技术领域
[0001] 本
发明涉及鱼藤酮技术领域，特别涉及一种鱼藤酮及类似物的大孔树脂提取方法。
背景技术
[0002] 三叶鱼藤(Derris trifoliata)是红树林常见攀援伴
生物种，三叶鱼藤通过攀援
覆盖、蔓延，严重的话会造成红树林枯死，三叶鱼藤是危害红树林湿地的“
植物杀手”，而此次治理主要靠人工拔除等方式来遏制三叶鱼藤对红树林的危害。三叶鱼藤对红树林有很强的破坏性，使我国广西、海南等红树林保护区域受到该植物的危害，国家下拨大笔资金进行人工拔除。三叶鱼藤含有鱼藤酮及其类似等成分。鱼藤酮是一种广谱性
杀虫剂，对
害虫高效且不易产生抗药性。鱼藤酮是一种触杀型杀虫剂兼具胃毒作用。鱼藤酮能直接通过
皮肤、气孔等进入虫体，抑制线粒体呼吸链中辅酶I与辅酶Q之间的部位，即呼吸链第一部位的
电子传递系统，致使
氧化-还原反应不能进行，从而阻碍呼吸，造成昆虫中毒瘫痪。同时，鱼藤酮类似物也具有一定的杀虫作用。因此，从三叶鱼藤中提取鱼藤酮及其类似物具有重要意义。
[0003] 现有文献报道了鱼藤酮的提取方法，包括振荡提取、
微波提取，超临界CO2萃取等；提取
溶剂有丙酮、
甲苯、苯等。但甲苯作为溶剂对环境有一定影响；丙酮、氯仿等属于易制毒
试剂。使用这些试剂，不利于生态环境。
发明内容
[0004] 鉴于此，本发明提出一种鱼藤酮及类似物的大孔树脂提取方法，解决上述技术问题。
[0005] 本发明的技术方案是这样实现的：一种鱼藤酮及类似物的大孔树脂提取方法，包括以下步骤：
[0006] S1.取三叶鱼藤根和茎，切段，晾干，
粉碎，过筛，得三叶鱼藤粉末；
[0007] S2.将三叶鱼藤粉末置于
乙醇溶液中浸泡，得浸提液；
[0008] S3.将上述浸提液减压浓缩得到浸膏；
[0009] S4.在浸膏中加入
水，使用乙酸乙酯萃取，静置，收集乙酸乙酯萃取液，无水
硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取物；
[0010] S5.用乙醇溶解乙酸乙酯萃取物，所得溶液缓慢加入到活化后的大孔树脂中，先使用8-12个柱体积25-35v/v％乙醇溶液洗脱；再后用8-12个柱体积45-55v/v％乙醇溶液洗脱；最后收集75-85v/v％乙醇溶液洗脱液，其洗脱液流速为12-18mL/min，监测直到流出物未出现鱼藤酮为止，所述监测使用薄层层析板监测，鱼藤酮标样为对照，紫外分光光度计检测，直到流出物未出现鱼藤酮为止；
[0011] S6.将上述75-85v/v％乙醇溶液洗脱液减压浓缩，
真空干燥，得到鱼藤酮及类似物。
[0012] 进一步的，在步骤S1中，取三叶鱼藤根和茎，切成1cm长的小段，自然晾干，粉碎，过40目筛，得三叶鱼藤粉末。
[0013] 进一步的，在步骤S2中，所述乙醇溶液为工业酒精。
[0014] 进一步的，在步骤S2中，将三叶鱼藤粉末置于乙醇溶液中浸泡2-4天，重复2-4次。
[0015] 进一步的，在步骤S3中，所述减压浓缩
温度为50℃以下。
[0016] 进一步的，在步骤S4中，加入水量为浸膏的重量3-5倍。
[0017] 进一步的，在步骤S4中，所述乙酸乙酯用量为浸膏与水重量和的1/3-1/2。
[0018] 进一步的，在步骤S5中，大孔树脂用量为三叶鱼藤粉末重量的0.5-1.5倍，[0019] 进一步的，在步骤S5中，先使用10个柱体积30v/v％乙醇溶液洗脱；再用10个柱体积50v/v％乙醇溶液洗脱；最后收集80v/v％乙醇溶液洗脱液。
[0020] 本发明任一项所述的一种鱼藤酮及类似物的大孔树脂提取方法，在步骤S5中，所述洗脱液流速为15mL/min。
[0021] 与
现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0022] (1)本发明提供一种有效、环保的提取方法，选择红树林杀手三叶鱼藤为原料，通过乙醇浸提，乙酸乙酯萃取，随后利用大孔树脂分离，获得鱼藤酮及类似物。在环保的前提下，本发明的提取物中鱼藤酮含量高，符合优级品(鱼藤酮含量≥70.0％)。本发明的提取物能够很好应用于杀虫。
[0023] (2)①本发明避免使用传统有毒有害溶剂或易制毒溶剂，绿色环保，对环境友好；②而且本发明使用溶剂乙醇、乙酸乙酯均可以
回收利用，大孔树脂经活化后可以反复使用，减少物料的使用，节约资源，降低提取成本；③本发明使用设备简单，避免使用昂贵的设备，降低制备成本；④本发明的提取方法操作流程简便，洗脱剂常见，适合于工业化生产。
