 펩티드를 코딩하는 유전자 (예를 들어, 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드를 코딩하는 유전자)는 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 증폭되고, 임의의 상기 기재된 표적화 서열을 코딩하는 DNA에 라이게이션되어 융합 단백질을 코딩하는 DNA 분자를 형성할 수 있다. 융합 단백질을 코딩하는 DNA 분자는 임의의 적합한 벡터, 예를 들어 플라스미드 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 벡터는 적합하게는 융합 단백질을 코딩하는 DNA 분자가 용이하게 삽입될 수 있는 다중 클로닝 부위를 포함한다. 벡터는 또한 적합하게는 선택 마커, 예컨대 항생제 저항성 유전자를 함유하여, 그 벡터로 형질전환, 형질감염 또는 메이팅된 박테리아가 용이하게 확인 및 단리될 수 있도록 한다. 벡터가 플라스미드인 경우에, 플라스미드는 적합하게는 또한 복제 기점을 포함한다. 융합 단백질을 코딩하는 DNA는 적합하게는 비. 세레우스 패밀리 구성원 내생포자의 포자외막 상에 융합 단백질의 발현을 유발할 포자형성 프로모터 (예를 들어, 비. 세레우스 패밀리 구성원으로부터의 천연 bclA 프로모터)의 제어 하에 있다. 대안적으로, 융합 단백질을 코딩하는 DNA는 비. 세레우스 패밀리 구성원 숙주의 염색체 DNA 내로 통합될 수 있다.

융합 단백질은 또한 표적화 서열, 포자외막 단백질, 포자외막 단백질 단편, 또는 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드, 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드, 또는 식물 결합 단백질 또는 펩티드의 부분이 아닌 추가의 폴리펩티드 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 융합 단백질은 융합 단백질의 정제 또는 시각화를 용이하게 하기 위한 태그 또는 마커 (예를 들어, 폴리히스티딘 태그 또는 형광 단백질, 예컨대 GFP 또는 YFP), 또는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 포자의 시각화를 용이하게 하기 위한 태그 또는 마커를 포함할 수 있다.

본원에 기재된 표적화 서열, 포자외막 단백질 및 포자외막 단백질 단편을 사용하여 포자외막 상에 융합 단백질을 발현하는 것은 이들 서열의 아미노-말단에서의 2차 구조의 결여로 인해 증진되며, 이는 융합된 단백질의 천연 폴딩 및 활성의 보유를 가능하게 한다. 적절한 폴딩은 표적화 서열, 포자외막 단백질, 포자외막 단백질 단편과 융합 파트너 단백질 사이에 짧은 아미노산 링커를 포함시킴으로써 추가로 증진될 수 있다.

따라서, 본원에 기재된 임의의 융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편과 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드, 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드, 또는 식물 결합 단백질 또는 펩티드 사이에 아미노산 링커를 포함할 수 있다.

링커는 폴리알라닌 링커 또는 폴리글리신 링커를 포함할 수 있다. 알라닌 및 글리신 잔기 둘 다의 혼합물을 포함하는 링커가 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, 표적화 서열이 서열식별번호: 1을 포함하는 경우에, 융합 단백질은 하기 구조 중 하나를 가질 수 있다:

링커 부재: 서열식별번호: 1 - 융합 파트너 단백질

알라닌 링커: 서열식별번호: 1-An-융합 파트너 단백질

글리신 링커: 서열식별번호: 1-Gn-융합 파트너 단백질

혼합된 알라닌 및 글리신 링커: 서열식별번호: 1 - (A/G)n - 융합 파트너 단백질

여기서 An, Gn 및 (A/G)n은 각각 임의의 수의 알라닌, 임의의 수의 글리신 또는 임의의 수의 알라닌 및 글리신의 혼합물이다. 예를 들어, n은 1 내지 25일 수 있고, 바람직하게는 6 내지 10이다. 링커가 알라닌 및 글리신 잔기의 혼합물을 포함하는 경우에, 글리신 및 알라닌 잔기의 임의의 조합이 사용될 수 있다. 상기 구조에서, "융합 파트너 단백질"은 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드, 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드, 또는 식물 결합 단백질 또는 펩티드를 나타낸다.

대안적으로 또는 추가로, 링커는 프로테아제 인식 부위를 포함할 수 있다. 프로테아제 인식 부위의 포함은 프로테아제 인식 부위를 인식하는 프로테아제에 대한 노출시에, 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드, 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드, 또는 식물 결합 단백질 또는 펩티드의 표적화된 제거를 가능하게 한다.

식물 성장 자극 단백질 및 펩티드

상기 제시된 바와 같이, 융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편, 및 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는 펩티드 호르몬, 비-호르몬 펩티드, 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소, 또는 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소를 포함할 수 있다.

예를 들어, 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드가 펩티드 호르몬을 포함하는 경우에, 펩티드 호르몬은 피토술포카인 (예를 들어, 피토술포카인-α), 클라바타 3 (CLV3), 시스테민, ZmlGF 또는 SCR/SP11을 포함할 수 있다.

식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드가 비-호르몬 펩티드를 포함하는 경우에, 비-호르몬 펩티드는 RKN 16D10, Hg-Syv46, eNOD40 펩티드, 멜리틴, 마스토파란, Mas7, RHPP, 폴라리스(POLARIS) 또는 쿠니츠 트립신 억제제 (KTI)를 포함할 수 있다.

식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드는 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소를 포함할 수 있다. 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소는 식물 성장을 자극하거나 식물 구조를 변경하는 화합물에 대한 생물학적 합성 경로 내 임의의 단계를 촉매하는 임의의 효소, 또는 식물 성장을 자극하거나 식물 구조를 변경하는 화합물의 불활성 또는 덜 활성인 유도체를 화합물의 활성 또는 보다 활성인 형태로 전환시키도록 촉매하는 임의의 효소일 수 있다.

식물 성장 자극 화합물은 근권에서 박테리아 또는 진균에 의해 생산된 화합물, 예를 들어 2,3-부탄디올을 포함할 수 있다.

대안적으로, 식물 성장 자극 화합물은 식물 성장 호르몬, 예를 들어, 시토키닌 또는 시토키닌 유도체, 에틸렌, 옥신 또는 옥신 유도체, 지베렐산 또는 지베렐산 유도체, 아브시스산 또는 아브시스산 유도체, 또는 자스몬산 또는 자스몬산 유도체를 포함할 수 있다.

식물 성장 자극 화합물이 시토키닌 또는 시토키닌 유도체를 포함하는 경우에, 시토키닌 또는 시토키닌 유도체는 키네틴, 시스-제아틴, 트랜스-제아틴, 6-벤질아미노퓨린, 디히드록시제아틴, N6-(D2-이소펜테닐) 아데닌, 리보실제아틴, N6-(D2-이소펜테닐) 아데노신, 2-메틸티오-시스-리보실제아틴, 시스-리보실제아틴, 트랜스-리보실제아틴, 2-메틸티오-트랜스-리보실제아틴, 리보실제아틴-5-모노포스페이트, N6-메틸아미노퓨린, N6-디메틸아미노퓨린, 2'-데옥시제아틴 리보시드, 4-히드록시-3-메틸-트랜스-2-부테닐아미노퓨린, 오르토-토폴린, 메타-토폴린, 벤질아데닌, 오르토-메틸토폴린, 메타-메틸토폴린 또는 그의 조합을 포함할 수 있다.

식물 성장 자극 화합물이 옥신 또는 옥신 유도체를 포함하는 경우에, 옥신 또는 옥신 유도체는 활성 옥신, 불활성 옥신, 공액 옥신, 자연 발생 옥신 또는 합성 옥신, 또는 그의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 옥신 또는 옥신 유도체는 인돌-3-아세트산, 인돌-3-피루브산, 인돌-3-아세탈독심, 인돌-3-아세트아미드, 인돌-3-아세토니트릴, 인돌-3-에탄올, 인돌-3-피루베이트, 인돌-3-아세탈독심, 인돌-3-부티르산, 페닐아세트산, 4-클로로인돌-3-아세트산, 글루코스-공액 옥신 또는 그의 조합을 포함할 수 있다.

식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소는 아세토인 리덕타제, 인돌-3-아세트아미드 히드롤라제, 트립토판 모노옥시게나제, 아세토락테이트 신테타제, α-아세토락테이트 데카르복실라제, 피루베이트 데카르복실라제, 디아세틸 리덕타제, 부탄디올 데히드로게나제, 아미노트랜스퍼라제 (예를 들어, 트립토판 아미노트랜스퍼라제), 트립토판 데카르복실라제, 아민 옥시다제, 인돌-3-피루베이트 데카르복실라제, 인돌-3-아세트알데히드 데히드로게나제, 트립토판 측쇄 옥시다제, 니트릴 히드롤라제, 니트릴라제, 펩티다제, 프로테아제, 아데노신 포스페이트 이소펜테닐트랜스퍼라제, 포스파타제, 아데노신 키나제, 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제, CYP735A, 5'리보뉴클레오티드 포스포히드롤라제, 아데노신 뉴클레오시다제, 제아틴 시스 -트랜스 이소머라제, 제아틴 O-글루코실트랜스퍼라제, β-글루코시다제, 시스-히드록실라제, CK 시스-히드록실라제, CK N-글루코실트랜스퍼라제, 2,5-리보뉴클레오티드 포스포히드롤라제, 아데노신 뉴클레오시다제, 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제, 제아틴 리덕타제, 히드록실아민 리덕타제, 2-옥소글루타레이트 디옥시게나제, 지베렐산 2B/3B 히드롤라제, 지베렐린 3-옥시다제, 지베렐린 20-옥시다제, 키토시나제, 키티나제, β-1,3-글루카나제, β-1,4-글루카나제, β-1,6-글루카나제, 아미노시클로프로판-1-카르복실산 데아미나제 또는 nod 인자를 생산하는데 수반되는 효소 (예를 들어, nodA, nodB 또는 nodI)를 포함할 수 있다.

효소가 프로테아제 또는 펩티다제를 포함하는 경우에, 프로테아제 또는 펩티다제는 단백질, 펩티드, 전구단백질 또는 전전구단백질을 절단하여 생물활성 펩티드를 생성하는 프로테아제 또는 펩티다제일 수 있다. 생물활성 펩티드는 생물학적 활성을 발휘하는 임의의 펩티드일 수 있다.

생물활성 펩티드의 예는 RKN 16D10 및 RHPP를 포함한다.

단백질, 펩티드, 전구단백질 또는 전전구단백질을 절단하여 생물활성 펩티드를 생성하는 프로테아제 또는 펩티다제는 서브틸리신, 산 프로테아제, 알칼리성 프로테아제, 프로테이나제, 엔도펩티다제, 엑소펩티다제, 써모리신, 파파인, 펩신, 트립신, 프로나제, 카르복실라제, 세린 프로테아제, 글루탐산 프로테아제, 아스파르테이트 프로테아제, 시스테인 프로테아제, 트레오닌 프로테아제 또는 메탈로프로테아제를 포함할 수 있다.

프로테아제 또는 펩티다제는 단백질-풍부 음식 (예를 들어, 대두 음식 또는 효모 추출물) 내 단백질을 절단할 수 있다.

식물 성장 자극 단백질은 또한 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소를 포함할 수 있다. 이러한 효소는 셀룰라제, 리파제, 리그닌 옥시다제, 프로테아제, 글리코시드 히드롤라제, 포스파타제, 니트로게나제, 뉴클레아제, 아미다제, 니트레이트 리덕타제, 니트라이트 리덕타제, 아밀라제, 암모니아 옥시다제, 리그니나제, 글루코시다제, 포스포리파제, 피타제, 펙티나제, 글루카나제, 술파타제, 우레아제, 크실라나제 및 시데로포어를 포함한다. 식물 성장 배지 내로 도입되거나 식물, 종자, 또는 식물 또는 식물 종자 주위 영역에 적용되는 경우에, 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소를 포함하는 융합 단백질은 식물의 부근에서 영양소의 가공을 보조하고, 식물의 부근에서 식물에 의한 또는 유익한 박테리아 또는 진균에 의한 증진된 영양소 흡수를 유발할 수 있다.

적합한 셀룰라제는 엔도셀룰라제 (예를 들어, 엔도글루카나제, 예컨대 바실루스 서브틸리스 엔도글루카나제, 바실루스 투린기엔시스 엔도글루카나제, 바실루스 세레우스 엔도글루카나제 또는 바실루스 클라우시이( Bacillus clausii ) 엔도글루카나제), 엑소셀룰라제 (예를 들어, 트리코더마 레에세이( Trichoderma reesei ) 엑소셀룰라제), 및 β-글루코시다제 (예를 들어, 바실루스 서브틸리스 β-글루코시다제, 바실루스 투린기엔시스 β-글루코시다제, 바실루스 세레우스 β-글루코시다제 또는 바실루스 클라우시이 B-글루코시다제)를 포함한다.

리파제는 바실루스 서브틸리스 리파제, 바실루스 투린기엔시스 리파제, 바실루스 세레우스 리파제 또는 바실루스 클라우시이 리파제를 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 리파제는 바실루스 서브틸리스 리파제를 포함한다. 바실루스 서브틸리스 리파제는 하기 프라이머를 사용하여 PCR 증폭될 수 있다: ggatccatggctgaacacaatcc (정방향, 서열식별번호: 37) 및 ggatccttaattcgtattctggcc (역방향, 서열식별번호: 38).

또 다른 실시양태에서, 셀룰라제는 바실루스 서브틸리스 엔도글루카나제이다. 바실루스 서브틸리스 엔도글루카나제는 하기 프라이머를 사용하여 PCR 증폭될 수 있다: ggatccatgaaacggtcaatc (정방향, 서열식별번호: 39) 및 ggatccttactaatttggttctgt (역방향, 서열식별번호: 40).

또 다른 실시양태에서, 융합 단백질은 이. 콜라이( E. coli ) 프로테아제 PtrB를 포함한다. 이. 콜라이 프로테아제 PtrB는 하기 프라이머를 사용하여 PCR 증폭될 수 있다: ggatccatgctaccaaaagcc (정방향, 서열식별번호: 41) 및 ggatccttagtccgcaggcgtagc (역방향, 서열식별번호: 42).

특정 실시양태에서, 융합 단백질은 서열식별번호: 104에서의 뉴클레오티드 서열로부터 유래되는 엔도글루카나제를 함유한다.

융합 단백질에서 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편 및 임의로 링커 서열, 예컨대 폴리-A 링커에 융합될 수 있는 예시적인 엔도글루카나제에 대한 아미노산 서열은 서열식별번호: 107로서 제공된다.

다른 실시양태에서, 융합 단백질은 서열식별번호: 105에 제시된 뉴클레오티드 서열로부터 유래되는 포스포리파제를 함유한다.

융합 단백질에서 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편 및 임의로 링커 서열, 예컨대 폴리-A 링커에 융합될 수 있는 예시적인 포스포리파제에 대한 아미노산 서열은 서열식별번호: 108로서 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 융합 단백질은 서열식별번호: 106에 제시된 뉴클레오티드 서열로부터 유래되는 키토사나제를 함유한다. 융합 단백질에서 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편 및 임의로 링커 서열, 예컨대 폴리-A 링커에 융합될 수 있는 예시적인 키토사나제에 대한 아미노산 서열은 서열식별번호: 109로서 제공된다.

융합 구축물을 생성하기 위해, 유전자는 중첩 연장에 의한 스플라이싱 (SOE) 기술을 사용하여 BclA의 최초 35개의 아미노산 (서열식별번호: 1의 아미노산 1-35)을 코딩하는 바실루스 투린기엔시스 DNA의 천연 bclA 프로모터에 융합될 수 있다. 정확한 앰플리콘을 이. 콜라이/바실루스 셔틀 벡터 pHP13 내로 클로닝하고, 정확한 클론을 DNA 서열분석에 의해 스크리닝한다. 정확한 클론을 바실루스 투린기엔시스 내로 전기천공하고 (Cry-, 플라스미드-), 클로람페니콜 저항성에 대해 스크리닝한다. 정확한 형질전환체를 30℃에서 밤새 뇌 심장 주입 브로쓰에서 성장시키고, 영양 한천 플레이트 상에 플레이팅하고, 30℃에서 3일 동안 인큐베이션한다. 융합 구축물을 발현하는 포자 (BEMD 포자)는 포스페이트 완충 염수 (PBS) 중 세척에 의해 플레이트로부터 수집될 수 있고, 원심분리 및 PBS 중 추가의 세척에 의해 정제될 수 있다.

이러한 융합 단백질에서, 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제는 각각 서열식별번호: 107, 108 또는 109와 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.

이러한 융합 단백질에서, 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제는 각각 서열식별번호: 107, 108 또는 109와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

이러한 융합 단백질에서, 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제는 각각 서열식별번호: 107, 108 또는 109와 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

이러한 융합 단백질에서, 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제는 각각 서열식별번호: 107, 108 또는 109와 적어도 98% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

이러한 융합 단백질에서, 엔도글루카나제, 포스포리파제 또는 키토시나제는 각각 서열식별번호: 107, 108 또는 109와 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

적합한 리그닌 옥시다제는 리그닌 퍼옥시다제, 락카제, 글리옥살 옥시다제, 리그니나제 및 망가니즈 퍼옥시다제를 포함한다.

프로테아제는 서브틸리신, 산 프로테아제, 알칼리성 프로테아제, 프로테이나제, 펩티다제, 엔도펩티다제, 엑소펩티다제, 써모리신, 파파인, 펩신, 트립신, 프로나제, 카르복실라제, 세린 프로테아제, 글루탐산 프로테아제, 아스파르테이트 프로테아제, 시스테인 프로테아제, 트레오닌 프로테아제 또는 메탈로프로테아제를 포함할 수 있다.

포스파타제는 인산 모노에스테르 히드롤라제, 포스포모노에스테라아제 (예를 들어, PhoA4), 인산 디에스테르 히드롤라제, 포스포디에스테라제, 삼인산 모노에스테르 히드롤라제, 포스포릴 무수물 히드롤라제, 피로포스파타제, 피타제 (예를 들어, 바실루스 서브틸리스 EE148 피타제 또는 바실루스 투린기엔시스 BT013A 피타제), 트리메타포스파타제 또는 트리포스파타제를 포함할 수 있다.

니트로게나제는 Nif 패밀리 니트로게나제 (예를 들어, 파에니바실루스 마실리엔시스( Paenibacillus massiliensis ) NifBDEHKNXV)를 포함할 수 있다.

식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 및 펩티드

융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편, 및 식물을 병원체로부터 보호하는 적어도 1종의 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다.

