食用菌凝集素及其在抑制棕囊藻生长中的应用
专利汇可以提供食用菌凝集素及其在抑制棕囊藻生长中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 的目的是从食用 真菌 双孢蘑菇2796中分离纯化食用菌凝集素，并将其应用于棕囊藻的生长抑制中。本发明所 请求 保护的双孢蘑菇凝集素能够显著地抑制赤潮微藻——棕囊藻的生长，为开发环保的选择性抑制藻技术提供新思路和新方法。，下面是食用菌凝集素及其在抑制棕囊藻生长中的应用专利的具体信息内容。
1.一种食用菌凝集素，其特征在于，所述食用菌凝集素为双孢蘑菇2796凝集素。
2.根据权利要求1所述的一种食用菌凝集素，其特征在于：其提取步骤为：
取食用菌子实体，按质量体积比为1:5加入0.9%w/v生理盐水，在4℃下浸泡18h；然后用高速组织捣碎机将其均浆后再次放在4℃下浸泡4h，4层纱布过滤，弃滤渣，取滤液；在4℃，
9000r/min下冷冻离心20min，取出上清液；加入22.6%w/v硫酸铵盐析，并用79-1磁力加热搅拌器使其混匀，以此得到沉淀为40%的饱和溶液部分，放入到4℃下18h使其充分沉淀，取上清；再次在4℃，9000r/min下冷冻离心20min，取出上清液，加入12%w/v硫酸铵盐析，并用79-
1磁力加热搅拌器使其混匀，以此得到沉淀为60%的饱和溶液部分，放入到4℃下18h使其充分沉淀，在4℃，9000r/min下冷冻离心20min，取出沉淀；将沉淀溶于1mol/l的NaCl中，装入透析袋中除盐，用相同的盐浓度透析至外透析液无SO42-检出为止；所得透析液聚乙二醇浓缩后上DEAE-Sepharose Fast Flow柱，以0.05mol/l，pH7.8的磷酸缓冲液PBS对含1molNaCl的同一缓冲液梯度洗脱，检测波长280nm，分管收集，以鸽子血检测各峰的凝血活性，收集活性峰；然后活性峰上Sephadex G-100柱层析纯化，流速4ml/管，10min/管，洗脱液为
0.05mol/l、pH8.0的PBS缓冲液，检测波长280nm，分管收集后检测各峰的凝血活性，收集活性峰，冷冻干燥即得所述食用菌凝集素纯品。
3.利用权利要求1所述的一种食用菌凝集素抑制棕囊藻生长的方法，其特征在于，其使用方法为将所提取的食用菌凝集素直接加入棕囊藻生长水域中，抑制其生长。
食用菌凝集素及其在抑制棕囊藻生长中的应用
技术领域
背景技术
发明内容
2796凝集素，其提取步骤为：
取食用菌子实体，按质量体积比为1:5加入0.9%w/v生理盐水，在4℃下浸泡18h；然后用高速组织捣碎机将其均浆后再次放在4℃下浸泡4h，4层纱布过滤，弃滤渣，取滤液；在4℃，
9000r/min下冷冻离心,20min，取出上清液；加入22.6%w/v硫酸铵盐析，并用79-1磁力加热搅拌器使其混匀，以此得到沉淀为40%的饱和溶液部分，放入到4℃下18h使其充分沉淀，取上清；再次在4℃，9000r/min下冷冻离心,20min，取出上清液，加入12%w/v硫酸铵盐析，并用
79-1磁力加热搅拌器使其混匀，以此得到沉淀为60%的饱和溶液部分，放入到4℃下18h使其充分沉淀，在4℃，9000r/min下冷冻离心,20min，取出沉淀；将沉淀溶于1mol/l的NaCl中，装入透析袋中除盐，用相同的盐浓度透析至外透析液无SO42-检出为止；所得透析液聚乙二醇浓缩后上DEAE-Sepharose Fast Flow柱，以0.05mol/l，pH7.8的磷酸缓冲液PBS对含
1molNaCl的同一缓冲液梯度洗脱，检测波长280nm，分管收集，以鸽子血检测各峰的凝血活性，收集活性峰；然后活性峰上Sephadex G-100柱层析纯化，流速4ml/管，10min/管，洗脱液为0.05mol/l、pH8.0的PBS缓冲液，检测波长280nm，分管收集后检测各峰的凝血活性，收集活性峰，冷冻干燥即得所述食用菌凝集素纯品。
