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治疗用肽衍生物

阅读:877发布:2020-09-23

专利汇可以提供治疗用肽衍生物专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且含有一个或多个取代基的肽衍 生物 ,这些取代基通过酰胺、 氨 基或氨磺酰键分别与生物活性肽部分的N-末端或 侧链 的氨基相连。与相应的单纯的肽相比,该肽衍生物具有相对增强的生物活性。,下面是治疗用肽衍生物专利的具体信息内容。

1、一种肽衍生物,其包含:
一个具有生物活性的肽部分,和至少一个与所说肽部分相连的 取代基,其中所说的取代基选自化合物I、II和III,其中化合物I 是: 其中:
R0是O,S或NR5,其中R5是H或(C1-C6)烷基;
R1和R2各自独立地为H,(CH2)mOR6,或CH(OR7)CH2OR8,其中R6是H或(C2-C7)酰基,R7和R8各自独立地为H,(C2-C7)酰基,或(CR9)(R10), 其中R9和R10各自独立地为H或(C1-C6)烷基;
或R1和R2为=CHCH2OR11,其中在R1和R2中,R11是H或(C2-C7)酰基, m是1至5的整数,包括1和5;和
R3或R4之一为(CH2)nR12或(CH2)nCH(OH)R12,其中R12是CO、CH2或SO2, n是1至5的整数,包括1和5;
剩下的R3或R4为H,(C1-C6)羟烷基,或(C2-C7)酰基;和 化合物II为: 其中:
R13、R14和R15各自独立地为H或(C2-C24)酰基;
R16是NH或不存在;
R17为CO、O或不存在;
R18为CO、CH2、SO2或不存在;
m是1至5的整数,包括1和5;
n是0至5的整数,包括0和5;和 化合物III为: 其中:
R19是H、NH2、芳香族官能团、OH、(C1-C6)羟烷基、H(R27)(R28)、 SO3H,或不存在;其中R27和R28各自独立地为H或(C1-C6)烷基;
R20是O或不存在;
R21是(C1-C6)烷基或不存在;
R22为N、O、C或CH;
-R23-是(C1-C6)烷基或不存在;
R24是N、CH或C;
R25是NH、O或不存在;
R26是SO2、CO、CH2或不存在;
m是0至5的整数,包括0和5;
n是0至5的整数,包括0和5;
p是0至5的整数,包括0和5;和
q是0至5的整数,包括0和5;
其中所说的肽部分与每一所说的取代基通过所说取代基与所说 肽部分的N末端或侧链的N原子形成的CO-N、CH2-N或SO2-N键相连 结。
2、权利要求1的肽衍生物,其中所说的取代基是化合物I。
3、权利要求2的肽衍生物,其中R12是CH2或SO2。
4、权利要求1的肽衍生物,其中所说的取代基是化合物II。
5、权利要求4的肽衍生物,其中R18为CH2或SO2。
6、权利要求5的肽衍生物,其中R13,R14和R15为H,R17不存在。
7、权利要求6的肽衍生物,其中所说的取代基是 (HOCH2)3C-NH-(CH)2-SO2或(HOCH2)3C-CH2。
8、权利要求1的肽衍生物,其中所说的取代基为化合物III。
9、权利要求8的肽衍生物,其中-R23-是(C1-C6)烷基;R22 是N,C或CH;R24是C。
10、权利要求8的肽衍生物,其中R22是O;R19、R20、R21和-R23- 不存在;m和n的总和为3、4或5。
11、权利要求8的肽衍生物,其中-R23-不存在。
12、权利要求11的肽衍生物,其中R22和R24至少一个为N。
13、权利要求12的肽衍生物,其中R22和R24均为N。
14、权利要求13的肽衍生物,其中所说取代基为 和 之一。
15、权利要求1的肽衍生物,其中所说的肽部分选自下列物质: 促生长素抑制素,铃蟾肽,降素,降钙素基因相关肽(CGRP),胰 岛淀粉样多肽,甲状旁腺素(PTH),促胃泌素释放肽(GRP),黑素细 胞刺激素(MSH),促肾上腺皮质激素(ACTH),甲状旁腺相关肽(PTH- rP),促黄体素释放激素(LHRH),生长激素释放因子(GHRF),生长 激素释放肽(GHRP),缩胆囊肽(CCK),胰高血糖素,缓激肽,类胰 高血糖素肽(GLP),胃泌素,脑啡肽,神经调节肽,内皮肽,P物质, 神经肽Y(NPY),肽YY(PYY),血管活性肠肽(VIP),苷蛋白,垂体 腺苷酸环化酶活化多肽(PACAP),β-细胞调理素,肾上腺素调节 素(adrenomedulin)及其衍生物、片断和类似物。
16、权利要求15的肽衍生物,其中所说的肽部分为促生长素抑 制素或其衍生物、片断或类似物。
17、权利要求16的肽衍生物,其中所说的促生长素抑制素类似 物是下列物质之一:H-D-Phe-环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu -Cys]-Thr-NH2,H-D-Phe-环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr -Cys]-Nal-NH2,和H-D-Nal-环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys- Val-Cys]-Thr-NH2。
18、权利要求15的肽衍生物,其中所说的肽部分为铃蟾肽或其 衍生物,片断或类似物。
19、权利要求1的肽衍生物,其中所说的肽衍生物为下列物质 之一: 和
20、一种二聚肽衍生物,其含有:
两个具有生物活性的肽部分,和至少一个与所说肽之一相连的 取代基,其中所说的取代基为化合物IV和V之一,其中化合物IV为: 其中:
R0是O,S或NR5,其中R5是H或(C1-C6)烷基; R1和R2各自独立地为H,(CH2)mOR6,或CH(OR7)CH2OR8,其中R6是H或(C2-C7)酰基,R7和R8各自独立地为H,(C2-C7)酰基,或C(CR9)(R10), 其中R9和R10各自独立地为H或(C1-C6)烷基;
或R1和R2为=CHCH2OR11,其中在R1和R2中R11独立地为H或(C2-C7) 酰基,m是1至5的整数,包括1和5;和
R3或R4各自独立地为(CH2)nR12或(CH2)nCH(OH)R12,其中R12是CO、 CH2或SO2,n是1至5的整数,包括1和5;和 化合物V是: 其中:
R19是SO2,CO或CH2;
R20是O或不存在;
R21是(C1-C6)烷基或不存在;
R22是N、CH、O或C;
-R23-是(C1-C6)烷基或不存在;
R24是N、CH或C;
R25是NH、O或不存在;
R26是SO2、CO、CH2或不存在;
m是0至5的整数,包括0和5;
n是0至5的整数,包括0和5;
p是0至5的整数,包括0和5;
q是0至5的整数,包括0和5;
其中至少一个所说的肽部分通过所说的取代基与所说肽之一的 N-末端或侧链N原子间形成的CO-N、CH2-N或SO2-N键与每个所说 的取代基相连。
21、权利要求20的二聚肽衍生物,其中-R23-是(C1-C6)烷基; R22是N,C或CH;R24是C。
22、权利要求20的二聚肽衍生物,其中R22是O;R19、R20、R21 和-R23-不存在;m和n的总和为3、4或5。
23、一种治疗病人疾病的方法,包括给所说病人施用治疗量的 权利要求1的肽衍生物。
24、权利要求23的方法,其中所说的肽部分是促生长素抑制素 或其类似物。
25、权利要求23的方法,其中所说的疾病是癌症。