단백질 또는 펩티드는 식물 면역 반응을 자극하는 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 식물 면역 반응을 자극하는 단백질 또는 펩티드는 식물 면역계 증진제 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 식물 면역계 증진제 단백질 또는 펩티드는 식물의 면역계에 대한 유익한 효과를 갖는 임의의 단백질 또는 펩티드일 수 있다. 적합한 식물 면역계 증진제 단백질 및 펩티드는 하르핀, α-엘라스틴, β-엘라스틴, 시스테민, 페닐알라닌 암모니아-리아제, 엘리시틴, 데펜신, 크립토게닌, 플라젤린 단백질 및 플라젤린 펩티드 (예를 들어, flg22)를 포함한다.

대안적으로, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드는 항박테리아 활성, 항진균 활성, 또는 항박테리아 및 항진균 활성 둘 다를 갖는 단백질 또는 펩티드일 수 있다. 이러한 단백질 및 펩티드의 예는 박테리오신, 리소자임, 리소자임 펩티드 (예를 들어, LysM), 시데로포어, 비-리보솜 활성 펩티드, 콘알부민, 알부민, 락토페린, 락토페린 펩티드 (예를 들어, LfcinB), 스트렙타비딘 및 TasA를 포함한다.

식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드는 또한 살곤충 활성을 갖거나, 살연충 활성을 갖거나, 곤충 또는 벌레 포식을 억제하거나, 또는 그의 조합을 갖는 단백질 또는 펩티드일 수 있다. 예를 들어, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드는 살곤충 박테리아 독소 (예를 들어, VIP 살곤충 단백질), 내독소, Cry 독소 (예를 들어, 바실루스 투린기엔시스로부터의 Cry 독소), 프로테아제 억제제 단백질 또는 펩티드 (예를 들어, 트립신 억제제 또는 애로우헤드 프로테아제 억제제), 시스테인 프로테아제 또는 키티나제를 포함할 수 있다. Cry 독소가 바실루스 투린기엔시스로부터의 Cry 독소인 경우에, Cry 독소는 Cry5B 단백질 또는 Cry21A 단백질일 수 있다. Cry5B 및 Cry21A는 살곤충 및 살선충 활성 둘 다를 갖는다.

식물을 병원체로부터 보호하는 단백질은 효소를 포함할 수 있다. 적합한 효소는 프로테아제 및 락토나제를 포함한다. 프로테아제 및 락토나제는 박테리아 신호전달 분자 (예를 들어, 박테리아 락톤 호모세린 신호전달 분자)에 특이적일 수 있다.

효소가 락토나제인 경우에, 락토나제는 1,4-락토나제, 2-피론-4,6-디카르복실레이트 락토나제, 3-옥소아디페이트 엔올-락토나제, 악티노마이신 락토나제, 데옥시리모네이트 A-고리-락토나제, 글루코노락토나제 L-람노노-1,4-락토나제, 리모닌-D-고리-락토나제, 스테로이드-락토나제, 트리아세테이트-락토나제 또는 크실로노-1,4-락토나제를 포함할 수 있다.

효소는 또한 박테리아 또는 진균의 세포 성분에 특이적인 효소일 수 있다. 예를 들어, 효소는 β-1,3-글루카나제, β-1,4-글루카나제, β-1,6-글루카나제, 키토시나제, 키티나제, 키토시나제-유사 효소, 리티카제, 펩티다제, 프로테이나제, 프로테아제 (예를 들어, 알칼리성 프로테아제, 산 프로테아제 또는 중성 프로테아제), 뮤타놀리신, 스타폴리신 또는 리소자임을 포함할 수 있다.

식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 및 펩티드

융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편, 및 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 적어도 1종의 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다.

예를 들어, 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드는 스트레스-관련 화합물을 분해하는 효소를 포함한다. 스트레스-관련 화합물은 아미노시클로프로판-1-카르복실산 (ACC), 반응성 산소 종, 산화질소, 옥시리핀 및 페놀계를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 특정 반응성 산소 종은 히드록실, 과산화수소, 산소 및 슈퍼옥시드를 포함한다. 스트레스-관련 화합물을 분해하는 효소는 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 옥시다제, 카탈라제, 아미노시클로프로판-1-카르복실산 데아미나제, 퍼옥시다제, 항산화제 효소 또는 항산화제 펩티드를 포함할 수 있다.

식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 단백질 또는 펩티드는 또한 식물을 환경적 스트레스로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 환경적 스트레스는, 예를 들어 가뭄, 홍수, 열, 동결, 염, 중금속, 낮은 pH, 높은 pH 또는 그의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 식물을 환경적 스트레스로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드는 빙핵형성 단백질, 프롤리나제, 페닐알라닌 암모니아 리아제, 이소코리스메이트 신타제, 이소코리스메이트 피루베이트 리아제 또는 콜린 데히드로게나제를 포함할 수 있다.

식물 결합 단백질 및 펩티드

융합 단백질은 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편, 및 적어도 식물 결합 단백질 또는 펩티드를 포함할 수 있다. 식물 결합 단백질 또는 펩티드는 식물의 임의의 부분 (예를 들어, 식물 뿌리 또는 식물의 지상부, 예컨대 잎, 줄기, 꽃 또는 과실) 또는 식물 물질에 특이적으로 또는 비-특이적으로 결합할 수 있는 임의의 펩티드 또는 단백질일 수 있다. 따라서, 예를 들어, 식물 결합 단백질 또는 펩티드는 뿌리 결합 단백질 또는 펩티드, 또는 잎 결합 단백질 또는 펩티드일 수 있다.

적합한 식물 결합 단백질 및 펩티드는 어드헤신 (예를 들어, 리커드헤신), 플라젤린, 옴프틴, 렉틴, 엑스판신, 바이오필름 구조 단백질 (예를 들어, TasA 또는 YuaB) 필루스 단백질, 쿠를루스 단백질, 인티민, 인바신, 응집소 및 아핌브리알 단백질을 포함한다.

융합 단백질을 발현하는 재조합 바실루스

본원에 기재된 융합 단백질은 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포에 의해 발현될 수 있다. 융합 단백질은 상기 논의된 임의의 융합 단백질일 수 있다.

재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 상기 논의된 임의의 융합 단백질 중 2종 이상을 공동발현할 수 있다. 예를 들어, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 식물 결합 단백질 또는 펩티드를 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질을, 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드를 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질, 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드를 포함하는 적어도 1종의 융합 단백질, 또는 식물에서 스트레스 저항성을 증진시키는 적어도 1종의 단백질 또는 펩티드와 함께 공동발현할 수 있다.

재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 바실루스 안트라시스, 바실루스 세레우스, 바실루스 투린기엔시스, 바실루스 미코이데스, 바실루스 슈도미코이데스, 바실루스 사마니이, 바실루스 가에모켄시스, 바실루스 웨이헨스테펜시스, 바실루스 토요이엔시스 또는 그의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 바실루스 세레우스, 바실루스 투린기엔시스, 바실루스 슈도미코이데스 또는 바실루스 미코이데스를 포함할 수 있다. 특히, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 바실루스 투린기엔시스 또는 바실루스 미코이데스를 포함할 수 있다.

융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포를 생성하기 위해, 임의의 바실루스 세레우스 패밀리 구성원은 관련 기술분야에 공지된 표준 방법을 사용하여 (예를 들어, 전기천공에 의해) 융합 단백질을 코딩하는 벡터와 접합되거나, 그에 의해 형질도입 또는 형질전환될 수 있다. 이어서, 박테리아는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 스크리닝되어 형질전환체가 확인될 수 있다. 예를 들어, 벡터가 항생제 저항성 유전자를 포함하는 경우에, 박테리아는 항생제 저항성에 대해 스크리닝될 수 있다. 대안적으로, 융합 단백질을 코딩하는 DNA는 비. 세레우스 패밀리 구성원 숙주의 염색체 DNA 내로 통합될 수 있다. 이어서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 포자형성을 유도할 조건에 노출될 수 있다. 포자형성을 유도하기에 적합한 조건은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 한천 플레이트 상에 플레이팅되고, 수일 (예를 들어, 3일) 동안 약 30℃의 온도에서 인큐베이션될 수 있다.

임의의 상기 종의 불활성화된 균주, 비-독성 균주 또는 유전자 조작된 균주가 또한 적합하게 사용될 수 있다. 예를 들어, Cry 독소가 결여되어 있는 바실루스 투린기엔시스가 사용될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 융합 단백질을 발현하는 재조합 비. 세레우스 패밀리 포자가 생성되었을 때, 그들은 사용시에 1회 추가의 발아를 방지하기 위해 불활성화될 수 있다. 관련 기술분야에 공지된 박테리아 포자를 불활성화시키기 위한 임의의 방법이 사용될 수 있다. 적합한 방법은 비제한적으로, 열 처리, 감마선 조사, X선 조사, UV-A 조사, UV-B 조사, 화학적 처리 (예를 들어, 글루타르알데히드, 포름알데히드, 과산화수소, 아세트산, 표백제 또는 그의 임의의 조합을 사용한 처리), 또는 그의 조합을 포함한다. 대안적으로, 비독소생성 균주 또는 유전적으로 또는 물리적으로 불활성화된 균주로부터 유래된 포자가 사용될 수 있다.

식물-성장 촉진 효과 및/또는 다른 유익한 속성을 갖는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포

많은 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 균주는 고유의 유익한 속성을 갖는다. 예를 들어, 일부 균주는 식물-성장 촉진 효과를 갖는다. 본원에 기재된 임의의 융합 단백질은 이러한 균주에서 발현될 수 있다.

예를 들어, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 박테리아의 식물-성장 촉진 균주를 포함할 수 있다.

박테리아의 식물-성장 촉진 균주는 살곤충 독소 (예를 들어, Cry 독소)를 생산하거나, 살진균 화합물 (예를 들어, β-1,3-글루카나제, 키토시나제, 리티카제 또는 그의 조합)을 생산하거나, 살선충 화합물 (예를 들어, Cry 독소)을 생산하거나, 살박테리아 화합물을 생산하거나, 1종 이상의 항생제에 저항성이 있거나, 1종 이상의 자유 복제 플라스미드를 포함하거나, 식물 뿌리에 결합하거나, 식물 뿌리를 콜로니화하거나, 바이오필름을 형성하거나, 영양소를 가용화시키거나, 유기 산을 분비하거나, 또는 그의 임의의 조합을 갖는 박테리아의 균주를 포함할 수 있다.

예를 들어, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포가 박테리아의 식물-성장 촉진 균주를 포함하는 경우에, 박테리아의 식물 성장-촉진 균주는 바실루스 미코이데스 BT155 (NRRL 번호 B-50921), 바실루스 미코이데스 EE118 (NRRL 번호 B-50918), 바실루스 미코이데스 EE141 (NRRL 번호 B-50916), 바실루스 미코이데스 BT46-3 (NRRL 번호 B-50922), 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 EE128 (NRRL 번호 B-50917), 바실루스 투린기엔시스 BT013A (NRRL 번호 B-50924) 또는 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 EE349 (NRRL 번호 B-50928)를 포함할 수 있다. 바실루스 투린기엔시스 BT013A는 또한 바실루스 투린기엔시스 4Q7로 공지되어 있다. 각각의 이들 균주는, 미국 61604 일리노이주 피오리아 노스 유니버시티 스트리트 1815의 주소를 갖는 미국 농무부 (USDA) 농업 연구소 (ARS)에 2014년 3월 10일에 기탁되었고, 괄호 안에 제공된 NRRL 기탁 번호에 의해 확인된다.

이들 식물-성장 촉진 균주는 다양한 건강한 식물의 근권으로부터 단리되었고, 그의 16S rRNA 서열에 의해 및 생화학적 검정을 통해 확인되었다. 균주는 적어도 통상적인 생화학 및 형태학적 지시자에 의해 그의 속 명칭으로 확인되었다. 확인된 그람-양성 균주, 예컨대 바실루스에 대한 생화학적 검정은 PEA 배지 및 영양 한천 상의 성장, 현미경 검사, 5% 및 7.5% NaCl 배지 상의 성장, pH 5 및 pH 9에서의 성장, 42℃ 및 50℃에서의 성장, 셀로비오스, 락토스, 글리세롤, 글루코스, 수크로스, d-만니톨 및 전분을 사용한 발효시에 산을 생산하는 능력; 형광 안료 생산; 젤라틴 가수분해; 니트레이트 환원; 카탈라제 생산, 전분 가수분해; 옥시다제 반응, 우레아제 생산 및 운동성을 포함하였다.

예를 들어, 박테리아의 식물-성장 촉진 균주를 포함하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 바실루스 미코이데스 BT155, 바실루스 미코이데스 EE141 또는 바실루스 투린기엔시스 BT013A를 포함할 수 있다. 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 본원에 기재된 임의의 융합 단백질, 예를 들어 서열식별번호: 60의 표적화 서열 및 비-호르몬 펩티드 (예를 들어, 쿠니츠 트립신 억제제 (KTI)), 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소 (예를 들어, 키토시나제), 식물 결합 단백질 또는 펩티드 (예를 들어, TasA); 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드 (예를 들어, TasA), 또는 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소 (예를 들어, 포스파타제, 예컨대 PhoA 또는 피타제, 또는 엔도글루카나제)를 포함하는 융합 단백질을 발현할 수 있다.

프로모터

본원에 기재된 임의의 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원에서, 융합 단백질은 융합 단백질의 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편에 천연인 프로모터의 제어 하에 발현될 수 있다. 예를 들어, 융합 단백질이 비. 안트라시스 스턴 BclA로부터 유래된 표적화 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 1의 아미노산 20-35, 서열식별번호: 1의 아미노산 1-35, 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 60)을 포함하는 경우 또는 융합 단백질이 전장 BclA (서열식별번호: 2) 또는 전장 BclA의 단편 (예를 들어, 서열식별번호: 59)을 포함하는 경우에, 융합 단백질은 비. 안트라시스 스턴의 게놈 내 BclA 유전자와 정상적으로 연관된 프로모터 (예를 들어, 서열식별번호: 85의 프로모터)의 제어 하에 발현될 수 있다.

대안적으로, 융합 단백질은 고발현 포자형성 프로모터의 제어 하에 발현될 수 있다. 일부 경우에서, 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편에 천연인 프로모터는 고발현 포자형성 프로모터일 것이다. 다른 경우에서, 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편에 천연인 프로모터는 고발현 포자형성 프로모터가 아닐 것이다. 후자의 경우에서, 천연 프로모터를 고발현 포자형성 프로모터로 대체하는 것이 유리할 수 있다. 고발현 포자형성 프로모터의 제어 하의 융합 단백질의 발현은 바실루스 세레우스 패밀리 구성원의 포자외막 상의 융합 단백질의 증가된 발현을 제공한다.

고발현 포자형성 프로모터는 1개 이상의 시그마-K 포자형성-특이적 폴리머라제 프로모터 서열을 포함할 수 있다.

바실루스 세레우스 패밀리 구성원에서 융합 단백질을 발현하는데 사용하기에 적합한 고발현 포자형성 프로모터는 하기 표 2에 열거된 것을 포함한다:

표 2. 프로모터 서열

상기 표 2에 열거된 프로모터 서열에서, 시그마-K 포자형성-특이적 폴리머라제 프로모터 서열의 위치는 볼드체 및 밑줄표시 문자에 의해 나타나 있다. Cry1A 프로모터 (비. 투린기엔시스 HD-73; 서열식별번호: 90)는 표 2에서 이중 밑줄표시에 의해 나타나 있는 바와 같이, 2개가 서로 중첩되어 있는 총 4개의 시그마-K 서열을 갖는다.

바실루스 세레우스 패밀리 구성원에서 융합 단백질을 발현하는데 사용하기에 바람직한 고발현 포자형성 프로모터는 BetA 프로모터 (비. 안트라시스 스턴; 서열식별번호: 86), BclA 프로모터 (비. 안트라시스 스턴; 서열식별번호: 85), BclA 클러스터 글리코실 트랜스퍼라제 오페론 1 및 2 프로모터 (비. 안트라시스 스턴; 서열식별번호: 101 및 102) 및 YVTN β-프로펠러 단백질 프로모터 (비. 웨이헨스테펜시스 KBAB 4; 서열식별번호: 89)를 포함한다.

본원에 기재된 임의의 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원에서, 융합 단백질은 서열식별번호: 85-103 중 어느 하나의 핵산 서열과 적어도 80% 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 포자형성 프로모터의 제어 하에 발현될 수 있다.

포자형성 프로모터가 서열식별번호: 85-103 중 어느 하나의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 경우에, 시그마-K 포자형성-특이적 폴리머라제 프로모터 서열 또는 서열들은 서열식별번호: 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102 또는 103의 상응하는 뉴클레오티드와 바람직하게는 100% 동일성을 갖는다. 예를 들어, 상기 표 2에 예시된 바와 같이, 비. 안트라시스 스턴의 BclA 프로모터 (서열식별번호: 85)는 뉴클레오티드 24-32, 35-43 및 129-137에 시그마-K 포자형성-특이적 폴리머라제 프로모터 서열을 갖는다. 따라서, 포자형성 프로모터가 서열식별번호: 85의 핵산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경우에, 서열식별번호: 85의 뉴클레오티드 24-32, 35-43 및 129-137에 상응하는 포자형성 프로모터의 뉴클레오티드는 서열식별번호: 85의 뉴클레오티드 24-32, 35-43 및 129-137과 100% 동일성을 갖는 것이 바람직하다.

식물 성장을 자극하기 위한 본원에 기재된 임의의 방법에서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 특정한 살진균제로부터 선택된 적어도 1종의 살진균제를 포함하는 식물 성장 배지에서 성장한 식물은 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포를 함유하지 않는 동일한 식물 성장 배지에서의 식물의 성장과 비교하여 증가된 성장을 나타낸다.

식물 성장을 자극하기 위한 본원에 기재된 임의의 조성물 및 방법에서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 상기 기재된 임의의 박테리아의 재조합 식물-성장 촉진 균주를 포함할 수 있다.

본원에 개시된 식물 성장을 자극하기 위한 임의의 조성물 및 방법에서, 융합 단백질은 상기 기재된 임의의 프로모터의 제어 하에 발현될 수 있다.

살진균제

일반적으로, "살진균"은 진균의 사멸률을 증가시키거나 성장률을 억제하는 물질의 능력을 의미한다.

용어 "진균" 또는 "진균류"는 클로로필이 결여된 매우 다양한 유핵 포자보유 유기체를 포함한다. 진균의 예는 효모, 곰팡이, 흰곰팡이, 녹병 및 버섯을 포함한다.

