为了解决以往使用生物农药见效慢,Bt单一制剂对夜蛾科害虫防治不佳, 化学农药毒性超标的问题,本发明研制了一种蔬菜田中防治害虫的生物源杀虫 复配剂,该杀虫复配剂的组成为:每100ml成品中含吐温-60或吐温-80:2克、
柠檬酸:1~3克、甲基
纤维素:1~4克、
硅藻土:0.2~0.4克、苯
甲酸钠:0.5~ 2克、
苏云金芽孢杆菌(Bacillus Thuringiensis)库斯塔克亚种HD-73(subsp.kurstaki) 芽孢数:2×109~7×109个、重量浓度为2.5%的success(菜喜):0.01~004ml。
本发明的苏云金芽孢杆菌(Bacillus Thuringiensis)库斯塔克亚种HD-73 (subsp.kurstaki)简称HD-73,所述HD-73为标准菌株(美国孟山都公司),它在 杀虫剂中起杀虫作用,即:苏云金芽孢杆菌在它的芽孢中会分泌一种称为“内 毒素”的
蛋白质晶体,这种内毒素是无毒的,昆虫吃了苏云金芽孢杆菌的芽孢 后,内毒素晶体在昆虫的肠道中溶解,并经过昆虫肠道中的蛋白酶加工,被激 活变成了有毒性的蛋白毒素,与肠道细胞表面上的受体结合,插入膜内,形成 孔洞或离子通道导致膜完全性的破坏,引起离子渗漏,水随之进入细胞,细胞 因膨胀而解体、死亡,最终昆虫死亡。
Success为美国陶氏益农惠赠,主要起辅助杀虫作用,是胃毒剂,Success 可以持续激活靶标昆虫乙酰胆
碱烟碱型受体,但是其结合位点不同于烟碱和吡 虫啉。
多杀菌素也可以影响GABA受体,来起杀虫作用。Success其主要成分为 spinosynA:C41H65NO16和spinosynB:C42H67NO16,分子结构式为:
本发明杀虫复配剂的杀虫谱为菜青虫、菜蛾、草地螟、油松毛虫、甘蓝夜 蛾等。
现有的苏云金芽孢杆菌生物农药普遍存在着杀虫见效慢的现象,一般是用 药后第4天开始效果比较明显,而使用本配方在当天或第二天的杀虫效果就比 较明显;同时,杀虫效果也比原来的苏云金芽孢杆菌生物农药杀虫效果明显。 从整体杀虫效果上来讲,本研究的杀虫配方的杀虫效果明显优于以往的同类产 品。
本发明研制的生物杀虫剂是高活性苏云金杆菌菌株和来自于微生物的 success复合制剂。通过生物测定方法和对芽孢活
力测定筛选出了与苏云金芽孢 杆菌相容性好的高活性生物杀虫剂success,并将其作为系列苏云金芽孢杆菌复 合杀虫剂的另一重要杀虫组分,通过室内测定、盆栽和田间小区防治试验,取 得了令人满意的防治效果,不但能提高苏云金芽孢杆菌的杀虫效果,而且能提 高苏云金芽孢杆菌杀虫的速效性,使
目标害虫致死时间提高24小时以上。此种 生物制剂配方在国内还尚属首次。本发明的生物农药是符合AA级绿色食品和 国际
有机农业生产标准的生物制剂。本发明解决了以往使用生物农药时见效慢 的问题;用生物农药代替传统的高毒、高残留的化学农药来解决农药毒性超标, 具有如下优点:
1、降低蔬菜中的农药残留;
2、
加速生物农药的见效时间;
3、降低农药对人、畜及害虫天敌的毒害作用;
4、减少化学农药对的环境污染、保持生态平衡,保持农业、林业的可持续 发展,适应人们对无公害农副产品、绿色食品的需求。
具体实施方式一:本实施方式的杀虫复配剂的组成为:每100ml成品中含 吐温-60或吐温-80:2克、柠檬酸:1~3克、甲基
纤维素:1~4克、
硅藻土: 0.2~0.4克、
苯甲酸钠:0.5~2克、HD-73芽孢数:2×109~7×109个、重量浓度 为2.5%的success:0.01~004ml。
本实施方式中芽孢计数按照如下方法进行:在无菌室内,向已培养好的斜 面中加入2ml无菌水,刮下菌苔,用移液器反复抽打使其在无菌水中充分混匀, 将菌液移入无菌小瓶中.然后按梯度稀释104~5倍;在血球计数板上滴几滴己稀 释的菌液,盖好盖玻片,在
显微镜下查数并记录平均每格芽孢个数,计算每毫 升菌液含芽孢数,求出原菌液浓度。
具体实施方式二:本实施方式的杀虫复配剂的组成为:每100ml成品中含 吐温-60或吐温-80:2克、柠檬酸:3克、甲基纤维素:4克、硅藻土:0.4克、 苯甲酸钠:2克、HD-73芽孢数:7×109个、重量浓度为2.5%的success:004ml。
具体实施方式三:本实施方式的杀虫复配剂的组成为:每100ml成品中含 吐温-60或吐温-80:2克、柠檬酸:1克、甲基纤维素:1克、硅藻土:0.2克、 苯甲酸钠:0.5克、HD-73芽孢数:2×109个、重量浓度为2.5%的success:0.01ml。