说明书全文

发明涉及治疗用肽。

人们已做出一些努,以延长生物活性肽的活性。例如,通过 合成方法加一个糖基对肽进行化学修饰,以延长肽呈活性状态的时 间(Sandoz,WO 88/02756; Sandoz,WO 89/09786;DE 3910667 A1, EPO 0374089 A2(1990);和Breipohl,U.S.专利NO.4,861,755 (1989))。加入阳离子锚(EPO 0363589 A2(1990))和脂基(Whittak- er,WO 91/09837;Jung,U.S.专利NO.4,837,303(1989)),也用来 延长肽的寿命。

总体而言,本发明提供了生物活性肽的衍生物,其含有一个或 多个取代基,分别与肽部分的N-末端或侧链的一个基相连结。 这种修饰形式的衍生物比相应的未修饰的肽具有更强的和延长的生 物活性。

该肽衍生物的优点在于其价格便宜,高度的生物相容性,没有 有害的副作用,并适于不同形式的治疗给药。特别是,许多以促生 长素抑制素(somatostatin)作为肽部分的衍生物与未修饰的促生长 素抑制素相比,具有大大增强的效力和选择性。

一方面,本发明的特点在于含有生物活性肽部分和至少一个与 该肽部分相连的取代基的肽衍生物;该取代基选自化合物I、II和 III,其中化合物I为: 其中:

R0是O,S或NR5,其中R5是H或(C1-C6)烷基;

R1和R2分别单独是H,(CH)mOR6,或CH(OR7)CH2OR8,其中R6是H或(C2- C7)酰基,R7和R8分别单独是H,(C2-C7)酰基,或(CR9)(R10),其中R9和 R10各自是H或(C1-C6)烷基;

或R1和R2为=CHCH2OR11,其中在R1和R2中,R11各自是H或(C2-C7) 酰基,m是1至5的整数,包括1和5;和

R3或R4之一为(CH2)nR12或(CH2)nCH(OH)R12,其中R12是CO、CH2或 SO2,n是1至5的整数,包括1和5;剩下的R3或R4是H,(C1-C6)羟烷 基,或(C2-C7)酰基; 化合物II为: 其中:

R13、R14和R15各自为H或(C2-C24)酰基;

R16为NH或不存在;

R17为CO、O或不存在;

R18为CO、CH2、SO2或不存在;和

m是1至5的整数,包括1和5;n是0至5的整数,包括0和5; 化合物III为: 其中:

R19是H、NH2、一个芳族官能团、OH、(C1-C6)羟烷基、H(R27)(R28)、 SO3H或不存在;其中R27和R26各自为H或(C1-C6)烷基;

R20为O或不存在;

R21为(C1-C6)烷基或不存在;

R22为N、CH、O或C;

-R23-为(C1-C6)烷基或不存在;

R24为N、OH或C;

R25为NH、O或不存在;

R26为SO2、CO、CH2或不存在;

m是0至5的整数,含0和5;

n是0至5的整数,含0和5;

p是0至5的整数,含0和5;

q是0至5的整数,含0和5;

在化合物I、II和III中,肽部分通过取代基和所说肽部分的N -末端或侧链的N原子间形成的CO-N、CH2-N或SO2-N键与每一取 代基相连。

在优选实施方案中,-R23-为(C1-C6)烷基,R22是N,C或CH;R24 是C。另外可选择地,R22是O;R19、R20、R21和-R23-不存在;m和n 的总和为3、4或5。

在本发明的其它优选实施方案中,取代基是化合物I;在这一 实施方案中,R12优选为CH2或SO2。可选择地,取代基可以是化合物 II,这一情况下R18优选为CH2或SO2;R13、R14和R15为H;R17不存在。 在特别优选的实施方案中,取代基是(HOCH2)3C-NH-(CH)2-SO2或 (HOCH2)3C-CH2。

在本发明其它实施方案中,取代基是化合物III;优选这种实 施方案中的-R23-不存在,R22和R24至少一个为N。可选择地,R22 和R24均可为N。

在其它实施方案中,取代基为下列之一: 和

肽部分优选自:促生长素抑制素(Somatostatin),铃蟾肽、降 素,降钙素基因相关肽(CGRP),胰岛淀粉样多肽,甲状旁腺素 (PTH),促胃泌素释放肽(gastrin releasing peptide,GRP),黑 素细胞刺激激素(MSH),促肾上腺皮质激素(ACTH),甲状旁腺相关 肽(PTHrP),促黄体素释放激素(LHRH),生长激素释放因子(GHRF), 生长激素释放肽(GHRP),缩胆囊肽(CCK),胰高血糖素(glucagon), 缓激肽,类胰高血糖素肽(GLP),胃泌素,脑啡肽,神经调节肽, 内皮肽,P物质,神经肽Y(NPY),肽YY(PYY),血管活性肠肽(VIP), 苷蛋白(guanylin),垂体腺苷酸环化酶活化多肽(PACAP),β- 细胞调理素,肾上腺素调节素(adrenomedulin),及其衍生物,片 断和类似物。

肽部分优选为促生长素抑制素或其衍生物,片断或类似物。最 为优选地,促生长素抑制素类似物为下列物质之一:H-D-Phe-c [Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2、H-D-Phe-c [Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH2、H-D-Nal-c [Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH2。可选择地,肽 部分是铃蟾肽或其衍生物,其片断或其类似物。

在其它优选实施方案中,肽衍生物为下列物质之一: 和

另一方面,本发明提供了含有两种生物活性肽部分的二聚肽衍 生物,每个肽分子至少连有一个取代基。取代基选自化合物IV和V, 其中化合物IV具有相当于化合物I的同属结构,化合物V具有相当于 化合物III的同属结构。在二聚物中,每个肽部分均是通过取代基 和肽的N-末端或侧链的N原子间形成的CO-N、CH2-N或SO2-N键与 该取代基相连。

