豆芋花多糖的提高免疫力用途
阅读：397发布：2022-10-01
专利汇可以提供豆芋花多糖的提高免疫力用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种豆芋花多糖的提高免疫 力 用途，为医学、食品科学等领域开发天然免疫增强剂提供新资源。本发明中的豆芋花多糖经免疫功能评价实验证明，可以显著增强免疫抑制小鼠的细胞免疫、体液免疫和固有免疫功能，作用效果全面且显著。因此，本发明的豆芋花多糖应用于制备免疫增强型食品或药品，以增强亚健康等免疫低下人群的免疫功能。，下面是豆芋花多糖的提高免疫力用途专利的具体信息内容。
1.豆芋花多糖的提高免疫力用途，其特征在于：用于制备增强机体免疫力的食品或药物。
2.根据权利要求1所述的豆芋花多糖的提高免疫力用途，其特征在于：
所述增强机体免疫力的食品或药物为增加免疫抑制体重的食品或药物。
3.根据权利要求1所述的豆芋花多糖的提高免疫力用途，其特征在于：
所述增强机体免疫力的食品或药物为增强胸腺指数和脾脏指数的食品或药物。
4.根据权利要求1所述的豆芋花多糖的提高免疫力用途，其特征在于：
所述增强机体免疫力的食品或药物为增强白细胞和淋巴细胞数量的食品或药物。
5.根据权利要求1所述的豆芋花多糖的提高免疫力用途，其特征在于：
所述增强机体免疫力的食品或药物为增强单核-巨噬细胞功能的食品或药物。
6.根据权利要求1所述的豆芋花多糖的提高免疫力用途，其特征在于：
所述增强机体免疫力的食品或药物为增强体液免疫的食品或药物。
7.根据权利要求1所述的豆芋花多糖的提高免疫力用途，其特征在于：
所述增强机体免疫力的食品或药物为增强免疫球蛋白分泌的食品或药物。
8.根据权利要求1所述的豆芋花多糖的提高免疫力用途，其特征在于：
所述增强机体免疫力的食品或药物为调节细胞因子分泌水平的食品或药物。
9.根据权利要求1-8任一所述的豆芋花多糖的提高免疫力用途，其特征在于：
所述豆芋花多糖的制备方法包括以下步骤：
①、按照1g：4～6ml的料液比将豆芋花和蒸馏水混合后先进行提取，然后打浆，再离心，取上清液抽滤并收集滤液；
②、将步骤①离心所得的滤渣代替豆芋花按步骤①重复提取两次，合并三次滤液，旋蒸浓缩得到浓缩液；
③、将步骤②所得浓缩液于搅拌条件下加入乙醇至乙醇终浓度为80±5％，4±1℃下静置24±2h后收集沉淀，得豆芋花粗多糖；
④、将步骤③所得豆芋花粗多糖经正丁醇－三氯甲烷法除蛋白后再经活性炭加热脱色一小时，抽滤后过得到多糖溶液，旋蒸浓缩得到其浓缩液；
⑤、将步骤④所得多糖溶液的浓缩液在-70～-90℃预冻5～7h，然后用真空冷冻干燥机将其干燥成粉末状，得到豆芋花多糖。
豆芋花多糖的提高免疫力用途
技术领域
[0001] 本发明涉及医药领域，具体涉及一种豆芋花多糖的提高免疫力用途。
背景技术
[0002] 豆芋(ApiosamericanaMedikus)原产于北美洲东部的加拿大至美国佛罗里达州的南部地区，属多年生豆科植物(蝶形花科亚科)。其可食用部分为地下块茎，且其蛋白质含量高于其他植物块茎，是一种既营养又有经济价值的作物，因而常被印第安人作为主食。豆芋自2009年国内引种成功，并被逐渐在富阳、金华、龙游、温州等地推广种植。研究表明豆芋不同部位(花、藤、叶、块茎)均含有丰富的游离氨基酸、可溶性蛋白、多糖、皂苷、黄酮、异黄酮、维生素C、维生素E和矿物质等成分。其中，豆芋花的维生素C含量最高，同时还含有较高含量的维生素E、总皂苷和异黄酮，具有极大的开发潜力。
[0003] 然而随着现代生活水平的提高及生活方式的变更，生活节奏的加快和社会压力的增大，令越来越多人的健康亮起“黄灯”——被亚健康困扰。免疫力是人体自身的防御机制，当免疫力长时间比较低下，通常被称为亚健康状态。在我国，亚健康人群约占总人口数的60％，而北京、上海和广州三大城市人群的亚健康发生率更超过70％，许多重大疾病的发生、发展均与不注重日常保健以及免疫力低下密切相关。但对于豆芋花提取物的提高免疫力功能鲜有报道，因而以豆芋为原料开发免疫调节功能性食品具有重要意义。