[0024] 综上，本发明的提取方法，绿色环保，节约资源，环境友好，降低成本，工艺简化，适合于工业化生产，为三叶鱼藤的有效利用提供良好的途径。
具体实施方式
[0025] 为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体
实施例，对本发明做进一步的说明。
[0026] 本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0027] 本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0028] 实施例1
[0029] 一种鱼藤酮及类似物的大孔树脂提取方法，包括以下步骤：
[0030] S1、收集红树林
杂草防除后废弃的三叶鱼藤根和茎，切成1cm长的小段，自然晾干，工业粉碎机粉碎，过40目筛，得三叶鱼藤粉末；
[0031] S2、取三叶鱼藤粉末1Kg，浸泡在工业酒精中，工业酒精用量以没过三叶鱼藤粉末为宜，3天后，过滤；滤渣再用工业酒精浸没，重复该过程3次，合并滤液，即得浸提液；
[0032] S3、在50℃以下，将上述浸提液减压浓缩得到浸膏，并回收乙醇；
[0033] S4、在浸膏中加入3倍重量的
自来水，使用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯用量为浸膏与水重量和的1/3，静置，收集乙酸乙酯萃取液，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取物；
[0034] S5、用乙醇溶解乙酸乙酯萃取物，所得溶液缓慢加入到活化后的大孔树脂中，大孔树脂用量为三叶鱼藤粉末重量的0.5倍，使用10个柱体积30v/v％乙醇溶液洗脱；随后用10个柱体积50v/v％乙醇溶液洗脱；收集80v/v％乙醇溶液洗脱液，使用薄层层析板监测，鱼藤酮标样为对照，紫外分光光度计检测，直到流出物未出现鱼藤酮为止；洗脱液流速为15mL/min。
[0035] S6、将最后收集的乙醇洗脱液减压浓缩，真空干燥得到提取物，即得鱼藤酮及类似物。
[0036] 实施例2
[0037] 一种鱼藤酮及类似物的大孔树脂提取方法，包括以下步骤：
[0038] S1、收集红树林杂草防除后废弃的三叶鱼藤根和茎，切成1cm长的小段，自然晾干，工业粉碎机粉碎，过40目筛，得三叶鱼藤粉末；
[0039] S2、取三叶鱼藤粉末5Kg，浸泡在工业酒精中，工业酒精用量以没过三叶鱼藤粉末为宜，3天后，过滤；滤渣再用工业酒精浸没，重复该过程3次，合并滤液，即得浸提液；
[0040] S3、在50℃以下，将上述浸提液减压浓缩得到浸膏，并回收乙醇；
[0041] S4、在浸膏中加入4倍重量的自来水，使用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯用量为浸膏与水重量和的1/2，静置，收集乙酸乙酯萃取液，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取物；
[0042] S5、用乙醇溶解乙酸乙酯萃取物，所得溶液缓慢加入到活化后的大孔树脂中，大孔树脂用量为三叶鱼藤粉末重量的0.5倍，使用10个柱体积30v/v％乙醇溶液洗脱；随后用10个柱体积50v/v％乙醇溶液洗脱；收集80v/v％乙醇溶液洗脱液，使用薄层层析板监测，鱼藤酮标样为对照，紫外分光光度计检测，直到流出物未出现鱼藤酮为止；洗脱液流速为15mL/min。
[0043] S6、将最后收集的乙醇洗脱液减压浓缩，真空干燥得到提取物，即得鱼藤酮及类似物。
[0044] 实施例3
[0045] 一种鱼藤酮及类似物的大孔树脂提取方法，包括以下步骤：
[0046] S1、收集红树林杂草防除后废弃的三叶鱼藤根和茎，切成1cm长的小段，自然晾干，工业粉碎机粉碎，过40目筛，得三叶鱼藤粉末；
[0047] S2、取三叶鱼藤粉末10Kg，浸泡在工业酒精中，工业酒精用量以没过三叶鱼藤粉末为宜，3天后，过滤；滤渣再用工业酒精浸没，重复该过程3次，合并滤液，即得浸提液；
[0048] S3、在50℃以下，将上述浸提液减压浓缩得到，并回收乙醇；
[0049] S4、在浸膏中加入5倍重量的自来水，使用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯用量为浸膏与水重量和的1/3，静置，收集乙酸乙酯萃取液，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取物。