본 발명에 따른 조성물은 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제를 포함한다.

일반 명칭에 의해 본원에 명시된 활성 화합물은 공지되어 있으며, 예를 들어 "Pesticide Manual" 또는 인터넷 상 (예를 들어: http://www.alanwood.net/pesticides)에 기재되어 있다.

일부 실시양태에서, 살진균제는 비테르타놀, 빅사펜, 브로무코나졸, 카르벤다짐, 카르프로파미드, 디클로플루아니드, 페나미돈, 펜헥사미드, 펜틴 아세테이트, 펜틴 히드록시드, 플루오피콜리드, 플루오피람, 플루옥사스트로빈, 플루퀸코나졸, 포세틸, 이프로디온, 이프로발리카르브, 이소티아닐, 메토미노스트로빈, 오푸레이스, 펜시쿠론, 펜플루펜, 프로클로라즈, 프로파모카르브, 프로피네브, 프로티오코나졸, 피리메타닐, 스피록사민, 테부코나졸, 톨릴플루아니드, 트리아디메폰, 트리아디메놀, 트리아족시드, 트리플록시스트로빈, N-[5-클로로-2-(트리플루오로메틸)벤질]-N-시클로프로필-3-(디플루오로메틸)-5-플루오로-1-메틸-1H-피라졸-4-카르복스아미드 및 2,6-디메틸-1H,5H-[1,4]디티이노[2,3-c:5,6-c']디피롤-1,3,5,7(2H,6H)-테트론으로 이루어진 군으로부터 선택 된다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서 살진균제는 카르벤다짐, 플루퀸코나졸, 이소티아닐, 펜시쿠론, 펜플루펜, 프로티오코나졸, 테부코나졸 및 트리플록시스트로빈으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또 다른 실시양태에서, 살진균제는 N-(5-클로로-2-이소프로필벤질)-N-시클로프로필-3-(디플루오로메틸)-5-플루오로-1-메틸-1H-피라졸-4-카르복스아미드이다.

본 발명에 따른 조성물

본 발명에 따르면 조성물은 a) (i) 식물 성장 자극 화합물의 생산 또는 활성화에 수반되는 효소; 박테리아, 진균 또는 식물 영양 공급원을 분해하거나 변형시키는 효소; 및 식물을 병원체로부터 보호하는 단백질 또는 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 (상기 표적화 서열은 상기 바실루스 세포의 포자외막에 상기 융합 단백질을 국재화함); 및 b) 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제를 상승작용적 유효량으로 포함한다.

본 발명에 따른 "상승작용적 유효량"은 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 또는 본원에 기재된 바와 같은 적어도 1종의 특정한 살진균제 단독보다 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대해 더 효과적인, 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 상기 살진균제의 조합의 양을 나타낸다. 본 발명에 따른 "상승작용적 유효량"은 또한 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 또는 본원에 개시된 바와 같은 적어도 1종의 특정한 살진균제 단독보다 식물 성장을 증진시키고/거나 식물 건강을 촉진하는데 더 효과적인, 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 살진균제의 조합의 양을 나타낸다.

본 발명은 본원에 언급된 각각의 살진균제와 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포와의 각각의 및 모든 조합을 포함한다.

추가의 첨가제

본 발명의 한 측면은 증량제, 용매, 자발성 촉진제, 담체, 유화제, 분산제, 결빙 보호제, 증점제 및 아주반트로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 보조제를 추가로 포함하는 상기 기재된 바와 같은 조성물을 제공하는 것이다. 그러한 조성물은 제제로서 언급된다.

따라서, 본 발명의 한 측면에서, 상기 제제 및 그로부터 제조된 적용 형태는 본 발명의 조성물을 포함하는 작물 보호제 및/또는 살충제, 예컨대 드렌치, 드립 및 분무액으로서 제공된다. 적용 형태는, 예를 들어 추가의 작물 보호제 및/또는 살충제 및/또는 활성-증진 아주반트, 예컨대 침투제, 예를 들어 식물성 오일, 예컨대, 예를 들어 평지씨 오일, 해바라기 오일, 미네랄 오일, 예컨대, 예를 들어 액체 파라핀, 식물성 지방산의 알킬 에스테르, 예컨대 평지씨 오일 또는 대두 오일 메틸 에스테르, 또는 알칸올 알콕실레이트 및/또는 전착제, 예컨대, 예를 들어, 알킬실록산 및/또는 염, 예를 들어 유기 또는 무기 암모늄 또는 포스포늄 염, 예를 들어 황산암모늄 또는 인산수소이암모늄, 및/또는 저류 촉진제, 예컨대 디옥틸 술포숙시네이트 또는 히드록시프로필구아 중합체 및/또는 함습제, 예컨대 글리세롤 및/또는 비료, 예컨대 암모늄, 칼륨 또는 인 비료를 포함할 수 있다.

전형적인 제제의 예는 수용성 액체 (SL), 유화성 농축물 (EC), 물 중 에멀젼 (EW), 현탁액 농축물 (SC, SE, FS, OD), 수분산성 과립 (WG), 과립 (GR) 및 캡슐 농축물 (CS)을 포함하고; 이들 및 다른 가능한 유형의 제제는, 예를 들어 문헌 [Crop Life International and in Pesticide Specifications, Manual on Development and Use of FAO and WHO Specifications for Pesticides, FAO Plant Production and Protection Papers - 173, prepared by the FAO/WHO Joint Meeting on Pesticide Specifications, 2004, ISBN: 9251048576]에 기재되어 있다. 제제는 본 발명의 1종 이상의 활성 화합물 이외의 다른 활성 농약 화합물을 포함할 수 있다.

해당 제제 또는 적용 형태는 바람직하게는, 예를 들어 보조제, 예컨대 증량제, 용매, 자발성 촉진제, 담체, 유화제, 분산제, 결빙 보호제, 살생물제, 증점제 및/또는 다른 보조제, 예컨대 아주반트를 포함한다. 이러한 문맥에서 아주반트는 그 자체로 생물학적 효과를 갖는 성분 없이, 제제의 생물학적 효과를 증진시키는 성분이다. 아주반트의 예는 저류, 전착, 잎 표면에 대한 부착 또는 침투를 촉진하는 작용제이다.

이들 제제는 공지된 방식으로, 예를 들어 활성 화합물을 보조제, 예컨대, 예를 들어 증량제, 용매 및/또는 고체 담체 및/또는 추가의 보조제, 예컨대, 예를 들어 계면활성제와 혼합함으로써 생산된다. 제제는 적합한 식물에서 제조되거나, 또는 다르게는 적용 전에 또는 그 동안에 제조된다.

활성 화합물의 제제 또는 이들 제제로부터 제조된 적용 형태 (예컨대, 예를 들어 사용가능한 작물 보호제, 예컨대 분무액 또는 종자 드레싱)에 특정한 특성, 예컨대 특정 물리적, 기술적 및/또는 생물학적 특성을 부여하는데 적합한 물질이 보조제로 사용하기에 적합하다.

적합한 증량제는, 예를 들어 물, 예를 들어 방향족 및 비-방향족 탄화수소 (예컨대 파라핀, 알킬벤젠, 알킬나프탈렌, 클로로벤젠), 알콜 및 폴리올 (이는 적절한 경우에 또한 치환되고/거나, 에테르화되고/거나 에스테르화될 수 있음), 케톤 (예컨대 아세톤, 시클로헥사논), 에스테르 (지방 및 오일 포함) 및 (폴리)에테르, 비치환 및 치환된 아민, 아미드, 락탐 (예컨대 N-알킬피롤리돈) 및 락톤, 술폰 및 술폭시드 (예컨대 디메틸 술폭시드)의 부류로부터의 극성 및 비극성 유기 화학 액체이다.

사용된 증량제가 물인 경우에, 예를 들어 유기 용매를 보조 용매로 사용하는 것이 또한 가능하다. 본질적으로, 적합한 액체 용매는 하기와 같다: 방향족, 예컨대 크실렌, 톨루엔 또는 알킬나프탈렌, 염소화 방향족 및 염소화 지방족 탄화수소, 예컨대 클로로벤젠, 클로로에틸렌 또는 메틸렌 클로라이드, 지방족 탄화수소, 예컨대 시클로헥산 또는 파라핀, 예를 들어 석유 분획, 미네랄 및 식물성 오일, 알콜, 예컨대 부탄올 또는 글리콜 및 또한 그의 에테르 및 에스테르, 케톤, 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 메틸 이소부틸 케톤 또는 시클로헥사논, 강한 극성 용매, 예컨대 디메틸포름아미드 및 디메틸 술폭시드, 및 또한 물.

원칙적으로 모든 적합한 용매를 사용하는 것이 가능하다. 적합한 용매는, 예를 들어 방향족 탄화수소, 예컨대 크실렌, 톨루엔 또는 알킬나프탈렌, 예를 들어 염소화 방향족 또는 지방족 탄화수소, 예컨대 클로로벤젠, 클로로에틸렌 또는 메틸렌 클로라이드, 예를 들어 지방족 탄화수소, 예컨대 시클로헥산, 예를 들어 파라핀, 석유 분획, 미네랄 및 식물성 오일, 알콜, 예컨대, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올 또는 글리콜, 및 또한 그의 에테르 및 에스테르, 케톤, 예컨대 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 메틸 이소부틸 케톤 또는 시클로헥사논, 예를 들어 강한 극성 용매, 예컨대 디메틸 술폭시드, 및 물이다.

모든 적합한 담체가 원칙적으로 사용될 수 있다. 적합한 담체는 특히 하기와 같다: 예를 들어, 암모늄 염 및 분쇄된 천연 미네랄, 예컨대 카올린, 점토, 활석, 백악, 석영, 아타풀자이트, 몬모릴로나이트 또는 규조토, 및 분쇄된 합성 미네랄, 예컨대 미분된 실리카, 알루미나 및 천연 또는 합성 규산염, 수지, 왁스 및/또는 고체 비료. 이러한 담체의 혼합물이 마찬가지로 사용될 수 있다. 과립에 적합한 담체는 하기를 포함한다: 예를 들어, 분쇄 및 분획화된 천연 미네랄, 예컨대 방해석, 대리석, 부석, 세피올라이트, 돌로마이트, 및 또한 무기 및 유기 분말의 합성 과립, 및 또한 유기 물질, 예컨대 톱밥, 종이, 코코넛 쉘, 메이즈 속대 및 담배 자루의 과립.

액화된 기체상 증량제 또는 용매가 또한 사용될 수 있다. 표준 온도에서 및 표준 압력 하에 기체상인 그러한 증량제 또는 담체, 예를 들어 에어로졸 추진제, 예컨대 할로겐화 탄화수소, 및 또한 부탄, 프로판, 질소 및 이산화탄소가 특히 적합하다.

이온성 또는 비이온성 특성을 갖는 유화제 및/또는 거품-형성제, 분산제 또는 습윤제, 또는 이들 표면-활성 물질의 혼합물의 예는, 폴리아크릴산의 염, 리그노술폰산의 염, 페닐술폰산 또는 나프탈렌술폰산의 염, 에틸렌 옥시드와 지방 알콜 또는 지방산 또는 지방 아민, 치환된 페놀 (바람직하게는, 알킬페놀 또는 아릴페놀)과의 중축합물, 술포숙신산 에스테르의 염, 타우린 유도체 (바람직하게는, 알킬타우레이트), 폴리에톡실화 알콜 또는 페놀의 인산 에스테르, 폴리올의 지방산 에스테르, 및 술페이트, 술포네이트 및 포스페이트를 함유하는 화합물의 유도체, 예를 들어 알킬아릴 폴리글리콜 에테르, 알킬술포네이트, 알킬 술페이트, 아릴술포네이트, 단백질 가수분해물, 리그닌-술파이트 폐액 및 메틸셀룰로스이다. 표면-활성 물질의 존재는 활성 화합물 중 1종 및/또는 불활성 담체 중 1종이 물에 가용성이 아닌 경우 및 적용이 물 중에서 수행되는 경우에 유리하다.

제제 및 그로부터 유래된 적용 형태 중에 존재할 수 있는 추가의 보조제는 착색제, 예컨대 무기 안료, 예를 들어 산화철, 산화티타늄, 프러시안 블루, 및 유기 염료, 예컨대 알리자린 염료, 아조 염료 및 금속 프탈로시아닌 염료, 및 영양소 및 미량 영양소, 예컨대 철, 망가니즈, 붕소, 구리, 코발트, 몰리브데넘 및 아연의 염을 포함한다.

화학적 및/또는 물리적 안정성을 개선시키는 안정화제, 예컨대 저온 안정화제, 보존제, 항산화제, 광 안정화제 또는 다른 작용제가 또한 존재할 수 있다. 거품-형성제 또는 탈포제가 추가로 존재할 수 있다.

추가로, 제제 및 그로부터 유래된 적용 형태는 또한 추가의 보조제로서, 점착제, 예컨대 카르복시메틸셀룰로스, 분말, 과립 또는 라텍스 형태의 천연 및 합성 중합체, 예컨대 아라비아 검, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 아세테이트, 및 또한 천연 인지질, 예컨대 세팔린 및 레시틴, 및 합성 인지질을 포함할 수 있다. 추가의 가능한 보조제는 미네랄 및 식물성 오일을 포함한다.

제제 및 그로부터 유래된 적용 형태 중에 존재하는 추가의 보조제가 있을 수도 있다. 이러한 첨가제의 예는 향료, 보호 콜로이드, 결합제, 접착제, 증점제, 요변성 물질, 침투제, 저류 촉진제, 안정화제, 격리제, 착화제, 함습제 및 전착제를 포함한다. 일반적으로 말하면, 활성 화합물은 제제화 목적을 위해 흔히 사용되는 임의의 고체 또는 액체 첨가제와 조합될 수 있다.

적합한 저류 촉진제는, 예를 들어 동적 표면 장력을 감소시키는 모든 물질, 예컨대 디옥틸 술포숙시네이트, 또는 점탄성을 증가시키는 모든 물질, 예컨대 히드록시프로필구아 중합체를 포함한다.

본 발명의 문맥에서 적합한 침투제는 식물 내로의 활성 농약 화합물의 침투를 증진시키기 위해 전형적으로 사용되는 모든 그러한 물질을 포함한다. 이러한 문맥에서 침투제는, (일반적으로 수성) 적용액 및/또는 분무 코팅으로부터, 그들이 식물의 각피를 침투하여 각피에서의 활성 화합물의 이동성을 증가시킬 수 있는 것으로 정의된다. 이러한 특성은 문헌에 기재된 방법을 사용하여 결정될 수 있다 (Baur, et al., 1997, Pesticide Science 51, 131-152). 예는, 예를 들어 알콜 알콕실레이트, 예컨대 코코넛 지방성 에톡실레이트 (10) 또는 이소트리데실 에톡실레이트 (12), 지방산 에스테르, 예컨대 평지씨 또는 대두 오일 메틸 에스테르, 지방 아민 알콕실레이트, 예컨대 탈로우아민 에톡실레이트 (15), 또는 암모늄 및/또는 포스포늄 염, 예컨대 황산암모늄 또는 인산수소이암모늄을 포함한다.

제제는 바람직하게는 제제의 중량을 기준으로 하여 0.0001 중량% 내지 98 중량%의 활성 화합물, 특히 바람직하게는 0.01 중량% 내지 95 중량%의 활성 화합물, 보다 바람직하게는 0.5 중량% 내지 90 중량%의 활성 화합물을 포함한다. 활성 화합물의 함량은 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제의 합계로 정의된다.

제제로부터 제조된 적용 형태 (작물 보호 제품)의 활성 화합물 함량은 넓은 범위 내에서 달라질 수 있다. 적용 형태의 활성 화합물 농도는 적용 형태의 중량을 기준으로 하여 전형적으로 0.0001 중량% 내지 95 중량%의 활성 화합물, 바람직하게는 0.0001 중량% 내지 1 중량%로 고려될 수 있다. 적용은 적용 형태에 적합화된 통상의 방식으로 수행된다.

추가로, 본 발명의 한 측면에서 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제를 상승작용적 유효량으로 공간적으로 분리된 배열로 포함하는 부분들의 키트가 제공된다.

본 발명의 추가 실시양태에서 상기 언급된 부분들의 키트는 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제를 추가로 포함한다. 살진균제 및/또는 살곤충제는 부분들의 키트의 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 성분 또는 부분들의 키트의 살진균제 성분에, 공간적으로 분리되어 또는 이들 성분의 둘 다에 존재할 수 있다. 바람직하게는, 살진균제 및/또는 살곤충제는 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원-기재 생물학적 방제제 성분에 존재한다.

더욱이, 본 발명에 따른 부분들의 키트는 하기 언급된 바와 같이 증량제, 용매, 자발성 촉진제, 담체, 유화제, 분산제, 결빙 보호제, 증점제 및 아주반트로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 보조제를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 적어도 1종의 보조제는 부분들의 키트의 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 성분 또는 부분들의 키트의 살진균제 성분에, 공간적으로 분리되어 또는 이들 성분의 둘 다에 존재할 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면에서 상기 기재된 바와 같은 조성물은 식물 및 식물 부분의 전체 손상, 뿐만 아니라 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의해 유발된 수확된 과실 또는 채소에서의 손실을 감소시키기 위해 사용된다.

추가로, 본 발명의 또 다른 측면에서 상기 기재된 바와 같은 조성물은 전체 식물 건강을 증가시킨다.

용어 "식물 건강"은 일반적으로 해충의 방제에 연관되지 않은 식물의 다양한 종류의 개선을 포함한다. 예를 들어, 언급될 수 있는 유리한 특성은 다음을 포함한 개선된 작물 특징이다: 출아, 작물 수확량, 단백질 함량, 오일 함량, 전분 함량, 보다 발달된 뿌리계, 개선된 뿌리 성장, 개선된 뿌리 크기 유지, 개선된 뿌리 유효성, 개선된 스트레스 내성 (예를 들어 가뭄, 열, 염, UV, 물, 추위에 대한), 감소된 에틸렌 (감소된 생산 및/또는 수용 억제), 분얼 증가, 식물 높이의 증가, 보다 큰 잎새, 보다 적은 죽은 기부 잎, 보다 강한 분얼경, 보다 푸른 잎 색, 색소 함량, 광합성 활성, 보다 적은 투입 필요량 (예컨대 비료 또는 물), 보다 적은 종자 필요량, 보다 생산적인 분얼경, 보다 이른 개화, 이른 곡물 성숙, 보다 적은 식물 쓰러짐 (도복), 증가된 싹 성장, 증진된 식물 활력, 증가된 식물 생립 및 보다 이르고 보다 우수한 발아.