另一方面,本发明提供了一种用于治疗病人疾病的方法,如癌 症;该方法包括对病人施用治疗量的所述肽衍生物。在优选实施方 案中,用于治疗的肽部分为促生长素抑制素。

本文使用的“生物活性”是指具有生理或治疗活性的天然存在 的、重组的及合成的肽。通常,这一术语包括了生物活性肽的所有 衍生物,片断和类似物,其呈现出与未修饰肽性质上相似或相反的 作用。

附图的简要说明

图1为AR42J细胞在不同促生长素抑制素衍生物存在时的两条生 长曲线图。

优选实施方案的描述 肽衍生物

通常,本发明的肽衍生物包含两个独立的部分:1)生物活性肽; 2)至少一种具有化合物I、II和III结构的取代基。根据本文所述方 法制备的肽衍生物包括下列化合物。 基于化合物I的衍生物

其中,R0、R1、R2、R3、R4、R12和n同本文所定义,NH-P′为生物活性肽部分。在这些实例中,NH位于肽的N-末端或侧链上, P′代表肽的其余部分。 基于化合物II的衍生物

其中R13、R14、R15、R16、R17、R18、m、n和NH-P′同本文中 所定义。 基于化合物III的衍生物

其中,R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、m、n、P和NH-P′同本文中所定义。

除了上面所描述的结构之外,根据本发明所制备的化合物还包 括含有与一个肽相连的两个或多个取代基的肽衍生物。本发明的这 些实施方案为具有多于1个自由氨基(如赖氨酸残基)的生物活性 肽衍生物。

本发明还提供了含有与一个取代基相连结的两个肽部分的二聚 肽衍生物,例如两个缓激肽的类似物连结于一个取代基化合物V上。

本发明的肽衍生物为选自下组物质的生物活性肽的衍生物:促 生长素抑制素(somatostatin)、铃蟾肽、降钙素、降钙素基因相关 肽(CGRP)、胰岛淀粉样多肽、甲状旁腺素(PTH)、促胃泌素释放肽 (GRP)、黑素细胞刺激激素(MSH)、促肾上腺皮质激素(ACTH),甲状 旁腺相关肽(PTHrP),促黄体素释放激素(LHRH),生长激素释放因 子(GRF),生长激素释放肽(GHRP),缩胆囊肽(CCK),胰高血糖素, 缓激肽,类胰高血糖素肽(GLP),胃泌素,脑啡肽,神经调节肽, 内皮肽,P物质,神经肽Y(NPY),肽YY(PYY),血管活性肠肽(VIP), 鸟苷蛋白,垂体腺苷酸环化酶活化多肽(PACAP)、β-细胞调理素, 肾上腺素调节素(adrenomedulin),或前述任一物质的衍生物,其 片断和类似物。

在特别优选的实施方案中,肽部分为促生长素抑制素或促生长 素抑制素的衍生物,其片断或类似物。根据本发明可使用的促生长 素抑制素类似物包括下列化合物,但不限于这些物质:

H-D-β-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2;

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-β-Nal-NH2;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-β-Nal-NH2;

H-D-β-Nal-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-NH2; H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-NH2; H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr; H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr; H-Gly-Pen-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr; H-Phe-Pen-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr; H-Phe-Pen-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr; H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol; H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2; H-D-Trp-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2; H-D-Trp-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2; H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2; H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Trp-NH2; H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2; AC-D-Phe-Lys*-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Asp-Thr-NH2 Ac-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys- Thr-NH2; Ac-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr- NH2; Ac-D-hArg(Bu)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr- NH2; Ac-D-hArg(Et)2-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2; Ac-L-hArg(Et)2-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2; Ac-D-hArg(CH2CF3)2-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr- NH2; Ac-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys- Thr-NH2; Ac-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys- Phe-NH2; Ac-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys- Thr-NHEt; Ac-L-hArg(CH2-CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys- Thr-NH2; Ac-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(Me)-Thr- Cys-Thr-NH2; Ac-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(Me)-Thr- Cys-Thr-NHEt; Ac-hArg(CH3,己基)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys- Thr-NH2; H-hArg(己基2)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr- NH2; AC-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr- NHEt; Ac-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe- NH2; 丙酰基-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(异丙基)- Thr-Cys-Thr-NH2; Ac-D-β-Nal-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Gly- hArg(Et)2-NH2; Ac-D-Lys(异丙基)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr- NH2; Ac-D-hArg(CH2CF3)2-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D- Trp- Lys-Thr-Cys-Thr-NH2; Ac-D-hArg(CH2CF3)2-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe- D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH2; AC-D-hArg(Et)2-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-phe-D-Trp-Lys- Thr-Cys-Thr-NH2; Ac-Cys-Lys-Asn-4-Cl-Phe-phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe- Thr-Ser-D-Cys-NH2; Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2; Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Phe-NH2; Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-p-Cl-Phe-NM2 ; Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-β-Nal-NH2 H-D-β-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2; H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2; H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-β-Nal-NH2; H-五氟-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr- NH2; Ac-D-β-Nal-Cys-五氟-Phe-D-Trp-Lys-Val-Cys- Thr-NH2; H-D-β-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-β-Nal-NH2; H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-β-Nal-NH2; H-D-β-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2; H-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2; Ac-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2; H-D-Phe-Cys-β-Nal-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2; H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Cys-Thr-NH2;

环(Pro-Phe-D-Trp-N-Me-Lys-Thr-Phe);

环(Pro-Phe-D-Trp-N-Me-Lys-Thr-Phe);

环(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-N-Me-Phe);

环(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe);

环(Pro-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe);

环(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe);

环(Pro-Phe-L-Trp-Lys-Thr-Phe);

环(Pro-Phe-D-Trp(F)-Lys-Thr-Phe);

环(Pro-Phe-Trp(F)-Lys-Thr-Phe);

环(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe);

环(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-p-Cl-Phe);

环(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-D-Lys-Trp-D-Phe);

环(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Val-Lys-D-Trp-D-Phe);

环(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-Lys-D-Trp-D-Phe);

环(D-Abu-N-Me-D-Phe-D-Val-Lys-D-Trp-D-Tyr);

环(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe);

环(Pro-Tyr-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe);

环(Pro-Phe-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe);

环(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe);

环(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba);

环(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba-Gaba);

环(Asn-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe);

环(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-NH(CH2)4CO);

环(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-β-Ala);

环(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Glu)-OH;

环(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe);

环(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gly);

环(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba);

环(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gly);

环(Asn-Phe-Phe-D-Trp(F)-Lys-Thr-Phe-Gaba);

环(Asn-Phe-Phe-D-Trp(NO2)-Lys-Thr-Phe-Gaba);

环(Asn-Phe-Phe-Trp(Br)-Lys-Thr-Phe-Gaba);

环(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe(I)-Gaba);

环(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Tyr(But)-Gaba);

环(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr- Pro-Cys)-OH;

环(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr- Pro-Cys)-OH;

