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用于皮肤护理应用的侧流测定装置

阅读:167发布:2020-05-11

专利汇可以提供用于皮肤护理应用的侧流测定装置专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 申请 公开了一种基于侧流测定装置的 诊断 试剂 盒 和方法,其用于检测取自 哺乳动物 皮肤 的测试样本内的一种或多种测试分析物的存在或量。,下面是用于皮肤护理应用的侧流测定装置专利的具体信息内容。

1.一种诊断试剂盒,用于检测从哺乳动物皮肤表面获得的测试样本内的一种或多种测试分析物的存在或量,所述诊断试剂盒包括:
a)单独拭子(200、301),配置为用于收集所述测试样本,其中,该单独拭子包括附接到支撑构件(202)的样本收集垫(201、101),
b)侧流测定装置(300),包括一个或多个多孔元件,其中所述侧流测定装置(300)配置为接受并保持所述单独拭子,
其中,所述样本收集垫(201、101)配置为:当所述单独拭子(200、301)插入所述侧流测定装置(300)中时,形成多孔支撑组件(100)的一部分。
2.根据权利要求1所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述支撑构件(202)的所述远端(204)的一个边缘包括切口(206),并且其中,所述侧流测定装置包括凸起(303),该凸起配置为在所述单独拭子插入所述侧流测定装置中时对所述支撑构件的所述远端进行定向和定位
3.根据权利要求1或2中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述单独拭子(200)包括在所述支撑构件(202)的所述远端(204)的边缘上或附近的切口(206),并且所述侧流测定装置(300)包括凸起(303),该凸起与所述支撑构件上的所述切口(206)配合,使得当插入所述侧流测定装置(300)中时,所述单独拭子(200)的所述样本收集垫(201、101)形成所述多孔支撑组件(100)的一部分。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述支撑构件(202)的所述远端(204)包括孔(205),其中,所述样本收集垫(201、101)附接到所述支撑构件(202),使得所述样本收集垫覆盖所述孔(205)。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述侧流测定装置包括开口(304),所述开口配置为与所述单独拭子的所述孔(205)对准,使得当所述单独拭子插入所述侧流测定装置中时,所述样本收集垫(201、101)通过所述开口(304)暴露。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述支撑构件(202)沿着所述支撑构件的纵向轴线是柔性的。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述支撑构件(202)由是柔性材料的材料制成,使得当所述样本收集垫(201、101)被压靠皮肤并在所述皮肤上来回移动以收集所述测试样本时,所述支撑构件(202)会略微弯曲。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述支撑构件(202)由塑料材料制成,比如塑料材料,其中,所述塑料材料的厚度小于约2mm,比如1mm或更小。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述支撑构件配置有:
配置为手指握持部的一个近端(203),以及附接所述样本收集垫(201)的相对的远端(204)。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述样本收集垫(201、101)由纤维素材料、诸如硝化纤维素的纤维素衍生物、聚醚砜、聚乙烯、尼龙聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚酯、聚丙烯、玻璃纤维、、或布制成,并且可选地,所述样本收集垫(201、
101)用封闭缓冲液进行预处理。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述样本收集垫(201、101)用封闭缓冲液进行预处理,所述封闭缓冲液诸如是包括1%BSA的PBS缓冲液,或包括10mM酸盐、3%BSA、1%PVP-40和0.25%Triton X100 pH 8.0的缓冲液。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述样本收集垫(201、101)为具有一个或多个片材或类似物的层的形式,诸如具有两个片材的层。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述样本收集垫(201、101)的厚度小于2mm,比如在1至0.80mm的范围内、优选地小于1mm、比如小于0.95mm、例如小于0.85mm、比如在0.85至0.80mm的范围内。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述样本收集垫(201、101)为两个片材的层的形式,其中每个片材的厚度小于0.50mm,比如在0.49至0.40mm的范围内。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述侧流测定装置包括样本垫狭槽(306),所述样本垫狭槽配置为接收所述单独拭子的所述远端,使得固定所述样本收集垫(201、101、301)在所述侧流测定装置中的位置
16.根据权利要求1至15中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述侧流测定装置包括保持构件(302),所述保持构件配置为保持所述单独拭子的远端并固定包括所述样本收集垫(201、101)的所述单独拭子的所述远端的位置,其中所述保持构件(302)配置为折叠在所述单独拭子的所述远端上方,并且定到所述侧流测定装置的主体,并且其中,所述保持构件(302)包括所述开口(304)。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的诊断试剂盒,其特征在于,所述侧流测定装置被构造成当所述侧流测定装置与附接到所述单独拭子的所述样本收集垫配合时形成多孔支撑组件(100),其中,与所述样本收集垫配合的所述侧流测定装置(300)包括洗脱区(101)、比如结合垫形式的结合区(102)、以及检测区域(DA),并且可选地包括芯吸垫(104),其中所述检测区域(DA)包括含有用于选择性地保留一种或多种测试分析物的一个或多个亲和分子的检测区(105),并且可选地包括含有用于选择性地保留一个或多个指示剂亲和分子的一个或多个亲和分子的指示剂区(106),并且可选地包括配置用于视觉检查所述检测区域(DA)的反应窗口(305)。
18.一种用于检测一种或多种测试分析物的存在或量的方法,所述方法包括以下步骤:
a)提供包括样本收集垫(201)的如前述权利要求中任一项限定的单独拭子(200),其中所述样本收集垫包括使用所述单独拭子从诸如人类的哺乳动物的皮肤表面获得的测试样本;
b)将包括含有所述测试样本的样本收集垫的所述单独拭子插入到如前述权利要求中任一项中限定的适于接收所述单独拭子插入件的侧流测定装置中,以及可选地将运行缓冲液添加到插入所述侧流测定装置中的样本收集垫;
c)进行侧流测定。