具体实施方式四:本实施方式的杀虫复配剂的组成为:每100ml成品中含 吐温-60或吐温-80:2克、柠檬酸:1.5克、甲基纤维素:2.6克、硅藻土:0.3 克、苯甲酸钠:1克、HD-73芽孢数:4×109个、重量浓度为2.5%的success: 0.02ml。上述杀虫剂的药效试验如下:
1、高活性苏云金杆菌菌株的筛选:
筛选方法:用甘蓝
叶片浸苏云金杆菌
发酵液,
风干后饲喂
小菜蛾,于24、 72、120、168小时观察小菜蛾的死亡情况,计算死亡率和校正死亡率。对照处 理是用清水浸甘蓝叶片。
经初步筛选,得到苏云金杆菌菌株HD-73的
杀虫活性在所选菌株中最强, 其校正死亡率为73.20%,具体结果见表1。
表147株苏云金杆菌菌株对菜蛾的室内生物测定
菌株 处理 24h 72h 120h 168h 死亡率 (%) 校正死亡 率(%) 死亡率 (%) 校正死 亡率(%) 死亡率 (%) 校正死亡 率(%) 死亡 率(%) 校正死亡 率(%) HD-73 平均 24.40 17.10 64.44 61.00 73.33 70.70 75.60 73.20 对照 平均 2.22 - 4.44 - 8.89 - 8.89 -
2、Success对Bt芽孢存活的影响:
将Bt菌液与Success混合10d,然后采用稀释法将HD-73稀释成含有一定 芽孢数的菌液,接入平皿培养基中培养48h,检测处理与对照的芽孢萌发率,确 定Success对Bt芽孢存活是否有伤害作用。结果表明,Success与Bt芽孢相容 性好,对芽孢无杀伤作用,从而确定Success是与Bt混用的理想的高效低毒的 杀虫组分,具体影响结果见表2。
表2 Success对菌株HD-73芽孢萌发的影响
处理 重复 菌落数 Success+HD-73 1 12 2 8 3 11
平均 10.3 HD-73 1 9 2 12 3 8 平均 9.7
3、苏云金杆菌与Success混用对主要蔬菜害虫的防效测定:
将HD-73菌种按每毫升含芽孢1×108的菌液,分别与稀释6000倍、9000 倍液的Success混用,对菜蛾进行室内、室外杀虫活性测定,通过2年试验结果 表明Success对苏云金杆菌有明显的增效作用,药后48~72h对菜蛾室内防效达 90%以上,田间小区防治效果稳定在80~85%以上。对菜青虫、甘蓝夜蛾的室 内防治效果分别为84~95%、60~70%,参见表3~8。
表3 Success混用对菜蛾防效的室内测定
处理 使用浓度 重复 死亡率 24h (%) 校正死 亡率 24h (%) 死亡率 48h (%) 校正死 亡率 48h (%) 72h 死亡率 (%) 校正死 亡率 72h (%) SUCCESS 9000倍液 1 33.33 30.21 46.67 42.86 53.33 48.77 2 40.00 37.19 53.33 49.99 60.00 56.09 3 33.33 30.21 33.33 28.56 46.67 41.46 平均 35.55 32.54 44.44 40.47 53.33 48.77 6000倍液 1 40.00 37.19 60.00 57.14 66.67 63.41 2 46.67 44.17 46.67 42.85 60.00 56.09 3 33.33 30.21 46.67 42.85 66.67 63.41 平均 40.00 37.19 51.11 47.61 64.45 60.97 平均 37.67 34.86 55.55 52.37 68.89 65.88
从表3可以看出:Success对菜蛾有一定的防治效果,但其防治效果仅为 48%~66%;将Success稀释到9000倍还是6000倍时对菜蛾防治的效果差异不 大。
表4菌株HD-73与success混配及二者单独使用时对甘蓝夜蛾的防治效果
处理 浓度 死亡率(%) 校正死亡率(%) 24h 48h 72h 96h 24h 48h 72h 96h HD-73 + Success 1×107/mL +3000倍 11.1 46.7 62.2 68.9 8.9 44.2 58.0 58.7 1×107/mL +6000倍 8.9 26.7 60 66.7 6.7 22.5 57.1 57.7 Success 3000倍 15.6 33.3 46.7 57.8 13.7 30.2 42.3 43.8 6000倍 9.4 19.0 50.0 52.4 7.1 15.0 44.6 36.0 HD-73 1.0×107 8.9 11.1 24.4 24.4 6.7 6.9 19.2 4.7