环(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr- Tpo-Cys)-OH;

环(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr- MeLeu-Cys)-OH;

环(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-Gaba);

环(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Phe-Gaba);

环(Phe-Phe-D-Trp(5F)-Lys-Thr-Phe-Phe-Gaba);

环(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys(Ac)-Thr-Phe-NH- (CH2)3-CO);

环(Lys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba);

环(Lys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba);和

环(Orn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba)

其中Lys*表示Lys*和ASP间形成的酰胺键。

上面所列举的肽化合物描述于下面的参考文献中,其内容引入 本文作为参考:

EP申请No.P5 164 EU;Van Binst,G.等人,Peptide Resear- ch 5:8(1991);Horvath,A.等人,Abstract,“Conformations of Somatostatin Analogs Having Anti-tumor Activity”,22nd European Peptide Symposium,September 13-19,1992,Inter- laken,Switzerland;PCT申请WO 91/09056(1991);EP申请0363 589 A2(1990);EP申请0203031 A2(1986);U.S.专利4,904,642; 4,871,717;4,853,371;4,725,577;4,684,620;4,650,787; 4,60 3,120;4,585,755;4,522,813;4,486,415;4,485,101; 4,435,385;4,395,403;4,369,179;4,360,516;4,358,439; 4,328,214;4,316,890;4,310,518;4,291,022;4,238,481; 4,235,886;4,224,190;4,211,693;4,190,648;4,146,612; 和4,133,782。

在上述促生长素抑制素的类似物中,每一氨基酸残基均具有 NH-C(R)H-CO-的结构,其中R为侧链;氨基酸残基间的线表示连结 氨基酸的肽键。当氨基酸残基为光学活性时,应为L-构型,除非 明确表明是D-型。当肽中有两个Cys残基时,这两个基团间形成二 硫键。但该键没有在所列举的残基中表示出来。

另外的本发明优选的促生长素抑制素类似物如下式所示:

其中A1是β-Nal、Trp、β-吡啶基-Ala、Phe、取代的 Phe的D型或L型异构体,或缺失;A2和A7各自独立地为Cys、Asp或 Lys。这些基团通过二硫键或酰胺键相互共价连结。此外,A3是β -Nal、Phe或邻-、间-、对-位取代的x-Phe,其中x为卤素, OH、NH2、NO2或C1-3烷基;A6是Val、Thr、Ser、Ala、Phe、β -Nal、Abu、ILe、Nle或Nva;A8是Phe、Thr、Tyr、Trp、Ser、 β-Nal、醇基、或缺失;R1和R2各自独立地为H,低级酰基或低级 烷基;R3是OH,NH2或缺失。优选当A2和A7之一为Cys时,其它也为 Cys;当A8为α-氨基醇时,R3缺失;当A2和A7都不是Cys时,A2与A7 不同。

这一实施方案特别优选的促生长素抑制素类似物是:

Me-D-Phe-Cys-Tyr-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2;

H-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Nal-NH2;

H-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2;

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Nal-NH2;和

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-醇。

在其它实施方案中,本发明的线性促生长素抑制素类似物具有 如下结构:

其中A1为D或L-型的Ala、Leu、Ile、Val、Nle、Thr、Ser、 β-Nal、β-吡啶基-Ala、Trp、Phe、2,4-二氯-Phe、五氟 -Phe、对-X-Phe或邻-X-Phe,其中X是CH3、Cl、Br、F、OH、 OCH3或NO2;

A2是Ala、Leu、Ile、Val、Nle、Phe、β-Nal、吡啶基-Ala、 Trp、2,4-二氯-Phe、五氟-Phe、邻-X-Phe、或对-X-Phe, 其中X是CH3、Cl、Br、F、OH、OCH3或NO2;

A3是吡啶基-Ala、Trp、Phe、β-Nal、2,4-二氯-Phe、五 氟-Phe、邻-X-Phe、或对-X-Phe,其中X是CH3、Cl、Br、F、 OH、OCH3或NO2;

A6是Val、Ala、Leu、Ile、Nle、Thr、Abu、或Ser;

A7是Ala、Leu、Ile、Val、Nle、Phe、β-Nal、吡啶基-Ala、 Trp、2,4-二氯-Phe、五氟-Phe、邻-X-Phe、或对-X-Phe, 其中X是CH3、Cl、Br、F、OH、OCH3或NO2;

A8是D-或L-型的Ala、Leu、Ile、Val、Nle、Thr、Ser、Phe、 β-Nal、吡啶-Ala、Trp、2,4-二氯-Phe、五氟-Phe、对-X -Phe,或邻-X-Phe,其中X是CH3、Cl、Br、F、OH、OCH3或NO2, 或它们的醇;R1和R2各自独立地为H,低级酰基或低级烷基;R3为OH、 NH2或缺失。优选至少A1和A8之一及A2和A7之一必须为芳族氨基酸; 当A8为醇时,R3缺失。此外,A1、A2、A7、A8不能都为芳族氨基酸。 本发明这种情况的特别优选的类似物包括: H-D-Phe-p-氯-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr- NH2; H-D-Phe-p-NO2-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2; H-D-Nal-p-氯-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr- NH2; H-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2; H-D-Phe-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2; H-D-Phe-p-氯-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr- NH2;and H-D-Phe-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Ala-D-β-Nal-NH2。

在其它优选实施方案中,肽部分为铃蟾肽或铃蟾肽的衍生物, 片断或类似物。可用于实施本发明的铃蟾肽类似物包括但不限于神 经调节肽C,神经调节肽B,雨滨蛙肽和促胃泌素释放肽(GRP),其 具有下列氨基酸序列: H-Ala-Pro-Val-Ser-Val-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-Leu- Ala-Lys-Met-Tyr-Pro-Arg-Gly-Asn-His- Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2

可用于本发明的其它铃蟾肽类似物包括下列参考文献所描述的 化合物,其内容在此引入作为参考:

COY等,Peptides,Proceedings of the Eleventh Amer。 Peptide Symposium,Rivier等编,ESCOM,pp.65-67(1990); Wang等.J.Biol.Chem.265:15695(1990);Mahmoud等,Cancer Research 51:1798(1991);Wang等,Biochemistry 29:616(1990); Heimbrook等,“Synthetic Peptides:Approaches to Biological Problems”,UCLA Symposium On Mol.and Cell.Biol.New Series,Vol.86,Tam和Kaiser编;Martinez等,J.Med.Chem.28: 1874(1985);Gargosky等,Biochem.J.247:427(1987);Dubreuil 等,Drug Design and Delivery,Vol 2:49,Harwood Academic Publishers,GB(1987);Heikkia等,J.Biol.Chem.262:16456 (1987);Caranikas等,J.Med.Chem.25:1313(1982);Saeed等, Peptides 10:597(19 89);Rosell等,Trends in Pharmacological Sciences 3:211(1982);Lundberg等,Proc.Nat.Aca.Sci.80: 1120(1983);Engberg等,Nature 293:222(1984);Mizrahi等, Euro.J.Pharma.82:101(1982);Leander等,Nature 294:467 (1981);Woll等,Biochem.Biophys.Res.Comm.155:359(1988); Rivier等,Biochem.17:1766(1978);Cuttitta等,Cancer Surv- eys 4:707(1985);Aumelas等,Int.J.Peptide Res.30:596 (1987);Szepeshazi.等,Cancer Research 51:5980(1991);Jens- en等,Trends Pharmacol.Sci.12:13(1991);U.S.专利5,028,692; 4,943,561;4,207,311;5,068,222;5,081,107;5,084,555;EP 申请Nos.0 315 367 A2(1989);0 434 979 A1(1991);0 468 497 A2(1992);0 313 158 A2(1989);0 339 193 A1(1989);PCT申请 WO 90/01037(1990);90/02545(1992);和UK申请GB 1 231 051 A (1990)。

本发明的肽可以药物上可接受的盐的形式提供。优选的盐的例 子是与治疗上可接受的有机酸形成的,如乙酸,乳酸,来酸,柠 檬酸,苹果酸,抗坏血酸琥珀酸,苯甲酸杨酸,甲磺酸,甲 苯磺酸,或双羟酸,及聚合酸如单宁酸或羧甲基纤维素,和与无 机酸形成的盐如氢卤酸、包括盐酸硫酸磷酸。 化合物的合成

现在描述化合物I、II和III的合成。

在描述合成本发明化合物时使用下列缩写形式:

Nal:萘基丙氨酸(1或2)

Abu:α-氨基丁酸

D:右旋

L:左旋

HOAC:乙酸

BOP:苯并三唑-1-基三(二甲氨)鏻六氟-磷酸盐

BOC:叔-丁氧羰基

DCC:二环己基二亚胺

EDC:1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺

DEPC:二乙基氰膦酸酯(diethyl cyanophosphonate)

DMF:二甲基甲酰胺

CH2Cl2:二氯甲烷

MeOH:甲醇

EtOH:乙醇

DIEA:N,N-二异丙基乙胺

HOBT:1-羟基苯并三唑

HBTU:O-苯并三唑-1-基,N,N,N′,N′-四甲基 鎓六氟

      磷酸盐

THF:四氢呋喃

TFA:三氟乙酸

制备化合物I、II和III的原料及中间体均可购买得到。可选择 地,原料可容易地以熟知的并记载在文献中的方法进行制备。例如, 抗坏血酸相关的衍生物化学可见于J.Chem.Soc.,Perkin Trans. 1:1220(1974);Carbohyd.Res.,67:127(1978);Yakuqaku Zass- hi,86:376(1966);U.S.专利4,552,888;J.Med.Chem.,31:793 (19 88);ibid.34:2152(1991);和35:1618(1992),其内容在此引 入作为参考。有关三-衍生物化学可见于Arch.Biochem.Biophy。, 96,653(1962),Biochem.,5 467(1966),其内容也在此引入作为 参考。 肽衍生物的合成

根据常识,通过肽合成中采用的熟知方法(如DCC,DCC-HOBT, DIC-HOBT PPA,EDC-HOBT,DEPT,BOP,HBTU)在惰性溶剂(如DMF, THF或CH2Cl2乙酸乙酯或其组合物)中使用(如DIEA)可以完成化合 物I、II或III与被保护氨基酸或肽的适宜的自由氨基偶联。脱保护 基也可根据熟知的方法进行(如通过加入酸或碱、TFA、二噁烷- HCl、氨、NaOMe、哌啶移去保护基)。在多数情况下,反应温度应 在-30C至室温间。

通常,合成的第一步包括环氧化物和被保护氨基酸或肽的自由 氨基间的反应;采用熟知的方法可完成复合和脱保护,如McManus 等人,Synth.Communications 3,177(1973)中所描述的,其内容 在此引入作为参考。合成后,通过常规方法对中间体和产物进行纯 化,如色谱或HPLC。可用常规技术如NMR,氨基酸分析和质谱确认 该化合物。

下述实施例叙述了形成本发明化合物的优选方法。 实施例1-促生长素抑制素衍生物的合成

依照本发明合成了下面所示的促生长素抑制素衍生物,在此也 记为BIM-23118: 实施例1.1-3-O-(苄氧羰基甲基)-2,5,6-三乙酰-抗坏血酸

向3-O-(苄氧羰基甲基)-抗坏血酸(2.2g)的吡啶(30ml)中 滴加乙酐(6ml);然后将混合物在室温下进行过液搅拌。减压蒸发 吡啶,然后将残余物在乙酸乙酯和1N HCl间进行分配。以1N HCl, 然后用水洗涤乙酸乙酯层。MgSO4干燥后,减压蒸发掉乙酸乙酯; 存留的残余的吡啶和乙酸酐通过与甲苯的多次共蒸发被移去。将得 到的3-O-(苄氧羰基甲基)-2,5,6-三乙酰-抗坏血酸真空干 燥,获得存留于残余物(2.4 g)中的粘胶。TLC(胶:CHCl3/乙 [9∶1],Rf=0.52) 实施例1.2-3-0-(羧甲基)-2,5,6-三乙酰-抗坏血酸

向3-O-(苄氧羰基甲基)-2,5,6-三乙酰-抗坏血酸(2.4 g)的乙醇溶液(30ml)中加入Pd-C(100mg)的水(2ml)的浆状物, 在氢(17psi(磅/平方英寸))中振摇悬浮液6小时。然后通过一硅藻 土填塞物(Celite pad)过滤除去该催化剂,减压蒸发滤液,得到3 -O-(羧甲基)-2,5,6-三乙酰-抗坏血酸。TLC(硅胶:CHCl3/ MeOH/HOAc[9∶1∶0.1],Rf=0.2) 实施例1.3-5,6-O-异亚丙基抗坏血酸

向快速搅拌的抗坏血酸(8.0g)的丙酮(80ml)悬浮液中加入乙 酰氯(0.67ml),将该混合物在室温下搅拌过夜。过滤收集沉淀, 以乙酸乙酯洗涤,减压干燥得到8.29g 5,6-O-异亚丙基抗坏血 酸的无色固体。TLC(硅胶:CHCl3/MeOH/HOAc[3∶1∶0.1],Rf=0.54)。 实施例1.4-3-O-(乙氧羰基丙基)-5,6-异亚丙基-抗坏血酸