19.根据权利要求18所述的方法,其中,所述样本收集垫(201、101)用封闭缓冲液进行预处理,所述封闭缓冲液诸如是包括1%BSA的PBS缓冲液,或包括10mM硼酸盐、3%BSA、1%PVP-40和0.25%Triton X100 pH 8.0的缓冲液。
20.根据权利要求18或19所述的方法,其中,在样本收集之前,预润湿所述样本收集垫(201、101)。
21.根据权利要求18至20中任一项所述的方法,其中,所述测试分析物是IL-8、IL-1a和IL-1RA。
22.根据权利要求18至21中任一项所述的方法,还包括步骤d):捕获所述检测区域(DA)的图像并且将所述图像传输到包括图像处理器和数据库计算机系统,其中,由所述图像处理器从所述图像中提取图像特征并且将所述图像特征存储在所述数据库中,并且其中,所述计算机系统基于所述图像特征生成至少一个输出数据,其中使用诸如配置为捕获图像的蜂窝电话的移动装置来捕获所述图像,并且将由所述计算机系统生成的输出数据传输到所述移动装置。

说明书全文

用于皮肤护理应用的侧流测定装置

技术领域

[0001] 本发明涉及基于侧流测定装置的诊断试剂盒和方法,其用于检测取自哺乳动物皮肤的测试样本内的一种或多种测试分析物的存在或量。

背景技术

[0002] 基因组学、转录组学、蛋白质组学和调控组学的快速发展使得可以大规模分析分子和细胞机制。这些研究的重要结果之一是功能基因组学的发展,以及来自不同个体的细胞在基因组结构、基因和蛋白质表达谱以及控制特定细胞功能的调节机制中具有显著差异的理解。这引起了对以下的兴趣:检测和/或定量生物标志物以通过一种或多种生物标志物的存在、不存在和/或浓度的评估哺乳动物的当前状态。
[0003] 还需要评估处理在个人平上的有效程度,诸如在个性化用药和个性化皮肤护理的领域。
[0004] 关于个性化皮肤护理,要求保护的化妆品的抗皱纹和抗衰老效果通常基于这些产品对所有个体具有类似效果的假设。然而,情况并非如此。不同的人和不同的皮肤类型对化妆品的反应不同,因此需要能够确定个人对于特定类型的皮肤护理产品的效果或反应性的即时装置。
[0005] 皮肤“质量”取决于控制和调节皮肤形态、结构和功能的生物过程。负责皮肤性能的基本生物机制与皮肤中的不同细胞群的维持、更新和功能相关。例如,真皮纤维细胞控制细胞外基质的体内平衡、皮肤的质细胞控制阻隔功能、免疫细胞和因子负责炎性过程并抵抗感染。控制这些过程的功能网络(分子机制)是相对众所周知的,并且已经识别了这些网络中的关键参与者。不同细胞因子和生长因子的水平和活性调节皮肤中的细胞过程的平衡,诸如不同细胞群的增殖和分化、细胞外基质的合成和降解、代谢活性等。这些活动的结合产生了皮肤“质量”和皮肤的美学外观。
[0006] 白介素的水平可以用于确定皮肤的状态并且还提供如何改善皮肤“质量”(外观、功能、结构)的建议。
[0007] 侧流测定法面临的挑战之一是提供要测试的样本,具体是提供皮肤上的样本形式,并且具体是以可再现和/或均匀的方式从皮肤上提供样本。
[0008] WO 2014184151 A1描述了一种及时诊断装置,其基于侧流测定技术并且能够对来自皮肤表面的分泌和可扩散因子进行非侵入性分析。
[0009] US 2005/0175992描述了一种用于快速诊断人体流体中的靶标的方法。具体地,采用侧流测定方法,其中使用拭子构件非侵入性地从眼液收集样本。
[0010] 因此,在本领域中需要用于从皮肤获得分析物和对其进行分析的试剂盒和方法,具体是允许快速检测的即时装置。与现有技术相比,本领域中还需要用于即时装置的采样方法,所述即时装置可能以可再现和/或均匀的方式提供样本。

发明内容

[0011] 鉴于上述现有技术完成了本发明,并且本发明的目的是提供一种诊断试剂盒,其用于检测取自哺乳动物皮肤表面的测试样本内的一种或多种测试分析物的存在或量。
[0012] 本发明的一个方面提供了一种诊断试剂盒,其用于检测从哺乳动物皮肤表面获得的测试样本内的一种或多种测试分析物的存在或量,所述诊断试剂盒包括:
[0013] a)被配置用于收集所述测试样本的单独拭子(200、301),其中所述拭子包括附接到支撑构件(202)的样本收集垫(201、101),
[0014] b)被配置为接受并保持所述单独拭子的侧流测定装置(300)。
[0015] 发明人还提供了修改的侧流测定以分析例如皮肤中的IL-1a、IL-1RA和IL-8的水平。因此,本发明的第二方面提供了一种用于检测一种或多种测试分析物的存在或量的方法,所述方法包括以下步骤:
[0016] a)提供如本文限定的包括样本收集垫(201)的单独拭子(200),其中所述样本垫包括使用所述单独拭子从受试者的皮肤表面获得的测试样本;
[0017] b)将包括含有所述测试样本的样本收集垫的所述拭子插入到如前述权利要求中任一项中限定的适于接收所述单独拭子插件的侧流测定装置中;
[0018] c)进行所述侧流测定。附图说明
[0019] 图1示出了本发明的多孔支撑组件(100)(也称为侧流测定条)的不同实施例的透视图。在图1a中,多孔支撑组件(100)被示为具有样本垫(101)、结合垫(102)、检测区(105)和指示剂区(106)(两个区均固定在多孔支撑件(107)上)、芯吸垫(104)和背衬材料(108)。
“L”示出侧流的方向,并且区域“DA”限定检测区域。图1b示出了多孔支撑组件,其中样本垫(101)与剩余的多孔支撑组件分离。图1c示出了图1a的替代实施例,其中样本垫(101);结合垫(102);多孔支撑件(107)上的检测区(105)和指示剂区(106);和芯吸垫(104)邻接或重叠,并且放置在背衬材料(108)上。图1d示出了图1c的侧流条,其中样本垫(101)与剩余的多孔支撑组件分离。
[0020] 图2在本发明的实施例中示出了单独拭子(200)的不同视图,该拭子包括支撑构件(202),其中孔(205)在支撑构件(202)的远端(204)处。公开的单独拭子(200)不具有或具有附接并覆盖孔的周边的样本收集垫(201)。支撑构件(202)包括在支撑构件(202)的边缘之一上的切口(206)。切口(206)被配置为与侧流装置(300)上的凸起(303)相互作用,以将拭子的位置定向并固定在侧流装置(300)中的插入位置。图2进一步公开了单独拭子(200)的实施例,其中支撑构件(202)的近端(203)的宽度延伸以形成手指握持部。
[0021] 图3在本发明的实施例中示出了侧流装置(300)的不同视图,其中单独拭子(200)插入样本垫狭槽(306)中,该狭槽包括凸起(303),该凸起被配置为与单独拭子(200)的切口(206)相互作用以将单独拭子(200)定向和定位在侧流装置(300)中。侧流装置(300)包括保持构件(302),该保持构件可以在单独拭子(200)上方闭合并且将拭子保持并定在侧流装置(300)中的插入位置中。保持构件(302)包括开口(304),该开口在保持部件的锁定位置中与样本收集垫(201)对准,使得样本收集垫暴露于通过开口(304)引入的运行缓冲液并且可由其接近。侧流装置(300)还包括允许视觉检查检测区域(DA)的反应窗口(305)。
[0022] 图4示出了体外测试不同材料以用于样本收集的结果。使用80μl标准蛋白质溶液(包含2ng/ml IL8、4ng/ml IL1A和8ng/ml IL1RA重组蛋白的PBS)作为测试样本。信号强度以mV为单位进行测量。
[0023] 图5示出了在体(in vivo,体内)测试选定材料以用于样本收集的结果。图5A(前额)和图5B(内臂)。信号强度以mV为单位进行测量。
[0024] 图6示出了比较前臂皮肤内侧上的封闭样本垫(C083)和对应未封闭样本垫的结果。信号强度以mV为单位进行测量。
[0025] 图7示出了比较样本收集规程(在体)的结果。图7A(前额)和图7B(面颊)。三名志愿者(JA/AL和AS)。信号强度以mV为单位进行测量。