从表4可以看出:菌株HD-73与success混配合使用均优于二者单独作用时 对甘蓝夜蛾的防治效果,而且Success稀释到3000或6000倍时,对杀虫效果影 响不大。
表5 HD-73和20与success混配及单独使用时菜蛾的校正死亡率
处理 浓度 死亡率(%) 校正死亡率(%) 24h 48h 72h 24h 48h 72h HD-73 Success 10×108/mL+6000倍 61.7 88.3 100 61.0 87.2 100 10×108/mL+9000倍 56.7 80.0 95.0 56.0 78.2 94.4 5×107/mL+6000倍 61.7 81.7 96.7 61.0 80.0 96.3 5×107/mL+9000倍 51.7 75.0 88.3 50.9 72.7 86.8 Success 6000倍 35.0 63.3 78.3 33.9 60.0 75.5 9000倍 28.3 55.0 61.7 27.1 50.9 56.8 HD-73 1.0×108/mL 33.3 66.7 83.3 32.1 63.7 81.2 5×107/mL 25.0 55.0 71.7 23.7 50.9 68.1 水 - 1.7 8.3 11.3 - - -
从表5可以看出:HD-73与success混配的杀虫效果明显优于HD-73或 success的单独使用;同时,也可以看出Success稀释到9000倍还是6000倍与HD-73 混合使用对菜蛾的防治效果影响不大。
表6 HD-73与success混配及二者单独使用时对菜青虫的防治效果
处理 浓度(芽孢数) 死亡率(%) 校正死亡率(%) 24h 48h 72h 96h 24h 48h 72h 96h HD-73 Success 1.0×108/mL +3000倍 23.3 86.7 95 96.7 23.3 86.7 94.5 95.5 1.0×108/mL +6000倍 28.3 95 96.7 96.7 28.3 95 96.4 95.6 1.0×108/mL +9000倍 40.2 84.4 89.6 89.6 40.2 84.4 88.9 86.8 HD-73 + Success 5×107/mL +3000倍 20.3 88.3 90 91.7 20.3 88.3 89.4 89.7 5×107/mL +6000倍 20.4 89.9 95 95 20.4 89.9 94.5 93.4 5×107/mL +9000倍 36.7 73.3 85 88.3 36.7 73.3 84.1 85.5 Success 3000倍 39.4 76.4 93.2 96.7 39.4 76.4 92.9 95.8 6000倍 31.7 85 91.7 93.3 31.7 85 92.6 91.1 9000倍 8.7 62.9 71.7 80.6 8.7 62.9 69.4 75.4 HD-73 1.0×108 3.6 42.9 80.5 84 3.6 42.9 79.0 79.7 5×107 8.6 31.4 76.2 86.5 8.6 31.4 74.4 82.9
从表6可以看出:HD-73与Success混配的防治菜青虫的效果明显优于 HD-73或success的单独使用;同时,也可以看出Success稀释到9000倍、6000 倍还是3000倍与HD-73混合使用对菜蛾的防治效果影响不大。苏云金芽孢杆菌 HD-73的芽孢数为108时的杀虫效果略优于其芽孢数为109。
表7菌株与success及助剂混配后对菜蛾的防治效果
处理 浓度 死亡率(%) 校正死亡率(%) 24h 48h 72h 24h 48h 72h 助剂 200倍 0.0 44 6.7 0.0 1.2 00 复配剂 200倍 40.0 93.3 100.0 40.0 93.1 100.0
success 6000 28.3 73.3 100.0 28.3 72.4 100.0 success+HD-73 6000+ 5×107/ml 35.0 83.3 100.0 35.0 82.8 100.0