将5,6-异亚丙基抗坏血酸(2.0g)的10ml DMF溶液滴加入 NaH(0.44g 50%矿物油NaH分散液,以己烷洗涤数次)的5ml DMF 的悬浮液。停止出气后,滴加1.43ml的5ml DMF中的4-溴丁酸乙 酯溶液,室温下搅拌混合物过夜。减压蒸发掉溶剂,将得到的残余 物在硅胶(55g)上进行层析,使用CHCl3/MeOH(19∶1)为洗脱液。收 集适宜的级分,减压除去溶剂,得到含3-O-(乙氧羰基丙基)-5, 6-异亚丙基-抗坏血酸(1.1g)的粘性残留物。 实施例1.5-3-O-(羧丙基)-5,6-异亚丙基抗坏血酸

将4.6ml的2N-NaOH加入3-O-(乙氧羰基丙基)-5,6-异亚 丙基-抗坏血酸(1.02g)的15ml乙醇溶液中。1小时后,减压除去 大部分乙醇,将残余物以水(10ml)稀释,以稀释的HCl(pH3)进行 酸化。然后将该溶液用NaCl饱和,以乙酸乙酯萃取数次;用MgSO4干燥收集的萃取液。减压蒸发掉溶剂,得到含有3-O-(羧丙基)- 5,6-异亚丙基抗坏血酸(0.84g)的粘性残余物。TLC:(硅胶: CHCl3/MeOH/HOAc[5∶1∶0.1],Rf=0.55)。

实施例1.6-D-Nal-环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys(Boc)-Val-Cys] -Thr-NH2

将碳酸氢二叔丁基酯(di-tertbutyl dicarbonate)(0.36g) 的10ml DMF溶液滴加入D-Nal-环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val -Cys]-Thr-NH2乙酸盐(2g,BIM-23014)的45ml DMF溶液中。 室温下两小时之后,减压除去溶剂,得到的残留物在硅胶(150g) 上进行层析,用CHCl3/MeOH(9∶1)作洗脱液。收集适宜的级份,减 压除去溶剂,得到含D-Nal-环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys(Boc)- Val-Cys]-Thr-NH2(1.45g)的残余物。TLC(硅胶:CHCl3/MeOH[3∶ 1],Rf=0.52)。

实施例1.7

将0.2ml的二异丙基乙胺加入到D-Nal-环-[Cys-Tyr-D- Trp-Lys(Boc)-Val-Cys]-Thr-NH2(300mg),3-O-(羧丙基) -5,6-异亚丙基抗坏血酸(56mg)和HBTU(113mg)的5ml的DMF溶 液中。然后室温下搅拌混合物过夜,减压除去溶剂。将残余物在乙 酸乙酯/MeOH混合液和饱和NaCl水溶液间进行分配,用饱和的NaCl水溶液,然后用饱和的NaHCO3水溶液洗涤乙酸乙酯层,然后以MgSO4干燥。减压蒸发掉溶剂,将残余物进行制备性TLC,使用CHCl3/ MeOH(8∶1)混合物作为展开溶剂。分离合适的UV-阳性区带,以 CHCl2/MeOH提取。减压除去溶剂,得到上面所确认的产物(0.20g)。 TLC(硅胶:CHCl3/MeOH[5∶1],Rf=0.54)

实施例1.8-除去Boc基团

室温下用CHCl3中的25%TFA对上述含D-Nal-环[Cys-Tyr-D -Trp-Lys(Boc)-Val-Cys]-Thr-NH2(95mg)的抗坏血酸衍生 物处理45分钟。减压除去易挥发的物质,得到干燥的残余物,用 Vydac C18 HPLC和CH3 CN/0.1%TFA水溶液进行纯化。最终获得 90mg终产物(FAB-MS(m/e)1341)。

实施例1.9-其它实施方案

下述促生长素抑制素衍生物也以类似的方式合成: BIM-23135 BIM-23181 BIM-23183 实施例2-BIM 23107的合成

依照本发明合成下面的促生长素抑制素衍生物,也称为BIM- 23107。 (AcO-CH2)3-C-NH-CO-(CH2)2-CO-D-Nal-c[Cys-Tyr-D- Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH2 实施例2.1-(AcO-CH2)3-C-NH-CO-(CH2)2-CO-D-Nal-c [Cys-Tyr-D-Trp-Lys(Boc)-Val-Cys]-Thr-NH2

将0.03ml DIEA加入到冷却的2-N-(琥珀酰)氨基-2-(乙 酸基甲基)-1,3-丙二醇双乙酸酯(83mg)和HBTU(92mg)的2ml DMF溶液中。0-5℃搅拌30分钟后,加入含0.03ml DIEA的D-Nal -环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys(Boc)-Val-Cys]-Thr-NH2(100 mg)的2ml DMF溶液。先在0-5℃搅拌混合物1小时,然后室温下搅 拌过夜。减压除去溶剂,得到干燥的残余物,其在乙酸乙酯和饱和 的NaCl水溶液间进行分配,以5%NaHCO3水溶液洗涤乙酸乙酯层, 最后以饱和的NaCl水溶液洗涤;将得到的溶液用MgSO4干燥。减压 蒸发掉溶剂,得到含(AcO-CH2)3-C-NH-CO-(CH2)2-CO-D-Nal -环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys(Boc)-Val-Cys]-Thr-NH2(0.14 mg)的残余物。TLC(硅胶:CHCl3/MeOH/HOAc=4∶1∶0.1,Rf=0.82)

实施例2.2-脱BOC基

室温下用CHCl3中的50%TFA处理30mg上面所述的化合物45分 钟;减压除去易挥发物质得到残余物。将残存的TFA与乙醇共蒸发 数次,用乙醚滴定残余物,然后干燥得到30mg产物(30mg)。TLC (硅胶:CHCl3/MeOH/HOAc=3∶1∶1,Rf=0.24)

实施例2.3-其它实施方案

下面的促生长素抑制素衍生物也用类似方式进行合成。 (HO-CH2)3-C-NH-CO-(CH2)2-CO-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val- Cys]-Thr-NM2

                    BIM-23158 (HO-CM2)3-C-NM-CO-(CH2)2-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr- cys]-Nal-NH2

                    BIM-23167 (HO-CH2)3-C-NH-CO-(CH2)2-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu- cys]-Thr-NH2

                    BIM-23173 (HO-CH2)3-C-NH-CH2-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]- Nal-NH2

                    BIM-23179 (Ho-CH2)3-C-NH-CH2-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]- Thr-NH2

                    BIM-23182

实施例3 BIM-23201的合成

依照本发明合成下面的促生长素抑制素衍生物,也称为BIM- 23201。 (HO-CH2)3-C-CH2-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr- Cys]-Nal-NH2 实施例3.1-(HO-CH2)3-C-CH2-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp- Lys-Thr-Cys]-Nal-NH2