[0026] 图8示出了比较两名志愿者(JA和AL)的在体不同擦拭规程的结果。在5cm2的区域内通过Z形运动进行5秒钟的收集。信号强度以mV为单位进行测量。
[0027] 图9示出了在样本收集之前对皮肤进行预处理的效果以及预处理持续的时间。图9A(皮肤的水预处理)、图9B(皮肤的EtOH预处理)和图9C(使用化妆进行的皮肤预处理)。
浅灰色条(IL1A)。深灰色条(IL1RA)。信号强度以mV为单位进行测量。
[0028] 鉴于本公开的益处,本领域普通技术人员将认识到,图1至图5所示的某些特征不一定按比例绘制。附图中的一些特征的尺寸和特性相对于附图中的其他特征可能已经被放大、变形或改变,以便有助于更好地理解本文公开的说明性示例。
[0029] 本领域普通技术人员将进一步认识到,附图的单独特征可以互换以获得进一步实施例。

具体实施方式

[0030] 在描述本发明的实施例时,为了清楚起见,将采用特定的术语。然而,本发明不旨在限于如此选择的特定术语,并且应理解,每个特定术语包括以相似方式操作以实现相似目标的所有技术等同物。
[0031] 本发明的第一方面提供了一种诊断试剂盒,其用于检测取自哺乳动物皮肤表面的测试样本内的一种或多种测试分析物的存在或量,所述诊断试剂盒包括:
[0032] a)被配置用于收集所述测试样本的单独拭子(200、301),其中所述拭子包括附接到支撑构件(202)的样本收集垫(201、101),
[0033] b)被配置为接受并保持所述单独拭子的侧流测定装置(300)。
[0034] 本发明的诊断试剂盒可以用于即时检验装置中,以检测使用诊断试剂盒的单独拭子(200)从皮肤获得的测试样本内的一种或多种测试分析物的存在或不存在。
[0035] 本发明的诊断试剂盒的单独拭子被配置为适合于从哺乳动物的皮肤表面收集测试样本。在一个优选实施例中,哺乳动物是人类。拭子(200、301)包括支撑构件(202),样本收集垫(201、101)附接到该支撑构件,优选地附接在支撑构件的一侧上。当从皮肤收集样本时,支撑构件(202)通常用作柄部,例如通过将样本收集垫(201、101)放置在皮肤上,并且使用支撑构件(202)在皮肤上四处移动垫以控制该移动。
[0036] 在一个实施例中,支撑构件是细长的,例如构件的长度是构件的宽度的至少2倍,诸如构件的宽度的2.5倍、诸如构件的宽度的3倍、诸如构件的宽度的至少4倍。在一个实施例中,支撑构件被配置有:被配置为手指握持部的一个近端(203)以及所述样本收集垫(201、101)所附接的相对远端(204)。近端(203)的形状可以被配置为允许在两个或更多个手指之间牢固地握持支撑构件(202)。图2公开了一个示例,其中支撑构件(202)的近端
(203)的宽度延伸以提供更好的手指握持部。因此,在一个实施例中,支撑构件的近端(203)比远端(204)更宽。在一个实施例中,支撑构件的近端(203)的面积和形状对应于成年人拇指指肚,从而允许牢固地握持支撑构件。
[0037] 在一个实施例中,支撑构件(202)沿着支撑构件的纵向轴线是柔性的。支撑构件(202)可以由作为柔性材料的材料制成,使得当样本收集垫(201、101)被压靠皮肤并在皮肤上四处移动以收集样本材料时,支撑构件(202)将略微弯曲。支撑构件(202)的柔性减小了伤害皮肤的险。在优选实施例中,支撑构件(202)由塑料制成,例如支撑构件(202)可以由塑料材料制成,其中塑料材料的厚度小于约2mm,诸如1mm或更小、诸如在2mm与0.5mm之间、诸如在2mm与1mm之间,从而使得支撑构件(202)沿纵向轴线是柔性的。
[0038] 在本发明的优选实施例中,支撑构件(202)的远端(204)包括被配置为由样本收集垫(201、101)覆盖的孔(205)。在该实施例中,附接到支撑构件(202)的样本收集垫(201、101)覆盖孔和孔的周边。在一个实施例中,所述样本收集垫(201、101)附接到支撑构件
(202),使得所述样本收集垫覆盖所述孔(205)。
[0039] 样本收集垫(201、101)可以在孔周边附近附接到支撑构件(202)。样本收集垫(201、101)可以更远离孔周边附接到支撑构件(202)。样本收集垫(201、101)通常附接到支撑构件(202)的一侧。在一个实施例中,孔(205)的面积对应于样本收集垫(201、101)的面积的至少50%,诸如样本收集垫的面积的至少60%,例如样本收集垫的至少70%、诸如样本收集垫的至少70%、例如样本收集垫的至少80%、诸如样本收集垫的至少90%、例如样本收集垫的至少95%。
[0040] 在插入侧流装置(300)中时,拭子(200)的样本收集垫(201、101)形成多孔支撑组件(100)的一部分,即样本收集垫与组件的其他元件接触。该孔允许进入样本收集垫(201、101)以添加运行缓冲液以便促进多孔支撑组件中的侧流。在本发明的上下文中,运行缓冲液是适合于促进多孔支撑组件中的侧流的任何液体缓冲液,诸如PBS缓冲液。
[0041] 样本收集垫(201、101)由适合于在皮肤上收集测试样本的材料制成,并且随后与多孔支撑组件(100)配合并形成其一部分,以及将测试样本释放到多孔支撑组件(100)。在一个实施例中,样本收集垫(201、101)由以下制成:纤维素材料、纤维素衍生物(诸如硝化纤维素)、聚醚砜、聚乙烯、尼龙聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚酯、聚丙烯、玻璃纤维、棉或布。在优选实施例中,样本收集垫(201、101)由纤维素材料、纤维素衍生物(诸如硝化纤维素)制成。
[0042] 样本收集垫(201、101)可能以片材等的形式。在一个实施例中,样本收集垫(201、101)以具有一个或多个片材的层的形式,诸如具有两个片材的层。
[0043] 样本收集垫(201、101)的平均厚度优选小于2mm,诸如在1至0.80mm的范围内、优选小于1mm、诸如小于0.95mm、例如小于0.85mm、诸如在0.85至0.80mm的范围内、诸如为0.83mm。在一个实施例中,样本收集垫(201、101)以具有两个片材的层的形式,其中每个片材的厚度小于0.50mm,诸如在0.49至0.40mm的范围内。
[0044] 为了防止或减小一种或多种测试分析物的吸收之间的任何偏差、或一种或多种测试分析物从样本收集垫(201、101)释放时的任何偏差,样本收集垫(201、101)可以用封闭缓冲液进行预处理。在一个实施例中,封闭缓冲液是包括1%BSA的PBS缓冲液或包括10mM酸盐、3%的BSA、1%的PVP-40和0.25%的Triton X100 pH 8.0的缓冲液。
[0045] 在一个特定实施例中,样本收集垫(201、101)为用封闭缓冲液预处理的纤维素材料或纤维素衍生物(诸如硝化纤维素)的形式,其中样本收集垫(201、101)的厚度在0.85至0.80mm的范围内,诸如0.83mm。
[0046] 在本发明的优选实施例中,单独拭子(200)的支撑构件(202)包括在所述支撑构件(202)的远端(204)的边缘上或附近的切口(206)。侧流装置(300)包括凸起(303),当拭子插入侧流装置(300)中时,该凸起与支撑构件(202)上的切口(206)配合并且对所述支承部件(202)的远端(204)进行定向并定位。因此,凸起/切口配置确保拭子并且具体地样本收集垫(201、101)被正确地定向并定位在侧流装置(300)中。因此,凸起/切口配置确保拭子并且具体是样本收集垫(201、101)只能插入侧流装置(300)中以使得拭子(200)的样本收集垫(201、101)形成多孔支撑组件(100)的一部分,即样本收集垫与组件的其他元件接触。因此,在一个实施例中,单独拭子(200)包括在所述支撑构件(202)的远端(204)的边缘上或附近的切口(206),并且侧流装置(300)包括凸起(303),该凸起与支撑构件上的切口(206)配合,使得当插入侧流装置(300)中时,拭子(200)的样本收集垫(201、101)形成多孔支撑组件