본 발명에 따른 용도에 관하여, 개선된 식물 건강은 바람직하게는 다음을 포함한 개선된 식물 특징을 지칭한다: 작물 수확량, 보다 발달된 뿌리계 (개선된 뿌리 성장), 개선된 뿌리 크기 유지, 개선된 뿌리 유효성, 분얼 증가, 식물 높이의 증가, 보다 큰 잎새, 보다 적은 죽은 기부 잎, 보다 강한 분얼경, 보다 푸른 잎 색, 광합성 활성, 보다 생산적인 분얼경, 증진된 식물 활력 및 증가된 식물 생립.

본 발명에 관하여, 개선된 식물 건강은 바람직하게는 특히 작물 수확량, 보다 발달된 뿌리계, 개선된 뿌리 성장, 개선된 뿌리 크기 유지, 개선된 뿌리 유효성, 분얼 증가 및 식물 높이의 증가로부터 선택된 개선된 식물 특성을 지칭한다.

본원에 정의된 바와 같은 식물 건강에 대한 본 발명에 따른 조성물의 효과는 식물 중 일부를 본 발명에 따른 조성물로 처리하고, 식물 중 또 다른 일부를 본 발명에 따른 조성물로 처리하지 않은, 동일한 환경 조건 하에서 성장시킨 상기 식물을 비교함으로써 결정될 수 있다. 대신에, 상기 다른 일부는 전혀 처리하지 않거나 위약으로 처리한다 (즉, 본 발명에 따른 조성물이 없는 적용, 예컨대 모든 활성 성분이 없는 (즉, 본원에 기재된 바와 같은 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원-기재 생물학적 방제제가 없고 본원에 기재된 바와 같은 살진균제가 없는) 적용, 또는 본원에 기재된 바와 같은 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원-기재 생물학적 방제제가 없는 적용, 또는 본원에 기재된 바와 같은 살진균제가 없는 적용).

본 발명에 따른 조성물은 임의의 목적하는 방식, 예컨대 종자 코팅, 토양 드렌치의 형태로 및/또는 직접 고랑내로 및/또는 엽면 분무로서 적용되고, 출아전, 출아후 또는 둘 다에 적용될 수 있다. 다시 말해서, 조성물은 종자, 식물 또는 수확된 과실 및 채소, 또는 식물이 성장하고 있거나 식물을 성장시키려는 토양 (식물의 성장 생육지)에 적용될 수 있다.

식물 및 식물 부분의 전체 손상을 감소시키는 것은 종종 보다 건강한 식물 및/또는 식물 활력 및 수확량의 증가를 유발한다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 조성물은 통상적인 또는 트랜스제닉 식물 또는 그의 종자를 처리하기 위해 사용된다.

본 발명은 또한 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제를 포함하는 상기 기재된 임의의 조성물을 사용하여 식물 성장을 자극하는 방법에 관한 것이다. 식물 성장을 자극하는 방법은 (i) 적어도 1종의 식물 성장 자극 단백질 또는 펩티드; 및 (ii) 표적화 서열, 포자외막 단백질 또는 포자외막 단백질 단편을 포함하는 융합 단백질을 발현하는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포, 및 본원에 개시된 적어도 1종의 추가의 특정한 살진균제를 상승작용적 유효량으로 포함하는 조성물을 식물, 식물 부분, 식물 주위 생육지 또는 식물이 식재될 생육지 (예를 들어, 토양 또는 다른 성장 배지)에 적용하는 것을 포함한다.

본 발명의 또 다른 측면에서 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제를 상승작용적 유효량으로 동시에 또는 순차적으로 적용하는 단계를 포함하는, 식물 및 식물 부분의 전체 손상, 뿐만 아니라 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의해 유발된 수확된 과실 또는 채소에서의 손실을 감소시키는 방법이 제공된다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 조성물은 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 특정한 살진균제 이외에도 적어도 1종의 살곤충제 및/또는 적어도 1종의 살진균제를 포함한다. 한 실시양태에서, 적어도 1종의 살곤충제는 합성 살곤충제이다.

본 발명의 방법은 하기 적용 방법을 포함하며, 즉 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 이전에 언급된 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제 둘 다는 농업상 허용되는 보관 수명을 갖는 단일의 안정한 조성물로 제제화되거나 (소위 "단독-제제"), 또는 사용 전에 또는 사용 시에 조합될 수 있다 (소위 "조합-제제").

달리 언급되지 않는 한, 표현 "조합"은 단독-제제, 단일 "레디-믹스" 형태, 단독-제제로부터 구성된 조합 분무 혼합물, 예컨대 "탱크-믹스", 및 특히 순차적 방식으로, 즉 하나를 적용한 후에 상당히 짧은 기간, 예컨대 몇 시간 또는 며칠, 예를 들어 2시간 내지 7일 이내에 다른 것을 적용하는 경우의 단일 활성 성분의 조합 사용에 있어서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제, 및 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제의 다양한 조합을 나타낸다. 본 발명에 따른 조성물을 적용하는 순서는 본 발명을 실시하는데 필수적이지 않다. 따라서, 용어 "조합"은 또한, 예를 들어 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제, 및 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제를 식물, 그의 주위, 서식지 또는 저장 공간에 동시에 또는 순차적으로 적용한 후에, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제, 및 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 살곤충제의 처리될 식물 또는 그의 주위, 서식지 또는 저장 공간 상 또는 그 내의 존재를 포괄한다.

재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제, 및 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제가 순차적 방식으로 이용 또는 사용되는 경우에, 식물 또는 식물 부분 (이는 종자 및 종자로부터 출아한 식물을 포함함), 수확된 과실 및 채소를 하기 방법에 따라 처리하는 것이 바람직하다: 첫번째로 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제 및 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제를 식물 또는 식물 부분에 적용하고, 두번째로 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포를 동일한 식물 또는 식물 부분에 적용하는 것. 이러한 적용 방식에 의해 수확시에 식물 상의 살곤충제/살진균제의 잔류물의 양이 가능한 한 낮아진다. (작물) 성장 사이클 내에서의 제1 및 제2 적용 사이의 기간은 달성하고자 하는 효과에 따라 달라지고 그에 의존할 수 있다. 예를 들어, 제1 적용은 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의한 식물 또는 식물 부분의 침입을 방지하거나 (이는 특히 종자를 처리하는 경우임) 또는 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의한 침입을 퇴치하기 위해 (이는 특히 식물 및 식물 부분을 처리하는 경우임) 수행되며, 제2 적용은 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의한 침입을 방지 또는 방제하고/거나 식물 성장을 촉진하기 위해 수행된다. 이러한 문맥에서 방제는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포가 해충 또는 식물병원성 진균을 완전히 근절할 수는 없지만 침입을 허용되는 수준으로 유지할 수는 있다는 것을 의미한다.

본 발명은 또한 다중 적용에 의해 본 발명의 조성물의 사멸, 억제, 방지 및/또는 기피 활성을 증진시키는 방법을 제공한다. 일부 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 임의의 목적하는 발달 단계 동안에 또는 임의의 미리 결정된 해충 압박 하에 약 1시간, 약 5시간, 약 10시간, 약 24시간, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 1주, 약 10일, 약 2주, 약 3주, 약 1개월 또는 그 초과의 간격으로, 2회 동안 식물 및/또는 식물 부분에 적용된다. 또한 일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 임의의 목적하는 발달 단계 동안에 또는 임의의 미리 결정된 해충 압박 하에 약 1시간, 약 5시간, 약 10시간, 약 24시간, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 1주, 약 10일, 약 2주, 약 3주, 약 1개월 또는 그 초과의 간격으로, 2회 초과, 예를 들어 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회 또는 그 초과 동안 식물 및/또는 식물 부분에 적용된다. 각각의 적용 사이의 간격은 원하는 경우에 달라질 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 적용 횟수 및 간격의 길이를 식물 종, 식물 해충 종 및 다른 인자에 따라 결정할 수 있을 것이다.

상기 언급된 단계를 따름으로써, 처리된 식물, 식물 부분 및 수확된 과실 및 채소 상의 적어도 1종의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제의 잔류물의 매우 낮은 수준이 달성될 수 있다.

달리 언급되지 않는 한, 본 발명에 따른 조성물을 사용한 식물 또는 식물 부분 (이는 종자 및 종자로부터 출아한 식물을 포함함), 수확된 과실 및 채소의 처리는 통상의 처리 방법, 예를 들어 침지, 분무, 분무화, 관개, 증발, 살분, 연무, 산포, 발포, 도장, 전착, 살수 (드렌칭), 적하 관개를 사용하여 직접적으로 수행되거나 그의 주위, 서식지 또는 저장 공간에 대한 작업에 의해 수행된다. 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포, 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제, 및 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제를 단독-제제 또는 조합-제제로서 초저부피 방법에 의해 적용하거나, 또는 본 발명에 따른 조성물을 조성물로서 또는 단독-제제로서 토양 내로 (고랑에) 주입하는 것이 추가로 가능하다.

용어 "처리될 식물"은 각각 처리될 식물의 줄기 또는 경 주위의 적어도 10 cm, 20 cm, 30 cm 반경 내에 있거나 처리될 상기 식물의 뿌리계 주위의 적어도 10 cm, 20 cm, 30 cm에 있는, 뿌리계 및 물질 - 예를 들어, 토양 또는 영양 배지 - 를 포함한 식물의 모든 부분을 포괄한다.

임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제의 존재 하에, 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제와 조합되어 사용 또는 이용되는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포의 양은 최종 제제, 뿐만 아니라 처리될 식물, 식물 부분, 종자, 수확된 과실 및 채소의 크기 또는 유형에 좌우된다. 통상적으로, 본 발명에 따라 이용 또는 사용될 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포는 그의 단독-제제, 또는 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제 및 임의로 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제와의 조합-제제 중 약 1% 내지 약 80% (w/w), 바람직하게는 약 1% 내지 약 60% (w/w), 보다 바람직하게는 약 10% 내지 약 50% (w/w)로 존재한다.

또한, 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제의 존재 하에, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포와 조합되어 사용 또는 이용되는 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제의 양은 최종 제제, 뿐만 아니라 처리될 식물, 식물 부분, 종자, 수확된 과실 또는 채소의 크기 또는 유형에 좌우된다. 통상적으로, 본 발명에 따라 이용 또는 사용될 특정한 살진균제는 그의 단독-제제, 또는 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제와의 조합-제제 중 약 0.1% 내지 약 80% (w/w), 바람직하게는 1% 내지 약 60% (w/w), 보다 바람직하게는 약 10% 내지 약 50% (w/w)로 존재한다.

재조합 포자외막-생산 바실루스 세포의 적용은 엽면 분무로서, 토양 처리로서, 및/또는 종자 처리/드레싱으로서 수행될 수 있다. 엽면 처리로서 사용되는 경우에, 한 실시양태에서 에이커당 약 1/16 내지 약 5 갤런의 전체 브로쓰가 적용된다. 토양 처리로서 사용되는 경우에, 한 실시양태에서 에이커당 약 1 내지 약 5 갤런의 전체 브로쓰가 적용된다. 종자 처리를 위해 사용되는 경우에, 에이커당 약 1/32 내지 약 1/4 갤런의 전체 브로쓰가 적용된다. 종자 처리의 경우, 최종-사용 제제는 그램당 적어도 1 x 10 ⁴ , 적어도 1 x 10 ⁵ , 적어도 1 x 10 ⁶ , 1 x 10 ⁷ , 적어도 1 x 10 ⁸ , 적어도 1 x 10 ⁹ , 적어도 1 x 10 ¹⁰ 콜로니 형성 단위를 함유한다.

재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제, 및 존재하는 경우에 바람직하게는 또한 추가의 살진균제 및/또는 살곤충제가 상승작용적 중량비로 사용 또는 이용된다. 통상의 기술자는 본 발명에 대한 상승작용적 중량비를 상용 방법에 의해 찾아낼 수 있다. 통상의 기술자는 이들 비가 조합-제제 내의 비, 뿐만 아니라 본원에 기재된 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제가 처리될 식물에 단일-제제로서 적용되는 경우에 두 성분의 계산상 비를 지칭한다는 것을 이해한다. 단일-제제 중 각각 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 적어도 1종의 특정한 살진균제의 부피 및 양이 통상의 기술자에게 공지되어 있기 때문에, 통상의 기술자는 상기 비를 간단한 수학에 의해 계산할 수 있다.

비는 본 발명에 따른 조합의 상기 성분을 식물 또는 식물 부분에 적용하는 시점에서의 적어도 1종의 특정한 살진균제의 양, 및 본 발명에 따른 조합의 상기 성분을 식물 또는 식물 부분에 적용하기 직전 (예를 들어, 48시간, 24시간, 12시간, 6시간, 2시간, 1시간 전) 또는 그 시점에서의 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포의 양을 기준으로 하여 계산될 수 있다.

재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제의 식물 또는 식물 부분에의 적용은, 둘 다의 성분이 적용(들) 후 식물 상에 또는 그 내에 존재하는 한 동시에 또는 상이한 시간에 수행될 수 있다. 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 특정한 살진균제가 상이한 시간에 적용되고 본원에 개시된 특정한 살진균제가 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 전에 적용되는 경우에, 통상의 기술자는 식물 상/내 살진균제의 농도를 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포를 적용하는 시점에 또는 그 직전에 관련 기술분야에 공지된 화학적 분석에 의해 결정할 수 있다. 그 반대의 경우, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포가 먼저 식물에 적용되는 경우에, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포의 농도는 살진균제를 적용하는 시점에 또는 그 직전에 관련 기술분야에 또한 공지된 시험을 사용하여 결정될 수 있다.

특히, 한 실시양태에서 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제의 상승작용적 중량비는 1:1000 내지 1000:1의 범위, 바람직하게는 1:500 내지 500:1의 범위, 보다 바람직하게는 1:300 내지 500:1의 범위 내에 있다. 특히 바람직한 비는 20:1 내지 1:20, 예컨대 10:1, 5:1 또는 2:1이다. 이들 비 범위는 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원-기재 생물학적 방제제 (본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제 또는 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제 제제와 조합됨)를 지칭한다는 것이 주목되어야 한다. 예를 들어, 100:1의 비는 재조합 포자외막-생산 바실루스-기재 생물학적 방제제의 포자 제제 100 중량부 및 본원에 개시된 특정한 살진균제 1 중량부가 조합된다는 것 (단독 제제로서, 조합 제제로서, 또는 식물 상에 조합이 형성되도록 하는 식물에의 개별 적용에 의해)을 의미한다. 이러한 실시양태의 한 측면에서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포의 포자 제제는 적어도 약 1 x 10 ⁴ cfu/g, 적어도 약 1 x 10 ⁵ cfu/g, 적어도 약 1 x 10 ⁶ cfu/g, 적어도 약 1 x 10 ⁷ cfu/g, 적어도 약 1 x 10 ⁸ cfu/g, 적어도 약 1 x 10 ⁹ cfu/g, 적어도 약 1 x 10 ¹⁰ cfu/g, 또는 적어도 약 1 x 10 ¹¹ cfu/g을 함유하는 건조 포자 제제이다.

또 다른 실시양태에서, 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제의 상승작용적 중량비는 1:100 내지 20,000:1의 범위, 바람직하게는 1:50 내지 10,000:1의 범위 또는 심지어 1:50 내지 1000:1의 범위 내에 있다.

본 발명의 한 실시양태에서, 분산 후에 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포의 농도는 적어도 50 g/ha, 예컨대 50 - 7500 g/ha, 50 - 2500 g/ha, 50 - 1500 g/ha; 적어도 250 g/ha (헥타르), 적어도 500 g/ha 또는 적어도 800 g/ha이다.

본 발명에 따라 이용 또는 사용될 조성물의 적용률은 달라질 수 있다. 통상의 기술자는 적절한 적용률을 상용 실험에 의해 찾을 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면에서 상기 기재된 바와 같은 조성물로 처리된 종자가 제공된다.

식물의 종자를 처리하는 것에 의한 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체의 방제는 오랜 시간 동안 공지되어 왔으며, 계속적인 개선 대상이다. 그럼에도 불구하고, 종자의 처리는 항상 만족스러운 방식으로 해결될 수 있는 것은 아닌 일련의 문제를 수반한다. 따라서, 저장 도중에, 파종 후에 또는 식물의 출아 후에 작물 보호 조성물의 추가의 전달에 대한 필요성을 제거하거나 그를 적어도 유의하게 감소시키는, 종자 및 발아 식물을 보호하는 방법을 개발하는 것이 바람직하다. 추가로, 사용되는 활성 성분의 양을, 사용되는 활성 성분에 의한 식물 자체에 대한 손상을 유발하지 않으면서도 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 의한 공격으로부터 종자 및 발아 식물에 대해 가능한 한 최고의 보호를 제공하도록 하는 방식으로 최적화하는 것이 바람직하다. 특히, 종자를 처리하는 방법은 또한 종자 및 발아 식물의 최적 보호를 작물 보호 조성물의 최소 사용으로 달성하기 위해, 해충-저항성 또는 해충-내성 트랜스제닉 식물의 고유 살곤충 및/또는 살선충 특성을 고려해야 한다.

따라서, 본 발명은 또한 특히, 종자를 상기 정의된 바와 같은 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제를 상승작용적 유효량으로 처리함으로써, 종자 및 발아 식물을 해충에 의한 공격으로부터 보호하는 방법에 관한 것이다. 종자 및 발아 식물을 해충에 의한 공격으로부터 보호하기 위한 본 발명의 방법은 종자를 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제, 및 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제로 동시에 1회 작업으로 처리하는 방법을 포괄한다. 그것은 또한 종자를 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제, 및 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제로 상이한 시간에 처리하는 방법을 포괄한다.

본 발명은 마찬가지로 종자 및 생성된 식물을 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체에 대해 보호하려는 목적으로 종자를 처리하기 위한 본 발명의 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제, 및 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제로 동시에 처리된 종자에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제, 및 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제로 상이한 시간에 처리된 종자에 관한 것이다. 재조합 포자외막-생산 바실루스 세포 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제, 및 임의로 적어도 1종의 추가의 살진균제 및/또는 적어도 1종의 살곤충제로 상이한 시간에 처리된 종자의 경우에, 본 발명의 조성물 중 개별 활성 성분은 종자 상의 상이한 층에 존재할 수 있다.

추가로, 본 발명은 본 발명의 조성물로 처리한 후, 종자의 분진 마모를 방지하기 위해 필름-코팅 공정에 적용된 종자에 관한 것이다.