将2g 3A分子筛以及随后的NaCNBH3(36mg)以15分钟增加一份 的方式一份份加入D-Phe-环[Cys-Tyr(OBt)-D-Trp-Lys(Boc) -Thr(OBt)-Cys]Nal-NH2(250mg)和三(乙酸基甲基)乙(120 mg)的溶液中,该三(乙酸基甲基)乙醛是通过在含10%乙酸的甲醇 (10ml)中以吡啶鎓重铬酸盐或DMSO/草酰氯/三乙胺氧化三乙酰基 季戊四醇而得到的。将混合物在室温下搅拌30分钟并加热4小时, 过滤后,残余物在乙酸乙酯和水间进行分配。用水、然后用NaHCO3水溶液洗涤乙酸乙酯层,然后干燥(MgSO4)。减压蒸发掉溶剂,得 到0.4g残余物,将其溶解于甲醇(5ml)中,用NaOMe/MeOH溶液(pH 10)处理,搅拌1小时,最终用1N HCl进行中和至PH5-6。蒸发溶 剂后,将残余物溶于90%的TFA(5ml)水溶液,并搅拌30分钟。减 压除去易挥发物质,将得到的残余物中残存的TFA和水通过与乙醇 共蒸发(2x)而除去。干燥残余物,然后用醚滴定,最终以HPLC纯化, 采用的条件与前述的相似,得到41mg的(HO-CH2)3-C-CH2-D- Phe-环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH2为无色固 体。MS(m/e)1262.8。

实施例3.2-其它实施方案

用类似方式合成下面的促生长素抑制素衍生物,也称为BIM- 23195。 (HO-CH2)3C-CH2-D-Phe-环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu- Cys]-Thr-NH2                        BIM-23195

实施例4-BIM-23197的合成

依照本发明合成下面的促生长素抑制素衍生物,也称为BIM- 23197

实施例4.1-2-溴乙烷磺酰氯

当在冰浴中冷却时以PCl5(11.8g)处理2-溴乙烷磺酸钠(4.0g)。 呈液相后,溶液在油中90-120℃加热1.5小时,冷却至室温。倾倒 入50g碎冰中,然后搅拌15分钟。混合物以CH2C12(3×30ml)萃取, 合并萃取物以H2O(2x),5%NaHCO3(2x)和再次用H2O(2x)洗涤,用无 水MgSO4干燥,减压蒸馏,得到2-溴乙烷磺酰氯,为无色液体 (1.95g,42-44℃/1mmHg)。 实施例4.2-Br-(CH2)2-SO2-D-Phe-环[Cys-Tyr(tBu)-D- Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]-Thr(tBu)-NH(1-环丙基-1-甲基) -乙基

在N2下0℃,将2-溴乙烷磺酰氯(30mg)的DMF(1ml)溶液滴加入 H-D-Phe-环[Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]- Thr(tBu)-(1-环丙基-1-甲基)-乙基(15mg)和DIEA(55mg)的 DMF(2ml)溶液中。反应混合物在0-5℃搅拌3小时;减压除去溶剂。 将残余物溶于乙酸乙酯中,并以5%的柠檬酸(2x),5%NaHCO3(2x) 和盐水(2x)洗涤。然后用无水MgSO4干燥溶液,过滤,减压浓缩至 干燥。将产物进一步以短的硅胶柱纯化,以乙酸乙酯洗脱。收集含 产物的级分,减压除去溶剂,得到105mg Br-(CH2)2-SO2-D-Phe -环[Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]-Thr(tBu) -NH(1-环己基-1-甲基)-乙基,为淡黄色固体(硅胶,CHCl3/ MeOH/HOAc(9∶1∶0.1),Rf=0.36)。

实施例4.3-

在N2中将Br-(CH2)2-SO2-D-Phe-环[Cys-Tyr(tBu)-D- Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]-Thr(tBu)-NH(1-环丙基-1-甲基) -乙基(100mg)和2-羧乙基哌嗪(55mg)的2ml 1-丙醇溶液回流 2.5小时。然后溶液冷至室温,减压除去溶剂。然后将残余物溶于 含5%MeOH的乙酸乙酯中,以盐水洗涤(3x)。最后,通过无水MgSO4干燥溶液,过滤并减压浓缩至干燥,产生110mg的上面所述化合物 的固体。不用进一步纯化,该化合物直接用于下面的步骤。

实施例4.4-

110mg由前面步骤获得的被保护的促生长素抑制素衍生物溶于 10ml 90%TFA水溶液中,室温下N2中搅拌1小时。减压除去TFA和 水,残余物用冷乙醚滴定(3×10ml)。得到淡黄色固体,该物质在 制备性反相HPLC上进一步纯化,使用1)NH4OAc水溶液;和,2)HOAc 水溶液进行洗脱。冷冻干燥所收集的级分,其含有上述的产物,为 白色固体。(18mg,ESI-MS,((m+1)/e)1252.7)。

实施例4.5-其它实施方案

用类似的方式合成下面的促生长素抑制素衍生物。 BIM-2390

                            BIM-23191 (HO-CH2)3C-NH-(CH2)2-SO2-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2

                            BIM-23196

                            BIM-23202 实施例5-铃蟾肽衍生物的合成

用上述类似的方式合成下面的铃蟾肽衍生物,也称为BIM- 26333。

使用本领域已知的合成修饰方法以类似的方式可合成本发明的 其它肽衍生物。 试验肽的分析结果

实施例6-结合分析

为证明促生长素抑制素(SRIF)类似物和促生长素抑制素受体的 结合亲合力,对上述纯化的化合物进行促生长素抑制素结合分析试 验,包括测试体外抑制[125I-Tyr11]SRIF-14与鼠AR42J胰膜的结合。 如表I所示,本发明的纯化的促生长素抑制素类似物显示出与这些 受体的高度的结合亲合性。另外,表中还列出了每一促生长素抑制 素类似物的质谱测定的分子量和由分子结构估计的分子量。

类似地,将上述纯化的铃蟾肽进行铃蟾肽结合分析。结合分析 为[125I-Tyr11]铃蟾肽和鼠AR42J胰膜结合的体外抑制测定试验;根 据分析,铃蟾肽类似物和GRP受体的结合亲合力为约21nM。

实施例7-生长激素(GH)抑制分析

对每组5只雄性Sprague Dawley鼠(每只鼠重250-300g)皮下 注射促生长素抑制素的衍生物或盐水。在表II中选择的用药后时间 点(2小时、4小时、6小时、8小时)前30分钟,用戊巴比妥腹膜内注 射(50mg/kg)使鼠麻醉。麻醉后15分钟,心穿刺取出一份试样的血, 肝素抗凝,测定基础GH。另外,皮下注射D-Ala2-GRF(10μg/kg)。 15分钟后,取血以定量刺激的GH,使用NIADDKD提供的放射免疫分 析法在血浆中测定。根据基础GH和刺激的GH值的差值计算对GH抑制 的百分比。