(100)的部分,即样本收集垫与组件的其他元件接触。
[0047] 在本发明的另一个实施例中,侧流装置(300)包括开口(304),该开口配置为与拭子的孔(205)对准以使得当拭子插入侧流装置中时,样本收集垫(201、101)通过所述开口(304)暴露。尽管样本收集垫(201、101)可以用运行缓冲液预先润湿,但开口可以添加(更多)运行缓冲液,其中单独拭子(100)处于在侧流装置(300)中的插入状态。
[0048] 当与凸起/切口配置结合使用时,样本收集垫(201、101)相对于开口正确对准以使得将运行缓冲液添加到样本收集垫(201、101)。
[0049] 在一个实施例中,侧流装置包括样本垫狭槽(306),该样本垫狭槽被配置为接收所述拭子的远端以使得确保了样本收集垫(201、101、301)在侧流装置中的位置。
[0050] 在另一个实施例中,侧流装置包括保持构件(302),该保持构件被配置为保持所述拭子的远端并固定包括所述样本收集垫(201、101)的所述拭子的远端的位置。在另一实施例中,保持构件通过铰链附接到侧流装置的主体。在打开状态下,可以将包括样本收集垫(201、101、301)的所述支撑构件(202)的远端(204)插入装置中,被配置为接受所述拭子的远端的样本垫狭槽(306)的存在可以进一步促进插入。在闭合位置中,保持构件围绕样本收集垫(201、101、301)闭合,从而将样本收集垫(201、101、301)牢固地保持在侧流装置(300)中。在一个实施例中,保持构件(302)被配置为在所述拭子的远端上方向下闭合并锁定到侧流装置的主体。优选地,装置的保持构件(302)配置与凸起/切口配置结合使用,从而确保了拭子并且具体地样本收集垫(201、101)被正确地定向并定位在侧流装置(300)中。
[0051] 在优选实施例中,保持构件(302)包括开口(304),该开口被配置为与拭子的孔(205)对准以使得当拭子插入侧流装置中时,样本收集垫(201、101)通过所述开口(304)暴露。开口(304)可以是以端口的形式,诸如以锥形端口的形式,其中宽基部面向上并且窄基部面向下。在这种配置中,可以将(另外的)运行缓冲液添加到样本收集垫(201、101)中以便有助于多孔支撑组件(100)中的侧流。
[0052] 在本发明的上下文中,术语侧流(lateral flow)是指一种液体流动,其中溶解或分散的液体组分(包括测试分析物)与液体一起横向迁移通过多孔支撑组件(100,称为毛细管床或侧流带),前提是组分不会被永久性地截留或者通过其他方式被阻止在液体中迁移。依赖于这种侧流的测定被称为侧流测定。在多孔支撑组件优选地由非吸水材料制成的情况下,液体中的组分将以基本相等的速度行进通过毛细管床。如果多孔支撑组件由吸水材料制成,则一种或多种组分的迁移可能受到该材料的影响。如果多孔支撑组件包括吸水材料或由吸水材料组成,则可以用封闭剂(诸如包括BSA和/或Triton X-100的PBS缓冲液)处理该材料以便改变多孔支撑组件的特性,使得流动特性与非吸水材料的流动特性相同或基本相同。
[0053] 侧流测定基于多孔支撑组件(100)—毛细管床(诸如多孔纸或烧结聚合物)——具有通过毛细管的作用来运输流体的能力。多孔支撑组件(100)是多孔支撑元件的组件,在将流体(诸如运行缓冲液)施加到组件时,所述元件彼此流体连通。多孔支撑组件(100)的多孔支撑元件之一是样本收集垫(101、200),当拭子在侧流装置中处于插入位置时,样本收集垫成为多孔支撑组件(100)的部分。多孔支撑组件(100)也被称为侧流测定条。
[0054] 在本发明的一个实施例中,侧流装置被构造成当其与附接到所述拭子的样本收集垫配合时形成多孔支撑组件(100),其中与样本收集垫配合的侧流装置(300)包括洗脱区(101)、结合区(102)和检测区域(DA)。
[0055] 结合区可以是多孔支撑组件(100)的较大的多孔元件的整合部分,诸如多孔支撑条(107)。结合区也可以是为多孔支撑组件(100)的元件的形式。在优选实施例中,结合区是以结合垫(102)的形式。
[0056] 样本收集垫(101、200)起海绵的作用并保持测试样本。一旦其被浸泡,包含一种或多种测试分析物的测试样本将从样本收集垫(101、200)迁移到多孔支撑组件(100)的相邻元件中。样本收集垫(101、200)和多孔支撑组件的相邻元件之间的中间相称为洗脱区。多孔支撑组件的相邻元件通常是结合区,优选地以结合垫(102)的形式。结合区/结合垫(102)通常包含一个或多个指示剂亲和分子,诸如用检测探针标记的亲和分子,其被设计为与测试样本中的一种或多种测试分析物接合。将测试样本和一种或多种亲和分子混合,并且针对测试样本中的一种或多种测试分析物具有亲和力的一种或多种亲和分子将相互接合并同时进一步迁移到检测区域(DA),该检测区域(DA)可以包含检测区(105)并且可以包括指示剂区(106),这两个区具有一个或多个条带,另一组的一个或多个亲和分子已被固定在其中。在与来自结合垫中的亲和分子混合的测试样本到达检测区域(DA)时,测试样本中的一种或多种分析物将接合到来自结合垫的亲和分子。然后,该复合物将继而由检测区(105)中的条带上的亲和分子接合。在一段时间后,当越来越多的流体经过检测区时,检测探针积聚并且条带改变颜色。检测探针可以是例如结合到亲和分子以制备用检测探针标记的亲和分子的金或乳胶颗粒。检测区域(DA)还可以包括指示剂区(106),该指示剂区可以用作对照以验证是否已正确地进行了侧流测定。这种指示剂区(106)还可以包括一个或多个固定有亲和力分子的条带,这些条带仅接合到用来自结合垫的检测探针标记的亲和力分子,然而检测区(105)中的亲和分子接合到分析物和指示剂亲和分子之间的复合物,诸如用来自结合垫的检测探针标记的亲和分子。在经过检测区域(DA)之后,流体进入芯吸垫(104),该芯吸垫通常接收已经迁移通过整个多孔支撑组件(100)的流体。因此,在一个实施例中,检测区域(DA)包括含有用于选择性地保留一种或多种测试分析物的一个或多个亲和分子的检测
区(105),并且任选地包括含有一个或多个亲和分子的指示剂区(106),以用于选择性地保留一个或多个指示剂亲和分子。
[0057] 检测区(105)可以位于指示剂区(106)的上游或下游。检测器区或指示剂区中的线或条带可以沿基本垂直于测试样本的流动的方向设置。在一些实施例中,线可以沿基本平行于测试样本的流动的方向。检测区(105)或指示剂区(106)中的线或条带不需要是线或条带,并且也可以是其他形状(例如点或图案)。
[0058] 在一个实施例中,侧流装置还包括芯吸垫(104)。芯吸垫是多孔支撑组件(100)的部分,并且可以帮助促进毛细作用以及从样本垫(101)、结合垫(102)通过检测区域(DA)的流体流动。
[0059] 在另一个实施例中,侧流装置包括在所述多孔支撑组件(100)的背离洗脱区的背侧上的背衬材料(108)。背衬层(108)是液体不可渗透的,使得流过多孔支撑组件(100)的流体不会通过背衬层(108)泄漏。用于支撑件的合适材料的示例包括但不限于:玻璃;聚合材料,诸如聚苯乙烯、聚丙烯、聚酯、聚丁二烯、聚氯乙烯、聚酰胺、聚酸酯、环化物、甲基丙烯酸酯和聚三聚氰胺。
[0060] 多孔支撑组件(100)是两个或更多个多孔元件(例如一个或多个多孔元件)和样本收集垫(201、101)的组件,其中将包括样本收集垫的拭子(200)插入侧流测定装置(300)中。
元件优选地为薄膜的形式,诸如片状薄膜。多孔支撑组件(100)可以具有等于或小于4mm(诸如小于4、3、2、1mm)的厚度,以及大于该厚度的宽度和长度。在一些实施例中,多孔支撑组件(100)的宽度和长度都大于厚度(例如,大3、4、5、6、7、8、9、10、50倍或高达4、5、6、7、8、9、10、