본 발명의 이점 중 하나는 본 발명의 조성물의 특정한 침투성 특성 때문에, 이들 조성물을 사용한 종자의 처리가 종자 자체, 뿐만 아니라 출아한 후 종자로부터 기원하는 식물에 대해 곤충, 응애, 선충류 및/또는 식물병원체로부터의 보호를 제공한다는 점이다. 이러한 방식으로, 파종 시에 또는 그 직후에 작물을 직접적으로 처리하는 것이 필요하지 않을 수 있다.

추가의 이점은 본 발명의 조성물을 사용한 종자의 처리를 통해 처리된 종자의 발아 및 출아가 촉진될 수 있다는 사실에서 나타난다.

마찬가지로, 본 발명의 유리한 조성물은 또한 특히 트랜스제닉 종자에 사용될 수 있는 것으로 간주된다.

또한, 본 발명의 조성물은 신호전달 기술의 작용제와 조합되어 사용될 수 있으며, 이는 결과적으로, 예를 들어 공생체와의 콜로니화를 개선시키고, 예컨대, 예를 들어 리조비아, 근균 및/또는 식내서성 박테리아를 증진시키고/거나 질소 고정화를 최적화시키는 것으로 제시된다.

본 발명의 조성물은 농업, 온실, 임업 또는 원예에서 사용되는 임의의 다양한 식물의 종자를 보호하는데 적합하다. 보다 특히, 해당 종자는 곡류 (예를 들어, 밀, 보리, 호밀, 귀리 및 기장), 메이즈, 목화, 대두, 벼, 감자, 해바라기, 커피, 담배, 카놀라, 유지종자 평지, 비트 (예를 들어, 사탕무 및 사료용 비트), 땅콩, 채소 (예를 들어, 토마토, 오이, 콩, 브라시카, 양파 및 상추), 과실 식물, 잔디 및 관상식물의 종자이다. 곡류 (예컨대, 밀, 보리, 호밀 및 귀리), 메이즈, 대두, 목화, 카놀라, 유지종자 평지 및 벼의 종자의 처리가 특히 중요하다.

상기에 이미 언급된 바와 같이, 본 발명의 조성물을 사용한 트랜스제닉 종자의 처리가 특히 중요하다. 여기서 해당 종자는 일반적으로 특히 살곤충 및/또는 살선충 특성을 갖는 폴리펩티드의 발현을 제어하는 적어도 1종의 이종 유전자를 함유하는 식물의 종자이다. 트랜스제닉 종자에서의 이들 이종 유전자는 미생물, 예컨대 바실루스( Bacillus ), 리조비움( Rhizobium ), 슈도모나스( Pseudomonas ), 세라티아( Serratia ), 트리코더마( Trichoderma ), 클라비박터( Clavibacter ), 글로무스( Glomus ) 또는 글리오클라디움( Gliocladium )으로부터 유래할 수 있다. 본 발명은 바실루스 종으로부터의 적어도 1종의 이종 유전자를 함유하는 트랜스제닉 종자의 처리에 특히 적합하다. 특히 바람직하게는, 해당 이종 유전자는 바실루스 투린기엔시스로부터 유래한다.

본 발명의 목적을 위해, 본 발명의 조성물은 종자에 단독으로 또는 적합한 제제로 적용된다. 종자는 바람직하게는 처리 도중에 손상이 일어나지 않을 정도로 안정성인 조건으로 처리된다. 일반적으로 말하면, 종자는 수확과 파종 사이의 시간 중 임의의 시점에 처리될 수 있다. 전형적으로, 식물로부터 분리하고, 속대, 겨, 줄기, 껍질, 털 또는 펄프를 제거한 종자가 사용된다. 따라서, 예를 들어 수확하고, 세정하고, 15 중량% 미만의 수분 함량으로 건조시킨 종자가 사용될 수 있다. 대안적으로, 건조 후에, 예를 들어 물로 처리한 다음, 다시 건조시킨 종자가 또한 사용될 수 있다.

종자를 처리하는 경우에는, 일반적으로 말하면, 종자에 적용되는 본 발명의 조성물 및/또는 다른 첨가제의 양을 종자의 발아에 부정적인 영향을 미치지 않고/거나 종자로부터 출아하는 식물을 손상시키지 않도록 선택하는 것을 보장하는 것이 필요하다. 이는 특정 적용률에서 식물독성 효과를 나타낼 수 있는 활성 성분의 경우에 특히 그러하다.

본 발명의 조성물은 직접적으로, 다시 말해서 추가의 성분을 포함하지 않고 희석되지 않으면서 적용될 수 있다. 일반적으로, 조성물을 적합한 제제 형태로 종자에 적용하는 것이 바람직하다. 종자 처리를 위한 적합한 제제 및 방법은 통상의 기술자에게 공지되어 있고, 예를 들어 하기 문헌에 기재되어 있다: 미국 특허 번호 4,272,417 A; 4,245,432 A; 4,808,430 A; 5,876,739 A; 미국 특허 공개 번호 2003/0176428 A1; WO 2002/080675 A1; WO 2002/028186 A2.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 조합은 통상적인 종자-드레싱 제제, 예컨대 용액, 에멀젼, 현탁액, 분말, 발포체, 슬러리 또는 종자를 위한 다른 코팅 조성물, 및 또한 ULV 제제로 전환될 수 있다.

이들 제제는 공지된 방식으로, 조성물을 통상의 아주반트, 예컨대, 예를 들어 통상의 증량제 및 또한 용매 또는 희석제, 착색제, 습윤제, 분산제, 유화제, 소포제, 보존제, 2차 증점제, 점착제, 지베렐린 및 또한 물과 혼합함으로써 제조된다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 착색제는 이러한 목적에 통상적인 모든 착색제를 포함한다. 이러한 문맥에서, 물 중에서 낮은 용해도를 갖는 안료, 뿐만 아니라 수용성 염료를 사용하는 것이 가능하다. 예는 명칭 로다민 B, CI 피그먼트 레드 112 및 CI 솔벤트 레드 1 하에 공지된 착색제를 포함한다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 습윤제는 습윤을 촉진하고, 활성 농약 성분의 제제에 통상적인 모든 물질을 포함한다. 바람직하게는 알킬나프탈렌술포네이트, 예컨대 디이소프로필- 또는 디이소부틸-나프탈렌술포네이트가 사용될 수 있다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 분산제 및/또는 유화제는 활성 농약 성분의 제제에 통상적인 모든 비이온성, 음이온성 및 양이온성 분산제를 포함한다. 바람직하게는 비이온성 또는 음이온성 분산제, 또는 비이온성 또는 음이온성 분산제의 혼합물이 사용될 수 있다. 적합한 비이온성 분산제는 특히 에틸렌 옥시드-프로필렌 옥시드 블록 중합체, 알킬페놀 폴리글리콜 에테르 및 또한 트리스티릴페놀 폴리글리콜 에테르, 및 이들의 인산화 또는 황산화 유도체이다. 적합한 음이온성 분산제는 특히 리그노술포네이트, 폴리아크릴산의 염 및 아릴술포네이트-포름알데히드 축합물이다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 소포제는 활성 농약 성분의 제제에 통상적인 모든 발포 억제제를 포함한다. 바람직하게는 실리콘 소포제 및 스테아르산마그네슘이 사용될 수 있다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 보존제는 농약 조성물에서 이러한 목적을 위해 사용될 수 있는 모든 물질을 포함한다. 예는 디클로로펜 및 벤질 알콜 헤미포르말을 포함한다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 2차 증점제는 농약 조성물에서 이러한 목적을 위해 사용될 수 있는 모든 물질을 포함한다. 바람직하게 간주되는 것은 셀룰로스 유도체, 아크릴산 유도체, 크산탄, 개질 점토 및 고분산 실리카를 포함한다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 점착제는 종자-드레싱 제품에 사용될 수 있는 모든 통상의 결합제를 포함한다. 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐 아세테이트, 폴리비닐 알콜 및 틸로스가 바람직하게 언급될 수 있다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 중에 존재할 수 있는 지베렐린은 바람직하게는 지베렐린 A1, A3 (= 지베렐산), A4 및 A7을 포함하며, 지베렐산이 특히 바람직하게 사용된다. 지베렐린은 공지되어 있다 (문헌 [R. Wegler, "Chemie der Pflanzenschutz- und Schaedlingsbekaempfungsmittel", Volume 2, Springer Verlag, 1970, pp. 401-412] 참조).

본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제는 임의의 매우 다양한 유형의 종자를 처리하기 위해 직접적으로 또는 물로 사전 희석한 후에 사용될 수 있다. 따라서, 농축물 또는 물로의 희석에 의해 그로부터 수득가능한 제제는 곡류, 예컨대 밀, 보리, 호밀, 귀리 및 트리티케일의 종자, 및 또한 메이즈, 벼, 유지종자 평지, 완두, 콩, 목화, 해바라기 및 비트의 종자, 또는 임의의 매우 다양한 채소의 종자를 드레싱하는데 사용될 수 있다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 또는 그의 희석 제제는 또한 트랜스제닉 식물의 종자를 드레싱하는데 사용될 수 있다. 이러한 경우에, 추가의 상승작용적 효과가 발현을 통해 형성된 물질과 상호작용하여 일어날 수 있다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제 또는 물의 첨가에 의해 그로부터 생산된 제제를 사용한 종자의 처리를 위해, 적합한 혼합 장비는 종자 드레싱을 위해 전형적으로 사용될 수 있는 모든 이러한 장비를 포함한다. 보다 특히, 종자 드레싱을 수행하는 경우의 절차는 종자를 혼합기에 넣고, 특정한 목적하는 양의 종자-드레싱 제제를 그 자체로 또는 사전에 물로 희석한 후에 첨가하고, 종자에 대한 제제의 분포가 균일해질 때까지 혼합을 수행하는 것이다. 이 후에 건조 작업이 이어질 수 있다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는 종자-드레싱 제제의 적용률은 상대적으로 넓은 범위 내에서 달라질 수 있다. 그것은 제제 중 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원-기재 생물학적 방제제 및 본원에 개시된 적어도 1종의 특정한 살진균제의 특정한 양에 의해 및 종자에 의해 안내된다. 조성물의 경우에 적용률은 일반적으로 종자 킬로그램당 0.001 내지 50 g, 바람직하게는 종자 킬로그램당 0.01 내지 15 g으로 고려된다.

추가로, 본 발명에 따른 조성물은 바람직하게는 강력한 살미생물 활성을 갖고, 작물 보호 및 물질의 보호에서 원치않는 미생물, 예컨대 진균 및 박테리아의 방제를 위해 사용될 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명의 조성물을 식물병원성 진균, 식물병원성 박테리아 및/또는 그의 서식지에 적용하는 것을 특징으로 하는, 원치않는 미생물을 방제하는 방법에 관한 것이다.

살진균제는 식물병원성 진균의 방제를 위한 작물 보호에 사용될 수 있다. 그들은 특히 플라스모디오포로미세테스( Plasmodiophoromycetes ), 페로노스포로미세테스( Peronosporomycetes ) (동의어 난균류( Oomycetes )), 키트리디오미세테스( Chytridiomycetes ), 지고미세테스( Zygomycetes ), 자낭균류( Ascomycetes ), 담자균류( Basidiomycetes ) 및 듀테로미세테스( Deuteromycetes ) (동의어 불완전 균류( Fungi imperfecti )) 부류의 구성원인, 토양 매개 병원체를 포함한 광범위한 스펙트럼의 식물병원성 진균에 대해 탁월한 효능을 특징으로 한다. 일부 살진균제는 침투성 활성이고, 식물 보호에서 엽면, 종자 드레싱 또는 토양 살진균제로서 사용될 수 있다. 추가로, 그들은 특히 목재 또는 식물의 뿌리에 침입하는 진균을 퇴치하는데 적합하다.

살박테리아제는 슈도모나다세아에( Pseudomonadaceae ), 리조비아세아에( Rhizobiaceae ), 엔테로박테리아세아에( Enterobacteriaceae ), 코리네박테리아세아에( Corynebacteriaceae ) 및 스트렙토미세타세아에( Streptomycetaceae )의 방제를 위한 작물 보호에 사용될 수 있다.

본 발명에 따라 처리될 수 있는 진균성 질병의 병원체의 비제한적 예는 다음을 포함한다:

흰가루병 병원체, 예를 들어 블루메리아( Blumeria ) 종, 예를 들어 블루메리아 그라미니스( Blumeria graminis ); 포도스파에라( Podosphaera ) 종, 예를 들어 포도스파에라 류코트리카( Podosphaera leucotricha ); 스파에로테카( Sphaerotheca ) 종, 예를 들어 스파에로테카 풀리기네아( Sphaerotheca fuliginea ); 운시눌라( Uncinula ) 종, 예를 들어 운시눌라 네카토르( Uncinula necator )에 의해 유발된 질병;

녹병 병원체, 예를 들어 김노스포란기움( Gymnosporangium ) 종, 예를 들어 김노스포란기움 사비나에( Gymnosporangium sabinae ); 헤밀레이아( Hemileia ) 종, 예를 들어 헤밀레이아 바스타트릭스( Hemileia vastatrix ); 파코프소라( Phakopsora ) 종, 예를 들어 파코프소라 파키리지( Phakopsora pachyrhizi ) 및 파코프소라 메이보미아에( Phakopsora meibomiae ); 푹시니아( Puccinia ) 종, 예를 푹시니아 레콘디테( Puccinia recondite ), 피. 트리티시나( P. triticina ), 피. 그라미니스( P. graminis ) 또는 피. 스트리이포르미스( P. striiformis ) 또는 피. 호르데이( P. hordei ); 우로미세스( Uromyces ) 종, 예를 들어 우로미세스 아펜디쿨라투스( Uromyces appendiculatus )에 의해 유발된 질병;

난균류, 예를 들어 알부고( Albugo ) 종, 예를 들어 알부고 칸디다( Albugo candida ); 브레미아( Bremia ) 종, 예를 들어 브레미아 락투카에( Bremia lactucae ); 페로노스포라( Peronospora ) 종, 예를 들어 페로노스포라 피시( Peronospora pisi ), 피. 파라시티카( P. parasitica ) 또는 피. 브라시카에( P. brassicae ); 피토프토라( Phytophthora ) 종, 예를 들어 피토프토라 인페스탄스( Phytophthora infestans ); 플라스모파라( Plasmopara ) 종, 예를 들어 플라스모파라 비티콜라( Plasmopara viticola ); 슈도페로노스포라( Pseudoperonospora ) 종, 예를 들어 슈도페로노스포라 휴물리( Pseudoperonospora humuli ) 또는 슈도페로노스포라 쿠벤시스( Pseudoperonospora cubensis ); 피티움( Pythium ) 종, 예를 들어 피티움 울티뭄( Pythium ultimum )의 군으로부터의 병원체에 의해 유발된 질병;

예를 들어, 알테르나리아( Alternaria ) 종, 예를 들어 알테르나리아 솔라니( Alternaria solani ); 세르코스포라( Cercospora ) 종, 예를 들어 세르코스포라 베티콜라( Cercospora beticola ); 클라디오스포리움( Cladiosporium ) 종, 예를 들어 클라디오스포리움 쿠쿠메리눔( Cladiosporium cucumerinum ); 코클리오볼루스( Cochliobolus ) 종, 예를 들어 코클리오볼루스 사티부스( Cochliobolus sativus ) (분생포자 형태: 드레크슬레라( Drechslera ), 동의어: 헬민토스포리움( Helminthosporium )), 코클리오볼루스 미야베아누스( Cochliobolus miyabeanus ); 콜레토트리쿰( Colletotrichum ) 종, 예를 들어 콜레토트리쿰 린데무타니움( Colletotrichum lindemuthanium ); 시클로코니움( Cycloconium ) 종, 예를 들어 시클로코니움 올레아기눔( Cycloconium oleaginum ); 디아포르테( Diaporthe ) 종, 예를 들어 디아포르테 시트리( Diaporthe citri ); 엘시노에( Elsinoe ) 종, 예를 들어 엘시노에 파우세티이( Elsinoe fawcettii ); 글로에오스포리움( Gloeosporium ) 종, 예를 들어 글로에오스포리움 라에티콜로르( Gloeosporium laeticolor ); 글로메렐라( Glomerella ) 종, 예를 들어 글로메렐라 신굴라타( Glomerella cingulata ); 구이그나르디아( Guignardia ) 종, 예를 들어 구이그나르디아 비드웰리( Guignardia bidwelli ); 렙토스파에리아( Leptosphaeria ) 종, 예를 들어 렙토스파에리아 마쿨란스( Leptosphaeria maculans ), 렙토스파에리아 노도룸( Leptosphaeria nodorum ); 마그나포르테( Magnaporthe ) 종, 예를 들어 마그나포르테 그리세아( Magnaporthe grisea ); 미크로도키움( Microdochium ) 종, 예를 들어 미크로도키움 니발레( Microdochium nivale ); 미코스파에렐라( Mycosphaerella ) 종, 예를 들어 미코스파에렐라 그라미니콜라( Mycosphaerella graminicola ), 엠. 아라키디콜라( M. arachidicola ) 및 엠. 피지엔시스( M. fijiensis ); 파에오스파에리아( Phaeosphaeria ) 종, 예를 들어 파에오스파에리아 노도룸( Phaeosphaeria nodorum ); 피레노포라( Pyrenophora ) 종, 예를 들어 피레노포라 테레스( Pyrenophora teres ), 피레노포라 트리티시 레펜티스( Pyrenophora tritici repentis ); 라물라리아( Ramularia ) 종, 예를 들어 라물라리아 콜로-시그니( Ramularia collo-cygni ), 라물라리아 아레올라( Ramularia areola ); 린코스포리움( Rhynchosporium ) 종, 예를 들어 린코스포리움 세칼리스( Rhynchosporium secalis ); 세프토리아( Septoria ) 종, 예를 들어 세프토리아 아피이( Septoria apii ), 세프토리아 리코페르시이( Septoria lycopersii ); 티풀라( Typhula ) 종, 예를 들어 티풀라 인카르나타( Typhula incarnata ); 벤투리아( Venturia ) 종, 예를 들어 벤투리아 이나에쿠알리스( Venturia inaequalis )에 의해 유발된 잎무늬병 및 잎시들음병;