9000r/min下冷冻离心,20min，取出上清液；加入22.6%w/v硫酸铵盐析，并用79-1磁力加热搅拌器使其混匀，以此得到沉淀为40%的饱和溶液部分，放入到4℃下18h使其充分沉淀，取上清液再次在4℃，9000r/min下冷冻离心,20min，取出上清液，加入12%w/v硫酸铵盐析，并用79-1磁力加热搅拌器使其混匀，以此得到沉淀为60%的饱和溶液部分，放入到4℃下18h使其充分沉淀，在4℃，9000r/min下冷冻离心,20min，取出沉淀；将沉淀溶于1mol/l的NaCl中，装入透析袋中除盐，用相同的盐浓度透析至外透析液无SO42-检出为止；所得透析液聚乙二醇浓缩后上DEAE-Sepharose Fast Flow柱（1.6cm×30cm），以磷酸缓冲液PBS（0.05mol/l,pH7.8）对含1molNaCl的同一缓冲液梯度洗脱，检测波长280nm，分管收集，以鸽子血检测各峰的凝血活性，收集活性峰；然后活性峰上Sephadex G-100柱(2.6cm×60cm)层析纯化，流速4ml/管，10min/管，洗脱液PBS（0.05mol/l，pH8.0），检测波长280nm，分管收集后检测各峰的凝血活性，收集活性峰，冷冻干燥即得食用菌2796凝集素纯品。
具体实施方式
9000r/min下冷冻离心20min，取出上清液；加入22.6%w/v硫酸铵盐析，并用79-1磁力加热搅拌器使其混匀，以此得到沉淀为40%的饱和溶液部分，放入到4℃下18h使其充分沉淀，取上清；再次在4℃，9000r/min下冷冻离心20min，取出上清液，加入12%w/v硫酸铵盐析，并用79-
1磁力加热搅拌器使其混匀，以此得到沉淀为60%的饱和溶液部分，放入到4℃下18h使其充分沉淀，在4℃，9000r/min下冷冻离心20min，取出沉淀；将沉淀溶于1mol/l的NaCl中，装入透析袋中除盐，用相同的盐浓度透析至外透析液无SO42-检出为止；所得透析液聚乙二醇浓缩后上DEAE-Sepharose Fast Flow柱（1.6cm×30cm），以磷酸缓冲液PBS（0.05mol/l, pH7.8）对含1mol NaCl的同一缓冲液梯度洗脱，检测波长280nm，分管收集，以鸽子血检测各峰的凝血活性，收集活性峰；然后活性峰上Sephadex G-100柱(2.6cm×60cm)层析纯化，流速4ml/管，10min/管，洗脱液PBS（0.05mol/l，pH8.0），检测波长280nm，分管收集后检测各峰的凝血活性，收集活性峰，冷冻干燥即得食用菌2796凝集素纯品。
棕囊藻在LRH-250-G光照培养箱中培养，温度为25±1℃，光照强度E 3000±50lx，光暗周期12h，实验中藻类培养所用培养基为f/2培养基。
试验步骤：
(1)海洋棕囊藻在LRH-250-G光照培养箱中培养，温度为25±1℃，光照强度E 3000±
50lx，光暗周期12h，实验中藻类培养所用培养基为f/2培养基。
实施例4 凝集素对微藻细胞运动能力的影响
试验步骤：
在96孔“V”型血凝板上用40µL凝集素溶液与等量生理盐水系列倍比稀释后，加入40µL经离心洗涤过的藻细胞悬液，以等量消毒海水作为空白对照，振荡均匀，室温下静置1h，显微观察其运动情况。
模拟赤潮发生时的藻类密度高的环境情况，跟踪观察双孢蘑菇凝集素对高密度棕囊藻的杀灭效果(图1A，图1B)。结果显示在t<3d时双孢蘑菇凝集素处理的右缸和对照组左缸的叶绿素浓度变化基本一致，当t>5d后，左缸与右缸的叶绿素浓度变化趋势开始出现差异。对照组，在不断补充营养盐的条件下，虽然其叶绿素浓度出现了弱的下降趋势，但总体仍维持在1.1mg/L以上的高水平，藻液藻密度高且分布均匀。相比之下，双孢蘑菇凝集素处理的右缸在t>2d后逐渐观察到棕囊藻藻体沉淀的现象，但在t=3d时，搅匀取样测得的叶绿素浓度数值与对照组差异不大，这可能与藻细胞沉淀但并未解体有关。但随着时间的增加，沉底的藻细胞开始解体，藻液的叶绿素浓度开始急剧下降，呈现出先急后缓的趋势，这可能与凝集素的降解有关。
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