注:助剂是指配方中除了苏云金芽孢杆菌和success以外的其它成份组合。
从表7可以看出:助剂对菜蛾没有杀虫效果;复配剂、success、success+HD-73 对菜蛾均有较高的活性,但从不同的处理时间来看,本实施方式的复配剂对菜 蛾的防治效果最好,明显优于success、success+HD-73的防治效果。
4、生物杀虫剂的室内杀虫活性及田间防治效果(表9~12):
用本实施方式所配制的复配剂对菜蛾、菜青虫、甘蓝夜蛾、草地螟、松毛 虫等重要农林害虫进行杀虫活性测定。结果表明,对菜蛾防效达100%(48h)、 菜青虫89.1%(72h)、甘蓝夜蛾84.8%(72h)、草地螟86.7%(48h)、松毛虫91.7% (168h)。室外盆栽及小区试验,对菜蛾的防治效果达80~87%(48h)、97~100% (72h),对2龄甘蓝夜蛾的防治效果达70~100%(96h)。
表9菌株与Success及助剂混配后对草地螟的防治效果
处理 浓度 死亡率(%) 校正死亡率(%) 24h 48h 72h 24h 48h 72h 助剂 200倍 6.7 8.3 11.7 6.7 8.3 8.6 复配剂 200倍 500 86.7 98.3 50.0 86.7 98.2 Succcss+HD-73 6000 25.0 38.3 55.0 25.0 38.3 53.5
从表可9以看出:单独使用助剂时,对草地螟的杀虫效果不大,可以忽略; 复配剂对草地螟的杀虫效果明显优于success+HD-73对草地螟的防治效果。
表10 Bt制剂对油松毛虫的防治效果
处理 方法 稀释 倍数 校正死亡率(%) 72h 96h 120h 144h 168h Bt悬浮剂 300 3.45 20.69 39.66 48.28 80.91 100 5.17 18.97 37.93 46.55 82.27 复配剂 100 25.86 46.55 65.52 75.86 91.7 菌株HD-73 200 -1.72 1.72 1.72 6.90 9.09
注:Bt悬浮剂:8000IU/ml苏云金杆菌悬浮剂(武汉科诺生物农药有限公司)。
从表10可以看出:本实施方式的复配剂对松毛虫的杀虫效果优于Bt悬浮 剂和菌株HD-73。
表11田间小区菌剂对菜青虫的防治结果
处理方式 使用浓度 (v/v) 重复 虫口基数 (头) 死亡虫数(头) 死亡率(%) 校正死亡率(%) 24h 48h 72h 24h 48h 72h 24h 48h 72h CK(对照) 1 30 0 2 6 0 6.67 20 - - - 2 30 0 0 4 0 0 13.3 - - - 3 30 0 2 3 0 6.67 10 - - - 平均 30 0 133 433 0 4.44 14.4 - - - HD-73 150 1 30 20 26 28 66.67 86.67 93.33 66.67 85.71 91.66 2 30 19 27 28 63.33 90 93.33 63.33 90 92.62 3 30 19 26 27 63.33 86.67 90 63.33 85.71 88.32 平均 30 19.33 26.33 27.66 64.44 87.78 92.22 64.44 87.14 90.87 复配剂 150 1 30 21 28 29 70 93.33 96.67 70 93.02 96.10 2 30 21 23 29 70 76.67 96.67 70 75.58 96.10 3 30 24 28 29 80 93.33 96.67 80 93.02 96.10 平均 30 22 26.33 29 73.33 87.78 96.67 73.33 87.21 96.10
从表11可以看出:田间小区试验中,本实施方式的复配剂对菜青虫的杀虫 效果优于菌株HD-73单独防治效果。
表12 Bt复配剂对2种蔬菜害虫的田间小区防治试验
处理 浓度 防治对象 虫口减退率(%) 24h 48h 72h 96h 复配剂 150倍 菜蛾 56.6 86.7 100.0 100.0 76.7 80.0 96.7 100.0 43.3 83.3 100.0 100.0 60.0 73.3 96.7 100.0 复配剂 150倍 甘蓝夜蛾 20.0 70.0 85.0 100.0
从表12可以看出:本实施方式的复配剂对菜蛾和甘蓝夜蛾都有较好的防效。