예를 들어, 코르티시움( Corticium ) 종, 예를 들어 코르티시움 그라미네아룸( Corticium graminearum ); 푸사리움( Fusarium ) 종, 예를 들어 푸사리움 옥시스포룸( Fusarium oxysporum ); 가에우만노미세스( Gaeumannomyces ) 종, 예를 들어 가에우만노미세스 그라미니스( Gaeumannomyces graminis ); 리족토니아( Rhizoctonia ) 종, 예컨대, 예를 들어 리족토니아 솔라니( Rhizoctonia solani )에 의해 유발된 뿌리 및 줄기병; 예를 들어 사로클라디움 오리자에( Sarocladium oryzae )에 의해 유발된 사로클라디움( Sarocladium ) 질병; 예를 들어 스클레로티움 오리자에( Sclerotium oryzae ); 타페시아( Tapesia ) 종, 예를 들어 타페시아 아쿠포르미스( Tapesia acuformis ); 티엘라비옵시스( Thielaviopsis ) 종, 예를 들어 티엘라비옵시스 바시콜라( Thielaviopsis basicola )에 의해 유발된 스클레로티움( Sclerotium ) 질병;

예를 들어, 알테르나리아( Alternaria ) 종, 예를 들어 알테르나리아 종; 아스페르길루스( Aspergillus ) 종, 예를 들어 아스페르길루스 플라부스( Aspergillus flavus ); 클라도스포리움( Cladosporium ) 종, 예를 들어 클라도스포리움 클라도스포리오이데스( Cladosporium cladosporioides ); 클라비셉스( Claviceps ) 종, 예를 들어 클라비셉스 푸르푸레아( Claviceps purpurea ); 푸사리움( Fusarium ) 종, 예를 들어 푸사리움 쿨모룸( Fusarium culmorum ); 지베렐라( Gibberella ) 종, 예를 들어 지베렐라 제아에( Gibberella zeae ); 모노그라펠라( Monographella ) 종, 예를 들어 모노그라펠라 니발리스( Monographella nivalis ); 세프토리아( Septoria ) 종, 예를 들어 세프토리아 노도룸( Septoria nodorum )에 의해 유발된 이삭 및 원추화서 질병 (옥수수 속대를 포함함);

깜부기병 진균, 예를 들어 스파셀로테카( Sphacelotheca ) 종, 예를 들어 스파셀로테카 레일리아나( Sphacelotheca reiliana ); 틸레티아( Tilletia ) 종, 예를 들어 틸레티아 카리에스( Tilletia caries ), 티. 콘트로베르사( T. controversa ); 우로시스티스( Urocystis ) 종, 예를 들어 우로시스티스 오쿨타( Urocystis occulta ); 우스틸라고( Ustilago ) 종, 예를 들어 우스틸라고 누다( Ustilago nuda ), 유. 누다 트리티시(U. nuda tritici)에 의해 유발된 질병;

예를 들어, 아스페르길루스( Aspergillus ) 종, 예를 들어 아스페르길루스 플라부스( Aspergillus flavus ); 보트리티스( Botrytis ) 종, 예를 들어 보트리티스 시네레아( Botrytis cinerea ); 페니실리움( Penicillium ) 종, 예를 들어 페니실리움 엑스판숨( Penicillium expansum ) 및 피. 푸르푸로게눔( P. purpurogenum ); 스클레로티니아( Sclerotinia ) 종, 예를 들어 스클레로티니아 스클레로티오룸( Sclerotinia sclerotiorum ); 베르티실리움( Verticilium ) 종, 예를 들어 베르티실리움 알보아트룸( Verticilium alboatrum )에 의해 유발된 과실썩음병;

예를 들어, 알테르나리아( Alternaria ) 종에 의해 유발된, 예를 들어 알테르나리아 브라시시콜라( Alternaria brassicicola )에 의해 유발된; 아파노미세스( Aphanomyces ) 종, 예를 들어 아파노미세스 에우테이케스( Aphanomyces euteiches )에 의해 유발된; 아스코키타( Ascochyta ) 종, 예를 들어 아스코키타 렌티스( Ascochyta lentis )에 의해 유발된; 아스페르길루스( Aspergillus ) 종, 예를 들어 아스페르길루스 플라부스( Aspergillus flavus )에 의해 유발된; 클라도스포리움( Cladosporium ) 종, 예를 들어 클라도스포리움 헤르바룸( Cladosporium herbarum )에 의해 유발된; 코클리오볼루스( Cochliobolus ) 종, 예를 들어 코클리오볼루스 사티부스( Cochliobolus sativus )에 의해 유발된; (분생포자 형태: 드레크슬레라( Drechslera ), 비폴라리스( Bipolaris ) 동의어: 헬민토스포리움( Helminthosporium )); 콜레토트리쿰( Colletotrichum ) 종, 예를 들어 콜레토트리쿰 콕코데스( Colletotrichum coccodes )에 의해 유발된; 푸사리움( Fusarium ) 종, 예를 들어 푸사리움 쿨모룸( Fusarium culmorum )에 의해 유발된; 지베렐라 ( Gibberella ) 종, 예를 들어 지베렐라 제아에( Gibberella zeae )에 의해 유발된; 마크로포미나( Macrophomina ) 종, 예를 들어 마크로포미나 파세올리나( Macrophomina phaseolina )에 의해 유발된; 모노그라펠라( Monographella ) 종, 예를 들어 모노그라펠라 니발리스( Monographella nivalis )에 의해 유발된; 페니실리움( Penicillium ) 종, 예를 들어 페니실리움 엑스판숨( Penicillium expansum )에 의해 유발된; 포마( Phoma ) 종, 예를 들어 포마 린감( Phoma lingam )에 의해 유발된; 포몹시스( Phomopsis ) 종, 예를 들어 포몹시스 소자에( Phomopsis sojae )에 의해 유발된; 피토프토라( Phytophthora ) 종, 예를 들어 피토프토라 칵토룸( Phytophthora cactorum )에 의해 유발된; 피레노포라( Pyrenophora ) 종, 예를 들어 피레노포라 그라미네아( Pyrenophora graminea )에 의해 유발된; 피리쿨라리아( Pyricularia ) 종, 예를 들어 피리쿨라리아 오리자에( Pyricularia oryzae )에 의해 유발된; 피티움( Pythium ) 종, 예를 들어 피티움 울티뭄( Pythium ultimum )에 의해 유발된; 리족토니아( Rhizoctonia ) 종, 예를 들어 리족토니아 솔라니( Rhizoctonia solani )에 의해 유발된; 리조푸스( Rhizopus ) 종, 예를 들어 리조푸스 오리자에( Rhizopus oryzae )에 의해 유발된; 스클레로티움( Sclerotium ) 종, 예를 들어 스클레로티움 롤프시이( Sclerotium rolfsii )에 의해 유발된; 세프토리아( Septoria ) 종, 예를 들어 세프토리아 노도룸( Septoria nodorum )에 의해 유발된; 티풀라( Typhula ) 종, 예를 들어 티풀라 인카르나타( Typhula incarnata )에 의해 유발된; 베르티실리움( Verticillium ) 종, 예를 들어 베르티실리움 달리아에( Verticillium dahliae )에 의해 유발된 종자 및 토양 매개 부패병, 곰팡이병, 시들음병, 썩음병 및 모잘록병;

예를 들어, 넥트리아( Nectria ) 종, 예를 들어 넥트리아 갈리게나( Nectria galligena )에 의해 유발된 암, 벌레혹 및 빗자루병;

예를 들어, 모닐리니아( Monilinia ) 종, 예를 들어 모닐리니아 락사( Monilinia laxa )에 의해 유발된 시들음병;

예를 들어 엑소바시디움( Exobasidium ) 종, 예를 들어 엑소바시디움 벡산스( Exobasidium vexans )에 의해 유발된 잎수포병 또는 잎말림병;

타프리나( Taphrina ) 종, 예를 들어 타프리나 데포르만스( Taphrina deformans );

예를 들어 파에모니엘라 클라미도스포라( Phaemoniella clamydospora ), 파에오아크레모니움 알레오필룸( Phaeoacremonium aleophilum ) 및 포미티포리아 메디테라네아( Fomitiporia mediterranea )에 의해 유발된, 예를 들어 에스카( Esca ) 질병; 예를 들어 유티파 라타( Eutypa lata )에 의해 유발된 유티파( Eutypa ) 가지마름병; 예를 들어 가노더마 보니넨세( Ganoderma boninense )에 의해 유발된 가노더마( Ganoderma ) 질병; 예를 들어 리기도포루스 리그노수스( Rigidoporus lignosus )에 의해 유발된 리기도포루스( Rigidoporus ) 질병에 의해 유발된 목본 식물의 쇠퇴병;

예를 들어, 보트리티스( Botrytis ) 종, 예를 들어 보트리티스 시네레아( Botrytis cinerea )에 의해 유발된 꽃 및 종자의 질병;

예를 들어, 리족토니아( Rhizoctonia ) 종, 예를 들어 리족토니아 솔라니( Rhizoctonia solani ); 헬민토스포리움( Helminthosporium ) 종, 예를 들어 헬민토스포리움 솔라니( Helminthosporium solani )에 의해 유발된 식물 괴경의 질병;

예를 들어, 플라스모디오포라( Plasmodiophora ) 종, 예를 들어 플라모디오포라 브라시카에( Plamodiophora brassicae )에 의해 유발된 뿌리혹병;

박테리아 병원체, 예를 들어 크산토모나스( Xanthomonas ) 종, 예를 들어 크산토모나스 캄페스트리스 병원체변종 오리자에( Xanthomonas campestris pv. oryzae ); 슈도모나스( Pseudomonas ) 종, 예를 들어 슈도모나스 시린가에 병원체변종 라크리만스( Pseudomonas syringae pv. lachrymans ); 에르위니아( Erwinia ) 종, 예를 들어 에르위니아 아밀로보라( Erwinia amylovora )에 의해 유발된 질병.

하기 대두의 질병이 바람직하게 방제될 수 있다:

예를 들어, 알테르나리아( Alternaria ) 점무늬병 (알테르나리아 종 아트란스 테누이시마( Alternaria spec. atrans tenuissima )), 탄저병 (콜레토트리쿰 글로에오스포로이데스 데마티움 변종 트룬카툼( Colletotrichum gloeosporoides dematium var. truncatum )), 갈색점무늬병 (세프토리아 글리시네스( Septoria glycines )), 세르코스포라 점무늬병 및 마름병 (세르코스포라 키쿠키이( Cercospora kikuchii )), 코아네포라 잎마름병 (코아네포라 인푼디불리페라 트리스포라( Choanephora infundibulifera trispora ) (동의어)), 닥툴리오포라 점무늬병 (닥툴리오포라 글리시네스( Dactuliophora glycines )), 노균병 (페로노스포라 만슈리카( Peronospora manshurica )), 드레크슬레라 마름병 (드레크슬레라 글리시니( Drechslera glycini )), 콩점무늬병 (세르코스포라 소지나( Cercospora sojina )), 레프토스파에룰리나 점무늬병 (레프토스 파에룰리나 트리폴리이( Leptosphaerulina trifolii )), 필로스티카 점무늬병 (필로스티카 소자에콜라( Phyllosticta sojaecola )), 흑점병 (포몹시스 소자에( Phomopsis sojae )), 흰가루병 (미크로스파에라 디푸사( Microsphaera diffusa )), 피레노카에타 점무늬병 (피레노카에타 글리시네스( Pyrenochaeta glycines )), 리족토니아 지상부, 잎 및 거미줄 마름병 (리족토니아 솔라니( Rhizoctonia solani )), 녹병 (파코프소라 파키리지( Phakopsora pachyrhizi ), 파코프소라 메이보미아에( Phakopsora meibomiae )), 흑성병 (스파셀로마 글리시네스( Sphaceloma glycines )), 스템필리움 잎마름병 (스템필리움 보트리오숨( Stemphylium botryosum )), 갈색무늬병 (코리네스포라 카시이콜라( Corynespora cassiicola ))에 의해 유발된 잎, 줄기, 꼬투리 및 종자 상의 진균성 질병.

예를 들어, 검은뿌리썩음병 (칼로넥트리아 크로탈라리아에( Calonectria crotalariae )), 검은썩음병 (마크로포미나 파세올리나( Macrophomina phaseolina )), 푸사리움 마름병 또는 시들음병, 뿌리썩음병 및 꼬투리 및 지제부 썩음병 (푸사리움 옥시스포룸( Fusarium oxysporum ), 푸사리움 오르토세라스( Fusarium orthoceras ), 푸사리움 세미텍툼( Fusarium semitectum ), 푸사리움 에퀴세티( Fusarium equiseti )), 미콜렙토디스쿠스 뿌리썩음병 (미콜렙토디스쿠스 테레스트리스( Mycoleptodiscus terrestris )), 네오코스모스포라 (네오코스모스포라 바신펙타( Neocosmospora vasinfecta )), 흑점병 (디아포르테 파세올로룸( Diaporthe phaseolorum )), 줄기 동고병 (디아포르테 파세올로룸 변종 카울리보라( Diaporthe phaseolorum var. caulivora )), 피토프토라 썩음병 (피토프토라 메가스페르마( Phytophthora megasperma )), 갈색줄기썩� �병 (피알로포라 그레가타( Phialophora gregata )), 피티움 썩음병 (피티움 아파니더마툼( Pythium aphanidermatum ), 피티움 이레굴라레( Pythium irregulare ), 피티움 데바리아눔( Pythium debaryanum ), 피티움 미리오틸룸( Pythium myriotylum ), 피티움 울티뭄( Pythium ultimum )), 리족토니아 뿌리썩음병, 줄기부패병, 및 모잘록병 (리족토니아 솔라니( Rhizoctonia solani )), 스클레로티니아 줄기부패병 (스클레로티니아 스클레로티오룸( Sclerotinia sclerotiorum )), 스클레로티니아 백견병 (스클레로티니아 롤프시이( Sclerotinia rolfsii )), 티엘라비옵시스 뿌리썩음병 (티엘라비옵시스 바시콜라( Thielaviopsis basicola ))에 의해 유발된 뿌리 및 간기 상의 진균성 질병.

본 발명의 조성물은 식물병원성 진균의 치유적 또는 보호적/방지적 방제를 위해 사용될 수 있다. 본 발명은 따라서 또한 종자, 식물 또는 식물 부분, 과실 또는 식물이 성장하는 토양에 적용되는 본 발명의 조성물의 사용에 의해 식물병원성 진균을 방제하기 위한 치유적 및 보호적 방법에 관한 것이다.

조성물이 식물 질병을 방제하는데 요구되는 농도에서 식물에 의해 잘 허용된다는 사실은 식물의 지상 부분, 번식 스톡 및 종자, 및 토양의 처리를 가능하게 한다.

본 발명에 따라 모든 식물 및 식물 부분이 처리될 수 있다. 식물은 모든 식물 및 식물 집단, 예컨대 바람직한 및 바람직하지 않은 야생 식물, 재배품종 및 식물 품종 (식물 품종 또는 식물 육종가의 권리에 의해 보호가능한지 여부와 상관 없이)을 의미한다. 재배품종 및 식물 품종은 1종 이상의 생명공학적 방법, 예컨대 이중 반수체, 원형질체 융합, 무작위 및 지정 돌연변이유발, 분자 또는 유전자 마커의 사용에 의해 또는 생체공학 및 유전 공학 방법에 의해 보조 또는 보충될 수 있는 통상적인 번식 및 육종 방법에 의해 수득된 식물일 수 있다. 식물 부분은 식물의 모든 지상 및 지하 부분 및 기관, 예컨대 싹, 잎, 꽃 및 뿌리를 의미하며, 이에 의해 예를 들어 잎, 가시, 줄기, 가지, 꽃, 자실체, 과실 및 종자, 뿐만 아니라 뿌리, 구경 및 근경이 열거된다. 작물 및 영양 및 생식 번식 물질, 예를 들어 삽목, 구경, 근경, 포복경 및 종자가 또한 식물 부분에 속한다.

본 발명의 조성물은, 식물에 의해 잘 허용되고 유리한 항온동물 독성을 가지며 환경에 의해 잘 허용되는 경우에, 식물 및 식물 기관을 보호하고, 수확량을 증진시키고, 수확된 물질의 품질을 개선시키는데 적합하다. 그것은 바람직하게는 작물 보호 조성물로서 사용될 수 있다. 그것은 통상적으로 감수성이고 저항성인 종에 대해, 및 모든 또는 일부 발달 단계에 대해 활성이다.

본 발명에 따라 처리될 수 있는 식물은 하기 주요 작물 식물을 포함한다: 메이즈, 대두, 알팔파, 목화, 해바라기, 브라시카( Brassica ) 오일 종자, 예컨대 브라시카 나푸스( Brassica napus ) (예를 들어 카놀라, 평지씨), 브라시카 라파( Brassica rapa ), 비. 준세아( B. juncea ) (예를 들어 (필드) 머스타드) 및 브라시카 카리나타( Brassica carinata ), 아레카세아에( Arecaceae ) 종 (예를 들어 기름야자, 코코넛), 벼, 밀, 사탕무, 사탕수수, 귀리, 호밀, 보리, 기장 및 소르굼, 트리티케일, 아마, 견과, 포도 및 덩굴 및 다양한 식물 분류군으로부터의 다양한 과실 및 채소, 예를 들어 로사세아에( Rosaceae ) 종 (예를 들어 인과류, 예컨대 사과 및 배, 뿐만 아니라 핵과류, 예컨대 살구, 체리, 아몬드, 자두 및 복숭아, 및 장과류, 예컨대 딸기, 라즈베리, 레드 및 블랙 커런트 및 구스베리), 리베시오이다에( Ribesioidae ) 종, 주글란다세아에( Juglandaceae ) 종, 베툴라세아에( Betulaceae ) 종, 아나카르디아세아에( Anacardiaceae ) 종, 파가세아에( Fagaceae ) 종, 모라세아에( Moraceae ) 종, 올레아세아에( Oleaceae ) 종 (예를 들어 올리브 나무), 악티니다세� ��에( Actinidaceae ) 종, 라우라세아에( Lauraceae ) 종 (예를 들어 아보카도, 시나몬, 캄포르), 무사세아에( Musaceae ) 종 (예를 들어 바나나 나무 및 플랜테이션), 루비아세아에( Rubiaceae ) 종 (예를 들어 커피), 테아세아에( Theaceae ) 종 (예를 들어 차나무), 스테르쿨리세아에( Sterculiceae ) 종, 루타세아에( Rutaceae ) 종 (예를 들어 레몬, 오렌지, 만다린 및 그레이프프루트); 솔라나세아에( Solanaceae ) 종 (예를 들어 토마토, 감자, 페퍼, 캅시쿰, 가지, 담배), 릴리아세아에( Liliaceae ) 종, 콤포시타에( Compositae ) 종 (예를 들어 상추, 아티초크 및 치커리 - 뿌리 치커리, 엔디브 또는 일반 치커리 포함), 움벨리페라에( Umbelliferae ) 종 (예를 들어 당근, 파슬리, 셀러리 및 셀러리악), 쿠쿠르비타세아에( Cucurbitaceae ) 종 (예를 들어 오이 - 게르킨, 호박, 수박, 조롱박 및 멜론 포함), 알리아세아에( Alliaceae ) 종 (예를 들어 리크 및 양파), 크루시페라에( Cruciferae ) 종 (예를 들어 백색 양배추, 적색 양배추, 브로콜리, 콜리꽃, 브뤼셀 스프라우트, 청경채, 콜라비, 무, 양고추냉이, 크레스 및 배추), 레구미노사에( Leguminosae ) 종 (예를 들어 땅콩, 완두, 렌틸 및 콩 - 예를 들어 강낭콩 및 잠두), 케노포디아세아에( Chenopodiaceae ) 종 (예를 들어 근대, 사료용 비트, 시금치, 비트루트), 리나세아에( Linaceae ) 종 (예를 들어 대마), 칸나베아세아( Cannabeacea ) 종 (예를 들어 칸나비스), 말바세아에( Malvaceae ) 종 (예를 들어 오크라, 코코아), 파파베라세아에( Papaveraceae ) (예를 들어 양귀비), 아스파라가세아에( Asparagaceae ) (예를 들어 아스파라거스); 정원 및 목재에서의 유용한 식물 및 관상 식물, 예컨대 잔디, 잔디밭, 목초 및 스테비아 레바우디아나( Stevia rebaudiana ); 및 각각의 경우에서의 이들 식물의 유전자 변형 유형.