50倍)。在一些实施例中,多孔支撑组件(100)是方形的(诸如矩形),并且在一些实施例中,多孔支撑组件(100)是圆形的。如果多孔支撑组件(100)是不规则形状(即不同于方形或矩形),则宽度、长度和厚度是指这种不规则形状的最大值。例如,圆的宽度将为直径。宽度和长度的示例可以是4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、
26、27、28、29、30、35、40mm,例如宽度和长度的范围从5至30mm。
[0061] 因此,在一个实施例中,侧流装置(300)的多孔支撑组件(100)具有等于或小于4mm的平均厚度,以及大于该厚度的宽度和长度,其中侧流装置被配置为在由多孔支撑组件的宽度和长度形成的平面的方向上具有侧流方向(L)。
[0062] 在一个实施例中,侧流装置包括被配置用于视觉检查检测区域(DA)的反应窗口(305)。
[0063] 本发明的诊断试剂盒可以用于测试皮肤上存在并且可使用单独拭子(200)来获得的分析物。在一个实施例中,一种或多种测试分析物选自由以下组成的列表:趋化因子、白介素、生长因子、激素、酶和哺乳动物皮肤上存在的其他分子,诸如选自由以下组成的列表:
IL-1a、IL-1b、IL-1RA、IL-8、CCL-2、CCL-5、CCL-27、CXCL-1、CXCL-2、CXCL-9、Trappin2/Elafin、hBD-1、hBD-2、VEGF和TSLP。在优选实施例中,测试分析物是IL-8、IL-1a和IL-1RA的组合。
[0064] 如所提到的,本发明的诊断试剂盒可以用于即时检验装置中,以检测使用诊断试剂盒的单独拭子(200)从皮肤获得的测试样本内的一种或多种测试分析物的存在或不存在。可以视觉上完成读出,即在检测区(105)中是否存在一条或多条彩色测试线(也称为测试条带),并且可以通过在指示剂区(106)中的一个或多个彩色指示剂线/条带的存在和/或不存在来完成测试的确认/验证。测试可能是定性的(存在或不存在)以及定量的,并且检测/定量可以通过读数装置来辅助,或者可以纯粹是由侧流测定的用户的眼睛进行的视觉检测。
[0065] 本发明的一个方面提供了一种用于检测一种或多种测试分析物的存在或量的方法,该方法包括以下步骤:
[0066] a)提供如本文限定的包括样本收集垫(201)的单独拭子(200),其中所述样本垫包括使用所述单独拭子从受试者的皮肤表面获得的测试样本;
[0067] b)将包括含有所述测试样本的样本收集垫的所述拭子插入到如前述中任一项中限定的适于接收所述单独拭子插件的侧流测定装置中;
[0068] c)进行侧流测定。
[0069] 本发明的另一个方面提供了一种用于检测一种或多种测试分析物的存在或量的方法,该方法包括以下步骤:
[0070] a)使用包括所限定的样本收集垫(201)的单独拭子(200)从受试者的皮肤表面收集测试样本,
[0071] b)将包括含有所述测试样本的样本收集垫的所述拭子插入到如前述中任一项中限定的适于接收所述单独拭子插件的侧流测定装置中;
[0072] c)进行侧流测定。
[0073] 受试者是哺乳动物,优选是人类。使用包括样本收集垫(201)的单独拭子(200)来获得测试样本,该单独拭子被施加到哺乳动物的皮肤,优选地是人类的皮肤。皮肤的区域例如可以是额头、脸颊、内臂、或通常暴露于阳光下的手臂部分。可以将单独拭子施加到预定区域,诸如不超过5cm2的区域。也可能以预定时间,诸如5秒或30秒来施加单独拭子。也可以通过施加拭子的预定运动(诸如拭子在皮肤上的z形运动)来收集测试样本。
[0074] 可以通过用固定体积的流体润湿样本收集垫(201)来辅助采样。在优选实施例中,在样本收集之前用缓冲液(诸如用固定体积的缓冲液)预先润湿单独拭子(200)的样本收集垫(201)。缓冲液可以是任何合适的缓冲液(诸如PBS缓冲液)。用于预润湿样本收集垫的缓冲液可以是在该规程的侧流测定步骤中用作运行缓冲液的相同缓冲液。
[0075] 在另一个优选实施例中,将运行缓冲液添加到插入侧流测定装置中的样本收集垫。将运行缓冲液添加到插入到侧流测定装置中的样本收集垫中,以促进或提供足够的流体以用于多孔支撑组件(100)中的侧流和测定的进行。在侧流装置(300)中存在开口(304)的情况下,开口可以用作将运行缓冲液添加到插入装置中的样本收集垫(201)的端口。
[0076] 在一个实施例中,侧流测定装置包括洗脱区(101)和检测区(DA),并且其中所述样本收集垫是洗脱区(101)。
[0077] 在另一个实施例中,侧流装置被构造成当其与附接到所述拭子的样本收集垫配合时形成多孔支撑组件(100),其中与样本收集垫配合的侧流装置(300)包括洗脱区(101)、结合区(102)和检测区域(DA)。
[0078] 在一个实施例中,多孔支撑组件(100)具有等于或小于4mm的厚度,以及大于该厚度的宽度和长度,其中侧流装置被配置为基本上在由多孔支撑组件(100)的宽度和长度形成的平面的方向上具有侧流方向(L)。
[0079] 在另一个实施例中,检测区域(DA)包括含有用于选择性地保留一种或多种测试分析物的一个或多个亲和分子的检测区(105),并且任选地包括含有用于选择性地保留一个或多个指示剂亲和分子的一个或多个亲和分子的指示剂区(106)。
[0080] 总体上,本发明涉及提供集成系统的诊断套件,其用于在从一种或多种测试分析物的可能浓度的广泛范围内,检测从皮肤获得的测试样本内的一种或多种测试分析物的存在或不存在。在一些实施例中,也在定量测定中检测一种或多种测试分析物的量。诊断试剂盒采用侧流测定装置(300)和单独拭子(200、301)以及用于检测测试样本内的一种或多种测试分析物的一种或多种测定试剂。测定试剂包括用检测探针标记的亲和分子,这些检测探针能够产生表示试验样本中的一种或多种测试分析物的存在或量的检测信号。量化一种或多种测试分析物的一种方式是使用一种或多种测试分析物的已知浓度来制备合适的标准曲线。
[0081] 使用本发明的方法来测定的一种或多种测试分析物可以选自由以下组成的列表:趋化因子、白介素、生长因子、激素、酶和哺乳动物皮肤上存在的其他分子,诸如选自由以下组成的列表:IL 1a、IL 1b、IL 1RA、IL8、CCL 2、CCL 5、CCL 27、CXCL 1、CXCL 2、CXCL 9、Trappin2/Elafin、hBD 1、hBD 2、VEGF和TSLP。在优选实施例中,测试分析物是IL-8、IL-1a和IL-1RA的组合。
[0082] 如果需要,在一些实施例中,可以使用合适的读取装置(诸如光学读取器)来测量探针的强度。光学读取器的实际配置和结构通常可以取决于要测量的探针而变化。例如,可利用的光学检测技术包括但不限于发光(例如,荧光磷光等)、吸光度(例如,荧光或非荧光)、衍射等。根据本发明可以实现对分析物的存在或浓度的定性、定量或半定量确定。例如,可通过使用接合在检测区(105)和指示剂区(106)处的检测探针所产生的信号强度来定量或半定量地确定分析物的量。
[0083] 在优选实施例中,使用用于捕获图像的合适装置(诸如包括相机的蜂窝电话)来捕获检测区域(DA)的图像。随后可以将图像传输到包括图像处理器和数据库计算机系统(例如,远程定位的服务器),其中分析图像,例如通过提取图像特征并将特征与存储在数据库中的对应特征进行比较。然后,计算机系统可以基于所述图像特征生成输出数据,该输出数据可以被传输给用户,例如回到用于捕获图像的蜂窝电话。