表II显示了各种纯化的促生长素抑制素类似物的作为时间函数 的效果。将D-Phe-环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal -NH2(BIM 23060)在鼠中抑制生长激素的效能与本发明的其它促生 长素抑制素衍生物(BIM-23167,BIM-23179和BIM-23181)进行比 较。所有衍生物均显示出一个令人吃惊的延长的作用期,这种作用 是依赖于时间而减弱的。

另外还对D-Phe-环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]- Thr-NH2,一种促生长素抑制素类似物,和BIM-23190、BIM- 23195和BIM-23197进行了实验,以确定各个化合物的ED50值(即特 定时间后抑制50%的生长激素释放所需要的每种化合物的浓度)。 实验用剂量范围在25μg/kg和0.25μg/kg之间。表III显示出在各 种时间间隔与未修饰的肽相比,促生长素抑制素衍生物令人吃惊的 改善效果,表明了本发明的化合物对刺激的GH释放的时间依赖性抑 制作用。

实施例8-抗增殖分析

对上述纯化的促生长素抑制素类似物作用于快速增殖细胞的活 性也进行了测试。表IV描述了这些肽对AR42J鼠胰腺肿瘤细胞生长 的作用效果。与天然促生长素抑制素不同的是,本发明的衍生物显 示出相当大的抗增殖活性。现在参见图1,BIM-23014C(一种促生 长素抑制素类似物)和BIM-23118(BIM-23014的衍生物)均以浓度 依赖性的方式抑制AR42J鼠胰腺肿瘤细胞的生长,两种化合物中 BIM 23118效果更强。在等浓度时两种化合物比未修饰的促生长素 抑制素类似物更大程度地抑制肿瘤细胞的生长。

实施例9-胸苷摄取分析

在该分析实验中,Swiss 3T3细胞的贮存培养物在10%CO2和 90%空气的潮湿气体中37℃生长于添加10%胎血清的Dulbecco′s 改良的Eagles培养基(DMEM)中。然后将细胞接种于24-孔培养板中 并在最后一次更换培养基4天后使用。为将细胞停留于细胞周期的 G1/G0期,在胸苷摄取分析之前24小时使用无血清DMEM;然后以1ml 等份的DMEM(-血清,0.5μm)和[甲基-3H]胸苷(20 Ci/mmol,New England Nuclear)洗涤细胞两次。在0.001,0.01,0.1,1,10, 100,100nM开始测试铃蟾肽衍生物。37℃ 28小时后,根据下述方 法分析酸不溶的收集物中[甲基-3H]胸苷的掺入。首先用冰冷却的 0.9%NaCl(1ml等份试样)洗涤细胞两次;然后用5%三氯乙酸 (TCA)40℃保温30分钟除去酸可溶的放射活性物质。然后将培养以 95%的乙醇(1ml)洗涤一次,并以1ml 0.1N NaOH保温30分钟溶解。 将溶解的物质转移到含10ml ScintA(Packard)小瓶中,通过液体 闪烁光谱测定法测定放射活性。该分析显示了铃蟾肽衍生物刺激细 胞对胸苷摄取的能力,计算出EC50为0.48nm,由此证明了本发明的 铃蟾肽衍生物是有效的胸苷摄取的刺激物。 使用方法

可以将本发明的肽衍生物可以一种常规方式(如口服,非肠道, 经皮肤经粘膜给药哺乳动物,特别是人,也可采用可生物降解、 生物相容性聚合物制成持续释放制剂或使用微囊、胶和脂质体进行 点释放(如抗癌铃蟾肽或促生长素抑制素衍生物送于部的情况)。 剂量通常与用于人体的治疗肽常用剂量相似。

另外,本发明的肽衍生物适于更好地治疗对相应的未修饰肽的 治疗敏感的疾病。特别地,上述的促生长素抑制素的衍生物适用于 治疗癌症、肢端肥大症、胰腺炎、创伤引发的增生、糖尿病、糖尿 病性视网膜病,血管成形术再狭窄滋病、神经原性的炎症、 动脉炎和包括腹泄的肠胃病。 表I促生长素抑制素肽衍生物的体外结合亲和性和分子量

    分子量     测试     分子量     计算     IC50 nM     SRIF-14     -     -     0.17     SRIF-28     -     -     0.23     BIM-23107     1340.4     1340.40     0.30     BIM-23118     1313.5     1313.52     0.30     BIM-23135     1426.2     1426.64     2.52     BIM-23158     1299.6     1299.54     0.33     BIM-23167     1347.6     1347.55     0.09     BIM-23173     1235.5     1235.46     0.11     BIM-23179     1305.9     1305.55     0.12     BIM-23181     1435.0     1434.62     0.25     BIM-23182     1193.8     1193.42     0.12     BIM-23183     1323.0     1322.49     0.22     BIM-23190     1202.8     1202.47     0.20     BIM-23191     1314.9     1314.61     0.08     BIM-23195     1150.8     1150.39     0.08     BIM-23196     1243.7     1243.50     0.09     BIM-23197     1252.7     1252.55     0.29     BIM-23201     1262.8     1262.53     0.14     BIM-23202     1247.0     1246.53     0.18 表II促生长素抑制素肽衍生物在鼠中对刺激的生长激素释放的抑 制作用 抑制(对照的百分数)25μG/KG

 2小时 4小时 6小时 8小时  BIM-23060  86.39  64.96  47.62  38.15  BIM-23167  92.67  79.54  59.72  50.14  BIM-23179  92.79  63.85  67.78  68.26  BIM-23181  99.24  77.07  60.56  56.12 表III皮下给药的促生长素抑制素肽衍生物对鼠体中刺激的生长 激素释放的抑制作用 ED 50(μg/kg)

2小时 4小时 6小时 8小时  BIM-23023  0.48  1.11  2.26  4.32  BIM-23190  0.68  0.57  0.76  1.04  BIM-23195  1.19  3.13  2.08  3.23  BIM-23197  1.01  0.59  1.14  1.59 表IV-促生长素抑制素肽衍生物的抗增殖活性

    细胞生长(对照的百分数)1     SRIF-14     91.3     SRIF-28     98.0     BIM-23014C     74.1     BIM-23107     67.5     BIM-23109     72.1     BIM-23118     61.0     BIM-23135     62.9     BIM-23167     60.2     BIM-23173     67.9     BIM-23181     69.1     BIM-23182     68.7     BIM-23183     69.1     BIM-23195     69.2     BIM-23197     66.4 1表示100nM浓度,8天后AR42J鼠的胰腺肿瘤细胞

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