发明内容
[0004] 本发明目的在于提供一种豆芋花多糖的提高免疫力用途，为医学、食品科学等领域开发天然提高免疫增强剂提供新资源。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明提供一种豆芋花多糖的提高免疫力用途：
[0007] 作为本发明豆芋花多糖的提高免疫力用途的改进：
[0008] 所述增强机体免疫力的食品或药物为增加免疫抑制体重的食品或药物(即，缓解环磷酰胺造成体重下降的食品或药物)。
[0009] 作为本发明豆芋花多糖的提高免疫力用途的进一步改进：
[0010] 所述增强机体免疫力的食品或药物为增强胸腺指数和脾脏指数的食品或药物。
[0011] 作为本发明豆芋花多糖的提高免疫力用途的进一步改进：
[0012] 所述增强机体免疫力的食品或药物为增强白细胞和淋巴细胞数量的食品或药物。
[0013] 作为本发明豆芋花多糖的提高免疫力用途的进一步改进：
[0014] 所述增强机体免疫力的食品或药物为增强单核-巨噬细胞功能的食品或药物。
[0015] 作为本发明豆芋花多糖的提高免疫力用途的进一步改进：
[0016] 所述增强机体免疫力的食品或药物为增强体液免疫的食品或药物。
[0017] 作为本发明豆芋花多糖的提高免疫力用途的进一步改进：
[0018] 所述增强机体免疫力的食品或药物为增强免疫球蛋白分泌的食品或药物。
[0019] 作为本发明豆芋花多糖的提高免疫力用途的进一步改进：
[0020] 所述增强机体免疫力的食品或药物为调节细胞因子分泌水平的食品或药物。
[0021] 作为本发明豆芋花多糖的提高免疫力用途的进一步改进：
[0022] 所述豆芋花多糖的制备方法包括以下步骤：
[0023] ①、按照1g：4～6ml的料液比将豆芋花和蒸馏水混合后先进行提取，然后打浆，再离心，取上清液抽滤并收集滤液；
[0024] ②、将步骤①离心所得的滤渣代替豆芋花按步骤①重复提取两次，合并三次滤液，旋蒸浓缩得到浓缩液(旋蒸浓缩至原体积的1/4～1/6，得浓缩液)；
[0025] ③、将步骤②所得浓缩液于搅拌条件下加入乙醇至乙醇终浓度为80±5％，4±1℃下静置24±2h后收集沉淀，得豆芋花粗多糖；
[0026] ④、将步骤③所得豆芋花粗多糖经正丁醇－三氯甲烷法除蛋白后再经活性炭加热脱色一小时，抽滤后过得到多糖溶液，旋蒸浓缩得到其浓缩液(旋蒸浓缩直至为原体积的8～12％)；
[0028] 本发明公开了一种豆芋花多糖的提高免疫力用途，为医学、食品科学等领域开发天然免疫增强剂提供新资源。本发明中的豆芋花多糖经免疫功能评价实验证明，可以显著增强免疫抑制小鼠的细胞免疫、体液免疫和固有免疫功能，作用效果全面且显著。因此，本发明的豆芋花多糖应用于制备免疫增强型食品或药品，以增强亚健康等免疫低下人群的免疫功能。
[0029] 本发明的豆芋花多糖的用法为口服，用量每次约150～250mg，每日三次。
[0030] 本发明同现有技术相比，具有以下优点：
[0031] 1、本发明首次发现豆芋花多糖能够显著增强免疫抑制小鼠的细胞免疫、体液免疫和固有免疫功能，作用广泛，效果显著，具有良好的开发前景。
[0033] 图1为本发明中不同浓度豆芋花多糖对小鼠体重的影响。
[0034] 图2为本发明中不同浓度豆芋花多糖对小鼠胸腺指数的影响。
[0035] 图3为本发明中不同浓度豆芋花多糖对小鼠脾脏指数的影响。
[0036] 图4为本发明中不同浓度豆芋花多糖对小鼠体液免疫功能的影响。
[0037] 图5为本发明中不同浓度豆芋花多糖对小鼠血清免疫球蛋白A(IgA)的影响。
[0038] 图6为本发明中不同浓度豆芋花多糖对小鼠血清免疫球蛋白G(IgG)的影响。
[0039] 图7为本发明中不同浓度豆芋花多糖对小鼠血清免疫球蛋白M(IgM)的影响。
[0040] 图8为本发明中不同浓度豆芋花多糖对小鼠血清γ-干扰素(IFN-γ)的影响。
[0041] 图9为本发明中不同浓度豆芋花多糖对小鼠血清白细胞介素-2(IL-2)的影响。