[0084] 因此在本发明的一个实施例中,本发明的方法还包括步骤d):捕获检测区域(DA)的图像并且将所述图像传输到包括图像处理器和数据库的计算机系统,其中由图像处理器从图像中提取图像特征并且将所述图像特征存储在所述数据库中,并且其中所述计算机系统基于所述图像特征生成至少一个输出数据。在另一实施例中,使用移动装置(诸如被配置为捕获图像的蜂窝电话)来捕获图像。在又一个实施例中,将由计算机系统生成的输出数据传输到移动装置。
[0085] 当描述本发明的实施例时,没有明确描述所有可能实施例的组合和排列。然而,某些措施在互不相同的实施例中叙述或在不同的实施例中进行描述的事实并不意味着不能有利地使用这些措施的组合。本发明设想了所描述的实施例的所有可能的组合和排列。
[0086] 发明人希望本文中的术语“包括(comprising)”、“包含(comprise)”和“涵括(comprises)”在每种情况下分别可选地分别替换为术语“由…组成(consisting of)”、“由…构成(consist of)”和“由…组构成(consists of)”。
[0087] 在以下非限制性项目中进一步描述本发明。
[0088] 项目1.一种诊断试剂盒,其用于检测取自哺乳动物皮肤表面的测试样本内的一种或多种测试分析物的存在或量,所述诊断试剂盒包括:
[0089] a)被配置用于收集所述测试样本的单独拭子(200、301),其中所述拭子包括附接到支撑构件(202)的样本收集垫(201、101),
[0090] b)被配置为接受并保持所述单独拭子的侧流测定装置(300)。
[0091] 项目2.根据项目1所述的诊断试剂盒,特征为,所述侧流测定装置(300)包括一个或多个多孔元件,并且其中当所述单独拭子(200、301)插入所述侧流测定装置(300)中时,所述样本收集垫(201、101)被配置为形成多孔支撑组件(100)的部分。
[0092] 项目3.根据项目1或2所述的诊断试剂盒,特征为,所述支撑构件被配置有:被配置为手指握持部的一个近端(203),以及附接所述样本收集垫(201)的相对远端(204)。
[0093] 项目4.根据项目1至3中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述支撑构件(202)沿着支撑构件的纵向轴线是柔性的。
[0094] 项目5.根据项目1至4中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述支撑构件(202)的所述远端(204)包括被配置为由所述样本收集垫(201)覆盖的孔(205)。
[0095] 项目6.根据项目1至5中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述样本收集垫(201、101)附接到所述支撑构件(202),使得所述样本收集垫覆盖所述孔(205)。
[0096] 项目7.根据项目1至6中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述孔(205)的面积对应于所述样本收集垫(201、101)的面积的至少50%,诸如所述样本收集垫的面积的至少60%,例如所述样本收集垫的至少70%、诸如所述样本收集垫的至少70%、例如所述样本收集垫的至少80%、诸如所述样本收集垫的至少90%、例如所述样本收集垫的至少95%。
[0097] 项目8.根据项目1至7中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述样本收集垫(201、101)由以下制成:纤维素材料、纤维素衍生物(诸如硝化纤维素)、聚醚砜、聚乙烯、尼龙聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚酯、聚丙烯、玻璃纤维、棉或布。
[0098] 项目9.根据项目1至8中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述样本收集垫(201、101)用封闭缓冲液进行预处理,所述封闭缓冲液诸如是包括1%BSA的PBS缓冲液或包括
10mM硼酸盐、3%BSA、1%PVP-40和0.25%Triton X100 pH 8.0的缓冲液。
[0099] 项目10.根据项目1至9中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述样本收集垫(201、101)为片材或类似物的形式。
[0100] 项目11.根据项目1至10中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述样本收集垫(201、101)为具有一个或多个片材的层的形式,诸如具有两个片材的层。
[0101] 项目12.根据项目1至11中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述样本收集垫(201、101)的厚度小于2mm,诸如在1至0.80mm的范围内、优选小于1mm、诸如小于0.95mm、例如小于0.85mm、诸如在0.85至0.80mm的范围内。
[0102] 项目13.根据项目1至12中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述样本收集垫(201、101)为具有两个片材的层的形式,其中每个片材的厚度小于0.50mm,诸如在0.49至
0.40mm的范围内。
[0103] 项目14.根据项目1至13中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述样本收集垫(201、101)以用封闭缓冲液预处理的纤维素材料、纤维素衍生物(诸如硝化纤维素)的形式,其中所述样本收集垫(201、101)的厚度在0.85至0.80mm的范围内。
[0104] 项目15.根据项目1至14中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述支撑构件由塑料材料制成。
[0105] 项目16.根据项目1至15中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述支撑构件(202)由作为柔性材料的材料制成,使得当所述样本收集垫(201、101)被压靠所述皮肤并在所述皮肤上四处移动以收集所述测试样本时,所述支撑构件(202)将略微弯曲。
[0106] 项目17.根据项目1至16中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述支撑构件由塑料材料制成,其中所述塑料材料的厚度小于约2mm,诸如1mm或更小、诸如在2mm与0.5mm之间、诸如在2mm与1mm之间。
[0107] 项目18.根据项目1至17中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述支撑构件(202)的所述远端(204)的一个边缘包括切口(206),并且其中所述侧流装置包括凸起(303),所述凸起被配置为在所述拭子插入所述侧流装置中时对所述支撑构件的远端进行定向和定位。
[0108] 项目19.根据项目1至18中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述侧流装置包括开口(304),所述开口被配置为与所述拭子的所述孔(205)对准以使得当所述拭子插入所述侧流装置中时,所述样本收集垫(201、101)通过所述开口(304)暴露。
[0109] 项目20.根据项目1至19中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述侧流装置包括样本垫狭槽(306),所述样本垫狭槽被配置为接收所述拭子的所述远端以使得确保所述样本收集垫(201、101、301)在所述侧流装置中的位置。