식물 종 또는 식물 재배품종, 그의 위치 및 성장 조건 (토양, 기후, 식생 기간, 양분)에 따라, 본 발명에 따른 조성물을 사용 또는 이용하는 본 발명에 따른 처리는 또한 초상가적 ("상승작용적") 효과를 유발할 수 있다. 따라서, 예를 들어 본 발명의 조성물을 본 발명에 따른 처리에 사용 또는 이용하는 것에 의해, 감소된 적용률 및/또는 활성 스펙트럼의 확장 및/또는 활성의 증가, 보다 우수한 식물 성장, 고온 또는 저온에 대한 증가된 내성, 가뭄에 대한, 또는 물 또는 토양 염 함량에 대한 증가된 내성, 증가된 개화 성능, 보다 용이한 수확, 가속화된 성숙, 보다 높은 수확량, 보다 큰 과실, 보다 큰 식물 높이, 보다 푸른 잎 색, 보다 이른 개화, 수확된 산물의 보다 높은 품질 및/또는 보다 높은 영양가, 과실 내의 보다 높은 당도, 수확된 산물의 보다 우수한 저장 안정성 및/또는 가공성이 가능하며, 이는 실제로 예상되었던 효과를 초과한다.

본 발명에 따른 처리에 있어서 본 발명의 조성물의 특정 적용률에서 또한 식물에서의 강화 효과를 가질 수 있다. 원치않는 식물병원성 진균 및/또는 미생물 및/또는 바이러스에 의한 공격에 대한 식물의 방어 시스템이 동원된다. 식물-강화 (저항성-유발) 물질은 본 문맥에서, 원치않는 식물병원성 진균 및/또는 미생물 및/또는 바이러스로 후속적으로 접종되는 경우에, 처리된 식물이 이들 식물병원성 진균 및/또는 미생물 및/또는 바이러스에 대해 상당한 정도의 저항성을 나타내도록 하는 방식으로, 식물의 방어 시스템을 자극할 수 있는 그러한 물질 또는 물질의 조합을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물을 본 발명에 따른 처리에 사용 또는 이용하는 것에 의해, 식물은 처리 후 특정 기간 이내에 상기 언급된 병원체에 의한 공격에 대해 보호될 수 있다. 보호가 일어나는 기간은 일반적으로 식물을 활성 화합물로 처리한 후에 1 내지 10일, 바람직하게는 1 내지 7일까지 연장된다.

또한 본 발명에 따라 바람직하게 처리될 식물 및 식물 재배품종은 1종 이상의 생물적 스트레스에 대해 저항성이며, 즉 상기 식물은 동물 및 미생물 해충, 예컨대 선충류, 곤충, 응애, 식물병원성 진균, 박테리아, 바이러스 및/또는 바이로이드에 대해 보다 우수한 방어를 나타낸다.

또한 본 발명에 따라 처리될 수 있는 식물 및 식물 재배품종은 1종 이상의 비생물적 스트레스에 대해 저항성인, 즉 스트레스 내성에 대해 증가된 식물 건강을 이미 나타내는 그러한 식물이다. 비생물적 스트레스 조건은, 예를 들어 가뭄, 저온 노출, 열 노출, 삼투 스트레스, 홍수, 증가된 토양 염분, 증가된 미네랄 노출, 오존 노출, 고도의 광 노출, 질소 영양소의 제한된 이용가능성, 인 영양소의 제한된 이용가능성, 음지 회피를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물을 사용한 이들 식물 및 재배품종의 처리는 전체 식물 건강을 추가로 증가시킨다 (상기 참조).

또한 본 발명에 따라 처리될 수 있는 식물 및 식물 재배품종은 증진된 수확량 특징을 특징으로 하는, 즉 이러한 특색에 대해 증가된 식물 건강을 이미 나타내는 그러한 식물이다. 상기 식물에서의 증가된 수확량은, 예를 들어 개선된 식물 생리학, 성장 및 발달, 예컨대 물 사용 효율, 수분 저류 효율, 개선된 질소 사용, 증진된 탄소 동화, 개선된 광합성, 증가된 발아 효율 및 가속화된 성숙의 결과일 수 있다.

수확량은 추가로 이른 개화, 하이브리드 종자 생산을 위한 개화 조절, 묘목 활력, 식물 크기, 절간 수 및 거리, 뿌리 성장, 종자 크기, 과실 크기, 꼬투리 크기, 꼬투리 또는 이삭 수, 꼬투리 또는 이삭당 종자 수, 종자 질량, 증진된 종자 충실률, 감소된 종자 분산, 감소된 꼬투리 열개 및 도복 저항성을 포함하나 이에 제한되지는 않는 개선된 식물 아키텍쳐에 의해 (스트레스 및 비-스트레스 조건 하에) 영향을 받을 수 있다. 추가의 수확량 특성은 종자 조성, 예컨대 탄수화물 함량, 단백질 함량, 오일 함량 및 조성, 영양가, 항-영양 화합물의 감소, 개선된 가공성 및 보다 우수한 저장 안정성을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물을 사용한 이들 식물 및 재배품종의 처리는 전체 식물 건강을 추가로 증가시킨다 (상기 참조).

본 발명에 따라 처리될 수 있는 식물은 일반적으로 보다 높은 수확량, 활력, 건강 및 생물 및 비생물적 스트레스 인자에 대한 저항성을 유발하는 잡종강세 또는 하이브리드 활력의 특징을 이미 발현하는 하이브리드 식물이다. 이러한 식물은 전형적으로 근교 웅성-불임 모계 (자성 모체)를 또 다른 근교 웅성-가임 모계 (웅성 모체)와 교배시킴으로써 만들어진다. 하이브리드 종자는 전형적으로 웅성 불임 식물로부터 수확되고, 재배자에게 판매된다. 웅성 불임 식물은 때때로 (예를 들어, 옥수수에서) 웅수제거, 즉 웅성 생식 기관 (또는 수꽃)의 기계적 제거에 의해 생산될 수 있지만, 보다 전형적으로 웅성 불임성은 식물 게놈 내의 유전자 결정기의 결과이다. 그러한 경우 및 특히 종자가 하이브리드 식물로부터 수확될 목적 산물인 경우에, 하이브리드 식물에서의 웅성 가임성이 완전히 회복되는 것을 보장하는 것이 전형적으로 유용하다. 이는 웅성 모체가, 웅성-불임성의 원인이 되는 유전자 결정기를 함유하는 하이브리드 식물에서 웅성 가임성을 회복할 수 있는 적절한 가임성 회복 유전자를 갖도록 보장함으로써 달성될 수 있다. 웅성 불임성에 대한 유전자 결정기는 세포질에 위치할 수 있다. 세포질 웅성 불임성 (CMS)의 예는, 예를 들어 브라시카 종에서 기재되었다. 그러나, 웅성 불임성에 대한 유전자 결정기는 또한 핵 게놈에 위치할 수 있다. 웅성 불임 식물은 또한 식물 생명공학 방법, 예컨대 유전 공학에 의해 수득될 수 있다. 웅성-불임 식물을 수득하는 특히 유용한 수단은 WO 89/10396에 기재되어 있으며, 여기서 예를 들어 리보뉴클레아제, 예컨대 바르나제는 수술의 융단 세포에서 선택적으로 발현된다. 이어서 가임성은 리보뉴클레아제 억제제, 예컨대 바르스타의 융단 세포에서의 발현에 의해 회복될 수 있다.

본 발명에 따라 처리될 수 있는 식물 또는 식물 재배품종 (식물 생명공학 방법, 예컨대 유전 공학에 의해 수득됨)은 제초제-내성 식물, 즉 1종 이상의 주어진 제초제에 대해 내성을 갖게 된 식물이다. 이러한 식물은 유전자 형질전환에 의해, 또는 이러한 제초제 내성을 부여하는 돌연변이를 함유하는 식물의 선택에 의해 수득될 수 있다.

실시예

실시예 1: 다중 활성 성분의 조합의 효능에 대한 식

활성 성분의 상승작용적 효과는 활성 성분 조합의 활성이 개별적으로 적용될 때의 활성 성분의 총 활성을 초과하는 경우에 존재한다. 2종의 활성 성분의 주어진 조합에 대한 기대 활성은 하기와 같이 계산될 수 있다 (문헌 [Colby, SR, "Calculating Synergistic and Antagonistic Responses of Herbicide Combinations," Weeds 1967, 15, 20-22] 참조):

X가 활성 성분 A를 m ppm (또는 g/ha)의 적용률로 적용할 때의 효능이고,

Y가 활성 성분 B를 n ppm (또는 g/ha)의 적용률로 적용할 때의 효능이고,

E가 활성 성분 A 및 B를 각각 m 및 n ppm (또는 g/ha)의 적용률로 적용할 때의 효능인 경우에,

이때

실제 활성이 계산된 값을 초과하는 경우에, 이때 조합의 활성은 초상가적이며, 즉 상승작용적 효과가 존재한다. 이러한 경우에, 실제로 관찰된 효능은 상기 언급된 식으로부터 계산된 기대 효능 (E)에 대한 값보다 더 커야 한다.

예를 들어, 식 및 분석은 식물 성장 촉진의 평가에 적용될 수 있다. 이러한 검정은 식물에 적용한 지 수일 후에 평가된다. 100%는 비처리 대조군 식물의 것에 상응하는 식물 중량을 의미한다. 효능은 이러한 경우에 비처리 대조군의 것과 비교하여 식물 중량의 추가의 %를 의미한다. 예를 들어, 비처리 대조군 식물과 비교하여 120%인 식물 중량을 유발한 처리는 20%의 효능을 가질 것이다. 조합에 대한 식물 성장 촉진 효과 (즉, 조합으로 처리된 식물의 % 식물 중량에 대한 관찰된 효능)가 계산된 값을 초과하는 경우에, 이때 조합의 활성은 초상가적이며, 즉 상승작용적 효과가 존재한다.

식 및 분석은 또한 질병 대조군 검정에서 상승작용을 평가하는데 사용될 수 있다. %로 표현된 효능의 정도가 표시된다. 0%는 대조군의 것에 상응하는 효능을 의미하고, 반면에 100%의 효능은 질병이 관찰되지 않는다는 것을 의미한다.

실제 살곤충 또는 살진균 활성이 계산된 값을 초과하는 경우에, 이때 조합의 활성은 초상가적이며, 즉 상승작용적 효과가 존재한다. 이러한 경우에, 실제로 관찰된 효능은 상기 언급된 식으로부터 계산된 기대 효능 (E)에 대한 값보다 더 커야 한다.

상승작용적 효과를 입증하는 추가의 방식은 타메스(Tammes)의 방법이다 (문헌 ["Isoboles, a graphic representation of synergism in pesticides" in Neth. J. Plant Path., 1964, 70, 73-80] 참조).

실시예 2: 트리플록시스트로빈 및 재조합 바실루스 투린기엔시스 세포를 사용한 식물 성장 촉진

트리플록시스트로빈 및 엔도글루카나제를 발현하는 재조합 바실루스 투린기엔시스 세포 ("BEE")의 발효 제품의 조합의 효능을 분석하기 위해 실험을 수행하였다. 메이즈 종자를 25-28℃ 및 50% 습도에서 식물 성장실 내 조명 랙 상의 작은 3-인치 제곱 포트 안의 합성 배지 및 모래의 멸균 혼합물에서 약 14일 동안 성장시켰다. 2개의 종자를 각각의 포트에 심었다. 심을 때, 각각의 포트 안의 성장 배지를 하기 기재된 처리로 적셨다. 14일 후에, 식물을 전체 식물 바이오매스에 대해 측정하였다. 하기 표에서, UTC는 비처리 대조군을 지칭한다. "계산치"는 상기 기재된 콜비(Colby) 식을 사용하여 계산된 기대 효과를 지칭하고, "효능"은 관찰된 실제 효과를 지칭한다.

활성 성분으로서 트리플록시스트로빈 (22% 트리플록시스트로빈)을 함유하는 트릴렉스(TRILEX)® 제품을 50 mL 물 중에 희석하고, 희석 용액을 성장 배지를 적시는데 사용하였다. 하기 제시된 적용률은 성장 배지에 적용된 활성 성분 (즉, 트리플록시스트로빈)의 양을 지칭한다.

포자외막 상에 엔도글루카나제를 발현하는 재조합 바실루스 세레우스 패밀리 구성원 (바실루스 투린기엔시스 BT013A) (BEE)을 하기와 같이 생성하였다. 바실루스 세레우스 패밀리 구성원에서 융합 단백질의 발현을 위한 플라스미드를 생성하기 위해, BclA 프로모터 (서열식별번호: 85), 메티오닌 개시 코돈 및 BclA (서열식별번호: 1)의 아미노산 20-35, 이어서 6개의 알라닌 링커 서열과 이에 인 프레임 융합된 바실루스 투린기엔시스 BT013A 엔도글루카나제 (서열식별번호: 107)를 코딩하는 PCR 단편을 생성하였다. 이들 PCR 단편을 XhoI에 의해 소화시키고, pSUPER 플라스미드의 SalI 부위 내로 라이게이션하여 플라스미드 pSUPER-BclA 20-35-엔도글루카나제를 생성하였다. pSUPER 플라스미드는 pUC57 플라스미드 (암피실린 저항성 카세트를 함유함)와 바실루스로부터의 pBC16-1 플라스미드 (테트라시클린 저항성을 함유함)와의 융합을 통해 생성하였다. 이러한 5.5 kbp 플라스미드는 이. 콜라이 및 바실루스 종 둘 다에서 복제될 수 있다. pSUPER-BclA 20-35-포스포리파제 플라스미드를 dam 메틸라제 음성 이. 콜라이 균주 내로 형질전환 및 증식시키고, 최종적으로 바실루스 투린기엔시스 BT013A 내로 형질전환시켰다.

BEE의 전체 브로쓰 배양물을 수득하기 위해, 뇌 심장 주입 배지 (BHI)를 함유하는 15 mL 원추형 용기에 BEE를 접종하고, 300 rpm의 진탕기 셋팅으로 약 30℃에서 7-8시간 동안 성장시켰다. 다음날, 각각의 플라스크로부터의 250 μl 분취물을 50 mL의 효모 추출물-기재 배지를 함유하는 250 mL 플라스크 내로 접종하고, 약 30℃에서 성장시켰다. 대략 2일의 인큐베이션 후에, 포자형성이 적어도 95% 완료되었을 때, 배양 브로쓰를 수거하고, 콜로니 형성 단위를 계산하였다. 발효 브로쓰를 50 mL 물 중 5%로 희석하고, 하기 콜로니 형성 단위를 각각의 포트에 적용하였다.

실험의 결과는 하기 표 3에 제시되어 있다.

표 3

결과는 트리플록시스트로빈 및 BEE를 조합하는 경우에 초상가적 식물 수확량 효과를 나타낸다.

실시예 3: 이소티아닐 및 재조합 바실루스 투린기엔시스 세포를 사용한 식물 성장 촉진

메이즈 종자를 20℃ 및 70% 습도에서 온실 내 양질 사토에서 약 11일 동안 성장시킬 것이다. 처리 시로부터 약 11일 후에 묘목을 토양 위에서 절단하고, 생중량을 결정할 것이다.

서열식별번호: 107에 의해 코딩되는 엔도글루카나제 또는 서열식별번호: 108에 의해 코딩되는 포스포리파제 C를 발현하며 상기 기재된 바와 같이 제조된 재조합 바실루스 투린기엔시스 세포를 약 50 μg/커넬로 적용할 것이다. 이소티아닐을 또한 약 250 μg/커넬로 적용할 것이다.

재조합 바실루스 투린기엔시스를 이소티아닐과 조합하여 처리한 메이즈 식물의 % 싹 중량은 2종의 활성 성분을 단독으로 처리한 메이즈 식물로부터의 % 싹 중량을 기준으로 하여 계산된 값을 초과할 것이며, 즉 상승작용적 효과가 관찰될 것이라고 예상된다.