[0042] 图10为本发明中不同浓度豆芋花多糖对小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)的影响。
[0044] 注：本发明图1～图11中：
[0045] Control代表对照组(灌胃生理盐水)；
[0046] CTX代表模型组(灌胃生理盐水)；
[0047] LMS代表阳性对照组(灌胃50mg/(kg·d)左旋咪唑)；
[0048] L代表低剂量组(灌胃100mg/(kg·d)豆芋花多糖)；
[0049] M代表中剂量组(灌胃200mg/(kg·d)豆芋花多糖)；
[0050] H代表高剂量组(灌胃400mg/(kg·d)豆芋花多糖)。
具体实施方式
[0051] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
[0052] 实施例1、豆芋花多糖的提高免疫力用途，如图1-图11所示，豆芋花多糖具有显著的提高免疫力效果。
[0053] 豆芋花多糖具体制备步骤如下：
[0054] (1)、称取豆芋花100g，按料液比1g∶5ml加入500mL蒸馏水，90℃水浴80min进行灭酶处理，然后打浆，经4000r/min离心15min，取上清液抽滤并收集滤液。
[0055] (2)、将步骤(1)离心所得的滤渣代替步骤(1)中豆芋花，重复提取2次，合并三次滤液，旋蒸浓缩得到浓缩液(旋蒸浓缩至原体积的1/5)。
[0056] (3)、将步骤(2)中所得浓缩液于搅拌条件下加入纯乙醇至乙醇终浓度为80％，4℃下静置24h后收集沉淀为豆芋花粗多糖。
[0057] (4)、豆芋花粗多糖经正丁醇－三氯甲烷法除蛋白(Sevage法脱蛋白)后再经活性炭加热脱色一小时，抽滤后过得到多糖溶液，旋蒸浓缩得到其浓缩液(约为原体积的10％)。
[0058] 注：上述正丁醇－三氯甲烷法除蛋白及活性炭加热脱色均采用现有技术，故不再此处对其进行详细介绍。
[0059] (5)、将步骤(4)所得的多糖溶液的浓缩液在-80℃预冻6h，然后用真空冷冻干燥机将其干燥成粉末状，得到豆芋花多糖。
[0060] 用上述方法制备获得的豆芋花多糖进行干预由环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠，检测其免疫功能相关指标，具体步骤为：
[0061] 1、实验动物分组与处理；
[0062] SPF级ICR雄性小鼠60只，实验动物按体重平均分为6组：空白对照组、环磷酰胺(CTX)模型组、阳性药左旋咪唑组(LMS)和豆芋花多糖低(L)、中(M)、高(H)剂量组。除了空白对照组外，其它各个组小鼠于给药的第1、3、5、7、9、16、18、20、22d皮下注射CTX(40mg/kg)造模。空白对照组用生理盐水(0.1mL/10g)进行灌胃，阳性对照组用LMS[50mg/(kg·d)]进行灌胃，低、中、高剂量组分别用100mg/(kg·d)，200mg/(kg·d)，400mg/(kg·d)豆芋花多糖进行灌胃，连续灌胃30天后测定各项指标。
[0063] 2、记录豆芋花多糖对免疫抑制小鼠体重的影响：
[0064] 给药第一天开始，每隔3天称一次各组小鼠体重，共10次。
[0065] 如图1可知，与对照组相比模型组小鼠体重显著降低，阳性对照组及各豆芋花多糖处理组同模型组相比体重趋于恢复正常。以上结果表明豆芋花多糖能够缓解环磷酰胺造成的小鼠体重下降。
[0066] 实施例2、豆芋花多糖对免疫抑制小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响；
[0067] 将实施例1中按步骤1灌胃30天后的小鼠处死，摘取小鼠胸腺和脾脏称重，计算小鼠胸腺指数和脾指数。
[0068] 结果如图2和图3所示，与空白对照组相比，模型组小鼠胸腺指数和脾脏指数显著降低。阳性对照组及各豆芋花多糖处理组同模型组相比胸腺指数和脾脏指数趋于恢复正常，且中剂量组和高剂量组均能显著提高免疫低下小鼠的胸腺指数和脾脏指数。