[0110] 项目21.根据项目1至20中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述侧流装置包括保持构件(302),所述保持构件被配置为保持所述拭子的所述远端并固定包括所述样本收集垫(201、101)的所述拭子的所述远端的位置。
[0111] 项目22.根据项目1至21中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述保持构件通过铰链附接到所述侧流装置的所述主体。
[0112] 项目23.根据项目1至22中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述保持构件(302)被配置为在所述拭子的远端上方折叠并且锁定到所述侧流装置的所述主体。
[0113] 项目24.根据项目1至23中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述保持构件(302)包括所述开口(304)。
[0114] 项目25.根据项目1至24中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述开口(304)是以端口的形式,诸如以锥形端口的形式,其中宽基部面向上并且窄基部面向下。
[0115] 项目26.根据项目1至25中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述哺乳动物是人类。
[0116] 项目27.根据项目1至26中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述侧流装置被构造成当其与附接到所述拭子的所述样本收集垫配合时形成多孔支撑组件(100),其中与所述样本收集垫配合的所述侧流装置(300)包括洗脱区(101)、结合区(102)和检测区域(DA)。
[0117] 项目28.根据项目1至27中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述结合区是为结合垫(102)的形式。
[0118] 项目29.根据项目1至28中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述侧流装置还包括芯吸垫(104)。
[0119] 项目30.根据项目1至29中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述侧流装置包括在所述多孔支撑组件(100)的背离所述洗脱区的背侧上的背衬材料(108)。
[0120] 项目31.根据项目1至30中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述多孔支撑组件具有等于或小于4mm的平均厚度,以及大于所述厚度的宽度和长度,其中所述侧流装置被配置为在由所述多孔支撑组件(100)的宽度和长度形成的平面的方向上具有侧流方向(L)。
[0121] 项目32.根据项目1至31中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述检测区域(DA)包括含有用于选择性地保留一种或多种测试分析物的一个或多个亲和分子的检测区(105),并且任选地包括含有用于选择性地保留一个或多个指示剂亲和分子的一个或多个亲和分子的指示剂区(106)。
[0122] 项目33.根据项目1至32中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述侧流装置包括被配置用于视觉检查所述检测区域(DA)的反应窗口(305)。
[0123] 项目34.根据项目1至33中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述一种或多种测试分析物选自由以下组成的列表:趋化因子、白介素、生长因子、激素、酶和哺乳动物皮肤上存在的其他分子,诸如选自由以下组成的列表:IL 1a、IL 1b、IL 1RA、IL 8、CCL 2、CCL 5、CCL 27、CXCL 1、CXCL 2、CXCL 9、Trappin2/Elafin、hBD 1、hBD 2、VEGF和TSLP。
[0124] 项目35.根据项目1至34中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述测试分析物是IL-8、IL 1a和IL 1RA。
[0125] 项目36.根据项目1至35中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,它还包括单独容器,所述单独容器包括适合于预润湿所述单独拭子(200)的所述样本垫的缓冲液。
[0126] 项目37.根据项目36所述的诊断试剂盒,特征为,所述单独容器包括运行缓冲液。
[0127] 项目38.根据项目1至37中任一项所述的诊断试剂盒,特征为,所述单独拭子(200)包括在所述支撑构件(202)的远端(204)的边缘上或附近的切口(206),并且所述侧流装置(300)包括凸起(303),所述凸起与所述支撑构件上的所述切口(206)配合,使得当插入所述侧流装置(300)中时,所述拭子(200)的所述样本收集垫(201、101)形成所述多孔支撑组件(100)的一部分。
[0128] 项目39.一种用于检测一种或多种测试分析物的存在或量的方法,所述方法包括以下步骤:
[0129] a)提供如前述项目中任一项限定的包括样本收集垫(201)的单独拭子(200),其中所述样本垫包括使用所述单独拭子从哺乳动物的皮肤表面获得的测试样本;
[0130] b)将包括含有所述测试样本的样本收集垫的所述拭子插入到如前述项目中任一项中限定的适于接收所述单独拭子插件的所述侧流测定装置中;
[0131] c)开发所述侧流测定装置。
[0132] 项目40.根据项目39所述的方法,还包括将运行缓冲液添加到插入所述侧流测定装置中的样本收集垫。
[0133] 项目41.根据项目39至40中任一项所述的方法,其中所述侧流测定装置包括洗脱区(101)和检测区(DA),并且其中所述样本收集垫是所述洗脱区(101)。
[0134] 项目42.根据项目39至41中任一项所述的方法,其中所述哺乳动物的皮肤表面是人类的皮肤。
[0135] 项目43.根据项目39至42中任一项所述的方法,其中所述侧流装置被构造成当其与附接到所述拭子的所述样本收集垫配合时形成多孔支撑组件(100),其中与所述样本收集垫配合的所述侧流装置(300)包括洗脱区(101)、结合区(102)和检测区域(DA)。
[0136] 项目44.根据项目39至43中任一项所述的方法,其中所述多孔支撑组件(100)具有等于或小于4mm的厚度,以及大于所述厚度的宽度和长度,其中所述侧流装置被配置为基本上在由所述多孔支撑组件(100)的宽度和长度形成的平面的方向上具有侧流方向(L)。
[0137] 项目45.根据项目39至44中任一项所述的方法,其中所述检测区域(DA)包括含有用于选择性地保留一种或多种测试分析物的一个或多个亲和分子的检测区(105),并且任选地包括含有用于选择性地保留一个或多个指示剂亲和分子的一个或多个亲和分子的指
示剂区(106)。
[0138] 项目46.根据项目39至45中任一项所述的方法,其中所述测试分析物是IL-8、IL 1a和IL 1RA。
[0139] 项目47.根据项目39至46中任一项所述的方法,还包括步骤d):捕获所述检测区域(DA)的图像,并且将所述图像传输到包括图像处理器和数据库的计算机系统,其中由所述图像处理器从所述图像中提取所述图像特征并且将所述图像特征存储在所述数据库中,并且其中所述计算机系统基于所述图像特征生成至少一个输出数据。