[0050] S5、用乙醇溶解乙酸乙酯萃取物，所得溶液缓慢加入到活化后的大孔树脂中，大孔树脂用量为三叶鱼藤粉末重量的0.5倍，使用10个柱体积30v/v％乙醇溶液洗脱；随后用10个柱体积50v/v％乙醇溶液洗脱；收集80v/v％乙醇溶液洗脱液，使用薄层层析板监测，鱼藤酮标样为对照，紫外分光光度计检测，直到流出物未出现鱼藤酮为止；洗脱液流速为15mL/min；
[0051] S6、将最后收集的乙醇洗脱液减压浓缩，真空干燥得到提取物，即得鱼藤酮及类似物。
[0052] 实施例4
[0053] 一种鱼藤酮及类似物的大孔树脂提取方法，包括以下步骤：
[0054] S1、收集红树林杂草防除后废弃的三叶鱼藤根和茎，切成1cm长的小段，自然晾干，工业粉碎机粉碎，过40目筛，得三叶鱼藤粉末；
[0055] S2、取三叶鱼藤粉末20Kg，浸泡在工业酒精中，工业酒精用量以没过三叶鱼藤粉末为宜，3天后，过滤；滤渣再用工业酒精浸没，重复该过程2次，合并滤液，即得浸提液；
[0056] S3、在50℃以下，将上述浸提液减压浓缩得到浸膏，并回收乙醇；
[0057] S4、在浸膏中加入4倍重量的自来水，使用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯用量为浸膏与水重量和的1/3，静置，收集乙酸乙酯萃取液，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取物；
[0058] S5、用乙醇溶解乙酸乙酯萃取物，所得溶液缓慢加入到活化后的大孔树脂中，大孔树脂用量为三叶鱼藤粉末重量的0.5倍，使用10个柱体积30v/v％乙醇溶液洗脱；随后用10个柱体积50v/v％乙醇溶液洗脱；收集80v/v％乙醇溶液洗脱液，使用薄层层析板监测，鱼藤酮标样为对照，紫外分光光度计检测，直到流出物未出现鱼藤酮为止；洗脱液流速为15mL/min；
[0059] S6、将最后收集的乙醇洗脱液减压浓缩，真空干燥得到提取物，即得鱼藤酮及类似物。
[0060] 实施例5
[0061] 本实施例与实施例1区别在于，
[0062] 在步骤S2中，将三叶鱼藤粉末置于乙醇溶液中浸泡2天，重复4次。
[0063] 在步骤S5中，大孔树脂用量为三叶鱼藤粉末重量的1倍；先使用10个柱体积25v/v％乙醇溶液洗脱；再用10个柱体积45v/v％乙醇溶液洗脱；最后收集75v/v％乙醇溶液洗脱液；其洗脱液流速为12mL/min。
[0064] 实施例6
[0065] 本实施例与实施例1区别在于，
[0066] 在步骤S2中，将三叶鱼藤粉末置于乙醇溶液中浸泡4天，重复2次。
[0067] 在步骤S5中，大孔树脂用量为三叶鱼藤粉末重量的1.5倍；先使用10个柱体积35v/v％乙醇溶液洗脱；再用10个柱体积55v/v％乙醇溶液洗脱；最后收集85v/v％乙醇溶液洗脱液；其洗脱液流速为18mL/min。
[0068] 对比例1
[0069] 本对比例与实施例1区别在于，在步骤S5中，先使用5个柱体积45v/v％乙醇溶液洗脱；再用15个柱体积60v/v％乙醇溶液洗脱；最后收集90v/v％乙醇溶液洗脱液。
[0070] 一、将实施例1-6以及对比例1制得的最终提取物进行称量，并检测其鱼藤酮含量，其中，鱼藤酮含量检测的条件：以鱼藤酮标准样品(Sigma公司，含量99％)为参照，采用美国Agilent 6890N公司的高效液相色谱(HPLC)进行检测。检测条件：C18色谱柱，色谱柱:250mm×4.0mm不锈
钢柱,流动相v(乙腈)∶v(水)＝60∶40，柱温：30℃，流速为1.0mL/min，检测
波长为294nm，进样量：10μL。鱼藤酮的保留时间为12.053。
[0071] 各实施例与对比例提取物的得率以及鱼藤酮含量，如下：
[0072]
[0073] 上述结果表明，本发明实施例1-6的提取物中鱼藤酮含量高，符合优级品(鱼藤酮含量≥70.0％)。本发明的提取物能够很好应用于杀虫。
[0074] 另外，经确证本发明实施例1-6的提取物含有鱼藤酮类似物。
[0075] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何
修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