SEQUENCE LISTING <110> Bayer CropScience LP <120> COMPOSITIONS COMPRISING RECOMBINANT BACILLUS CELLS AND A FUNGICIDE <130> BCS149058 WO <150> US 62/051,915 <151> 2014-09-17 <160> 109 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 41 <212> PRT <213> Bacillus anthracis <400> 1 Met Ser Asn Asn Asn Tyr Ser Asn Gly Leu Asn Pro Asp Glu Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ala Ser Ala Phe Asp Pro Asn Leu Val Gly Pro Thr Leu Pro Pro 20 25 30 Ile Pro Pro Phe Thr Leu Pro Thr Gly 35 40 <210> 2 <211> 332 <212> PRT <213> Bacillus anthracis <400> 2 Met Ser Asn Asn Asn Tyr Ser Asn Gly Leu Asn Pro Asp Glu Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ala Ser Ala Phe Asp Pro Asn Leu Val Gly Pro Thr Leu Pro Pro 20 25 30 Ile Pro Pro Phe Thr Leu Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Phe Thr Thr 35 40 45 Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly 50 55 60 Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Asp Thr Gly Thr Thr Gly Pro 65 70 75 80 Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr 85 90 95 Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gly Pro Thr Gl 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213> Bacillus anthracis <400> 8 Met Lys Gln Asn Asp Lys Leu Trp Leu Asp Lys Gly Ile Ile Gly Pro 1 5 10 15 Glu Asn Ile Gly Pro Thr Phe Pro Val Leu Pro Pro Ile His Ile Pro 20 25 30 Thr Gly Ile Thr Gly Ala Thr Gly Ala Thr Gly Ile Thr Gly Ala Thr 35 40 45 Gly Pro Thr Gly Thr Thr Gly Ala Thr Gly Ala Thr Gly Ile Thr Gly 50 55 60 Val Thr Gly Ala Thr Gly Ile Thr Gly Val Thr Gly Ala Thr Gly Ile 65 70 75 80 Thr Gly Val Thr Gly Ala Thr Gly Ile Thr Gly Val Thr Gly Pro Thr 85 90 95 Gly Ile Thr Gly Ala Thr Gly Pro Thr Gly Ile Thr Gly Ala Thr Gly 100 105 110 Pro Ala Gly Ile Thr Gly Val Thr Gly Pro Thr Gly Ile Thr Gly Ala 115 120 125 Thr Gly Pro Thr Gly Thr Thr Gly Val Thr Gly Pro Thr Gly Asp Thr 130 135 140 Gly Leu Ala Gly Ala Thr Gly Pro Thr Gly Ala Thr Gly Leu Ala Gly 145 150 155 160 Ala Thr Gly Pro Thr Gly Asp Thr Gly Ala Thr Gly Pro Thr Gly Ala 165 170 175 Thr Gly Leu Ala Gly Ala Thr Gly Pro Thr Gly Ala Thr Gly Leu Thr 180 185 190 Gly Ala Thr Gly Ala Thr Gly Ala Thr Gly Gly Gly Ala Ile Ile Pro 19 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3> Bacillus anthracis <400> 10 Met Asp Glu Phe Leu Ser Ser Ala Ala Leu Asn Pro Gly Ser Val Gly 1 5 10 15 Pro Thr Leu Pro Pro Met Gln Pro Phe Gln Phe Arg Thr Gly Pro Thr 20 25 30 Gly Ser Thr Gly Ala Lys Gly Ala Ile Gly Asn Thr Glu Pro Tyr Trp 35 40 45 His Thr Gly Pro Pro Gly Ile Val Leu Leu Thr Tyr Asp Phe Lys Ser 50 55 60 Leu Ile Ile Ser Phe Ala Phe Arg Ile Leu Pro Ile Ser 65 70 75 <210> 11 <211> 39 <212> PRT <213> Bacillus weihenstephensis <400> 11 Met Phe Asp Lys Asn Glu Ile Gln Lys Ile Asn Gly Ile Leu Gln Ala 1 5 10 15 Asn Ala Leu Asn Pro Asn Leu Ile Gly Pro Thr Leu Pro Pro Ile Pro 20 25 30 Pro Phe Thr Leu Pro Thr Gly 35 <210> 12 <211> 299 <212> PRT <213> Bacillus weihenstephensis <400> 12 Met Phe Asp Lys Asn Glu Ile Gln Lys Ile Asn Gly Ile Leu Gln Ala 1 5 10 15 Asn Ala Leu Asn Pro Asn Leu Ile Gly Pro Thr Leu Pro Pro Ile Pro 20 25 30 Pro Phe Thr Leu Pro Thr Gly Pro Thr Gly Val Thr Gly Pro Thr Gly 35 40 45 Val Thr Gly Pro Thr Gly Val Thr Gly Pro Thr Gly Val Thr Gly Pro 50 55 60 Thr G 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tephensis <400> 28 Met Lys Glu Arg Asp Arg Gln Asn Ser Leu Asn Ser Asn Phe Arg Ile 1 5 10 15 Ser Pro Asn Leu Ile Gly Pro Thr Phe Pro Pro Val Pro Thr Gly Phe 20 25 30 Thr Gly Ile Gly Ile Thr Gly Pro Thr Gly Pro Gln Gly Pro Thr Gly 35 40 45 Pro Gln Gly Pro Arg Gly Phe Gln Gly Pro Met Gly Glu Met Gly Pro 50 55 60 Thr Gly Pro Gln Gly Val Gln Gly Ile Gln Gly Pro Ala Gly Gln Met 65 70 75 80 Gly Ala Thr Gly Pro Glu Gly Gln Gln Gly Pro Gln Gly Leu Arg Gly 85 90 95 Pro Gln Gly Glu Thr Gly Ala Thr Gly Pro Gln Gly Val Gln Gly Leu 100 105 110 Gln Gly Pro Ile Gly Pro Thr Gly Ala Thr Gly Ala Gln Gly Ile Gln 115 120 125 Gly Ile Gln Gly Leu Gln Gly Pro Ile Gly Ala Thr Gly Pro Glu Gly 130 135 140 Pro Gln Gly Ile Gln Gly Val Gln Gly Val Pro Gly Ala Thr Gly Ser 145 150 155 160 Gln Gly Ile Gln Gly Ala Gln Gly Ile Gln Gly Pro Gln Gly Pro Ser 165 170 175 Gly Asn Thr Gly Ala Thr Gly Val Thr Gly Gln Gly Ile Ser Gly Pro 180 185 190 Thr Gly Ile Thr Gly Pro Thr Gly Ile Thr Gly Pro Ser Gly Gly Pro 195 200 205 Pro 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213> Bacillus cereus <400> 54 Met Arg Glu Arg Asp Asn Lys Arg Gln Gln His Ser Leu Asn Pro Asn 1 5 10 15 Phe Arg Ile Ser Pro Glu Leu Ile Gly Pro Thr Phe Pro Pro Val Pro 20 25 30 Thr Gly Phe Thr Gly Ile Gly Ile Thr Gly Pro Thr Gly Pro Gln Gly 35 40 45 Pro Thr Gly Pro Gln Gly Pro Arg Gly Phe Gln Gly Pro Met Gly Glu 50 55 60 Met Gly Pro Thr Gly Pro Gln Gly Val Gln Gly Ile Gln Gly Pro Val 65 70 75 80 Gly Pro Ile Gly Ala Thr Gly Pro Glu Gly Gln Gln Gly Pro Gln Gly 85 90 95 Leu Arg Gly Pro Gln Gly Glu Thr Gly Ala Thr Gly Pro Gly Gly Val 100 105 110 Gln Gly Leu Gln Gly Pro Ile Gly Pro Thr Gly Ala Thr Gly Ala Gln 115 120 125 Gly Val Gln Gly Ile Gln Gly Leu Gln Gly Pro Ile Gly Ala Thr Gly 130 135 140 Pro Glu Gly Pro Gln Gly Ile Gln Gly Val Gln Gly Leu Pro Gly Ala 145 150 155 160 Thr Gly Ser Gln Gly Ile Gln Gly Val Gln Gly Ile Gln Gly Pro Gln 165 170 175 Gly Pro Ser Gly Asn Thr Gly Ala Thr Gly Ala Thr Gly Gln Gly Ile 180 185 190 Thr Gly Pro Thr Gly Ile Thr Gly Pro Thr Gly Ile Thr Gly Pro Ser 195 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3> Bacillus anthracis <400> 80 Met Leu Phe Thr Ser Trp Leu Leu Phe Phe Ile Phe Ala Leu Ala Ala 1 5 10 15 Phe Arg Leu Thr Arg Leu Ile Val Tyr Asp Lys Ile Thr Gly Phe Leu 20 25 30 Arg Arg Pro Phe Ile Asp Glu Leu Glu Ile Thr Glu Pro Asp Gly Ser 35 40 45 Val Ser Thr Phe Thr Lys Val Lys Gly Lys Gly Leu Arg Lys Trp Ile 50 55 60 Gly Glu Leu Leu Ser Cys Tyr Trp Cys Thr Gly Val Trp Val Ser Ala 65 70 75 80 Phe Leu Leu Val Leu Tyr Asn Trp Ile Pro Ile Val Ala Glu Pro Leu 85 90 95 Leu Ala Leu Leu Ala Ile Ala Gly Ala Ala Ala Ile Ile Glu Thr Ile 100 105 110 Thr Gly Tyr Phe Met Gly Glu 115 <210> 81 <211> 61 <212> PRT <213> Bacillus anthracis <400> 81 Met Phe Ala Val Ser Asn Asn Pro Arg Gln Asn Ser Tyr Asp Leu Gln 1 5 10 15 Gln Trp Tyr His Met Gln Gln Gln His Gln Ala Gln Gln Gln Ala Tyr 20 25 30 Gln Glu Gln Leu Gln Gln Gln Gly Phe Val Lys Lys Lys Gly Cys Asn 35 40 45 Cys Gly Lys Lys Lys Ser Thr Ile Lys His Tyr Glu Glu 50 55 60 <210> 82 <211> 481 <212> PRT <213> Bacillus anthracis <400> 82 Met Ser Arg T 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ttaat acatatctat acacttcaat atcacagcat 180 gcagttgaat tatatccaac tttcatttca aattaaataa gtgcctccgc tattgtgaat 240 gtcatttact ctccctacta catttaataa ttatgacaag caatcatagg aggttactac 300 atg 303 <210> 87 <211> 173 <212> DNA <213> Bacillus anthracis <400> 87 aattacataa caagaactac attagggagc aagcagtcta gcgaaagcta actgcttttt 60 tattaaataa ctattttatt aaatttcata tatacaatcg cttgtccatt tcatttggct 120 ctacccacgc atttactatt agtaatatga atttttcaga ggtggatttt att 173 <210> 88 <211> 124 <212> DNA <213> Bacillus weihenstephensis <400> 88 ctatgattta agatacacaa tagcaaaaga gaaacatatt atataacgat aaatgaaact 60 tatgtatatg tatggtaact gtatatatta ctacaataca gtatactcat aggaggtagg 120 tatg 124 <210> 89 <211> 376 <212> DNA <213> Bacillus weihenstephensis <400> 89 ggtaggtaga tttgaaatat gatgaagaaa aggaataact aaaaggagtc gatatccgac 60 tccttttagt tataaataat gtggaattag agtataattt tatataggta tattgtatta 120 gatgaacgct ttatccttta attgtgatta atgatggatt gtaagagaag gggcttacag 180 tccttttttt atggtgttct ataagccttt ttaaaagggg tac cacccca cacccaaaaa 240 cagggggggt tataactaca tattggatgt tttgtaacgt acaagaatcg gtattaatta 300 ccctgtaaat aagttatgtg tatataaggt aactttatat attctcctac aataaaataa 360 aggaggtaat aaagtg 376 <210> 90 <211> 225 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 90 aacccttaat gcattggtta aacattgtaa agtctaaagc atggataatg ggcgagaagt 60 aagtagattg ttaacaccct gggtcaaaaa ttgatattta gtaaaattag ttgcactttg 120 tgcatttttt cataagatga gtcatatgtt ttaaattgta gtaatgaaaa acagtattat 180 atcataatga attggtatct taataaaaga gatggaggta actta 225 <210> 91 <211> 125 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 91 taattccacc ttcccttatc ctctttcgcc tatttaaaaa aaggtcttga gattgtgacc 60 aaatctcctc aactccaata tcttattaat gtaaatacaa acaagaagat aaggagtgac 120 attaa 125 <210> 92 <211> 144 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 92 aggatgtctt tttttatatt gtattatgta catccctact atataaattc cctgctttta 60 tcgtaagaat taacgtaata tcaaccatat cccgttcata ttgtagtagt gtatgtcaga 120 actcacgaga aggagtgaac ataa 144 <210> 93 <211> 126 <212> DNA <21 3> Bacillus thuringiensis <400> 93 ttaatgtcac tccttatctt cttgtttgta tttacattaa taagatattg gagttgagga 60 gatttggtca caatctcaag accttttttt taaataggcg aaagaggata agggaaggtg 120 gaatta 126 <210> 94 <211> 103 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 94 atatattttc ataatacgag aaaaagcgga gtttaaaaga atgagggaac ggaaataaag 60 agttgttcat atagtaaata gacagaattg acagtagagg aga 103 <210> 95 <211> 169 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 95 aaactaaata atgagctaag catggattgg gtggcagaat tatctgccac ccaatccatg 60 cttaacgagt attattatgt aaatttctta aaattgggaa cttgtctaga acatagaacc 120 tgtccttttc attaactgaa agtagaaaca gataaaggag tgaaaaaca 169 <210> 96 <211> 111 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 96 attcactaca acggggatga gtttgatgcg gatacatatg agaagtaccg gaaagtgttt 60 gtagaacatt acaaagatat attatctcca tcataaagga gagatgcaaa g 111 <210> 97 <211> 273 <212> DNA <213> Bacillus anthracis <400> 97 cgcgcaccac ttcgtcgtac aacaacgcaa gaagaagttg gggatacagc agtattctta 60 ttcagtgatt tagcacgcgg cgtaacagga g aaaacattc acgttgattc agggtatcat 120 atcttaggat aaatataata ttaattttaa aggacaatct ctacatgttg agattgtcct 180 ttttatttgt tcttagaaag aacgattttt aacgaaagtt cttaccacgt tatgaatata 240 agtataatag tacacgattt attcagctac gta 273 <210> 98 <211> 303 <212> DNA <213> Bacillus anthracis <400> 98 tgaagtatct agagctaatt tacgcaaagg aatctcagga caacactttc gcaacaccta 60 tattttaaat ttaataaaaa aagagactcc ggagtcagaa attataaagc tagctgggtt 120 caaatcaaaa atttcactaa aacgatatta tcaatacgca gaaaatggaa aaaacgcctt 180 atcataaggc gttttttcca ttttttcttc aaacaaacga ttttactatg accatttaac 240 taatttttgc atctactatg atgagtttca ttcacattct cattagaaag gagagattta 300 atg 303 <210> 99 <211> 240 <212> DNA <213> Bacillus anthracis <400> 99 tatatcatat gtaaaattag ttcttattcc cacatatcat atagaatcgc catattatac 60 atgcagaaaa ctaagtatgg tattattctt aaattgttta gcaccttcta atattacaga 120 tagaatccgt cattttcaac agtgaacatg gatttcttct gaacacaact ctttttcttt 180 ccttatttcc aaaaagaaaa gcagcccatt ttaaaatacg gctgcttgta atgtacatta 240 <210> 100 <211> 267 < 212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 100 tatcacataa ctctttattt ttaatatttc gacataaagt gaaactttaa tcagtggggg 60 ctttgttcat ccccccactg attattaatt gaaccaaggg ataaaaagat agagggtctg 120 accagaaaac tggagggcat gattctataa caaaaagctt aatgtttata gaattatgtc 180 tttttatata gggagggtag taaacagaga tttggacaaa aatgcaccga tttatctgaa 240 ttttaagttt tataaagggg agaaatg 267 <210> 101 <211> 124 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 101 attttttact tagcagtaaa actgatatca gttttactgc tttttcattt ttaaattcaa 60 tcattaaatc ttccttttct acatagtcat aatgttgtat gacattccgt aggaggcact 120 tata 124 <210> 102 <211> 170 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 102 acataaattc acctccataa agcgttcatt atatagtaga tgcaaaaccg aaagaaaatg 60 acacggacat ttgaattatt gaaaagaaat cttaaactac ttgaacaatt taaaaaaatg 120 gaaagtttag tatatgtata acatatgatt gatttggaag agggtgatta 170 <210> 103 <211> 212 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 103 ttctattttc caacataaca tgctacgatt aaatggtttt ttgcaaatgc cttcttggga 60 agaaggatta gagcgt tttt ttatagaaac caaaagtcat taacaatttt aagttaatga 120 cttttttgtt tgcctttaag aggttttatg ttactataat tatagtatca ggtactaata 180 acaagtataa gtatttctgg gaggatatat ca 212 <210> 104 <211> 1500 <212> DNA <213> Bacillus subtilis <400> 104 atgaaacggt caatctcgat ttttattacg tgtttattga ttacgttatt gacaatgggc 60 ggcatgatag cttcgccggc atcagcagca gggacaaaaa cgccagtagc caagaatggc 120 cagcttagca taaaaggtac acagctcgtt aaccgagacg gtaaagcggt acagctgaag 180 gggatcagtt cacacggatt gcaatggtat ggagaatatg tcaataaaga cagcttaaaa 240 tggctgagag atgattgggg tatcaccgtt ttccgtgcag cgatgtatac ggcagatggc 300 ggttatattg acaacccgtc cgtgaaaaat aaagtaaaag aagcggttga agcggcaaaa 360 gagcttggga tatatgtcat cattgactgg catatcttaa atgacggtaa tccaaaccaa 420 aataaagaga aggcaaaaga attcttcaag gaaatgtcaa gcctttacgg aaacacgcca 480 aacgtcattt atgaaattgc aaacgaacca aacggtgatg tgaactggaa gcgtgatatt 540 aaaccatatg cggaagaagt gatttcagtt atccgcaaaa atgatccaga caacatcatc 600 attgtcggaa ccggtacatg gagccaggat gtgaatgatg ctgccgatga ccagctaaaa 660 gat gcaaacg ttatgtacgc acttcatttt tatgccggca cacacggcca atttttacgg 720 gataaagcaa actatgcact cagcaaagga gcacctattt ttgtgacaga gtggggaaca 780 agcgacgcgt ctggcaatgg cggtgtattc cttgatcaat cgagggaatg gctgaaatat 840 ctcgacagca agaccattag ctgggtgaac tggaatcttt ctgataagca ggaatcatcc 900 tcagctttaa agccgggggc atctaaaaca ggcggctggc ggttgtcaga tttatctgct 960 tcaggaacat tcgttagaga aaacattctc ggcaccaaag attcgacgaa ggacattcct 1020 gaaacgccat caaaagataa acccacacag gaaaatggta tttctgtaca gtacagagca 1080 ggggatggga gtatgaacag caaccaaatc cgtccgcagc ttcaaataaa aaataacggc 1140 aataccacgg ttgatttaaa agatgtcact gcccgttact ggtataaagc gaaaaacaaa 1200 ggccaaaact ttgactgtga ctacgcgcag attggatgcg gcaatgtgac acacaagttt 1260 gtgacgttgc ataaaccaaa gcaaggtgca gatacctatc tggaacttgg atttaaaaac 1320 ggaacgttgg caccgggagc aagcacaggg aatattcagc tccgtcttca caatgatgac 1380 tggagcaatt atgcacaaag cggcgattat tcctttttca aatcaaatac gtttaaaaca 1440 acgaaaaaaa tcacattata tgatcaagga aaactgattt ggggaacaga accaaattag 1500 <210> 105 <211 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