[0140] 项目48.根据项目47所述的方法,其中使用移动装置(诸如被配置为捕获图像的蜂窝电话)来捕获所述图像。
[0141] 项目49.根据项目48所述的方法,其中将由所述计算机系统生成的输出数据传输到所述移动装置。
[0142] 项目50.根据项目39至49中任一项所述的方法,其中所述样本收集垫(201、101)用封闭缓冲液进行预处理,所述封闭缓冲液诸如是包括1%BSA的PBS缓冲液或包括10mM硼酸盐、3%BSA、1%PVP-40和0.25%Triton X100 pH 8.0的缓冲液。
[0143] 项目51.根据项目39至50中任一项所述的方法,其中在样本收集之前预润湿所述样本收集垫(201、101)。
[0144] 实施例
[0145] 样本垫材料和处理
[0146] 实施例1-样本垫材料的体外测试
[0147] 测试不同的材料作为样本收集材料。
[0148] 执行用于样本收集和释放的最佳材料的体外测试。将80μ0标准蛋白溶液(包含2ng/ml IL8、4ng/ml IL1A和8ng/ml IL1RA重组蛋白的PBS)移液到封口膜上,并且用1×1cm件的不同可能样本垫材料(封闭和未封闭)吸附它。将样本垫在室温下温育5分钟,插入SELF盒中,用FibroTx样本垫载体(透明塑料条,移除样本垫)覆盖,关闭盒,并且施加80μ0运行缓冲液(PBS+1%Tween20),在通过Qiagen ESEQuant LR3侧流读取器运行20分钟后读取结果,信号强度结果以mV为单位表示。
[0149]
[0150]
[0151] 在图4中呈现数据。
[0152] 与相同材料的已封闭样本垫相比,未封闭样本垫导致IL1A测试线上的更低信号强度,并且同时无法释放足够的IL1RA导致大多数被测样本垫产生可检测测试线。已封闭样本垫产生可检测的IL1RA。
[0153] 实施例2-样本垫材料的在体测试
[0154] 对于在体测试,选择了基于体外结果的最佳材料:选择C083、C048(2层)、111(2层)、222(均已封闭)来对皮肤进行测试。还包括第一FibroTx样本垫(C095,未封闭)。
[0155] 将样本垫放置在皮肤上并用FibroTx样本垫绷带覆盖(移除样本垫)。应用90μl PBS并且将样本垫在皮肤上温育15分钟。将样本垫插入盒(包括垫载体)中,施加80μl运行缓冲液(PBS+1%Tween20),在通过Qiagen ESEQuant LR3侧流读取器运行20分钟后读取结果,信号强度结果以mV为单位执行。并行地测试来自日晒区域(前额)和未日晒区域(前臂内侧)的皮肤。
[0156]
[0157]
[0158] 在图5A(前额)和图5B(内臂)中呈现数据。
[0159] 在皮肤上,C083给出来自前额和内臂皮肤的最强信号,因此该材料被选作FibroTx SELF的样本采集垫。
[0160] 实施例3-在体测试封闭缓冲液
[0161] 对于这种材料,测试了2种不同的封闭缓冲液:
[0162] ·更简单的溶液:1%BSA+PBS
[0163] ·更复杂的溶液:10mM硼酸盐、3%BSA、1%PVP-40、0.25%Triton-X100,pH8.0[0164] 在前臂皮肤内侧上测试封闭样本垫(C083)并且将其与未封闭样本垫进行比较。
[0165] 将样本垫放置在皮肤上并用FibroTx样本垫绷带覆盖(移除样本垫)。应用90μl PBS并且将样本垫在皮肤上温育15分钟。将样本垫插入盒(包括垫载体)中,施加80μl运行缓冲液(PBS+1%Tween20),在通过Qiagen ESEQuant LR3侧流读取器运行20分钟后读取结果,信号强度结果以mV为单位显示。
[0166]
[0167] 用更复杂的封闭缓冲液封闭的C083样本垫清楚地显示出通过FibroTx SELF测试皮肤的最佳结果。在图6中呈现数据。
[0168] 实施例4-在体样本收集规程
[0169] 通过在皮肤上温育样本垫(用绷带固定在皮肤上)或通过在皮肤上擦拭(涂擦/擦涂)样本垫,可以从皮肤获得生物标志物样本。对这些方法进行比较以查看是否可以使用擦拭来简化客户的样本收集并缩短总体测试时间。
[0170] 通过皮肤上的样本垫温育的样本收集:
[0171] 将样本垫(C083已封闭)放置在皮肤上并用FibroTx样本垫绷带覆盖。施加2滴活化缓冲液(PBS)并将样本垫在皮肤上保持10分钟。
[0172] 替代性样本收集方法——在皮肤上擦涂样本垫:
[0173] 向志愿者指示将2滴PBS加到样本垫上,从绷带移除具有载体的垫,并且用2种不同的方式在皮肤上擦涂样本垫(没有从任一侧接触样本垫区域)。
[0174] a)以Z形运动涂擦样本收集区域
[0175] b)在约5cm的区域内以圆周运动涂擦样本收集区域持续5秒钟。
[0176] 在以上述任何一种方法进行样本收集后,将样本垫插入盒中(包括垫载体),施加2滴运行缓冲液(PBS),在通过Qiagen ESEQuant LR3侧流读取器运行20分钟后读取结果,信号强度结果以mV为单位表示。
[0177]
[0178]
[0179] 在图7A(前额)和图7B(面颊)中呈现数据。
[0180] 以Z形运动擦拭皮肤可能获得太少量的样本(前额)。
[0181] 出于美容目的,选择了通过擦拭来进行样本收集,因为它加大地缩短和简化客户的样本收集。
[0182] 还测试了更长的擦拭时间。
[0183] 将2滴PBS添加到样本垫并且以3种不同方式在皮肤上擦拭:
[0184] ·以Z形运动涂擦样本收集区域
[0185] ·在约5cm的区域内以圆周运动涂擦样本收集区域持续5秒钟。
[0186] ·在约5cm的区域内以圆周运动涂擦样本收集区域持续30秒钟。
[0187] 收集样本后,将样本垫离心以洗脱包含所收集的样本的PBS,使用酶联免疫吸附测定来确定生物标志物水平,生物标志水平以ng/ml为单位表示。
[0188]
[0189] 在图8中呈现数据。
[0190] 与Z形运动相比,5”擦拭从皮肤获得的材料多2倍。更长的擦拭时间(30”)确实会增加获得的材料量,但擦拭超过10”会致使样本垫材料的碎裂(取决于客户进行的擦拭的强度和压力),并且因此可能不建议用于功能测试。
[0191] 实施例5-测试前的皮肤处理效果的在体测试
[0192] 分析在进行SELF测试之前的皮肤处理/清洗的效果,以确定在此类处理后在皮肤上应用SELF绷带之前所需的时间。
[0193] 用mQ水/乙醇或化妆棉润湿的棉垫将内臂涂擦10次。
[0194] 每个处理旁边都有对照/未处理样本,取3个对照的平均值。
[0195] 在该处理后的不同时间,将样本垫(C083已封闭)放置在皮肤上并用FibroTx样本垫绷带覆盖。施加80μl活化缓冲液(PBS)并将样本垫在皮肤上温育15分钟。将样本垫插入盒中,施加80μl运行缓冲液(PBS),在通过Qiagen ESEQuant LR3侧流读取器运行20分钟后读取结果,信号强度结果以mV为单位表示。
[0196]
[0197]
[0198] 在图9中呈现数据。
[0199] a)用70%乙醇洗涤似乎具有最大的影响,主要是对IL1RA水平。
[0200] b)在所有处理中,IL1A和IL1RA处理后均略有下降(未从健康皮肤中检测到IL8)。
[0201] c)在5分钟后,IL1A和IL1RA的水平似乎恢复。
[0202] d)在皮肤测试之前,客户可以遵循他/她的常规皮肤护理例程:执行定期清洗/清洁并且每天应用乳霜/乳液/精华液等。
[0203] e)仍然不建议在皮肤测试前3天对您的皮肤采取极端的规程,例如深度日光浴、化学/机械去皮等(除非研究本身要求),并且在皮肤测试期间不要带着厚重/油性的乳霜/精华素/乳液或厚妆(例如,遮瑕膏、彩妆霜、紧致粉饼等),因为这可能会影响结果的成果。
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