专利汇可以提供污水中残留药物降解菌的筛选方法及所用培养基专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 提供了污 水 中残留药物降解菌的筛选方法及所用培养基。本发明的筛选污水中可降解残留药物的菌株的方法包括:将污水样本在液体BM培养基中扩大培养,经过梯度稀释后再在固体BM培养基上涂布平板培养,初步筛选得到污水中的菌株;其中,所述BM培养基包括:每1000mL液体培养基中含有0.4-0.6g NaCl、1-2g NH4Cl、1-2g K2HPO4、0.25-0.75g KH2PO4和0.1-0.3g MgSO4,加入超纯水至1000mL;每1000mL固体培养基中可在液体培养基 基础 上含有14-16g琼脂。本发明的技术能有效地筛选到对药物降解效率高的工程菌株。,下面是污水中残留药物降解菌的筛选方法及所用培养基专利的具体信息内容。
1.一种筛选污水中可降解残留药物的菌株的方法,该方法包括:
将污水样本在液体BM培养基中扩大培养,经过稀释后再在固体BM培养基上涂布平板培养,初步筛选得到污水中的菌株;
其中,所述BM培养基包括:
每1000mL液体培养基中含有0.4-0.6g NaCl、1-2g NH4Cl、1-2g K2HPO4、0.25-0.75g KH2PO4和0.1-0.3g MgSO4,加入超纯水至1000mL;
每1000mL固体培养基中含有0.4-0.6g NaCl、1-2g NH4Cl、1-2g K2HPO4、0.25-0.75g KH2PO4、0.1-0.3g MgSO4和14-16g琼脂,加入超纯水至1000mL。
2.根据权利要求1所述的方法,该方法还包括:
在FM培养基中加入两种以上不同浓度的污水残留药物的混合物,接种初步筛选得到的菌种,培养24h以上后,利用Agilent HP1100液相色谱质谱联用技术检测培养基中药物含量,进一步筛选除药物降解菌。
3.根据权利要求2所述的方法,其中,所述FM培养基包括:
每1000mL液体培养基中含有0.4-0.6g NaCl、1-2g NH4Cl、1-2g K2HPO4、0.4-0.6g KH2PO4、0.1-0.3g MgSO4、0.75-1.25g蛋白胨、0.25-0.75g酵母膏,加入超纯水至1000mL。
4.根据权利要求2所述的方法,其中,所述污水残留药物选自以下中的至少两种:头孢氨苄(Cefalexin)、氯霉素(Chloramphenicol)、萘普生(Naproxen)、新诺明(Sulfamethoxazole)、咖啡因(Caffeine)、水杨酸(Salicylic acid)。
5.根据权利要求1所述的方法,该方法包括:
取1-2mL从城市污水处理厂采集的污水样本,加入到15-20mL BM液体培养基中,调节转速为150-200RPM,温度为26-30℃,放置在摇床上培养3-5天;
将富集的培养液分别按照1X、3X、5X、10X的稀释比例,再次加入到BM液体培养基中培养
24-48h;
之后将各个梯度的培养液分别涂布于BM固体培养基上,在26-30℃的条件下倒置培养
3-5天;
将培养的菌株进一步在新的平板上分离纯化,得到初步筛选的菌株,根据颜色、形态和
16S rRNA基因的序列比对结果,将分离纯化的菌分类。
6.根据权利要求5所述的方法,该方法还包括:
选取以下药物中的至少两种:头孢氨苄(Cefalexin)、氯霉素(Chloramphenicol)、萘普生(Naproxen)、新诺明(Sulfamethoxazole)、咖啡因(Caffeine)、水杨酸(Salicylic acid),混合后,按照0.1ppm和1ppm两种浓度分别加入灭过菌的FM液体培养基中;
在无菌操作条件下,将初步筛选的菌株富集培养后分别接种于上述加入残留药物的灭过菌的FM培养基中,26-30℃,150-200RPM培养3-5天;
培养得到的混合液离心,之后用Oasis HLB纯化柱和Agilent HP1100液相色谱质谱串联法分离和检测药物含量,筛选出药物降解菌。
7.一种用于筛选污水中可降解残留药物的菌株的培养基,该培养基包括液体和/或固体形式的改进的BM培养基,所述改进的BM培养基包括:
每1000mL液体培养基中含有0.4-0.6g NaCl、1-2g NH4Cl、1-2g K2HPO4、0.25-0.75g KH2PO4和0.1-0.3g MgSO4,加入超纯水至1000mL;
每1000mL固体培养基中含有0.4-0.6g NaCl、1-2g NH4Cl、1-2g K2HPO4、0.25-0.75g KH2PO4、0.1-0.3g MgSO4和14-16g琼脂,加入超纯水至1000mL。
8.根据权利要求7所述的培养基,该培养基还包括液体形式的改进的FM培养基,所述改进的FM培养基包括:
每1000mL液体培养基中含有0.4-0.6g NaCl、1-2g NH4Cl、1-2g K2HPO4、0.4-0.6g KH2PO4、0.1-0.3g MgSO4、0.75-1.25g蛋白胨、0.25-0.75g酵母膏,加入超纯水至1000mL。
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