[0069] 实施例3、豆芋花多糖对免疫抑制小鼠外周血常规的影响；
[0070] 将实施例1中按步骤1灌胃30天后的小鼠，以摘除小鼠眼球的方法采集全血，采用干净无菌的眼科镊子摘取小鼠一侧或双侧眼球，让血液自由滴入装有抗凝剂的1.5ml离心管(或商品化的抗凝管)中，采血过程中不断混匀血液与抗凝剂防止血液凝固，每只动物采集抗凝全血约1ml。上机前血液颠倒混匀，注意检查是否存在凝块。在24h内以全血细胞分析仪检测白细胞总数和淋巴细胞数，上机操作参照仪器说明书，具体检测结果如表1所示。
[0071] 表1 豆芋花多糖对免疫抑制小鼠外周血常规的影响
[0072]
[0073] 结果如表1所示，同对照组相比环磷酰胺能够显著降低血液中白细胞数量和血小板数目，同时提高血液中红细胞和血红蛋白含量。同模型组相比，豆芋花多糖处理组能够显著提高免疫低下小鼠血液中白细胞和血小板的数目，同时缓解由环磷酰胺引起的血液中红细胞和血红蛋白的增加。
[0074] 实施例4、豆芋花多糖对免疫抑制小鼠单核-巨噬细胞功能的影响；
[0075] 在一定范围内，碳颗粒的清除速率与其剂量呈指函数关系。以血碳浓度对数值为纵座标，时间为横座标，两者呈直线关系。此直线斜率(K)可表示吞噬速率。动物肝、脾重量影响吞噬速率，一般以校正吞噬指数α表示。
[0076] 各组小鼠处死前从小鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁(原液稀释4倍)，按每10g体重0.1mL计算。待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2min和10min分别从内眦静脉丛取血20μl，并立即将其加到2mL 0.1％Na2CO3溶液中。用分光光度计或全自动酶标仪在600nm波长处测光密度值(OD)，以Na2CO3溶液作空白对照。将小鼠处死，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，称重。按下式计算吞噬指数α：
[0077] 吞噬指数α＝体重/(肝重+脾重)*k1/3
[0078] k＝(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)
[0079] 其中，α为吞噬指数；k为廓清指数；OD1为t1时的吸光度值；OD2为t2时的吸光度值；t1为给墨汁后第一次取血的时间；t2为给墨汁后第二次取血的时间。
[0080] 结果如表2所示，同对照组相比环磷酰胺造模组小鼠的廓清指数和吞噬指数均显著下降。而阳性药物和不同剂量的豆芋花多糖干预后均能显著提高免疫低下小鼠的廓清指数和吞噬指数。以上结果表明，豆芋花多糖能够显著改善由环磷酰胺造成的小鼠单核-巨噬细胞功能的下降，提高机体免疫。
[0081] 表2.豆芋花多糖对免疫抑制小鼠单核-巨噬细胞功能的影响
[0082]
[0083] 实施例5、豆芋花多糖对免疫抑制小鼠体液免疫功能的影响；
[0085] 绵羊红细胞(SRBC)的制备：从健康绵羊颈部静脉采血，立即与两倍体积量阿氏液(Alsever)混勻，置于4℃冰箱中保存备用。临用时取上述保存的绵羊红细胞，用生理盐水洗涤3次，每次2000rpm，离心5min，每次弃上清液，最后用生理盐水配成所需浓度。
[0086] 补体制备：取膝鼠8只，腹主动脉釆血，离心分离血清，临用时用生理盐水1：10稀释。
[0087] 设样品孔和空白对照孔，样品孔：取血清10μl，用1mL1：5稀释的SA缓冲液稀释；每孔加入稀释后的血清100μl；空白对照孔：每孔加入100μl1：5稀释SA缓冲液，再依次加入10％(v/v)SRBC50μl，补体100μl(用SA溶液或PBS溶液按1：8稀释)，置37℃恒温水浴中保温
30min，1500r/min离心10min。然后样品孔和空白对照孔各取上清液50μl加入另一个96孔培养板内，加都氏试剂150μl。同时设半数溶血孔，加入10％(v/v)SRBC12.5μl，再加都氏试剂至200μl。用震荡器充分混匀，放置10min后，于540nm处用全自动酶标仪测定各孔光密度值。
溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示，按下列公式计算：
30min，1500r/min离心10min。然后样品孔和空白对照孔各取上清液50μl加入另一个96孔培养板内，加都氏试剂150μl。同时设半数溶血孔，加入10％(v/v)SRBC12.5μl，再加都氏试剂至200μl。用震荡器充分混匀，放置10min后，于540nm处用全自动酶标仪测定各孔光密度值。
溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示，按下列公式计算：
[0088] HC50＝(样品光密度值-空白光密度值)/(SRBC板书溶血时的光密度值-空白光密度值)*稀释倍数
[0089] 实验结果如图4所示，同对照组相比环磷酰胺造模组小鼠的半数溶血值(HC50)显著下降。而阳性药物和不同剂量的豆芋花多糖干预后均能显著提高免疫低下小鼠的半数溶血值(HC50)。以上结果表明，豆芋花多糖能够显著改善由环磷酰胺造成的小鼠体液免疫的下降，提高机体体液免疫。
[0090] 实施例6、豆芋花多糖对免疫抑制小鼠血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM分泌的影响；
[0091] 将各组小鼠按实施例1中步骤1灌胃30天，并于末次给药后予小鼠禁食12小时，然后摘除眼球取血，使用离心机以1500r/min离心5分钟分离出血清，分别装于不同的离心管中，并转移至-80℃低温冰箱中贮存。按IgA、IgG、IgM试剂盒(武汉基因美生物科技有限公司)说明并参考文献用Elisa法进行环磷酰胺所致免疫抑制小鼠血清中IgA、IgM、IgG含量进行检测。
[0092] 结果如图5、图6和图7所示，同对照组相比环磷酰胺造模组小鼠的免疫球蛋白IgA、IgG、IgM分泌量显著下降。而阳性药物和不同剂量的豆芋花多糖干预后均能显著提高免疫低下小鼠的免疫球蛋白IgA、IgG、IgM分泌。以上结果表明，豆芋花多糖能够显著改善由环磷酰胺造成的小鼠免疫球蛋白含量的下降。
[0093] 实施例7、豆芋花多糖对免疫抑制小鼠血清细胞因子分泌水平的影响；
[0094] 将各组小鼠按实施例1中步骤1灌胃30天，并于末次给药后予小鼠禁食12小时，然后摘除眼球取血；使用离心机以1500r/min离心5分钟分离出血清，分别装于不同的离心管中，并转移至-80℃低温冰箱中贮存。按IFN-γ、IL-2、IL-6、TNF-α试剂盒(武汉基因美生物科技有限公司)说明并参考文献用Elisa法进行环磷酰胺所致免疫抑制小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-6、TNF-α含量进行检测。
[0095] 结果如图8、图9、图10和图11所示，同对照组相比环磷酰胺造模组小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-6、TNF-α分泌量显著下降。而阳性药物和不同剂量的豆芋花多糖干预后均能显著提高免疫低下小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-6、TNF-α分泌。以上结果表明，豆芋花多糖能够正向调节由环磷酰胺造成的小鼠血清中免疫相关细胞因子的分泌情况。
[0096] 综上本发明提出一种豆芋花多糖的提高免疫力用途，为医学、食品科学等领域开发天然免疫增强剂提供新资源。同时涉及豆芋花多糖在制备免疫增强剂中的应用。
[0097] 以上列举的仅为本发明的实施的若干实例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
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